JP2003519163A - Ｄｎａウイルス感染症の治療 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ループ利尿薬および強心性配糖体の相乗的組み合わせは、ＤＮＡウイルス感染の治療において有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、抗ウイルス治療、ならびにとくに、ヘルペスウイルス感染などのＤ
ＮＡウイルス感染の予防および治療に関する。

【０００２】 ヘルペスウイルスはＤＮＡウイルスであり、タンパク質性の構造の内部にＤＮ
Ａからなるセントラルコアを有する。ＤＮＡはそのウイルスが繁殖するための遺
伝コードを運ぶ。ウイルスは、繁殖するためには生細胞に感染しなければならな
い。ウイルスのタンパク質には、抗ウイルス化学療法において理想的な標的とし
て働く重要な酵素を含めて、よく特徴付けられたものが多数ある。それらは、Ｄ
ＮＡ複製に必要なＤＮＡポリメラーゼおよびチミジンキナーゼを含む。ウイルス
ＤＮＡの複製は、ウイルスの感染能において必要不可欠である。感染ウイルスは
、生細胞の複製中に、生細胞の通常のイオンバランスを変化させ得ることが知ら
れている。

【０００３】 欧州特許出願第０４４２７４４号明細書は、単純ヘルペスウイルスおよび水痘
−帯状疱疹ウイルスの治療のために、ある配糖体の用途を開示している。このＰ
ＣＴ出願の先の出願（the priority applications）日後に公開された国際公開
第００／１０５７４号パンフレットは、レトロウイルスの治療、この場合はＨＩ
Ｖ感染の治療のために、ループ利尿薬の用途を開示している。本発明者らは、配
糖体とループ利尿薬とを組み合わせた適用によって、ループ利尿薬または配糖体
の単独投与に比べて高い効果が得られることを、予期せぬも発見した。

【０００４】 ある局面において、本発明は、ループ利尿薬と強心性配糖体との相乗的な組み
合わせからなる、ＤＮＡウイルス感染症の治療に有用な医薬組成物を提供する。

【０００５】 他の局面においては、本発明は、相乗効果を奏するループ利尿薬と強心性配糖
体との適用からなるウイルス感染の治療方法を提供する。

【０００６】 ループ利尿薬は、広範囲の利用可能な薬剤から選択され得る。好ましくは、利
尿薬はフルセミド、ブメタニド、エタクリン酸またはトラセミドのいずれかひと
つもしくはそれ以上である。本発明者らの研究によると、ループ利尿薬は細胞の
イオン濃度、細胞のイオンバランス、細胞のイオン環境および電位を変化させる
ことによって、抗ウイルス効果を実現する。

【０００７】 フルセミドは、アンスリル酸誘導体であり、化学的には４−クロロ−Ｎ−フル
フリル−５−スルファモイルアントラニル酸である。フルセミドは中性ｐＨでは
実質的に水に不溶であるが、アルカリにはよく溶ける。フルセミドは、細胞間を
横切る塩化物イオンの輸送を阻害することによって生理学的効果を及ぼす。フル
セミドは作用期間が短いループ利尿薬である。フルセミドは肝不全、腎不全また
は心不全による浮腫の治療および高血圧の治療のために使用される。フルセミド
の生物学的利用能は、６０％から７０％の間であり、ろ過および分泌作用によっ
て不変の薬剤として主に排出される。フルセミドはＮａ＋／Ｋ＋／２Ｃｌ−共輸
送体に対して作用する。フルセミドの利尿効果として、その顕著な作用は、腎臓
におけるヘンレのループの上行脚膨大部において生じる。ループ利尿薬はＫ⁺の
排出を著しく促進し、細胞内カリウムを枯渇させる。これにより、長期的な全身
へのフルセミド使用の最も顕著な合併症、すなわち低い血清カリウム（a lowere
d serum potassium）が導かれる。このような作用によりループ利尿薬がＤＮＡ
ウイルスに対する薬剤として有用であるということを主張する。

【０００８】 最近の証拠により、フルセミドの主な生物変換産物はグルクロニドであること
が示唆される。フルセミドは、広範囲に血漿タンパク質に、主にアルブミンに結
合する。１から４００ｍｃｇ／ｍｌの範囲の血漿濃度は、健康な個人において９
１〜９９％が結合されている。治療濃度での非結合比は２．３〜４．１％の間の
範囲内である。フルセミドの定期の半減期は、およそ２時間で、主に尿中に排出
される。

