JP2009508814A - 有効成分経皮送達手段 - Google Patents
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Abstract
Description
細胞レベルでジギタリスは、ナトリウム輸送酵素ナトリウム・カリウム・アデノシン・トリホスファターゼ(Na/K ATPase)の阻害によってその主要作用を発揮する。即ちこれは、心筋に及ぼす電気生理学的作用に直接起因し、更に理論的仮定に従って、しかしながらそれに拘束されるものではないが、DNAウイスルに対するその活性にも起因する。
・低カリウムを置換することによって、DNA合成、従ってウイルス複製が修復されることになる。
・フロセミドとジゴキシンを組み合わせて使用することは、カリウム枯渇に匹敵する作用を有する。
・カリウム枯渇レベルは正常に細胞を機能させるのに十分である。
・カリウム枯渇は細胞障害性作用を備えない。
本発明の経皮送達手段は好都合なことに、単純ヘルペスウイルスのようなDNAウイルスによって感染した皮膚上の部位へ接着することによって外用投与するのに適し得る。皮膚バリアを介する経皮的に有効な局所適用は最も有用であり得る。送達手段内の組成物は、特に徐放性に製剤化されることが可能である。組成物を局所経皮的に有効に適用すべく製剤化されることは本発明の非常に好適な特徴である。組成物内の他の成分は、抗ウイルス活性を損なわなければ、含むことが可能である。例として保存剤、添加物、賦形剤、増粘剤及び溶媒が含まれる。好ましくは、本発明は角膜の眼感染症を治療する緩衝化生理食塩水製剤における局所適用としてのフロセミドとジゴキシンの組合せを含む送達手段を提供する。
実施例1〜3は、HSVウイルスで感染した細胞に対してジゴキシンとフロセミドを含む組成物の相乗作用を含む作用を示すべく、例証として含まれる。しかしながら、そのような実施例は本発明の範囲内の経皮的に有効な送達手段を完全に明示していないが、それでもなお有効性の有用な指標であることを本明細書において強調されるべきである。
使用した単純ヘルペス菌株:
1型単純ヘルペス菌株HFEMは、ロッカーフェラー(Rockerfeller)菌株HF(ウイルディ(Wildy)1955)の派生型であり、2型単純ヘルペス菌株3345、陰茎単離体(スキナー(Skinner)ら1977)を原型菌株として使用した。これらの原型は必要時まで−80℃で保存した。
細胞培養物:
アフリカミドリザル腎細胞(ベロ)は、英国国立生物学的製剤研究所(National Institute of Biological Standards and Control UK)から得られ、実施例における全実験の唯一の細胞株として用いた。
培養培地:
細胞とウイルスは10%ウシ胎仔血清を加えたグラスゴー(Glasgows)修正培地で維持した。
結果:
組成物を異なる型のベロ細胞(アフリカミドリザル腎細胞とBHK1細胞)に適用し、低度、中等度及び高度の感染多重度(MOI)で2型単純ヘルペスウイルス(菌株3345と180)に感染させた。ウイルス複製の阻害を以下の尺度で採点した。
20%阻害 +
40%阻害 ++
60%阻害 +++
80%阻害 ++++
100%阻害 +++++
Tは薬物毒性を示す。
ループ利尿剤と強心配糖体が感染細胞に同時に適用された場合、最大作用(+++++)は30μg/mlのジゴキシンと1mg/mlのフロセミドを用いることによって得られた。HSV2複製の100%阻害は、低度、中等度及び高度の感染多重度で示された。
この実施例は、HSV2の複製がフロセミド又はジゴキシンを単独に適用することによって極限まで阻害されないことを示す。しかしながらフロセミドとジゴキシンを組み合せると、HSV2複製が完全に阻害された。
ジゴキシンとフロセミドはシグマ(SIGMA)社(UK)から購入した。Durotakアクリル系グルーはナショナル・スターチ・アンド・ケミカル社(National Starch and Chemical Company)から調達した。Duro−tak87−900A(グルー1),87−2052(グルー2)及び87−201A(グルー3)を用いた。放出と透過性に用いた溶媒と化学薬品は全てシグマから購入した。合成皮膚バリアとして用いたシリコーンシートはアドバンスト・バイオテクノロジーズ社(Advanced Biotechnologies,USA)から購入した。
ジゴキシンとフロセミドの送達用の製剤と経皮パッチのインビトロでの評価の概要を以下に述べる。
有効に治療するためには、薬物は皮膚を透過する前にまず製剤から放出されなければならない。そのため各々の場合において薬物放出量又は透過速度を定量することが必要になる。GHPLCは放出された薬物量を定量する信頼できる手段を提供する。両薬物のHPLC分析を詳述する幾つかの公表された方法が存在する。用いたHPLCはPhenomenex C18(150×4.60mm、5ミクロン)カラムを備えるAgilent Series 1100であった。移動相は水、メタノール及びアセトニトリル(40:30:30)であり、流速は1ml/分であった。20μlの試料を注入し、可変波長検出器(VWD)によって220nmで検出した。
HPLCはグルー3から放出されたジゴキシンを検出できなかったので、ジゴキシンはこのグルー内に優先的に結合されていることを示す。
ジゴキシンとフロセミドでの使用に適当であり得る特性を備えるアクリル系圧力感受性接着剤はナショナル・スターチ・アンド・ケミカル社から調達した。様々な溶媒における薬物の溶解度を測定する試験を実施した。
透過試験の前にスクリーニング試験として薬物放出試験を行った。直径が1cmの製剤円形パッチをとり、過剰量の放出溶媒(2ml)を含有する密閉容器内に設置した。バイアルを密封し、制御速度と温度(37℃)で48時間振盪させた。設定時点;1,2,4,6,8,12,24及び48時間目に試料(0.5ml)を分析用に除去した。試料を除去する度に、2mlの全容量を維持すべく、新鮮放出溶媒と置き換えた。各々の試料のHPLC分析によって、経時的薬物放出のプロットを可能にした。最良の放出を示すプロットを指摘すべく、製剤を比較した。臨床条件においてパッチは約0.25cm2になり、必要な放出は24時間当り25μgになるので、放出速度は100μg/cm2/24時間より大きくなければならない。
図4はグルー2(872677)からの両薬物の放出を示す。
図5はグルー3(87201A)からの両薬物の放出を示す。
上記のグラフ(図11と図12)の比較は、薬物を溶解すべくプロピレングリコールよりはむしろメタノールを使用して製剤が形成されるとき、薬物がより良好に放出されることを示す。
