KR20080042164A

KR20080042164A - 국소형 제형

Info

Publication number: KR20080042164A
Application number: KR1020087007996A
Authority: KR
Inventors: 크리스토퍼 하트레이; 이안 스튜어트 파르도
Original assignee: 핸더슨 몰리 피엘씨
Priority date: 2005-09-02
Filing date: 2006-08-22
Publication date: 2008-05-14
Also published as: GB0517840D0; WO2007026125A2; JP2009507008A; EP1942908A2; AU2006286368A1; US20080220066A1; CA2621201A1; WO2007026125A3

Abstract

항바이어스성 국소형 겔 제형은 겔 캐리어 매체 내에 적어도 하나의 루프 이뇨제 및/또는 강심 배당체를 포함하며, 상기 제형은 상기 이뇨제 및/또는 글리코시드을 경피적으로 전달할 수 있다.

국소형 겔 제형, 겔 캐리어 매체, 루프 이뇨제, 글리코시드, 각질층.

Description

국소형 제형{TOPICAL FORMULATIONS}

본 발명은 국소형 제형에 관한 것이며, 특히 바이러스 감염의 치료에 유용한 국소형 제형에 관한 것이다.

바이러스는 생존을 위해 전적으로 감염된 호스트 세포에 의존하는 세포내 기생체이다. 초기에 공지된 항바이러스성 약물은 항암 화학요법에서 사용되는 것과 같은 세포독성 약물(cytotoxic drug)이다. 호스트 세포 대사의 이러한 억제자가 바이러스의 수명에 악영향을 준다고 가정되었다. 암이 아닌 환자에서, 세포독성 약물은 호스트에 너무 유독하여 이롭지 않고, 결과적으로, 항바이러스성 치료로서 이것을 사용하는 것이 매우 제한되었다.

바이러스에 특정된 대사 경로를 목표로 하는 약물이 탐색되었지만, 성공이 제한되었다. 하나의 성공적인 약물인 아시클로구아노신 및 이의 파생물이 개발되었다. 그러나, 이것의 임상 유용성은 좁은 범위의 바이러스 감염, 예를 들어, α-포진 바이러스에 국한된다. 효과적인 화학요법이 존재하지 않는 인간 내에서의 많은 바이러스 감염이 존재한다.

항바이러스성 화학요법은 또한 내약성의 발전에 의해 방해를 받는다. 단순 포진 바이러스(herpes simplex virus)의 치료를 위한 아시클로비어의 광범위한 사 용 이후에; 티미딘 키아나제 유전자 및 폴리메라이제 유전자에서의 내변종성을 지니는 돌연변이가 용이하게 발견된다.

우리는 이제 넓은 범위의 바이러스 감염의 치료에 유용한 제형을 개발하였다. 내약성의 빈도가 낮다는 것이 하나의 예상되는 이점이다. 종래의 항바이러스성 약물, 예를 들어, 뉴클레오시드 유사체와 이의 파생물 및 프로테아제 억제자는 바이러스 복제에 필요로 되는 생합성과 깊이 연관된다. 그러나, 본 제형은 이산적으로 중재되어, 세포내 이온 농도 및 이들의 분포를 변경시키고, 필수적인 공통인자의 바이러스 DNA 합성을 허용하지 않는다. 그러므로, 본 제형의 적용 및 사용시에, 정상적인 세포내 기능이 진행되지만, 바이러스 재생이 진행되지 않는다는 점에서 호스트 세포 대사의 고의적이지만, 최소이며 가역적인 억제가 존재한다.

HPV(인 유두종 바이러스) 감염은 세계에서 가장 널리 퍼진 성접촉을 통해 감염되는 병원성 질병 중 하나이다. 미국에서만 한 해에 대략 550만 개의 새로운 생식기 HPV 감염 사례가 발생한다라고 추정된다.

인 유두종 바이러스는 인간 상피 세포의 종양 증식을 유발할 수 있는 한 그룹의 DNA 종양 바이러스이다. 120 이상의 HPV 유형이 설명되었고, 이들 중 약 1/3이 성 접촉을 통해 확산된다. 저-위험 유형의 HPV는 생식기 사마귀(wart), 피부 사마귀 및 베루커(verucca)(발바닥 사마귀)와 같은 병을 유발할 수 있다. 다른 고-위험 유형의 HPV는 경부 또는 항문 이형성(cervical and anal dysplasia)을 유발하여, 경부 및 사마귀 암종의 수명을 위협하는 질병을 잠재적으로 유발한다.

HPV는 상피에 침범하는 과증식성 질병 범위의 발전을 설명할 수 있다.

예를 들어, 생식기 사마귀는 성접촉에 의해 확산되는 이와 같은 과증식성 질병의 한 형태이며, 매우 전염성이 있다. 현재의 치료가 종종 사마귀를 제거할 수 있을지라도, 사마귀가 치료 후 3개월 내지 6개월 이내에 종종 재발하기 때문에 상기 제거는 거의 영구적이지 않다. 더 큰 사마귀가 존재하는 경우에, 일반적인 마취 하에서 외과 수술이 필요로 될 수 있다.

HPV 감염에 대한 현재의 임상 치료는 병변부 파괴(lesion destruction)를 포함한다. 이러한 절차는 국소적으로 및/또는 직접주사식으로 투여된 독성 약품(트리클로로아세트산, 페놀, 살리실산, 포도필린, 5-플루러유러실, 아시클릭 뉴클레오티드 및 포도필록스)에 의한 외과용 메스, 레이저, 냉동, 또는 병변부 절개를 사용하녀 절제, 뿐만 아니라, 광역학적 요법을 포함한다.

이미퀴모드 및 인터페론과 같은 국소적으로 투여된 면역 조절물을 포함하는 부가적인 방법이 시도되었지만, 재발 비율이 매우 높고(통상적으로 50%보다 더 큼), 무증상 감염이 종종 발견되지 않고 치료되지 않게 된다. 이러한 후자의 감염은 환경적인 발암물질, 공통인자, UV-방사선, 호르몬, 상처, 면역 억제 및 다른 STD 약품과 같은 다양한 양호하지 않은 특성의 이벤트 및 약품에 의해 재발되어, 새로운 활성 임상 질병을 발생시킬 수 있다.

고통스러울 수 있고 흉터를 남길 수 있는 현재의 치료가 불만족스럽고, 특히 현재 치료의 기간이 많은 주 또는 달 동안 지속되기 때문에, 더 큰 효능 및 특이성을 갖는 약물을 개발하는 것이 긴급하게 필요로 된다는 것이 명백하다.

단순 구순 포진에 대한 가장 광범위한 항바이러스성 치료는 아시클로비어이 다. 그러나, 국소형 아시클로비어에 의한 연구는 사용된 제형에 따라 가변되는 결과를 발생시켰다. 아시클로비어 및 다른 뉴클레오시드 유사체에 대한 치료 비용은 상대적으로 높다.

HIV 변종은 감염의 장소인 기저 세포로의 진입을 허용하는 상피에서의 육안으로 보이는 상처를 통한 직접적인 접촉을 통하여 감염된다. 많은 HPV 변종은 임상 증상을 사마귀로서 일으킨다.

생식기 사마귀에 이용 가능한 항바이러스성 치료에만 광범위하게 사용되는 국소성의 효과적인 처방이 존재하지 않는다. 생식기 사마귀는 가장 널리 퍼진 성적 전염병(STI) 중 하나이다. 이러한 이상생성물은 다른 종류의 사마귀과 임상적으로 상이하며, 설정된 효과적인 치료 투약법이 존재하지 않는다. HPV는 사마귀로부터 먼 피부를 감염시킬 수 있다.

특히 면역 약화(immune compromise)를 겪는 사람에 있어서 내약성이 이제주요 문제가 되고 있다. 예를 들어, 아시클로비어가 단일 대사 이벤트 상에서 동작할 때, 바이러스는 단일 유전자 돌연변이로 이 약의 효과를 극복할 수 있다. (유도된 약물 또는 질병에 기인한) 면역약화로 고통을 받고 있는 사람은 특히 심하고 난치성의 질병이 발전하는 경향이 있다. 내변종성의 발전이 또한 높은 투여량 및 지속적인 항바이러스성 치료를 받는 사람들에 있어서 훨씬 더 일반적이다. 현재 치료는 HSV 감염을 전적으로 뿌리뽑지 못한다.

통상적인 발바닥 및 생식기 사마귀의 치료에 이용 가능한 현재의 옵션은 광범위하게 2개의 그룹: 1. 감염된 병변부를 기계적으로 제거하는 안티워트 치 료(antiwart therapy) 및 2. 근원적인 원인을 뿌리뽑고자 하는 직접적이거나 간접적인) 항바이러스성 중재(antiviral intervention)으로 분할될 수 있다. 안티워트 치료는 통상적으로 대부분의 비-생식기 사마귀에 대한 제1선 치료법이다. 외과수술 및 냉동요법과 같은 비-화학적 중재, 뿐만 아니라, 포도필린, 포도필록스, 블레오미신, 살리실산, 포름알데히드, 글루타르알데히드, 바이클로로아세트산, 및 트리클로로아세트산과 같은 화합물을 포함하는, 환자에 이용 가능한 다수의 안티워드 옵션이 존재한다. 임의의 중재의 목적은 주위의 건강한 피부에 대한 병변을 가능한 한 적게 하면서, 사마귀를 제거하는 것이다. 상기 약품 각각은 바이러스가 아니라, 세포가 살아남도록 한다기보다는 오히려, 세포 및 바이러스를 파괴하고자 하는 것이며, 이는 악영향을 초래할 수 있다.

외과수술로 사마귀를 제거하면 병변부가 신속하게 제거되며 높은 응답 속도가 제공된다. 그러나, 이 방법은 출혈, 흉터, 및 박테리아 감염에 대한 가능성 및 국소 마취의 요건을 포함한 여러 단점과 관련된다. 가장 적은 흉터가 환자의 불편함을 초래하는 발바닥 사마귀에서는 흉터가 주로 문제가 된다. 냉동요법 - 설상 이산화탄소 (carbon dioxide snow) 또는 액체 질소로 30-60초 동안 사마귀를 얼리는 것은 고통스럽고, 물집을 생성할 수 있다.

여전히, 냉동요법의 완전한 응답 속도가 외과수술보다 더 높지 않고, 몇 주의 시기에 걸친 다수의 기간이 종종 필요로 된다.

감염된 조직을 부드럽게 하여 파괴하는 살리실산, 글루타르알데히드 및 포름알데히드와 같은 비-생식기 사마귀에 이용 가능한 여러 세포-파괴적인 제품들이 또 한 존재한다. 살리실산이 안전하고, 적절히 효과적이며, 종종 정선한 치료에 이용되지만, 자극적이며 치료 기간이 길다(대략 3 개월)는 여러 단점을 갖는다. 이것은 환자 순응도(patent compliance)에 실질적인 영향을 준다.

포도필로톡신(포도필록스)은 통상적으로 가장 적게 사용되는 천연 제품 프도필린 용액의 활성 성분이다. 이것은 돌연변이원이고 높은 재발률과 관련되기 때문에 종종 사용되지 않는다. 포도필로톡신은 미국 식약품 안전청에서 승인된 자기-관리를 위한 2개의 생식기 사마귀 조제약 중 하나이다. 이 치료에 의한 하나의 주요 문제점은 이 치료를 적용하는 것이 사마귀의 부위 및 이의 기형 가능성으로 인해 제한된다는 것이다.

요약하면, 본 안티워트 치료는 다수의 효능을 갖는다. 단일 치료는 완전히 효과적이지는 않고, 부작용과 함께 재발률이 높다.

항바이러스성 치료는 근원적인 감염을 치료하고자 하는 것이며, 이는 안티워트 치료에 비하여, 더 합리적인 방법임이 분명하다. 시도포비르, 인터페론 및 이미퀴모드는 간접적으로 이러한 기준을 모두 충족시킨다. 사마귀의 각질화된 피부 층을 통하여 활성 장소에 이러한 화합물을 전달하는데 있어서 제한이 존재한다.

시도포비르, 시티딘 유사체는 DNA 바이러스의 전체 호스트에 대해 활성이며, 또한 HPV 질병을 치료하는데 효과적인 것으로 나타났다. HPV 감염에서의 시도포비르의 항바이러스성 효과는 아포토시스(Snoeck 등, 2001)의 도입에 기인한다고 여겨진다. 이 치료는 HPC 감염에 대해 현재 인증받지 못하였고, 이의 전신적인 독성 때문에 인증받게 되지는 않을 것이다.

인터페론(IFN)은 진핵 세포에서 바이러스 복제를 방해하는 단백질이다. IFN의 장점은 이의 면역조절, 항바이러스성 및 항증식성 특성에 있다. IFN은 양성 사마귀에 대해서만 승인된 항바이러스성 약물이다. IFN은 임상에서 일상적으로 사용되지는 않는다. Alferon®은 18년에 걸쳐 환자들에서 재발하는 생식기 사마귀에 대해 나타내는 병변부내 주사액(intralesion injection)이다. 이것은 국소형 투약 형태로서의 가능성을 제한하는, 16,000로부터 27,000 Da까지의 범위의 대략 166개의 아미노산을 함유하는 인터페론 α로 이루어져서, 이들과 관련된 양호하지 않은 부작용 프로파일을 극복할 수 있다.