【０００９】 強心性配糖体は、ジゴキシン、ジギトキシン、メジゴキシン（medigoxin）、
ラナトシドＣ、プロスシラリジン、ｋストロファンチン、ペルボサイド（peruvo
side）およびウアバインのいずれかひとつもしくはそれ以上であってよい。ジギ
タリス種の植物（たとえば、ジギタリス パープレア、ジギタリス ラナタ）は
、ジギタリスとしてひとまとめにして知られるジゴキシンおよびジギトキシンな
どの強心性配糖体を含有する。他の植物は、化学的にジギタリス配糖体に関連す
る強心性配糖体を含み、それらはしばしばジギタリスとも呼ばれる。このように
用語ジギタリスは、配糖体の全ての群を意味するために用いられる。その配糖体
は、糖およびカルデノリドの二つの成分からなる。ウアバインはアフリカの植物
ストロファンツス グラタス（Strophantus gratus）由来であり（ストロファン
チジンＧ（strophanthidin G）としても知られる）、静脈注射の方法で利用でき
（経口から吸収されない）、その優れた溶解性により、配糖体の研究において多
くの実験に使用される。ウアバインはジゴキシンと実質上同一の作用形式を有す
る。

【００１０】 ジゴキシンは、化学的には（３ｂ，５ｂ，１２ｂ）−３−［Ｏ−２，６−ジデ
オキシ−ｂ−Ｄ-リボ−ヘキソピラノシル−（１″４）−Ｏ−２，６−ジデオキ
シ−ｂ−Ｄ−リボ−ヘキソピラノシル−（１″４）−２，６−ジデオキシ−ｂ−
Ｄ-リボ−ヘキソピラノシル）オキシ］−１２，１４−ジヒドロキシ−カード−
２０−２２）−エノリドとして記載される。ジゴキシンの分子式はＣ₄₁Ｈ₆₄Ｏ₁₄ で、分子量は７８０．９５である。ジゴキシンは２３０℃以上で分解して溶ける
無臭の白色結晶体として存在する。その薬剤は実質上、水およびエーテルには溶
けず、希釈アルコール（５０％）およびクロロホルムにわずかに溶け、ピリジン
によく溶ける。

【００１１】 ジゴキシンによる副作用をとくに受けやすい患者がいるため、薬剤の投与量は
患者の臨床状態が許すように常に注意深く選択し、かつ適合させるべきである。

【００１２】 細胞レベルにおいて、ジギタリスはナトリウム輸送酵素であるナトリウムカリ
ウムアデノシントリホスファターゼ（Ｎａ／Ｋ ＡＴＰａｓｅ）を阻害すること
によって主に効果を発揮するものであり、ナトリウムカリウムアデノシントリホ
スファターゼは、心筋の電気生理学的効果に、および本発明者らの理解によると
、ＤＮＡウイルスに対するジギタリスの活性にも直接責任を有している。この活
性はまた、細胞内カルシウムの二次的変化による心筋収縮能の能率にも効果を有
する。細胞内のジギタリスの濃度が非常に低いときは、ジギタリスがＮａ／Ｋ
ＡＴＰａｓｅを刺激するにつれて、心筋収縮能の能率は減少するといった相反す
る効果が見られる。

【００１３】 好ましい組み合わせは、ループ利尿薬であるフルセミドおよび強心性配糖体で
あるジゴキシンである。濃度はフルセミドが１ｍｇ／ｍｌおよびジゴキシンが３
０ｍｃｇ／ｍｌであるのが好ましい。２つの活性成分の適用を短期間において分
けて行うことは、本発明の範囲内である。

【００１４】 研究（Ｘ線微量分析を含む）は、本発明の組成物の抗ウイルスＤＮＡ効果が細
胞内カリウムイオンの枯渇に依存することを証明している。つまり、それらの研
究は ・カリウムの補充はＤＮＡ合成を復活させるであろう、 ・フルセミドおよびジゴキシンの組み合わせの使用は、カリウムの枯渇に相当す
る効果を有する、 ・カリウム枯渇のレベルは、正常細胞が機能するために充分である、 ・カリウムの枯渇は細胞毒性効果はない、 ことを証明する。

