JP2009080119A - 生物学的および生化学的サンプルの蛍光測定用低バックグラウンドマルチウェルプレート - Google Patents
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Abstract
【解決手段】シクロオレフィンコポリマーを含む、低蛍光性および高透過性を有する層を、ポリマープラットフォームに熱溶接することを含み、前記層が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じるマルチウェルプレートおよびプラットフォームは蛍光測定に特によく適している。
【選択図】なし
Description
本発明は、マルチウェルプレートおよびプラットフォームのような、分光学的測定装置を包含する。典型的には、かかる装置は、シクロオレフィンポリマーを含んでなる低蛍光性かつ高透過性を有する層と、この層を保持するためのマルチウェルプレートまたはプラットフォームのいずれかのウェルとを含む。
特に断りのない限り、本明細書で用いられるすべての専門用語および科学用語は、本発明が属する当業者により通常理解されているものと同様の意味を有する。一般に、本明細書で用いられる学術用語、ならびに以下に記載する分光学、薬剤発見、細胞培養、分子遺伝学、プラスチック製品、ポリマー化学、診断法、アミノ酸および核酸化学、および以下に記載の糖化学における実験室手法は周知なものであり、当該技術分野で通常使用されている。プラスチックの製造、シグナル検出、組換え核酸法、ポリヌクレオチド合成および微生物培養、および形質転換(例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション)には標準的な技法が典型的に使用される。この技術および手法は一般に、当該技術分野において慣用の方法および本明細書の至るところで見られる種々の総説文献(概略的には、蛍光性技術に関するSambrookら, MolecularCloning: A LaboratoryManual,第2版(1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor.N.Y.,およびLakowicz J.R. Principlesof Fluorescence Spectroscopy, New York: Plenum Press(1983)を参照;これは引用により本明細書の一部とみなす)に従って実施される。標準的技法は、化学合成、化学分析、および生化学的アッセイにために使用される。本開示を通じて使用されているように、以下の用語は、特に断りのない限り、以下の意味を有すると理解されるべきである:
1)蛍光測定に有用なシクロオレフィンウェル底部を有するマルチウェルプレート、
2) 蛍光測定に有用なシクロオレフィン層またはウィンドウを有するプラットフォーム、
3)(1)および(2)を製造する方法、ならびに
4)(1)および(2)に部分的に基づいた検出方法およびシステム
を包含する。
本発明は、マルチウェルプレートおよびプラットフォームなどの分光測定用装置を包含する。典型的には、かかる装置はシクロオレフィンポリマーを含んでなる低蛍光性かつ高透過性を有する層と、この層を保持するためのマルチウェルプレートのウェルまたはプラットフォームのいずれかとを含む。マルチウェルプレートおよびプラットフォームの双方を下記に記載する。
本発明のマルチウェルプレートは、シクロオレフィンポリマーを含んでなる低蛍光性かつ高透過性を有する層と、この層を保持または形成するためのウェルとを有してなる。シクロオレフィンは通常、マルチウェルプレートのウェルの底面の少なくとも一部を構成する。多くの実施形態では、製造を容易にするために、シクロオレフィンは実質的に底部全体を構成する。またシクロオレフィンを用いて、プレートの壁面を形成することができ、これがプレート固有の蛍光を減ずる第2の手段となる。本発明のいくつかの成形例では、シクロオレフィンは、所望により、プレート底部、ウェル壁面、ウェル同士を互いに連結するウェル間の構造部材、プレート側面、プレート上面または下面、ならびにプレート蓋を含むプレートのいずれかの部分を構成する。
発明のプラットフォームは、通常は、シクロオレフィンポリマーまたは他の低蛍光性物質を含んでなる低蛍光性かつ高透過性を有する層またはウィンドウと、この層を保持または形成するための足場もしくはフレームとを含んでなる。ウィンドウは所定の寸法を有し、フレーム上に、2次元配列をはじめとする任意の幾何学的配列で多数のウィンドウとして配列できる。いくつかの実施形態では、該ウィンドウは、光がしばしば該ウィンドウを通過する分光学的事象の検出を可能にする。他の実施形態では、該ウィンドウは基本的に、例えば、光の屈折または反射率の測定による、化学反応またはアッセイの検出を可能にする反応部位またはアッセイ部位となる。ウィンドウが反応またはアッセイ部位であるとき、光は必ずしもウィンドウを通過しなくてよい。
この節は、物質、選択基準、および本明細書に記載のマルチウェルプレートおよびプラットフォーム用のシクロオレフィンの選択を容易にする迅速な試験について記載する。
本発明者らは、分光シグナル、特に蛍光シグナルを検出するための適当な特性を呈するポリマーを求めて、広範囲にわたる種々のポリマーの研究を行った。本発明に用いられる物質は表1に挙げられた市販のプレートには使われていなかった。驚いたことに、これらの物質は、本明細書において初めて実証された、低い固有蛍光等の非常に優れた特性を呈する。「シクロオレフィン」は、一般に、その使用に関して修飾されていない限り、シクロオレフィンポリマーをいい、本明細書で例示したもののようなコポリマーを含む。「シクロオレフィンコポリマー」とは、一般に、その使用に関して修飾されていない限り、シクロオレフィンコポリマーをいう。