最大放出を示す薬物を組み込む感圧接着剤を選択し、皮膚への透過を評価した。フランツセル装置を用いることによって、皮膚膜への接着製剤からの薬物透過を測定した。
薬物粉末を1:1の重量比で混合し、500mgのこの混合物を10mlのグルー1と配合した。次にこの混合物を80×120mmの範囲にわたって3M・Scotchpak1020の放出ライナ上に鋳造した。溶媒を蒸発させ、薄膜を3M・Scotchpak1109・ポリエステルフィルムラミネートバッキングで覆った。
直径1cmのパッチの表面積は0.785cm2である。
各々の小パッチは1.02mgのジゴキシンと1.02mgのフロセミドを含有する。
各々のパッチは4.08mgのジゴキシンと4.08mgのフロセミドを含有する。
HPV感染症の多種多様な解剖学的部位を検討すべくジゴキシンとフロセミドの望ましさが>1の高い剤型を検討し、提案された相違点には以下のものが含まれた。
・手/指イボ:ラッカー/塗布剤
この後の実施例の目的は、経皮接着剤に基づくグルー中薬物型製剤の実行可能性と弾性コロジオンBPに基づくラッカー/塗布製剤の実行可能性の両方を示すことである。
ジゴキシン(D)バッチ番号181104とフロセミド(F)バッチ番号114310は、ビーユーエフエー・ファルマシューティカル・プロダクツbv社(BUFA Pharmaceutical Products bv)(Vitgeest,Netherlands)から得た。セトリミド、ロット番号A012633401はアクロク・オルガニック社(Acros Organics)(New Jersey,USA)から得た。Duro−tak(登録商標)387−2287(グルー4)接着剤はナショナル・スターチ・アンド・ケミカル社(Zutphen,Netherlands)から得た。弾性コロジオンBPはジェエム・ラブリッジ・ピーエルシー(JM Loveridge plc)(Southampton,UK)から得た。HPLC等級アセトニトリル、エタノール及びメタノールは、フィッシャー・サイエンティフィック社(Fisher Scientific)(Loughborough,UK)から得た。ブタの耳は蒸気洗浄する前に地元の食肉処理場から得た。水はELGA実験室蒸留器から引いた。
F:D選択混合物の比は1:1,1:25及び1:100(w/w)であったので、かなり過剰のジゴキシンを提供した。これはジゴキシンがFより実質的にウイルス静止力が大きいことを示唆する証拠に基づいた(10頁を参照)。この証拠は過剰のジゴキシンを送達した製剤がウイルス負荷を低下させるのに有効であり得ることを示唆する。各々の比率がジゴキシンとフロセミドの放出に及ぼした作用を例示し、各々の有効成分の最適放出を生成し得る比率を検討する。
0.5gの薬物混合物を5gの接着剤(湿重量)に直接加えることによってパッチを調製した。異なるモル比でF:Dを含有する三つの薬物混合物を調製した。薬物混合物の組成を表1において示す。適量の薬物混合物と接着剤を直接ガラスバイアル内に化学天秤を用いることによって正確に秤量し、2.5mlのメタノールを混合物に添加した。各々のバイアルを3分間ボルテックス混合し、血清回転装置で一晩回転させることによって、薬物混合物が確実に均一に分散されるようにした。薬物混合物を含まない対照パッチも、同じ方法によって調製した。次に各々の接着混合物を上記のようなポリマー裏打ちペーパー上にて成型した。パッチを覆い、48時間溶媒を蒸発させた(チェッジ(Chedgzy)ら2001)。次にパッチバッキングの機能を果たすべく、透明ポリエチレンフィルムをパッチの暴露側に接着した。個々の球形パッチを直径が1cm(約0.785cm2)の穿孔器を用いて切り取った。
レセプター相の機能は、放出薬物又は透過薬物の有効なシンクを提供することである。我々が研究を行う上でのルールは、薬物量が所与シンクにおいてその溶解度の10%を超えるべきでないことである。更にシンクは放出過程または透過過程を妨害してはいけない(ハード(Heard)ら、2002)。二つのレセプター相がこの研究において考慮される。これらは水性セトリミド30mg/ml、イオン系界面活性剤及びEtOH/水10:90v/vであった。これらは両薬物が各々の溶媒に溶けやすいことが分かっているので選択された。
ポリマー裏打ちペーパーをパッチから剥がすことによってパッチの片側を暴露した。次に各々のパッチを7mlの一般ガラススクリューキャップバイアルの底に少量のグルー4をポリマー薄膜に塗り付けることによって個々に固定化し、30分間乾燥させた。用いた溶出溶媒はセトリミド30mg/mlかEtOH/水10:90v/vであり、各々の5mlを個々に各々のバイアルに加えた。次にバイアルを70rpmに設定されたStuart Scientific Gyro−Rocker(フィッシャー(Fisher),UK)上に設置することによって、溶出溶媒が確実に十分混合されるようにし、実験室インキュベータ(ゲンラブ(Genlab))中において32℃(皮膚温度)でインキュベートした。1,3,6,12及び24時間目の時点で(予測適用期間)0.5mlの溶出溶媒を試料採取し、HPLC自動試料採取装置のバイアルに入れた。各々の試料を採取した後、レセプター相を同様に32℃の0.5mlの原液溶出溶媒で補充した。24時間後にHPLC分析するまで2〜4℃で試料を冷蔵した。各々のレセプター相における各々の処理について総計3回繰り返した。最適放出を示した製剤を透過実施例の間使用した。
イボを治療する新規の局所製剤を検討するため、ヒトイボ組織を介する送達がインビトロモデルにおいて最も適切になるだろう。しかしながら、このような材料は入手できないので適切なモデルが必要であった。適切な代用品としてブタの皮膚を使用することが幾つかの研究において示されており、耳はヒト皮膚に最も近い透過特性を提供する部分である(ディック(Dick)及びスコット(Scott),1992;シモン(Simon)及びマイバッハ(Maibach),2000)。透過実験を用いることによってこの皮膚薬物送達系を試験した。透過性は局在化(基底層における経皮吸収)を予測できるので、フラックスが大きいほど、健常皮膚よりもイボにおいて数が多いケラチン生成細胞を含む角質層を通る透過性が大きい。イボ病変は「正常」皮膚と比較して比較的多く角質化される。しかしながら、正常皮膚を介する透過測定は、特にスクリーニングモードでイボを介する透過を予測し得る。これは、ケラチンが皮膚透過速度の測定において重要な部分を果たす幾つかの証拠が存在するので正当化される(ハシグチ(Hashiguchi)ら、1998;ハード(Heard)ら、2003)。
