JP2009507863A - シロキクラゲ雑多糖またはその抽出物の新用途 - Google Patents
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Abstract
本発明は、一種のシロキクラゲ雑多糖またはシロキクラゲ雑多糖抽出物及びその、プロバイオティクスの成長及び/または繁殖を促進する薬品、飲食品もしくは健康食品の調合中における用途；便秘改善機能を備えた薬品、飲食品もしくは健康食品の調合中における用途；デトックス美顔美容効能を備えた薬品、飲食品もしくは健康食品の調合中における用途；体外におけるプロバイオティクスの成長及び/または繁殖を促す促進剤中の用途について公開している。本発明のシロキクラゲ雑多糖またはその抽出物を含む薬品、飲食品または健康食品は服用後便秘改善機能、毒素の排出機能及びデトックス美顔美容機能を持ち、体内毒素の排出及びシロキクラゲ雑多糖中の栄養物質の吸収を通して美容美顔の作用を果たすことができる。
Description
本発明は一種の雑多糖及びその用途に関わるものである。とりわけ、一種のシロキクラゲ雑多糖またはその抽出物のプロバイオティクス及びその成長及び/または繁殖方面の促進における用途及び便秘改善機能、毒素の排出機能及びデトックス美顔美容機能等の方面の用途に関わる。
ビフィズス菌は人体内の生理性細菌である。グラム陽性、無性芽、非運動性、絶対嫌気性で、人の腸内で絶対的な優勢を占め、終生人体に存在し、人の健康と密接に関係する、人体に対して多くの重要な生理機能を持つ有益菌である。微生物学の急激な発展に伴い、ビフィズス菌の臨床保健作用は徐々に人々に認識され、受け入れられつつある。人の生理、免疫、栄養、消化、抗腫瘍、アンチエイジング、薬物效能等はいずれも人体自身が備えている微生物群と不可分であり、また人体腸内のビフィズス菌は病気があればそれを治療し、病気が無い場合では老化防止と保健の作用を備えている。例えば、ビフィズス菌は生理障壁を形成して病原菌の定植と侵入を阻止することができる。宿主を病原菌の侵害から守り、たんぱく質の代謝を改善することが可能で、複数のB種ビタミンの提供、カルシウムと鉄の吸収の促進、免疫力の向上、抗腫瘍力の強化等の複数の作用がある。人体内のビフィズス菌の不足は人体に健康危機が発生していることを示し、適宜補充しなければならない。
乳酸菌もまた人体内の重要な生理性細菌である。グラム陽性、無性芽、非運動性、絶対嫌気性で、複数の生理機能を備える。乳酸菌は腸及び生殖器官菌群のバランスを保ち、いくつかの発ガン剤を除去し、または発ガン予防等のプロセスで重要な作用を発揮する。乳酸菌の減少は腸内菌群の失調を招く可能性があり、病原菌がこの機に乗じて大量に繁殖し、その代謝の産物であるいくつかの細菌酵素は発ガン前体物質の発ガン物質への転換を触媒する。また乳酸菌は腸内菌群のバランスを回復し、腸内の病原菌の成長に抵抗し、細菌酵素の産出を抑制すると同時にその活性を抑え、さらに発癌物質とあわせて糞便とともに排出することが可能で、その形成、活性及び腸内での滞留機会を減らす。
プレバイオティクスは一種の非消化性の物質を指すが、基礎物として腸内の正常菌群が利用することができ、選択的に腸内の一種または複数種の有益菌の成長と繁殖を刺激することが可能で、有害細菌の成長を抑制し、宿主の健康に対して有益な作用を持つ。例えばスタキオース、フラクトオリゴ糖（麦芽オリゴ糖、半乳糖オリゴ糖、果糖オリゴ糖等を含む）である。これらの物質はビフィズス菌の成長及び/または繁殖を促進することができるため、“ビフィズス因子”とも呼ばれる。フラクトオリゴ糖は国際的に公認されたビフィズス因子であるが、それらは皆オリゴ糖類であり、分子量は比較的小さい。プレバイオティクス類物質の服用により体内のプロバイオティクスの成長及び/または繁殖を促進することが可能で、さらに人体の吸収システムの機能を改善することができ、便秘改善と人体の新陳代謝の促進を助ける。また体内の毒素が適時排出されて、美容及び美顔効果を挙げることもできる。
シロキクラゲ（Tremella faciformis Berk）はまたの名を白木耳、「清異録」では桑鵞と呼ばれる。シロキクラゲ目（Tremellales）、シロキクラゲ科（Tremellacease）、シロキクラゲ属（Tremella）に属し、陰気を増して肺を潤し、気と血行を盛んにする効能を持つ。シロキクラゲ雑多糖はシロキクラゲの現物（またはその微生物発酵液）中から抽出・分離する一種の酸性雑多糖である。中国では古代からシロキクラゲを高級栄養食品及び薬品と称し、薬食両用の逸品は宮廷における上等な健康栄養食品であった。
科学のたゆみなき発展と技術の向上に伴い、人々はシロキクラゲへの認識を新たにしている。国内外ではシロキクラゲの主要成分−シロキクラゲ雑多糖について大量の研究が行われ、シロキクラゲ雑多糖が免疫力向上、抗腫瘍、アンチエイジング、血糖値の引き下げ、血脂、たんぱく質核酸合成の促進、抗血栓等の薬理作用を備えることが明らかになっている。日本はすでにこれを健康食品、化粧品、薬品に幅広く利用している。シロキクラゲの開発と応用は、科学界から非常に注目されており、国際医薬界及び化粧品領域において広く重視され、現在では研究開発の熱い視線を集めている。
