JP2009509548A5

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Publication number: JP2009509548A5
Application number: JP2008533785A
Authority: JP
Filing date: 2006-10-02
Publication date: 2009-11-26

Claims

ｓｈＲＮＡがＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介する能力を高めるための方法であって、
（ｉ）少なくとも２１ヌクレオチド長のアンチセンスステム部分と、センスステム部分とを含む二本鎖ステムを含むｓｈＲＮＡを提供するステップと；
（ｉｉ）前記ｓｈＲＮＡがＲＮＡｉを媒介する能力を高めるように、アンチセンス鎖部分の５’末端における塩基対とセンス鎖部分の３’末端の対応する塩基対と間の塩基対の力を弱めることによって、前記ステムの非対称性を高めるステップと、を含み、前記塩基対の力は、アンチセンス鎖部分の５’末端から３位の塩基対の修飾よって弱くなる、方法。
前記修飾は、
（ａ）アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されているミスマッチの塩基対；または、
（ｂ）アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている希少ヌクレオチド；または、
（ｃ）アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている修飾されたヌクレオチド；および、
（ｄ）アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されているゆらぎ塩基対、を含む、請求項１に記載の方法。
（ａ）前記ミスマッチの塩基対は、
（ｉ）Ｇ：Ａ、Ｃ：Ａ、Ｃ：Ｕ、Ｇ：Ｇ、Ａ：Ａ、Ｃ：Ｃ、およびＵ：Ｕ、もしくは、
（ｉｉ）Ｇ：Ａ、Ｃ：Ａ、Ｃ：Ｔ、Ｇ：Ｇ、Ａ：Ａ、Ｃ：Ｃ、およびＵ：Ｔのいずれかからなる群から選択され、または、
（ｂ）前記希少ヌクレオチドは、
（ｉ）前記希少ヌクレオチドは、イノシン（Ｉ）である；もしくは、
（ｉｉ）前記塩基対は、Ｉ：Ａ、Ｉ：Ｕ、およびＩ：Ｃからなる群から選択され、または、
（ｃ）前記修飾されたヌクレオチドは、２−アミノ−Ｇ、２−アミノ−Ａ、２，６−ジアミノ−Ｇ、および２，６−ジアミノ−Ａからなる群から選択され；または、
（ｄ）前記ゆらぎ塩基対は、Ｇ：ＵもしくはＧ：Ｔである、
請求項２に記載の方法。
前記ｓｈＲＮＡは、機能獲得型の突然変異対立遺伝子に標的化される、請求項１に記載の方法。
少なくとも２１ヌクレオチド長のアンチセンスステム部分と、センスステム部分とを含む二本鎖ステムを含む非対称ｓｈＲＮＡであって、アンチセンス鎖部分の５’末端における塩基対が、センス鎖部分の３’末端の対応する塩基対と間の塩基対の力より弱い、非対称ｓｈＲＮＡであって、
アンチセンス鎖部分の５’末端とセンス鎖部分の３’末端との間のＧ：Ｃ塩基対が、アンチセンス鎖部分の３’末端とセンス鎖部分の５’末端との間より少ないために、前記塩基対の力は弱められ、
前記非対称性は、アンチセンス鎖部分の５’末端における塩基対と、センス鎖部分の３’末端の対応する塩基対と間の塩基対の力を弱めることによって高められ、
さらに、前記塩基対の力は、アンチセンス鎖部分の５’末端から３位の塩基対の修飾よって弱くなる、非対称ｓｈＲＮＡ。
前記修飾は、
（ａ）アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されているミスマッチの塩基対；または、
（ｂ）アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている希少ヌクレオチド；または、
（ｃ）アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されている修飾されたヌクレオチド；または、
（ｄ）アンチセンス鎖部分の５’末端から３位に導入されているゆらぎ塩基対、を含む、請求項５に記載のｓｈＲＮＡ。
（ａ）前記ミスマッチの塩基対は、
（ｉ）Ｇ：Ａ、Ｃ：Ａ、Ｃ：Ｕ、Ｇ：Ｇ、Ａ：Ａ、Ｃ：Ｃ、およびＵ：Ｕ、もしくは、
（ｉｉ）Ｇ：Ａ、Ｃ：Ａ、Ｃ：Ｔ、Ｇ：Ｇ、Ａ：Ａ、Ｃ：Ｃ、およびＵ：Ｔからなる群から選択される、または、
（ｂ）少なくとも１つの塩基対は、希少ヌクレオチドを含み、
（ｉ）前記希少ヌクレオチドは、イノシン（Ｉ）である；もしくは、
（ｉｉ）前記塩基対は、Ｉ：Ａ、Ｉ：Ｕ、およびＩ：Ｃからなる群から選択されるかのいずれかであり、または、
（ｃ）前記修飾されたヌクレオチドは、２−アミノ−Ｇ、２−アミノ−Ａ、２，６−ジアミノ−Ｇ、および２，６−ジアミノ−Ａからなる群から選択され；
（ｄ）前記ゆらぎ塩基対は、Ｇ：ＵもしくはＧ：Ｔである、
請求項６に記載のｓｈＲＮＡ。
前記ｓｈＲＮＡは、機能獲得型の突然変異対立遺伝子に標的化される、請求項５乃至７のいずれか１項に記載のｓｈＲＮＡ。
前記対立遺伝子は、優性の機能獲得型突然変異に関連する障害と相関している、請求項８に記載のｓｈＲＮＡ。
前記障害が、筋萎縮性側策硬化症、ハンチントン病、アルツハイマー病、およびパーキンソン病からなる群から選択される、請求項９に記載のｓｈＲＮＡ。
前記疾患は、筋萎縮性側策硬化症であり、前記対立遺伝子は、ＳＯＤ１であり；任意に、前記突然変異対立遺伝子は、点突然変異を含み；任意に前記点突然変異は、グアニン：シトシン突然変異；Ｇ２５６Ｃ；およびＧ２８１Ｃからなる群から選択される、請求項１０に記載のｓｈＲＮＡ。
治療に用いられる、請求項８乃至１１のいずれか１項に記載のｓｈＲＮＡ。
前記ｓｈＲＮＡは、Ｓ３−２１である、図１４に記載の配列を含む、ｓｈＲＮＡ。
請求項５乃至１３のいずれかに記載のｓｈＲＮＡを含む、ｓｈＲＮＡの細胞への移行を促進するために作られた、組成物。
請求項５乃至１３のいずれかに記載のｓｈＲＮＡをコードする作製物、または請求項１４に記載の組成物。
請求項５乃至１３のいずれかに記載のｓｈＲＮＡ、請求項１４に記載の組成物、または請求項１５に記載の作製物を含む、薬学的組成物。
前記細胞に前記ｓｈＲＮＡを導入することによって、遺伝子の少なくとも２つの異なる対立遺伝子を含む標的対立遺伝子の細胞中での発現を阻害する方法に使用するためのｓｈＲＮＡであって、任意に、前記ｓｈＲＮＡは、作製物から前記細胞において発現されるか、または前記細胞を前記ｓｈＲＮＡと接触させることによって導入される、請求項５乃至１３のいずれか１項に記載のｓｈＲＮＡ。