耳を流水下で洗浄し、外科用メスを用いて背面皮膚の全層を鈍的切開によって軟骨から分離した後、電気カミソリを用いて毛を除去した。皮膚を約2cm2の試料に切断し、外観検査によって各々の片に表皮剥離や血管がないことを確認した。次に試料を必要時までアルミニウム箔上で皺のない状態にして−20℃で貯蔵した。
皮膚試料を冷凍庫から取り出して、完全に解凍させた。フランツ型拡散セル(図13を参照)のドナー区画とレセプター区画にグリースを塗ることによって密封し、レセプター相からの任意の漏出を防止した。ポリマー裏打ちペーパーをパッチから除去して片側を暴露し、各々の皮膚片の表面の中心にしっかりと押し付けた。確実に接着した後、皮膚を拡散セルのレセプター区画(公称容量2.5ml)のフランジ上に取り付けることによって、パッチが確実にフランジ開口の直接上方に設置されるようにした。次にドナー区画をレセプター区画の上部に設置し、更にピンチクランプを用いて締め付けた。EtOH/水10:90のレセプター相(37℃に維持される)を用いて慎重にレセプター区画を満たし、皮膚の下面と接触する気泡がなく、レセプター相が皮膚と接触することを確認した。小さな磁気撹拌器を加えてレセプター相が確実に均質に混合されるようにした。フランツセルを水浴(ベルコン含有)中に沈めた磁気撹拌器上に置き、37℃の一定温度(従って皮膚の表面は約32℃であった)で維持した。湿度から保護する市販パッチのバッキング層を真似るべくドナーの開口を塞ぎ、レセプター相の蒸発を防止すべく試料採取アームを塞いだ。3,6,12,24,48時間目の時点で0.2μlのレセプター相を試料採取し、自動試料採取器バイアル内に移し、分析に必要とされるまで2〜4℃で冷蔵した。次にレセプター相を補充した。各々の処理に対して総計5回繰り返した。
DとFの局所投与に利用できる一連の賦形剤のうちの塗布様製剤かラッカー製剤が一般イボ及び性器イボの治療に特に魅力的であると考えられた。これはこのような治療が比較的簡単であり、表皮剥離に対してある程度の抵抗性を提供するからである。またこのような製品、例えばサリチル酸コロジオンBP(Salicylic Acid Collodion BP)は現在市販されている。
市販のコロジオンBPは液体であり、高い溶媒含有量を有する(主にジエチルエーテル)。皮膚への適用によってコロジオンの揮発性成分は速やかに蒸発し、液体溶液を乾燥した固体薄膜に変換し、これが皮膚に接着することになる。グルー中薬物型接着剤におけるように、賦形剤の物理的状態の変化は、液体/半固体皮膚系のうちの熱力学的活量が最初の液体製剤に加わるだけであり、固体状態における製剤には関係ないことを意味する。従って液体製剤に対する溶媒の割合を増加させることによって、より多くの薬物混合物を添加できるので、有効成分のある程度までの溶解度は自由裁量による。しかしながら固化によって製剤中の溶媒が蒸発した後、化合物の結晶化が起こることになる。そのため結晶は製剤のマトリックス中に保持されることになる。これは、結晶体と皮膚の間で直接接触することによって優れた送達が提供されることが多いので(しかしながら、この正確な機構はわかっていない)送達速度を増加させ得る。顕微鏡観察レベルで薬物送達をもたらす皮膚との親密な接触を維持するコロジオンの能力に影響を及ぼすもの、即ち制限因子は皮膚への接着であろう。
0.02g(原料を製造)の薬物混合物(組成については表2を参照)を化学天秤(精度小数第5位まで)で秤量し、マッカートニー(McCarthney)瓶中の10mlのコロジオンと10mlのエタノールに直接添加した。接着剤中薬物型と比較して少量の薬物混合物を使用したので、用いたF:Dのモル比は1:1,1:2.5(2:5)及び1:10であった。これによって測定可能量のFが使用できた。各々のマッカートニー瓶を3分間ボルテックス混合し、血清回転装置上で一晩回転させることによって、混合物が確実に均質になるようにし、何れの気泡も分散されるようにした。同様に同じ方法によって調製したが、薬物混合物を添加しなかった対照コロジオンを調製した。
異なるモル比の二つの薬物を用いて各々の薬物の放出速度と放出程度に及ぼす影響を測定した。200μlのコロジオンをギルソンピペットで7mlの一般ガラススクリューキャップバイアルの底に分配し、3時間乾燥させた。次に再度脱気したEtOH/水10:90の溶解溶媒2mlを各々のバイアルに加えた。試料採取及び補充するレセプター相の量は200μlであり、各々の処理に対して総計5回繰り返した。最適放出を示した製剤を皮膚透過実験に選択した。
方法は実施例16において記載したものと本質的に同じであった。200μlのコロジオンを皮膚膜に取り付け、レセプター相を加える前に30分間乾燥させた。各々の処理に対して総計4回繰り返した。
高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析
先に記載したものと同じ方法、即ちPhenomenex kingsorb5mmのC18カラム250×4.6mm(フェノメネックス社(Phenomenex),Macclesfield,UK)とPhenomenex Securiguardガードカラムが装着されたアジレント(Agilent)シリーズ1100自動化システムを用いてHPLC分析を行った。DとFは波長220nmに設定された紫外線(UV)検出器を用いて検出した。移動相は40:30:30の水:MeOH:MeCNから構成され、0.45膜で抜き取ることによって脱気し、1ml/分の流速で10分間、定組成で稼動させた。各々の試料の注入容量は20μlであった。F及びDの保持時間は通常、それぞれ2.6分と5.2分であった(図15を参照)。データはアジレントソフトウエアを用いて得た。標準検量線は、レセプター相において5,10,20,40,80及び100μg/mlの標準溶液を用いて測定することによって、ソルバトクロミック作用を防止した。検出限界は0.1μg/mlであった。
データ処理
クロマトグラムのピークを手動で積分し、データを希釈効果について補正した。累積放出を測定し、時間の平方根に対してプロットすることによって放出速度を測定した。フラックスを得るため、累積透過データを測定し、時間に対してプロットした。データ処理にエクセルを用い、統計分析にミニタブ(Minitab)を用いた。
放出したジゴキシンの累積質量
モル比が1:1,1:25,1:100のF:Dを含有する接着剤からのジゴキシンの累積放出(質量/面積)グラフを24時間にわたって測定し、図14において例示する。ジゴキシンはパッチ全てから放出された。24時間後の最大累積放出における傾向(表3)は、1:100>1:1>1:25であった。1:1と1:100の比率を含むパッチは類似のグラフを有し、1:1のモル比を含むパッチから最長12時間までに最大放出が観察された。エラーバーは小さかった。
モデルパッチからのジゴキシン負荷用量の放出パーセント