이미퀴모드는 사람에게 엔터페론 및 사이토가인을 생성하는 면역 응답 변경자이다. 임상 시도를 통해 이 약물의 효능 및 안전성이 증명되었고, 플라시보에 비하여, 5% 이미퀴모드 크림에 의해 상당한 생식기 사마귀 제거가 관측되었다고 결정되었다.

이제 중재 및 바이러스 재생의 가능한 예방에 의해 DNA 바이러스 감염을 치료하기 위한 항바이러스성 국부형 제형을 고안하였다. 바람직하게는, 상기 제형은 현재 치료법이 존재하지 않거나, 현재 치료법이 내약성이 강해는 것을 경험하고 있는 광범위한 DNA 바이러스 감염-유두종 바이러스와 관련된 것을 포함함-을 치료하는데 사용하기 위한 것이다.

본 발명에 따르면, 하나의 양상에서, 겔 캐리어 매체에서 적어도 하나의 이뇨제 및/또는 강심 배당체를 포함하는 항바이러스성 국소형 겔 제형이 제공되며, 상기 제형은 상기 이뇨제 및/또는 글리코시드를 경피적으로 전달할 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시예는 이에 첨부된 종속 청구항에서 표현된다는 것이 발견되어야 한다.

이뇨제는 루프 이뇨제, 티아지드 이뇨제 및/또는 술포닐우레아를 포함하는 이뇨제 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 이뇨제일 수 있다.

화학적으로 5-(아미노술포닐)-4-클로로-2-[(2-푸라닐메틸)아미노] 벤조산)으로서 공지되어 있는 푸로세미드는 Na⁺/K⁺/2Cl 심포트(symport)의 억제자로서 또한 공지되어 있는 루프 이뇨제이다. 이 푸로세미드는 현재 신부전증으로 인한 부종 및 빈뇨의 징조를 나타내고, 세포막을 가로지른 염화물 이온의 전달의 금지에 의해 자신의 생리적 효과를 발휘한다. Henle의 루프의 상승 림(ascending limb)의 두꺼운 세그먼트는 주로 이의 이뇨 효과를 위한 활동 장소이며, 메커니즘은 두꺼운 상승 림에서 NA⁺/K⁺/2Cl^- 심포터로의 바인딩하고, 결과적으로 칼륨 배출을 촉진하여, 세포내 칼륨이 고갈된 세포를 남기는 것을 포함한다.

화학적으로 3β-[O-2. 6-디데옥시-β-D-리보-헥소피라노실-(1,4)-O-2, 6-디데옥시-β-D-리보-헥소피라노실-(1,4)-2, 6-디데옥시-β-D-리보-헥소피라노실)옥시] -12b, 14디히디록시-5β, 14β-카드-20(22)-에놀라이드로서 공지되어 있는 디곡신은 디지탈리스 라나타(Digitalis lanata)의 잎으로부터 획득되는 강심제이다. 이 디곡신은 C17에서의 활동성을 위해 필수적인 포화되지 않은 락톤과 함께, 스테로이드 핵 및 C3에서의 하나 이상의 클리코시드 잔존물을 포함한다.

디곡신의 약리학적 활동성은 특히 효소 Na+, K+ ATase의 α 서브유닛의 세포외부 면(extracytoplasmic) 상의 장소에 바인딩되는 디곡신의 능력과 관련된다(세포 내부의 나트륨 및 칼륨의 농도를 조정한다). 이것은 선택적으로 세포의 활성 전달 Na+ 및 K+ 펌프를 방지하여, 나트륨 및 칼슘의 세포내 농도를 증가시키도록 하고, 세포내 칼륨의 농도를 감소시키도록 한다. 이것은 현재 심장병 및 심방 부정맥에서 나타난다. 경구로 또는 주사로 투여될 때의 디곡신의 임상 사용에 대한 하나의 주요 한계는 이의 치료 범위(therapeutic window)가 좁을 때, 독성과 관련된 매스꺼움 및 구토와 같은 부작용의 위험이다.

피부과학적 약품(dermatological preparatioin)은 피부 구역(skin compartment) 내의 피부 표면 또는 외용 장소에 물리적으로 인접하여 위치되는 관련 부위에 화합물을 전달하도록 디자인된 제형으로서 규정된다. 피부 전달 시스템은 주로 높은 약물 농도가 전신 분배를 피하는 병리 장소(site of pathology)에 전달될 수 있기 때문에, 경구 전달(가장 통상적인 루트)을 통하는 것이 유용하다. 그러나, 피부에 대한 잠재적인 자극, 및 느린 활동 개시를 포함한 단점이 종종 관측된다. 본 발명은 바람직하게는, 디곡신 및/또는 푸로세미드의 표피의 기저층으로의 경피적 흡수가 성취될 수 있는 피부 약품을 제공하고자 하는 것이다. 흡수가 주로 화합물의 생리화학적 특성에 의해 결정될지라도, 제형은 화합물의 플럭스(flux)를 결정하는데 있어서 중요한 역할을 할 수 있다.

겔은 종종 작은 이산 입자를 함유하는 재료이며, 이 경우에 액체가 풍부한 반고체 특성의 2개의 컴포넌트 시스템으로서 규정된다. 하나의 특징적인 특성은 고체와 같은 특성을 제공하는 '시크너(thickener) 또는 증점제(thickening agent)'라고 종종 칭해지는 연속적인 구조가 존재한다는 것이다. 전형적인 폴라 겔(polar gel)에서, 합성 또는 천연 폴리머는 통상적으로 친수성 액체 전체에 걸쳐 3차원 매트릭스를 구성한다. 겔이 작은 이산 입자를 포함하는 경우, 상기 겔은 2-상 시스템인 반면, 겔이 이산 입자를 포함한다는 것을 나타나지 않는 경우, 상기 겔은 1-상 시스템이라고 칭해진다. 2-상 시스템은 요변적인 경향이 있는데, 즉, 정지 시에는 반고체이지만 흔들 때 액화된다. 1-상 시스템에 대한 겔화제 또는 응집제로서 사용되는 전형적인 폴리머는 천연 검(natural gum), 카라기난, 우뭇가사리, 펙틴을 포함하는 반면, 2-상 시스템은 메틸셀룰로오스, 히드로에틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 및 카르복실메틸셀룰로오스와 같은 반-합성 재료, 및 천연 폴리머(Carbapol®(Carbomer) 및 Cabosi®)를 포함한다. 겔은 삼투적으로 양호하게 방출되어, 너무 크지 않은 분자의 비교적 양호한 확산을 허용하는 경향이 있다.

본 발명이 설명되고, 당업자에 의해 효과적으로 더 쉽게 이해되고 용이하게 수행될 수 있도록 하기 위하여, 순전히 비-제한적인 예로서 이제 첨부 도면이 참조될 것이다.

도1은 단지 32℃에서의 다양한 용매에서 디곡신의 포화된 용해도를 도시한 도면.

도2는 32℃에서의 동일한 용매에서 푸로세미드의 포화된 용해도를 도시한 도면.

도3은 공동용매 혼합물(40PG: 40 물: 20 요소)을 포함하는 원형 사마귀 겔 제형(prototype wart gel formulation)에서 푸로세미드 및 디곡신의 32℃에서의 포화된 용해도를 나타낸 도면.

도4는 개정된 공동용매 혼합물(50PG: 40 EtOH: 10H₂O)을 포함하는 제안된 사마귀 겔 제형에서 개별적이거나 결합된 푸로세미드 및 디곡신의 포화된 용해도를 나타낸 도면.

도5는 50PG: 20 EtOH 20 PEG 400: 10 H₂O의 공동용매 혼합물을 포함하는 겔 제형에서 푸로세미드 및 디곡신의 포화된 용해도를 도시한 도면.

도6은 도3에서 언급된 원형 및 도4에서 언급된 개정된 공동용매 혼합물 사이의 푸로세미드 용해도의 차이를 나타내는 도면.

도7은 원형 40: 40: 20 공동용매 혼합물 및 개정된 50: 40: 10 공동용매 혼합물 사이의 디곡신 용해도의 차이를 나타내는 도면.

도8은 겔로부터 디곡신 약물 방출 시의 pH의 영향, 및 특히 pH 5, 7, 및 9에서 14:1 몰비 겔로부터 획득된 디곡신에 대한 시험관내 방출 프로파일을 나타내는 도면.

도9는 pH 5, 7, 및 9에서 14:1 몰비 겔로부터의 푸로세미드에 대한 시험관내 방출 프로파일을 나타내는 도면.

도10은 pH 7에서의 14:1 및 1:1 카보머로부터의 디곡신에 대한 시험관내 방출 프로파일을 나타내는 도면.

도11은 pH 7에서의 14:1 및 1:1(F:D) 카보머로부터의 푸로세미드에 대한 시험관내 방출 프로파일을 나타내는 도면.

도12는 (울트레즈 카보머(Ultrez Carbomer)로 두꺼워진) 개정된 겔 제형을 사용하여 디곡신 및 푸로세미드에 대한 시험관내 방출 프로파일을 나타내는 도면.

도13은 (HPC로 두꺼워진) 개정된 겔 제형을 사용하여 디곡신 및 푸로세미드에 대한 시험관내 방출 프로파일을 나타내는 도면.

도14는 (HPC로 두꺼워진) 앰풀 겔 제형(amopule gel formulation)을 사용하여 디곡신 및 푸로세미드에 대한 시험관내 방출 프로파일을 나타내는 도면.

도15는 울트레즈 또는 HPC 중하나로 두꺼워진 pH 5 제형에서 겔 1:14(D:F)로부터 디곡신 및 푸로세미드의 시험관내 방출의 비교를 도시한 도면.

도16은 원형 겔과 관련하여, 인간의 굳은 발바닥 피부(human callous plantar skin)를 통한 푸로세미드의 누적 침투를 도시한 도면.

도17은 원형 겔과 관련하여, 인간의 굳은 발바닥 피부를 통한 디곡신의 누적 침투를 도시한 도면.

도18은 원형 겔과 관련하여, 인간의 굳은 발바닥 피부를 통한 디곡신 및 푸로세미드의 누적 침투를 도시한 도면.

도19는 원형 겔과 관련하여, 몰량으로서 표현된 인간의 굳은 발바닥 피부를 통한 푸로세미드 및 디곡신의 누적 침투의 프로파일을 도시한 도면.

도20은 원형 겔과 관련하여, 적용된 투여량의 퍼센티지로서 표현된 인간의 굳은 발바닥 피부를 통한 푸로세미드 및 디곡신의 누적 침투를 도시한 도면.

도21은 3개의 겔 제형으로부터 인간의 굳은 피부를 통한 푸로세미드의 시험관내 침투를 도시한 도면.

도22는 도21에 도시된 동일한 3개의 겔 제형으로부터 인간은 굳은 피부를 통한 디곡신의 시험관내 침투를 도시한 도면.

도23은 인간의 굳은 피부를 통한 푸로세미드의 시험관내 침투를 도시한 도면: 원형 겔 제형이 개정된 최대 디곡신 겔 제형과 비교됨.

도24는 인간의 굳은 피부를 통한 디곡신의 시험관내 침투를 도시한 도면: 원형 겔 제형이 개정된 최대 디곡신 겔 제형과 비교됨.

인간의 피부의 각질층(stratum corneum)이 국소형 적용 약품으로부터의 경피적 흡수라고 칭해지는 속도 제한 스텝이라는 것이 광범위하게 인식된다. 바이러스성 사마귀가 있는 피부 부위 내의 각질층은 제한된 지질 세포내 경로를 갖는 조밀하게 패킹된 각질세포로 상당히 상이하게 이루어진다. 이로 인해, 각질이 잠재적으로 훨씬 더 큰 약물 흡수 속도 제한 능력을 갖는다.

국소형 제형을 제형화할 때, 하나의 방법은 약리학적으로 활성인(그리고, 피부에 친밀한) 첨가제를 통합하여 (배리어를 더 효율적이도록 하는) 배리어 특성을 화학적으로 변경하는 것이다.

각각의 상이한 유형의 항-HPV 제형을 갖는 경우와 같이, 주요 목적은 (시너지적으로 동작하는) 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두를 최소의 독성으로 효능이 있는 량으로 (케라티노사이트 복제의 장소인 기저층인 것으로 가정되는) 활동 장소에 이 상적으로 전달할 수 있는 국소형 제형을 제형화하는 것이다.

이러한 2개의 바람직한 약물은 시너지적으로 동작하며, 주요 목적은 이로운 비율로 함께 이들을 전달하는 국소형 겔 제형을 제공하는 것이다. 이를 성취하는 효율적인 방법은 '동질 시스템(homogenous system)', 즉 단상 제형(single phase formulation)을 사용하는 것이다. 더구나, 구성된 메트릭스(예를 들어, 겔)는 더 양호한 활성 방출 및 최소의 첨가제 상호작용을 제공한다. 겔의 폐색 특성은 또한 병변부를 더 효율적으로 코팅하는 것을 돕는다.