しかし現在までのところ，シロキクラゲ雑多糖の組成と構造及び対応する機能についての報道はごくわずかである。
本発明の目的の一つは、一種のシロキクラゲ雑多糖を提供するためである。
本発明に述べるシロキクラゲ雑多糖の構造はα-（1-3）マンノースを主鎖とし、主な重量パーセンテージは70-93%の中性総糖、6-28%のグルクロン酸、0.1-3%の結合蛋白から構成されている。同シロキクラゲ雑多糖の平均分子量は85-160万ドルトンで、そのうち分子量が6000ドルトンのものが90%（重量）以上を占める。その中で中性総糖は主に以下の含有量の糖基が含まれる：35-60%マンノース、10-25%フコース、8-18%キシロースと5-15%のブドウ糖。上記の含有量はシロキクラゲ雑多糖の重量で計量する。
同シロキクラゲ雑多糖の側鎖は複数の異なる組み合わせからなり、そのうち一種の組み合わせはすでにX線放射方法により以下の構造式Ｉで示される構造ユニットであることが測定されている。
本発明のもう一つの目的は一種のシロキクラゲ雑多糖を提供するものである。本発明で述べるシロキクラゲ雑多糖抽出物は、主に重量パーセンテージが80-98%の上記シロキクラゲ雑多糖、0.1-3.3%の遊離蛋白及び0.5-8％の灰分を含む。同シロキクラゲ雑多糖抽出物の平均分子量は75-140万ドルトンで、そのうち分子量が6000ドルトン以上のものが75-98%（重量）を占める。
本発明で述べるシロキクラゲ雑多糖抽出物は以下の抽出方法で得ることができる。
1）シロキクラゲ子実体原料を80-100℃の水で攪拌して粗抽出液を得る。
2）手順1）で得られた粗抽出液をろ過し、ろ過液は最終的には穴径0.1-1μmのフィルターを通す。
3）手順2）で得られたろ過液中にアルコールを加え、アルコールの最終体積濃度を50-85%にして、沈殿物を収集する。
4）手順3）で得られた沈殿を乾燥させる。
このうち、同シロキクラゲ子実体原料は干燥したシロキクラゲ子実体原料とし、この干燥したシロキクラゲ子実体原料を水に浸して膨張させた後、きれいに洗う（黄褐色の根元部分の除去を含む）。毎回20-100倍、何度も抽出する場合はこの干燥したシロキクラゲ子実体原料量の200倍（重量）を超えない水で80-100℃の状態で攪拌して粗抽出液を得る。
このシロキクラゲ子実体原料は新鮮なシロキクラゲ子実体原料でもよいし、冷蔵で鮮度を保った新鮮なシロキクラゲ子実体原料または冷凍の新鮮シロキクラゲ子実体原料でもよく、同シロキクラゲ子実体原料から黄褐色の根元部分を取り去ってからきれいに洗浄し、毎回同シロキクラゲ子実体原料の2-15倍、何度も抽出する場合は30倍（重量）の水で、80-100℃の状態で攪拌して粗抽出液を抽出する。
本発明に述べるシロキクラゲ雑多糖抽出物のもう一つの抽出方法は、以下の手順を含む：
1）通常の微生物発酵方法(参考文献（１）シロキクラゲ深層発酵条件についての研究、呉大康等；食品科学；2002，Vol.23，No.1；64；(２)シロキクラゲ菌分離方法の研究、張炳熾；中国食用菌；Vol.13，No.3；22)取得したシロキクラゲ発酵液を80-100℃に加熱し、0.5-2時間保温してからろ過する。ろ過済み液を最終的に穴径0.1-1μmのフィルターを通してろ過液を得る。
1）通常の微生物発酵方法(参考文献（１）シロキクラゲ深層発酵条件についての研究、呉大康等；食品科学；2002，Vol.23，No.1；64；(２)シロキクラゲ菌分離方法の研究、張炳熾；中国食用菌；Vol.13，No.3；22)取得したシロキクラゲ発酵液を80-100℃に加熱し、0.5-2時間保温してからろ過する。ろ過済み液を最終的に穴径0.1-1μmのフィルターを通してろ過液を得る。
2）手順1）で得られたろ過液にアルコールを加えアルコールの最終体積濃度を50-85%にして、沈殿物を収集する。
3）手順2）で得られた沈殿物を乾燥させる。
本発明で述べるシロキクラゲ雑多糖の抽出方法には、上記の抽出方法で得られた抽出物をさらに純化させる手順が含まれる。
そのうち、この純化はSevag法及び透析法により行う。もちろん、本領域の技術者が知っているとおり、その他のクロマトフィー分離法等の多糖純化方法でも本発明のシロキクラゲ雑多糖を得ることができる。
本発明のもう一つの目的は、上記に述べたシロキクラゲ雑多糖またはシロキクラゲ雑多糖抽出物にプロバイオティクスの成長及び/または繁殖を促進する薬品、飲食品または健康食品の調合中における用途を提供することである。
本発明のもう一つの目的は、上記に述べたシロキクラゲ雑多糖またはシロキクラゲ雑多糖抽出物に便秘改善機能を備えた薬品、飲食品または健康食品の調合中における用途を提供することである。
本発明のもうひとつの目的は、上記に述べたシロキクラゲ雑多糖またはシロキクラゲ雑多糖抽出物に毒素の排出機能及びデトックス美容機能を備えた薬品、飲食品または健康食品の調合中における用途を提供することである。
ここで述べるプロバイオティクスは各種プロバイオティクスでよいが、主にビフィズス菌及び/または乳酸菌であり、できれば消化系統（例えば腸内）中のビフィズス菌及び/または乳酸菌または生殖系統（例えば生殖器内）中の乳酸菌が良い。