本発明で使用されるシクロオレフィンフィルムまたは樹脂の所望の特性は、所望のマルチウェルプレートまたはプラットフォームのタイプにより多様である。一般に、その物質は、低蛍光性、高透過性、変形に耐え、実質的に単一プレート(特に、分光学的実施態様に対して)のままにしておくのに十分な堅牢性、良好な化学的不活性、比較的低い細胞傷害性、低水分吸収、約150℃までの耐熱性/撓み、ならびに酸および塩基に対する耐性を有する最終生成物を得るために選択される。良好な成形特性を有する出発物質が特に望ましい。
本発明はシクロオレフィンに基づくマルチウェルプレートおよびプラットフォームを製造する方法を包含する。熱溶接、インサート成形、射出成形、ならびに本明細書に記載の、および当該技術分野で公知の他の方法をはじめとする種々の方法を使用することができる。1つの方法は、シクロオレフィンコポリマーを含んでなる、低蛍光性かつ高透過性を有する層をポリマープラットフォームに熱溶接することを含んでなる。この方法では、典型的には、シクロペンテン・ポリエチレンコポリマー、シクロヘキサン・ポリエチレンコポリマー、およびシクロヘプテン・ポリエチレンコポリマーからなる群より選択されるシクロオレフィンコポリマーを使用する。この方法は選択的に、あるいは所望により、この層とポリマーを十分量の高周波エネルギーに曝して、この層とポリマーの内部加熱を促進するか、または超音波溶接する工程を含んでもよい。あるいは、この方法は、ポリマーを溶融させるのに十分な時間の間、ウェルを形成する層とポリマーを約320℃まで加熱する必要があるかも知れない。圧力をかけて溶接工程を促進することもできる(例えば、低粘性モノマー溶液を用いる低圧法については、層とポリマーに対して約100〜1,000psiの圧力、インサート成形などの高圧法については、約10,000〜25,000psi)。
本発明はまた、サンプルと分光測定用装置を接触させることを含んでなるシグナル検出方法であって、シクロオレフィンコポリマーを含んでなる、低蛍光性かつ高透過性を有する層と、この層を保持するためのプラットフォームを有してなり、該プラットフォームルがサンプルからシグナルを検出するためのものであり、ただし、該プラットフォームがマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートである場合は、マイクロタイターウェル数は864を上回ることはなく、サンプルからシグナルを検出することを含んでなる方法を提供する。好ましくは該検出は、マルチウェルプレートまたはプラットホームの底部からのエピフルオレセンスを検出することを含んでなる。この検出工程ではまた、マルチウェルプレートにおけるウェルの密度および配列に対応する光学的配列を利用することもできる。本発明を用いるアッセイでは種々の標識が使用されてよい。アッセイ系の一部分としての使用のため、マルチウェルプレートまたはプラットホームには付着部位を提供することがしばしば所望されるであろう。かかる標識は直接または間接的にポリマー表面に付着させてよい。本発明とともに、比色分析法、分光光度分析法、発光法および蛍光法のような種々の分光技術を用いてよい。屈折および反射法のような、光に基づく非分光学的方法を用いてもよい。
蛍光プローブを用いて本発明を行うにあたり、蛍光色素または基質のような、種々のタイプの蛍光モニター系が使用可能であることが認められている。好ましくは、例えば96ウェルまたはそれ以上のマイクロタイタープレートのような高流量のスクリーニングに供されるシステムを使用する。蛍光物質を用いてアッセイを行う方法は当該技術分野において十分公知であり、例えばLakowicz, J.R., 蛍光分光分析の原理,New York:Plenum Press(1983);Herman, B., 共鳴エネルギー移動顕微鏡検査法,生存培養細胞の蛍光顕微鏡検査法,Part B, Methods in Cell Biology, vol.30, Taylor, D.L. & Wang, Y.L.編, San Diego:Academic Press(1989), 219-243頁;Turro, N.J., 現代の分子光化学,Menlo Park:Benjamin/Cummings PublishingCol, Inc.(1978), 296-361頁および分子プローブカタログ(1997), OR, USAに記載されている。
1つの実施態様では、本発明は、マルチウェルプレートまたはプラットホームを有する、分光学的事象をモニターするための検出器を提供する。好ましくは、この検出器は蛍光検出器であり、より好ましくはエピフルオレセンスのために使用することのできる型である。特にプレートあたり96、192、384および864ウェルを有するプレートのための本発明のいくつかの実施態様において、多くの検出器が利用可能である。かかる検出器は米国特許第5,589,351号(Harootunian)、米国特許第5,355,215号(Schroeder)、およびPCT特許出願WO93/13423(Akong)に記載されている。あるいは、全プレートはMolecular Dynamics Fluor-Imager595のような画像処理装置を用いて「読み取って」もよい。本発明のプラットホームの適用に関しては、分光分析ならびに屈折光または反射光の測定のため、関連技術分野で公知の従来の光学ディスクリーダーを採用することができる。
