KR20080043384A - 경피적 활성 성분 전달 수단 - Google Patents

경피적 활성 성분 전달 수단 Download PDF

Info

Publication number
KR20080043384A
KR20080043384A KR1020087007977A KR20087007977A KR20080043384A KR 20080043384 A KR20080043384 A KR 20080043384A KR 1020087007977 A KR1020087007977 A KR 1020087007977A KR 20087007977 A KR20087007977 A KR 20087007977A KR 20080043384 A KR20080043384 A KR 20080043384A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
digoxin
furosemide
skin
release
drug
Prior art date
Application number
KR1020087007977A
Other languages
English (en)
Inventor
이안 스튜어트 파르도
크리스토퍼 하트레이
Original Assignee
핸더슨 몰리 피엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 핸더슨 몰리 피엘씨 filed Critical 핸더슨 몰리 피엘씨
Publication of KR20080043384A publication Critical patent/KR20080043384A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A61K9/7023—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms
    • A61K9/703—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms characterised by shape or structure; Details concerning release liner or backing; Refillable patches; User-activated patches
    • A61K9/7038—Transdermal patches of the drug-in-adhesive type, i.e. comprising drug in the skin-adhesive layer
    • A61K9/7046—Transdermal patches of the drug-in-adhesive type, i.e. comprising drug in the skin-adhesive layer the adhesive comprising macromolecular compounds
    • A61K9/7053—Transdermal patches of the drug-in-adhesive type, i.e. comprising drug in the skin-adhesive layer the adhesive comprising macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl, polyisobutylene, polystyrene
    • A61K9/7061—Polyacrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/341—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide not condensed with another ring, e.g. ranitidine, furosemide, bufetolol, muscarine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A61K9/7015—Drug-containing film-forming compositions, e.g. spray-on
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/12—Keratolytics, e.g. wart or anti-corn preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

경피적 활성 성분 전달 수단은 DNA 바이러스에 감염된 피부 부위에 적용 가능한 피부 접착성 또는 피부 내성 기질을 포함하며, 상기 기질은 이뇨제 및 강심 배당체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 활성 성분을 포함하는 경피적으로 효율적인 캐리어 매체를 포함하는 DNA를 치료하는 조성을 포함한다.
DNA 바이러스, 피부, 이뇨제, 강심 배당체, 캐리어 매체.