ここで述べるビフィズス菌Bifidobaterinmは不規則な形をした絶対性嫌気菌であり、32種類ある。ビフィズス菌ロンガム、ビフィズス菌アドレッセンティスまたはビフィズス菌インファンティスを優先し、さらにビフィズス菌ロンガムを優先する。同ビフィズス菌ロンガムはビフィズス菌ATCC
2952が望ましい。同乳酸菌Lactobacillusはグラム陽性の無性芽杆菌で56種類あるが、デルブリュック菌、KW乳酸菌とKK乳酸菌を優先し、さらにデルブリュック菌を優先する。同デルブリュック菌はデルブリュック菌ブルガリア亜種が望ましく、ブルガリア菌ATCC
11480がより望ましい。
2952が望ましい。同乳酸菌Lactobacillusはグラム陽性の無性芽杆菌で56種類あるが、デルブリュック菌、KW乳酸菌とKK乳酸菌を優先し、さらにデルブリュック菌を優先する。同デルブリュック菌はデルブリュック菌ブルガリア亜種が望ましく、ブルガリア菌ATCC
11480がより望ましい。
上記の薬品は既存技術中の各種薬剤形態、たとえば粉末剤、錠剤、カプセル剤（ソフトカプセルとハードカプセルを含む）、液体剤、浮遊液、乳剤、口服液、ゼリーまたは水溶性服用剤が可能である。上記の飲食品には飲料と食品が含まれ、シロキクラゲ雑多糖またはシロキクラゲ雑多糖抽出物を含む濃縮液及び/または干燥物の飲料または食品とする。飲食品の応用には制限がなく、既存技術中の各種剤型とすることができ、例えば粉剤、錠剤、カプセル剤（ソフトカプセルとハードカプセルを含む）、顆粒、水溶性服用剤、ゼリー、飲料、乳製品、ヨーグルトまたは小さなスナック焼物等に使用可能である。上記の健康食品は、既存技術中の各種剤型、例えば粉剤、錠剤、カプセル剤（ソフトカプセルとハードカプセルを含む）、液体剤、浮遊液、乳剤、口服液、ゼリーまたは水溶性服用剤等とすることができる。
本発明に基づき、上記の薬品、飲食品または健康食品はさらにその他のプロバイオティクスの成長及び/または繁殖を促進するプレバイオティクスを含むことができる。
ここでいう飲食品または健康食品中にはさらにその他の各種食用の栄養成分を含むことができ、それによりより良い栄養保健の作用を果たす。
本発明でいうシロキクラゲ雑多糖は、粗抽出された雑質を含むシロキクラゲ雑多糖粗品でもよいし、またシロキクラゲ雑多糖純品でも構わない。
本発明のもう一つの目的は、述べるシロキクラゲ雑多糖またはシロキクラゲ雑多糖抽出物に、体外におけるプロバイオティクスの成長及び/または繁殖を促進する促進剤中の用途を提供することである。
本発明で述べる促進剤の作用または機能はビフィズス因子に似ている。相違点は、ビフィズス因子はビフィズス菌の成長及び/または繁殖を促進する物質であるのに対して、促進剤はプロバイオティクス（ビフィズス菌を含む）の成長及び/または繁殖を促進する物質であることである。本発明で言う促進剤は、薬品、飲食品や健康食品に添加することで、服用後体内プロバイオティクスの成長と繁殖を促進することができる。プロバイオティクスを含む薬品、飲食品や健康食品に本発明で述べる促進剤を添加すれば、同種製品の機能を強化できる。本発明で述べる促進剤は体外、たとえば培地中で使用してプロバイオティクスを培養することができ、より早くより多くの有益菌を培養することが可能で、これによりコストを削減できる。
ここで述べるプロバイオティクスは各種プロバイオティクスでよいが、主にビフィズス菌及び/または乳酸菌である。
ここで述べるビフィズス菌はビフィダムB.bifidumを優先し、さらにビフィズス菌ATCC 2952を優先する。ここで述べる乳酸菌はデルブリュック菌を優先し、デルブリュック菌ブルガリア亜種L.delbrueckii
subsp.bulgaricusをより優先、ブルガリア菌ATCC 11480を最優先する。
subsp.bulgaricusをより優先、ブルガリア菌ATCC 11480を最優先する。
本発明のプラスの効果は以下のとおりである：シロキクラゲ雑多糖抽出物及びシロキクラゲ雑多糖（商品名：WSK）は、直接人体の腸内菌を調節する、体内のビフィズス菌及び/または乳酸菌を増やすなどプロバイオティクスの成長及び/または繁殖に対する促進作用を持ち、将来性は広い。さらに、シロキクラゲ雑多糖はビフィズス菌や乳酸菌等のプロバイオティクスに対して増殖促進作用を持ち、将来的には促進剤（ビフィズス因子の機能または作用に類似する）としてより一層の開発研究を進めるとともに、ミクロ生態学の発展を促進することができる。本発明のシロキクラゲ雑多糖またはシロキクラゲ雑多糖抽出物を含む薬品、飲食品または健康食品は経口後便秘改善機能、毒素の排出機能及びデトックス美顔美容の機能を持ち、体内毒素の排出及びシロキクラゲ雑多糖中の栄養物質の吸収により美容美顔の作用を果たすことができる。
実施例1
干燥したシロキクラゲの現物を水に浸し、膨張してから黄褐色の根元部分を取り除いてきれいに洗浄する。洗浄後の原料を抽出ビーカーに入れ、100倍量の水を加えて、100℃の水温で4時間攪拌する。その後ろ過を行い、ろ過済み液を最終的には穴径0.1-1μmのフィルターを通す。均一に攪拌して、ろ過済み液とアルコールを充分に混ぜ合わせ、混合液中のアルコールの最終濃度を85%とする。沈殿物を収集し、純アルコールにより脱水を行い、沈殿物を収集する。-40℃でフリーズドライし、粉砕してシロキクラゲ雑多糖抽出物（WSK-1）を得る。製品収集率は20%（乾燥シロキクラゲの重量計）、シロキクラゲ雑多糖の純度は80%である。