モル比が1:1,1:25及び1:100のF:Dを含有する接着剤からのジゴキシン負荷用量の放出パーセントを24時間にわたって測定し、図15に示した。放出パーセントは図14において観察された傾向に良く似ている。24時間後のジゴキシンの最大放出パーセント値を表3に例示する。エラーバーは小さかった。
図16において例示した主作用プロットを用いることによって、モデルパッチからのジゴキシンの拡散放出データを視覚的に要約した。ジゴキシン負荷用量の放出パーセントの比率における傾向と、放出パーセントがどのように経時的に増加するかとを示す。
図14における累積放出(質量/面積)グラフによって示される直線性は、三つのモル比全てからゼロ次放出速度過程を示した。放出速度は、各々のグラフの傾向線の勾配から測定した。理想的な直線性はR2=1である。放出値を表4において例示する。
放出されたFの累積質量
モル比が1:1,1:25,1:100のF:Dを含有する接着剤からのFの累積放出(質量/面積)グラフを24時間にわたって測定し、図17において例示する。フロセミドはパッチ全てから放出される。1:1の比率は、典型的な放出グラフを示すが、1:25と1:100の放出は直線状である。24時間後の最大累積放出における傾向は1:1>1:25>1:100であった(最大放出値については表3.3を参照)。エラーバーは小さかった。
フロセミド負荷用量の放出パーセントにおける傾向(図18)は、3.6において観察される傾向とよく似ており、24時間後の最大放出パーセントについては表5を参照する。エラーバーは小さかった。
図19において示す主作用プロットは、モデルパッチからのフロセミドの拡散放出データを要約する。主作用プロットはF負荷用量の放出パーセントの比率における傾向と、フロセミド負荷の放出パーセントがどのように経時的に増加したかとを示す。
パッチからブタ耳の皮膚を介するジゴキシンの透過
ブタ皮膚を介するジゴキシンの透過をジゴキシン負荷の累積質量/面積と透過パーセントの両方として示し、それぞれ図20と21において示す。そのグラフは類似の形状であり、非定型の透過グラフである。しかしながら、それらの図はジゴキシンがブタ皮膚を透過したことを示す。エラーバーは放出結果よりも大きい。見掛けの最大フラックス(最大透過値と共に表6)を図21から算出したが、遅延時間とKpはこれらのグラフから算出できなかった。
ブタ皮膚を介するフロセミドの透過をフロセミド負荷の累積放出(質量/面積)と透過パーセントの両方として示し、おのおの図22と図23において示す。両グラフは類似の形状であり、非定型透過グラフである。しかしながら、それらは、フロセミドがブタ皮膚を透過したことを示す。エラーバーはブタ皮膚を介するジゴキシンの放出と透過の場合よりも大きい。見掛けの最大フラックス値(表6と最大透過値)を算出したが、遅延時間とKpは図22から算出できなかった。
パッチから放出されたジゴキシンの質量/面積と、皮膚を透過したジゴキシンの質量/面積との間の比較
図24はパッチから放出されたジゴキシンの質量/面積と、皮膚を透過したジゴキシンの質量/面積とを例示し、比較できるようにする。皮膚を透過したジゴキシンより多量のジゴキシンがパッチから放出された。
図25はパッチから放出されたフロセミドの質量/面積と、皮膚を透過したフロセミドの質量/面積とを例示し、比較できるようにする。皮膚を透過したフロセミドより多量のフロセミドがパッチから放出された。
コロジオンから放出されたジゴキシンの累積質量/面積
各々のコロジオンから放出された、モル比が1:1,1:2.5及び1:10のF:Dを含有するコロジオンからのジゴキシン累積放出グラフを24時間にわたって測定し、図26において例示する。24時間後の最大累積放出における傾向(表7を参照)は1:100,1:2.5>1:10であった。三つのグラフの形状は類似し、エラーバーは小さかった。
モル比が1:1,1:2.5及び1:10のF:Dを含有するコロジオンからのジゴキシン負荷用量の放出パーセントを24時間にわたって測定し、図27において示す。放出パーセントは図26において観察された傾向によく似ている。24時間後のジゴキシンの最大放出パーセント値を表8において例示する。エラーバーは小さかった。
図28は時間の平方根に対してプロットした三つの異なるコロジオンからのジゴキシンの累積放出を例示する。プロットの直線性は一次放出速度過程を示し、1:10は最大放出速度を示す。R2と放出速度を表9において例示する。
コロジオンから放出されたフロセミドの累積質量/面積
モル比が1:1,1:2.5及び1:10のF:Dを含有するコロジオンからのフロセミドの累積放出グラフを24時間にわたって測定し、図29において示す。フロセミドは異なるコロジオン全てから放出され、典型的な放出グラフを生成した。24時間後の最大累積放出における傾向は、1:1>1:2.5>1:10であった(最大放出値について表10を参照)。エラーバーの大きさは変化した。
フロセミド負荷用量の放出パーセントにおける傾向(図30)は、累積放出の傾向によく似ている。24時間後の最大放出パーセントについては表10を参照する。エラーバーは小さかった。
図31は時間の平方根に対してプロットした三つの異なるモル比を含有するコロジオンからのフロセミド累積放出を示す。直線性は1:1から報告され、一次反応速度過程を示した。放出値については表11を参照する。
コロジオンからのブタ耳の皮膚を介するジゴキシンの透過
ブタ皮膚を介するジゴキシンの透過をジゴキシン負荷の累積質量/面積と累積パーセントの両方で例示し、おのおの図32と図33において例示する。両グラフは形状において類似し、非定型の透過グラフである。しかしながら両グラフはコロジオンからのジゴキシンが皮膚を透過することを示す。エラーバーはコロジオン放出結果の場合よりも大きかった。AFMと最大透過値については表12を参照する。遅延時間とKpはこれらのグラフから算出できなかった。
累積質量/面積と累積パーセントの両方でブタ耳の皮膚を介するフロセミドの透過を示し、おのおの図34と図35において示す。両グラフは類似した形状であり、非定型透過グラフである。しかしながら、両グラフはフロセミドがブタの皮膚を透過したことを示す。エラーバーは大きい。AFMと最大透過値は表12において示す。しかしながら遅延時間とKpは図34から算出できなかった。
対照
対照はこの研究を通じて用いた。放出試験中、有効成分を含有しない製剤を対照として用いた。対応クロマトグラムは検出波長にピークを示さなかった。
パッチからのジゴキシンとフロセミドの拡散放出