種々の選択されたフィルムの蛍光特性を検討するため、所定の励起波長における蛍光放出について、種々のポリマーフィルムを試験し、2タイプの溶融石英ガラスシート(標準)と比較した。これらの実験は、励起波長315〜425nmのSPEX FluorologIII蛍光光度計を使用して行った。フィルムおよびガラス材料はホルダー上に配置した。サンプル表面に励起光線が垂直に当たるようにサンプルを置いた。サンプルからの蛍光放出は約12.5度の角度で集めた。このサンプルからの蛍光放出を鏡でモノクロメーター上に反射させた。放出放射線は単色の格子により選択し、機器の光電子増倍管により検出した。SPEX FluorologIII蛍光光度計は、校正および機器測定の日間差のバックグラウンド補正のために水のラマン放射線を用いる。このバックグラウンド補正は毎日、校正のため、機器を使用する前に行った。校正ファイルはその日に行われた測定値とともに保存し、次いでSPEX機器を用いるそれに続く測定値と直接比較し、機器変動を補正することができる。
種々の選択されたフィルムの蛍光特性をさらに検討するために、所定の励起波長における蛍光放出について、種々のポリマーフィルムを試験し、2種の溶融石英ガラスシート(標準)と比較した。これらの実験は、水性溶媒を用いる生化学的または細胞に基づくアッセイをシミュレートするために行った。従って、水性溶媒を滴下できるようにフィルムを水平プラスチックホルダー上に乗せた。3mlの水をフィルム上に滴下し、ツァイス倒立蛍光顕微鏡を用いて蛍光を記録した。フィルムなしのバックグラウンドを記録して、フィルム存在時のシグナルから差し引いた。
シクロオレフィンの細胞傷害性を、シクロオレフィン製マルチウェルプレート中で細胞を37℃にて60時間培養することにより評価した。約90個のチャイニーズハムスター卵巣(CHO)を含有する容量1.8μlの培地を、シクロオレフィン製マルチウェルプレートに先細ピペットを用いて分注した。蒸発を防ぐためにウェル上にガラスカバーを置いた。細胞を5%CO2下、37℃、相対湿度90%のインキュベーター中で60時間インキュベートした。次いで生体染色剤カルセインを装填することにより細胞を生存率に関して試験した。このCHO細胞を4μMカルセイン/AMを含有する溶液中で室温にて30分間インキュベートすることにより装填を行った。細胞総数を測定するために位相差顕微鏡を、また生存細胞数を測定するために蛍光顕微鏡の双方を使用することにより細胞を検査した。カルセイン染色剤の装填により、ほぼ95%以上の細胞が生存していることが示された(およそ200細胞/ウェル)。
シクロオレフィンの細胞傷害性を検討するために、細胞生存性のためのアッセイを用いてシクロオレフィンフィルムを試験した。生体染色剤であるCCF2は、PCT公開公報WO96/30540(Tsien)に記載されているように、細胞中に分散させ、分子上のエステル基を開裂させ、その結果細胞内部で捕捉される負電荷を持つ分子を生ずる、エステラーゼ活性を有する生細胞により捕捉される。捕捉された色素は生細胞中で緑色に見える。CCF2をJurkat細胞とともに、黒色の壁面およびシクロオレフィン底を有する1μlのウェル中で1時間インキュベートし、おおよその蛍光をモニターした。これらのJurkat細胞は、本質的にβ-ラクタマーゼを発現する。実施例3の条件下で、細胞を60時間培養した。60時間後、β-ラクタマーゼ活性をCCF2を用いて測定した。細胞が青色に見え、これは、通常β-ラクタマーゼを含有しないこれらの細胞の中で、実際にβ-ラクタマーゼが活性であることを示す。これらの結果は、このフィルムは低い蛍光バックグラウンドしか生じないため、シクロオレフィンを感度の高い蛍光アッセイに用いることが可能であることを証明している。これは、アッセイ容量が微量でよく(例えば2μlまたはそれ以下)、微弱なシグナルの測定(例えばより少ない細胞またはより少ない数の単離生化学的標的)も可能であるために特に有益である。
本出願に記載した特許文献および科学文献を含むすべての刊行物は、個々の刊行物の各々がそれぞれ参考として組み込まれるのと同様に、あらゆる目的のためにその全体が参考として本明細書に組み込まれる。
Claims (103)
- シクロオレフィンコポリマーを含む、低蛍光性および高透過性を有する層を、ポリマープラットフォームに熱溶接することを含み、前記層が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、分光測定装置の製造方法。
- 前記プラットフォームが、マイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートである、請求項1記載の方法。
- 前記ポリマーがシクロペンテン・ポリエチレンコポリマー、シクロヘキサン・ポリエチレンコポリマーおよびシクロヘプテン・ポリエチレンコポリマーからなる群より選択される、請求項1記載の方法。
- 前記層および前記ポリマーを十分量の高周波エネルギーに曝して、前記層と前記ポリマーの内部加熱を促進する工程をさらに含んでなる、請求項1記載の方法。
- 前記熱溶接が前記層と前記ポリマーを320℃まで加熱することをさらに含んでなる、請求項1記載の方法。
- 前記層と前記ポリマーに15,000〜22,000PSIの圧力をかける工程をさらに含んでなる、請求項1記載の方法。
- アッセイ用試薬、および
シクロオレフィンコポリマーを含む低蛍光性および高透過性を有する層と、前記層を保持するためのプラットフォームとを含んでなる装置、
を有してなり、前記プラットフォームがサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、前記層が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、分光測定システム。 - 前記プラットフォームがマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有する、請求項7記載のシステム。
- 検出器をさらに有してなる、請求項7記載のシステム。
- a) シクロオレフィンコポリマーを含む低蛍光性および高透過性を有する層と、前記層を保持するためのプラットフォームとを有してなり、前記プラットフォームがサンプルからのシグナルを検出するためのものである分光測定装置にサンプルを接触させ、次いで