Description

경피적 활성 성분 전달 수단{TRANSDERMAL ACTIVE PRINCIPLE DELIVERY MEANS}
본 발명은 항바이러스성 치료를 위한 능동 성분을 포함하는 경피적 전달 수단에 관한 것이며, 특히 포진 바이러스 감염과 같은 DNA 바이러스 감염의 예방 및 치료, 특히 전형적으로 보기 흉하고 불편한 사마귀를 유발하는 HPV(인 유두종 바이러스) 감염의 치료에 유용한 수송 수단에 관한 것이다.
포진 바이러스는 단백질 구조 내에 DNA 중앙 코어를 DNA 바이러스이다. DNA는 바이러스를 재생성하기 위하여 유전 코드를 지닌다. 바이러스는 재생성을 위해 살아있는 호스트 세포를 감염시켜야 한다. 항바이러스 화학요법에 대한 이상적인 타겟으로서 동작하는 중요한 효소를 포함하는 다수의 양호하게 특징지워진 바이러스 단백질이 존재한다. 이들은 DNA 복제에 필수적인 DNA 폴리머라제와 티미딘 키나제를 포함한다. 바이러스성 DNA의 복제는 바이러스 복제에 필수적이다. 감염된 바이러스의 복제는 살아 있는 호스트 세포 내에서 자연적인 이온 평형을 변경시킬 수 있다는 것이 공지되어 있다.
EP-A-0442744는 단순 포진 바이러스와 대상 포진 바이러스의 치료에 특정 배당체(글리코사이드)의 사용을 노출시킨다. WO 00/10574는 이 경우에, HIV 감염 치료와 같은 레트로 바이러스의 치료에서의 루프 이뇨제의 사용을 개시한다. 피부 배 리어를 가로지른 루프 이뇨제 및/또는 다른 강심 배당체 경피 적용이 DNA 바이러스의 감염증 치료, 특히 사마귀 같은 파필로마 바이러스 감염증 증상을 보이는 국소 피부의 전형적인 치료에 사용될 수 있고 효과적일 수 있다는 것을 놀랍게도 알게 되었다.
본 발명에 따르면, 한 양상에서, DNA 바이러스에 의해 감염된 피부 부위에 적용 가능한 피부 접착성 또는 다른 피부 내성 기질을 포함하는 경피적 활성 전달 수단이 제공되며, 상기 기질은 루프 이뇨제 및/또는 강심 배당체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 활성 성분 중 경피적으로 효과적인 캐리어 매체 내에서 DNA 바이러스의 체내침입을 치료하기 위한 조성을 포함한다.
발명의 다른 양상에서 경피적으로 효과적인 캐리어 매체 내에 루프 이뇨제 및/또는 강심 배당체 중 하나 혹은 둘 모두를 포함하는 조성을 형성하는 단계 및 한 세트 또는 점착성 콜로디온 층에 조성을 적용하는 단계를 포함하는 전달 수단을 제조하는 방법이 제공된다.
상술된 바와 같은 루프 이뇨제는 광범위한 적용 가능한 이와 같은 약물로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 루프 이뇨제는 푸로세미드, 부메타니드, 에타크릴산, 또는 토라세미드 중 어느 하나 또는 그 이상이다. 가장 바람직하게는, 루프 이뇨제는 푸로세미드로 구성되어 있다. 임의의 이론적 가정에 속박됨이 없이, 우리에 연구에 따르면, 루프 이뇨제는 명백히 세포의 이온 농도, 세포의 이온 평형, 세포의 이온 환경, 전위에 대한 변경을 통해 자신의 항바이러스 효과를 명백히 중재한다.
푸로세미드는 화학적으로 4-클로로- N-퍼푸릴-5-술파모일안트라닐 산인 안트라닐산 유도체이다. 특히 푸로세미드는 중성 pH의 물에 용해되지 않고 알칼리에서는 자유롭게 용해된다. 푸로세미드는 세포막을 가로지른 염소 이온의 전달을 방해함으로써 자신의 생리적 효능을 발휘한다. 푸로세미드는 짧은 동작 지속기간을 갖는 루프 이뇨제이다. 상기 푸로세미드는 간, 신장, 심부전에 의한 부종을 치료하거나 고혈압을 치료하는데 사용된다. 푸로세미드의 생물학적 이용 가능성은 약 60%에서 70%까지의 범위이며, 변화되지 않은 약물로서 여과 및 분비에 의해 주로 배설된다. 푸로세미드는 Na+/K+/2Cl- 의 공동-트랜스포머로 작용한다. 푸로세미드의 이뇨 효과에 대해서, 푸로세미드의 지배적인 작용은 신장의 Henle 고리의 상행 구역에서 이루어지므로, 일반적으로 '루프 이뇨제'라는 명칭을 얻게 되었다. 루프 이뇨제는 현저하게 K+ 분비를 촉진하여, 세포내 칼륨을 고갈시킨다. 이것은 장기간의 전신적 푸로세미드 사용의 가장 중요한 문제점, 즉 혈청 칼륨이 낮아지는 것을 초래할 수 있다. 어떤 이론적 가정에 속박됨이 없이, 세포의 이온 칼륨 고갈이 DNA 바이러스에 대해 루프 이뇨제가 유용하도록 한다고 가정한다.
푸로세미드의 주요 생체내 변화가 글루코로나이드라는 것이 증거를 통해 제시된다. 푸로세미드는 혈장 단백질, 주로 알부민과 광범위하게 결합한다. 건강한 사람에게서 1에서 400mcg/ml까지의 범위의 혈장 농도는 91~99% 결합된다. 치료 농도에서 결합되지 않은 부분은 2.3 - 4.4 % 사이의 범위이다. 푸로세미드의 반감기는 대략 2시간이고 소변을 통해 주로 배설된다.
상술된 바와 같은 강심 배당체는 디곡신, 디기톡신, 메디고신, 라나토사이드 C, 프로실라리딘, k 스트로판틴, 퍼루보사이드, 오아바인 등 중 어느 하나 또는 그 이상일 수 있다. 가장 바람직하게는, 디곡신은 단독으로 사용된다. 디기탈리스 종의 식물(예를 들어, 디키탈리스 퍼푸라, 디기탈리스 라나타)는 집합적으로 디기탈리스라고 칭하는 디곡신 및 디기톡신과 같은 강심 배당체를 함유한다. 다른 식물은 화학적으로 디기탈리스 배당체와 관련되는 강심 배당체를 함하며, 종종 디기탈리스라고 칭해진다. 따라서, 용어 디기탈리스는 배당체의 전체 그룹을 나타내는데 사용된다: 배당체는 2개의 성분, 즉 당과 카데놀리드로 이루어진다. 오아바인은 아프리카 식물인 스트로판터스 그라투스 (스트로판티딘 G로서 또한 공지됨)로부터 유도되고, 정맥 주사의 형태로 이용 가능하며(경구로는 흡수되지 않는다), 용해도가 높기 때문에, 배당체의 연구 시에 많은 실험실에서 사용된다. 이것은 실제로 디곡신으로서 동일한 작용 모드를 갖는다.
디곡신은 화학적으로 (3b, 5b, 12b)-3-[0 -, 6 -디디옥시-b-D-리오브헥사피라노실-1"4)-0-2, 6-디데옥시-b-D-리보-헥사피라노실-(1"4)-2, 6-디데옥시-b-D-리보펙사피라노질)옥시}-12, 14-디하이드로시카드-20- 22)-에놀리드로서 기술된다. 이의 분자식은 C41H64O14이고 분자량은 780.95이다. 디곡신은 230℃ 이상에서 분해되면서 용해되는 무향의 백색 결정이다. 상기 약물은 실제로 물 및 에테르에서 용해되지 않고; 희석된(50%) 알코올 및 클로르포름에서 약간 용해되며; 피리딘에는 자유롭게 용해된다.
일부 환자가 특히 디곡신에 의한 부작용에 민감할 수 있기 때문에, 약물의 투여량은 환자의 임상적 상황이 보증될 때 신중하게 선택되고 조정된다.
세포 레벨에서, 디기탈리스는 나트륨 전달 효소인 나트륨 칼륨 아데노신 크리포스파테이스(Na/K ATPase)를 억제함으로써 자신의 주요 효과를 발휘한다: 이것은 직접적으로 심장 근육에 대한 전기 생리적 영향에 대한 책임이 있고, 이론적 가정에 속박되지는 않지만, 이론적 가정에 따르면, DNA 바이러스에 대한 디기탈리스의 활동에도 또한 책임이 있다.
상기 조성들에서 특히 선호되는 조성은 강심배당체 디곡신과 결합된 루프 이뇨제 푸로세미드이다. 단기간에 의해 분리되는 사용중인 두 개의 활성 성분의 순차적인 적용을 위해 별도의 수송 수단을 제공하는 것이 본 발명의 범위 내에 존재한다.
(X레이 미시분석을 포함한) 연구는 본 발명에 따른 조성을 포함하는 전달 수단의 항바이러스성 DNA 효과가 바이러스에 감염된 호스트 세포내 칼륨 이온의 고갈에 기인한다는 것을 입증한다. 간결하게, 이 연구들은 다음을 입증한다:
ㆍ낮아진 칼륨의 보충이 DNA 합성 및 이에 의한 바이러스 복제를 회복시킬 것이다.
ㆍ조합된 푸로세미드 및 디곡신 사용이 칼륨 고갈에 상당한 영향을 미친다.
ㆍ칼륨 고갈의 레벨이 정상 세포 기능을 허용하는데 충분하다.
ㆍ칼륨 고갈이 세포 독성을 가지지 않는다.
그러므로, 루프 이뇨제 및 강심 배당체의 적용에 의해 세포의 이온 농도, 세포의 이온 평형, 세포의 이온 환경 및 세포의 전위를 변경함으로써, 세포 내의 정상적 기능에 대한 손상 없이 세포 대사가 변경되어 DNA 바이러스의 복제가 억제될 수 있다. 따라서, 경피적으로 효과적인 캐리어 내의 루프 이뇨제 및/또는 강심 배당체의 사용은 바이러스성 DNA의 복제를 억제함으로써 바이러스 복제를 방지하거나 제어하는데 있어서 유용하다. DNA 바이러스, 즉 HSV1, HSV2, CMW VZV, 마말리안 포진 바이러스, 파포바이러스, 아데노 바이러스에 대한 항바이러스 효과가 입증되었다.
파보바이러스; 광견병 바이러스; 헤파드노바이러스; 소아마비 바이러스에 대해서도 또한 효능이 나타날 것이라고 믿는다.
본 발명의 경피적 전달 수단은 단순 포진 바이러스와 같은 DNA 바이러스에 감염된 피부의 장소로의 접착에 의한 외부 투약에 편리하게 적응될 수 있다. 피부 배리어을 가로질러 경피적으로 효율적인 국소형 적용제가 가장 유용할 것이다. 전달 수단 내의 조성은 아마도 특히 저속 방출을 위해 제형화될 수 있다. 본 발명의 많이 선호되는 특징은 상기 조성이 국소형 경피적으로 효율적인 적용제를 위해 제형화된다는 것이다. 항-바이러스성 활동을 손상시키지 않는다면 상기 조성 내에 다른 성분이 존재할 수 있다; 예로는, 보존제, 부속물, 첨가제, 부형제 및 용매가 있다. 바람직하게도, 본 발명은 눈 각막 감염의 치료를 위한 완충된 셀라인 제형 내에 국소형 적용제로서 푸로세미드 및 디곡신의 조합을 포함하는 전달 수단을 제공한다.
본 발명의 바람직한 애플리케이션은 사마귀를 유발하는 HPV 바이러스 감염의 매우 효율적인 치료를 위해 루프 이뇨제 및 강심 배당체의 국부적인 농도를 사용하는 것이다.
도1은 사용된 HPLC 방법에 따른 디곡신 농도의 눈금 곡선을 도시한 도면.
도2는 사용된 HPLC 방법에 따른 푸로세미드 농도의 눈금 곡선을 도시한 도면.
도3은 글루 1(87900A)로부터의 약물들 둘 모두의 방출을 도시한 도면.
도4는 글루 2(872677)로부터의 약물들 둘 모두의 방출을 도시한 도면.
도5는 글루 3(87201A)으로부터의 약물들 둘 모두의 방출을 도시한 도면.
도6 내지 10은 설명된 용매 내의 막으로부터 설명된 바와 같은 완충 용액 내로의 약물 방출의 HPLC 흔적을 도시한 도면.
도11 및 12는 상기 그래프들 간의 비교를 도시한 도면.
도13은 피부 침투 실험 동안 Franz-형 확산 세포를 도시한 도면.
도14는 F:D; 1:1, 1:25, 1:100의 몰비를 포함하는 접착제로부터의 디곡신의 누적 방출(량/에어리어) 프로파일을 도시한 도면.
도15는 F:D; 1:1, 1:25, 1:100의 몰비를 포함하는 접착제로부터의 디곡신의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출을 도시한 도면.
도16은 모델 페치로부터의 D의 확산 방출로부터의 데이터를 요약하기 위해 주요 효과를 도시한 도면.
도17은 F:D; 1:1, 1:25, 1:100의 몰비를 포함하는 접착제로부터의 F의 누적 방출(량/에어리어) 프로파일을 도시한 도면.
도18 F:D; 1:1, 1:25, 1:100의 몰비를 포함하는 글루 4로부터 방출된 F의 로딩이 퍼센티지를 도시한 도면.
도19는 모델 페치로부터의 F의 확산 방출로부터의 데이터를 요약하기 위해 주요 효과를 도시한 도면.
도20 및 21은 돼지 피부를 가로지른 디곡신의 침투를 디곡신의 로딩의 퍼센티지 침투 및 누적 량/에어리어 둘 모두로서 도시한 도면.
도22 및 23은 돼지 피부를 가로지른 푸로세미드의 침투를 푸로세미드의 퍼센티지 로딩 및 로딩의 누적 방출(량/에어리어) 둘 모두로서 도시한 도면.
도24는 패치로부터 방출된 디곡신의 량/에어리어 및 피부에 침투되는 디곡신의 량/에어리어를 도시한 도면.
도25는 패치로부터 방출된 푸로세미드의 량/에어리어 및 피부에 침투된 푸로세미드의 량/에어리어를 도시한 도면.
도26은 F:D 1:1, 1:2.5 및 1:100의 몰비를 포함하는 콜로디온으로부터의 디곡신의 누적 방출 프로파일을 도시한 도면.
도27은 F:D 1:1, 1:2.5 및 1:100의 몰비를 포함하는 콜로디온으로부터의 디곡신의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출을 도시한 도면.
도28은 시간의 제곱근에 대해 플롯팅된 3개의 상이한 콜로디온으로부터의 디곡신의 누적 방출을 도시한 도면.
도29는 F:D 1:1, 1:2.5 및 1:100의 몰비를 포함하는 콜로디온으로부터의 푸로세미드의 누적 방출 프로파일을 도시한 도면.
도30은 F:D 1:1, 1:2.5 및 1:100의 몰비를 포함하는 콜로디온으로부터의 디곡신의 누적 방출 프로파일을 도시한 도면.
도31은 시간의 제곱근에 대해 플롯팅된 3개의 상이한 몰비를 포함하는 콜로디온으로부터의 푸로세미드의 누적 방출을 도시한 도면.
도32 및 33은 돼지 피부를 가로지른 디곡신의 침투를 디곡신의 로딩의 누적 퍼센티지 및 누적 량/에어리어 둘 모두로서 도시한 도면.
도34 및 35은 돼지 귀 피부를 가로지른 푸로세미드의 침투가 누적 량/에어리어 및 누적 퍼센티지 둘 모두로서 도시한 도면.
도36은 디곡신의 화학적 구조를 도시한 도면.
도37은 푸로세미드의 화학적 구조를 도시한 도면.
도38은 환자의 발의 하측 상의 관련되지 않은 병변부를 도시한 도면.
도39는 도40의 병변부의 더 가까운 도면.
도40은 본 발명에 따른 전달 수단에 의한 치료 동안의 병변부를 도시한 도면.
도41은 21일 치료 후의 병변부를 도시한 도면.
도42는 울트라-클로즈업에서의 치유된 병변부를 도시한 도면.
도43은 각각의 제형으로부터 방출된 디곡신의 량을 시간에 대해 도시한 도면.
도44는 72 시간 후의 피부에서의 약물 농도를 도시한 도면.
도45는 글루로부터 방출되거나 피부에 침투되었던 약물의 누적 량을 도시한 도면.
도46은 디곡신 농도를 도시한 그래프.
도47 및 48은 푸로세미드 단독, 디곡신 단독, 및 조합된 푸로세미드 및 디곡신을 사용할 시의 항바이러 효과를 도시한 도면.
도49 내지 51은 디곡신, 디기톡신 및 라녹신(IV)의 ICVT-효능을 도시한 도면.
본 발명은 이제 다음 예들을 참조하여 실례로서 설명될 것이다.
예 1 내지 3은 HSV 바이러스에 감염된 세포에 대해 디곡신 및 푸로세미드를 포함하는 조성의 시너지 효과를 포함한 효과들을 설명하기 위하여 실례로서 포함된다. 그러나, 이와 같은 예가 전적으로 본 발명의 범위 내에서 경피적으로 효과적인 전달 수단을 설명하는 것이 아니라, 효능의 유용한 표시자라는 것이 여기서 강조되어야 한다.
예1
푸로세미드(1mg/ml)와 디곡신(30mcg/ml)의 동시 투여에 의한 항바이러스 활동에 따르는 시험관 내의 단순 포진 바이러스에 의한 생물학적 분석이 착수되었다. 배양 및 분석 방법은 단순 포진 바이러스 및 작은 변형을 갖는 베로 세포에 대해 Lennette 및 Schmidt(1979)에 의해 설명된 것을 따른다.
사용된 심플렉스 스트레인( simplex strain )
유형 1 단순 포진 스트레인(HFEM)은 Rockefeller 스트레인(HF)(Wildy 1955)의 유도체이며, 유형 2 단순 포진 스트레인(3345)인, 음경 아이솔레이트(penile isolate(1977년 스키너 등)은 원형 스트레인이었다. 이러한 원형은 필요로 될 때까지 -80℃에서 저장되었다.
세포 배양:
아프리카 녹색 원숭이 신장 세로(베로)가 영국의 생물학적 표준 및 제어의 국립 연구소로부터 획득되었거, 예들에서 모든 실험에 대한 단일 세포 라인으로서 사용되었다.
배양 매체:
세포 및 바이러스는 10% 우태아 혈청이 보충된 Glasgows 변형된 매체 상에 유지되었다.
결과:
hsv1 의 억제
Figure 112008023926071-PCT00001
이 예는 바이러스의 활동이 HSV1에 감염된 베로 세포에 저 농도의 스 톡(stock) 푸로세미드 및 배당체 용액을 적용함으로써 거의 제거된다는 것을 입증한다. 고 공도에서, 바이러스 활동은 완전하게 억제되었다. 이 스톡 용액의 항바이러스 효과는 푸로세미드 또는 디곡신 단독의 효과보다 훨씬 더 컸다. 세포 밖의 바이러스에 대한 직접적인 바이러스 박멸 효과는 없었다.
이러한 실험은 HSV2 스트레인을 사용하여 반복되었고, 거의 동일한 결과가 획득되었다.
예2
예1의 방법이 유형 1 포진 바이러스 스트레인(kos)을 사용해서 반복되었다. 유사한 결과가 획득되었다.
예3
둘 다를 동시 및 단독으로 적용할 때 푸로세미드 및 디곡신의 항바이러스 활동에 따르는 시험관내 생물학적 분석이 착수되었다.
상기 조성이 싱이한 유형의 베로 세포(아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 및 BHK1 세포)에 적용되었고, 저, 중간, 고 감염 정도(MOI)에서 유형 2 단순 포진 바이러스(스트레인 3345 및 180)에 감염되었다. 바이러스의 복제 억제는 아래 규모에 따라 스코어링되었다.
억제 없음 -
20% 억제 +
40% 억제 ++
60% 억제 +++
80% 억제 ++++
100% 억제 +++++
T는 약물 독성을 나타낸다.
다음의 결과는 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포와 유형 2의 단순 포진 스트레인 3345를 사용해서 획득되었다.
Figure 112008023926071-PCT00002
디곡신 단독의 최대 효과(+++)는 저 감염 정도에서 30mcg/ml의 디곡신 적용 시에만 발생되었다.
푸로세미드 단독의 최대 효과(+++)는 저 및 중간 감염 정도에서 푸로세미드 1mg/ml의 적용 시에 발생되었다.
루프 이뇨제 및 강심 배당체가 감염된 세포에 동시에 적용되었을 때, 가장 큰 효과(+++++)는 30mcg/ml의 디곡신 및 1mg/ml를 푸로세미드를 사용하여 획득되었다. 저, 중간, 고 정도의 감염에서 HSV2의 복제의 100% 억제가 나타났다.
유사한 결과가 다른 베로 세포 및 유형 2 단순 포진 스트레인을 사용하여 획득되었다.
이 예는 HSV2의 복제가 푸로세미드 또는 디곡신을 단독으로 적용함으로써 최대로 억제되지는 않는다는 것을 나타낸다. 그러나, 조합된 푸로세미드 및 디곡신은 HSV2의 복제를 완전히 억제한다.
예4
이 예는 경피적 약물 전달 장치로부터의 푸로세미드 및 디곡신의 시험관내 방출 및 침투를 설명한다. 방출 및 침투 둘 모두를 돕는 부가적인 첨가제의 존재 및 부재 시에 전달 시스템이 본 출원에 대한 제형으로서 평가되었다. 3개의 아크릴 폴리머-기반의 글루(glue)가 이용되었다.
물질
디곡신 및 푸로세미드는 영국의 Sigma로부터 구매되었다. Durotak 아크릴 글루는 National Starch & Chemical Company으로부터 공급되었다. Duro-tak 87-900A(글루1), 87-2052(글루 2), 87-201A(글루 3)가 사용되었다. 방출과 투과율을 위해 사용된 모든 용매 및 화학제는 Sigma에서 구매되었다. 인조 피부 배리어로 사용되었던 실리콘 시트는 미국의 Advanced Biotechnologies로부터 구매되었다.
방법
디곡신 및 푸로세미드의 전달을 위한 경피적 패치의 제형 및 시험관내 평가는 후술된다.
디곡신 및 푸로세미드의 HPLC 방법의 개발
효과적인 치료를 위해서, 약물은 최초에 피부 침투 전에 제형으로부터 방출되어야 한다: 각각의 경우에, 약물 방출 량 또는 투과율은 정량화될 필요가 있을 것이다. GHPLC는 방출되었던 약물의 양을 정량화하는 신뢰 가능한 수단을 제공한다. 약물 둘 모두의 HPLC 분석을 상술하는 여러 공개된 방법이 존재한다. 사용된 HPLC는 Phenomenex C 18(150*4.6mm 5 micro) 컬럼을 갖는 Agilent Series 1100였다. 이동 상은 물, 메탄올, 아세토니트릴 (40:30:30)이었고, 1ml/min로 흘렸다. 샘플의 20μℓ가 주입되었고 가변 파장 검출기(VWD)로 220 나노미터에서 검출되었다.
도1은 사용된 HPLC 방법에 따른 디곡신 농도의 눈금 곡선을 도시한다.