이용 가능한 광범위한 국소형 제형 첨가제가 존재하지만, 바람직한 첨가제는 다음 팩터를 고려하여 선택된다:

1 규칙적인 첨가제의 각질용해 활동도.

2 각질의 '스웰링(swelling)'에 대한 영향

3 2개의 활성제가 (비교적 낮은 농도로 열역학 활동을 높게 유지하여 효능을 유지하고 최소의 독성을 유지하기 위하여) H₂O에 비교적 녹지 않는다는 점을 상기한 용매 내에서의 활성제의 상대적인 용해도.

우레아( BP , EP USP )

우레아는 연화 제형에서 통상적으로 사용되며, 20%에서 각질용해가 되는 2-20%의 농도의 각질층의 수화작용을 증가시키는 것으로 나타났다.

일부 바람직한 실시예에서, 우레아는 20%의 겔 내로 통합되므로, 부드러운 각질용해 효과를 발휘하면서, 각질층의 수화작용(스웰링 시의 부가적인 효과)을 제 공한다.

구멍(pore)을 수화시킴으로써, 이 첨가제는 또한 SC에서 오프닝을 통한 활성제의 이동을 용이하게 할 수 있다. 이 첨가제를 통합하는 부가적인 장점은 이 첨가제가 대사의 천연물이며, 전신적 독성이 없이 소변으로 배설된다는 것이다.

프로필렌 글리콜( PG )( BP , EP , USP )

PG는 이용 가능한 가장 통상적으로 사용되는 제형 첨가제 중 하나이며, 비교적 낮은 매체 농도에서 자주 사용된다. 국소형 제형에서 이것을 사용하는 주요 이유는 용매화제로서의 우수한 특성 때문이다. PG는 또한 각질층에서 물 함량을 증가시켜서, 각질층을 통한 삼투성 경사(osmotic gradient)를 촉진한다.

PG가 40-70%의 농도로 사용되는 경우, 상기 PG는 각질용해제로서 동작한다. PG는 최소로 흡수되고, 임의의 전신적 앱서번스(absorbance)는 간에서 젖산 피루브산으로 산화된다.

무균 H ₂ O( BP , EP , USP )

스웰링(및 조직의 관련된 수화작용)은 2개의 활성제를 조밀하게 패킹된 각질세포/각질을 통해 타겟 존 기저층으로 최적으로 전달하도록 하는데 매우 바람직하다고 여겨진다.

에탄올( ETOH )( BP , EP , USP )

에탄올은 주로 제형 내에서 약물 용해도를 개선시키기 위하여 국소형 제형에서 자주 사용된다. 피부에 노출될 때, 에탄올은 비교적 높은 농도에서 탈수, 지방 이동(lipid mobilisation), 및 잠재적으로 "피부 갈라짐"을 유발한다.

PEG 평균 분자량 400( BP , EP , USP )

액체 마크로골로서 또한 공지되어 있는 폴리에틸렌 글리콜 400은 수화성 용액, 공동용매 및 휴멕턴트이며, 피부로부터 수분을 회수할 수 있다. 상기 폴리에틸렌 글리콜 400은 20℃(물=1)에서 1.13 g cm^-3의 밀도 및 40℃에서 43Cs의 점도를 갖는 약간 알코올 냄새의 명백한 액체이다.

PEG 400은 또한 국소형 제형에서 제형 내의 약물 용해도를 개선시키는 것으로 공지되어 있다. PEG 400이 각질용해 활동을 나타낸다는 것을 제안하는 과학적인 증거가 존재하지는 않지만, PEG 400이 피부의 수화작용을 돕는다는 것을 제안하는 일부 증거가 존재한다.

예 1

인간의 굳은 피부에 대한 첨가제 에탄올, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 프로필렌 글리콜(PG) 및 물(H₂O)의 스웰링 효과(즉, 흡수)는 24 시간 동안 이러한 용매에서 사전-계량된 피부 샘플(pre-weighted skin sample)을 침수시킴으로써 결정된다. 그 후, 피부 샘플이 제거되고, 표면 용매가 조직과 함께 서서히 제거되고, 재-계량(re-weighting)된다. 물만이 임의의 큰 정도로 피부 내로 흡수되었다는 결과가 나타났다. 이러한 이유 때문에, 물이 바람직하게는 히드로겔의 형태로 겔 내로 통합된다. 폴리에틸렌 글리콜/물 용액에서, PEG가 증가하면 굳은 피부의 스웰링이 감소한다는 것이 또한 발견되었다. 그러므로, 상당한 PEG를 겔 내로 통합하는 것은 덜 바람직하다.

예 2

프로필렌 글리콜(PG)/물 용액이 만들어지고, PG가 물의 스웰링 효과에 바람직하지 않은 영향을 갖지 않는다는 것을 나타낸다. 100 % 물 용액 및 PG와 물의 50:50 용액 사이에서 스웰링에 상당한 차이가 존재하지 않는다. 그러므로, 40% PG를 겔 내로 통합하는 것은 피부 스웰링에 영향을 줌이 없이 각질용해 동작을 제공할 수 있다.

예 3

겔 제형 내로의 우레아가 일부 실시예들에 대해 바람직하다는 것을 포함하는, 20% 우레아 용액이 각질용해 특성을 나타낸다(우레아가 또한 겔/크림을 덜 기름지게 느끼도록 한다)는 것이 문헌을 통해 드러났다. 프로필렐 글리콜을 40%로 유지함으로써, 첨가제 혼합물은 스웰링에 대한 임의의 영향을 결정하기 위해 (20%까지의) 우레아의 가변 량으로 준비되었다. 우레아가 굳은 피부의 스웰링에 임의의 상당한 정도로 악영향을 주지 않는다는 결과가 나타났다. 그러므로, 겔 내로 20%의 우레아를 통합하는 것은 일부 실시예에서 바람직하며, 이를 공지된(또한 최소의) 각질용해 농도로 유지시킨다.

이러한 결과는 물에만 기인하는 것으로 나타난 스웰링에 프로필렌 글리콜이 영향을 미치지 않는다는 것을 나타낸다. 우레아는 또한 섭취(uptake)에 바람직하지 않은 영향을 미치지 않는다는 것을 제시한다. 이러한 결과는 40% 물, 40% 프로필렌 글루콜 및 20% 우레아를 포함하는 겔이 최적의 스웰링 특성과 함께, 프로필렌 글리 콜 및 우레아의 이중 각질용해 특성을 갖는 일부 바람직한 실시예를 나타낸다는 것을 제시한다.

국소형 투약량을 전개할 때, 임의의 시험관내 방출 또는 침투 실험을 행하기 전에, 장래의 약물 및 용매 후보의 물리적 및 화학적 특성에 대한 정보를 습득하기 위하여 사전-제형 연구(pre-formulation study)를 수행하는 것이 중요하다. 다른 팩터들 중에서, 용액 및 피부 내에 존재하는 다양한 상태 둘 모두에서 침투제의 용해성은 침투제의 침투의 상대적인 속도를 결정한다.

전형적으로, 피부에 적용될 때, 활성제 또는 침투제는 용매 또는 용액 내에서 용해되거나 분산되어 존재할 것이다. 피부 내에 존재하는 침투제의 농도가 일반적으로 전달 속도를 제어할지라도, 그 특정 농도는 피부의 표면 상에 존재하는 용액 내에 존재하는 침투제의 용해도(즉, 열역학적 활동)에 따른다.

예 4

디곡신 및 푸로세미드 침투 약물의 상대적인 용해도는 일련의 규칙적인 용매/첨가제에서 평가되었다. 용해도는 피부 표면에서의 평균 온도인 32℃에서 조사되었다. 그 후, 결과는 시험관내 방출 및 침투에 대한 바람직한 침투 용매 조합을 결정하여 2개의 활성제의 최적 량을 전달하는 바람직한 겔 제형에 도달하는데 사용된다.

일반적인 절차

금속 압설기를 사용하여, 소량의 각각의 금속 침투제가 1.5ml 바이알(바이알의 ≒ 1/4 볼륨을 차지하는 대략 50 mg) 내로 별도로 배치되었다. 그 후, 바이알은 이전에 눈금조정된 전자 저울(previously calibrated electronic balance) 상으로 개별적으로 전달되고 나서, 계량된다. 그 후, 정확히 1g(중량/볼륨 w/v)의 각 용매가 눈금조정된 1000μl 길슨 피펫을 사용하여 바이알에 신중히 첨가되는데, 질량이 필요로 되는 1g에 가까워질수록, 1000μl 길슨 피펫은 더 적은 볼륨의 용매를 정확하게 배치할 수 있도록 하는 200μl 및 20μl 길슨 피펫으로 교환된다. 이 절차는 연구되고 있는 각종 용매에 의해 나타나는 상이한 밀도를 고려하기 위하여 신중히 행해졌다.

용해도 예가 32℃에서 행해지면, 용매가 바이알에 첨가되기 전에, 모든 용매는 디지털로 온도를 판독하는 자동온도 조절되는 인큐베이터 내에서 상기 용매들의 지정된 온도로 온도-평형화되었다(이것은 용매와 나란히 인큐베이터 내부에 온도계를 배치함으로써 확인되었다). 침투제를 포함하는 각각의 바이알 내로의 용매의 후속 계량이 또한 적절한 연구 온도에서 전자 저울 상에서 실행되었다.

약물이 첨가되지 않은 각각의 용매를 포함하는 부정 제어 바이알이 존재하였다. 각각의 침투제/용매 조합에 대하여, 총 4개의 복제가 실행되었다.

일단 모든 용매가 정확하게 계량되었다면, 바이알은 혈구 로테이터(blood cell rotator) 내로 고정되었다. 다시 이 절차는 소정 온도에서 실행되었다. 인큐베이터는 32℃의 일정 온도를 유지하는데 사용되었다. 온도계 판독은 안전한 일관된 온도가 유지되고 있다는 것을 보장하기 위하여 주기적으로 기록되었다.

포화된 용해도 예의 최초에, 바이알은 용매 내에 과도한 약물이 존재한다는 것, 즉, 투명한 용액이라기보다는 오히려, 가시적 고체 입자 또는 현탁액이 존재한 다는 것을 보장하기 위하여 주기적으로 조사되었다. 임의의 바이알이 시각적으로 입자가 없다는 것으로 보이면, 그 특정 침투제 용매 조합에 대한 완전한 포화가 성취될 때까지 부가적인 량의 침투제가 첨가되었다. 이 바이알은 24 시간의 총 기간 동안 회전하도록 허용되었다.

과도한 고체의 존재를 확인하기 위한 최종적인 시각적 조사 및 평형이 성취되었다는 가정 이후에, 바이알은 즉시 원심분리기에 전달되어 10분 동안 12,500rpm으로 회전되었다. 원심분리기는 온도가 32℃로 사전-평형화되었다. 바이알을 원심분리함으로써, 과도한 침투제로부터의 포화된 침투제 용매의 분리가 성취되었고, 상기 과도한 고체는 바이알의 바닥에서 펠렛(pellet)을 형성한다.

그 후, 상청액의 750μl(대략 75%)가 또 다른 바이알 내로 전달되었고(사전에 데워지고), 두 번째로 원심분리기에서 10분 동안 12,500rmp으로 회전되었다. 이것은 길슨 피펫을 사용하여 상청액을 제거할 때 발생할 수 있는 펠렛으로부터의 임의의 과도한 미립자 물질이 존재하지 않는다는 것을 보장한다. 피펫을 포함하는 사용된 모든 장비를 안전하게 하기 위하여 상당히 주의되고, 팁은 온도의 잠재적인 작은 변화에 따른 침투 용해도의 임의의 변화를 피하기 위하여 사용되기 전에 대응하는 온도로 평형화된다. 그 후, 바이알은 사전에 데워진 피펫 팁을 사용하여 샘플링되고, HPLC에 의해 즉시 분석된다.

예 5

각각의 개별적인 용매에서 침투제 각각의 최초 용해도 예에서 획득된 결과로부터, 부가적인 용해도 예가 다음의 공동용매 혼합물을 사용하는 것을 제외하고는, 상술된 것과 동일한 절차를 사용하여 행해진다.

제1 공동용매 혼합물: 40:40:20 프로필렌 글리콜:물:우레아

(최대의 각질용해 포텐셜)

제2 공동용매 혼합물: 50:40:10 PG:EtOH:물

(최대의 디곡신 포텐셜)

제3 공동용매 혼합물: 50:20:20:10 PG:EtOH:PEG400:물

(최대의 푸로세미드/최적의 디곡신)

도1 내지 5는 용해도 테스트 각각으로부터 획득된 결과를 도시한다. 도6 및 7은 하이라이트 비교이다. 도1 내지 3에 도시된 용해도 테스트 결과는 활성 푸로세미드(F) 및 디곡신(D) 둘 모두가 물에 비교적 불용성이지만, 이들의 용해도가 프로필렌 글리콜(PG)의 존재 시에 증가된다는 것을 나타낸다. 우레아의 존재는 활성 F 및 D 둘 모두의 용해도를 감소시킨다.