皮膚表面で活性化合物を放出する皮膚用製剤が必要とされる。場合によっては律速段階が製剤からの活性化合物の放出である可能性はあるが、一般的に皮膚透過における律速段階は角質層を介する輸送であると考えられる。これが認められる場合には、化合物のバイオアベイラビリティが影響を受ける可能性はある。これは硬くなったイボ物質を介してジゴキシンとフロセミドが透過中に起こる確率は低い。イボは正常皮膚と比較して大きな割合のケラチン生成細胞を含有し、これは吸収の程度と速度を変調することが可能である。
これらの結果はジゴキシンの負荷質量の一部が全てのパッチから放出されたことを示した。放出の程度は放出されたジゴキシンの最大質量/面積を確立すべく累積放出(質量/面積)に関して観察した。この結果から患者の皮膚表面と潜在的に接触することが可能であった最大用量を予測することができた。これは約136.18μg/cm2であると分かった。ジゴキシンの放出における初期バーストが全てのパッチから認められた。これは1:1と1:100のモル比を含有するパッチからが最も突出していた。これはパッチの表面、又は表面付近でジゴキシン分子が放出するためであり得る。三つの全比率からの放出は直線性であり、これはゼロ次放出速度過程を示すので、望ましい局所送達デバイスである。最大放出(質量/面積)の傾向は、1:100>1:1>1:25であった。1:100の比率は、最大質量/面積のジゴキシンを含有したので、期待通り放出最大質量/面積を与えた。1:1の比率は、最小質量のジゴキシンを含有したので期待されなかったが、類似の結果を与えたため、負荷が放出の律速因子ではなかったことを示唆する。
全パッチから一部のフロセミドが放出されたため、両薬物がマトリックスから同時に放出されたことが確認され、従って、両薬物は潜在的に同時に皮膚を透過し得るだろう。
フグチ(Huguchi)(1962)は、パッチのようなマトリックスデバイスからの薬物放出は時間の平方根の関数であることが多いと述べた。直線性プロットは一次放出速度過程を示す。1:1の比率では次数を確立するために時間の平方根に対して累積放出(質量/面積)をプロットすることが必要であったが、累積放出(質量/面積)としての反応速度はゼロ次放出速度過程を示さなかった。1:1の比率は一次放出速度過程を示したが、放出速度は他の比率よりもずっと大きく、放出された質量/面積は他の比率よりもかなり大きかったので、1:1の比率はフロセミド送達に関して第一選択であったことを示唆する。
1:1のモル比を含有するモデルパッチからブタの皮膚を介するジゴキシン及びフロセミド混合物の透過
皮膚吸収は幾つかの過程を伴う。まず有効成分は製剤から放出される。次に有効成分は皮膚の表面に遭遇し、角質層貯留層を構築する。これによってバリアを透過し、最終的に皮膚の別の区画内に拡散するようになる(シェーファー(Schaefer)及びレーデルメーラー(Redelmeler),1996)。
放出された質量が透過された質量よりも大きかったという点において、パッチから放出されたジゴキシンとフロセミドの質量/面積と、皮膚を介して透過されたジゴキシンとフロセミドの質量/面積とにおいて差が観察された。パッチから溶出溶媒へジゴキシンとフロセミドが放出された質量が角質層で放出されたものとほぼ同じであると仮定する。これは各々の多量の有効成分が皮膚において保持され得ることを示唆する。図26と図27の目視検査からフロセミドより高い割合のジゴキシンが皮膚において保持されることを観察することができる。感染部位に過剰のジゴキシンを有することが望ましいので、これは肯定的な結果であった。
パッチに関するようにコロジオンからのジゴキシンとフロセミドの放出は、三つのパラメータ、即ちモル比と、薬物負荷と、薬物とコロジオンマトリックスの間の相互作用とによって潜在的に制限されるだろう。この実験の目的は、最大量のジゴキシンと十分量のフロセミドを放出したD:Fのモル比を含有したコロジオンを確立することであった。これは更に透過試験に使用されるだろう。全体としてジゴキシンの放出は比率の選択においてフロセミドの放出を超える大きな影響を備えるだろう(実施例14)。
結果は、ジゴキシンの負荷質量の一部が三つのコロジオン全てから放出され、放出が経時的に増加したことを例示した。累積放出(質量/面積)プロットは放出の程度を示し、24時間後に放出された最大用量を例示した。24時間後に放出されたジゴキシンの最大用量は約34.01μg/cm2であったが、理論的には患者の皮膚表面に送達された用量であった。
フロセミドは全てのコロジオンから放出され、全コロジオンがジゴキシンとフロセミドの同時放出を示したので、全コロジオンが潜在的に透過試験において使用し得ることを示す。48時間後に放出された最大用量は約6.02μg/cm2であった。
時間の平方根に対するフロセミドの放出累積質量/面積は、1:1の比率で直線性を示し、R2値は1に近かった。この比率は最大速度の放出も例示した。しかしながら他の比率のR2値は1に近くなかったので、相関性が悪いことを示す。
要約すると、ジゴキシンとフロセミドの最適な送達を潜在的に提供し得る比率の決定は、特にジゴキシンの放出に関してパッチほど明確ではなかった。
累積質量/面積と総負荷の透過パーセントとして透過データを示した。透過データはフロセミドとジゴキシンの両方が同時に皮膚を透過したことを示したので、透過データを局在化の予測に使用することが可能である。
パッチとコロジオンの間の比較
コロジオン製剤とパッチ製剤を統計学的に比較することはできなかった。何故なら比率の選択の背後にある根拠は同じであったが、各々の製剤について選択された実際の比率が僅かに異なったからである。これまでの考察はパッチとコロジオンから得られたデータを比較してきたが、この次の考察部分は製剤間の質的な差を比較する。
皮膚への適用時、コロジオン中に多量のエタノールが存在したが、パッチにはエタノールは存在しなかった。コロジオン製剤中のエタノールは性器イボの治療において潜在的な問題になるかもしれない。イボ組織の性質が皮膚イボと異なるのでスティンギング(チクチクとした痛み)を惹起する可能性がある。周囲の感受性粘膜に適用しないでイボの領域に適用を限定することも難しい。これを克服する可能な製剤溶液、例えばリグノカインのような局所麻酔剤を製剤に含めた製剤溶液が存在する。しかしながらこれは製剤中の有効成分数を増加させることになり、製品の医薬品許諾を複雑にするだろう。更にある程度のスティンギングは、これらのイボの部位を考慮して、および重篤度に依存して患者が我慢して受け入れるかもしれない。他方エタノールを包含させることによって、基底層への経皮吸収が助けられるかもしれない。角質化皮膚の脱水は皮膚を亀裂させ、作用部位への顕微鏡的経路を形成する可能性がある。エタノールは脂質を普通の皮膚中に可溶化することによって透過増強剤として働くことも公知である。HPVに感染した皮膚におけるこの程度はまだわかっていないが、恐らくこの種類の組織における脂質の割合が低いため低下するだろう。