b) 前記サンプルからのシグナルを検出する、
ことを含み、前記層が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じるシグナル検出法。 - 前記プラットフォームがマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートである、請求項10記載の方法。
- 前記検出が前記プラットフォーム底部からのエピフルオレッセンスを検出することを含む、請求項10記載の方法。
- 前記プラットフォームがマルチウェルプレートであり、かつ、前記検出が前記マルチウェルプレート内のウェルの密度に対応する光学アレイを用いて検出することを含む、請求項10記載の方法。
- 各ウェルが壁面と、シクロオレフィンコポリマーを含む底部の低蛍光性および高透過性部分とを有してなる複数のウェルと、
前記ウェルが内部に配置されているフレームと、
を有してなる分光測定用マルチウェルプレートであって、
前記マルチウェルプレートはサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、ただし、前記マルチウェルプレートはマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、分光測定用マルチウェルプレート。 - 前記マルチウェルプレートがマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートである、請求項14記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートが96〜3,456のウェルを有する、請求項14記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートが864以上のウェルを有する、請求項14記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートのウェル中心からウェル中心までの間隔が3mm未満である、請求項14記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーの厚さが20〜200ミクロンである、請求項14記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーの厚さが30〜80ミクロンである、請求項14記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーの厚さが20〜200ミクロンである、請求項14記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーが300〜500nmの光からの低蛍光を有し、かつ、低蛍光性および高透過性部分が前記底部の実質的にすべてにわたる、請求項14記載のマルチウェルプレート。
- 前記フレームがシクロオレフィンコポリマー製である、請求項14記載のマルチウェルプレート。
- 前記層が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において、100ミクロンの厚さの溶融石英ガラスに比べ、200パーセントまたはそれ以下の蛍光を生じる、請求項14記載のマルチウェルプレート。
- ウェル、およびシクロオレフィンコポリマーからのマルチウェルプレートの前記ウェルの底部をインサート成形することを含んでなる、分光測定用マルチウェルプレートの製造方法であって、
前記マルチウェルプレートはサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、ただし、前記マルチウェルプレートはマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、上記方法。 - 前記マルチウェルプレートがマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートである、請求項25記載の方法。
- 射出成形を260〜320℃の間で行う、請求項25記載の方法。
- シクロオレフィンコポリマーを含む低蛍光性および高透過性を有する層と、前記層を保持するためのプラットフォームとを有してなる装置であって、
ただし、前記プラットフォームが光学情報記録媒体のフォーマットを有する場合は、前記プラットフォームが軟質金属を用いる記録層を欠いており、前記層が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、上記装置。 - 前記プラットフォームがマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートである、請求項28記載の装置。
- 各ウェルが壁面と、シクロオレフィンコポリマーを含む底部の低蛍光性および高透過性部分とを有する複数のウェルと、
前記ウェルが内部に配置されているフレームと、
を有してなる、生物学的および生化学的サンプルの蛍光測定用マルチウェルプレートであって、