각각의 개별적인 용매 내의 침투제의 용해도 연구로부터, 디곡신은 에탄올 및 프로필렌 글리콜 내에서 최고의 용해도를 가지며 PEG400 및 물에서 비교적 낮은 용해도를 갖는 것으로 나타났다. 푸로세미드는 PEG400에서 두드러지게 최고의 용해도를 가지며, PG 및 에탄올에서 비교적 양호한 용해도를 가지며, 물에서 낮은 용해도를 갖는 것으로 나타났다.

40:40:20(PG:물:우레아) 공동용매 혼합물(원형)에서 푸로세미드가 존재할 시의 디곡신의 최고 용해도는 각각 433 및 5979 μg ml^-1이었다.

예 6

임상에서 환자에게 적용할 때, 환자의 조직이 매우 수화된 것으로 나타나고, 하나의 경우에, '사마귀' 병변부가 16주 이후에 완전히 사라진다는 것을 관측하였다. 원형 제형은 상기 제형 내에서 D 및 F의 레벨을 증가(최대화)시킴으로써 제형에 대한 응답 시간 제안된 개정이 필요로 될지라도, 일반적으로 병변부를 스웰링하여 파괴시키는 것으로 시각적으로 나타났다.

제1(40:40:20 PG:물:우레아) 공동용매 혼합물이 제2(50:40:10 GP:EtOH:물) 공동용매 혼합물보다 상당히 더 큰 '각질용해' 포텐셜을 가지며, '사마귀' 조직을 통한 활성제의 전달을 가능하게 하는 것으로 여전히 나타날지라도, (시험관내 침투 연구에 의해 지원되는) 제형 내의 화학적 포텐셜은 효능이 있는 량으로 바이러스의 위치를 확산시키는데 불충분할 수 있다고 가정된다. 이것이 친유성 디곡신 및 푸로세미드의 진입에 대한 부가적인 배리어를 제공할 수 있는 수화된 병변부 및 제형 내의 물에 의해 악화될 수 있다는 것이 또한 가정된다.

제2 및 제3 겔 공동용매 혼합물(50:40:10 PG:EtOH:물 및 50:20:20:10 PG:EtOH:PEG400:물)에 관한 용해도 연구로부터, 특히 주로 디곡신(50:40:10)의 농도를 최대화시키도록 지정되는 공동용매 혼합물이 또한 (PEG400을 포함하는 겔 제형보다 더 많이) 푸로세미드의 농도를 최대화시킨다는 것이 명백해졌다. 이에 기초하여, '최대의 디곡신' 겔만이 시험관내 방출 테스트를 받게 되었다.

최대의 디곡신의 제2 공동용매 혼합물에서, 디곡신의 용해도는 433μg ml^- ¹ 로부터 6267μg ml^-1로(~15 배) 증가되었다. 푸로세미드의 용해도가 또한 5979μg ml^-1로부터 95001μg ml^-1로(~16 배) 증가되었다. 침투제 용해도의 이러한 예상하지 못한 증가는 여러 팩터로 인한 것이다:

ㆍ40% 에탄올의 통합.

ㆍ시스템으로부터 우레아의 제거

ㆍ8%까지의 H₂O 함량의 감소

제형으로부터 우레아의 손실은 개정된 겔 제형 내에서 각질용해를 감소시킨다고 예상될 것이다. 그러나, 이 팩터를 보상하기 위하여. PC 함량은 50%로 증가되었다.

피부과학적 제형으로부터 피부 내로의 침투제의 전달을 최적화하는 하나의 수단은 전달 시스템 내에서 침투제의 열역학적 활동 또는 '화학적 포텐셜'을 개선시키는 것이다. 피부 내로, 및 피부를 가로지른 침투제의 최적의 방출 및 후속 전달은 통상적으로 열역학적 활동이 자신의 최고 성취 가능한 레벨, 즉, 포화(=1)에 있을 때 성취될 수 있다. 포화 위(약물 결정 효과) 및 아래(더 낮은 화학적 포텐셜)에 있는 레벨은 제형으로부터의 배출 및 피부를 가로지른 후속 전달의 감소를 발생시킨다. 그러므로, 국소형 제형에서 열역학적 활동 레벨 1을 성취하는 것이 피부 내로의 침투제의 전달을 최적화하는데 바람직하다. 다양한 공동용매 혼합물에서 포화를 성취하는데 필요로 되는 디곡신 및 푸로세미드는 용해도 테스트에서 조사되었다. 열역학적인 것 이외의, 다른 제형 팩터가 또한 고려되어야만 하는데, 예를 들어, 푸로세미드는 화학적 특성이 양친매성이어서, 제형 pH 효과가 성능에 영향을 줄 수 있다.

예 7

이와 같은 현상 및 다른 현상을 조사하기 위하여, 여러 상이한 유형의 겔의 군이 제형화되어, 이러한 파라미터가 디곡신 및 푸로세미드의 시험관내 방출 특성에 영향을 줄 수 있다는 것을 나타냈다.

상이한 유형의 겔 시크너, 예를 들어, 카보폴 981NF 카보폴 및 울트레즈와 같은 카보머의 영향. 셀룰로오스 파생물. 히드록시프로필셀룰로오스가 또한 적절한 증점제로서 조사되었다.

상기 유형의 시크너(및 '바람직한' 점도를 획득하는데 필요로 되는 각각의 am) 이외에, 겔의 pH를 5, 7 및 9로 변경시키는 효과가 조사되었다.

최종적으로, 침투제의 몰비를 디곡신:푸로세미드의 1:1 및 1:14 몰비로 변경시키는 효과가 조사되었다. 이러한 선택 뒤의 원리는 본원에 논의된다.

원리 1: 1:1 몰비의 40:40:20 공동용매 혼합물에서 디곡신 및 푸로세미드의 포화된 용액을 포함하는 겔 제형.

이 원리에 대한 근거는 사마귀의 2성분 약물 치료의 효능이 1:1 (등몰) 전달에 기초한다는 (공지된 시너지 효과를 제공하는데 적합한) 가정이었다. 이것은 겔 공동용매 혼합물(40:40:20 물:프로필렌 글리콜:우레아)에서 디곡신 및 푸로세미드의 포화된 용액을 제형화하고 나서, 이들을 소정의 볼륨으로 결합하여, 2개의 약물의 등몰 량이 용액에 포함되도록 함으로써 성취된다.

40:40:20(PG:물:우레아) 공동용매 혼합물 내의 디곡신의 포화 한도는 433 μg cm^-3이었다(포화된 용해도 결과 섹션 참조). 용액 내의 몰의 수는 433/780.9 = 0.55 μmol cm^-3이다. 공동용매 내의 푸로세미드의 포화 한도는 5979 μg cm^-3이다. 용액 내의 몰의 수는 5979/330.7 = 18.1 μmol cm^-3이다. 그러므로, 1:1 몰비에 대하여, 평형 푸로세미드 용액의 1cm^-3에 대한 포화된 디곡신 용액의 18.1/0/55 = 32.9cm^-3이 필요로 된다. 33:1의 양적인 비로 디곡신 및 푸로세미드의 포화된 용액을 각각 결합함으로써, 1:1 몰비로 둘 모두를 포함하는 용액이 발생되어야 한다. (그러나, 이것은 약물이 혼합 시에 용액으로부터 떨어지지 않는 경우에만 그러하다 - 실험적으로 이것은 그 경우인 것으로 발견되었다). 이 경우에, 약물 둘 모두는 포화상태이므로, 최고의 열역학적 활동상태이다.

원리 2: 1:14 몰비의 40:40:20 공동용매 혼합물에서 디곡신 및 푸로세미드의 결합된 포화된 용액을 포함하는 겔 제형.

이 원리에 대한 근거는 화학량론의 제어와 무관하고 화학량론의 제어가 없는 혼합물에서 약물 둘 모두의 최대 량의 획득하는 것이다. 본질적으로, 약물 둘 모두가 과도하게 존재하면, 다른 성분이 존재시에 각각의 성분에 대한 포화에서 평형이 설정될 것이다. 더 많은 '버킷 캐미스트리(bucket chemistry)'에 접근할지라도, 최종 결과는 이전의 원리에 대한 임상 성능에서 더 우수하다는 것을 나타낼 수 있다.

과도한 량의 각각의 약물이 공동용매 혼합물에 첨가될 때, 후속 HPLC 분석은 각각의 1:14 디곡신:푸로세미드 몰비를 발생시켰다. 이 몰비는 공동용매 혼합물 내에서의 서로가 존재 시에 각각의 침투제의 상대적인 화학적 포텐셜에 기인하여 성취되었다. 몰비가 일부 방식에서 원리 1과 상당히 상이할지라도, 각각의 침투제는 포화상태이므로, 자신의 최고 레벨의 열역학적 활동상태일 것이다. 더구나, 2개의 활성제 중 디곡신이 더 효능이 있는 경우, 과도한 푸로세미드는 활동 장소(나트륨/칼륨 펌프)에서 유용할 수 있다. pH 변화가 이것이 중성 분자일 때 디곡신의 방출에 최소의 영향을 미친다라고 가정되었다.

다음의 테이블은 시험관내 방출 테스트를 후속하여 받게 되는 제조된 상이한 유형의 겔 및 사용된 각각의 성분(w/w)의 비율을 상세히 나타낸다.

겔 각각의 실험식

예 8

겔 제제

모든 계산은 상이한 제형 공동용매 혼합물의 상대적인 비율에 기초한다. 각 각의 상이한 세포 제형에서, 시크너가 총 w/w 제형 혼합물의 퍼센티지로서 최종적으로 첨가된다.

이벤트의 다음 시퀀스는 '개정된 최대 디곡신' 겔의 제제를 설명한다. 모든 다른 겔이 또한 상기 테이블에서 설명된 바와 같은 적절한 성분을 사용하는 것을 제외하고는, 이벤트의 동일한 시퀀스를 사용하여 제조된다. 모든 겔 제조는 GLP 표준에서 수행되었다. pH 조정은 적절한 량의 NaOH 또는 아세트산의 첨가에 의해 시크너의 첨가 이후에 실행된다. 우레아를 포함하는 그러한 겔에 대하여, 소정 량의 우레아가 각각의 공동용매의 조합 이후에, 그리고 침투제가 첨가되기 이전에, 첨가된다.

투명한 1리터 유리 비이커 내로, '최대 디곡신' 겔 제형이 우선 프로필렌 글리콜 250g을 에탄올 200g 및 물 50g과 (50:40:10 비를 구성하도록) 결합함으로써 준비되었다. 상기 량은 사전-눈금조정된 전자 저울 상에서 정확하게 계량되고, 자기 교반기를 사용하여 지속적으로 혼합된다. 과도한 량의 푸로세미드 및 디곡신이 공동용매 혼합물에 첨가되어, 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두의 포화된 용액이 획득되도록 한다. 비이커는 (임의의 용매 증발을 정지시키기 위하여) 파라필름을 사용하여 즉시 시일링(sealing)되었고, 밤새 실온에서 지속적으로 교반되었다. 그 후, 결과적인 현탁액이 결과적인 포화된 공동용매 혼합물로부터 과도한 푸로세미드 및 디곡신 약물을 분리하기 위하여 20분 동안 25,000rmp으로 원심분리되었다. 결과적인 포화된 용액이 과도한 침투제가 또한 전달되지 않도록 하기 위해 주의되었고 전자 저울 상에 이전에 위치되었던 또 다른 투명한 1리터 비이커 내로 전달되었고, 포화된 용액의 총 중량이 기록되었다. 전자 저울을 사용하여, 총 포화된 용액(w/w)의 8.0% w/w에 대응하는 HPC(히드록시프로피셀룰로오스)가 그 후에 계량되었다.

포화된 공동용매 혼합물이 (오버헤드 교반기를 사용하여), 압설기를 사용하여 강력하게 교반되고 있지만, HFC는 5분의 기간에 걸쳐 천천히 첨가되었다. HFC가 완전히 분리되었다는 것을 확인하는 시각적 조사 이후에, 겔 제형을 포함하는 컨테이너는 혈액 튜브 로테이터 상에 배치되었고, HPC 겔 네트워크가 형성되도록 밤새도록 유지되었다. 결과적인 동질 군의 겔 제형이 획득되었다. 이 절차는 50:20:20:10 프로필렌 글리콜: 에탄올: PEG 400: 물 공동용매 혼합물로 이루어진 겔 제형을 획득하기 위하여 보다 적은 스케일로 반복되었다.

디곡신 및 푸로세미드 앰풀로부터 겔을 제형화하기 위하여, 동일한 량의 디곡신 앰풀(62.5mg/ml) 및 푸로세미드 앰풀(20mg/ml)이 전자 저울 상에서 정확하게 계량되었다. 앰풀을 결합할 때, (디곡신 앰풀만이 에탄올을 포함하기 때문에) 총 에탄올 함량이 감소된다. (디곡신이 푸로세미드와 결합될 때 침전하지 않도록) 이를 보상하기 위하여, 푸로세미드 2g, 에탄올 200μl과 각각 결합되는 디곡신 2g이 또한 첨가되었다. HPC 8% w/w가 다시 첨가되었고, 용액은 상술된 것과 동일한 절차 이후에 겔을 형성하게 되었다.