干燥したシロキクラゲの現物を水に浸し、膨張してから黄褐色の根元部分を取り除いてきれいに洗浄する。洗浄後の原料を抽出ビーカーに入れ、100倍量の水を加えて、100℃の水温で4時間攪拌する。その後ろ過を行い、ろ過済み液を最終的には穴径0.1-1μmのフィルターを通す。均一に攪拌して、ろ過済み液とアルコールを充分に混ぜ合わせ、混合液中のアルコールの最終濃度を85%とする。沈殿物を収集し、純アルコールにより脱水を行い、沈殿物を収集する。-40℃でフリーズドライし、粉砕してシロキクラゲ雑多糖抽出物（WSK-1）を得る。製品収集率は20%（乾燥シロキクラゲの重量計）、シロキクラゲ雑多糖の純度は80%である。
実施例2
鮮度を保って冷蔵したシロキクラゲの現物を水に浸し、黄褐色の根元部分を取り除いてきれいに洗浄する。洗浄後の原料を抽出ビーカーに入れ、生材料の15倍量の水を加えて、100℃の水温で4時間攪拌する。それからろ過し、ろ過済み液を最終的には穴径0.1-1μmのフィルターを通す。ろ過澄み液を加熱して濃縮させ、濃縮液を得る。ろ過済み液とアルコールを充分に混ぜ合わせ、混合液中のアルコールの最終濃度を85%とする。沈殿物を収集し、純アルコールを用いて脱水脱色を行い、収集した沈殿物を80℃の熱風で乾燥し、粉砕してシロキクラゲ雑多糖抽出物を得る。製品収集率は2.1%（新鮮なシロキクラゲの重量計）である。
鮮度を保って冷蔵したシロキクラゲの現物を水に浸し、黄褐色の根元部分を取り除いてきれいに洗浄する。洗浄後の原料を抽出ビーカーに入れ、生材料の15倍量の水を加えて、100℃の水温で4時間攪拌する。それからろ過し、ろ過済み液を最終的には穴径0.1-1μmのフィルターを通す。ろ過澄み液を加熱して濃縮させ、濃縮液を得る。ろ過済み液とアルコールを充分に混ぜ合わせ、混合液中のアルコールの最終濃度を85%とする。沈殿物を収集し、純アルコールを用いて脱水脱色を行い、収集した沈殿物を80℃の熱風で乾燥し、粉砕してシロキクラゲ雑多糖抽出物を得る。製品収集率は2.1%（新鮮なシロキクラゲの重量計）である。
実施例3
微生物の発酵により得られたシロキクラゲ発酵液を100℃で0.5時間加熱し、通常どおりろ過を行う。ろ過滓を廃棄し、ろ過済み液を最終的には穴径0.1-1μmのフィルターを通す。均一に攪拌して、ろ過済み液とアルコールを充分に混ぜ合わせ、混合液中のアルコールの最終濃度を85%とする。沈殿物を収集し、純アルコールを用いて脱水脱色を行い、沈殿物を集める。-40℃でフリーズドライし、粉碎してシロキクラゲ雑多糖抽出物を得る。製品収集率は0.55%（発酵液の重量計）である。
微生物の発酵により得られたシロキクラゲ発酵液を100℃で0.5時間加熱し、通常どおりろ過を行う。ろ過滓を廃棄し、ろ過済み液を最終的には穴径0.1-1μmのフィルターを通す。均一に攪拌して、ろ過済み液とアルコールを充分に混ぜ合わせ、混合液中のアルコールの最終濃度を85%とする。沈殿物を収集し、純アルコールを用いて脱水脱色を行い、沈殿物を集める。-40℃でフリーズドライし、粉碎してシロキクラゲ雑多糖抽出物を得る。製品収集率は0.55%（発酵液の重量計）である。
測定の結果、上記の実施例中のシロキクラゲ雑多糖抽出物には主に重量パーセンテージが80-98%の上記シロキクラゲ雑多糖、0.1-3.3%の遊離蛋白及び0.5-8％の灰分が含まれる。同シロキクラゲ雑多糖抽出物の平均分子量は75-140万ドルトンで、そのうち分子量が6000ドルトン以上のものが75-98%（重量）を占める。
実施例4
実施例1〜3のシロキクラゲ雑多糖抽出物を600倍（重量）のイオン除去水に溶解し、溶解した後200mLのクロロフォルムを加える。ブタノール=4：1（体積比）の混合溶液を充分に混ぜ合わせた後、遠心分離機で遠心分離にかけ（4000r/min、30分間）、上澄み液を収集する。遠心分離後の上澄み液と上記のクロロフォルムブタノール混合溶液を3：1（体積比）の割合で混ぜ合わせ、遠心分離機で遠心分離にかけ（4000r/min、30分間）、上澄み液を収集する。以上の操作を繰り返し、水相の280nm箇所のOD値（752紫外線回折格子分光光度計、上海精密科学儀器廠）がそれ以上下がらなくなるまで繰り返し処理する。水相を減圧により三分の一まで圧縮し、濃縮液と水相3倍量（体積比）の95%アルコールを充分に混合して、4000r/minで30分遠心分離を行い、沈殿物を得る。沈殿物を100倍（重量）のイオン除去水に溶かした後、遠心分離にかけ、解けない物質を除去する。ろ過済み液を30cm長さの透析袋内に入れ（透析袋は5000分子量以下の物質を通すことができる）透析（両端を括ってイオン除去水のビン内に吊るし、かつイオン除去水を使用して流水で12時間洗い流す）を行い、5000分子量以上の物質を集める。透析後のろ過済み液と3倍量（体積）の純アルコールを充分に混合し、再度4000r/minで30分遠心分離を行って、沈殿物を得る。沈殿物を無水アルコールで脱水した後、60℃で真空乾燥し、純シロキクラゲ雑多糖（WSK）を取得する。