前記マルチウェルプレートはサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、だだし、前記マルチウェルプレートはマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、上記マルチウェルプレート。 - 前記マルチウェルプレートがマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートである、請求項30記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートが標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントをもたない、請求項31記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートが864以上のウェルを有する請求項32記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートはウェル中心からウェル中心までの間隔が3mm未満であるウェルを有する、請求項33記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンコポリマーの厚さが20〜200ミクロンである、請求項34記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンコポリマーの厚さが30〜80ミクロンである、請求項35記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンコポリマーの厚さが20〜200ミクロンである、請求項30記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において、100ミクロンの厚さの溶融石英ガラスに比べ、200パーセントまたはそれ以下の蛍光を生じる、請求項37記載のマルチウェルプレート。
- 前記フレームがシクロオレフィンコポリマー製である、請求項38記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において、100ミクロンの厚さの溶融石英ガラスに比べ、200パーセントまたはそれ以下の蛍光を生じる、請求項30記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートがインサート成形されている、請求項40記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートが96〜3,456のウェルを有する、請求項40記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートが864以上のウェルを有する、請求項30記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートがシクロオレフィンポリマー以外の材料から製造されたウェル壁面を有してなる、請求項30記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートがバックグラウンド低下のための色素をさらに含む、請求項43記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が結合対の一方のメンバーをさらに含む、請求項40記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が複数の生細胞をさらに含む、請求項40記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートがシクロオレフィンコポリマー製である、請求項40記載のマルチウェルプレート。
- アッセイ用試薬、および
シクロオレフィンコポリマーを含む低蛍光性および高透過性を有する層と、前記層を保持するためのプラットフォームとを含んでなる装置、
を有してなり、前記プラットフォームがサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、前記層が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、分光測定システム。 - 前記プラットフォームがマイクロタイターウェルを有する標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するマイクロタイタープレートである、請求項49記載のシステム。
- さらに検出器を含んでなる、請求項49記載のシステム。
- 各ウェルが壁面と、シクロオレフィンポリマーを含む低蛍光性および高透過性部分を有する底部とを有してなる複数のウェルと、
前記ウェルが内部に配置されているフレームと、
を有してなるマルチウェルプレートであって、前記マルチウェルプレートはサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、かつ標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するものであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、マルチウェルプレート。 - 前記低蛍光性および高透過性部分が前記底部の実質的にすべてにわたる、請求項52記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートが3456以上のウェルを有する、請求項52記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートはウェル中心からウェル中心までの間隔が2.5mm未満であるウェルを有する、請求項53記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーの厚さが20〜200ミクロンである、請求項53記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーの厚さが30〜80ミクロンである、請求項56記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーの厚さが20〜200ミクロンである、請求項52記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーが300〜500nmの励起光からの低い自己蛍光を有する、請求項52記載のマルチウェルプレート。