예 9

시험관내 방출

시험관내 방출 테스트는 국소형 약물 제형의 성능을 검사하기 위하여 통상적으로 사용되는 기술이다. 이는 FDA와 같은 감독 기관에 의해 지시되는 기본적인 요 건이다. 이전에 사용된 방법에서 일부 함정을 제거하는 최근에 개발된 개선된 시험관내 모델을 이용하였다.

확산 실험이 모든 유리 Frant-형 세포(노미널 리셉터 상 볼륨, 3ml)를 사용하여 수행되었다. 나일론 시트 막이 개시 이전에 24 시간 동안 리셉터 매체(적절한 공동용매 혼합물)에 스며들었다. 그 후, 상기 막은 리셉터 유체로부터 꺼내졌고, 표면은 건조되고 리셉터 컴파트먼트(receptor compartment)의 사전-그리스칠된 플랜지 상으로 신중하게 배치된다. 그 후, 도너 챔버가 대응한 리셉터 컴파트먼트 상에 배치되고, 적소에서 핀치 클램핑된다. 마이크로 교반기가 각각의 리셉터 컴파트먼트에 첨가된다. PBS 및 더 점성이 있는 PEG400에 대한 이 기술의 유효성은 용액으로 채워진 리셉터 컴파트먼트에 염료(dye)의 작은 분취량(aliquot)을 적용함으로서 이전에 검증되었다.

첨가된 겔의 량이 도너 챔버의 상부에 도달할 때까지 적절한 도너 캡들 각각 내로 제형을 첨가함으로써 무한한 투여량이 첨가되었다. 그 후, 사전-그리스칠된 유리 커버 슬립이 도너 챔버들 각각 상에 배치되어, 폐색 기밀 시일을 형성한다. 그 후, 리셉터클 컴파트먼트가 적절한 가스제거된 공동용매 혼합물(40:40:23 물:프로필렌 글리콜:우레아, 50:40:10 PG:EtOH:물 또는 10% EtOH/완충된 용액 - 앰풀에 존재하는 것과 동일한 염분 농도)로 채워지고, 세포는 자동으로 온도가 조절되는 물 욕조 내의 다수의 교반기 플레이트 상에 배치되며, 여기서 막의 표면에서의 온도는 32℃로 유지된다. 200μl 샘플이 1, 2, 4, 6, 12 및 24시간에 수집되었고, 적절한 온도-평형화된 공동용매 혼합물로 교체되었다. 각각의 처리에 대해 총 6개의 복제가 실행되었다.

예 10

HPLC 분석

2개의 활동에 대한 분리 및 검출을 위한 이중 HPLC-UV 분석 방법이 개발되었다. HPLC 분석은 Phenomenex Kingsorb 5μm C18 Column(250 x 4.6mm)가 구비된 휴렛 팩커드 1100 HPLC 자동화된 시스템을 사용하여 수행된다. 이동 상태는 40:30:30 물:MeOH:MECN으로 이루어진다. UV 검출기는 200nm로 설정되었고, 20μl 주입 볼륨이 사용되었다. 흐름 속도는 1ml min^-1이었고, 실행 시간은 10분이었으며, 푸로세미드의 유지 시간은 전형적으로 3.2분이었고, 디곡신의 유지 시간은 5.4분이었다. 표준 눈금 곡선이 용매 또는 공동용매 혼합물의 상대적인 동일한 비율을 포함하는 표준 용액(범위 0.1, 1, 10, 20, 40, 80 및 100μg ml^-1)로부터 구성되었다. F(2.6분에서 관측된 제1 피크) 및 D(5.2분에서 관측된 제2 피크)의 분리 및 검출에 대한 이중 HPLC 분석표를 나타내는 크로마토그래프가 획득되었다. 이 크로마토그래프는 D 및 F(둘 모두 50μg ml^-1에서)를 포함하는 결합된 표준 용액의 주입 이후에 획득되었다.

결과가 도8 내지 14에 도시되어 있다.

(도8 내지 11로부터 취해진) 각각의 겔로부터 생성된 시험관내 방출 데이터의 요약

(도12 내지 14로부터 취해진) 각각의 겔로부터 생성된 시험관내 방출 데이터의 요약

데이터 프로세싱

Q24: 이 값은 24 시간에 리셉터 상(receptor phase)으로 방출되었던 단위 면적당 활성제의 총 농도(μg ml^-2)이다.

플럭스: 이것은 시간당 및 단위 면적당 방출되었단 활성제의 농도이다(μg cm h-1). Q24를 24로 나눔으로써 계산된다.

방출 속도: 이것은 시간(시간) 플롯의 제곱근으로부터 얻어진 직선의 기울기(μg cm2 h0.5)이다. R2 값이 또한 라인 희소성(line rarity)을 나타내는 것으로 보고된다.

% 적용된 투여량 리셉터 상으로 존재하는 활성제의 량이 적용된 투여량의 퍼센티지로서 계산된다. 도우너 상이 고정된 2g의 겔을 포함한다고 가정한다.

인간의 피부를 통한 국소형 크림, 겔, 연고의 경피적 침투를 조사하는 시험관내 연구가 전형적으로 인산 완충 식염수(PBS) 리셉터 상을 사용한다는 것이 일상적인 일이 되었다. PBS 리셉터 상은 진피(dermis) 내 및 아래의 것들에 유사한 생리적 용질 조건을 제공하도록 디자인된다. 많은 다른 상이한 유형의 리셉터 상이 또한 시험관내 연구 동안 사용되며, 하나의 개별적인 연구는 HBS, HEPES 완충물(1.5mM CaCl₂), HEPES 완충물(10% 우아혈청) 및 트리즈마 기(trizma base) 45mM(40mM 나트륨 콜레이트(sodium cholate)인 4개의 상이한 리셉터 상을 사용한다.

그러나, 시험관내 연구의 주요 목적은 국소형 제형으로부터 활성제의 방출 시에 양적인 데이터를 획득하는 것이다.

예시된 겔들 둘 모두가 시험관내 시스템에서 개선된 것을 사용하였고, 여기서 국소형 제형 내에 포함된 공동용매 및 리셉터 상의 내용물 둘 모두가 40:40:20 물:프로필렌 글리콜:우레아 겔 혼합물이다. 종래의 인산 완충 식염수(PBS) 대신에, 리셉터 상으로서 40:40:20 겔 혼합물을 사용함으로써, 제형 내의 첨가제의 공동-용리(co-elution)가 최소가 되어, 도너로부터 푸로세미드 및 디곡신의 순수 전위(net translocation)만을 허용한다. 세포 조립 이전에 막을 이 혼합물 내에 담그면 순수 이동만이 활성이 될 것이다.

리셉터 상에서 관측된 푸로세미드 및 디곡신의 최대 농도는 각각 (이전의 용해도 연구로부터 결정된) 포화된 용해도 둘 모두보다 상당히 더 낮은 543.60μg ml^-1, 42.47μg ml^-1이었다. 그러므로, 실험 전체에 걸쳐 싱크 조건(sink condition)이 유지되었다.

시간(시간) 제곱근으로서 플롯팅(plotting)될 때, 푸로세미드 및 디곡신에 대해 획득된 방출 프로파일은 우수한 선형 타이(tie)를 나타낸다. 계산된 R₂ 값은 1:14 겔로부터 pH 5, 7 및 9에서 푸로세미드에 대해 0.9993, 0.9974, 0.9993이고, 1:14겔로부터 pH 5, 7 및 9에서 디곡신에 대해 0.9836, 0.9961, 0.9742이며, 1:1 겔로부터 푸로세미드 및 디곡신 각각에 대해 0.9844 및 0.9981이었다. 이것은 선택된 방출 막이 제형 둘 모두에 대해 최소/제로의 속도 제한 효과를 발휘한다는 것을 제안한다.

pH 를 변화시키는 것에 따른 방출 특성의 차이

푸로세미드 및 디곡신 둘 모두에 대하여, 겔의 pH가 증가함에 따라, 방출 속도에서 순위 감소(rank order reduction)가 존재하였다. pH 5에서의 푸로세미드의 방출 속도는 124.51μg cm^-2h⁰ ^.5이지만, pH 9에서는 거의 3배 감소인 43.389μg cm^-2h^0.5로 감소되었다. 방출 속도의 감소는 디곡신의 경우에 더 많은데, pH 5에서의 디곡신의 방출 속도는 10.18μg cm^-2h⁰ ^.5이었지만, pH 9에서는 12배 감소인 0.86μg cm^{- 2}h^0.5으로 감소되었다.

디곡신이 중성 침투제라고 가정하면, pH가 증가함에 따라 감소된 방출이 관측되는 것은 (겔의 증점 특성이 pH의 변화를 통해 영향을 받을 수 있다면) 겔의 물리화학적 특성으로 인한 것이다. 푸로세미드는 화학적으로 양친매성이며, 이는 pH의 변화에 따른 방출 속도의 더 적은 변화를 설명할 수 있다.

이러한 결과는 침투제 둘 모두에 대한 최적의 동시적인 방출 특성을 획득하도록 pH 5에서의 겔을 제형화하는 것을 지원한다.

상이한 침투제 화학량론의 겔들 사이의 방출 특성의 차이

시험관내 방출 테스트는 푸로세미드 및 디곡신의 상대적인 화학량론에 의해 달라지는 2개의 겔 사이의 차이를 또한 조사하도록 확장되었다. 제1 겔은 디곡신:푸로세미드의 1:1 몰비를 갖는 '원리 1'에서 설명된 바와 같이 제형화되었다. 제2 겔은 디곡신:푸로세미드의 1:14 몰비를 갖는 '원리 2'에 따라 제형화되었다. 겔 둘 모두는 7의 pH에서 제형화되었다. 겔로부터의 활성제 둘 모두의 방출에서의 상당한 차이가 명백해졌다.

1:14 겔은 푸로세미드에 대해 77.482μg cm^-2h⁰ ^.5 및 430μg cm^-2h⁰ ^.5의 방출 속도를 발생시켰다. 그러나, 1:1 겔에 의해 생성된 방출 속도는 푸로세미드에 대해 상당히 더 낮은 7.18μg cm^-2h⁰ ^.5이고 디곡신에 대해 또한 더 낮은 3.48μg cm^-2h⁰ ^.5이다. 이것은 각각 10.8배 및 1.2배 감소이다. 이 관측은 2개의 제형의 적용된 투여량으로 인한 것이다.

24시간에서, 개정된 세포 제형 둘 모두로부터의 푸로세미드 및 디곡신 방출량은 앰풀 겔 제형으로부터 방출된 대응하는 량보다 상당히 더 높았다. 개정된 제형은 24시간에서 유사한 량이 디곡신에 의해 방출된다는 것을 나타냈지만, HPC 증점된 겔 제형은 울트레즈 제형보다 거의 1.5배 더 많은 푸로세미드를 방출하였다.

3개의 겔에 대한 디곡신 방출 속도를 관측할 때, 울트레즈 제형은 최고 방출 속도인 274μg cm^-2h⁰ ^.5를 나타내었고, HPC 제형이 유사한 방출 속도인 245μg cm^-2h^0.5로 그 다음에 오지만, 앰풀 겔 제형은 상당히 더 낮은 방출 속도인 8.1μg cm^-2h^0.5이 획득되었다.

3개의 겔로부터의 푸로세미드 방출 속도에 관하여, 최고 방출 속도는 2673μg cm^-2h⁰ ^.5로 HPC 제형으로부터 관측되었고, 울트레즈 제형으로부터 생성된 상당히 더 낮은 방출 속도인 1527μg cm^-2h⁰ ^. ⁵이 그 다음에 오며, 또한 상당히 더 낮은 방출 속도가 앰풀 제형으로부터 획득되었다.

겔 각각에 의해 표시된 전체 방출 특성에 관하여, HPC 및 울트레즈 증점된 제형으로부터의 디곡신에 대한 방출 속도가 유사하지만, 푸로세미드 방출 속도가 HPC에서 상당히 더 높았다면, 전체의 HPC 증점된 겔이 울트레즈 겔보다 더 양호하다. 앰풀 겔 제형의 성능은 개정된 겔 제형 둘 모두와 비교할 때, 상당히 불량하다.

이러한 제형들로부터 푸로세미드 및 디곡신의 동시-방출에 대한 가장 바람직 한 제형이 8% HPC로 증점된 50:40:10 공동용매 혼합물에서의 pH 5의 1:14 디곡신:푸로세미드라는 것을 이러한 결과로부터 결론지을 수 있다.

공동용매 혼합물의 이들의 상대적인 각질용해 활동 면에서의 차이로 인하여, 어느 제형이 인간의 굳은 피부를 통해 가장 많은 량의 디곡신 및 푸로세미드를 전달할지를 결정하기 위하여 시험관내 침투 실험을 행하는 것이 중요하다.

시험관내 '굳은 피부' 침투

예 11

확산 세포를 사용하여 시험관내 침투 데이터를 획득하는 것이 국소형 약물 제형의 성능을 조사하는데 통상적으로 사용되는 기술이다.