HPLC는 글루 3으로부터 방출되는 디곡신을 검출할 수 없었고, 이는 디곡신이 이 글루 내에서 우선적으로 결합된다는 것을 나타낸다.
글루 1은 빠른 속도로 약물들 둘 모두가 방출되는 가장 바람직한 방출을 나타낸다. 모든 약물이 3일의 기간에 걸쳐 방출되었으므로, 이 글루 내의 약물의 로딩이 증가되어 약물 방출이 증가된다는 것을 방출의 프로파일이 나타낸다는 것으로 간주되었다.
도2는 사용된 HPLC 방법에 따른 푸로세미드 농도의 눈금 곡선을 도시한다.
예5 - 전달 장치의 제조
디곡신 및 푸로세미드와 함께 사용하는데 적합한 특성을 갖는 아크릴 기반의 압력에 민감한 접착제는 National Starch & Chemical Company로부터 공급되었다. 용매의 범위 내에서 약물의 용해도를 측정하는 연구가 수행되었다.
Figure 112008023926071-PCT00003
용매 내의 용해되지 않은 약물을 글루와 혼합한 후; 400μm 두께의 막이 백킹 막(backing film)(Scotchpak 1109) 상으로 가해졌다. 이것은 대략 45분의 기간 동안 실론에서 용매가 증발되도록 하기 위하여 커버되지 않은 채로 남겨졌다(그러나, 광으로부터 차단됨). 일단 충분히 건조되면(대략 45분), 부가적인 용매 손실을 방지하기 위하여 노출된 표면은 라이너(Scotchpak 1020)로 커버되었다. 모든 물질은 측정된 크기로 절단되어 실온의 밀폐 용기에 저장되었다. 공지된 중량의 각 패치는 공지된 약물 농도를 가지며, 이 경우에 표면적당 높은 로딩이 필요로 된다.
용매는 포함된 약물, 에틸아세테이트, 메탄올, 에탄올, 프로판올과 함께 사용되거나, 건조한 약 분말을 아교와 직접 결합하는데 사용되었다.
예6 - 제형화된 패치로부터의 약물 방출의 측정
약물 방출 연구는 침투 연구 이전에 스크리닝 실습(screening exercise)으로 서 수행되었다. 1cm 직경의 원형 패치 제형이 선택되어, 여분의 방출 매체를(2ml) 함유하는 밀봉된 컨테이너 내로 배치되었다. 바이알은 밀봉되었고 48시간의 기간 동안 제어된 속도 및 온도(37℃)로 흔들어졌다. 설정된 시점; 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48 시간에, 샘플(0.5mℓ)이 분석을 위해 제거되었다. 이것은 샘플이 제거될 때마다, 2ml의 전체 량을 유지하기 위하여 새로운 방출 매체로 대체되었다. 각 샘플의 HPLC 분석은 시간에 따른 약물 방출을 플롯팅되도록 하였다. 상기 제형은 최적의 방출을 나타내는 것들을 기록하기 위하여 비교되었다. 임상적인 세팅에서, 패치는 대략 0.25cm2일 것이며, 필요로 되는 방출량은 24시간마다 25μg이므로, 방출 속도는 100μg/cm2/24시간이어야 한다.
도3은 글루 1(87900A)로부터의 약물들 둘 모두의 방출을 도시한다.
도4는 글루 2(872677)로부터의 약물들 둘 모두의 방출을 도시한다.
도5는 글루 3(87201A)으로부터의 약물들 둘 모두의 방출을 도시한다.
도6 내지 10은 설명된 용매 내의 막으로부터 설명된 바와 같은 완충 용액 내로의 약물 방출의 HPLC 흔적을 도시한다.
상기 그래프의 비교(도11 및 12)는 약물이 상기 약물을 용해하기 위해 프로필렌 글리콜보다는 오히려 메탄올을 사용하여 형성될 때, 약물이 더 양호하게 방출된다는 것을 나타낸다.
예7 - 제형화된 패치로부터의 약물 침투의 측정
최대 방출을 나타내는 약물과 혼합된 압력에 민감한 접착제가 선택되었고, 피부로의 침투가 평가되었다. 접작체 재형으로부터 피부막으로의 약물의 침투를 측정하기 위하여 Franz 세포 장치가 사용되었다.
Franz 세포에서, 상부 층은 경피적 제형을 나타내고 하부 층은 피부를 나타낸다. 피부 아래의 베슬(vessel)은 체액으로 채워지며(방출 연구에서 사용된 것과 동일함), 동일한 속도로 교반되었다. 지정된 시간 간격에서, 하부 베슬로부터의 샘플이 사이드 포트(side port)를 사용하여 취해지고, 약물 농도에 대해 HPLC를 사용하여 분석되었다. 따라서, 시간에 따른 막을 가로지른 약물의 침투가 계산되었다.
이 연구에 사용된 막은 미국의 Adavanced Biotechnologies로부터 구매된 합성 실리콘 기반의 피부막이었다.
침투 예로부터의 데이터는 약물이 합성 막에 침투한다는 것을 나타낸다.
예8 - 디곡신 및 푸로세미드의 조성
약물 파우더는 중량 비로 1:1로 혼합되었고, 500mg의 이러한 혼합물이 10ml의 글루 1과 혼합되었다. 그 후, 이 혼합물은 80 내지 120mm의 부위에 걸쳐 3M Scotchpak 1020 상으로 주입되었다. 용매는 증발을 위해 남겨졌고, 막은 3M Scotchpak 1109 폴리에스테르 막 라미네이트 백킹(film laminate backing)으로 커버되었다.
제형 내에서 약물 로딩은 약물 둘 모두의 2.6mg/cm2였다.
1cm 직경 패치의 표면적은 0.785cm2이다.
각각의 작은 패치는 1. 02mg의 디곡신 및 1.02mg의 푸로세미드를 함유한다.
2cm 직경 패치들의 표면적은 3.142cm2이다.
각각의 패치는 4.08mg의 디곡신 및 4.08mg의 푸로세미드를 함유한다.
예9 - 이하 참조
HPV 감염의 광범위하게 가변되는 해부학적 위치를 처리하기 위하여 디곡신 및 푸로세미드로부터의 고 적합성의 > 1 투여량이 조사되었고, 다음:
ㆍ발바닥 사마귀들: 글루 내의 약물 플라스터 유형 적용
ㆍ손/손가락 사마귀들:래커/페인트을 포함하는 변화를 제안하였다.
이러한 다음 예의 목적은 경피적 접착을 기반으로 한 글루 내의 약물 제형의 가능성 및 유연한 콜로디온 BP에 기반한 래커/페인트 제형의 가능성 둘 모두를 나타내기 위한 것이다.
예9 - 물질
디곡신(D) 배취(batch) 번호 181104 및 푸로세미드(F) 배취 번호 114310이 BUFA Pharmaceutical Products bv(네덜란드, 비트지스트)로부터 획득되었다. 세트리미드 배취 번호 A012633401이 Acros Organics(미국, 뉴저지)로부터 획득되었다. Duro-tak® 387-2287 (글루 4) 접착제가 National Starch & Chemical(네덜란드, 주테픈)로부터 획득되었다. 유연한 콜리디온 BP가 JM Loveridge plc(영국, 사우스햄턴)으로부터 획득되었다. HPLC 등급 아세토니트릴, 에탄올, 메탄올이 Fosher Scientific (영국, 러프버러)로부터 획득되었다. 돼지 귀는 스팀 클리닝 이전에, 지역 도살장으로부터 획득되었다. 물은 ELGA 실험실 증류기로부터 도출되었다.
예9 - 접착제 내의 약물 제형
선택된 F: D의 비율은 1:1, 1:25, 1:100(w/w)이었으므로, 상당히 과도한 디곡신을 제공한다. 이것은 디곡신이 F보다 상당히 큰 바이로스테틱 파워(virostatic power)를 갖는 다는 것을 제시하는 증거를 기반으로 하며(페이지 10 참조), 이는 과도한 디곡신을 전달하는 제형이 바이러스 로드를 감소시키는데 더 효과적일 수 있다는 것을 나타낸다. 디곡신 및 푸로세미드의 방출에 대한 각 비율의 영향이 제시되어 있고, 각각의 활성제의 최적의 방출을 생성할 수 있는 비율이 조사되었다.
접착제 내의 약물 제형은 약물과 첨가제가 희망하는 전달 프로파일(Venkatramann & Gale, 1998)에 필요로 되는 약물의 양에 따라 용해되거나 분산될 수 있는 매트릭스 시스템의 유형이다. 접착제 내의 용매가 증발하여 고체 매트릭스 생성물을 형성할 때, 열역학적 활동의 개념은 적용되지 않는다. 그러나, 임의의 특정 이론에 속박되지 않기를 희망할지라도, 용매는 건조 시에 매트릭스에서 마이크로채널을 생성하여, 약물에 대한 피부로의 '통로'를 형성하기 때문에, 중요한 성분이다라고 여겨진다. 일반적으로, 통합될 수 있는 약물의 양의 제한 팩터는 생체접착 특성이 손실되는 지점이다.
모델 패치의 조성 및 그 준비 방법을 정제하기 위해 예비 작업이 수행되었다. 약물을 부가적으로 첨가하면 패치의 접착 특성이 감소하기 때문에, 5g의 접착제에 0.5g의 약물의 로딩 용량이 최적이라는 것이 발견되었다. 약물 혼합물은 점도를 감소시키고 패치부터의 방출을 돕기 위하여 2.5ml의 메탄올이 혼합물에 첨가되었을지라도, 접착제에 직접적으로 첨가되었다.
일정한 패치 두께를 얻기 위하여, 약물-접착제 혼합물을 수평선을 폴리머-라이닝된 종이 상으로 붓고 나서, 상기 종이를 수직으로 잡아서, 상기 혼합물이 종이에 흘러내리도록 하는 것이 바람직하였다는 것이 결정되었다. 이 방법은 재현 가능한 것으로 발견되었고, 접작제 내의 약물은 거의 정확히 1mm인 것으로 깊이가 측정된 8cm2의 표면적을 커버하였다.
예10 - 접착제 내 약물 패치의 준비
패치는 5g의 접착제(습식 중량)으로의 0.5g의 약물 혼합물의 직접적인 첨가에 의해 준비되었다. F:D의 상이한 량 비를 포함하는 3개의 약물 혼합물이 준비되었고, 약물 혼합물의 조성은 테이블 1에 표시되어 있다. 적절한 량의 약물 혼합물 및 접착제가 분석 저울을 사용하여 직접적으로 유리 바이알 내로 계량되었고, 2.5ml의 메탄올이 상기 혼합물에 첨가되었다. 각각의 바이알은 3분 동안 버텍스-혼합(vortex-mixing)되었고, 밤새 혈정 회전기 상에서 회전하도록 유지되어, 약물 혼합물이 균일하게 분산되도록 하였다. 약물 혼합물을 포함하지 않은 제어 패치가 동일한 방법에 의해 준비되어 졌다. 그 후, 각각의 접착제 혼합물은 상술된 폴리머-라이닝된 종이에 놓이게 되었다. 상기 패치는 용매가 증발하도록 하기 위하여 48시간 동안 커버된 채로 남겨졌다(Chedgzy 등. 2001). 그 후, 투명한 폴리에틸렌 필름이 패치 백킹으로서 동작하도록 패치의 노출된 측면에 접착되었다. 개별적인 구형 패치가 1cm의 직경을 갖는(대략 0.785cm2) 코르크 송곳을 사용하여 제거되었다.
테이블 1: 패치를 제조하는데 사용된 0.5g의 약물 혼합물 내의 F와 D의 조성
Figure 112008023926071-PCT00004
예11 - 리셉터 상
리셉터 상의 기능은 방출되거나 침투된 약물에 대한 효율적인 싱크(sink)를 제공하는 것이다. 작업 규칙은 약물의 양이 소정의 싱크 내에서 자신의 용해도의 10%를 초과하지 않아야 한다는 것이다. 더구나, 싱크는 방출 또는 침투 과정을 방해하지 않아야 한다(Heard 등 2002). 이 작업에서 2개의 리셉터 상이 고려되었다. 약물 둘 모두가 각 매체에 자유롭게 용해된다는 것이 공지되어 있기 때문에, 이온성 계면활성제인 수성 세트리미드 30mg/ml, 에탄올/물 10:90 V/V이 선택되었다.
각각의 스톡 용액은 체적 플래스크(volumetric flask)에서 준비되었고 사용 전에 0.45 막을 통해 인출함으로써 가스가 제거되었다. 그러나, 세트리미드가 HPLC 분석을 상당히 방해하는 것이 나중에 발견되었고, 이 작업의 나머지에 대해, 에탄올/물 10:90 v/v가 리셉터 상으로서 사용되었다.
예10 패치로부터의 D 및 F 혼합물의 확산 방출
패치의 일측을 노출시키기 위해 폴리머-라이닝된 종이가 패치로부터 들려졌다. 그 후, 각 패치는 폴리머 필름으로의 작은 글루 도료와 함께 일반적인 7ml의 유리 스크류 캡 바이알의 바닥으로 개별적으로 고정되었고, 30분 동안 건조되었다. 사용된 분해 매체는 세트리미드 30mg mℓ-1 또는 에탄올/물 10:90 v/v였고, 각각의 5mℓ가 각각의 바이알에 개별적으로 첨가되었다. 그 후, 바이알은 분해 매체의 적절한 혼합을 보장하기 위하여 70rpm으로 설정된 Suart Scientific Gyro-Rocker(피셔, 영국)에 배치되었고, 실험실 인큐베이터에 32℃(피부의 온도)로 인큐베이팅되었다(Genlab). 1, 3, 6, 12, 24시의 시점(예상된 적용 기간)에서, 0.5ml의 분해 매체가 샘플링되었고 HPLC 오토 샘플러 바이알 내에 배치되었다. 각 샘플이 취해진 후, 리셉터 상은 또한 32℃에서 0.5ml의 스톡 분해 매체로 보충되었다. 24시간 후의 HPLC 분석까지, 샘플은 2-4℃로 냉장되었다. 각각의 리셉터 상에서의 각각의 처리를 위해 총 3회의 반복이 수행되었다. 최적의 방출을 나타내는 제형이 침투 예 동안 사용되었다.
막 선택에 대한 원리
사마귀를 치료하는 신규한 국소형 제형을 조사하기 위해, 실험실 모델로 인간의 사마귀 조직을 가로지른 약물 전달이 시험관 내 모델로 가장 적합할 것이다. 그러나, 이와 같은 물질은 이용 가능하지 않아서, 적절한 모델이 필요로 된다. 적절한 대체물로서 돼지 피부를 사용하는 것이 사용은 여러 작업에서 설명되었는데, 상기 귀는 인간 피부에 가장 가까운 침투율 특성을 제공하는 부분이다(Dick & Scott, 1992; Simon & Maibach, 2000). 이 경피적 약물 전달 시스템을 연구하기 위하여 침투 실험이 사용되었는데, 그 이유는 침투가 국소화(기저층에서의 경피적 흡수), 즉 플럭스가 클수록, 건강한 피부보다 사마귀에서 더 많은 수가 존재하는 케 라티노사이트를 포함하는 각질층을 통한 침투가 더 크다는 것을 예상할 수 있기 때문이다. 사마귀 병변부는 '정상적인' 피부에 비해 상대적으로 더 각질화된다. 그러나, 정상 피부를 가로지른 침투를 결정하면 특히 스크리닝 모드에서, 사마귀를 통한 침투를 예상할 수 있다. 피부 내의 케라틴이 피부 침투의 속도를 결정하는데 중요한 역할을 한다는 것이 여러 증거를 통해 정당화된다(Hashiguchi 등 1998; Heard 등 2003). 신선하게 도축된 돼지는 통상적으로 스팀 클리닝에 의해 소독을 받는데, 이는 전체 표피를 제거하는 효과를 갖는다. 이 작업에 사용된 돼지 귀는 스팀 클리닝 이전에 획득되어, 표피 및 진피가 손상되지 않았다.
예12 - 돼지 귀 피부의 침투
귀는 흐르는 물에 세척되었고, 충분한-두께의 등 피부는 외과용 메스를 사용하여 비절개 박리(blunt dissection)를 통해 연골로부터 분리되었으며, 털이 전기 면도기를 사용하여 제거되었다. 피부는 대략 2cm2의 샘플로 절단되었고, 각각의 조각이 염증 및 혈관이 없다는 것을 보장하기 위하여 육안 조사되었다. 그 후, 견본이 필요로 될 때까지, -20℃로 알루미늄 포일 상에 주름이 없는 상태로 저장되었다.
예13 - 패치로부터 돼지 귀를 가로지른 D 및 F 혼합물의 침투
피부 샘플은 냉장고로부터 제거되었고, 완전히 녹게 되었다. Franz-형 확산 세포의 도너 및 리셉터 컴파트먼트(도13 참조)는 타이트한 밀봉을 제공하고 리셉터 상(receptor phase)으로부터 임의의 누설을 방지하기 위하여, 그리스 칠이 행해졌 다. 폴리머-라이닝된 종이가 패치로부터 제거되어, 한 측면을 노출하였고, 피부의 각 조각의 표면 상의 중심에 견고하게 가압되었다. 접착이 설정된 후, 피부는 확산 세포의 리셉터 컴파트먼트(공칭 량 2.5ml)의 플랜지 상에 놓여서, 패치가 플랜지 개구 바로 위에 배치되도록 한다. 그 후, 도너 컴파트먼트가 최상부에 배치되었고, 핀치 클램프를 사용하여 리셉터 컴파트먼트에 클램핑되었다. (37℃로 유지되는) EtOH/물 10:90 리셉터 상은 리셉터 컴파트먼트를 신중히 채워서 공기 버블이 피부의 하측과 접촉하지 않고 리셉터 상이 피부와 접촉하였다는 것을 보장하는데 사용되었다. 리셉터 상의 균질 혼합을 보장하기 위하여 작은 자기 교반기가 추가되었다. Franz 세포가 (베르콘(vercon)을 포함하는) 물 욕조에 침지된 자기 교반기 상에 배치되었고, 37℃의 일정 온도로 유지되었다(따라서, 피부의 표면은 대략 32℃였다). 도너 개구는 상업적 패치를 습기로부터 보호하는 상업적 패치의 뒷 층과 유사하도록 폐색되었고, 샘플링 암(sampling arm)은 리셉터 상의 증발을 방지하도록 폐색되었다. 3, 6, 12, 24, 48 시간의 시점에서, 0.2μℓ의 리셉터 상이 샘플링되었고, 분석을 위해 필요로 될 때까지 2-4℃에서 냉장되었던 자동 샘플러 바이알 내로 전달되었다. 그 후, 리셉터 상은 보충되었다. 각각의 치료에 대한 복제의 총 수는 5였다.
페인트 매체의 선택
D 및 F의 국소성 투여에 이용 가능한 부형약의 어레이 중에는, 페인트-형 또는 래커 제형이 특히 통상적 및 생식기 사마귀의 치료에 유용하다고 간주되었다. 이것은 이와 같은 치료가 비교적 단순하고 염증에 대한 내성 정도를 제공하기 때문 이다. 또한 이와 같은 제품은 현재 상업적으로 입수 가능한데, 예를 들면, 살리실산 콜로디온 BP이다.
예14 - 콜로디온 제형
상업적으로 준비된 콜로디온 BP는 높은 용매 함량(주로 디에틸 에테르)을 갖는 액체이다. 피부에 적용 시에, 콜로디온의 휘발성 성분은 고속으로 증발하여, 액체 용액을 피부에 접착될 건조한 고체 막으로 변형시킨다. 드러그-인-글루(drug-in-glue) 접착제에서와 같이, 부형약의 물리적 상태의 변화는 액체/반-고체 피부과학적 시스템의 열역학 활동이 초기 액체 제형에만 적용되고, 고체 상태의 제형과 무관하다는 것을 의미한다. 그러므로, 액체 제형에 용매의 비율을 증가시킴으로써 더 많은 약물 혼합물이 첨가될 수 있기 때문에, 일정 정도까지의 활성제의 용해도는 자의적이다. 응고 시의 제형에서의 용매의 증발 이후에, 화합물의 결정체가 발생되지만; 이들은 제형의 매트릭스에서 유지될 것이다. 이것은 이의 정확한 메커니즘이 공지되어 있지 않을지라도, 결정체 및 피부 사이의 직접적인 접촉이 종종 양호한 전달을 제공하기 때문에, 전달 속도를 증가시킬 수 있다. 또한, 약물 전달을 행하는 초소형 레벨의 피부와의 초기 접촉을 유지하는 콜로디온의 능력, 즉 제한 팩터에 영향을 주는 것은 피부로의 접착력이다.
콜로디온에서 약물 혼합물의 최대 로딩을 결정하기 위하여 여러 예비 실험이 행해졌다. 콜로디온의 제한된 용해도로 인한 약물 혼합물의 침전을 포함한 문제점을 겪게 된다. 약물 혼합물은 흔들 때 용이하게 재-부유되지 않았고; 이는 소량의 약물 혼합물만이 콜로디온에 용해된다는 것을 의미한다. 이 문제점을 극복하고, 콜 로디온 내에서의 약물 혼합물의 용해도를 증가시키기 위하여, 약물 용해/감소된 침전 속도(속력이 감소되는 경우에 증가함) 및 건조(용매 증발) 속도 사이의 균형이 발견될 때까지 많은 양의 에탄올이 제형에 첨가되었다. 콜로디온 5ml 및 에탄올 5ml 내의 약물 혼합물 0.01g이 절충된다고 결론이 지어졌다. 이 제형은 또한 양호한 접착 특성을 나타내었다.
예15 - 콜로디온 제형의 준비
약물 혼합물(조성에 대해서 테이블 2 참조) 0.02g(스톡이 만들어짐)이 분석 저울 상에서 계량되었고, MeCartney 병 내의 콜리디온 10ml 및 에탄올 10ml에 직접 첨가되었다. 사용된 몰비는 드러그-인-어드히시브(drug-in-adhesive)에 비하여, 보다 적은 량의 약물 혼합물이 사용되기 때문에, F:D 1:1, 1:2.5(2:5) 및 1:10이었다. MeCartney 병 각각은 3분 동안 흔들리게 되었고, 혼합물이 동질이고 존재하는 임의의 공기 버블이 분산되는 것을 보장하기 위하여 혈청 회전기 상에서 회전하게 되었다. 제어 콜로디온이 또한 동일한 방법에 의해 준비되었지만, 약물 혼합물은 첨가되지 않았다.
테이블 2: 0.01 약물 혼합물에서의 F 및 D의 조성 - 콜로디온을 준비하는데 사용됨
Figure 112008023926071-PCT00005
예16 - 콜로디온으로부터의 D 및 F의 확산 방출
각각의 약물의 방출 정도 및 방출 속도에 대한 영향을 결정하기 위하여 2개의 약물의 상이한 몰비가 사용되었다. 콜로디온 200μℓ가 Gilson 피펫을 사용하여 일반적인 7ml 글래스 스크류 캡 바이알의 최하부에 투여되고, 3시간 동안 건조되었다. 그 후, 용해 매체 2ml, 다시 가스제거된 EtOH물 10:90이 각각의 바이알에 첨가되었다. 샘플링되고 보충된 리셉터 상의 량은 200μℓ였고, 총 5번의 복제가 각각의 치료에 대해 수행되었다. 최적의 방출을 나타내는 제형이 피부 침투 실험을 위해 선택되었다.
예17 - 콜로디온으로부터의 돼지 귀 피부를 가로지른 D 및 F의 침투