- 前記フレームがシクロオレフィンポリマー製である、請求項59記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が前記ウェルとの熱溶融溶接部を有してなる、請求項58記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において、100ミクロンの厚さの溶融石英ガラスに比べ、200パーセントまたはそれ以下の蛍光を生じる、請求項61記載のマルチウェルプレート。
- 前記壁面がバックグラウンド低下のための色素を含む、請求項61記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が結合対の一方のメンバーをさらに含む、請求項63記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が複数の生細胞をさらに含む、請求項63記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が化学物質の結合のために誘導体化される、請求項63記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が生物学的細胞の付着を高める被覆をさらに含む、請求項66記載のマルチウェルプレート。
- 各ウェルがポリマー壁を含むマルチウェルプレートの製造方法であって、
シクロオレフィンポリマーを含む低蛍光性および高透過性を有する底部を、前記マルチウェルプレートのポリマー壁面に熱溶接することを含んでなり、
前記ウェルが前記フレーム内に配置されており、前記マルチウェルプレートがサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、かつ、標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するものであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、上記方法。 - 前記ポリマーがシクロオレフィンポリマーである、請求項68記載の方法。
- 熱溶接が30〜150ミクロンのシクロオレフィン底部をもたらす、請求項69記載の方法。
- 前記熱溶接が前記底部および前記ポリマーを200〜300℃まで加熱することをさらに含む、請求項70記載の方法。
- 前記底部および前記ポリマーに100〜1,000PSIの圧力をかける工程をさらに含む、請求項70記載の方法。
- ウェル、およびシクロオレフィンポリマーからのマルチウェルプレートの前記ウェルの底部をインサート成形することを含んでなるマルチウェルプレートの製造方法であって、前記マルチウェルプレートがサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、かつ、標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するものであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、上記方法。
- インサート成形を260〜320℃で行う、請求項73記載の方法。
- a) アッセイ用試薬、および
b) i) 各ウェルが壁面と、シクロオレフィンポリマーを含む低蛍光性および高透過性部分を有する底部とを含んでなる複数のウェルと、
ii) 前記ウェルが内部に配置されているフレームと、
を有してなるマルチウェルプレートであって、前記マルチウェルプレートがサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、かつ、標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するものであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じるマルチウェルプレート、
を含んでなるキット。 - さらに検出器を含んでなる、請求項75記載のキット。
- 蛍光検出法であって、
a) i) a)各ウェルが壁面と、シクロオレフィンポリマーを含む低蛍光性および高透過性部分を有する底部とを含んでなる複数のウェルと、
b)前記ウェルが内部に配置されているフレームと、
を有してなるマルチウェルプレートであって、前記マルチウェルプレートがサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、かつ、標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するものであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じるマルチウェルプレートに、
サンプルを接触させ、
b) 次いで、前記サンプルからのシグナルを検出する、
ことを含んでなる、上記方法。 - 前記検出が前記マルチウェルプレートの底部からのエピフルオレッセンスを検出することを含む、請求項77記載の方法。
- 前記検出が前記低蛍光性および高透過性部分を通して光を通過させることを含む、請求項77記載の方法。
- 蛍光を検出するマルチウェルプレートであって、
各ウェルが壁面と、シクロオレフィンコポリマーを含む低蛍光性および高透過性部分を有する底部とを有してなる複数のウェルと、
前記ウェルが内部に配置されているフレームと、
を有してなり、前記マルチウェルプレートがサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、かつ、標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するものであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、上記マルチウェルプレート。 - 生物学的および生化学的サンプルの蛍光測定用マルチウェルプレートであって、