実施例1〜3のシロキクラゲ雑多糖抽出物を600倍（重量）のイオン除去水に溶解し、溶解した後200mLのクロロフォルムを加える。ブタノール=4：1（体積比）の混合溶液を充分に混ぜ合わせた後、遠心分離機で遠心分離にかけ（4000r/min、30分間）、上澄み液を収集する。遠心分離後の上澄み液と上記のクロロフォルムブタノール混合溶液を3：1（体積比）の割合で混ぜ合わせ、遠心分離機で遠心分離にかけ（4000r/min、30分間）、上澄み液を収集する。以上の操作を繰り返し、水相の280nm箇所のOD値（752紫外線回折格子分光光度計、上海精密科学儀器廠）がそれ以上下がらなくなるまで繰り返し処理する。水相を減圧により三分の一まで圧縮し、濃縮液と水相3倍量（体積比）の95%アルコールを充分に混合して、4000r/minで30分遠心分離を行い、沈殿物を得る。沈殿物を100倍（重量）のイオン除去水に溶かした後、遠心分離にかけ、解けない物質を除去する。ろ過済み液を30cm長さの透析袋内に入れ（透析袋は5000分子量以下の物質を通すことができる）透析（両端を括ってイオン除去水のビン内に吊るし、かつイオン除去水を使用して流水で12時間洗い流す）を行い、5000分子量以上の物質を集める。透析後のろ過済み液と3倍量（体積）の純アルコールを充分に混合し、再度4000r/minで30分遠心分離を行って、沈殿物を得る。沈殿物を無水アルコールで脱水した後、60℃で真空乾燥し、純シロキクラゲ雑多糖（WSK）を取得する。
測定の結果、同シロキクラゲ雑多糖の構造はα-（1-3）マンノースが主鎖であり、主に重量パーセンテージが70-93%の中性総糖、6-28%のグルクロン酸、0.1-3%の構造蛋白から構成される。同シロキクラゲ雑多糖の平均分子量は85-160万ドルトンで、そのうち分子量が6000ドルトン以上のものが90%（重量）以上を占める。その中の中性総糖には主に下記の含有量の糖基が含まれる：35-60%マンノース、10-25%フコース、8-18%キシロース和5-15%グルクロン酸糖，上記の含有量はシロキクラゲ雑多糖の重量で計ったものである。
同シロキクラゲ雑多糖の側鎖には複数の異なる変化組合があるが、その中の一種類の組合せは既にX線輻射方法により以下の結合式Ｉで示される構造ユニットであることが測定されている。
効果実施例1 シロキクラゲ雑多糖（WSK）のビフィズス菌成長及び/または繁殖の促進作用
サンプル名：実施例4で得られたシロキクラゲ雑多糖（WSK）、フラクトオリゴ糖（無錫軽工大学食品学院から提供を受けた標準品）
測定菌株：ビフィズス菌（Bifidobacteria）ATCC 2952、アメリカ菌種保存センター（American Type Culture Collection）から購買
培地：MRS寒天培地
滅菌方法：90℃以下で30分間滅菌する
実験処理は以下の3項に分ける：
対照グループ 1：培地6.3mL＋菌液0.3mL
対照グループ 2：培地6.0mL＋フラクトオリゴ糖0.3mL＋菌液0.3mL（同培地中のフラクトオリゴ糖：培地の質量比は1：80）
実験グループ：培地6.0mL＋シロキクラゲ雑多糖溶液0.3mL+菌液0.3mL（同培地中のフラクトオリゴ糖：培地の質量比は1：80）
実験方法：液体培養法
培養ビフィズス菌培養の手順は以下のとおりである：嫌気菌基礎培地（上海生物製品研究所）にビタミンKを 0.1wt%まで加えて液体培地を作り、通常通りにインキュベーション37℃で48時間静止培養する。
サンプル名：実施例4で得られたシロキクラゲ雑多糖（WSK）、フラクトオリゴ糖（無錫軽工大学食品学院から提供を受けた標準品）
測定菌株：ビフィズス菌（Bifidobacteria）ATCC 2952、アメリカ菌種保存センター（American Type Culture Collection）から購買
培地：MRS寒天培地
滅菌方法：90℃以下で30分間滅菌する
実験処理は以下の3項に分ける：
対照グループ 1：培地6.3mL＋菌液0.3mL
対照グループ 2：培地6.0mL＋フラクトオリゴ糖0.3mL＋菌液0.3mL（同培地中のフラクトオリゴ糖：培地の質量比は1：80）
実験グループ：培地6.0mL＋シロキクラゲ雑多糖溶液0.3mL+菌液0.3mL（同培地中のフラクトオリゴ糖：培地の質量比は1：80）
実験方法：液体培養法
培養ビフィズス菌培養の手順は以下のとおりである：嫌気菌基礎培地（上海生物製品研究所）にビタミンKを 0.1wt%まで加えて液体培地を作り、通常通りにインキュベーション37℃で48時間静止培養する。
測定方法：液体定量有限希釈法。
注：液体培養法の細菌定量計数が560nmOD値の時：1.0OD値＝6×108个菌/mL，2.0OD値＝18×108个菌/mL，3.0OD値＝24×108个菌/mL。
実験結果によれば、液体培地にシロキクラゲ雑多糖（1：80希釈）を添加すると、双岐杆菌の成長と繁殖が促進され、明らかな効果が見られる。図1から見て取れるように、対象グループ1中の無糖の培地についていうと、シロキクラゲ雑多糖は発酵液中の双岐杆菌の数量を明らかに増加させ、シロキクラゲ雑多糖のビフィズス菌の成長及び繁殖に対する促進作用は、現在市場でプレバイオティクスに用いられているフラクトオリゴ糖をも凌ぐ。さらに、ビフィズス菌ATCC