방법은 예16에서 설명된 것과 본질적으로 동일하였다. 피부 막이 콜로디온 200μℓ와 함께 배치되었고, 리셉터 상이 첨가되기 전에 30분 동안 건조되었다. 총 4개의 복제가 각각의 치료에 대해 수행되었다.
고압 액체 크로마토그래피( HPLC ) 분석
HPLC 분석이 상술된 것과 동일한 방법, 즉, Phenomenex Kinsorb 5mm C18 컬럼 250 × 4.6mm(Phenomenex, Macclesfield, UL) 및 Phenomenex Securiguard 가드 컬럼을 구비한 Agilent 시리즈 1100 자동화된 시스템을 사용하여 수행되었다. D 및 F는 220nm 파장으로 설정된 자외선(UV) 검출기를 사용하여 검출되었다. 이동 상태는 40:30:30 물:MeOH:MeCN으로 이루어지고, 0.45 막을 통한 인출을 통해 가스제거되며, 1 ml min-1의 흐름 속도로 10분 동안 등용매적으로 흘렸다. 각 샘플의 주입 량은 20μℓ였다. F 및 D의 보유 시간은 전형적으로 각각 2.6분 및 5.2분이었다(도 15참조). 데이터는 Agilent 소프트웨어를 사용하여 포착되었다. 표준 교정 곡선이 솔바토크로닉 효과(solvatochronic effect)를 방지하기 위하여 리셉터 상에서 5, 10, 20, 40, 80 및 100μg ml-1의 표준 용액을 사용하여 결정되었다.
데이터 핸들링
크로마토그램 피크는 수동으로 통합되고, 데이터가 희석 효과를 위해 수정되었다. 방출 속도를 결정하기 위하여 누적 방출이 결정되고 시간의 제곱근에 대해 플롯팅되었다. 플럭스를 획득하기 위하여 누적 침투 데이터가 결정되고 시간에 대해 플롯팅되었다. 데이터 프로세싱을 위해 엑셀이 사용되었고, 통계적인 분석을 위해 미니탭이 사용되었다.
예18 - 패치로부터의 디곡신의 확산 방출
방출된 디곡신의 누적 량
F:D; 1:1, 1:25, 1:100의 몰비를 포함하는 접착제로부터의 디곡신의 누적 방출(량/에어리어) 프로파일이 24시간에 걸쳐 결정되었고, 도14에 도시되어 있다. 디곡신은 패치들 모두로부터 방출되었다. 24시간 후의 최대 누적 방출에서의 트렌드(테이블 3)는 1:100>1:1>1>25였다. 1:1 및 1:100의 비율을 포함하는 패치는 유사한 프로파일을 가졌으며, 12시간까지의 최대 방출은 1:1의 몰비를 포함하는 패치로부터 관측되었다. 에러 바는 작았다.
모델 패치로부터의 디곡신의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출
F:D; 1:1, 1:25, 1:100의 몰비를 포함하는 접착제로부터의 디곡신의 로딩 투 여량의 퍼센티지 방출이 24시간에 걸쳐 결정되었고, 도15에 도시되어 있다. 이 퍼센티지 방출은 도14에서 관측된 트렌드와 유사하다. 24시간 후의 디곡신의 최대 퍼센티지 방출 값이 테이블 3에 제시되어 있다. 에러 바는 작았다.
테이블 3: 24시간에 패치로부터의 디곡신의 최대 방출 값
Figure 112008023926071-PCT00006
예19 - 패치로부터의 디곡신 방출 데이터를 도시한 주요 효과 플롯
도16에 도시된 주요 효과 플롯은 모델 패치로부터의 디곡신의 확산 방출로부터의 데이터를 시각적으로 요약하는데 사용된다. 이것은 디곡신의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출의 비율에서의 트렌드 및 이것이 시간에 따라 증가하는 방법을 도시한다.
예20 - 패치로부터의 디곡신의 (로딩의) 방출 속도 결정
도14의 누적 방출(량/에어리어) 프로파일에 의해 표시된 선형성은 3개의 몰비 모두로부터 0차 방출 키네틱스를 나타낸다. 방출 속도는 각각의 프로파일에 대한 트렌드 라인의 기울기로부터 결정되었다. 이상적인 선형성에 대하여 R2=1이다. 방출 값이 테이블 4에 제시되어 있다.
테이블 4: 모델 패치로부터의 디곡신의 방출 속도 및 각각의 몰비에 대한 R2 값
Figure 112008023926071-PCT00007
예21 - 모델 패치로부터의 푸로세미드의 확산 방출
방출된 F의 누적 량
F:D; 1:1, 1:25, 1:100의 몰비를 포함하는 접착제로부터의 F의 누적 방출(량/에어리어) 프로파일이 24시간에 걸쳐 결정되었고, 도17에 도시되어 있다. 푸로세미드는 패치 모두로부터 방출되었다. 1:1 비율은 정형적인 방출 프로파일을 나타내지만, 1:25 및 1:100은 선형이다. 24시간 후의 최대 누적 방출의 트렌드는 1:100>1:1>1>25였다(최대 방출 값에 대해 테이블 3.3 참조). 에러 바는 작았다.
예22 - 모델 패치로부터의 푸로세미드의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출
푸로세미드의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출에서의 트렌드는 24시간 후의 최대 퍼센티지 방출에 대해 3.6에서 관측된 트렌드와 유사하다(테이블 5 참조). 에러 바는 작았다.
테이블 5: 24시간에서 모델 패치로부터의 푸로세미드의 최대 방출 값
Figure 112008023926071-PCT00008
예23 - 패치로부터 푸로세미드의 방출 데이터를 도시한 메인 효과 플롯
도19에 도시된 메인 효과 플롯은 모델 패치로부터의 푸로세미드의 확산 방출 로부터의 데이터를 요약한다. 이것은 F의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출 비율의 트렌드 및 푸로세미드의 로딩의 퍼센티지 방출이 시간에 따라 증가하는 방법을 도시한다.
예24 - 패치로부터의 돼지 귀 피부를 가로지른 디곡신 및 푸로세미드 혼합물의 침투
패치로부터의 돼지 귀 피부를 가로지른 디곡신의 침투
돼지 피부를 가로지른 디곡신의 침투가 디곡신의 로딩의 퍼센티지 침투 및 누적 량/에어리어 둘 모두로서 도20 및 21에 각각 도시되어 있다. 프로파일들은 유사한 형상으로 이루어지며, 비정형적인 침투 프로파일이다. 그러나, 이 도면들은 디곡신이 돼지 피부에 침투한다는 것을 나타낸다. 에러 바는 방출 결과에 대한 것보다 더 크다. 분명한 최대 플럭스(최대 침투 값과 함께 테이블 6)가 도21로부터 계산되었지만, 래그 시간 및 Kp는 이러한 프로파일로부터 계산될 수 없다.
예25 - 패치로부터의 돼지 귀 피부를 가로지른 푸로세미드의 침투
돼지 피부를 가로지른 푸로세미드의 침투는 푸로세미드의 퍼센티지 로딩 및 로딩의 누적 방출(량/에어리어) 둘 모두로서 도22 및 23에 각각 도시되어 있다. 프로파일 둘 모두는 유사한 형상으로 이루어지며, 비정형적인 침투 프로파일이다. 그러나, 이들은 푸로세미드가 돼지 피부에 침투되었다는 것을 나타낸다. 에러 바는 돼지 피부를 가로지른 디곡신의 방출 및 침투에 대한 것보다 더 크다. 분명한 플럭스 최대값(테이블 6 및 최대 침투 값)이 계산되었지만, 래그 시간 및 Kp는 도22로부터 계산될 수 없다.
테이블 6: 돼지 피부를 가로지른 패치로부터의 디곡신 및 푸로세미드의 최대 침투 값
Figure 112008023926071-PCT00009
예26 - 1:1 비율의 F:D를 포함하는 패치로부터 방출된 량 및 피부를 통해 침투된 량 사이의 비교
패치로부터 방출된 디곡신의 량/에어리어 및 피부에 침투된 디곡신의 량/에어리어 사이의 비교
도24는 패치로부터 방출된 디곡신의 량/에어리어 및 피부에 침투되는 디곡신의 량/에어리어를 도시하며, 비교가 행해지도록 한다. 피부에 침투된 것보다 큰 량의 디곡신이 패치로부터 방출되었다.
예27 - 패치로부터 방출된 푸로세미드의 량/에어리어 및 피부에 침투된 푸로세미드의 량/에어리어 사이의 비교
도25는 패치로부터 방출된 푸로세미드의 량/에어리어 및 피부에 침투된 푸로세미드의 량/에어리어를 도시하며, 비교가 행해지도록 한다. 피부에 침투된 것보다 큰 량의 푸로세미드가 패치로부터 방출되었다.
예28 - 콜로디온으로부터의 디곡신의 확산 방출
콜로디온으로부터 방출된 디곡신의 누적 량/에어리어
F:D 1:1, 1:2.5 및 1:100의 몰비를 포함하는 콜로디온으로부터의 디곡신의 누적 방출 프로파일이 24시간에 걸쳐 결정되고, 도26에 도시되어 있으며, 콜로디온 각각으로부터 방출된다. 24시간 후의 최대 누적 방출의 트렌드(테이블 7 참조)는 1:100>1:2.5>1:10이었다. 3개의 프로파일의 형상은 유사하였고, 에러 바는 작았다.
예29 - 콜로디온으로부터의 디곡신의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출
F:D 1:1, 1:2.5 및 1:100의 몰비를 포함하는 콜로디온으로부터의 디곡신의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출이 24시간에 걸쳐 결정되었고, 도27에 도시되어 있다. 이 퍼센티지 방출은 도26에서 관측된 트렌드와 유사하다. 24시간 후의 디곡신의 최대 퍼센티지 방출 값은 테이블 8에 제시되어 있다. 에러 바는 작았다.
테이블 8: 24시간 후의 콜로디온으로부터의 디곡신의 최대 방출 값
Figure 112008023926071-PCT00010
예30 - 콜로디온으로부터 디곡신의 로딩의 방출 속도 결정
도28은 시간의 제곱근에 대해 플롯팅된 3개의 상이한 콜로디온으로부터의 디곡신의 누적 방출을 도시한다. 플롯의 선형성은 1차 방출 키네틱스를 나타내며, 1:10은 최대 방출 속도를 나타낸다. R2 및 방출 속도가 테이블 9에 제시되어 있다.
테이블 9: 콜로디온으로부터의 디곡신의 방출 속도 값
Figure 112008023926071-PCT00011
예31 - 콜로디온으로부터의 푸로세미드의 확산 방출
콜로디온으로부터의 푸로세미드의 방출된 누적 량/에어리어
F:D 1:1, 1:2.5 및 1:100의 몰비를 포함하는 콜로디온으로부터의 푸로세미드의 누적 방출 프로파일이 24시간에 걸쳐 결정되었고, 도29에 도시되어 있다. 푸로세미드는 정형적인 방출 프로파일을 생성하는 상이한 콜로디온 모두로부터 방출된다. 24시간 후의 최대 누적 방출의 트렌드는 1:1>1:2.5>1:100이었다(최대 방출 값에 대해 테이블 10 참조). 에러 바의 크기는 가변된다.
예32- 콜로디온으로부터의 푸로세미드의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출
푸로세미드의 로딩 투여량의 퍼센티지 방출의 트렌드(도30)는 누적 방출과 유사하다. 24시간 후의 최대 퍼센티지 방출에 대해서 도10을 참조하라. 에러 바는 작았다.
테이블 10: 24시간 후의 콜로디온으로부터의 푸로세미드의 최대 방출 값
Figure 112008023926071-PCT00012
예33 - 콜로디온으로부터의 푸로세미드의 방출 속도
도31은 시간의 제곱근에 대해 플롯팅된 3개의 상이한 몰비를 포함하는 콜로디온으로부터의 푸로세미드의 누적 방출을 도시한다. 선형성은 1차 키네틱스를 나타내는 1:1로부터 보고되었다. 방출 값에 대하여, 테이블 11을 참조하라.
테이블 11: 콜로디온으로부터의 푸로세미드의 방출 속도 데이터
Figure 112008023926071-PCT00013
예34 - 콜로디온으로부터의 돼지 귀 피부를 가로지른 디곡신 및 푸로세미드의 침투
콜로디온으로부터 돼지 귀 피부를 가로지른 디곡신의 침투
돼지 피부를 가로지른 디곡신의 침투가 디곡신의 로딩의 누적 퍼센티지 및 누적 량/에어리어 둘 모두로서 도32 및 33에 각각 도시되어 있다. 프로파일 둘 모두는 형상이 유사하며, 비정형적 침투 프로파일이다. 그러나, 이들은 콜로디언으로부터의 디곡신이 피부를 통해 침투한다는 것을 나타낸다. 에러 바는 콜로디온 방출 결과에 대한 것보다 더 크다. AFM 및 최대 침투 값에 대하여, 테이블 12를 참조하라. 래그 및 Kp는 이러한 프로파일로부터 계산될 수 없다.
예 35 - 콜로디온으로부터 돼지 귀 피부를 가로지른 푸로세미드의 침투
돼지 귀 피부를 가로지른 푸로세미드의 침투가 누적 량/에어리어 및 누적 퍼센티지 둘 모두로서 도34 및 35에 각각 도시되어 있다. 프로파일들은 유사한 형상으로 이루어지며, 비정형적 침투 프로파일이다. 그러나, 이들은 푸로세미드가 돼지 피부에 침투한다는 것을 나태난다. 에러 바가 크다. AFM 및 최대 침투 값이 테이블 12에 표시되어 있다. 그러나, 래그 시간 및 Kp는 도34로부터 계산될 수 없다.
테이블 12: 콜로디온으로부터의 디곡신 및 푸로세미드 혼합물의 최대 침투 값
Figure 112008023926071-PCT00014
예36 - 1:1 몰비의 F:D를 포함하는 콜로디온으로부터 방출된 량 및 돼지 피부를 통해 침투된 량 사이의 비교
컨트롤
컨트롤이 이 작업에 걸쳐 사용되었다. 방출 연구 동안, 활성제를 포함하지 않는 제형이 컨트롤로서 사용되었다. 대응하는 크래마토그램이 검출 파장에서 피크를 나타내지 않았다.
침투 연구 동안, 활성제를 포함하지 않는 제형 및 제형이 적용되지 않은 피부가 컨트롤로서 사용되었다. 대응하는 크래마토그램이 검출 파장에서 피크를 나타내지 않았다.
패치로부터의 디곡신 및 푸로세미드의 확산 방출
피부의 표면에 활성 화합물(들)을 방출하기 위하여 피부과학적 제형이 필요로 된다. 일반적으로, 일부 경우에, 속도-제한 스텝이 제형으로부터 활성 화합물(들)의 배출일 수 있을지라도, 피부 침투에서의 속도-제한 스텝이 각질층을 가로지른 전달이라고 여겨진다. 이것이 발생하는 경우, 화합물(들)의 생물학적 이용 가능성이 영향을 받을 수 있다. 이것은 굳은 사마귀 물질을 통한 디곡신 및 푸로세미드의 침투 동안 발생하지 않을 것이다. 사마귀는 정상적인 피부에 비하여 더 큰 비율 의 케라티노사이트를 포함하며, 이는 흡수 정도 및 속도를 변화시킬 수 있다.
접착제로부터의 디곡신 및 푸로세미드의 방출은 잠재적으로 3개의 파라미터: 몰비, 약물 로딩 및 약물의 접착제와의 상호작용에 의해 제한될 수 있다. 본 조사의 목적은 어느 몰비가 대량의 디곡신 및 충분한 량의 푸로세미드를 방출하여, 후속 침투 연구에서 사용될 수 있는지를 설정하는 것이다. 디곡신의 전체 방출은 푸로세미드의 비율 선택에서 더 큰 영향을 미칠 것이며, 예14를 참조하라.
패치로부터의 디곡신의 확산 방출
이러한 결과는 디곡신의 부분이 로딩 량이 패치들 모두로부터 방출되었다는 것을 나타내었다. 방출 정도는 방출된 디곡신의 최대 량/에어리어를 설정하기 위하여 누적 방출(량/에어리어) 면에서 관측되었다. 이로부터, 환자의 피부 표면과 잠재적으로 접촉할 수 있는 최대 투여량이 추정되었다. 이것은 136.18μgcm- 2정도인 것으로 밝혀졌다. 디곡신의 방출에서의 초기 버스트는 패치들 모두로부터 관측되었다. 이것은 1:1 및 1:100 몰비를 포함하는 패치로부터 가장 두드러졌다. 이것은 패치의 표면에서, 또는 상기 표면 부근에서에서의 디곡신 분자의 방출에 기인할 수 있다. 모든 3개 비율로부터 방출은 국소형 전달 디바이스의 바람직한 0차 방출 키네틱스를 나타내는 선형이었다. 최대 방출(량/에어리어)에 대한 트렌드는 1:100>1:1>1:25였다. 1:100 비율은 디곡신의 최대 량/에어리어를 포함하기 때문에, 예상되는 바와 같이 방출된 최대 량/에어리어를 제공하였다. 1:1 비율은 디곡신의 최소 량을 포함하기 때문에 예상되지 않는 유사한 결과를 제공하였고, 로딩이 방출 의 속도-제한 팩터가 아니라는 것을 나타낸다.
패치 제제에서의 사소한 변화, 및 제형들 간의 비교를 허용하도록 하기 위하여 로딩의 퍼센티지 방출이 계산되었다. 퍼센티지 방출은 매트릭스에서 유지된 많은 량의 약물로 인해 작을 것으로 예상되었다.
로딩의 퍼센티지 방출에서 관측된 트렌드는 누적 방출(량/에어리어)에 관한 것과 동일하였다. 각각의 제형으로부터의 로딩의 퍼센티지 방출에서 관측된 차이점은 퍼센티지 방출이 약물 로딩에 비례하지 않았다는 것을 나타냈다. 그렇지 않았다면, 각각의 제형으로부터의 퍼센티지 방출이 동일할 것이다.
양방향 ANOVA에 의해 수행된 통계적인 평가는 1:15 및 다른 비율 사이에서 디곡신의 로딩의 퍼센티지 방출에 상당한 차이가 존재하였다는 것을 나타냈다. 각각의 시점에서의 퍼센티지 방출의 상당한 차이가 또한 나타났고 시간에 따라 증가하였다. 이것은 디곡신의 상당한 부분이 24시간 후에 여전히 방출되고 있었다는 것을 나타낸다. 디곡신의 전달에 관한 임상 실습에서, 패치는 이 시간 기간 내에서 변화될 필요가 없었을 것이다. 이로써, 투여 빈도를 증가시키고, 결과적으로 환자 순응도(patient compliance)를 증가시킨다.
제형이 최단 시간 기간에서 D의 최대 전달을 제공한다는 면에서, 1:1 및 1:100 사이를 구별하기 위하여 방출 속도가 조사되었다. 1:100으로부터의 방출 속도가 5.19μg cm-2h-1에서 최대였을지라도, 방출 속도는 놀랍게도 4.84μg cm-2h-1에서 1:1의 방출 속도와 유사하였다.
패치로부터의 푸로세미드의 확산 방출
푸로세미드의 부분이 모든 패치로부터 방출되었고, 이것은 약물 둘 모두가 매트릭스로부터 동시에 방출되었으므로, 잠재적으로 동시에 피부에 침투할 수 있다는 것을 확인시킨다.
방출된 최대 량, 및 이에 따른 환자의 피부와 잠재적으로 접촉할 수 있는 푸로세미드의 최대 투여량을 설정하기 위하여 방출 정도가 다시 누적 방출(량/에어리어)로서 관측되었다. 이것은 432.02μgcm-2 정도였다는 것이 밝혀졌다.
푸로세미드의 방출 시에 초기 버스트가 관측되지 않았고, 이는 푸로세미드가 매트릭스에서 균일하게 분포되었다는 것을 나타낸다. 방출의 트렌드는 1:1>1:25>1:100이었다. 1:1 비율은 3시간 후의 푸로세미드의 고갈 및 다른 비율보다 더 큰 푸로세미드의 누적 방출을 나타내는 정형적인 방출 프로파일을 제공하였다. 1:1이 최대 량의 푸로세미드를 포함하는 것으로서 예상되었을지라도, 다른 비율로부터의 방출의 크기의 차이가 예상되지 않았다. 1:25 및 1:100 비율은 바람직한 0차 방출 키네틱스를 나타내는 선형 방출 프로파일을 제공하였다.
로딩의 퍼센티지 방출은 누적 방출과 동일한 트렌드를 따랐다. 퍼센티지 방출은 1:1로부터의 F의 비교적 고 퍼센티지 방출을 나타내는 22.82%(1:1)에서 3.85%(1:100)의 범위였다. 푸로세미드에 대한 전체 퍼센티지 방출 값은 디곡신에 대해 획득된 것보다 더 컸다.
양방향 ANOVA에 의한 통계적인 평가는 1:1 및 다른 비율 사이에 상당한 차이 가 존재하였다는 것을 나타냈다. 주요 효과 플롯은 최적의 퍼센티지 방출이 1:1로부터 획득되었다는 것을 나타냈고, 이는 또한 더 큰 량/에어리어를 방출하였다. 각각의 시점에서의(또한 디곡신과 함께 도시됨) 퍼센티지 방출의 상당한 차이가 시간에 걸쳐 증가하도록 주요 효과 플롯을 통하여 도시되어 있고, 이러한 패치의 투여 빈도가 24시간마다 많아야 한번일 것이라는 것을 나타낸다.
에러 바는 샘플들 사이의 양호한 재현성을 나타낸다.
Huguchi(1962)는 패치와 같은 매트릭스 디바이스로부터의 약물 방출이 종종 시간의 제곱근의 함수이다라고 하였다. 선형 플롯은 1차 방출 키네틱스를 나타낸다. 1:1 비율에 대하여, 누적 방출(량/에어리어)이 0차 방출 키네틱스를 나타내지 않때문에, 반응 차수 및 속도를 설정하기 위하여 시간의 제곱근에 대해 누적 방출(량/에어리어)을 플롯팅하는 것이 필요로 되었다. 1:1 비율이 1차 방출 키네틱스를 나타낼지라도, 방출 속도는 훨씬 더 컸고, 방출된 량/에어리어는 다른 비율보다 훨씬 더 컸으며, 이는 1:1 비율이 푸로세미드 전달면에서 제1의 선택이었다는 것을 나타낸다.
요약하면, 이 데이터는 침투 연구에 대한 가장 유망한 제형의 합리적인 선택을 하도록 하는데 충분한 정보를 제공하였다. 그러므로, 1:1 몰비를 포함하는 D:F가 선택되었다. 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두의 퍼센티지 방출은 다른 비율보다 더 크다. 1:1 비율은 또한 약물 둘 모두의 최대 량/에어리어를 방출하였다.