パッチはコロジオンよりも厚い薄膜を提供するので、より大きな質量の二成分の薬物の組合せを製剤内に組み込むことが可能であり、恐らく持続性治療を提供するのでコンプライアンスを増加させる。コロジオンの薄膜の厚さは約5〜20ミクロンであり、パッチの約1mmと比較して皮膚へ適用される有効成分の量を制限する(シェーファー及びレーデルミラー,1996)。これは、パッチの上面からバルクマトリックスを通ってパッチ中の大部分の範囲まで分子が移動するので、投薬の頻度を減らし、コンプライアンスを助けることを示唆する。両剤型は弾力性であり、イボ組織において可動性はほとんどないが、足底イボだけが平面なので弾力特性が必要とされる。一般イボの治療におけるこれらのパッチの適合性を次の臨床試験において確立する。概して、製剤は作用の発現、生物学的反応の持続期間と程度に影響を及ぼす経皮吸収の速度過程と程度を決定する。
図40は本発明に従う送達手段による治療中の病変を示す。
図41は21日間の治療後の病変を示す。
上記の実施例に加えて、以下の追加実施形態は、経皮送達デバイスからのジゴキシンとフロセミドのインビトロでの放出と透過を示す。異なる量のジゴキシンとフロセミドを含有する幾つかのグルー中薬物型製剤をそれらの薬物放出速度、ブタの皮膚を介する薬物透過速度及び皮膚試料内の薬物濃度について比較した。皮膚飽和を提供すべく有効成分の比率を変えることによって、フロセミドとジゴキシンを送達する最適製剤を検討した。
ジゴキシンとフロセミドはシグマ社(Sigma,UK)から購入した。グルー1はナショナル・スターチ・アンド・ケミカル社から調達した。放出と透過試験に用いた溶媒と化学薬品はシグマから購入した。皮膚バリアとして用いたブタ耳の皮膚は、地元の食肉処理場から購入した。
都合の良い薬物負荷は、アクリレート系グルー内に1:1の比率で含まれるジゴキシンとフロセミドの両薬物とも25mg/mlである。薬物の総濃度が50mg/mlで維持されるなら、以下の系を試験することが可能である。
50mg/mlのジゴキシン
46.7mg/mlのジゴキシンと3.3mg/mlのフロセミド(14:1の比率)
40mg/mlのジゴキシンと10mg/mlのフロセミド(4:1の比率)
30mg/mlのジゴキシンと20mg/mlのフロセミド(3:2の比率)
25mg/mlのジゴキシンと25mg/mlのフロセミド(1:1の比率)
20mg/mlのジゴキシンと30mg/mlのフロセミド(2:3の比率)
10mg/mlのジゴキシンと40mg/mlのフロセミド(1:5の比率)
3.3mg/mlのジゴキシンと46.7mg/mlのフロセミド(1:14の比率)
50mg/mlのフロセミド
グルーのみを用いる対照
上記の系は質量比で比率を測定する。薬物のモル比はF:Dの比率1:1,1:25及び1:100でも試験し、結果を表13に提供する。
ブタ耳の皮膚を介する薬物透過をフランツ拡散セルを用いて測定した。組織を透過した両薬物の量を経時的に測定し、パッチ内の初期薬物負荷と比較した。モル比パッチをこの試験において用いた。ブタ耳の皮膚をモデル膜として用い、この組織を介する薬物の放出をフランツセル装置を用いて測定した。皮膚はHPLC分析内の移動相に用いるような水:メタノール:アセトニトリル(40:30:30)を含有する受容液の上に取り付けた。
皮膚は薬物の保持能を備えることが十分に裏付けられている。一般的に薬物のlogP値が高い程、皮膚内に保持される程度が大きいと考えられる。72時間の終了時の皮膚試料中に存在した薬物の量は、パッチを投与した皮膚を均質化し、薬物を抽出することによって測定した。各々のフランツセルにはQを含有し得る直径2cmのパッチを負荷した。
グルーから放出された薬物の累積量か皮膚を透過した薬物の累積量、Q(μg/cm2)を図45において時間に対してプロットした。このような傾斜(少なくとも5つのデータ点を使用)の直線状部分は、定常フラックス、Jssであると考えられた。次にグルーから放出されるか、皮膚を通るかいずれかにより拡散できる速度を決定する各々の薬物の定数、透過係数、Kp(単位=cm/時間)を以下の式によって算出した。
式中Cvはドナー区画内の透過物の濃度である(パッチ内のジゴキシンかフロセミドの濃度、単位=μg/cm3)。
パッチを最初の9製剤から製造し、これらの製剤から移動相溶液内への薬物放出を測定した。
ジゴキシンのレベルは、負荷製剤に無関係であった。それは皮膚が3.14cm2に40μg、即ち、12.73μg/cm2の濃度にてジゴキシンで飽和されたことを示す。フロセミドは皮膚内には蓄積されず、皮膚を解して直接透過した。72時間にて測定された濃度は、負荷濃度に依存する皮膚内のフロセミドの一時的な兆候であった。結果を図44に示す。
しかしながら、この試験は、非常に親油性の物質をドナー相に使用して、ジゴキシン及びフロセミドの両方の皮膚透過を最大化するために濃度勾配を高めているので、皮膚を介するジゴキシン全体の透過が高められた。
ジゴキシン、ジギトキシン及びラノキシン(IV)の溶解度及びICVT効力の比較
1)ICVT活性(ICVT−ivities)(イオン性反ウイルス療法−活性)の比較
ジゴキシン及びジギトキシン溶液は、粉末から、70%エタノール1ml当たり250μgの濃度に調製した。それらのICVT活性を、「標準」ジゴキシン調製物、即ち、10%エタノール1ml当たり250μgにて供給されているIVラノキシンと比較した。
ジゴキシン及びジギトキシンの飽和溶液を90%エタノールで調製し、そのICVT活性を「標準」ジゴキシン調製物、即ちラノキシンと比較した。
ジギトキシン(四角形)はここでもジゴキシンより効果的であった。
486μg/mlは約8倍も濃縮されており、仮にジギトキシンが実際に2倍の効力があるとすれば、これまでの用量の16倍も効果的であるものを使用することが可能になるであろう。無論、このより高濃度のものの毒性についても試験する必要がある。
ジゴキシンとジギトキシンの新たな溶液を粉末から70%エタノール1ml当たり250μgの濃度に調製し、それらのICVT活性を、それらの相対的な効力を更に調べるために、「標準」ジゴキシン調製物、即ち、IVラノキシンと比較した。結果を図51に示す。
ヒト胎児肺組織由来の細胞系であるMRC5細胞(ヤコブス(Jacobs)ら、1970年)をバイオウィッタカー(BioWhittaker)から入手した。細胞を10(v/v)%仔牛血清(ライフテクノロジーズ(Life Technologies)社)を補充したイーグル培地(ライフテクノロジーズ社)中にて増殖させた。MRC5細胞は水疱瘡ウイルス(VZV)原料製品に対して使用し、VZV複製におけるイオン性反ウイルス効果を検討する実験にて使用した。