침투 실험은 도너 및 리셉터 상 사이의 굳은 발바닥 피부를 포함하는 모든 유리 프란즈-형 세포(Franz-type cell)를 사용하여 수행되었다. 사용되는 커스터마이징된 '프란즈' 세포에 맞추기 위하여 대략 0.6cm 직경의 굳은살 커팅(callous coutting)이 필요로 되었다. 결과적으로, 겔 치료 당 5개의 세포를 사용하는 시험관내 침투 연구가 행해졌고, 총 15개의 세포만이 동시에 움직인다. 각각의 리셉터 컴파트먼트에 마이크로 교반기가 첨가되었다. 무한한 투여량의 겔(~1g)이 각각에서 리셉터 상으로서 사용되는 주사기 및 PEG400을 통하여 각각의 도너에 첨가됨으로써, 유체역학 경계 효과 및 조직 스웰링 효과를 제한하는 적절한 '싱크' 조건을 가능하게 하였다. 적용된 겔은 유리 커버 슬립으로 폐색되고, 세포는 32℃의 피부 온도를 유지하는, 자동으로 온도 조절되는 물 욕조 내에서 교반된다. 200μl 샘플리 1, 3, 6, 12, 24, 36, 48, 72, 96, 120 및 144시간(총 6일)에 수집되었고, 온도-평 형 리셉터 상으로 교체되었다. 각각의 세포에 대하여 총 5개의 복제가 실행되었다. 모든 샘플은HPLC에 의해 즉시 분석되었다.

최초 시험관내 침투 시도가 다음의 원형 겔에 대해 행해졌다:

1) 원형 겔

40:40:20(PG:물:우레아) pH 5(1.5% 카보머 - 981NF)에서의 1:14(디곡신:푸로세미드)

다음의 개정된 겔에 대해 후속 시험관내 침투 시도가 행해졌다:

2) 최대 디곡신 겔

50:40:10(PG:EtOH:물) pH 5(8% HPC)에서의 1:14(디곡신:푸로세미드)

3) 최대 푸로세미드 (최적의 디곡신 겔)

50:20:20:10(PG:EtOH:PEG400:물) pH 5(8% HPC)에서의 1:14(디곡신:푸로세미드)

4) 디곡신 및 푸로세미드 앰풀 겔

디곡신 앰풀로부터 취해진 용액 2g이 푸로세미드로부터 취해진 용액 2g과 결합되었고, 에탄올 200μl가 첨가되었다. 다시, HPC 8% w/w가 겔을 증점하기 위하여 첨가되었다.

데이터 프로세싱

각각의 겔에 대한 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두의 정상 상태 플럭스가 누적 침투 프로파일의 선형 섹션의 기울기로부터 계산되었다. 침투제가 (각각의 침투제에 대한 MDL에 따라) 리셉터 상에서 처음으로 검출된 지점으로부터 파과 시 간(breakthrough time)이 측정된다. 래그 시간(lag time)은 X-축(시간)에 대해 침투된 누적 량(정상 상태 플럭스)의 선형 섹션을 보간함으로써 계산되었다.

결과(원형 겔)

도16 내지 20은 무한한 투여량의 겔로부터 굳은 발바닥 피부를 통한 푸로세미드 및 디곡신에 대한 침투 프로파일을 도시한다.

테이블 1 40:40:20 원형 겔로부터 취해진 데이터의 요약

결론(원형 겔)

5.5 pH에서 상기 제형이 푸로세미드 및 디곡신에 대해 가장 큰 방출 속도를 나타낸다는 것이 이전의 연구에서 입증되었다. 이 연구는 굳은 피부를 통한 침투를 통하여 약물 둘 모두를 전달하기 위해 제형의 용량을 평가하였다.

디곡신에 대한 파과 시간은 대략 36시간이었고, 푸로세미드에 대한 파과 시간은 대략 6시간이었다. 이러한 차이가 여러 가지 것들:

1) 제형에서 푸로세미드의 농도(이에 따른 구동력)가 비교적 더 높다는 것

2) 디곡신에서 더 약한 발색단(chromophore)이 존재하는 것으로 인해 푸로세미드(3ng)에 비하여 디곡신(88ng)에 대한 검출 한도가 더 낮다는 것

3) 침투제 분자 중량에서의 상당한 차이(푸로세미드: 330.7 디곡신: 780.9)

4) 굳은 막의 배리어 특성을 반영한다고 가정된다.

피부의 물리적인 특성 면에서, 이 연구가 0.92mm의 평균 두께를 갖는 비교적 두꺼운 인간의 굳은 발바닥 피부를 사용한다는 것이 명백하다. 이것은 겔 제형으로부터 2개의 침투제의 침투를 연구하는데 있어서 (HPV를 둘러싸는 실제 사마귀 병변 조직에 대한) 최선의 가능한 대안이라고 여겨진다. 이전의 '스웰링 연구'에서 알 수 있는 바와 같이, 이 연구에서 사용된 조직은 아마도 굳은 발바닥 피부 내의 각질의 수화작용 및 결과적인 스웰링으로 인하여, 질량을 증가시키는 것으로 다시 나타났다. 중량의 평균 % 증가는 43%인 것으로 나타났다.

전체적으로, 푸로세미드는 굳은 발바닥 피부를 통한 전형적인 침투 프로파일을 나타낸다(도16). 1차 키네틱스(first order kinetics)가 120 및 312 시간 사이에서 관측되었고, 이로부터, 13.83±1.18μg cm^-2h^-1의 플럭스의 정상 상태가 계산되었다. 디곡신에 대하여, 전형적인 침투 프로파일이 또한 관측되었다. 정상 상태는 1.14±0.28μg cm^-2h^-1의 플럭스가 계산되는 144 시간에 달성되었다(도17). 푸로세미드 및 디곡신에 대한 상대적인 정상 상태 플럭스는 침투제의 물리적 특성 뿐만 아니라, 제형의 상대적인 각질용해 효과에 기인할 수 있다.

도19는 약물 둘 모두의 몰 침투를 도시한다. 푸로세미드 및 디곡신의 비율(대략 10:1)이 제형에서 발견된 약물의 몰비(14:1)로부터 크게 상이하지는 않다는 것을 알 수 있다. 겔 내의 더 높은 농도의 푸로세미드는 또한 침투된 약물의 상대적인 퍼센티지에서 반영된다(도18). 푸로세미드가 디곡신에 비해 상당히 더 낮은 분자 중량을 가진다면, 푸로세미드가 더 많이 침투할 것이라는 것이 예상된다. 이 것은 계산된 명백한 정상 상태 플럭스 값에서 반영된다(테이블 1). 그러나, 이 효과는 침투제의 물리적 특성에 기인할 뿐만 아니라, 제형의 각질용해 효과에 의해 생성된 상대적인 (아마도 일시적인) 구멍 크기와 관련될 수 있다. 생성된 구멍의 특정 직경/3-차원 형상은 침투 분사 중량과 관련하여 디곡신보다는 오히려 푸로세미드의 침투를 더 용이하게 할 수 있다.

pH 5에서 1.5% 카보폴 981NF로 증점된 물, 프로필렌 글리콜 및 우레아(40:40:20)를 포함하는 겔 제형이 굳은 피부를 통해 푸로세미드 및 디곡신을 성공적으로 전달할 것이라는 것을 이러한 결과로부터 결론지을 수 있다. 이러한 결과는 이와 같은 겔의 국소형 적용이 유두종 바이러스를 제어하는데 있어서 유용하다는 것을 제안한다.

이 연구로부터의 결과는 이 특정 겔 제형 내에 포함된 푸로세미드 및 디곡신이 인간의 굳은 발바닥 피부를 통하여 전달될 수 있고, HPV와 관련된 피부 조건의 치료에 유용하다는 명확한 증거를 제공한다.

결과 - 개정된 겔

도21 및 22는 3개의 상이한 겔 제형 각각의 대략 1g으로부터 굳은 발바닥 피부를 통한, 푸로세미드 및 디곡신 둘 모두에 대한 누적 침투 프로파일을 도시한다.

도23 및 24는 원형 겔 및 개정된 최대 디곡신 겔로부터 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두의 누적 침투 사이의 직접적인 비교를 제공한다.

테이블 2a) '최대' 디곡신 겔 제형에 대한 침투 데이터의 요약

테이블 2b) '최대' 푸로세미드 겔 제형에 대한 침투 데이터의 요약

테이블 2c) 디곡신/푸로세미드 겔 제형에 대한 침투 데이터의 요약

결론(개정된 겔)

이 연구는 인간의 굳은 피부를 통하여 푸로세미드 및 디곡신 둘 모두를 동시에 전달하기 위하여 3개의 (개정된) 겔 제형의 능력을 평가한다. 굳은 피부를 통해 활성제를 전달하는 각종 겔의 능력에서의 잠재적인 차이를 강조하기 위하여, 원형 겔 제형에 대한, 개정된 겔 제형에 의해 생성된 침투 데이터의 비교가 행해졌다.

연구된 3개의 제형으로부터, 인간의 굳은 피부를 통한 푸로세미드 및 디곡신의 최대 전달은 '최대' 디곡신 겔 제형으로부터 관측되었고, 그 다음은 최대 푸로세미드 겔에서 관측되었으며, 최소 푸로세미드 및 디곡신 전달은 디곡신/푸로세미드 앰풀 겔 제형으로부터 관측되었다. 도21 및 22를 참조하라.

'최대' 디곡신 겔 대 원형 겔로부터 전달된 디곡신 및 푸로세미드의 량을 비교할 때, 상당한 차이가 관측될 수 있다. '최대' 디곡신 겔에 대하여, 144 시간에, 푸로세미드 620μg cm^-2 및 디곡신 101μg cm^-2이 침투되었다. 그러나, 원형 겔에 대하여, 144 시간에, 단지 푸로세미드 574μg cm^-2 및 디곡신 30μg cm^-2이 침투되었는데, 이는 1.1 및 3.36배 각각 감소한 것이다.

부가적으로, 원래 겔 원형에 대하여, 디곡신에 대한 파과 시간은 대략 36 시간이었고, 푸로세미드에 대한 파과 시간은 대략 6 시간이었다(테이블 1 참조). 그러나, '최대' 디곡신 겔 제형으로부터 획득된 파과 시간은 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두에 대해 1시간에서 상당히 빨라졌다.

이러한 차이는 여러 가지 것:

1) 주로 제형 내에 존재하는 디곡신 및 푸로세미드의 농도(이에 따른 구동력)가 비교적 더 높다는 것

2) 디곡신에서 더 약한 발색단이 존재하는 것으로 인해 푸로세미드(3ng)에 비하여 디곡신(880ng)에 대한 검출 한도가 더 낮다는 것

3) 침투제 분자 중량에서의 상당한 차이(푸로세미드: 330.7 디곡신: 7809)

4) 굳은 막의 배리어 특성을 반영한다고 가정된다.

피부의 물리적 특성 면에서, 이 연구가 비교적 두꺼운 인간의 굳은 발바닥 피부를 사용한다는 것이 명백하다. 이것은 겔 제형으로부터 2개의 침투제의 침투를 연구하는데 있어서 (HPV를 둘러싸는 실제 사마귀 병변 조직에 대한) 최선의 가능한 대안이라고 여겨진다.

푸로세미드 및 디곡신은 굳은 발바닥 피부(도2)를 통한 '전형적인' 침투 프로파일을 나타낸다(도2). '최대' 디곡신 겔 제형에 대하여, 1차 키네틱스이 72 및 144 시간 사이에서 푸로세미드에 대해 관측되었고, 48 및 120 시간 사이에서 디곡신에 대해 관측되었으며, 이로부터 6.759 및 1.015μg cm^-2hr^-1의 정상 상태의 플럭스가 계산되었다.

8% HPC로 증점된 50:40:10 프로필렌 글리콜:에탄올:물을 포함하는 겔 제형이 인간의 굳은 피부를 통한 푸로세미드 및 디곡신의 동시적인 전달을 가능하게 한다는 것을 이러한 결과로부터 결론지을 수 있다. 개정된 '최대' 디곡신 겔 제형으로부터 생성된 침투 데이터는 원래 원형 제형과 비교할 때, 침투제 둘 모두에 대한 상대적인 침투 특성에서의 상당한 개선을 강조한다. 이러한 결과는 이와 같은 겔의 국소적인 적용이 유두종 바이러스를 제어하는데 있어서 유용하다는 것을 제안한다.

결과는 이 특정 겔 제형에 포함된 푸로세미드 및 디곡신이 인간의 굳은 피부를 통해 전달될 수 있고 HPV와 관련된 피부 조건의 치료에 유용하다는 명확한 증거를 제공한다.

상기 실시예 이외에, 다음의 부가적인 예는 다른 겔 제형이 준비되고 사용될 수 있는 방법을 나타낸다.

상술된 바와 같이, 이 상황에서 2개의 특히 효율적인 약물은 디곡신 및 푸로세미드인 것으로 제시되었고, 이들의 50% 플라크 억제 농도(plaque inhibitory concentration)(IC50)는 아래에 제공되어 있다(테이블 A). IC50은 상이한 약물을 비교할 때 유용하고 편리한 항바이러스성 약물 효능의 종종 인용되는 인덱스이다. 개별적으로 사용될 때, 디곡신 및 푸로세미드 둘 모두는 광범위한 바이러스의 복제를 명확하게 억제한다.