2952のMRS寒天培地中の培養時間は48時間から24時間に前倒しできる。また染色片からわかるように、対象グループ1と比較すると、実験グループの菌体は大きく増えており、同一視野における菌量の密度は明らかに増加している。図2Aと図2Bを参照する。
2952のMRS寒天培地中の培養時間は48時間から24時間に前倒しできる。また染色片からわかるように、対象グループ1と比較すると、実験グループの菌体は大きく増えており、同一視野における菌量の密度は明らかに増加している。図2Aと図2Bを参照する。
效果実施例2 シロキクラゲ雑多糖（WSK）の乳酸菌の成長及び/または繁殖促進の作用
サンプル名：実施例4で得られた的シロキクラゲ雑多糖（WSK）、フラクトオリゴ糖（無錫軽工大学食品学院から提供を受けた基準品）
測定菌株：ブルガリア菌（Lactobacillus）ATCC 11480、中科院微生物研究所から購入。
サンプル名：実施例4で得られた的シロキクラゲ雑多糖（WSK）、フラクトオリゴ糖（無錫軽工大学食品学院から提供を受けた基準品）
測定菌株：ブルガリア菌（Lactobacillus）ATCC 11480、中科院微生物研究所から購入。
培地：MRS寒天培地
培地滅菌方法：90℃下で30分滅菌
実験処理は以下の3項に分ける：
対象グループ 1：培地6.3mL＋菌液0.3mL
対象グループ 2：培地6.0mL＋フラクトオリゴ糖0.3mL＋菌液0.3mL（同培地中のフラクトオリゴ糖：培地の質量比は1：80）
実験方法：液体培養法
乳酸菌の培養：嫌O2菌基礎培地（上海生物製品研究所）にビタミンKを加えて濃度 0.1wt%にして液体培地を生成し、通常のインキュベーションで、37℃で48時間静止培養する。
培地滅菌方法：90℃下で30分滅菌
実験処理は以下の3項に分ける：
対象グループ 1：培地6.3mL＋菌液0.3mL
対象グループ 2：培地6.0mL＋フラクトオリゴ糖0.3mL＋菌液0.3mL（同培地中のフラクトオリゴ糖：培地の質量比は1：80）
実験方法：液体培養法
乳酸菌の培養：嫌O2菌基礎培地（上海生物製品研究所）にビタミンKを加えて濃度 0.1wt%にして液体培地を生成し、通常のインキュベーションで、37℃で48時間静止培養する。
測定方法：液体定量有限希釈法。
注：液体培養法の細菌定量計数が560nmOD値の時：1.0OD値＝6×108个菌/mL，2.0OD値＝18×108个菌/mL，3.0OD値＝24×108个菌/mL。
実験結果によれば、液体培地中にシロキクラゲ雑多糖（1：80希釈）を添加した場合、乳酸菌の成長と繁殖が促進され、明らかな効果があった。図3中からみてとれるように、対照グループ1の無糖の培地と比べると、シロキクラゲ雑多糖は発酵液中の乳酸菌の数量を明らかに増加し、シロキクラゲ雑多糖の乳酸菌の成長と繁殖に対する促進作用は、現在市場でプレバイオティクスに用いられているフラクトオリゴ糖をも凌ぐ。さらにブルガリア菌ATCC
11480のMRS寒天培地中の培養時間は48時間から24時間に前倒しできる。また染色片からわかるように、対照グループ1と比較すると、実験グループの菌体は大きく増えており、同一視野における菌量の密度は明らかに増加している。図4Aと図4Bを参照する。
11480のMRS寒天培地中の培養時間は48時間から24時間に前倒しできる。また染色片からわかるように、対照グループ1と比較すると、実験グループの菌体は大きく増えており、同一視野における菌量の密度は明らかに増加している。図4Aと図4Bを参照する。
效果実施例3 シロキクラゲ雑多糖（WSK）の便秘患者に対する便秘改善効果（改善するか否か）及び正常者の経口効果と服用後の顔面部の皮膚のツヤの変化状況（美容美顔の効能を備えるか否か）を測定する。
実験対象：16名の便秘患者、その症状は排便回数≦3回/週、または大便が干燥していることである。性別年齢は限定せず、3グループに分け、A1、A2、A3グループはそれぞれ0.1wt%、0.2wt%、0.5wt%のシロキクラゲ雑多糖溶液を服用して、大便状况及び顔部分の皮膚のツヤの変化状況を観察した。16名の排便正常者をB1、B2、B3の3グループに分け、それぞれ0.1wt%、0.2wt%、0.5wt%のシロキクラゲ雑多糖溶液を服用して、大便状况及び顔部分の皮膚のツヤの変化状況を観察した。
シロキクラゲ雑多糖溶液の配合説明：無菌処理、飲用者の健康安全を保証し、細菌が試験結果に与える影響を排除した。
1）充分な量の0.1wt%、0.2wt%、0.5wt%シロキクラゲ雑多糖溶液を調合して試験用に備え、同シロキクラゲ雑多糖は実施例4で得られたシロキクラゲ雑多糖（WSK）とする。
2）調合時には細菌測定結果<20cfu/gの無菌のシロキクラゲ雑多糖粉末を用い、防腐剤にはソルビトール（添加量は0.1〜0.2wt%、中国食品添加剤手帳、ソルビトールの説明書及び微生物試験の結果を参照）を選択する。
3）調合方法：少量の蒸留水を取って10分間加熱煮沸してから70〜80℃に冷却した後ソルビトールを加え、溶かして使用に備える。残りの蒸留水にシロキクラゲ雑多糖の粉末を加えて均一に攪拌して充分に溶かし、しばらくしたらソルビトール水溶液を加えて、均等にかき混ぜる。全過程では厳しく無菌とする。
4）ボトル（PEボトル）洗浄方法：75%のアルコールに浸し、クリーンルームで24時間陰干しする。