正常細胞において許容される薬物最大濃度を、薬物含有培地におけるコンフルエントに達していない培養物を72時間培養することにより決定した。細胞は位相差顕微鏡を使用して直接調べた。
細胞の複製を可能にする薬物最大濃度を、72時間後の細胞を採取し、かつ計数して、同様に決定した。細胞数における10倍の増加は、正常細胞の複製の典型であるとみなした(72時間において最小でも3つの集団で倍加)。
MTTアッセイは、抗ウイルス法及びプロトコル(キンチントン(Kinchington),2000年)に記載したように実施した。
VZVのエレン菌株をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手した。
1.6.VZVモノレイヤープラーク阻害アッセイ
VZV感染細胞は、5cmのペトリ皿内のMRC5細胞の予め形成されたモノレイヤーに、感染細胞懸濁液の5mlを接種して、72時間、又はウイルスのcpeが最適となるまで培養することにより、試験した。細胞をホルモル生理食塩水で固定し、カルボルフクシンで染色した。
2.1.インビトロでのVZV複製におけるフロセミドの効果
1.0mg/mlの濃度のフロセミドはMRC5細胞により十分に耐えられ、細胞形態及び複製された細胞において有害な効果は認められなかった。フロセミドは、この濃度にて、VZVプラーク形成を50%阻害した。
VZVの複製は、2.0mg/ml濃度におけるフロセミドにより完全に阻害された。
2.2.インビトロでのVZV複製におけるジゴキシンの効果
0.05μg/ml濃度のジゴキシンはMRC5細胞により十分に耐えられ、細胞形態及び複製された細胞において有害な効果は認められなかった。ジゴキシンは、この濃度にて、VZVプラーク形成を50%阻害した。
VZV複製は、0.1μg/mlの濃度におけるジゴキシンにより完全に阻害された。
2.3.インビトロでのVZV複製におけるフロセミド及びジゴキシンの効果
VZV複製は、フロセミド及びジゴキシンの組み合わせたものにより、それらの個々のID50濃度にて完全に阻害された[表E]。組み合わせられた用量では、MRC5細胞により等しく耐えられ、細胞形態及び複製された細胞において有害な効果は認められなかった。
NB。隣接する感染多重度(MOI)の間では10倍の差が存在した。
未感染のMRC5細胞は、VZVのID50と同じ濃度である0.05μg/mlの濃度のジゴキシンの存在下にて正常の産生にて複製した。
未感染のMRC5細胞は、フロセミド及びジゴキシンの両者がそれぞれのVZVのID50の濃度にて存在している場合、正常の産生までとはいかなかったが、複製した。これらの濃度にて、VZVの複製は完全に阻害された。
MRC5細胞の代謝におけるフロセミド及びジゴキシンの効果をMTTアッセイにて調べた。フロセミド又はジゴキシンを、それぞれのVZVのID50の濃度にて培養した未感染の細胞において、代謝は正常レベルであった。フロセミド及びジゴキシンの両者がそれぞれのVZVのID50の濃度にて存在しているもので培養した未感染の細胞においても正常な代謝であった。これらの濃度において、組み合わせたものは、VZV複製を完全に阻害した(2.3)。
チアジド(ヒドロクロロチアジド及びメトラゾン)、スルホニル尿素(トルブタミド)、スルホナミド(フロセミド、アセタゾラミド、ブメタニド、トラセミド及びエタクリン酸)及びカリウム保持性利尿剤(アミロリド)の実施例についてICVT活性を試験した。強心配糖体であるジゴキシン、ジギトキシン、ラノキシン及びストロファンチンGについても試験した。
Claims (32)
- 有効成分経皮送達手段であって、該送達手段は、
DNAウイルスに感染した皮膚領域に適用可能な皮膚接着性か、でなければ皮膚耐性の支持層を具備し、支持層は、利尿剤(例えばループ利尿剤)と強心配糖体剤のうちの少なくとも一つからなる群から選択された少なくとも一つの有効成分を含む経皮的に有効なキャリア媒体を含むDNAウイルス感染症治療用組成物を含む、有効成分経皮送達手段。 - 前記送達手段は一つ又は複数の強心配糖体剤と併せて一つ又は複数のループ利尿剤を含む請求項1に記載の送達手段。
- 前記利尿剤はフロセミド、ブメトラニド、エタクリン酸及びトラゼミドのうちの一つ又は複数を含む、請求項1又は請求項2に記載の送達手段。
- 前記利尿剤はフロセミドである、請求項3に記載の送達手段。
- 前記強心配糖体は、ジゴキシン、ジギトキシン、メディゴキシン、ラナトシドC、プロシラリジン、kストロファンチン、ペルボシド及びウアバインのうちの一つ又は複数からなるジギタリス配糖体である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記強心配糖体はジゴキシンである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記キャリア媒体は、医薬許容性の接着剤中有効成分型製剤を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記接着剤は好ましくはアルキルエステル溶媒、例えば酢酸エチル内に溶解又は分散したアクリル系ポリマー接着剤を含む、請求項7に記載の送達手段。
- 前記キャリア媒体は、前記有効成分の放出と透過のうちの少なくとも一つを助けるべく一つ又は複数の医薬許容性賦形剤を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記キャリア媒体は、一つ又は複数の皮膚許容性溶媒を含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記溶媒は、以下の、例えばメタノール、エタノール、プロパノールなどの一価アルコール、例えば酢酸エチルのようなアルキルエステル、例えばプロピレングリコールのようなアルキレングリコール及び水のうちの一つ又は複数を含む、請求項10に記載の送達手段。
- 前記キャリア媒体は更に、カルボポールかヒドロキシプロピルセルロースのような少なくとも一つの粘度変調剤を含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記組成物からの前記有効成分の放出速度は10μg/cm2/24時間より大きく、好ましくは20μg/cm2/24時間より大きく、より好ましくは50μg/cm2/24時間より大きく、最も好ましくは100μg/cm2/24時間より大きい、請求項1〜12のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記支持層上か支持層内の前記有効成分の負荷は、前記組成物から前記皮膚に前記有効成分を送達できる前記送達手段のうちの前記部分のcm2当りの一つ又は複数の有効成分が0.5mg/cm2より大きく、好ましくは1.0mg/cm2より大きく、より好ましくは1.5mg/cm2より大きく、最も好ましくは2.0mg/cm2より大きい、請求項1〜13のいずれか一項に記載の送達手段。