테이블 A

그러나, 항바이러스성 활동의 대안적인 지수는 이러한 약물의 실제 효능을 입증한다. 우리의 소위 이온 항바이러스성 치료(ionic contraviral therpy)(ICVT)가 비전염성 바이러스 단백질의 분석을 허용하고, 이러한 단백질이 부분적으로 IC 50 디터미네이션(determination)의 기초를 형성하는 세포 병리(세포 병변 효과)의 변화를 초래하기 때문에, 이러한 약물의 효능은 IC50 디터미네이션에 의해 과소평가된다. 그 대신에, 대안적인 인덱스가 감염된 세포에 의해 생성된 전염성 바이러스 입자의 총수를 측정한다.

예를 들어, 디곡신을 사용하면, 40% 및 60% 사이의 단순 포진 바이러스 플라크 생성이 억제되는데, 즉, IC50 효과(그래프의 상부 라인; 도25)는 전염성 바이러 스 입자 생성의 90% 및 99% 사이의 억제에 대응한다(그래프의 하부 라인; 도25).

디곡신 및 푸로세미드를 개별적으로 사용하면, 이들의 IC50에서 각각, 또 다른 바이러스, 즉 고양이 포진바이러스에 대하여, 바이러스 복제가 완전히 억제된다(테이블 B). 전염성 바이러스의 생성이 98.5%(디곡신) 및 99.5%(푸로세미드)만큼 감소되지만, 저 레벨의 바이러스 복제: 즉, 1.5%(푸로세미드) 및 0.5%(디곡신)가 유지된다.

테이블 B

그러나, 약물을 조합하여 사용함으로써 이들의 잔여물, 저 레벨의 바이러스 복제를 효율적으로 제거하는 것이 또한 가능하다. 조합된 항바이러스 효과는 약물이 개별적으로 적용될 때 더 크다; 약물은 시너지적이다(테이블 C)

테이블 C

따라서, 바이러스 복제는 99.99999%만큼 감소된다.

다른 바이러스, 예를 들어, 대상 포진 바이러스(VZV)의 복제가 또한 약물을 조합하여 사용함으로써 가장 효율적으로 억제된다. 그러나, VZV가 고도로 세포와 관련된 바이러스이기 때문에, 포함된 전염성 VZV 입자의 정확한 수를 정량화하는 것은 불가능하다. 대신에, 바이러스 플라크 형성에 대한 개별적이고 결합된 IC50의 영향이 비교된다(테이블 D).

푸로세미드 및 디곡신 각각은 이들의 각각의 IC50에서, 약 50%만큼 예상되는 바와 같이 VZV 플라크 형성을 억제한다; 푸로세미드 33/61 플라크 및 디곡신 21/61 플라크. 그러나, 약물 둘 모두가 이들의 IC50에서 조합되어 적용될 때, VZV 플라크 형성은 저 감염 정도(저 MOI)에서 완전히 억제되었다. 실제로, VZV 플라크 형성은 테스트 시스템에서 100배 감염 바이러스가 존재하였을 때, 완전히 억제되었다; 고 MOI. 이 효능 인덱스를 사용하여, 약물은 조합하여 적용될 때 100 이상의 효능이 있었다.

테이블 D

부분적인 IC50들의 조합된 효과의 비교는 2개의 약물 단독, 및 조합의 상대적인 효능을 비교하는 또 다른 인덱스를 제공한다. 이하의 예에서, 아데노바이러스를 사용하면, 어느 한 약물 단독의 IC50과 동일한 항바이러스 효과를 도출하는 것 은, 조합하여 사용할 때 각각의 약물의 IC50의 1/4만으로도 충분하다(도26).

동일한 현상이 또 다른 강력한 세포-관련 바이러스인 거대세포 바이러스(CMV)에 의해서도 유지된다; 2개의 약물이 조합되어 사용될 때, 어느 한 약물 단독의 IC50과 동일한 항바이러스 효과를 도출하는 것은, 각각의 약물의 1/3만으로도 충분하다(도27).

요약하면, 디곡신 및 푸로세미드는 ICVT에 적용될 때 시너지적이다. 항바이러스 활동(ICVT)의 특정 메커니즘으로 인하여, 표준 IC50 인덱스는 이 인덱스를 사용하여 증가된 조합 효과가 명백하게 유지될지라도, 실제 약물 효능을 과소평가한다.

가장 현저하게, 전염성 바이러스의 생성은 약물이 조합되어 사용될 때, 99.99999%만큼 감소된다.

상대적인 용해도 및 디곡신 , 디기톡신 및 라녹신(IV)의 ICVT -효능

1) ICVT 치료, 상대적인 ICVT-활동(이온 항-바이러스성 치료-활동)에서 이러한 종류의 화합물의 적합성에 관한 부가적인 증거를 제공하기 위하여 일련의 부가적인 실험이 착수되었다. 디곡신 및 디기톡신의 용액이 70% 에탄올 내의 ml당 250μg의 농도로 파우더로부터 준비되었고, 이들의 ICVT-활동이'표준' 디곡신 제제; 즉, 10% 에탄올 내의 ml 당 250μg로 공급되는 IV 라녹신과 비교되었다.

파우더 및 라녹신(원)(도27)으로부터 준비된 디곡신의 ID₅₀ 값들은 매우 유사하였는데, 즉, ml당 60ng이었다. 디기톡신(정사각형)은 ml당 30ng의 ID50으로 마 진이 더 양호한 것으로 나타났다.

2) 상대적인 용해도

디곡신 및 디기톡신의 포화된 용액이 90% 에탄올 내에서 준비되었고, 이들의 ICVT-활동이 '표준' 디곡신 제제; 즉, 라녹신과 비교되었다.

파우더로부터 준비된 디곡신 용액은 라녹신(원)(도28)만큼 효과적이었다.

디기톡신(정사각형)이 디곡신보다 더 효과적이었다.

디기톡신은 디곡신보다 가용성이 더 높다; 90% 에탄올 내의 포화된 용액(ml당 17.5mg)의 제제는 에탄올의 '안전한-어큘러-농도(safe-ocular-concentration)' (2.5%)에서의 ml당 486μg의 최대 농도로 사용하는 것을 가능하게 할 것이다.

디곡신은 이전에 ml당 62.5μg의 농도로 사용되었다.

ml당 486μg은 대략 8배 더 농축된 것이며, 디기톡신이 실제로 2배의 효능인 경우, 효과적으로 16 × 이전 '투여량'인 것을 사용하는 것이 가능할 수 있다. 이러한 더 높은 농도에서의 독성은 물론 조사될 필요가 있을 것이다.

3) 상대적인 유효성

디곡신 및 디기톡신의 신선한 용액이 70% 에탄올 내의 ml당 250μg의 농도로 파우더로부터 준비되었고, 이들의 ICVT-활동이 다시 이들의 상대적인 효능을 더 조사하기 위하여 '표준' 디곡신 제제; 즉, IV 라녹신과 비교되었다. 결과가 도29에 도시되어 있다.

상기 예 이외에, 다음의 부가적인 실시예가 시험관내 수도 바이러스 복제 및 MRC5 세포 복제 및 대사에 대한 개별적이거나 조합된 푸로세미드 및 디곡신의 효과 를 입증한다.

1.1. MRC5

MRC5 세포(Jacobs 등 1970), 즉 인간의 태아 폐 조직으로부터 도출된 라인이 BioWhittaker로부터 획득되었다. 세포는 10% (v/v) 우태아 혈청(Life Technologies Ltd)으로 보충된 이글스 미디엄(Eagles medium)(Life Technologies Ltd)에서 증식되었다. MRC5 세포는 대상 포진 바이러스(VZV) 스톡 생성 및 VZV 복제에 대한 이온 항-바이러스의 효과를 조사하는 실험에 사용되었다.

1.2. 세포 머펄러지( Cell morphology )

정상적인 세포를 허용하는 최대 약물 농도는 72 시간 동안 약물-포함 매체 내의 서브-융합성 배양(sub-confluent culture)의 인큐베이션(incubation)에 의해 결정된다. 세포는 위상차 현미경을 직접 사용하여 조사되었다.

1.3. 세포 복제

세포 복제를 허용하는 최대 약물 농도가 유사하게 결정되었다; 72 시간 후, 세포는 채취되고 카운팅되었다. 정상적인 세포 복제를 나타내는 10배의 세포 수 증가가 이루어졌다(72 시간에서 최소 3개의 개체수 배가).

1.4. MTT ( 디메틸디아졸 디페닐테트라졸리움 브로마이드) 분석

항바이러스성 방법 및 프로토콜(Kinchington, 200)에서 설명된 바와 같이 MTT 분석이 수행되었다.

1.5. 대상 포진 바이러스( VZV )

VZV의 Ellen 스트레인(strain)이 American Type Culture Collection으로부터 획득되었다.

1.6. VZV 단층 플라크 억제 분석

VZV 감염된 세포는 72 시간 동안, 또는 바이러스 cpe가 최적일 때까지, 감염된 세포 서스펜션 및 인큐베이션(cell suspension and incubation)의 5ml의 이나큐레이션(innoculation)에 의해 5cm 페트리접시에서 MRC5 세포의 미리형성된 단층 상에서 분석되었다. 세포는 포르몰-염류 및 스테인드 위드카르볼 푹신(stained withcarbol fuchsin)으로 고정되었다.

2. 결과

2.1. 시험관내 VZV 복제에 대한 푸로세미드의 효과

1 mg/ml 농도의 푸로세미드는 MCR 세포에 의해 매우 양호한 내성이 있었다; 세포 머펄러지 및 복제된 세포에 부작용이 존재하지 않았다. 푸로세미드는 이 농도에서 50%만큼 VZV 플라크 형성을 억제하였다.

푸로세미드 ID 50; 1.0 mg/ml.[테이블 E]

VZV 복제는 2.0 mg/ml 농도의 푸로세미드에 의해 완전히 억제되었다.

2.2. 시험관내 VZV 복제에 대한 디곡신의 효과

0.05 μg/ml 농도의 디곡신이 MRC5 세포에 의해 매우 양호한 내성이 있었다; 세포 머펄러지 및 복제된 세포에 부작용이 존재하지 않았다. 디곡신은 이 농도에서 50%만큼 VZV 플라크 형성을 억제하였다.

디곡신 ID; 0.05μg/ml.[테이블 E]

VZV 복제는 0.1 μg/ml 농도의 디곡신에 의해 완전히 억제되었다.

2.3. 시험관내 VZV 복제에 대한 푸로세미드 및 디곡신의 효과

VZV 복제는 조합된 푸로세미드 및 디곡신에 의하여 이들의 개별적인 ID 50 농도에서 완전히 억제되었다[테이블 E]. 조합된 투여량은 MCR5 세포에 의해 동등하게 양호한 내성이 있었다; 세포 머펄러지 및 복제된 세포에 부작용이 존재하지 않았다.

시험관내 대상 포진 바이러스 복제에 대한 개별적 및 조합된 푸로세미드 및 디곡신의 영향 [테이블 E]

NB. 감염인 경우 인접한 다수들 사이에 10배의 차이가 존재한다(MOI)

테이블 E

2.4. MRC5 세포 복제에 대한 푸로세미드의 효과

VZV ID50과 동일한 농도인 1.0 mg/ml 농도의 푸로세미드가 존재 시에 감염되지 않은 MRC5 세포가 정상적인 수량(normal yield)으로 복제되었다.

2.5. MRC5 세포 복제에 대한 디곡신의 효과

VZV ID50과 동일한 농도인 0.05 μg/ml 농도의 디곡신이 존재 시에 감염되지 않은 MRC5 세포가 정상적인 수량으로 복제되었다.

2.6. MRC5 세포 복제에 대한 푸로세미드 및 디곡신의 효과

푸로세미드 및 디곡신 둘 모두가 존재 시에 이들의 VZV ID50 농도에서 감염되지 않은 MRC5 세포가 정상적인 수량으로는 아닐지라도, 복제되었다. 이러한 농도에서, VZV 복제는 완전히 억제되었다.

2.7. MRC5 세포 대사에 대한 푸로세미드 및 디곡신의 효과

MRC5 세포 대사에 대한 푸로세미드 및 디곡신의 효과가 MTT 분석을 사용하여 측정되었다. 푸로세미드 및 디곡신 중 하나로 이들의 VZV ID50농도에서 인큐베이팅된 감염되지 않은 세포에서 정상적인 레벨의 대사가 존재하였다. 푸로세미드 및 디곡신 둘 모두로 이들의 VZV ID50 농도에서 인큐베이팅된 감염되지 않은 세포에서 정상적인 대사가 존재하였다. 조합된 이들의 농도에서, VZV 복제는 완전히 억제되었다(2.3).

상기 예 이외에, 다음의 부가적인 실시예는 대안적인 이뇨제 및 강심 배당체의 효능을 입증한다.