各ウェルが壁面と、シクロオレフィンコポリマーを含む低蛍光性および高透過性部分を有する底部とを含んでなる複数のウェルと、
前記ウェルが内部に配置されているフレームと、
を有してなり、前記マルチウェルプレートが生物学的および生化学的サンプルからの蛍光シグナルを検出するためのものであり、かつ標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するものであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、上記マルチウェルプレート。 - 前記低蛍光性および高透過性部分が前記底部の実質的にすべてにわたる、請求項81記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートが3456以上のウェルを有する、請求項82記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートはウェル中心からウェル中心までの間隔が2.5mm未満であるウェルを有する、請求項82記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーの厚さが20〜200ミクロンである、請求項84記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーの厚さが30〜80ミクロンである、請求項85記載のマルチウェルプレート。
- 前記シクロオレフィンポリマーの厚さが20〜200ミクロンである、請求項81記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において、100ミクロンの厚さの溶融石英ガラスに比べ、200パーセントまたはそれ以下の蛍光を生じる、請求項87記載のマルチウェルプレート。
- 前記フレームがシクロオレフィンポリマー製である、請求項88記載のマルチウェルプレート。
- 前記マルチウェルプレートが射出成形されている、請求項87記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において、100ミクロンの厚さの溶融石英ガラスに比べ、200パーセントまたはそれ以下の蛍光を生じる、請求項90記載のマルチウェルプレート。
- 前記壁面がバックグラウンド低下のための色素を含む、請求項90記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部がさらに結合対の一方のメンバーを含む、請求項91記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部がさらに多数の生細胞を含む、請求項92記載のマルチウェルプレート。
- 前記壁面がシクロオレフィンコポリマー製である、請求項92記載のマルチウェルプレート。
- 各ウェルがポリマー壁面を含む、生物学的および生化学的サンプルの蛍光測定用マルチウェルプレートの製造方法であって、
シクロオレフィンコポリマーを含む低蛍光性および高透過性を有する底部を有する前記マルチウェルプレートを射出成形することを含んでなり、
前記マルチウェルプレートの前記ウェルがフレーム内に配置されており、かつ、前記マルチウェルプレートが生物学的および生化学的サンプルからの蛍光シグナルを検出するためのものであり、かつ、標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するものであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、上記方法。 - 前記ウェルがシクロオレフィンポリマー製である、請求項96記載の方法。
- 射出成形が30〜150ミクロンのシクロオレフィン底部をもたらす、請求項96記載の方法。
- a) アッセイ用試薬、および
b) i) 各ウェルが壁面と、シクロオレフィンコポリマーを含む低蛍光性および高透過性部分を有する底部とを含んでなる複数のウェルと、
ii) 前記ウェルが内部に配置されているフレームと、
を有してなる、生物学的および生化学的サンプルの蛍光測定用マルチウェルプレートであって、前記マルチウェルプレートがサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、かつ、標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するものであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じるマルチウェルプレート、
を含んでなるキット。 - さらに検出器を含んでなる、請求項99記載のキット。
- 生物学的および生化学的サンプルの蛍光測定用マルチウェルプレートであって、
各ウェルが壁面と、シクロオレフィンポリマーを含む低蛍光性および高透過性部分を有する底部とを有してなる、二次元直線配置の複数のウェルと、
前記ウェルが内部に配置されているフレームと、
を有してなり、前記マルチウェルプレートがサンプルからのシグナルを検出するためのものであり、かつ、標準96ウェルマイクロタイタープレートのフットプリントを有するものであり、前記底部が、300〜400nmの励起波長および300〜800nmの発光波長において150ミクロンの厚さの溶融シリカと比較して400〜200パーセント以下の蛍光を生じる、上記マルチウェルプレート。 - 前記マルチウェルプレートがインサート成形されている、請求項101記載のマルチウェルプレート。
- 前記底部の厚さが20〜200ミクロンである、請求項102記載のマルチウェルプレート。
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