농도 기울기가 클수록 침투 속도가 높다. 이 비율은 또한 최대 방출 속도를 제공하였는데, 즉, 최적의 량이 최단 시간에 방출되었다.
1:1 몰비를 포함하는 모델 패치로부터 돼지 피부를 가로지른 디곡신 및 푸로세미드의 침투
피부 흡수는 여러 과정을 포함한다. 우선, 활성제가 제형으로부터 방출된다; 상기 활성제는 그 후, 피부의 표면에 닿고, 각질층 레저버(stratum corneum reservoir)를 설정한다. 이것은 배리어의 침투 및 피부의 또 다른 컴파트먼트 내로의 최종적인 확산을 초래한다(Schaefer 및 Redelmeler, 1996).
침투 프로파일은 총 로딩의 누적 량/에어리어 및 누적 퍼센티지 침투로서 표현되었다. 누적 침투 결과는 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두가 피부에 침투되었으므로, 미래의 국소화된 항유두종바이러스 치료제로서의 가능성을 갖는다는 것을 나타낸다. 피부를 통한 침투는 국소화를 예측할 수 있으므로, 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두가 표피의 기저층과 접촉하게 되는 것이 가능하다.
F:D 1:1을 포함하는 모델 패치로부터 방출된 디곡신 및 푸로세미드의 량 및 및 피부를 통해 침투된 량 사이의 비교
방출된 량이 침투된 량보다 더 크다는 점에서, 패치로부터 방출된 디곡신 및 푸로세미드의 량/에어리어 및 피부를 통해 침투된 디곡신 및 푸로세미드의 량/에어리어에서 차이가 관측되었다. 패치로부터 용해 매체 내로의 디곡신 및 푸로세미드의 방출 량이 각질층에서 방출된 량과 거의 동일하다고 가정하자. 이것은 활성제 각각의 량이 피부에서 유지될 수 있다는 것을 나타낸다. 도26 및 27의 육안 조사로부터, 푸로세미드보다 더 높은 비율의 디곡신이 피부에서 유지된다는 것을 관측할 수 있다. 이것은 감염 장소에서 과도한 디곡신을 갖는 것이 바람직하게 때문에, 긍 정적인 결과였다.
콜로디온으로부터 디곡신 및 푸로세미드의 확산 방출
패치에서와 같이, 콜로디온으로부터의 디곡신 및 푸로세미드의 방출은 3개의 파라미터, 즉, 몰비, 약물 로딩 및 약물 및 콜로디온 매트릭스 사이의 상호작용에 의해 잠재적으로 제한될 수 있다. 이 실험의 목적은 어느 콜로디온이 최대 량의 디곡신 및 충분한 량의 푸로세미드를 방출하는 D;F의 몰비를 포함하는지를 설정하는 것이다. 이것은 부가적인 침투 연구에 사용될 것이다. 디곡신의 전체 방출은 푸로세미드의 방출에 걸쳐 비율의 선택에 큰 영향을 준다(예 14).
콜로디온으로부터의 디곡신의 확산 방출
디곡신의 로딩 량이 3개의 콜로디온 모두로부터 방출되었고, 방출이 시간이 지남에 따라 증가되었다는 결과가 나타났다. 누적 방출(량/에어리어) 플롯은 방출 정도를 도시하였고, 24시간 후에 방출된 최대 투여량을 나타냈다. 24시간 후에 방출된 디곡신의 최대 투여량은 34.01μg cm-2 정도였고, 이론적으로, 환자의 피부의 표면에 전달된 투여량이다.
3개의 비율에 대한 누적 방출(량/에어리어) 프로파일은 정형적인 방출이었고, 6시간 이후에 안정수준에 달하기 시작하였다. 방출에 대한 트렌드는 1:10>1:2.5>1:1이었고, 콜로디온에서의 디곡신의 최초 량 및 이로부터 방출된 량 사이의 비율 관계를 나타내는 것이 예상되었다. 이러한 결과로부터, 로딩 량, 몰비 및 부형약(콜로디온)과의 상호작용이 방출된 량에서 제한 팩터일 수 있다는 것이 가능하다.
각각의 바이알 내로의 콜로디온 피펫의 볼륨의 변화를 허용하고 제형들 간의 비교를 허용하기 위하여 로딩 투여량의 퍼센티지 방출에 대한 방출 프로파일이 또한 플로팅되었다. 퍼센티지 방출은 25.54에서 30.36%의 범위였고, 이는 패치에 비하여, 그리고 예상되는 대략 10%에 비하여 상대적으로 높다. 이것은 접착제 및 콜로디온 매트릭스 사이의 차이가 반영될 수 있다는 것을 나타낸다. 가능한 설명은 용매가 건조 시에 증발하기 때문에 콜로디온의 매트릭스에서 더 큰 마이크로 채널이 형성되거나, 콜로디온의 더 높은 용매 함량으로 인해 패치에서보다 더 큰 수가 형성될 수 있다는 것이다.
로딩 투여량의 퍼센티지 방출은 누적 량/에어리어와 동일한 트렌드를 따르지 않았고, 1:1>1:10>1:2.5였다. 그러나, 이 트렌드는 패치로부터의 디곡신의 방출된 투적 량/에어리어의 트렌드와 상관되었다. 이것은 부형약의 효과가 3개의 콜로디온 모두로부터의 모든 방출 정도에 걸쳐 영향을 주고, 몰비의 차이가 트렌드에 기여한다는 것을 나타낸다.
양방향 ANOVA에 의한 통계적인 평가는 1:1 및 다른 비율 사이에 상당한 차이가 존재하였다는 것을 나타냈다. 최적의 퍼센티지 방출이 1:1로부터 획득되었지만, 이것은 방출된 최대 량/에어리어를 제공하지 않았다. 각각의 시점에서의 퍼센티지 방출의 상당한 차이가 (디곡신에서와 같이) 관측되었고, 이는 시간에 걸쳐 증가하였으며, 패치와 같이, 디곡신의 전달을 위한 콜로디온의 투여 빈도가 24시간마다 많아야 한번일 것이라는 것을 나타낸다.
에러 바는 작고, 이는 샘플들 사이의 양호한 재현성을 나타낸다. 요약하면, 이 조사 단계에서, 패치와 마찬가지로, 어느 콜로디온이 침투 연구에 사용될 것인지에 대한 결정이 1:1 및 1:10(즉, 디곡신의 최저 및 최대의 과도한 몰) 사이에서 이루어진다.
선형 플롯은 1차 방출 키네틱스를 나타냈다. 일반적으로, 방출 속도는 유사했고, 1:10이 최대 방출 속도를 제공하는 반면, 1:1이 최저 방출속도를 제공할지라도, 최적의 몰비는 이 데이터로부터 결정될 수 없었다.
콜로디온으로부터의 푸로세미드의 확산 방출
푸로세미드는 코든 콜로디온으로부터 방출되었고, 이는 모든 콜로디온이 디곡신 및 푸로세미드의 동시적인 방출을 설명하기 때문에, 침투 연구에 잠재적으로 사용될 수 있다는 것을 나타낸다. 48시간 후에 방출된 최대 투여량은 6.02μgcm- 2정도였다.
콜로디온으로부터의 푸로세미디의 누적 방출(량/에어리어)은 패치와 달리, 디곡신의 누적 방출(량/에어리어)보다 더 낮아서, 희망하는 감염 장소에 더 많은 디곡신을 잠재적으로 전달한다. 모든 몰비로부터의 프로파일은 정형적인 방출이었고, 초기 버스트는 1-6시간 사이에 관측되지 않았고, 6시간에 프로파일에서 안정수준에 달하였고, 이는 디곡신 방출 프로파일과 비교된다. 이것은 주로 고갈에 기인할 것이었는데, 그 이유는 이것이 약물 둘 모두로부터, 그리고 (더 높은 투여량의 디곡신 및 푸로세미드를 포함하는) 패치에서보다 더 적은 정도로 고갈이 관측되었 기 때문이다. 누적 방출(량/에어리어)에서의 트렌드는 1:1>1:1.5>1:100이었고, 1:1이 최저(량/에어리어)의 프로세미드를 포함하는 것으로 예상되지는 않았다. 이 트렌드는 또한 그렇지 않은 경우에는 푸로세미드의 퍼센티지 방출이 각각의 비율에 대해 동일하다고 예상할 수 있기 때문에, 디곡신이 푸로세미드의 방출에 영향을 미친다는 것을 나타내는 퍼센티지 방출 데이터에서 관측되었다.
양방향 ANOVA에 의해 통계적인 평가는 1:1 및 다른 비율 사이에 상당한 차이를 나타내었다. 최적의 퍼센티지 방출은 최대량을 또한 방출하는 1:1로부터 획득되었다. 각각의 시점에서의 퍼센티지 방출의 상당한 차이가 디곡신에서와 같이 나타났고, 6시간 후의 시점 내에서 관측된 바와 같이 더 적게 증가되었다. 이것은 콜로디온의 투여가 푸로세미드의 최적의 전달을 위해 더 자주 필요로 될 수 있다는 것을 나타낸다.
조사의 이 부분 전체에 걸친 에러 바는 작았고, 이는 샘플들 사이의 양호한 재현성을 나타낸다. 이 데이터의 요약에서, F의 전달을 위해, 1:1 비율이 가장 강한 후보라고 여겨졌다.
시간의 제곱근에 대해 푸로세미드의 방출된 누적 량/에어리어는 1에 가까운 R2 값을 갖는 1:1 비율에 대해 선형성을 나타낸다. 이 비율은 또한 최고 방출 속도를 나타낸다. 그러나, 다른 비율에 대한 R2 값은 양호하지 않은 상관을 나타내는 1에 가까운 리옷(riot)이었다.
콜리디온으로부터의 디곡신 및 푸로세미드 방출 데이터 사이의 비교
요약하면, 어느 비율이 잠재적으로 디곡신 및 푸로세미드의 최적의 전달을 제공하는지에 대한 판정은 특히, 디곡신의 방출에 관하여 패치에 대한 것만큼 명백하지 않았다.
이 조사는 몰비가 침투 연구를 위해 선택되는데 충분한 정보를 제공한다. 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두의 퍼센티지 방출이 본질적으로 다른 비율보다 더 컸기 때문에, 1:1 몰비의 D:F를 포함하는 패치가 사용되었다. 1:1 비율은 또한 최대 량/에어리어의 프로세미드를 방출하였다. 최대 농도 기울기를 제공한다.
1:1 몰비의 디곡신 및 푸로세미드를 포함하는 콜로디온으로부터 돼지 피부를 가로지른 디곡신 및 푸로세미드의 침투
침투 데이터는 총 로딩의 퍼센티지 침투 및 누적 량/에어리어로서 제시되었다. 침투 데이터는 푸로세미드 및 디곡신 둘 모두가 피부에 침투되었고, 국소화의 프레딕션(prediction)으로서 사용될 수 있다는 것을 나타냈다.
디곡신 및 푸로세미드에 대한 침투 프로파일은 패치에 대한 침투 프로파일에서와 같이, 비정형적이다. 그러므로, 이것이 개별적으로 또는 조합되어 활성제의 특성과 관련될 수 있다는 것을 나타낸다. 그러나, 디곡신에 대한 프로파일은 단계 1 동안에만 정형적인 프로파일과 상이한 푸로세미드의 프로파일과 상이하다. 디곡신에 대한 퍼센티지 방출 프로파일은 이 형상과 유사하였다. 푸로세미드에 대한 프로파일은 패치로부터 보여지는 것과 유사한 형상이었다.
침투 프로파일에 대한 SEM은 방출 프로파일에 대한 것보다 크기가 더 컸다. 이것은 방출 데이터에 비하여, 데이터에서 재현성이 더 낮다는 것을 나타낸다. 방 출 실험 및 침투 사이의 주요 차이는 피부의 도입이었으므로, 이것은 결과에 영향을 미칠 수 있다. SEM은 또한 디곡신에 비하여 푸로세미드에 대해 더 큰 크기로 이루어졌다. 이에 대한 이유는 콜린디온의 액체 상태로 존재하는 용매의 량(모든 용매는 준비 동안 패치로부터 증발되었다)이 피부의 인테그러티(integrity)에 영향을 줄 수 있고, 리플리케이트(replicate) 사이의 재현성을 감소시킬 수 있기 때문이다. 리플리케이트의 수는 패치에 대한 5개에 비하여 4개였고, 이는 도한 영향을 줄 수 있다.
이러한 프로파일의 비정형적 특성은 SSF가 정확하게 측정되지 않을 수 있고, AMF가 대신 측정되었다는 것을 의미하였다. 디곡신에 대하여, 이것은 12-24 시간 사이에서 0.313μgcm-2h-1인 것으로 계산되었고, 푸로세미드에 대하여, 6-12 시간 사이에서 4.3423μgcm-2h-1인 것으로 계산되었다. 래그 시간을 측정하는 것은 불가능하며, kp의 추정치만이 계산되었다.
피부에 침투된 디곡신의 량/에어리어는 푸로세미드의 28.49μgcm-2(8.62 × 10-8μgcm-2)에 비하여 8.02μgcm-2(1.03 × 10-8μgcm-2)이고, 이는 기저층으로의 약물 전달이 선형이라는 것을 나타낸다. 더 큰 량/에어리어의 푸로세미드가 침투되었다는 관측은 이러한 결과가 샘플들 사이의 재현성이 필요로 된다는 것을 나타내는 큰 SEM과 관련될 수 있다. 피부의 인테그러티가 감소되는 경우, 푸로세미드가 디곡신보다 더 적기 때문에, 푸로세미드는 피부에 더 효율적으로 침투될 수 있다. 이것 은 또한 친유성이 적으므로, 피부의 컴파트먼트에서 더 적게 트랩될 것이다. 디곡신보다 더 적은 퍼센티지의 푸로세미드 로딩이 피부에 침투되었고, 이는 패치에 대한 것과 동일하였다.
피부에 침투한 몰 비는 D:F 1:8이었고, 이는 푸로세미드가 피부에 더 용이하게 침투된다는 제안을 지원한다.
패치 및 콜로디온 사이의 비교
패치 제형을 콜로디온 제형에 통계적으로 비교하는 것은 불가능하였고, 비율의 선택 다음의 추론이 동일하였을지라도, 각각의 제형에 대해 선택된 실제 비율은 다소 상이하였다. 지금까지의 논의에서는, 패치 및 콜로디온으로부터 획득된 데이터를 비교하였고, 논의의 다음 부분에서는, 제형들 사이의 양적이 차이를 비교한다.
부형약 차이
피부에 적용 시에 콜로디온에는 대량의 에탄올이 존재하고, 상대적으로, 패치에는 에탄올이 존재하지 않는다. 콜로디온 제형 내의 에탄올은 생식기 사마귀의 치료에서 잠재적인 문제점일 수 있다. 이 에탄올은 사마귀 조직의 특성이 피부 사마귀와 상이하기 때문에 스팅잉(stinging)을 초래할 수 있다. 주변의 민감한 점액 막에 이 에탄올을 적용함이 없이 사마귀의 에어리어로 적용을 제한하는 것이 또한 어렵다. 이를 극복하기 위한 가능한 제형 솔루션, 예를 들어, 제형으로의 리크로카인과 같은 국소형 마취제를 포함하는 것이 존재한다. 그러나, 이것은 제형 내의 활성제의 수를 증가시키며, 제품의 라이센싱(licensing)을 복잡하게 할 수 있다. 여 전히, 스팅잉의 정도는 고통에 따라서, 그리고 이러한 사마귀의 위치를 기억하는 환자가 받아들일 수 있다. 한편, 에탄올의 포함은 기저 세포로의 경피적 흡수를 도울 수 있다. 각화된 피부의 탈수는 피부가 균열되도록 하고, 활동 장소에서 초소형 경로를 형성하도록 할 수 있다. 에탄올은 또한 정상 피부의 지질을 가용화함으로써 침투 강화제의 역할을 하는 것으로 공지되어 있다. HPV로 감염된 피부에서의 에탄올의 범위는 공지되어 있지 않지만, 아마도 이 유형의 조직에서 낮은 비율의 지질로 인해 감소될 것이다.
패치가 생식기 사마귀의 치료에서 비실용적일지라도, 이들의 고체 물리적 상태는 피부 및 발바닥 사마귀의 건강한 주변 조직에 활성제의 적용을 제한하는 것이 어렵지 않다는 것을 의미한다.
투약 형태의 특성
패치는 콜로디온보다 더 두꺼운 막을 제공하며, 이는 대량의 2성분 약물 조합이 제형 내로 통합될 수 있고, 아마도 연장된 치료 지속기간을 제공하여, 순응도를 증가시킨다는 것을 의미한다. 콜론디온의 막 두께는 패치의 대략 1mm에 비하여, 피부에 적용된 활성제의 량의 제한하는 대략 5-20μcldlek(Schaefer 및 Redelmirer, 1996). 이것은 분자가 패치에서 더 큰 정도로 패치의 상부면으로부터의 벌크 매트릭스를 통해 이동하여, 도우징 및 에이딩 순응도(dosing and aiding compliance)의 빈도를 감소시킨다는 것을 나타낸다. 투여 형태 둘 모두가 유연하며, 사마귀 조직에서 다소의 이동성이 존재할지라도, 발바닥 사마귀만이 평평하기 때문에 유연한 특성이 필요로 된다. 통상적인 사마귀의 치료에서 이러한 패치의 적 합성은 다음의 임상 시도에서 설정될 것이다. 전체의 제형은 동작의 개시, 지속기간 및 생물학적 응답의 정도에 영향을 미치는 경피적 흡수의 키네틱스 및 정도를 결정한다.
예 37 - 발바닥 사마귀가 드러그 -인- 글루 드레싱으로 치료된 환자의 초기 결과
환자 PW1
나이 43
성별 남자
직업 자영업자
병변 소견 오른쪽 엄지 발가락의 체중 부하 면에 걸친 고도로 각화된 병변
HPV DNA 결과 대기
사마귀의 지속기간 4년
이전의 치료 화학적인 절제가 시도되었지만 효과가 없었음, 다른 파괴적 방법이 시도되었지만 이점이 없었음.
사용된 제형 드러그-인-글루 제형 예 9
부작용 없음
계통적 디곡신 3개의 경우에 검출 한도 이하
혈압 상당히 변화하지 않음
혈청 칼륨 전체에 걸쳐 정상
치료 지속기간 21일
치료 결과 3주에 4 시각적으로(도42 참조). 팔로우업(follow up)이 이 환자에 대해 지속된다.
도38은 환자의 발의 하측 상의 관련되지 않은 병변부를 도시한다.
도39는 도40의 병변부의 더 가까운 도면이다.
도40은 본 발명에 따른 전달 수단에 의한 치료 동안의 병변부를 도시한다.
도41은 21일 치료 후의 병변부를 도시한다.
도42는 울트라-클로즈업에서의 치유된 병변부를 도시한다.
상술된 예 이외에, 다음의 부가적인 실시예는 경피적 전달 디바이스로부터 디곡신 및 푸로세미드의 시험관내 방출 및 침투를 나타낸다. 상이한 량의 디곡신 및 푸로세미드를 포함하는 여러 드러그-인-글루 제형이 이들의 약물 방출 속도, 돼지 피부를 통한 약물 침투 속도 및 피부 샘플 내의 약물의 농도에 대해 비교되었다. 활성제 성분의 비율은 피부 포화를 제공하기 위한 푸로세미드 및 디곡신의 전달에 최적을 제형을 제공하기 위하여 가변되었다.
물질
디곡신 및 푸로세미드는 영국의 Sigma로부터 구매되었다. Glue1은 National Starch 및 Chemical Company로부터 입수되었다. 방출 및 침투 연구에 사용된 Al 용매 및 화학제는 Sigma로부터 구매되었다. 피부 배리어로서 사용되었던 돼지의 귀 피부는 가까운 도살장으로부터 구매되었다.
테스트 프로토콜:
종래의 약물 로딩은 1:1 비율로 아크릴레이트 글루 내에서 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두의 25mg/mL이다. 약물의 총 농도가 50mg/mL로 유지되는 경우, 다음 시스템이 조사될 수 있다:
50mg/mL 디곡신
46.7mg/mL 디곡신 및 3.3mg/mL 푸로세미드(14:1 비율)
40mg/mL 디곡신 및 10mg/mL 푸로세미드(4:1 비율)
30mg/mL 디곡신 및 20mg/mL 푸로세미드(3:2 비율)
25mg/mL 디곡신 및 25mg/mL 푸로세미드(1:1 비율)
20mg/mL 디곡신 및 30mg/mL 푸로세미드(2:3 비율)
10mg/mL 디곡신 및 40mg/mL 푸로세미드(1:4 비율)
3.3mg/mL 디곡신 및 46.7mg/mL 푸로세미드(1:14 비율)
50mg/mL 푸로세미드
플러스 글루만을 사용한 제어
상기 시스템은 량 형태로 비율을 측정한다. 약물의 몰비가 또한 F;D의 1:1 비율, 1:12 및 1:100 비율로 조사되었고, 결과가 테이블 13에 제공되어 있다.
테이블 13
Figure 112008023926071-PCT00015
방법
약물 방출 연구
패치로부터 이동 상태의 용액 내로의 약물 방출이 9개의 량-비 제형에 대해 측정되었다. 이것은 약물 로딩이 약물 방출에 어떻게 영향을 미치는지를 비교하기 위하여 행해졌다.
약물 침투 연구
돼지의 귀 피부를 통한 약물 침투가 Franz 확산 세포를 사용하여 측정되었고, 여기서 조직에 침투된 약물들 둘 모두의 량이 시간에 걸쳐 측정되고 패치 내의 초기 약물 로딩과 비교되었다. 몰비 패치가 이 연구에서 사용되었다. 돼지의 귀 피부는 모델 막으로서 사용되었고, 이 조직을 통한 약물 방출은 Franz 세포 장치를 사용하여 측정되었다. 피부는 HPLC 분석에서 이동 상태에 대해 사용되는 바와 같이 물:메탄올:아세토니트릴(40:30:30)을 포함하는 리셉터 유체 위에 놓이게 되었다.
습도 손실을 피하기 위하여 전체 시스템이 밀봉되었고, 샘플이 0, 4, 8, 12, 24, 48 및 72 시간의 간격으로 리셉터 유체로부터 취해졌다. 리셉터 유체는 균질 리셉터 용액을 보장하기 위하여 지속적으로 교반되었다. 이 유체 내의 푸로세미드 및 디곡신 둘 모두의 농도는 HPLC 분석을 통하여 측정되었다. 72 시간 이후에, 피부는 균질화되었고, 이 조직 내의 약물 둘 모두의 농도는 "포화" 레벨을 인식하기 위하여 (추출을 통하여) 결정되었다.
피부 포화 연구
피부가 약물의 유지를 위한 능력을 갖는다는 것이 널리 문서화되었다. 더 높은 logP 값을 갖는 약물이 더 큰 정도로 피부 내에서 유지된다라고 일반적으로 여겨진다. 72 시간 기간의 끝에서 피부에 존재하였던 약물의 량은 패치가 투여되었던 피부의 균질화 및 약물의 추출을 통하여 측정디었다. 각각의 Franz 세포에는 Q가 포함하는 2cm 직경의 패치가 로딩되었다.
결과
글루로부터 방출되거나 피부에 침투되었던 약물의 누적 량은 도45에서 시간에 대해 플롯팅되었다. 이와 같은 슬로프의 선형 부분(적어도 5개의 데이터 포인트가 사용됨)은 정상 상태 플럭스(Jss)인 것으로 취해졌다. 약물이 방출을 허용하는 글루 또는 피부를 통하여 얼마나 빨리 확산될 수 있는지를 결정하는 각각의 약물에 대한 상수인 침투 계수(kp)(단위 = 시간 당 cm)는:
Kp = Jss/Cv로서 계산되었고, 여기서 Cv는 도너 컴파트먼트에서의 침투물의 농도이다(패치 내에서의 디곡신 또는 푸로세미드의 농도, 단위 = μg/cm3)