티아지드(히드로클로로티아지드 및 메톨라존), 술포닐우레아(톨부타미드), 술폰아미드(푸로세미드, 아세타졸아미드, 부메타니다, 토라세미드 및 에타크릴산) 및 K 보존성 이뇨제(아밀로리드)의 예가 ICVT 활성에 대해 테스트되었다. 강심 배당체 디곡신, 디기톡신, 라녹신 및 스트로판틴 G가 또한 테스트되었다.

단순 포진 바이러스(HSV)를 사용하면, 50% 플라크 억제 투여량(1D50)이 표준 플라크 억제 분석을 사용하여 설정되었다. 다양한 용매가 테스트를 용이하게 하기 위해 필요로 되었고, 이러한 용매는 종종 이들의 농도에 따라, 조직 배양에 해로웠다. 일부 화합물은 효능 ICVT 활동(푸로세미드, 디곡신, 라녹신 및 디기톡신)을 도출하였고, 높은 희석도에서 활성이 되었다; 용매 독성이 배제되는 실험 조건.

다른 화합물은 단지 '경계선' CVI 활동만을 도출하였다. 이러한 화합물(아세타졸아미드, 톨부타미드 및 히드로키오로디아지드)가 또한 동일한 테스트 시스템(즉, 플라크 억제 분석)에서 대안적인 용매를 사용하여 테스트되었고, 다른 것(푸메타니드, 토라세미드, 톨부타미드 및 히드로클로디아티드)이 바이러스 수량에 대한 효과가 결정되었던 ICVT 활동에 대한 더 민감한 테스트로 테스트되었다. 바이러스 수량에 대한 강심 배당체 디곡신 및 스트로판틴의 효과가 또한 이 분석에서 테스트되었다.

티아지드

히드로키오로디아지드( hydrochiorothiazide )

용매: 에탄올 10% 5 mg/ml

HSV 플라크 1D50 네거티브 @ 2.5 mg/ml -

용매: 수성 NaOH 1% 10 mg/ml

HSV 플라크 1D50 400 μg/ml 경계선 +/

HSV 수량이 600 μg/ml에서 제로로 감소됨

메톨라존

용매: PEG 10 mg/ml -

용매: PG 0 mg/ml -

술포닐우레아

톨부타미드

용매: 수성 NaOH 1% 10 mg/ml

HSV 플라크 ID50 500 μg/ml 경계선 +/

용매: PEG 10 mg/ml

HSV 플라크 1D50 500 μg/ml 경계선 +/

HSV 수량이 300 μg/ml에서 제로로 감소됨 +

용매: PG 10 mg/ml

HSV 플라크 ID50 500 μg/ml 경계선 +/

HSV 수량이 300 μg/ml에서 제로로 감소됨 +

용매: IPA 10 mg/ml

HSV 플라크 1D50 250 μg/ml 경계선 +/

술폰아미드

푸로세미드 +

용매: 수성 (IV) 10 mg/ml

HSV 플라크 1D50 1 μg/ml

아세타졸아미드

시그마

용매: PEG 40 mg/ml

HSV 플라크 1D50 네거티브 @ 500 μg/ml -

용매: PG 7mg/ml

HSV 플라크 1D50 네거티브 @ 100 μg/ml -

부메타니드

용매: (IV) 수성 500 μg/ml

HSV 플라크 1D50 네거티브 @ 100 μg/ml -

HSV 수량이 경계선에서 감소됨 +/-

토라세미드

퀘마코(Qemaco)

용매: 수성 NaOH 1% 5 mg/ml

HSV 플라크 1D50 60μg/ml 경계선 +/

HSV 수량이 90 μg/ml에서 영향을 받지 않음 -

에타크릴산

용매: (IV) 수성 100 μg/ml

HSV 플라크 1D50 25μg/ml 네거티브

K 보존성 이뇨제

아밀로라이드

용매: 수성 500 μg/ml

HSV 플라크 1D50 250μg/ml +/-

강심 배당체

디곡신(IV) 250μg/ml

HSV 플라크 1D50 60μg/ml +

HSV 수량이 감소됨 +

디기톡신

용매: 에탄올

HSV 플라크 ID50 30 ng/ml +

HSV 수량이 감소됨 +

라녹신(IV) 250μg/ml

HSV 플라크 ID50 60μg/ml +

HSV 수량이 감소됨 +

스트로판틴 G

용매: 수성

HSV 플라크 1D50 1μg/ml 세포독성

HSV 수량이 경계선에서 감소됨 +/-

상기 데이터는 다른 이뇨제 및 강심 배당체가 ICVT 효능을 입증한다는 것을 나타낸다. 분명하게, HPV와 같은 DNA 바이러스성 감염에 대한 국소형 적용을 위한 겔 제형의 상황에서 다른 이뇨제 및 강심 배당체의 사용이 가능하다.

Claims

겔 캐리어 매체에서 적어도 하나의 이뇨제 및/또는 강심 배당체를 포함하는 항바이러스성 국소형 겔 제형에 있어서:

상기 제형은 상기 이뇨제 및/또는 글리코시드를 경피적으로 전달할 수 있는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항에 있어서,

상기 이뇨제 및/또는 글리코시드를 각질층을 통해 기저 표피층에 경피적으로 전달할 수 있는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 또는 2항에 있어서,

상기 이뇨제 및/또는 글리코시드는 경피적으로 흡수될 수 있는 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서,

겔 매체의 전달 능력은 세포간, 세포내 및/또는 션트 루트인 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 4항 중 어느 한 항에 있어서,

폐색 드레싱, 코팅 또는 다른 층과 조합되는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 5항 중 어느 한 항에 있어서,

적어도 하나의 루프 이뇨제는 적어도 하나의 강심 배당체와 조합되어 존재하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제6항에 있어서,

상기 루프 이뇨제는 다음: 푸로세미드, 부메트라니드, 에타크릴산 및 토라제미드 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 7항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 이뇨제는 푸로세미드인 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 강심 배당체는 다음: 디곡신, 디기톡신, 메디곡신, 라나타시드 C, 프로실라리딘, k 스트로판틴, 페루보시드 및 오아바인(ouabain) 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제9항에 있어서,

상기 강심 배당체는 디곡신인 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 이뇨제 및/또는 글리코시드의 생물학적 이용 가능성은 0.1 내지 50 μg/cm²/hour, 바람직하게는 0.2 내지 40 μg/cm²/hour, 더 바람직하게는 0.5 내지 30 μg/cm²/hour, 가장 바람직하게는 1 내지 20 μg/cm²/hour 범위의 정상 상태 플럭스을 제공하도록 하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 겔 매체는 시크거를 가지거나 시크너 없이, 주로 액체 상태를 갖는 반-고체 매체에서 글리코시드 및/또는 이뇨제의 이산 입자를 포함하는 2개의 상태 매체로 구성된 매트릭스인 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 12항 중 어느 한 항에 있어서,

피부-내성이 있고/있거나 각질용해성이 있는 적어도 하나의 첨가제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제13항에 있어서,

상기 첨가제는 5 내지 30 중량%, 바람직하게는 10 내지 25 중량%, 더 바람직하게는 15 내지 25 중량%, 가장 바람직하게는 약 20중량% 범위의 량의 우레아를 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 14항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 겔 캐리어 매체는 공동용매 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 15항 중 어느 한 항에 있어서,

글리코시드:이뇨제의 몰비는 0.1 내지 10:30 내지 0.1, 바람직하게는 0.2 내지 5:20 내지 0.2, 더 바람직하게는 0.5 내지 2.5:20 내지 0.5, 가장 바람직하게는 1:14 내지 1과 같이 0.5 내지 1.5:20 내지 10의 범위인 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 겔 캐리어 매체는 다음:

i) 프로필렌 글리콜과 같은 알킬렌 글리콜;

ii) 물;

iii) 4개까지의 탄소 원자를 갖는 알카놀과 같은 모노히드릭 알카놀; 및

iv) 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리알킬렌 글리콜 중 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제17항에 있어서,

제17항에 규정된 바와 같은 성분((i) 내지 (iv)) 중 2개 이상이 존재하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제17항 또는 18항에 있어서,

제17항에 규정된 바와 같은 성분((i) 내지 (iv)) 중 3개 또는 4개가 존재하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제17항 내지 19항 중 어느 한 항에 있어서,

존재한다면 (i)의 량은 40 내지 70 볼륨%의 범위이고, 존재한다면 (ii)의 량은 약 40 볼륨%의 범위이며, 존재한다면 (iv)의 량은 약 40 볼륨%의 범위이고, 볼륨에 의해 표현된 % 량은 개별적으로 총 제형의 퍼센티지로서 그 성분의 량을 기반으로 하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제17항 내지 20항 중 어느 한 항에 있어서,

(iv) 폴리에틸렌 글리콜은 100 내지 1000, 바람직하게는 150 내지 800, 더 바람직하게는 200 내지 600, 가장 바람직하게는 400과 같이 300 내지 500 범위의 평균 분자 중량으로 존재하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 21항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 캐리어 매체는 (i) 프로필렌 글리콜, (ii) 무균 물, 및 (iii) 우레아를 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 21항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 캐리어 매체는 (i) 프로필렌 글리콜, (ii) 무균 물, 및 (iii) 에탄올 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제23항에 있어서,

400 범위의 평균 분자 중량의 (iv) 폴리에틸렌 글리콜을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 24항 중 어느 한 항에 있어서,

pH는 7보다 더 낮은 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제25항에 있어서,

pH는 6보다 더 낮은 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 26항 중 어느 한 항에 있어서,

pH는 3보다 더 높지 않고, 바람직하게는 4보다 더 높지 않고, 가장 바람직하게는 5보다 더 높지 않은 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 27항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 제형은 (vi) 하나 이상의 시크너를 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제28항에 있어서,

상기 시크너는 다음: 카보폴 또는 울트레즈와 같은 카보머 또는 히드록시알킬셀룰로오스와 같은 셀룰로오스 파생물 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제29항에 있어서,

시크너가 존재하며, 바람직하게는 상기 제형의 총 중량을 기반으로 한 5 내지 15 중량%의 량의 히드록시프로필셀룰로오스를 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제17항 내지 30항 중 어느 한 항에 있어서,

(i) 알킬렌 글리콜;

(ii) 물;

(iii) 모노히드릭 알콜, 및 선택적으로

(iv) 폴리알킬렌 글리콜을 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제31항에 있어서,

(iv) 폴리알킬렌 글리콜이 존재하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제31항 또는 32항에 있어서,

(i) 프로필렌 글리콜;

(ii) 에탄올;

(iii) 물, 및 선택적으로

(iv) 200 내지 600 범위의 평균 분자 중량의 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제33항에 있어서,

(i) 프로필렌 글리콜의 20-60 중량 파트: 물의 5-60 중량 파트: 에탄올의 10-50 중량 파트: 200 내지 600 범위의 평균 분자 중량의 폴리에틸렌 글리콜의 0-20 중량 파트를 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제31항 내지 34항 중 어느 한 항에 있어서,

강심 배당체: 루프 이뇨제의 몰비는 루프 이뇨제의 몰 과잉(molar excess)이 존재하게 되는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제5항에 있어서,

강심 배당체: 루프 이뇨제의 몰비는 1:12-18과 같이 1:10-20의 범위인 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제30항 내지 36항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 제형의 총 중량을 기반으로 하여, 0.5 내지 5 중량%의 카보머 시크너를 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 37항 중 어느 한 항에 있어서,

다음: 유화제, 항산화제, 프로펠런트(propellant), 컬러(colour), 완충제, 방부제 및 접착제 중 적어도 하나를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 38항 중 어느 한 항에 있어서,

DNA 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 것을 특징으로 하는 항바이러스 성 국소형 겔 제형.
제38항에 있어서,

잠복, 서브-임상 또는 임상 HPV 감염과 같은 인 유두종 바이러스의 치료에 사용하기 위한 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 39항 중 어느 한 항에 있어서,

사마귀의 국소형 치료에 사용하기 위한 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 41항 중 어느 한 항에 있어서,

바이러스성 세포내 칼륨 이온의 감소 또는 결핍에 의하여 바이러스성 복제를 감소시키거나 방지하는데 사용하기 위한 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제1항 내지 38항 중 어느 한 항에 있어서,

DNA 바이러스를 치료하는데 사용하기 위한 약물을 조제하는데 사용하기 위한 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제43항에 있어서,

상기 DNA 바이러스는 인 유두종 바이러스인 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제43항 또는 44항에 있어서,

사마귀의 국소형 외용에 사용하기 위한 약물을 조제하는데 사용하기 위한 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
제43항 내지 45항 중 어느 한 항에 있어서,

세포내 칼륨 이온을 감소시키거나 결핍시키는데 사용하기 위한 약물을 조제하는데 사용하기 위한 것을 특징으로 하는 항바이러스성 국소형 겔 제형.
DNA 바이러스성 감염을 치료하는 방법에 있어서:

대상에 국소형 조성을 적용하는 단계를 포함하며, 상기 국소형 조성은 제1항 내지 38항 중 어느 한 항에 따른 제형을 포함하는, DNA 바이러스성 감염 치료 방법.