- 利尿剤と強心配糖体の前記モル比は、配糖体モル:利尿剤モルが100〜0.1の範囲にある、請求項2〜14のいずれか一項に記載の送達手段。
- 有効成分:接着製剤の前記重量比は1:5〜20、好ましくは1:5〜15、より好ましくは1:8〜12の範囲にある、請求項7〜15のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記送達手段において皮膚接着性支持層が用いられ、前記組成物を含有する貯留層は前記支持層に取り付けられ、前記貯留層に放出層が取り付けられる、請求項1〜16のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記組成物を含浸させた島式貯留層を含む接着性パッチ型である、請求項17に記載の送達手段。
- ラッカー組成物を含む皮膚耐性接着膜が用いられる、請求項1〜16のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記ラッカーは弾性コロジオンラッカーである、請求項19に記載の送達手段。
- 前記コロジオンはベンゾインチンキ、パラフィン蝋とメチルセルロースを含有する混合物からなる、請求項19又は請求項20に記載の送達手段。
- 前記コロジオンはエーテル溶媒で希釈される、請求項21に記載の送達手段。
- 前記有効成分を含む前記組成物は吸収性貯留層の不在下において乾燥ラッカーの表面に直接適用及び接着される、請求項19〜22のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記有効成分を含む前記組成物は、前記有効成分を溶解及び/又は分散させる少なくとも一つの溶媒を含む、請求項19〜23のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記溶媒は水含有アルコール又は無水アルコールを含む、請求項24に記載の送達手段。
- 前記アルコールは例えばエタノールのアルカノールのような一価アルコールである、請求項25に記載の送達手段。
- 前記有効成分を溶解及び/又は分散する溶媒が存在し、有効成分:ラッカー組成物:溶媒の前記比率は0.01:1〜10:1〜10の範囲にある、請求項19〜26のいずれか一項に記載の送達手段。
- DNAウイルスを治療する前記組成物は、ヒトパピローマウイルス(HPV)感染症の作用に対する局所適用として有効である、請求項1〜27のいずれか一項に記載の送達手段。
- 前記組成物は足底イボと手/指と性器イボのうちの少なくとも一つのようなイボへの局所適用として有効である、請求項28に記載の送達手段。
- 請求項19〜29のいずれか一項に記載の送達手段を製造する方法であって、該方法は、
請求項1において規定される組成物を製剤化する工程と、
弾性コロジオンラッカーを提供する工程であって、これを固化させるか、でなければ粘着性になるようにする工程と、
前記組成物を前記固化又は粘着性コロジオンラッカーに直接適用する工程と、
任意に解除式保護層を前記暴露組成物に適用する工程と、
を含む送達手段の製造方法。 - 例えばヒトパピローマウイルス感染症のDNAウイルス感染症を治療する局所用薬剤の製造における利尿剤と強心配糖体のうちの少なくとも一つを使用する方法であって、前記局所用薬剤は弾性コロジオン層又は接着剤を含む、方法。
- 被験者におけるヒトパピローマウイルス感染症を治療する方法であって、該方法は前記被験者に局所用薬剤を適用する工程を含み、前記局所用薬剤は利尿剤と強心配糖体のうちの少なくとも一つと、弾性コロジオン層又は接着剤と、を含む、方法。
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Citations (4)
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---|---|---|---|---|
JPS6058913A (ja) * | 1983-08-22 | 1985-04-05 | エフ・ホフマン・ラ・ロシユ・ウント・コンパニー・アクチエンゲゼルシヤフト | 経皮性薬物放出装置および製造方法 |
JPH03240732A (ja) * | 1990-02-14 | 1991-10-28 | Yasuo Tanaka | 抗ウイルス剤 |
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DE4001034A1 (de) * | 1990-01-16 | 1991-07-18 | Eberhard Landau | Pflaster fuer die behandlung von warzen |
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US20010051182A1 (en) * | 1996-09-20 | 2001-12-13 | Hopp Robert B. | Skin patch for use in contact immunotherapy |
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Patent Citations (4)
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---|---|---|---|---|
JPS6058913A (ja) * | 1983-08-22 | 1985-04-05 | エフ・ホフマン・ラ・ロシユ・ウント・コンパニー・アクチエンゲゼルシヤフト | 経皮性薬物放出装置および製造方法 |
JPH03240732A (ja) * | 1990-02-14 | 1991-10-28 | Yasuo Tanaka | 抗ウイルス剤 |
JP2003514835A (ja) * | 1999-11-17 | 2003-04-22 | ディ・エスジー・ライセンシング・コーポレイション | 瘢痕を治療する方法と組成物 |
JP2003519163A (ja) * | 1999-12-30 | 2003-06-17 | ヘンダーソン モーリー リサーチ アンド ディベロップメント リミテッド | Dnaウイルス感染症の治療 |
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