약물 방출 연구:
패치는 초기의 9개의 제형으로 이루어졌고, 이러한 제형으로부터 이동 상태의 용액 내로의 약물 방출이 측정되었다.
일부 예시적인 데이터가 아래에 도시되어 있고, 각각의 제형으로부터 방출된 디곡신의 량이 도43에서 시간에 대해 플롯팅되었다. 유사한 플롯이 푸로세미드에 대해 구성되었다.
이러한 결과의 기울기가 계산되었는데, 이는 패치로부터의 정상 상태 플럭스(Jss)의 측정치이다. 초기 농도로 정상 상태 플럭스를 나누면 침투 계수가 제공되는데, 이 값은 패치로부터의 약물 방출을 결정하는 상수이다. 아래의 테이블은 4일에 각각의 패치로부터의 약물 방출의 량, 각각의 제형에 대한 정상 상태 플럭스와 침투 계수 둘 모두를 측정하는 데이터를 제공한다.
패치로부터의 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두의 방출 속도가 아래의 테이블에 목록화되어 있다.
테이블 14
Figure 112008023926071-PCT00016
테이블 14는 유사한 농도 값에서, 푸로세미드가 디곡신보다 더큰 정도로 방출된다는 것을 나타내는데, 예를 들어, 제형 1 및 9를 비교하라. 각각의 약물에 대한 정상 상태 플럭스는 패치 내의 약물의 초기 로딩이 증가함에 따라 증가한다. 이것은 약물이 약물 로딩 및 방출 매체 사이에 존재하는 농도 기울기로 인해 패치로부터 방출되기 때문에, 예상되는 바와 같다. 침투 계수는 패치로부터 각각의 약물 의 초당 cm의 약물 방출 속도의 측정치이다. 이러한 값은 모든 제형에 대해 비교적 일정하며, 이는 2개의 약물이 서로의 방출에 간섭하지 않는다는 것을 나타낸다. 각각의 약물 단독에 대한 Kp 값은 약물 둘 모두를 포함하는 패치 내의 값과 유사하다. 푸로세미드에 대한 Kp는 디곡신에 대한 Kp보다 대략 4배 더 크며, 이것은 푸로세미드의 비교적 더 작은 크기에 기인한 것이다.
아래의 테이블은 피부에 침투되었던 패치로부터 방출된 약물에 대한 데이터를 나타낸다.
테이블 15
Figure 112008023926071-PCT00017
테이블 15는 피부의 침투를 나타내며, 플럭스 값 및 침투 계수 값 둘 모두는 상기 테이블에 목록화된 제형으로부터의 약물의 방출보다 훨씬 더 낮다. 이것은 예상된 것이며, 피부의 배리어 특성을 반영한다. 푸로세미드는 디곡신보다 거의 8배 더 높은 침투 계수에 의해 입증되는 바와 같이, 디곡신보다 더 큰 정도로 피부에 침투한다.
피부에 축적된 약물이 또한 측정되었다. 피부의 2cm 직경 단면에 존재하였던 약물이 모든 4개의 제형에 대해 계산되었다.
디곡신의 레벨은 로딩 제형(loading formulation)과 무관한 것으로 나타났고, 이는 피부가 3.14 cm2에 걸쳐 40 ug 또는 12.73 μg/cm2의 농도의 디곡신으로 포화되었다는 것을 나타낸다. 푸로세미드는 피부 내에 축적되지 않고, 피부를 통해 직접 침투된다. 72 시간에 측정된 농도는 로딩 농도에 따르는 피부 내의 푸로세미드의 순시적 표시였다. 결과가 도44에 도시되어 있다.
패치에 대한 푸로세미드 방출 속도(Kp)는 초당 6.53 × 10-10cm였고, 이것은 4.32 × 10-8cm/초로 돼지의 귀 세포에 침투하는 푸로세미드의 속도보다 매우 더 빠르지는 않다.
디곡신은 약물 방출 및 피부 침투 둘 모두의 면에서 상당히 더 저속이었는데, 침투 계수가 패치 및 피부에 대해 각각 1.60 × 10-7cm/s 및 5.52 × 10-8cm/s이었다.
디곡신에 대한 초기 패치 농도가 피부를 통한 정상 상태 플럭스 속도에 대해 플롯팅되는 경우, 도45에 도시된 바와 같이, 제로보다 더 큰 플럭스에 대하여, 패치 내의 초기 농도는 804.5μg/cm3이어야 한다는 것을 알 수 있다.
피부 연구에서 사용된 최저 농도는 25000μg/cm3이었다. 효과적인 치료를 위 해 필요로 되는 플럭스는 하루당 25μg이었고, 이것이 1cm2의 표면적을 갖는 패치로부터 나온다고 가정하면, 로딩 투여량은:
Flux - cm2당 하루당 25jip = 시간당 cm2당 1.04μg이므로, cm3당 6004.5μg의 로딩 투여량이 필요로 된다.
그러나, 이 연구는 농도 기울기를 강화하여 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두의 피부 침투를 최대화하기 위해 매우 친유성의 물질이 도너 상으로 사용되었기 때문에, 피부를 통한 디곡신의 전체 침투를 강화시켰다.
2개의 특히 효과적인 약물은 디곡신 및 푸로세미드이며, 이들의 50% 플라크 억제 농도(IC50)의 예는 아래(테이블 A)에 제공된다. IC50은 다른 약물와 비교할 때, 유용하고 편리한 항바이러스성 약물 효능의 종종 인용되는 인덱스이다. 개별적으로 사용되면, 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두는 명백하게 광범위한 바이러스의 복제를 억제한다.
테이블 A
Figure 112008023926071-PCT00018
그러나, 항바이러스성 활동의 대안적인 지수는 이러한 약물의 실제 효능을 입증한다. ICVT가 비전염성 바이러스 단백질의 합성을 허용하고, 이러한 단백질이 부분적으로 IC 50 디터미네이션(determination)의 기초를 형성하는 세포 병리(세포 병변 효과)의 변화를 초래하기 때문에, 이러한 약물의 효능은 IC50 디터미네이션에 의해 과소평가된다. 그 대신에, 대안적인 인덱스가 감염된 세포에 의해 생성된 전염성 바이러스 입자의 총수를 측정한다.
예를 들어, 디곡신을 사용하면, 40% 및 60% 사이의 단순 포진 바이러스 플라크 생성이 억제되는데, 즉, IC50 효과(그래프의 상부 라인; 도25)는 전염성 바이러스 입자 생성의 90% 및 99% 사이의 억제에 대응한다(그래프의 하부 라인; 도25).
디곡신 및 푸로세미드를 개별적으로 사용하면, 이들의 IC50에서 각각, 또 다른 바이러스, 즉 고양이 포진바이러스에 대하여, 바이러스 복제가 완전히 억제된다(테이블 B). 전염성 바이러스의 생성이 98.5%(디곡신) 및 99.5%(푸로세미드)만큼 감소되지만, 저 레벨의 바이러스 복제: 즉, 1.5%(푸로세미드) 및 0.5%(디곡신)가 유지된다.
테이블 B
Figure 112008023926071-PCT00019
그러나, 약물을 조합하여 사용함으로써 이들의 잔여물, 저 레벨의 바이러스 복제를 효율적으로 제거하는 것이 가능하다. 조합된 항바이러스 효과는 약물이 개별적으로 적용될 때 더 크다; 약물은 시너지적이다(테이블 C)
테이블 C
Figure 112008023926071-PCT00020
따라서, 바이러스 복제는 99.99999%만큼 감소된다.
다른 바이러스, 예를 들어, 대상 포진 바이러스(VZV)의 복제가 또한 약물을 조합하여 사용함으로써 가장 효율적으로 억제된다. 그러나, VZV가 고도로 세포와 관련된 바이러스이기 때문에, 포함된 전염성 VZV 입자의 정확한 수를 정량하는 것은 불가능하다. 대신에, 바이러스 플라크 형성에 대한 개별적이고 결합된 IC50의 영향이 비교된다(테이블 D).
푸로세미드 및 디곡신 각각은 이들의 각각의 IC50에서, 약 50%만큼 예상되는 바와 같이 VZV 플라크 형성을 억제한다; 푸로세미드 33/61 플라크 및 디곡신 21/61 플라크. 그러나, 약물 둘 모두가 이들의 IC50에서 조합되어 적용될 때, VZV 플라크 형성은 낮은 수의 감염(낮은 MOI)에서 완전히 억제되었다. 실제로, VZV 플라크 형성은 테스트 시스템에서 100배 감염 바이러스가 존재하였을 때, 완전히 억제되었다; 고 MOI. 이 효능 인덱스를 사용하여, 약물은 조합하여 적용될 때 100 이상의 효능이 있었다.
테이블 D
Figure 112008023926071-PCT00021
부분적인 IC50들의 조합된 효과의 비교는 2개의 약물 단독, 및 조합의 상대적인 효능을 비교하는 또 다른 인덱스를 제공한다. 이하의 예에서, 아데노바이러스를 사용하면, 어느 한 약물 단독의 IC50과 동일한 항바이러스 효과를 도출하는 것은, 조합하여 사용할 때 각각의 약물의 IC50의 1/4만으로도 충분하다(도47).
동일한 현상이 또 다른 강력한 세포-관련 바이러스인 거대세포 바이러스(CMV)에 의해서도 유지된다; 2개의 약물이 조합되어 사용될 때, 어느 한 약물 단독의 IC50과 동일한 항바이러스 효과를 도출하는 것은, 각각의 약물의 1/3만으로도 충분하다(도48).
요약하면, 디곡신 및 푸로세미드는 ICVT에 적용될 때 시너지적이다. 항바이러스 활동(ICVT)의 특정 메커니즘으로 인하여, 표준 IC50 인덱스는 이 인덱스를 사용하여 증가된 조합 효과가 명백하게 유지될지라도, 실제 약물 효능을 과소평가한다.
가장 현저하게, 전염성 바이러스의 생성은 약물이 조합되어 사용될 때, 99.99999%만큼 감소된다.
상대적인 용해도 및 디곡신 , 디기톡신 및 라녹신(IV)의 ICVT -효능
1) 상대적인 ICVT-활동(이온 항-바이러스성 치료-활동)
디곡신 및 디기톡신의 용액이 70% 에탄올 내의 ml당 250μg의 농도로 파우더로부터 준비되었고, 이들의 ICVT-활동이'표준' 디곡신 제제; 즉, 10% 에탄올 내의 ml 당 250μg로 공급되는 IV 라녹신과 비교되었다.
파우더 및 라녹신(원)(도49)으로부터 준비된 디곡신의 ID50 값들은 매우 유사하였는데, 즉, ml당 60ng이었다. 디기톡신(정사각형)은 ml당 30ng의 ID50으로 마진이 더 양호한 것으로 나타났다.
2) 상대적인 용해도
디곡신 및 디기톡신의 포화된 용액이 90% 에탄올 내에서 준비되었고, 이들의 ICVT-활동이 '표준' 디곡신 제제; 즉, 라녹신과 비교되었다.
파우더로부터 준비된 디곡신 용액은 라녹신(원)(도50)만큼 효과적이었다.
디기톡신(정사각형)이 디곡신보다 더 효과적이었다.
디기톡신은 디곡신보다 가용성이 더 높다; 90% 에탄올 내의 포화된 용액(ml당 17.5mg)의 제제는 에탄올의 '안전한-어큘러-농도(safe-ocular-concentration)' (2.5%)에서의 ml당 486μg의 최대 농도로 사용하는 것을 가능하게 할 것이다.
디곡신은 이전에 ml당 62.5μg의 농도로 사용되었다.
ml당 486μg은 대략 8배 더 농축된 것이며, 디기톡신이 실제로 2배의 효능인 경우, 효과적으로 16 × 이전 '투여량'인 것을 사용하는 것이 가능할 수 있다. 이러한 더 높은 농도에서의 독성은 물론 조사될 필요가 있을 것이다.
3) 상대적인 'ICVT-활동'
디곡신 및 디기톡신의 신선한 용액이 70% 에탄올 내의 ml당 250μg의 농도로 파우더로부터 준비되었고, 이들의 ICVT-활동이 다시 이들의 상대적인 효능을 더 조사하기 위하여 '표준' 디곡신 제제; 즉, IV 라녹신과 비교되었다. 결과가 도51에 도시되어 있다.
상기 예 이외에, 다음의 부가적인 실시예가 시험관내 대상 포진 바이러스 복제 및 MRC5 세포 복제 및 대사에 대한 개별적이거나 조합된 푸로세미드 및 디곡신의 효과를 입증한다.
1.1. MRC5
MRC5 세포(Jacobs 등 1970), 즉 인간의 태아 폐 조직으로부터 도출된 라인이 BioWhittaker로부터 획득되었다. 세포는 10% (v/v) 우태아 혈청(Life Technologies Ltd)로 보충된 이글스 미디엄(Eagles medium)(Life Technologies Ltd)에서 증식되었다. MRC5 세포는 대상 포진 바이러스(VZV) 스톡 생성 및 VZV 복제에 대한 이온 항-바이러스의 효과를 조사하는 실험에 사용되었다.
1.2. 세포 머펄러지( Cell morphology )
정상적인 세포를 허용하는 최대 약물 농도는 72 시간 동안 약물-포함 매체 내의 서브-융합성 배양(sub-confluent culture)의 인큐베이션(incubation)에 의해 결정된다. 세포는 위상차 현미경을 직접 사용하여 조사되었다.
1.3. 세포 복제
세포 복제를 허용하는 최대 약물 농도가 유사하게 결정되었다; 72 시간 후, 세포는 채취되고 카운팅되었다. 정상적인 세포 복제를 나타내는 10배의 세포 수 증가가 이루어졌다(72 시간에서 최소 3개의 개체수 배가).
1.4. MTT ( 디메틸디아졸 디페닐테트라졸리움 브로마이드) 분석
항바이러스성 방법 및 프로토콜(Kinchington, 200)에서 설명된 바와 같이 MTT 분석이 수행되었다.
1.5. 대상 포진 바이러스( VZV )
VZV의 Ellen 스트레인(strain)이 American Type Culture Collection으로부터 획득되었다.
1.6. VZV 단층 플라크 억제 분석
VZV 감염된 세포는 72 시간 동안, 또는 바이러스 cpe가 최적일 때까지, 감염된 세포 서스펜션 및 인큐베이션(cell suspension and incubation)의 5ml의 이나큐레이션(innoculation)에 의해 5cm 페트리접시에서 MRC5 세포의 미리형성된 단층 상에서 분석되었다. 세포는 포르몰-염류 및 스테인드 위드카르볼 푹신(stained withcarbol fuchsin)으로 고정되었다.
2. 결과
2.1. 시험관내 VZV 복제에 대한 푸로세미드의 효과
1 mg/ml 농도의 푸로세미드는 MCR 세포에 의해 매우 양호한 내성이 있었다; 세포 머펄러지 및 복제된 세포에 부작용이 존재하지 않았다. 푸로세미드는 이 농도에서 50%만큼 VZV 플라크 형성을 억제하였다.
푸로세미드 ID 50; 1.0 mg/ml.[테이블 E]
VZV 복제는 2.0 mg/ml 농도의 푸로세미드에 의해 완전히 억제되었다.
2.2. 시험관내 VZV 복제에 대한 디곡신의 효과
0.05 μg/ml 농도의 디곡신이 MRC5 세포에 의해 매우 양호한 내성이 있었다; 세포 머펄러지 및 복제된 세포에 부작용이 존재하지 않았다. 디곡신은 이 농도에서 50%만큼 VZV 플라크 형성을 억제하였다.
디곡신 ID; 0.05μg/ml.[테이블 E]
VZV 복제는 0.1 μg/ml 농도의 디곡신에 의해 완전히 억제되었다.
2.3. 인험관내 VZV 복제에 대한 푸로세미드 및 디곡신의 효과
VZV 복제는 조합된 푸로세미드 및 디곡신에 의하여 이들의 개별적인 ID 50 농도에서 완전히 억제되었다[테이블 E]. 조합된 투여량은 MCR5 세포에 의해 동등하게 양호한 내성이 있었다; 세포 머펄러지 및 복제된 세포에 부작용이 존재하지 않았다.
시험관내 대상 포진 바이러스 복제에 대한 개별적 및 조합된 푸로세미드 및 디곡신의 영향 [테이블 E]
NB. 감염인 경우 인접한 다수들 사이에 10배의 차이가 존재한다(MOI)
테이블 E
Figure 112008023926071-PCT00022
2.4. MRC5 세포 복제에 대한 푸로세미드의 효과
VZV ID50과 동일한 농도인 1.0 mg/ml 농도의 푸로세미드가 존재 시에 감염되지 않은 MRC5 세포가 정상적인 수량(normal yield)으로 복제되었다.
2.5. MRC5 세포 복제에 대한 디곡신의 효과
VZV ID50과 동일한 농도인 0.05 μg/ml 농도의 디곡신이 존재 시에 감염되지 않은 MRC5 세포가 정상적인 수량으로 복제되었다.
2.6. MRC5 세포 복제에 대한 푸로세미드 및 디곡신의 효과
푸로세미드 및 디곡신 둘 모두가 존재 시에 이들의 VZV ID50 농도에서 감염되지 않은 MRC5 세포가 정상적인 수량으로는 아닐지라도, 복제되었다. 이러한 농도에서, VZV 복제는 완전히 억제되었다.
2.7. MRC5 세포 대사에 대한 푸로세미드 및 디곡신의 효과
MRC5 세포 대사에 대한 푸로세미드 및 디곡신의 효과가 MTT 분석을 사용하여 측정되었다. 푸로세미드 및 디곡신 중 하나로 이들의 VZV ID50농도에서 인큐베이팅된 감염되지 않은 세포에서 정상적인 레벨의 대사가 존재하였다. 푸로세미드 및 디곡신 둘 모두로 이들의 VZV ID50 농도에서 인큐베이팅된 감염되지 않은 세포에서 정상적인 대사가 존재하였다. 조합된 이들의 농도에서, VZV 복제는 완전히 억제되었다(2.3).
상기 예 이외에, 다음의 부가적인 실시예는 대안적인 이뇨제 및 강심 배당체의 효능을 입증한다.
티아지드(히드로클로로티아지드 및 메톨라존), 술포닐우레아(톨부타미드), 술폰아미드(푸로세미드, 아세타졸아미드, 부메타니다, 토라세미드 및 에타크릴산) 및 K 보존성 이뇨제(아밀로리드)의 예가 ICVT 활성에 대해 테스트되었다. 강심 배당체 디곡신, 디기톡신, 라녹신 및 스트로판틴 G가 또한 테스트되었다.
단순 포진 바이러스(HSV)를 사용하면, 50% 플라크 억제 투여량(1D50)이 표준 플라크 억제 분석을 사용하여 설정되었다. 다양한 용매가 테스트를 용이하게 하기 위해 필요로 되었고, 이러한 용매는 종종 이들의 농도에 따라, 조직 배양에 해로웠다. 일부 화합물은 효능이 있는 ICVT 활동(푸로세미드, 디곡신, 라녹신 및 디기톡신)을 도출하였고, 높은 희석도에서 활성이 되었다; 용매 독성이 배제되는 실험 조건.
다른 화합물은 단지 '경계선' CVI 활동만을 도출하였다. 이러한 화합물(아세 타졸아미드, 톨부타미드 및 히드로키오로디아지드)가 또한 동일한 테스트 시스템(즉, 플라크 억제 분석)에서 대안적인 용매를 사용하여 테스트되었고, 다른 것(푸메타니드, 토라세미드, 톨부타미드 및 히드로클로디아티드)이 바이러스 수량에 대한 효과가 결정되었던 ICVT 활동에 대한 더 민감한 테스트로 테스트되었다. 바이러스 수량에 대한 강심 배당체 디곡신 및 스트로판틴의 효과가 또한 이 분석에서 테스트되었다.
티아지드
히드로키오로디아지드( hydrochiorothiazide )
용매: 에탄올 10% 5 mg/ml
HSV 플라크 1D50 네거티브 @ 2.5 mg/ml -
용매: 수성 NaOH 1% 10 mg/ml
HSV 플라크 1D50 400 μg/ml 경계선 +/
HSV 수량이 600 μg/ml에서 제로로 감소됨
메톨라존
용매: PEG 10 mg/ml -
용매: PG 0 mg/ml -
술포닐우레아
톨부타미드
용매: 수성 NaOH 1% 10 mg/ml
HSV 플라크 ID50 500 μg/ml 경계선 +/
용매: PEG 10 mg/ml
HSV 플라크 1D50 500 μg/ml 경계선 +/
HSV 수량이 300 μg/ml에서 제로로 감소됨 +
용매: PG 10 mg/ml
HSV 플라크 ID50 500 μg/ml 경계선 +/
HSV 수량이 300 μg/ml에서 제로로 감소됨 +
용매: IPA 10 mg/ml
HSV 플라크 1D50 250 μg/ml 경계선 +/
술폰아미드
푸로세미드 +
용매: 수성 (IV) 10 mg/ml
HSV 플라크 1D50 1 μg/ml
아세타졸아미드
시그마
용매: PEG 40 mg/ml
HSV 플라크 1D50 네거티브 @ 500 μg/ml -
용매: PG 7mg/ml
HSV 플라크 1D50 네거티브 @ 100 μg/ml -
부메타니드
용매: (IV) 수성 500 μg/ml
HSV 플라크 1D50 네거티브 @ 100 μg/ml -
HSV 수량이 경계선에서 감소됨 +/-
토라세미드
퀘마코(Qemaco)
용매: 수성 NaOH 1% 5 mg/ml
HSV 플라크 1D50 60μg/ml 경계선 +/
HSV 수량이 90 μg/ml에서 영향을 받지 않음 -
에타크릴산
용매: (IV) 수성 100 μg/ml
HSV 플라크 1D50 25μg/ml 네거티브
K 보존성 이뇨제
아밀로라이드
용매: 수성 500 μg/ml
HSV 플라크 1D50 250μg/ml +/-
강심 배당체
디곡신(IV) 250μg/ml
HSV 플라크 1D50 60μg/ml +
HSV 수량이 감소됨 +
디기톡신
용매: 에탄올
HSV 플라크 ID50 30 ng/ml +
HSV 수량이 감소됨 +
라녹신(IV) 250μg/ml
HSV 플라크 ID50 60μg/ml +
HSV 수량이 감소됨 +
스트로판틴 G
용매: 수성
HSV 플라크 1D50 1μg/ml 세포독성
HSV 수량이 경계선에서 감소됨 +/-
그러므로, 이러한 루프 이뇨제 및/또는 강심 배당체 및 다른 이뇨제 및/또는 강심 배당체는 특히, 접착제에서 또는 접착제와 함께 제공될 때, 경피적 활성 성분 전달 수단에서 사용될 것이다.