5）要求：無菌、干燥、密封、調合済みのシロキクラゲ雑多糖溶液の保存に用いる。
実験方法：便秘患者と排便正常者が、観察期間内に毎日2回、朝食、夕食の2時間後にシロキクラゲ雑多糖溶液を服用する。
A1及びB1グループ：毎回の服用量は100mL、1日2回
A2及びB2グループ：毎回の服用量は100mL、1日2回
A3及びB3グループ：毎回の服用量は100mL、1日2回
連続7日服用した後、服用者の排便回数に対して統計をとるとともに体に違和感がないか及び7日前に観察した顔面部皮膚のツヤとの変化状況を記録した。
A2及びB2グループ：毎回の服用量は100mL、1日2回
A3及びB3グループ：毎回の服用量は100mL、1日2回
連続7日服用した後、服用者の排便回数に対して統計をとるとともに体に違和感がないか及び7日前に観察した顔面部皮膚のツヤとの変化状況を記録した。
シロキクラゲ雑多糖の便秘改善の効果及び便秘患者の皮膚ツヤの改善状況については表1、異なる濃度のシロキクラゲ雑多糖の便秘に対する改善効果については図5、シロキクラゲ雑多糖の大便正常者に対する整腸便通効果と服用者の皮膚のツヤ改善状況については表2、異なる濃度のシロキクラゲ雑多糖溶液の便秘患者及び正常者大便に対する潤滑作用は図6を参照する。
実験結果は以下を示している。
1）シロキクラゲ雑多糖抽出物には大便潤滑の作用があり、また便秘を改善できる。
2）改善效果はシロキクラゲ雑多糖抽出物の濃度の増加に伴い明らかに増加する。
3）改善効果に対する性別、年齢の影響は明らかではない。
4）便秘患者の身体に副作用はなく、胃の膨張、腹痛等の感覚をもたらすことはない。
5）シロキクラゲ雑多糖抽出物は正常者にも副作用はなく、腹部の膨張感はなく、大便も潤滑である。
6）シロキクラゲ雑多糖抽出物は皮膚ツヤを改善する美顔美容作用を備え、シロキクラゲ雑多糖抽出物の濃度の増加に伴い改善効果は明らかに上がる。
效果実施例4 シロキクラゲ雑多糖抽出の便秘患者に対する便秘改善効果（改善されるか否か）及び正常者の経口効果と服用後の顔面部の皮膚のツヤの変化状況（美容美顔の効能を備えるか否か）を測定する。
実験対象：18名の便秘患者、その症状は排便回数≦3回/週または大便が干燥していることで、性別年齢は限定しない。C1、C2、C3の3グループに分けて、それぞれ0.1wt%、0.2wt%、0.5wt%のシロキクラゲ雑多糖抽出物溶液を服用し、大便の状況と顔面部の皮膚のツヤの変化状況を観察した。18名の排便正常者をD1、D2、D3の3グループに分けて、それぞれ0.1wt%、0.2wt%、0.5wt%のシロキクラゲ雑多糖抽出物溶液を服用し、大便の状況と顔面部の皮膚のツヤの変化状況を観察した。
シロキクラゲ雑多糖抽出物溶液の調合説明：無菌処理、飲用者の健康安全を保証し、細菌の試験結果への影響を排除する。
1）充分な量の0.1wt%、0.2wt%、0.5wt%のシロキクラゲ雑多糖溶液を調合して試験用に備え、同シロキクラゲ雑多糖は実施例１で得られたシロキクラゲ雑多糖（WSK-1）、シロキクラゲ雑多糖の純度は80%とする。
2）調合時には細菌測定結果<20cfu/gの無菌のシロキクラゲ雑多糖粉末を用い、防腐剤にはソルビトール（添加量は0.1〜0.2wt%、中国食品添加剤手帳、ソルビトールの説明書及び微生物試験の結果を参照）を選択する。
3）調合方法：少量の蒸留水を取って10分間加熱煮沸してから70〜80℃に冷却した後ソルビトールを加え、溶かして使用に備える。残りの蒸留水にシロキクラゲ雑多糖の粉末を加えて均一に攪拌して充分に溶かし、しばらくしたらソルビトール水溶液を加えて、均等にかき混ぜる。全過程では厳しく無菌とする。
4）ボトル（PEボトル）洗浄方法：75%のアルコールに浸し、クリーンルームで24時間陰干しする。
5）要求：無菌、干燥、密封、調合済みのシロキクラゲ雑多糖溶液の保存に用いる。
実験方法：便秘患者と排便正常者が、観察期間内に毎日2回、朝食、夕食の2時間後にシロキクラゲ雑多糖溶液を服用する。
C1及びD1グループ：毎回の服用量は100mL、毎日2回
C2及びD2グループ：毎回の服用量は100mL、毎日2回
C3及びD3グループ：毎回の服用量は100mL、毎日2回
連続7日服用した後、服用者の排便回数に対して統計をとるとともに体に違和感がないか及び7日前に観察した顔面部皮膚のツヤとの変化状況を記録した。
C2及びD2グループ：毎回の服用量は100mL、毎日2回
C3及びD3グループ：毎回の服用量は100mL、毎日2回
連続7日服用した後、服用者の排便回数に対して統計をとるとともに体に違和感がないか及び7日前に観察した顔面部皮膚のツヤとの変化状況を記録した。
シロキクラゲ雑多糖抽出物の便秘改善の効果及び便秘患者の皮膚ツヤの改善状況については表3、異なる濃度のシロキクラゲ雑多糖抽出物の便秘に対する改善効果については図7、シロキクラゲ雑多糖抽出物の大便正常者に対する整腸便通効果と服用者の皮膚のツヤ改善状況については表4、異なる濃度のシロキクラゲ雑多糖抽出液の便秘患者及び正常者大便に対する潤滑作用は図8を参照する。
実験結果は以下を示している：
1）シロキクラゲ雑多糖抽出物には大便潤滑の作用があり、また便秘を改善できる。
1）シロキクラゲ雑多糖抽出物には大便潤滑の作用があり、また便秘を改善できる。