【００１５】 このように、ループ利尿薬および強心性配糖体の適用により、細胞内のイオン
濃度、細胞内のイオンバランス、細胞内の環境および細胞内の電位を変化するこ
とによって、細胞に損傷を与えることなく、しかしウイルスの複製は阻害される
ように、細胞の代謝を変化させることができる。したがって、本発明者らはその
ような観点において、ループ利尿薬および強心性配糖体の使用はウイルスのＤＮ
Ａ複製を阻害することによって、ウイルスの複製の妨害または制御に有用である
ことを確認した。抗ウイルスの有効性は、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２、ＣＭＶ、Ｖ
ＺＶならびに仮性狂犬病などのＤＮＡウイルスに対して確認した。その他のウイ
ルス候補としては、パルボウイルス、パポウイルス（papoviruses）、アデノウ
イルス、ヘパドノウイルス（hepadnoviruses）およびポックスウイルスである。

【００１６】 本発明の組成物は、外用または内用（internal）投与としても適合させてもよ
い。局所的および全身的な適用は、最も有用なようである。処方をゆっくりとし
た放出用に適合させてもよい。その組成物が局部適用の処方であることが本発明
の非常に好ましい性質である。抗ウイルス活性を弱めないのであれば、たとえば
保存料など他の成分が存在していてもよい。本発明は目の角膜感染の治療に対し
て、局所適用としてフルセミドおよびジゴキシンとの組み合わせを緩衝化生理食
塩水（buffered saline）処方のかたちで提供する。本発明者らが知る限り、ウ
イルス感染の治療のための、現在認められている化合物の組み合わせは前例がな
い。

【００１７】 本発明の好ましい適用は、眼のウイルス感染に非常に効果的な治療のための、
ループ利尿薬および強心性配糖体との局部に集中した使用である。頻発するヒト
の角膜へのヘルペス感染は、最も一般的なウイルス性の失明の原因である。

【００１８】 ループ利尿薬および強心性配糖体を含む、たとえばループ利尿薬および強心性
配糖体を染み込ませたコンタクトレンズの使用は、病気の予防または治療のため
に細胞内濃度を高くするための安全で有効な方法である。眼内に適用されるルー
プ利尿薬およびリチウムの補充適用（a depot application）は、ＡＩＤＳ患者
において失明の主な原因であるサイトメガロウイルス網膜炎の治療方法に有用で
ある。

【００１９】 以下の実施例を単に参考として用い、本発明を実例で記載する。

【００２０】 ［実施例］ 実施例１ インビトロで単純ヘルペスウイルスを用いた生物検定は、フルセミド（１ｍｇ
／ｍｌ）およびジゴキシン（３０ｍｃｇ／ｍｌ）の同時投与の抗ウイルス活性を
求めるために行った。培養および検定方法は、単純ヘルペスウイルスとベロ細胞
用に、レネット（Lennette）およびシュミット（Schmidt）（1979）が記載した
方法に重要でない変更を加えて行った。

【００２１】 用いた単純ヘルペス株 １型単純ヘルペスＨＦＥＭ株は、ロッカーフェラーＨＦ株（ワイルディ1995）
および２型単純ヘルペス３３４５株の誘導体であり、陰茎からの単離体（スキナ
ーら 1977）は原始型株として用いられた。これら原始型は必要になるまで−80
℃で保存された。

【００２２】 培養細胞 アフリカミドリザル腎臓細胞（ベロ）は、英国立生物学的標準品および規制研
究所（National Institute of Biological Standards and Control UK）から得
られ、本実施例における全実験の唯一の細胞株として使用された。

【００２３】 培地 細胞およびウイルスは、１０％のウシ胎仔血清で補充したグラスゴー改変培地
（Glasgows modified medium）で維持した。

【００２４】 結果ｈｓｖ１の阻害

【００２５】

【表１】

【００２６】 本実施例は、ｈｓｖ１が感染したベロ細胞に低濃度のフルセミドおよび配糖体
のストック溶液を適用することによって、ウイルス活性がほとんど除去されるこ
とを証明している。より高い濃度では、ウイルス活性は完全に妨害される。この
ストック溶液の抗ウイルス効果は、フルセミドまたはジゴキシン単独の効果より
はるかに大きい。細胞外のウイルスにおいて直接的な殺ウイルス活性はなかった
。