Claims (32)

  1. DNA 바이러스에 감염된 피부 부위에 적용 가능한 피부 접착성 또는 피부 내성 기질을 포함하는 경피적 활성 성분 전달 수단에 있어서,
    상기 기질은 이뇨제(예를 들어, 루프 이뇨제) 및/또는 강심 배당체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 활성 원소를 함유하는 경피적으로 효율적인 캐리어 매체를 포함하는 DNA 바이러스 감염을 치료하는 조성을 포함하는, 전달 수단.
  2. 제1항에 있어서,
    하나 이상의 강심 배당체와 함께 하나 이상의 루프 이뇨제를 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  3. 제1항 또는 2항에 있어서,
    상기 이뇨제는 다음: 푸로세미드, 부메타니드, 에타크릴산 및 토라세미드 중 하나 이상인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 이뇨제는 푸로세미드인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  5. 제1항 내지 4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 강심 배당체는 다음: 디곡신, 디기톡신, 메디곡신, 라나토사이드 C, 프로실라리딘, k 스트로판틴, 퍼루보사이드 및 오아바인 중 하나 이상을 포함하는 디기탈리스 배당체인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  6. 제1항 내지 5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 강심 배당체는 디곡신인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  7. 제1항 내지 6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 캐리어 매체는 접착제 내의 약제학적으로 수용 가능한 활성 원소 제형을 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 접착제는 바람직하게는 알킬 에스테르 용매, 예를 들어, 에틸 아세테이트 내에서 용해되거나 분산되는 아크릴 폴리머 접착제를 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  9. 제1항 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 캐리어 매체는 활성 원소(들)의 방출 및/또는 침투를 돕는 하나 이상의 약제학적으로 수용 가능한 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  10. 제1항 내지 9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 캐리어 매체는 하나 이상의 진피적으로 수용 가능한 용매를 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 용매는 다음: 1가 알코올, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로페놀, 알킬 에스테르, 예를 들어, 에틸 아세테이트, 알킬렌 글리콜, 예를 들어 프로필렌 글리콜 및 물 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  12. 제1항 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 캐리어 매체는 카보폴 또는 히드록시프로필 셀룰로오스와 같은 적어도 하나의 점도 변경자를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  13. 제1항 내지 12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성으로부터의 활성 성분(들)의 방출 속도는 10 μg/cm2/24hrs보다 더 크고, 바람직하게는 20μg/cm2/24hrs보다 더 크며, 더 바람직하게는, 50μg/cm2/24hrs보다 더 크고, 가장 바람직하게는 100μg/cm2/24hrs보다 더 큰 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  14. 제1항 내지 13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 기질 상의 또는 상기 기질 내의 활성 성분 로딩은 상기 성분(들)을 상기 조성으로부터 피부에 전달할 수 있는 전달 수수단의 부분인 제곱 센티미터 당 활성 성분(들)의 0.5mg/cm2보다 더 크고, 바람직하게는 10.mg/cm2보다 더 크며, 더 바람직하게는 1.5mg/cm2보다 더 크고, 가장 바람직하게는 2.0mg/cm2보다 더 큰 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  15. 제2항 내지 14항 중 어느 한 항에 있어서,
    이뇨제 대 강심 배당체의 몰비는 100 대 0.1의 배당체의 몰 : 이뇨제의 몰의 범위인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  16. 제7항 내지 15항 중 어느 한 항에 있어서,
    활성 성분(들) : 접착제 제형의 중량비는 1:5-20, 바람직하게는 1:5-15, 더 바람직하게는 1:8-12의 범위인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  17. 제1항 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서,
    피부 접착성 기질이 사용되며, 상기 조성을 포함하는 레저버(reservoir)가 상기 기질에 부착되고, 방출 가능한 층이 상기 레저버에 부착되는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  18. 제17항에 있어서,
    접착제 패치의 형태로 상기 조성에 스며드는 아일랜드 레저버(island reservoir)을 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  19. 제1항 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서,
    래커 조성을 포함하는 피부 내성 접착성 막이 사용되는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 래커는 유연한 콜로디온 래커인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  21. 제19항 또는 20항에 있어서,
    상기 콜로디온은 벤조인, 파라핀 왁스 및 메틸셀룰로오스를 함유하는 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  22. 제21항에 있어서,
    상기 콜로디온은 에테르 용매와 희석되는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  23. 제19항 내지 22항에 있어서,
    활성 성분(들)을 포함하는 상기 조성은 흡수성 레저버가 존재하지 않을 시에 건조된 래커의 표면에 직접 적용되어 접착되는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  24. 제19항 내지 23항에 있어서,
    활성 성분(들)을 포함하는 상기 조성은 상기 조성이 용해 및/또는 분산되는 적어도 하나의 용매를 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  25. 제24항에 있어서,
    상기 용매는 물을 갖거나 갖지 않는 알코올을 포함하는 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  26. 제25항에 있어서,
    상기 알코올은 알카놀, 예를 달어 에탄올과 같은 1가 알코올인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  27. 제19항 내지 26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 원소(들)이 용해 및/또는 분산되는 용매가 존재하며, 원소 : 래커 조성 : 용매의 비는 0.01 : 1-10 : 1-10의 범위인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  28. 제1항 내지 27항 중 어느 한 항에 있어서,
    DNA 바이러스를 치료하는 상기 조성은 인 유두종바이러스(HPV) 감염의 영향에 대한 국소형 적용제로서 효율적인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  29. 제28항에 있어서,
    상기 조성은 발바닥 사마귀 및/또는 손/손가락 및/또는 생식기 사마귀와 같은 사마귀에 대한 국소형 적용제로서 효율적인 것을 특징으로 하는 전달 수단.
  30. 제19항 내지 29항 중 어느 한 항에 따른 전달 수단을 제조하는 방법에 있어서,
    제1항에 따른 조성을 제형화하는 단계, 유연한 콜로디온 래커를 제공하고 상기 래커가 설정되거나 점성이 있도록 하는 단계, 및 상기 조성을 상기 설정되거나 점성이 있는 콜로디온 래커에 직접적으로 적용하고 방출 가능한 보호 층을 노출된 조성에 선택적으로 적용하는 단계를 포함하는 전달 수단 제조 방법.
  31. DNA 바이러스 감염, 예를 들어, 인 유두종 바이러스 감염의 치료를 위한 국소형 약제의 제조를 위한 이뇨제 및/또는 강심 배당체의 용도에 있어서,
    상기 국소형 약제는 유연한 콜로디온 층 또는 접착제를 포함하는 이뇨제 및/또는 강심 배당체의 용도.
  32. 환자의 인 유두종 바이러스를 치료하는 방법에 있어서,
    이뇨제 및/또는 강심 배당체 및 유연한 콜로디온 층 또는 접착제를 포함하는 국소형 약제를 상기 환자에게 적용하는 단계를 포함하는 인 유두종 바이러스 치료 방법.
KR1020087007977A 2005-09-02 2006-08-22 경피적 활성 성분 전달 수단 KR20080043384A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0517838.9A GB0517838D0 (en) 2005-09-02 2005-09-02 Transdermal active principle delivery means
GB0517838.9 2005-09-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20080043384A true KR20080043384A (ko) 2008-05-16