2）改善效果はシロキクラゲ雑多糖抽出物の濃度の増加に伴い明らかに増加する。
3）改善効果に対する性別、年齢の影響は明らかではない。
4）便秘患者の身体に副作用はなく、胃の膨張、腹痛等の感覚をもたらすことはない。
5）シロキクラゲ雑多糖抽出物は正常者にも副作用はなく、腹部の膨張感はなく、大便も潤滑である。
6）シロキクラゲ雑多糖抽出物は皮膚ツヤを改善する美顔美容作用を備え、改善効果はシロキクラゲ雑多糖抽出物の濃度の増加に伴い明らかに増加する。
まとめ：上記の実施例からわかるように、シロキクラゲ雑多糖抽出物及びシロキクラゲ雑多糖（WSK）はプロバイオティクスの成長及び/または繁殖を促進する良好な促進剤であり、また消化系統または生殖系統中のプロバイオティクスの成長及び/または繁殖を良好に促進する促進因子でもあって、大腸内の微生物コロニーのバランスを調節できる。またこのシロキクラゲ雑多糖抽出物及びシロキクラゲ雑多糖は整腸排便の作用も備えている。この作用は消化系統中のプロバイオティクスの成長及び/または繁殖が促進されるために引き起こされている可能性があり、シロキクラゲ雑多糖抽出物及びシロキクラゲ雑多糖は整腸排便を通して毒素を体外に排出し、シロキクラゲ雑多糖の栄養成分を吸収することで毒素の排出及びデトックス美顔美容の目的を達することができる。このため、シロキクラゲ雑多糖抽出物及びシロキクラゲ雑多糖（WSK）は一種の健康栄養食品である。
Claims (14)
- 一種のシロキクラゲ雑多糖で、その構造はα-（1-3）マンノースを主鎖とし、主に重量パーセンテージが70-93%の中性総糖、6-28%のグルクロン酸、0.1-3%の構造蛋白から構成される；同シロキクラゲ雑多糖の平均分子量は85-160万ドルトンで、そのうち分子量が6000ドルトン以上のものが90%（重量）以上を占める。
- 請求項１のシロキクラゲ雑多糖において、上記の中性総糖に主に以下の含有量の糖基が含まれることである：35-60%のマンノース、10-25%のフコース、8-18%のキシロースと5-15%の葡萄糖、上記の含有量はシロキクラゲ雑多糖の重量計であることを特徴とする。
- 請求項１のシロキクラゲ雑多糖において、上記のシロキクラゲ雑多糖が以下の構造式1に示す構造ユニットを含んでいることであることを特徴とする。
同構造ユニットの分子量は2578.5または2724.7である。 - 一種のシロキクラゲ雑多糖抽出物は、請求項1または2で述べる重量パーセンテージが80-98%のシロキクラゲ雑多糖、0.1-3.3%の遊離蛋白及び0.5-8％の灰分を含む。同シロキクラゲ雑多糖抽出物の平均分子量は75-140万ドルトンで、そのうち分子量が6000ドルトン以上のものが75-98%（重量）を占める。
- 請求項１乃至３のいずれかの一項で述べるシロキクラゲ雑多糖、または請求項4のシロキクラゲ雑多糖抽出物は、プロバイオティクスの成長及び/または繁殖を促進する薬品、飲食品または健康食品調合の用途に用いられる。
- 請求項１乃至３のいずれかの一項で述べるシロキクラゲ雑多糖、または請求項4のシロキクラゲ雑多糖抽出物の便秘改善機能を備えた薬品、飲食品または健康食品の調合中における用途。
- 請求項１乃至３のいずれかの一項で述べるシロキクラゲ雑多糖、または請求項4のシロキクラゲ雑多糖抽出物の毒素の排出機能及びデトックス美顔美容機能を備えた薬品、飲食品または健康食品の調合中における用途。
- 請求項5の用途において、上記のプロバイオティクスはビフィズス菌及び/または乳酸菌であることを特徴とする。
- 請求項8の用途において、上記のビフィズス菌はビフィダムであり、乳酸菌は徳氏デルブリュック菌ブルガリア亜種であることを特徴とする。
- 請求項9の用途において、上記のビフィダムはビフィズス菌ATCC 2952であり、徳氏デルブリュック菌ブルガリア亜種はブルガリア乳酸菌ATCC 11480であることを特徴とする。
- 請求項5乃至10のいずれの一項で述べる用途において、上記の薬品は粉末剤、錠剤、カプセル剤（ソフトカプセルとハードカプセルを含む）、液体剤、浮遊液、乳剤、口服液、ゼリーまたは水溶性服用剤である；上記の飲食品はシロキクラゲ雑多糖またはシロキクラゲ雑多糖抽出物を含む濃縮液及び/または干燥物の飲料または食品であり、飲食品の応用には制限はなく、粉末剤、錠剤、カプセル剤（ソフトカプセルとハードカプセルを含む）、顆粒、水溶性服用剤、ゼリー、飲料、乳製品、ヨーグルトまたはスナック焼き物等に使用できる；上記の健康食品とは粉末剤、錠剤、カプセル剤（ソフトカプセルとハードカプセルを含む）、液体剤、浮遊液、乳剤、経口液、ゼリーまたは水溶性服用剤であることを特徴とする。
- 請求項１乃至３のいずれかの一項で述べるシロキクラゲ雑多糖、または請求項4のシロキクラゲ雑多糖抽出物の体外におけるプロバイオティクスの成長及び/または繁殖を促進する促進剤中の用途。
- 請求項12の用途において、上記のプロバイオティクスはビフィズス菌及び/または乳酸菌であることを特徴とする。
- 請求項13の用途において、上記のビフィズス菌はビフィズス菌ATCC 2952、乳酸菌はブルガリア乳酸菌ATCC 11480であることを特徴とする。
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