【００２７】 これらの実験はｈｓｖ２株を用いて繰り返され、ほとんど同じ結果が得られた
。

【００２８】 実施例２ 実施例１の方法を、１型ヘルペスウイルスｋｏｓ株を用いて繰り返した。同様
な結果が得られた。

【００２９】 実施例３ 同時に、かつ単独に適用された場合の、フルセミドおよびジゴキシンの抗ウイ
ルス活性を求めるために、インビトロ生物検定を行った。

【００３０】 異なるタイプのベロ細胞（アフリカミドリザル腎臓細胞およびＢＨＫ１細胞）
に組成物を適用し、２型単純ヘルペスウイルス（３３４５株および１８０株）を
低度、中度および高度の感染多重度（ＭＯＩ）で感染させた。ウイルス複製の阻
害は以下の尺度で採点した。

【００３１】 阻害なし − ２０％阻害 ＋ ４０％阻害 ＋＋ ６０％阻害 ＋＋＋ ８０％阻害 ＋＋＋＋ １００％阻害 ＋＋＋＋＋ Ｔは薬剤毒性を示す

【００３２】 アフリカミドリザルの腎臓細胞および２型単純ヘルペスウイルス３３４５株を
用いたところ、以下の結果が得られた。

【００３３】

【表２】

【００３４】 ジゴキシン単独での最も優れた効果（＋＋＋）は、低度の感染多重度でのみジ
ゴキシン３０ｍｃｇ／ｍｌの適用で起こった。

【００３５】 フルセミド単独での最も優れた効果（＋＋＋）は、低度および中度の感染多重
度でフルセミド１ｍｇ／ｍｌの適用で起こった。

【００３６】 ループ利尿薬および強心薬配糖体が感染細胞に同時に適用されると、最も優れ
た効果（＋＋＋＋＋）は、ジゴキシンを３０ｍｃｇ／ｍｌおよびフルセミドを１
ｍｇ／ｍｌ用いることにより、達成された。ｈｓｖ２複製の１００％の阻害は、
低度、中度および高度の感染多重度において見られた。

【００３７】 ベロ細胞および２型単純ヘルペス株からなるほかの組み合わせを用いることに
よって、同様の結果が得られた。

【００３８】 この実施例は、フルセミドまたはジゴキシン単独を適用することによっては、
ｈｓｖ２の複製が最大限に阻害されないことを証明する。しかしながら、フルセ
ミドおよびジゴキシンの組み合わせにより、ｈｓｖ２複製は完全に阻害される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０２Ｃ 7/04 Ｇ０２Ｃ 7/04 (31)優先権主張番号 ００２３１９８．５ (32)優先日 平成12年９月21日(2000．9．21) (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 2H006 BB01 BB03 4C084 AA19 MA58 NA14 ZA372 ZA832 ZB331 ZC752 4C086 AA01 AA02 DA20 EA19 HA02 MA02 MA04 MA58 NA14 ZB33 ZC75

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＤＮＡウイルス感染の治療において相乗的効果を発揮するた
   めのループ利尿薬および強心性配糖体の用途。
2. 【請求項２】 ループ利尿薬および強心性配糖体の相乗的な組み合わせから
   なる、ＤＮＡウイルス感染の治療に有用な医薬組成物。
3. 【請求項３】 局部適用に適合させた請求項２記載の組成物。
4. 【請求項４】 全身適用に適合させた請求項２記載の組成物。
5. 【請求項５】 １ｍｇ／ｍｌのループ利尿薬および３０ｍｃｇ／ｍｌの強心
   性配糖体からなる請求項３記載の組成物。
6. 【請求項６】 眼内の補充適用に適合させた請求項２記載の組成物。
7. 【請求項７】 ループ利尿薬がフルセミドである請求項２、３、４、５また
   は６記載の組成物。
8. 【請求項８】 ループ利尿薬およびリチウムを含む、たとえばループ利尿薬
   およびリチウムを染み込ませて適用されるコンタクトレンズ。