Family

ID=35220717

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020087007977A KR20080043384A (ko) 2005-09-02 2006-08-22 경피적 활성 성분 전달 수단

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20090074845A1 (ko)
EP (1) EP1968611A2 (ko)
JP (1) JP2009508814A (ko)
KR (1) KR20080043384A (ko)
AU (1) AU2006286367A1 (ko)
CA (1) CA2621200A1 (ko)
GB (1) GB0517838D0 (ko)
MX (1) MX2008003091A (ko)
WO (1) WO2007026124A2 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2441011A (en) * 2006-08-18 2008-02-20 Henderson Morley Plc Pharmaceutical composition for the treatment of neuropathic pain
WO2009103932A1 (en) * 2008-02-19 2009-08-27 Henderson Morley Plc Use of a cardiac glycoside and/or a diuretic for the treatment of neuropathic pain

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0139127A1 (en) * 1983-08-22 1985-05-02 F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft Transdermal drug delivery device and its preparation
DE3617824A1 (de) * 1986-05-27 1987-12-03 Hoechst Ag Zusammensetzung fuer transdermale therapeutische systeme von schleifendiuretika
US5750136A (en) * 1989-11-03 1998-05-12 Riker Laboratories, Inc. Bioadhesive composition and patch
DE4001034A1 (de) * 1990-01-16 1991-07-18 Eberhard Landau Pflaster fuer die behandlung von warzen
JPH03240732A (ja) * 1990-02-14 1991-10-28 Yasuo Tanaka 抗ウイルス剤
US5476664A (en) * 1994-04-15 1995-12-19 Leonard Bloom Treatment of warts using anthralins and occlusion
US20010051182A1 (en) * 1996-09-20 2001-12-13 Hopp Robert B. Skin patch for use in contact immunotherapy
GB2355192A (en) * 1999-10-15 2001-04-18 Henderson Morley Res & Dev Ltd Anti-viral treatment
JP2003514020A (ja) * 1999-10-29 2003-04-15 ニトロメド インコーポレーテッド 酸化窒素不足により特徴付けられる血管疾患の治療法
US6337076B1 (en) * 1999-11-17 2002-01-08 Sg Licensing Corporation Method and composition for the treatment of scars
DK1242119T3 (da) * 1999-12-30 2004-08-02 Henderson Morley Res & Dev Ltd Kombinationer til behandling af DNA-virale infektioner omfattende et loop-diuretikum og et hjerteglycosid
DE60139134D1 (de) * 2000-09-21 2009-08-13 Henderson Morley Res & Dev Ltd Diuretikum oder sulfonylharnstoff zur benutzung in antiviraler behandlung
GB2376628B (en) * 2001-06-19 2005-06-08 Henderson Morley Res & Dev Ltd Treatment of DNA viral infections in cats
AU2003247496A1 (en) * 2002-06-06 2003-12-22 Matthew Davis Cardiac glycosides for treating muscle pain and spasm
GB2441011A (en) * 2006-08-18 2008-02-20 Henderson Morley Plc Pharmaceutical composition for the treatment of neuropathic pain

Also Published As

Publication number Publication date
EP1968611A2 (en) 2008-09-17
JP2009508814A (ja) 2009-03-05
US20090074845A1 (en) 2009-03-19
CA2621200A1 (en) 2007-03-08
GB0517838D0 (en) 2005-10-12
WO2007026124A2 (en) 2007-03-08
AU2006286367A1 (en) 2007-03-08
WO2007026124A3 (en) 2008-09-25
MX2008003091A (es) 2009-02-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kathe et al. Film forming systems for topical and transdermal drug delivery
Amnuaikit et al. Skin permeation of propranolol from polymeric film containing terpene enhancers for transdermal use
Shidhaye et al. Buccal drug delivery of pravastatin sodium
RU2764443C2 (ru) Трансдермальная терапевтическая система, содержащая азенапин и полисилоксан или полиизобутилен
CN109310646A (zh) 增强递送的肾上腺素组合物
CN109310647A (zh) 具有增强渗透的药物组合物
Lu et al. Preparation and characterization of a metered dose transdermal spray for testosterone
JP4624978B2 (ja) 血小板血症治療用製剤および治療方法
KR20080042164A (ko) 국소형 제형
US20030157155A1 (en) Compositions for use as penetration promoters in transdermal formulations for highly lipophilic active ingredients
Gimeno et al. Transbuccal delivery of doxepin: studies on permeation and histological investigation
KR20080043384A (ko) 경피적 활성 성분 전달 수단
JP2008534474A (ja) 経皮パッチ
JP2023506538A (ja) アゴメラチンを含有する経皮治療システム
Assaf et al. Design and evaluation of transdermal delivery system containing tamsulosin hydrochloride
Iman et al. Formulation and stability study of chlorpheniramine maleate transdermal patch
JP6345120B2 (ja) 経皮ホルモン送達
Mohamed et al. Preparation and release characteristics of Itracinazole poymeric films for topical application
WO2009103932A1 (en) Use of a cardiac glycoside and/or a diuretic for the treatment of neuropathic pain
Sharma et al. Healing efficacy and dermal toxicity of topical silver nanoparticles-loaded hydrogel in Sprague–Dawley rats
GB2441011A (en) Pharmaceutical composition for the treatment of neuropathic pain
Das et al. Effect of penetration enhancers on skin permeation of trazodone hydrochloride from matrix type transdermal formulation through mouse and human cadaver epidermis
Maruti et al. Formulation And Characterization Of Multilayered Controlled Release Topical Patch For Cure Of Cardiac Disease
Anuroop et al. NEWER TRENDS IN FILM FORMING SYSTEMS FOR TOPICAL AND TRANSDERMAL DRUG DELIVERY
Kumbhar Design and Evaluation of Transdermal Patches of Labetalol Hydrochloride

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid