JP2008542685A - サイトカイン受容体修飾因子及びその使用 - Google Patents

サイトカイン受容体修飾因子及びその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、非競合的ＶＥＧＦ受容体、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−４受容体、又はＩＬ−１受容体に結合するペプチドのようなサイトカイン受容体結合化合物、及びペプチド模倣アンタゴニスト、並びにそのような化合物の治療的使用に関するものである。本発明の化合物は、増殖性疾患（例えば結腸癌、乳癌、前立腺癌、及び肺癌）、異常な血管新生及び脈管形成、加齢性黄斑変性症、並びに乾癬のような増殖性及び／又は炎症性皮膚疾患などのサイトカイン関連疾患の治療に使用することができる。

Description

発明の分野
本発明は、サイトカイン受容体修飾因子、それらの使用、及びそのような修飾因子を同定する方法に関するものである。
発明の背景
サイトカインは、受容体を通して影響を仲介する生物活性ホルモン様タンパク質（例えば、インターロイキン、インターフェロン、腫瘍壊死因子、成長因子）である。特に、サイトカイン及びそれらの受容体は、細胞が細胞増殖及び分化、細胞死、並びに生存にシグナルを送ったり調整したりする強力な制御網を構築する。一般に、サイトカインは、オートクリン及びパラクリン経路を通して影響を及ぼし、結果として遺伝子発現を調節する。
サイトカイン及びそれらの受容体は主要な疾患に関わっている。例えば、サイトカインは、造血、免疫、及び神経系の発達を調整できる。さらにサイトカインは、遺伝子発現に影響を及ぼすことによって、癌、炎症性及び自己免疫性反応、喘息、アレルギー、血栓症、血管疾患、並びに敗血症ショックのような苦悩の発生の一因となり得る。さらに、サイトカインは、生物学的効果を厳格に制御することを介して免疫系機能を調整できる。また、サイトカイン自体は、炎症（例えば慢性関節リウマチ）及び組織の変性のような病態にも関与する。
インスリン様成長因子ファミリーは、２つのリガンド（ＩＧＦ−１及び−２）、２つの細胞膜受容体（ＩＧＦ−１Ｒ及びＩＧＦ−２Ｒ）、並びに６つのＩＧＦ−１結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ１〜６）を含む。ＩＧＦ−１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）は、進化的に保存された偏在性の膜貫通型チロシンキナーゼ受容体である。ヒトＩＧＦ−１受容体Ｉ型は、１９８６年にクローン化され（Ｕｌｌｒｉｃｈら、ＥＭＢＯ Ｊ．、５（１０）：２５０３−２５１２、１９８６）、１９９８年にタンパク質の一部の３次構造が解析された（Ｇａｒｒｅｔｔら、Ｎａｔｕｒｅ、３９４、６６９１：３９５−３９９、１９９８）。２量体は、２量体化リガンドと結合する２つの細胞外αサブユニット、並びにシグナル伝達に応答する膜近傍、膜貫通型、及び細胞内のチロシンキナーゼドメインを含む２つのβサブユニットで構成される（図１４）（Ｐｏｌｌａｋら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ、４：５０５−５１８、２００４；Ｂａｓｅｒｇａ、Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ、９：７５３−７８、２００５）。ＩＧＦ−１Ｒは、グリコシル化された１８０ｋＤａの前駆体として合成され、２量体化し、タンパク質分解によりプロセシングされて、１５５ｋＤａの成熟α２β２受容体を生ずることが示された（Ａｄａｍｓら、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ、２２：８９−９５、２００４）。
ＩＧＦ−１シグナル伝達は、ＭＡＰ／Ｒａｓ／Ｒａｆキナーゼ経路及びホスホイノシチド−３キナーゼ経路の活性化を包含する。さらに、エストロゲン、インテグリン、及びサイトカイン受容体のような別の細胞表面受容体とＩＧＦ受容体とのあいだの伝達は、ＩＦＧ−１シグナル伝達に重要であることが示され（Ｂａｒｔｕｃｃｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６１：６７４７−６７５４、２００１）；さらに、ＩＧＦ−１受容体は、Ｇタンパク質と関連していることが報告された（Ｐｏｌｌａｋら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ、４：５０５−５１８、２００４；Ｂａｓｅｒｇａ、Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ、９：７５３−７６８、２００５）。
ＩＧＦ−１及び−２はＩＦＧ−１Ｒと結合し、一方、ＩＦＧ−２Ｒはおそらくクリアランス受容体であるが、ＩＧＦ−２のみと結合し、主に発生期に機能する。生後優勢なリガンドであるＩＧＦ−１は７０アミノ酸残基から成る。ＩＧＦ−１は、細胞にエンドクリン、パラクリン、及びオートクリン様式で作用し、細胞の生存、増殖、遊走、及び細胞間マトリックス相互作用を誘導し、制御する。
ＩＧＦ−１Ｒの細胞内活性化ループ内の３つのチロシン残基がリン酸化されると、触媒活性を活性化する。Ｙ１１３５が最初にリン酸化され、さらにＹ１１３１及びＹ１１３６がリン酸化されると構造が安定し、ＡＴＰ及びドッキングタンパク質が受容体の細胞内触媒部位へ結合できるように、立体構造を大きく変化させる（Ｆｏｕｌｓｔｏｎｅら、Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．、２０５：１４５−１５３、２００５）。
インスリン受容体（ＩＲ）とＩＧＦ−１Ｒとの相同性が高ければ（細胞内結合ドメイン内で８４％）、ＩＲ及びＩＧＦ−１の半分の受容体（１つのαサブユニット及び１つのβサブユニットで構成）はヘテロ２量体化することができ、ＩＲ／ＩＧＦ−１ハイブリッド受容体を形成する（Ｂａｉｌｅｙｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、３２７（Ｐｔ１）：２０９−２１５、１９９７；Ｐａｎｄｉｎｉら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５：１９３５−１９４４、１９９９：Ｐａｎｄｉｎｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７７；３９６８４−３９６９５、２００２）。心臓、筋肉、腎臓、脾臓、胎盤（Ｂａｉｌｙｅｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３２７（Ｐｔ１）：２０９−２１５、１９９７）及び内皮（Ｃｈｉｓａｌｉｔａ及びＡｒｎｑｖｉｓｔ、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｉｓｉｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．、２８６：Ｅ８９６−Ｅ９０１、２００４；Ｎｉｔｅｒｔら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、２２９：３１−３７、２００５）のような多くの組織内、並びにＭＤＡ−ＭＢ−２３１及び４３５（エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性細胞）のようなあるがん細胞種内ではハイブリッドが優勢である。ハイブリッド受容体は、膜でのランダムプロセスから生ずるらしく、２つの相同受容体の１つの割合が高いことによって形成される（Ｐａｎｄｉｎｉら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５：１９３５−１９４４、１９９９）。しかしながら、ハイブリッド受容体の生物学的意義は、シグナル伝達におけるハイブリッド受容体の役割と同様に不明確である。ＩＧＦ−１は、インスリンより高親和性でハイブリッド受容体と結合し、ハイブリッド受容体はＩＧＦ−１Ｒシグナルの大部分を伝達し；さらに、ハイブリッド受容体は、ＩＧＦ−１との結合後により効率よくリン酸化される（Ｂａｉｌｙｅｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、３２７（Ｐｔ１）：２０９−２１５、１９９７；Ｐａｎｄｉｎｉら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５：１９３５−１９４４、１９９９；Ｐａｎｄｉｎｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７７：３９６８４−３９６９５、２００２；Ｇａｒｂｅｒ、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、９７：７９０−７９２、２００５）。
ＩＧＦ−１は、上皮成長因子（ＥＧＦ）誘導性分裂促進活性の進行因子として作用することが報告されており、逆に、ＥＧＦはＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達の細胞内基質／エフェクター分子を調節することができる。また、ＩＧＦ−１Ｒ／ＥＧＦＲ複合体が、不死化ヒト乳房上皮細胞（ＨＢ４Ａ）の膜で検出された（Ｂｕｒｇａｕｄ及びＢａｓｅｒｇａ、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．、２２３：４１２−４１９、１９９６；Ｐｕｔｚら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５９：２２７−２３３、１９９９；Ｒｏｕｄａｂｕｓｈら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２２５８３−２２５８９、２０００；Ｈａｌｌａｋら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、３６：１５０９−１５１８、２００２；Ａｄａｍｓら、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ、２２：８９−９５、２００４；Ａｈｍａｄら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７９：１７１３−１７１９、２００４）。ＩＧＦ−１シグナル伝達におけるＥＧＦＲの関与は、甲状腺癌（Ｂｅｌｆｉｏｒｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ、８１：４０３−４０７、１９９９；Ｐａｎｄｉｎｉら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５：１９３５−１９４４、１９９９）、並びに前立腺癌及び乳癌の細胞株（Ｐｕｔｚら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５９：２２７−２３３、１９９９）におけるがんの進行と関連している。また、ＩＧＦ−１Ｒは、そのチロシンキナーゼ活性とは無関係にβ−アレスチン１の直接動員によって活性化され（Ｐｏｖｓｉｃら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７８：５１３３４−５１１３３９、２００３）、Ｇタンパク質と相互作用してその血管運動性を伝達できることが示されている。
ＩＧＦ−１Ｒは、がんの発生及び進行に関して多く報告されている役割を果たす（Ｂａｓｅｒｇａ、Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ、９：７５３−７６８、２００５）。また、ＩＧＦ−１Ｒはインビトロでの細胞増殖に重要であり、形質転換細胞表現型の確立及び維持に必ず必要であることが示されている。ＩＧＦ−１Ｒから生ずる生存シグナルは、アポトーシスを阻害し、腫瘍形成に関与する別の重要な受容体機能に寄与する。さらに、ＩＧＦ−１Ｒは、がん細胞の運動性に重要な役割を果たす。広範なヒトがん細胞は、受容体を過剰発現しているか又はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ活性が増加している。したがって、がん及びその他の病気でＩＧＦ−１が仲介する活性を下方制御できる治療法が必要である。
血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、内皮細胞の増殖物質である。その受容体（ＶＥＧＦＲ）は単量体として内皮細胞の形質膜に存在するが、その内在チロシンキナーゼドメインを介して自己リン酸化を行うにはホモ２量体化が必要である。
インターロイキン４（ＩＬ−４）は、アレルギー性炎症及びアレルギーの発症に関与する主要サイトカインである。ＩＬ−４は喘息における炎症プロセスの初期に生成される。アレルギーでは、ＩＬ−４は、Ｂリンパ球によるＩｇＥ免疫グロブリンの生成と関連し、また、Ｂリンパ球、好塩基球、及び肥満細胞の細胞表面のＩｇＥ受容体の発現を上方制御する。喘息では、ＩＬ−４は血管内皮上の血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ−１）の発現を誘導する。この効果により、肺血管内皮細胞上の炎症部位へのＴリンパ球、単球、好塩基球、及び好酸球の直接遊走走化性が導かれる。ＩＬ−４は、エオタキシンの発現を増加させることによって部分的に存在を増加させ、好酸球アポトーシスを阻害し、好酸球炎症を促進する。ＩＬ−４のもう１つの重要な生物学的効果はＴｈ２の分化及び増殖である；このプロセスでは、ＩＬ−４はＴリンパ球アポトーシスを減少させる。ＩＬ−４受容体は、γサブユニットと結合したαサブユニットから成るシグナル伝達のための細胞表面タンパク質であり；その活性化にはオリゴマー化が必要である。
インターロイキン１（ＩＬ−１）は、他の炎症介在物質の生成を刺激することによって、そして直接炎症の進行を速めることによって、炎症の制御に初期段階で役割を果たす。腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）と共に、ＩＬ−１は炎症性サイトカインの原型と考えられる。ＩＬ−１の影響は炎症に限定されない；このサイトカインは、骨の形成及びリモデリング、インスリン分泌、並びに発熱誘導にも役割を果たす。ＩＬ−１は、急性及び慢性の炎症（例えば、敗血症性ショック、炎症性腸疾患、変形性関節症、又は慢性関節リウマチ）、アルツハイマー病、並びに多数の自己免疫疾患においても主要な役割を果たす。単球はＩＬ−１の有力な供給源であるが、他の多くの細胞種もこのタンパク質を発現する：その例として線維芽細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、破骨細胞、星状細胞、上皮細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び数多くのがん細胞が含まれる。
インターロイキン１ファミリーのタンパク質は、異なっているが構造的に関連する分子：生体応答を引き出すＩＬ−１α、ＩＬ−１β、及びＩＬ−１８、並びに自然発生の受容体アンタゴニストであるＩＬ−１ｒａから成る。ＩＬ−１αはマウスで有力な型であり、ＩＬ−１βはヒトで有力であるが、いずれも同一受容体によって影響を及ぼす。さらにＩＬ−１は、ＩＬ−６及びプロスタグランジンＰＧＥ２のような他の炎症介在物質の生成を誘導し（ＣＯＸ−２及びＰＧＥシンターゼの発現を誘導）、多数の細胞種の増殖及び活性化を誘導する。
主要な炎症誘発性サイトカインとして、ＩＬ−１は、関節炎のよう関節軟骨損傷に関連する疾患への治療的介入に際しての強力な標的となる可能性がある。骨関節炎及び慢性関節リウマチは心臓病に次いで米国での労働不能の原因となる第２の疾患であり、その広がりは加齢と共に劇的に増加する。およそ６０００万人の４０歳以上のアメリカ人に危険がある。１９９７年には、関節炎に関する直接的医療費及び労働不能による経費は、およそ７５０億（米）ドルであった。ＩＬ−１が役割を果たすその他の重要な疾患には、米国では長期欠席の主要原因でもある潰瘍性大腸炎及びクローン病、並びに他の型の自己免疫疾患が含まれる。
サイトカインが仲介する細胞シグナル伝達の欠損の結果として発症し、進行するであろう疾患は人々に広く広まっており、罹病率及び／又は死亡率と有意に関連している。サイトカイン受容体が治療上の重要な標的であることは明らかであり、サイトカイン受容体のアンタゴニスト及びアゴニスを同定し、選択し、生産する必要がある。
発明の概要
本発明は、サイトカイン受容体結合化合物、その使用、及びそのような化合物の選択方法を特徴とする。特に、本発明は、ＶＥＧＦ受容体、インターロイキン１（ＩＬ−１）受容体、ＩＬ−４受容体、及びＩＧＦ−１受容体に結合する化合物、例えば非競合的ＶＥＧＦ受容体、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−４受容体、又はＩＧＦ−１受容体に結合するペプチド及びペプチド模倣アンタゴニスト、並びにそれらの化合物の治療的使用を特徴とする。本発明の化合物は、増殖性疾患（例えば結腸癌、乳癌、前立腺癌、及び肺癌）、異常な血管新生及び脈管形成、網膜症、黄斑変性症、並びに乾癬のような増殖性及び／又は炎症性皮膚疾患の治療に用いることができる。
したがって、第１の側面では、本発明は、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｓ１Ｌ２Ｆ３Ｖ４Ｐ５Ｒ６Ｐ７Ｅ８Ｒ９Ｋ１０を特徴とするアミノ酸配列を含有する化合物を特徴とするものであり、式中：Ｓ１は、残基なし、セリン、スレオニン、バリン、又はηであり、ηは中性親水性アミノ酸であり；Ｌ２は、残基なし、ロイシン、アラニン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はφであり、φは疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；Ｆ３は、残基なし、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン、又はΣであり、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸であり；Ｖ４は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はφであり、φは疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；Ｐ５は、残基なし、プロリン、アラニン、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（ＭｅＡｌａ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、ジエチルチアゾリジンカルボン酸（Ｄｔｃ）、又はΩであり、Ωは構造制約生成アミノ酸であり；Ｒ６は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物であり；Ｐ７は、残基なし、プロリン、アラニン、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（ＭｅＡｌａ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、ジエチルチアゾリジンカルボン酸（Ｄｔｃ）、又はΩであり、Ωは構造制約生成アミノ酸であり；Ｅ８は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；Ｒ９は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物であり；そしてＫ１０は、残基なし、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物である。
本発明の第１の側面の望ましい態様では、中性アミノ酸は、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、ホモセリン、アロスレオニン、又はヒドロキシプロリンであり；疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンであり；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであり；そして芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである。
本発明の第１の側面の他の望ましい態様では、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΛであり、Λは、中性脂肪族アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；芳香族アミン又はアリールアルキルアミン；チロシン；４−ヒドロキシフェニルグリシン；フェニルグリシン；ホモセリン；３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン；又は４−クロロフェニルアラニンである。例えば、炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであることが望ましく、芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであることが望ましい。
本発明の第１の側面の更に望ましい態様では、構造制約生成アミノ酸は、アゼチジン−２−カルボン酸、ピペコリン酸、イソニペコチン酸、４−（アミノメチル）安息香酸、２−アミノ安息香酸、又はニペコチン酸である。本発明の第１の側面では、アルギニン代替物は、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルであることが望ましい。さらに、１級アリールアルキルアミンは、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンであることが望ましい。
本発明の第１の側面の更に他の望ましい態様では、化合物は、アミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１、アミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２、又はアミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１及びアミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２を更に含み、Ｇ１は、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、又はアシル基であり、Ｇ２はペプチドのカルボキシ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである。例えば、アシル基は、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルであることが望ましく；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであることが望ましく；そして芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであることが望ましい。
第２の側面では、本発明は、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｅ１Ｓ２Ｄ３Ｖ４Ｌ５Ｈ６Ｆ７Ｔ８Ｓ９Ｔ１０を特徴とするアミノ酸配列を含有する化合物を特徴とするものであり、式中：Ｅ１は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；Ｓ２は、残基なし、セリン、スレオニン、バリン、又はηであり、ηは中性親水性アミノ酸であり；Ｄ３は、残基なし、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；Ｖ４は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はφであり、φは疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸であり；Ｌ５は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はφであり、φは疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸であり；Ｈ６は、残基なし、ヒスチジン、リジン、アルギニン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物であり；Ｆ７は、残基なし、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン、又はΣであり、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸であり；Ｔ８は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、又はΣであり、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸を規定し；Ｓ９は、残基なし、セリン、スレオニン、バリン、又はηであり、ηは中性親水性アミノ酸であり；そしてＴ１０は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、又はΣであり、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸を規定する。
本発明の第２の側面の望ましい態様では、１級アリールアルキルアミンは、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンであり；中性親水性アミノ酸は、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、ホモセリン、アロスレオニン、又はヒドロキシプロリンであり；疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンであり；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであり；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであり；そしてアルギニン代替物は、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルである。
本発明の第２の側面の更なる望ましい態様では、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΛであり、Λは、中性脂肪族アミノ酸、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである。炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであることが望ましく；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、及びフェニルエチルアミン；チロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルグリシン、ホモセリン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、又は４−クロロフェニルアラニンであることが望ましい。
本発明の第２の側面の更に望ましい態様では、化合物は、アミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１、アミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２、又はアミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１及びアミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２を更に含み、Ｇ１は、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖若しくは分枝鎖アルキル基、又はアシル基であり；Ｇ２は、残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである。アシル基は、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルであることが望ましく；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであることが望ましく；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであることが望ましい。
本発明の第３の側面は、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式ａ１−ａ２−Ｎ１Ａ２Ｓ３Ｖ４−ａ３−ａ４−ａ５を特徴とするアミノ酸配列を含有する化合物を特徴とするものであり、式中：Ｎ１は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、αアミノアジピン酸、又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；Ａ２は、アラニン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸であり；Ｓ３は、セリン、スレオニン、バリン、又はηであり、ηは中性親水性アミノ酸であり；Ｖ４は、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；ａ１は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物であり；ａ２は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、及びΣであり、Σは、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸であり；ａ３は、残基なし、プロリン、アラニン、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（ＭｅＡｌａ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、ジエチルアゾリジンカルボン酸（Ｄｔｃ）、又はΩであり、Ωは構造制約生成アミノ酸であり；ａ４は、セリン、スレオニン、バリン、又はηであり、ηは中性親水性アミノ酸であり；そしてａ５は、ロイシン、アラニン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキル−アミンである。
本発明の第３の側面の望ましい態様では、１級アリールアルキルアミンは、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニルベンジルアミンであり；中性親水性アミノ酸は、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、ホモセリン、アロスレオニン、又はヒドロキシプロリンであり；親水性側鎖を含有するα−アミノ酸は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンであり；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであり；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであり；アルギニン代替物は、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルであり；疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、又はチロシンであり；構造制約生成アミノ酸は、アゼチジン−２−カルボン酸、ピペコリン酸、イソニペコチン酸、４−（アミノメチル）安息香酸、２−アミノ安息香酸、又はニペコチン酸である。
第４の側面では、本発明は、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｇ１−ａ１−ａ２−Ｘ−ａ３−ａ４−ａ５、ａ１−ａ２−Ｘ−ａ３−ａ４−ａ５−Ｇ２、又はＧ１−ａ１−ａ２−Ｘ−ａ３−ａ４−ａ５−Ｇ２を特徴とするアミノ酸配列を含有する化合物を特徴とするものであり、式中：ＸはＮ１Ａ２Ｓ３Ｖ４であり；Ｎ１、Ａ２、Ｓ３、Ｖ４、ａ１、ａ２、ａ３、ａ４、及びａ５は、本発明の第３の側面に記載の通りに定義され、Ｇ１はペプチドのアミノ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖若しくは分枝鎖アルキル基、又はアシル基であり、Ｇ２はペプチドのカルボキシ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである。
本発明の第４の側面の望ましい態様では、アシル基は、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルであり；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであり；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである。
本発明の第５の側面は、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｉ１Ｒ２Ｋ３Ｙ４Ａ５Ｄ６Ｇ７Ｔ８Ｉ９を特徴とするアミノ酸配列を含有する化合物を特徴とするものであり、式中：Ｉ１は、残基なし、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；Ｒ２は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物であり；Ｋ３は、残基なし、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物であり；Ｙ４は、残基なし、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン、又はΣであり、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸であり；Ａ５は、残基なし、アラニン、イソロイシン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；Ｄ６は、残基なし、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；Ｇ７は、残基なし、アラニン、イソロイシン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；Ｔ８は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、又はΣであり、Σは疎水性側鎖Σあるいは芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸であり；そしてＩ９は、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキル−アミンである。
本発明の第５の側面の望ましい態様では、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸は、ノルロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンであり；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであり；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであり；アルギニン代替物は、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルである。
本発明の第５の側面の他の望ましい態様では、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΛであり、Λは、中性脂肪族アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン、芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミン、チロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルグリシン、ホモセリン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、又は４−クロロフェニルアラニンである。炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであることが望ましく；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであることが望ましく；１級アリールアルキルアミンは、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンであることが望ましい。
本発明の第５の側面の更なる望ましい態様では、化合物は、アミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１、アミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２、又はアミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１及びアミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２を更に含み、Ｇ１は、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、及びアシル基であり、Ｇ２は、残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、及び芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである。アシル基は、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルであることが望ましく；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであることが望ましく；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであることが望ましい。
本発明の第６の側面は、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｅ１Ｎ２Ｆ３Ｌ４Ｈ５Ｌ６Ｌ７Ｌ８Ａ９を特徴とするアミノ酸配列を含有する化合物を特徴とするものであり、式中：Ｅ１は残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；Ｎ２は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含む、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；Ｆ３は、残基なし、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン、又はΣであり、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸であり；Ｌ４は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；Ｈ５は、残基なし、ヒスチジン、リジン、アルギニン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物であり；Ｌ６、Ｌ７、Ｌ８は独立して、残基なし、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；Ａ９は、残基なし、アラニン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである。
本発明の第６の側面の望ましい態様では、１級アリールアルキルアミンは、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンである。本発明の第６の側面の他の望ましい態様では、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΛであり、Λは、中性脂肪族アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミン；チロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルグリシン、ホモセリン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、又は４−クロロフェニルアラニンである。炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであることが望ましく；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであることが望ましく；疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンであることが望ましく；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであることが望ましく；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであることが望ましく；アルギニン代替物は、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルであることが望ましい。
本発明の第６の側面の更なる望ましい態様では、化合物は、アミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１、アミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２、又はアミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１及びアミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２を更に含み、Ｇ１は、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、及びアシル基であり、Ｇ２は、残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、及び芳香族アミン又はアリールアルキルアミンである。アシル基は、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルであることが望ましく；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであることが望ましく；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであることが望ましい。
第７の側面では、本発明は、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式ａ１−ａ２−ａ３−Ｔ１Ｖ２Ｌ３Ｓ４Ｎ５Ｌ６−ａ４を特徴とするアミノ酸配列を含有する化合物を特徴とするものであり、式中：Ｔ１は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、又はΣであり、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸であり；Ｖ２は、残基なし、バリン、アラニン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；Ｌ３は、残基なし、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリーアルキルアミンであり；Ｓ４は、セリン、スレオニン、バリン、又はηであり、ηは中性親水性アミノ酸であり；Ｎ５は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；Ｌ６は、残基なし、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΦであり、Φは、疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；ａ１は、残基なし、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物であり；ａ２は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；ａ３は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、ロイシン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物である。
本発明の第７の側面の望ましい態様では、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含有するα−アミノ酸は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアニリン、ヒスチジン、又はチロシンであり；疎水性側鎖を含有するα−アミノ酸は、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアミン、又はアリルグリシンであり；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであり；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンであり；中性親水性アミノ酸は、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、ホモセリン、アロスレオニン、又はヒドロキシプロリンであり；１級アリールアルキルアミンは、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンであり；アルギニン代替物は、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルである。
第８の側面では、本発明は、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｇ１−ａ１−ａ２−ａ３−Ｘ−ａ４、ａ１−ａ２−ａ３−Ｘ−ａ４−Ｇ２、又はＧ１−ａ１−ａ２−ａ３−Ｘ−ａ４−Ｇ２を特徴とするアミノ酸配列を含有する化合物を特徴とするものであり、式中：ＸはＴ１Ｖ２Ｌ３Ｓ４Ｎ５Ｌ６であり、Ｔ１、Ｖ２、Ｌ３、Ｓ４、Ｎ５、Ｌ６、ａ１、ａ２、ａ３、及びａ４は、本発明の第７の側面に記載の通りに定義され、Ｇ１はペプチドのアミノ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖若しくは分枝鎖アルキル基、又はアシル基であり、Ｇ２はペプチドのカルボキシ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである。
本発明の第８の側面の望ましい態様では、アシル基は、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルであり；炭素数１〜１０の脂肪族アミンは、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンであり；芳香族アミン又はアリールアルキルアミンは、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである。
第９の側面では、本発明は、配列番号１〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列をコードする単離核酸配列を含有するベクターを特徴とする。本発明の第１０の側面は、配列番号１〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列をコードする単離核酸配列を含有する細胞を特徴とする。本発明の第１０の側面の細胞は原核細胞又は真核細胞であることが望ましい。
第１１の側面では、本発明は、本発明の第１〜第８の側面のいずれか１つの化合物を発現する細胞を特徴とする。細胞は原核細胞又は真核細胞であることが望ましい。
第１２の側面では、本発明は、本発明の第１〜第８の側面のいずれか１つの化合物を含有する医薬組成物を特徴とする。本発明の第２０の側面に用いられる化合物は、ＡＰＧ−２０６又はその誘導体であることが望ましい。
第１３の側面では、本発明は、増殖性疾患の治療方法を特徴とする。この方法は、治療を必要とする患者に、本発明の第１〜第８の側面のいずれか１つの化合物を有効用量を投与することを包含する。化合物はＡＰＧ−２０６又はその誘導体であることが望ましい。望ましい態様では、本発明の第１３の側面の方法は、化学療法剤を患者に投与することを更に包含する。本発明の第１３の側面に用いられる望ましい化学療法剤の例としては、ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標））、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホルアミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、及びテモゾロミドなどのアルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、及びトリアゼン）が含まれる。他の望ましい化学療法剤には、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、及びゲムシタビンなどの（葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体、及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含む）代謝拮抗剤が含まれる。望ましい化学療法剤は、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、パクリタキセル（パクリタキセルはタキソール（登録商標）として市販されている）、ミトラマイシン、デオキシコフォルマイシン、マイトマイシンＣ、Ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン（特にＩＦＮ−α）、エトポシド、及びテニポシドなどの（ビンカ・アルカロイド、抗腫瘍抗生物質、酵素、リンホカイン、及びエピポドフィロトキシンを含む）天然産物及びそれらの誘導体でもよい。更なる望ましい化学療法剤には、１７−α−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、タモキシフェン、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、又はゾラデックスなどのホルモン及びステロイド（合成類似体を含む）が含まれる。望ましい化学療法剤は、シスプラチン、カルボプラチン、ヒドロキシウレア、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミゾール、又はヘキサメチルメラミンなどの（白金配位錯体のような無機錯体を含む）合成化合物でもよい。
本発明の第１３の側面の他の望ましい態様では、増殖性疾患は、乳癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、又は増殖性皮膚疾患である。望ましくは、増殖性疾患には異常な脈管形成が含まれる。
第１４の側面では、本発明は、異常な脈管形成の治療方法を特徴とする。この方法は、治療を必要とする患者に、本発明の第１〜第８の側面のいずれか１つの化合物の有効用量を投与することを包含する。本発明の第１４の側面の望ましい態様では、患者は、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症又、は黄斑変性症に罹患している。本発明の第１４の側面の他の望ましい態様では、化合物はＡＰＧ−２０６又はその誘導体である。
第１５の側面では、本発明は、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする本発明の第１〜第８の側面のいずれか１つの化合物の能力を阻害又は増強する候補化合物を同定する方法を特徴とする。この方法は、（ｉ）本発明の第１〜第８の側面のいずれか１つの化合物の存在下でインスリン様成長因子１受容体を候補化合物と接触させ；そして（ｉｉ）候補化合物と接触させない対照と比較して、インスリン様成長因子１受容体の生物活性の増加又は減少をアッセイすることを包含し、対照と比較して生物活性が減少していることは、候補化合物が、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、本発明の第１〜第８の側面のいずれか１つの化合物の能力を増強することを示しており、対照と比較して生物活性が増加していることは、該候補化合物が、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、本発明の第１〜第８の側面のいずれか１つの化合物の能力を阻害することを示している。
本発明の第１５の側面の望ましい態様では、本発明の第１〜第８の側面のいずれか１つの化合物を、検出可能シグナルを直接的又は間接的に提供する部分で標識する。望ましい部分の例は、１２５Ｉ、１４Ｃ、又は３Ｈなどの放射性標識である。望ましい部分の他の例には、アルカリホスファターゼ及び西洋ワサビペルオキシダーゼが含まれる。
第１６の側面では、本発明は、サイトカイン受容体の非競合的ペプチドアンタゴニストを同定する方法を特徴とする。この方法は、受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有する候補ペプチドを選択し、そして候補ペプチドの非存在下又は存在下で受容体の生物活性を測定することによって、候補ペプチドが受容体のオリゴマー化及び／又は活性を阻害する能力を測定する工程を包含し、候補ペプチド非存在下で測定した生物活性と比較して候補ペプチド存在下で生物活性が減少することによって、候補ペプチドがサイトカイン受容体の非競合的アンタゴニストペプチドとして同定される。
本発明の第１６の側面の望ましい態様では、候補ペプチドは、それが由来する受容体の領域に存在しないアミノ酸を少なくとも１つ含有し、このアミノ酸は、候補ペプチドのアンタゴニスト活性に有意な影響を及ぼさない。非競合的ペプチドはプロテイナーゼ耐性であることが望ましい。
本発明の第１６の側面の他の望ましい態様では、受容体はヒト血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＥＲ）であり、ペプチドは：（ａ）残基３２０〜３５０；（ｂ）残基３５０〜４００；（ｃ）残基４００〜４４０；（ｄ）残基４８１〜５６５；（ｅ）残基６４０〜６８５；及び（ｆ）残基７４５〜７７０から選択される残基に位置付けられるヒトＶＥＧＦＲの可動領域に由来する。
本発明の第１６の側面の更に望ましい態様では、受容体はヒトインターロイキン１受容体（ＩＬ−１Ｒα）であり、ペプチドは：（ａ）残基１８１〜２００；（ｂ）残基２０９〜２４０；及び（ｃ）残基３２０〜３４１から選択される残基に位置付けられるヒトＩＬ−１Ｒの可動領域に由来する。
本発明の第１６の側面の更に他の望ましい態様では、受容体はヒトインターロイキン１受容体（ＩＬ−１Ｒ）アクセサリータンパク質であり、ペプチドは：（ａ）残基１１５〜１６０；（ｂ）残基１７０〜２６６；（ｃ）残基２００〜２１５；（ｄ）残基２７５〜２９５；（ｅ）残基３００〜３１５；及び（ｆ）残基３３０〜３７０から選択される残基に位置付けられるＩＬ−１Ｒアクセサリータンパク質の可動領域に由来する。
本発明の第１６の側面の更なる望ましい態様では、受容体はヒトインスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）であり、ペプチドは：（ａ）残基３２０〜３３５；（ｂ）残基４８７〜５２７；（ｃ）残基５９５〜６２０；（ｄ）残基６６０〜６９０；（ｅ）残基７２５〜７４０；（ｆ）残基７８０〜７９９；（ｇ）残基８２０〜８４０；及び（ｈ）残基９１７〜９４７から選択される残基に位置付けられるヒトＩＧＦ−１Ｒの可動領域に由来する。
本発明の第１６の側面の他の望ましい態様では、受容体はヒトインターロイキン４受容体（ＩＬ−４Ｒ）であり、ペプチドは：（ａ）残基１１２〜１２５；（ｂ）残基１２５〜２１６；及び（ｃ）残基２１０〜２４０から選択される残基に位置付けられるヒトＩＬ−４Ｔの可動領域に由来する。
本発明の第１６の側面の更に望ましい態様では、受容体はヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）であり、ペプチドは：（ａ）残基３３５〜３４５；（ｂ）残基４９５〜５１５；及び（ｃ）残基６４０〜６５０から選択される残基に位置付けられるヒトＥＧＦＲの可動領域に由来する。
本発明の第１６の側面の更に他の望ましい態様では、受容体はヒト成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）であり、ペプチドは：（ａ）残基１６０〜２４０、及び（ｂ）残基２５０〜２７０から選択される残基に位置付けられるヒトＧＨＲの可動領域に由来する。
第１７の側面では、本発明は、サイトカイン受容体の活性を阻害するペプチド模倣薬を同定する方法を特徴とする。この方法は、サイトカイン受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有するサイトカイン受容体アンタゴニストペプチドの非ペプチド化合物を選択し、そしてペプチド模倣薬の受容体活性阻害能を測定する工程を包含する。
第１８の側面では、本発明は、非競合的細胞外サイトカイン受容体アンタゴニストを特徴とするものであり、アンタゴニストは、サイトカイン受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有するペプチドである。
本発明の第１８の側面の望ましい態様では、サイトカイン受容体はヒトＶＥＧＦＲであり、ペプチドは：（ａ）残基３２０〜３５０；（ｂ）残基３５０〜４００；（ｃ）残基４００〜４４０；（ｄ）残基４８１〜５６５；（ｃ）残基６４０〜６８５；及び（ｄ）残基７４５〜７７０から選択されるＶＥＧＦＲの領域に由来する。
本発明の第１８の側面の他の望ましい態様では、サイトカイン受容体はヒトＩＬ−１Ｒアクセサリータンパク質であり、ペプチドは：（ａ）残基１１５〜１６０；（ｂ）１７０〜２６６；（ｃ）残基２００〜２１５；（ｄ）残基２７５〜２９５；（ｅ）残基３００〜３１５；及び（ｆ）残基３３０〜３７０から選択されるＩＬ−１Ｒアクセサリータンパク質の領域に由来する。
本発明の第１８の側面の更なる望ましい態様では、サイトカイン受容体はヒトＩＬ−１Ｒであり、ペプチドは：（ａ）残基１８１〜２００；（ｂ）残基２０９〜２４０；及び（ｃ）残基３２０〜３４１から選択されるヒトＩＬ−１Ｒの領域に由来する。
本発明の第１８の側面の更に望ましい態様では、サイトカイン受容体はヒトＩＧＦ−１Ｒであり、ペプチドは：（ａ）残基３２０〜３３５；（ｂ）残基４８７〜５２７；（ｃ）残基５９５〜６２０；（ｄ）残基６６０〜６９０；（ｅ）残基７２５〜７４０；（ｆ）残基７８０〜７９９；（ｇ）残基８２０〜８４０；及び（ｈ）残基９１７〜９４７から選択されるヒトＩＧＦ−１Ｒの領域に由来する。
本発明の第１８の側面の更に他の望ましい態様では、サイトカイン受容体はヒトＩＬ−４Ｒであり、ペプチドは（ａ）残基１１２〜１２５；（ｂ）残基１２５〜２１６；及び（ｃ）残基２１０〜２４０から選択されるＩＬ−４Ｒの領域に由来する。
更に望ましい態様では、本発明は、本発明の第１８の側面のアンタゴニストでＶＥＧＦＲを標的化することを含むヒトＶＥＧＦＲ活性を阻害する方法、本発明の第１８の側面のアンタゴニストでＩＬ−１Ｒアクセサリータンパク質を標的化することを包含するヒトＩＬ−１ＲａｃＰ活性を阻害する方法、本発明の第１８の側面のアンタゴニストでＩＬ−１Ｒを標的化することを包含するヒトＩＬ−１Ｒ活性を阻害する方法、本発明の第１８の側面のアンタゴニストでＩＧＦ−１Ｒを標的化することを包含するヒトＩＧＦ−１Ｒ活性を阻害する方法、及び本発明の第１８の側面のアンタゴニストでＩＬ−４Ｒを標的化することを包含するヒトＩＬ−４Ｒ活性を阻害する方法を特徴とする。
アンタゴニストは、ＶＥＧＦＲの配列番号５６、配列番号５７、及び配列番号５８から選択される配列を有するペプチド；ＩＬ−１Ｒの配列番号９５、配列番号９７、及び配列番号９８から選択される配列を有するペプチド；ＩＧＦ−１Ｒの配列番号６６、配列番号６９、及び配列番号７１から選択される配列を有するペプチド；又はＩＬ−４Ｒの配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、及び配列番号８４から選択される配列を有するペプチドであることが望ましい。
他の望ましい態様では、アンタゴニストは、ＶＥＧＦＲの配列番号５６、配列番号５７、及び配列番号５８から選択される配列を有するペプチドのペプチド模倣薬；ＩＬ−１Ｒの配列番号９５、配列番号９７、及び配列番号９８から選択される配列を有するペプチドのペプチド模倣薬；ＩＧＦ−１Ｒの配列番号６６、配列番号６９、及び配列番号７１から選択される配列を有するペプチドのペプチド模倣薬；又はＩＬ−４Ｒの配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、及び配列番号８４から選択される配列を有するペプチドのペプチド模倣薬である。
本発明の第１９の側面は、動物の疾患又は病状を治療する方法を特徴とする。疾患又は病状は、サイトカイン受容体活性を包含するシグナル伝達経路の異常を特徴とする。この方法は、サイトカイン受容体の阻害に有効な条件下で治療上有効量のサイトカイン受容体小断片ペプチド又はその誘導体を動物に投与する工程を包含し、サイトカイン受容体小断片ペプチド又はその誘導体は本発明の第１８の側面のアンタゴニストである。
本発明の第２０の側面は、サイトカイン受容体活性を包含するシグナル伝達経路の異常を特徴とする動物の疾患又は病状を治療するための医薬組成物を特徴とする。この医薬組成物は、有効量のサイトカイン受容体アンタゴニスト小断片ペプチド又はその誘導体を、医薬的に許容可能な担体と共に含み、サイトカイン受容体小断片ペプチド又はその誘導体は本発明の第１８の側面のアンタゴニストである。
本発明の第２１の側面は、サイトカイン受容体の非競合的ペプチドアゴニストを同定する方法を特徴とする。この方法は、受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有する候補ペプチドを選択し、そして候補ペプチドの非存在下又は存在下で受容体の生物活性を測定することによって、候補ペプチドが受容体のオリゴマー化及び／又は活性を増加させる能力を測定する工程を包含し、候補ペプチド非存在下で測定した生物活性と比較して候補ペプチド存在下で生物活性が増加することによって、候補ペプチドがサイトカイン受容体の非競合的アゴニストペプチドとして同定される。
本発明の第２１の側面の望ましい態様では、候補ペプチドは、それが由来する受容体の領域に存在しないアミノ酸を少なくとも１つ含有し、その１つのアミノ酸は、候補ペプチドのアゴニスト活性に有意な影響を及ぼさない。アゴニストペプチドはプロテイナーゼ耐性であることが望ましい。
本発明の第２２の側面は、サイトカイン受容体の活性を活性化するペプチド模倣薬を同定する方法を特徴とする。この方法は、サイトカイン受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有するサイトカイン受容体アゴニストペプチドの非ペプチド化合物を選択し、そしてペプチド模倣薬がサイトカイン受容体の活性を増加させる能力を測定する工程を包含する。
本発明の第２３の側面は、非競合的細胞外サイトカイン受容体アゴニストを特徴とするものであり、アゴニストは、サイトカイン受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有するペプチドである。
本発明の更なる側面は、ＩＬ−１／ＩＬ−１ＲａｃＰアンタゴニストを包含する。ＩＬ−１Ｒアンタゴニストは、（ａ）アミノ酸配列ＲＹＴＰＥＬＡ（配列番号１２１）（式中、Ｒ、Ｙ、Ｔ、Ｐ、Ｅ、Ｌ、及びＡは対応するアミノ酸を表す）を含むことができ、このペプチドは、ＩＬ−１Ｒと結合できるか、又はＩＬ−１Ｒアンタゴニスト活性（例えばＩＬ−１Ｒ／ＩＬ−１ＲａｃＰアンタゴニスト活性）を有する。１〜４のアミノ酸の付加、欠失、又は置換を組み込んだ（ａ）の誘導体も包含され、この誘導体は、ＩＬ−１Ｒへの結合に関して（ａ）のペプチドと競合するか、又はそのＩＬ−１Ｒアンタゴニスト活性（例えばＩＬ−１Ｒ／ＩＬ−１ＲａｃＰ活性）を維持している。誘導体は、３つ、２つ、又は１つのアミノ酸の付加、欠失、又は置換を組み込んでいることが望ましい。
あるいは、ＩＬ−１Ｒ／ＩＬ−１ＲａｃＰアンタゴニストは、一般式：ＲＹＴＰＥＬＸ（配列番号１４２）と特徴とすることもでき、式中、Ｒ、Ｙ、Ｔ、Ｐ、Ｅ、及びＬは対応するアミノ酸を表し、Ｘはアミノ酸なし及びアラニン（Ａ）から選択される。本発明のＩＬ−１Ｒアンタゴニストはこの一般式の誘導体も包含し、誘導体は、ペプチドＲＹＴＰＥＬＸのＲＹＴＰＥＬ部分におけるアミノ酸の付加、欠失、又は置換から選択される１つ、２つ、又は３つのアミノ酸修飾を組み込んでおり、そのＩＬ−１Ｒアンタゴニスト活性（例えばＩＬ−１Ｒ／ＩＬ−１ＲａｃＰアンタゴニスト活性）を維持している。一般に、アミノ酸は、類似アミノ酸又は保存アミノ酸で置換される（以下を参照されたい）。
更に、誘導体は、ペプチドのＲＹＴＰＥＬ部分におけるアミノ酸の付加、欠失、又は置換から選択される２以下のアミノ酸の修飾を含むことができる。
ＩＬ−１Ｒの生物活性をアンタゴナイズするペプチドは、一般式：
Ｘ−ａａ１−ａａ２−ａａ３−ａａ４−ａａ５ 式Ｉ
を特徴とする配列を含むことができ、
式中、Ｘ、ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、及びａａ５は独立して選択され、
Ｘは、Ａ１Ｐ２Ｒ３Ｙ４、Ａ１Ａ２Ｒ３Ｙ４、Ａ１Ｐ２Ａ３Ｙ４、Ａ１Ｐ２Ｒ３Ａ４、Ｐ２Ｒ３Ｙ４、Ｒ３Ｙ４、Ｚ３Ｙ４、Ｒ３Ｆ４、及びＹ４から選択され；Ａ、Ｐ、Ｒ、Ｙ、及びＦは対応するアミノ酸を表し、数字はＡ１Ｐ２Ｒ３Ｙ４配列中のアミノ酸の位置を表し、Ｚはシトルリンであり；
Ａ１は、アラニン、ロイシン、バリン、メチオニン、及びΦより選択され、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンなどの疎水性側鎖を有するα−アミノ酸を規定する。
Ｐ２は、プロリン、アラニン、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（ＭｅＡｌａ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、ジエチルチアゾリジンカルボン酸（Ｄｔｃ）、及びΩから選択され、Ωは構造制約生成アミノ酸（Ｈａｎｅｓｓｉａｎ及びＭｃＮａｕｇｈｔｏｎ−Ｓｍｉｔｈ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５３：１２７８９−１２８５４、１９９７；Ｈａｌａｂら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、５５：１０１−１２２、２０００；Ｃｌｕｚｅａｕ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６９：１５０４−１５１２、２００４；Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６９：１５０４−１５１２、２００４；Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６：１１８１−１１８５、２００１）を規定し、非限定的な例としては、アゼチジン−２−カルボン酸、ピペコリン酸、イソニペコチン酸、４−（アミノメチル）安息香酸、２−アミノ安息香酸、及びニペコチン酸が含まれる。
Ｒ３は、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、及びアルギニン代替物、例えば、限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、４−グアニジノフェニルメチルグリシルから選択されるである（Ｍａｓｉｃ及びＫｉｋｅｌｊ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５７：７０７３、２００１；Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６：１１８１−１１８５、２００１）。
Ｙ４は、残基なし、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン、及びΣから選択され、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を有するα−アミノ酸を規定し、その例としては、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、及びチロシンが含まれる。
ａａ１は、スレオニン、セリン、バリン、及びηから選択され、ηは中性親水性アミノ酸を規定し、その例としては、限定するものではないが、ヒドロキシバリン、Ｄｅｔｔｗｉｌｅｒ及びＬｕｂｅｌｌ（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６８：１７７−１７９、２００３）に記載のようなβ，β−ジアルキルセリン、ホモセリン、アロスレオニン、ヒドロキシプロリンが含まれる。
ａａ２は、イソロイシン、ロイシン、バリン、プロリン、メチオニン、ピペコリン酸、アゼチジン−２−カルボン酸、ヒドロキシプロリン、チアゾリジン−ａ−カルボン酸、及びΦから選択され、Φは疎水性側鎖を有するα−アミノ酸（上記を参照されたい）を規定する。
ａａ３は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、及びΨから選択され、Ψは、親水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、及び１級アリールアルキルアミンを有する、３−アミノ−５−フェノルペンタン酸−α−アミノ酸を規定する。その例としては、限定するものではないが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、４−フェニルベンジルアミンが含まれる。
ａａ４は、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΛから選択され、Λは中性脂肪族アミノ酸を規定する。その例としては、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロへキシアラニン、アリルグリシン；炭素数１〜１０の炭素の脂肪族アミン、例えば、限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミン；芳香族アミン又はアリールアルキルアミン、例えば、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、及びフェニルエチルアミンが含まれる。
ＩＬ−１Ｒの生物活性をアンタゴナイズするペプチド又はその誘導体は、以下の一般式のうちの１つを特徴とする配列を含むこともできる：
Ｇ１−Ｘ−ａａ１−ａａ２−ａａ３−ａａ４−ａａ５− 式ＩＩ
−Ｘ−ａａ１−ａａ２−ａａ３−ａａ４−ａａ５−Ｇ２ 式ＩＩＩ
Ｇ１−Ｘ−ａａ１−ａａ２−ａａ３−ａａ４−ａａ５−Ｇ２ 式ＩＶ
式中、Ｇ１はペプチドのアミノ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、アシル基（ＲＣＯ）（アセチル、メチル、エチルなど）、プロピアノイル、ブタノイル、イソプロピアノイル、イソブタノイル、又は３級アミン（ジアルカイルアミノ基又はモノアルキルアミノ基）から選択される。
Ｇ２はペプチドのカルボキシ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン（限定するものではないが、メチルアミンなど）、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミン、芳香族アミン又はアリールアルキルアミン（限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、フェニルエチルアミンなど）、及び／又は３級アミン（ジアルカイルアミノ基又はモノアルキルアミノ基）から選択される。
ＩＬ−１Ｒのペプチド模倣アンタゴニストは、以下の一般配列を有することができ：
Ｒ１−ａａ１−ａａ２−ａａ３−ａａ４−ａａ５−ａａ６−ａａ７−Ｒ２、
式中、Ｒ１、ａａ１、ａａ２、ａａ３、ａａ４、ａａ５、ａａ６、ａａ７、及びＲ２は独立して選択される。
Ｒ１は、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、アシル基（ＲＣＯ−）（式中、Ｒは、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基である）から成る群より選択される。Ｒの非限定な例としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、イソプロピル、及びイソブチルが含まれる。
ａａ１は、残基なし、アルギニン、リジン、オルニチン、シトルリン、炭素数２〜８のΩ−アミノアシル基、炭素数２〜６のΩ−グアニジニルアシル基、アルギニン代替物（限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、４−グアニジノフェニルメチルグリシルなど）から選択される。
ａａ２は、残基なし、チロシン、フェニルアラニン、ナフチルアラニン、ヒスチジン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、トリプトファン、フェニルグリシン、ピリジルアラニン、ホモセリン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、及び４−クロロフェニルアラニンから選択される。
ａａ３は、残基なし、スレオニン、セリン、β−ヒドロキシバリン、アロスレオニン、バリン、ｔｅｒｔ−ブチルロイシン、ロイシン、プロリン、ピペコリン酸、アゼチジン−２−カルボン酸、ヒドロキシプロリン、及びアラニンから選択される。
ａａ４は、残基なし、バリン、プロリン、ピペコリン酸、アゼチジン−２−カルボン酸、ヒドロキシプロリン、チアゾリジン−４−カルボン酸、及び２，２−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸から選択される。
ａａ３−ａａ４は一緒に、３−アミノインドリジジン−２−オン ９−カルボン酸、３−アミノピロリジジン−２−オン ８−カルボン酸、３−アミノキノリジジン−２−オン １０−カルボン酸、８−アミノインドリジジン−９−オン ２−カルボン酸、ジペプチド代替物、又はβターンの模倣体、例えば、限定するものではないが、Ｈａｎｅｓｓｉａｎ及びＭｃＮａｕｇｈｔｏｎ−Ｓｍｉｔｈ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５３：１２７８９−１２８５４、１９９７）に概説された例から成ることができる。
ａａ５は、残基なし、アラニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、及びα−アミノアジピン酸から選択される。
ａａ６は、残基なし、アラニン、バリン、ロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、例えば、限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンなど、芳香族アミン又はアリールアルキルアミン、例えば、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンなどから選択される。
ａａ７は、残基なし、アラニン、バリン、ロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、例えば、限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンなど、芳香族アミン又はアリールアルキルアミン、例えば、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンなどから選択される。
Ｒ２は、残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、例えば、限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンなど、芳香族アミン及びアリールアルキルアミン、例えば、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、フェニルエチルアミンなどから選択される。
一般配列Ｒ１−ａａ１−ａａ２−ａａ３−ａａ４−ａａ５−ａａ６−ａａ７−Ｒ２の残基のキラル中心の立体化学配置は、Ｒ−及びＳ−配置であり、Ｄ−及びＬ−配置であり得ることに注目すべきである。ペプチドは全てＤ−異性体から成ることが望ましい。オレフィンは、シス−及びトランス−幾何異性であり得る。一般配列Ｒ１−ａａ１−ａａ２−ａａ３−ａａ４−ａａ５−ａａ６−ａａ７−Ｒ２のアミノ酸残基も、キラルα炭素が窒素で置換されたでアザ−アミノ酸対応物、例えば、限定するものではないが、アザ−アラニン、アザ−チロシン、及びアザ−フェニルアラニンなどであり得る。
本発明は、本発明のペプチドアンタゴニスト及びアゴニストを発現する核酸配列も包含するものである。発現ベクター、制御配列（例えばプロモーター）、リーダー配列、及びそのような配列を産生させて細胞に導入するための方法は当該技術分野において周知である。したがって、本発明の１つの望ましい態様では、本発明の化合物、例えばアンタゴニストペプチドを、組換え技術によって細胞内で発現させる。細胞は原核細胞（例えば細菌細胞）であることが望ましく、化合物は原核細胞から精製されることが望ましい。他の望ましい態様では、本発明の化合物、例えばアンタゴニストペプチドは、サイトカイン（例えばＶＥＧＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−４、又はＩＧＦ−１）活性を調節する必要がある真核細胞（例えばヒト細胞のような哺乳動物細胞）で産生される。
定義
特に定義しない限り、本明細書で使用する科学用語及び技術用語並びに命名法は、本発明が関係する分野において通常の技術を有する者が一般に理解するのと同じ意味である。一般に理解されている分子生物学用語の定義は、例えば、Ｓｉｇｎｌｅｔｏｎら、微生物学及び分子生物学事典、第２版（１９４４、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ニューヨーク）；Ｈａｒｐｅｒ Ｃｏｌｌｉｎｓの生物学事典（Ｈａｌｅ及びＭａｒｈａｍ、１９９１、Ｈａｒｐｅｒ Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ、ニューヨーク、ニューヨーク州）；Ｒｉｅｇｅｒら、古典及び分子遺伝学用語集、第５版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．、ニューヨーク、１９９１；並びにＬｅｗｉｎ、遺伝子ＶＩＩ、オックスフォード大学出版、ニューヨーク、２０００に見い出すことができる。概して、細胞培養法、感染法、及び分子生物学的方法などは、当該技術分野で用いられる一般的方法である。そのような標準技術は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、分子生物学の最新プロトコール、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ニューヨーク、２００１；及び、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、分子クローニング：実験室マニュアル、第３版、コールドスプリングハーバー研究所出版、ニューヨーク、２００１などの参考書に見い出すことができる。
本明細書では、２０の天然アミノ酸及びそれらの略語は慣用の用法に従うものである。立体異性体（例えばα，α−２置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、及び他の非従来型アミノ酸などのＤ−アミノ酸）も本発明のポリペプチドに適当な成分であり得る。非在来型アミノ酸の例としては、限定するものではないが、シトルリン、オルニチン、ノルバリン、４−（Ｅ）−ブテニル−４（Ｒ）−メチル−Ｎ−メチルスレオニン（ＭｅＢｍｔ）、Ｎ−メチル−ロイシン（ＭｅＬｅｕ）、アミノイソ酪酸、スタチン、Ｎ−メチル−アラニン（ＭｅＡｌａ）が含まれる。
本明細書に用いる用語「芳香族アミン」は、炭素原子６〜１０の環を有する分子を表す。芳香族アミンの例としては、限定するものではないが、フェニルメチルアミン、フェニルエチルアミン、フェニルプロピルアミン、及び飽和又は不飽和炭化水素鎖を含むアミンが含まれる。
本明細書に用いる用語「アリールアルキルアミン」は、飽和又は不飽和炭化水素鎖を含有するアミンを表す。１級アリールアルキルアミンは、炭素原子６〜１０の環で構成される。アリールアルキルアミンの例としては、限定するものではないが、フェニル、トリル、アルコキシフェニル、アルコキシカルボニルフェニル、及びハロフェニルが含まれる。
本明細書に用いる用語「アリール」は、フェニル、１−ナフチル、及び２−ナフチルである。本明細書に用いる用語「置換アリール」は、フェニル、ヘテロアリール、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、ハロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、アミノ、−ＮＨ（低級アルキル）、及び−Ｎ（低級アルキル）２から成る群より選択される置換基を有するフェニル、１−ナフチル、及び２−ナフチル、並びにメチル、メトキシ、メチルチオ、ハロ、ヒドロキシ、及びアミノから選択される置換基を含有する１−、２−、及び３−置換のフェニル、１−ナフチル、及び２−ナフチルである。
本明細書に用いる用語「アルキル」は、７以下の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖ラジカルを表す。本明細書に用いる用語「低級アルキル」は、４以下の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖ラジカルを表し、用語「アルキル」の望ましいサブグループである。
本明細書に用いる用語「置換アルキル」は、１以上、望ましくは１、２、又は３つの水素原子が、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ハロゲン、トリフルオロメチル、−ＮＨ（低級アルキル）、−Ｎ（低級アルキル）２、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、カルボキシ、アリール、及びヘテロアリールから成る群より選択される置換基で置換されている、７以下の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖ラジカルを表す。
本明細書では、２０の天然Ｌ−アミノ酸及びそれらの略語は慣用の用法に従うものである。本明細書に用いるポリペプチドの表示では、標準的用法及び慣例に従って、左方向はアミノ末端であり、右方向はカルボキシ末端である。
本明細書では、用語「ペプチド」及び「ポリペプチド」は、ペプチド結合内に多数のアミノ酸又はイミノ酸（又はそれらの同等物）を含む高分子を表す。ペプチド又はポリペプチドは、翻訳後修飾されていても、されていなくてもよい。望ましい態様では、ペプチドはサイトカイン受容体の可動領域に由来し、ペプチドが可動領域と相補的であり、標的ドメインの輪郭になるように選択されることが望ましい。ペプチド及びポリペプチドは、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−４、又はＩＧＦ−１の受容体のＤ−アミノ酸アンタゴニストペプチド、及びＶＥＧＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−４、又はＩＧＦ−１の受容体の活性を調節可能なペプチドの他の誘導体のような、サイトカイン受容体小断片ペプチドであることが望ましい。ペプチド誘導体は、Ｎ末端又はＣ末端アミノ酸にＤ−アミノ酸を含有することが望ましい。望ましい態様では、ペプチドは、本明細書に記載のＶＥＧＦＲペプチド２．１、２．２、若しくは２．３、又はＡＰＧ−２０１、ＡＰＧ−２０２、ＡＰＧ−２０３、ＡＰＧ−２０４、ＡＰＧ−２０５、若しくはＡＰＢ−２０６ペプチド、又はＡＰＩ−１０１、ＡＰＩ−１０３、若しくはＡＰＩ−１０６ペプチド、又はＡＰＩ−４０１、ＡＰＩ−４０２、ＡＰＩ−４０３、ＡＰＩ−４０４、若しくはＡＰＩ−４０５ペプチドである。修飾の例としては、Ｎ末端のアセチル化、グルコシル化、及びビオチン化が含まれる。例えば、ポリペプチドを、相互作用ドメインの生物活性を変えることなく安定性を高めるように修飾することができる。
更に、ペプチドは、特定のサイトカイン受容体の活性化（例えばオリゴマー化）を阻害する性質をそれぞれ有するが、可動領域内で隣接していない２つのペプチドの配列で構成することができる。そのようなペプチドも、内部欠失を有する特定のサイトカイン受容体に対応する配列を有するものとして記載することができる。
本明細書に用いる用語「可動領域に由来するペプチド」は、サイトカイン受容体可動領域のどこかに位置する５〜２０の連続アミノ酸のセグメントに対応するように作製される５〜約２０アミノ酸からなるペプチドを表す。そのようなペプチドを、本明細書に記載のように、更に修飾又は機能的誘導してもよい。可動領域に由来する誘導されたペプチドは、少なくとも７アミノ酸からなるペプチドであることが望ましい。
本明細書に用いる用語「短鎖ペプチド」は、約６〜２５アミノ酸からなるアミノ酸配列を表す。
本明細書に用いる用語「逆Ｄ−ペプチド」は、Ｌ−アミノ酸含有ペプチドに対して逆配列に配置された、Ｄ−アミノ酸を含有するペプチドを表す。例えば、Ｌ−アミノ酸ペプチドのＣ末端残基は、Ｄ−アミノ酸ペプチドのＮ末端になる、などである。逆Ｄ−ペプチドは、Ｌ−アミノ酸ペプチドと同一３次元立体構造を保持するために同一活性を保持することが望ましいが、本来のペプチドよりもインビトロ及びインビボで酵素分解に対して安定であるために高い治療効力を有し得ることが望ましい（Ｂｒａｄｙ及びＤｏｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：６９２−６９３、１９９４；並びに、Ｊａｍｅｓｏｎ及びＭｃＤｏｎｎｅｌ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：７４４−７４６、１９９４）。
本明細書において、「アンタゴニスト」、「ペプチドアンタゴニスト」、又は「ＩＧＦ−１受容体アンタゴニスト」は、ＩＧＦ−１受容体の生物活性を（完全に又は部分的に）阻害可能な化合物を表す。用語「アンタゴニスト」、「ペプチドアンタゴニスト」、又は「ＩＧＦ−１受容体アンタゴニスト」には、アンタゴニストの性質を有する公知化合物の増強剤も含まれる。
本明細書において、「機能的誘導体」という表記は、アミノ酸配列の機能的誘導体と関連して、本来の配列と実質的に類似の生物活性（機能又は構造）を保持する分子を意味する。機能的誘導体又は同等の天然誘導体は合成により調製することが望ましい。望ましい機能的誘導体の例としては、１以上のアミノ酸の置換、欠失、又は付加を有するアミノ酸配列が含まれるが、タンパク質の生物活性が保存されている（例えば、該誘導体がＶＥＧＦ受容体、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−４受容体、又はＩＧＦ−１受容体の非競合的アンタゴニストとして作用する）ことを条件とする。置換するアミノ酸は、置換されるアミノ酸と類似の物理化学的性質性質を有することが望ましい。望ましい類似の物理化学的性質には、電荷、かさ、疎水性、親水性などにおける類似性が含まれる。更に、用語「機能的誘導体」には、本明細書に開示のＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ、及びＩＧＦ−１Ｒの結合ペプチドの「断片」、「類似体」、又は「化学誘導体」が含まれる。
用語「生物活性」又は「サイトカイン受容体活性」又は「サイトカイン受容体活性化」又は「受容体活性」は、サイトカイン又はサイトカイン受容体の検出可能な生物活性を表す。サイトカインは、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−４、又はＩＧＦ−１であることが望ましく、サイトカイン受容体は、ＶＥＧＦ受容体、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−４受容体、又はＩＧＦ−１受容体の遺伝子又はペプチドであることが望ましい。活性には、がん細胞のＩＧＦ−１誘導性増殖若しくは遊走の測定及び／又はＩＧＦ−１受容体の自己リン酸化の定量など、細胞シグナル伝達におけるサイトカイン受容体タンパク質の特異的生物活性が含まれることが望ましい。生物活性には、例えば、化合物、基質、及び相互作用タンパク質などの、ＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ、又はＩＧＦ−１Ｒへの結合も含まれる。例えば、ＩＧＦ−１応答又はＩＧＦ−１Ｒの結合若しくは相互作用を阻害又は増大（即ち調節）する能力に対する試験化合物の効果の測定には、本発明によるＩＧＦ−１Ｒ生物活性の測定が含まれる。更に、本発明のペプチド、ペプチド誘導体、又はペプチド模倣薬の非存在下及び存在下での受容体サブユニット（例えばＩＧＦ−１Ｒのα及びβサブユニット）の分子内又は分子間結合の測定には、ＩＧＦ−１Ｒ受容体活性の測定も含まれる。ＩＧＦ−１Ｒ受容体活性又は生物活性には、この受容体の生化学測定、立体構造変化、リン酸化状態、タンパク質リン酸化（又は他の翻訳後修飾、例えば、ユビキチン化、ＳＵＭＯ化、パルミチル化、プレニル化など）のような受容体シグナル伝達の下流の効果、キナーゼの効果、又は当該技術分野に公知の技術で測定できるペプチドの他の特徴も含まれる。更に、ＩＧＦ−１Ｒ受容体活性又は生物活性には、リガンド（例えばＩＧＦ−１）の受容体への作用によって調節される、細胞の運動性、細胞増殖、又は他の細胞表現型の検出可能な変化が含まれる。
ＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ、又はＩＧＦ−１Ｒの生物活性は、本明細書に記載のリン酸化アッセイ、血管弛緩アッセイ、及び増殖アッセイを含めた当技術分野で標準的な様々な方法を用いて測定することができる。
アミノ酸配列に関連して本明細書で用いる用語「変異体」は、構造上実質的に同一であり、基礎となるペプチド又はポリペプチドの生物活性の少なくとも１つを維持しているペプチド又はポリペプチドを表す。同様に、核酸配列に関連して本明細書で用いる用語「変異体」は、変異体の基礎となる核酸配列と構造上実質的に同一であり、基礎となる核酸配列によってコードされるペプチド又はポリペプチドの生物活性を少なくとも１つ有するペプチド又はポリペプチドをコードする核酸配列を表す。
本明細書に用いる用語「サイトカイン」は、成長因子を含めたサイトカインを表す。同様に、用語「サイトカイン受容体」は、本明細書では、成長因子受容体を含めたサイトカイン受容体を表す。サイトカイン受容体は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）受容体、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、又は上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体などのチロシンキナーゼ受容体ファミリーのメンバーであることが望ましい。他の望ましい態様では、サイトカイン受容体は、インターロイキン２、３、４、５、７、９、又は１５受容体などのＩ型受容体、インターロイキン１０受容体、インターフェロンα受容体（ＩＦＮαＲ）、ＩＦＮβＲ、又はＩＦＮＲなどのＩＩ型受容体、形質転換成長因子β受容体（ＴＧＦβＲ）、ケモカイン受容体；あるいは神経成長因子／腫瘍壊死因子（ＮＧＦ／ＴＮＦ）受容体、又はインターロイキン１のＩ型若しくはＩＩ型受容体である。
更に、サイトカイン受容体はヒトサイトカイン受容体であることが望ましい。しかしながら、他の哺乳動物サイトカイン受容体を使用することも望ましいものであり得る。特に、ウズラ、マウス、ラット、又はウマのＶＥＧＦＲ、マウス、ラット、又はウマのＩＬ−１Ｒ、及びマウス、ブタ、又はウマのＩＬ−４Ｒの使用は望ましいものであり得る。
本明細書において用語「受容体の膜近傍領域」は、細胞膜付近に位置する受容体の細胞外領域を表す。長さ約２０アミノ酸以下にわたる領域であることが望ましい。
本明細書に用いる用語「受容体の可動領域」は、この領域を曲げ、伸ばし、ねじり、又はその立体構造を変化させることを可能にする十分な可動性を有する受容体の領域を表す。単独の立体構造又は他の可動領域の他の立体構造変化との組み合わせは、受容体の生物活性を誘導し又は促進することが望ましい。受容体の可動領域には、膜近傍領域、２次構造（例えばαへリックス、βシート、ループ、βターン）を有する領域のようなオリゴマー化領域、及び受容体のドメイン間の可動領域、又は２つのβシート間の長いループの可動領域が含まれる。
本明細書に用いる用語「被験者」又は「患者」は、治療、観察、又は実験の対象である哺乳動物、望ましくはヒトを表す。
本明細書に用いる用語「阻害する」、「減ずる」、「妨げる」、又はこれらの用語の変形は、生物活性の測定可能な減少を表す。測定可能な減少とは、生物活性の完全な阻害であることが望ましい。例えば、ペプチド、ペプチド誘導体、又はペプチド模倣薬は、細胞をペプチド、ペプチド誘導体、又はペプチド模倣薬と接触させた後、ペプチド、ペプチド誘導体、又はペプチド模倣薬と接触させなかった対照細胞と比較して、細胞増殖の低下が測定される場合にＶＥＧＦＲ又はＩＧＦ−１Ｒの活性を阻害することがわかる。
本明細書では、用語「精製された」は、天然に付随する他の成分から分離された分子（例えばＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＧＦ−１Ｒ、ペプチド、ペプチド誘導体、ペプチド模倣薬、又は核酸配列）を表す。したがって、例えば「精製ＶＥＧＦＲ」又は「精製ＩＧＦ−１Ｒ」は、天然には認められないレベルまで精製されている。「実質的に純粋な」分子は、天然に付随する多くの他の成分を欠く分子、例えば、５０、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００重量％純粋な分子である。実質的に純粋な分子は、化学合成、天然供給源からのペプチドの分離、又は天然ではペプチドを生成しない組換え宿主細胞におけるペプチドの産生によって得ることができる。
核酸配列に関して「単離された」とは、単離核酸配列が由来する天然遺伝子内で該核酸配列に隣接する核酸配列を含まない核酸配列を意味する。したがって、この用語には、例えば、ベクター；自己複製プラスミド若しくはウイルス；原核細胞若しくは真核細胞のゲノムＤＮＡに組み込まれているか、又は他の配列から独立した別個の分子（例えばｃＤＮＡ、又はＰＣＲ若しくは制限エンドヌクレアーゼ消化によって産生されたゲノム若しくはｃＤＮＡの断片）として存在する組換えＤＮＡが含まれる。更なるポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えＤＮＡも含まれる。
対照的に、「粗製」という用語は、天然に付随する成分から分離されていない化合物を意味する。したがって、用語「分離する」又は「精製する」は、生体サンプルの１以上の成分を、サンプルの１以上の他の成分から取り出す方法を表す。化合物、例えばペプチドは、Ａｕｓｕｂｅｌら（分子生物学の最新プロトコール、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ニューヨーク、２０００）に記載のような標準的技術を用いて、当該技術分野に熟練した者が精製することができる。化合物は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、カラムクロマトグラフィ、光学密度、ＨＰＬＣ解析、又はウエスタン解析（Ａｕｓｕｂｅｌら、分子生物学の最新プロトコール、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ニューヨーク、２０００）を用いて測定したとき、出発物質よりも少なくとも２倍、５倍、又は１０倍純粋であることが好ましい。好ましい精製方法には、塩析、ゲルろ過、疎水性相互作用クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、レクチンクロマトグラフィ、逆相クロマトグラフィ、及びこれらの方法の組み合わせが含まれる。ペプチドから分離された成分の例としては、タンパク質、炭水化物、又は脂質などの他の成分を含み得る通常水溶液中の核酸が含まれる。
「実質的に同一」とは、ポリペプチド又は核酸の配列が対照のアミノ酸又は核酸の配列に対して少なくとも４０％、好ましくは５０％、６０％、７０％、７５％、又は８０％、より好ましくは８５％、９０％、又は９５％、最も好ましくは９９％の同一性を示すことを意味する。ポリペプチドでは、比較する配列の長さは、一般に少なくとも１５の連続アミノ酸、好ましくは少なくとも２０の連続アミノ酸、より好ましくは少なくとも２５、５０、７５、９０、１００、１５０、２００、２５０、又は３００の連続アミノ酸、最も好ましくは全長のアミノ酸配列である。核酸では、比較する配列の長さは、一般に少なくとも４５の連続ヌクレオチド、好ましくは少なくとも６０の連続ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも７５、１５０、２５０、３００、４５０、６００、７５０、又は９００の連続ヌクレオチド、最も好ましくは全長のヌクレオチド配列である。例えば、ヒトと、ウズラ、マウス、ラット、及びウマのＶＥＧＦＲアミノ酸配列は、実質上同一である。（これらの配列は、７０％〜８２％の類似性を共有する。）同様に、ヒトと、マウス、ラット、及びウマのＩＬ−１Ｒ配列は、それぞれ、６８％、６７％及び７７％の配列類似性を共有し、ヒトと、マウス及びウマのＩＬ−４Ｒのアミノ酸配列は、それぞれ４８％及び５９％の配列類似性を共有する。
用語「医薬的に許容可能な担体」は、ペプチド、ペプチド誘導体、又はペプチド模倣薬の生物活性の有効性を妨げず、投与される宿主（例えば患者）に対して毒性がない担体媒質を表す。
「治療上有効な」又は「医薬的に有効な」量は、所望の効果を誘導するのに十分な本発明のペプチド、ペプチド誘導体、又はペプチド模倣薬の量を表す。そのような効果は、疾患の徴候、症状、若しくは原因の緩和又は軽減、あるいは標的生理学的システムの他の望ましい変化であり得る。例えば、本発明の化合物は、ＩＧＦ−１の生成又は応答の欠如によって細胞及び／又は組織の生理機能又は恒常性が低下する疾患又は病状の治療において治療的価値を有する。疾患及び病状の例としては、乳癌、肺癌、結腸癌、及び前立腺癌、異常な血管新生及び脈管形成、糖尿病性網膜症及び未熟児網膜症、黄斑変性、並びに乾癬のような増殖性及び／又は炎症性の皮膚疾患が挙げられる。
本明細書において「増殖性疾患」は、結果として細胞を異常に増殖させる分化した細胞内での遺伝子変化を表す。そのような変化には、細胞周期の調節、増殖制御の調節、又はアポトーシスの調節に関与する遺伝子の突然変異が含まれ、腫瘍抑制遺伝子及び癌原遺伝子が更に含まれ得る。増殖性疾患の具体的例としては、乳癌、肺癌、結腸癌、及び前立腺癌のような各種の癌、並びに増殖性皮膚疾患が挙げられる。
本明細書において用語「化合物」、「分子」、「薬剤」、及び「リガンド」は、天然、合成、若しくは半合成の分子又は化合物を表す。したがって、用語「化合物」は、例えば、化学物質、高分子、細胞又は組織の抽出物（植物又は動物由来）などを意味する。化合物の非限定的な例としては、ペプチド、ペプチド誘導体、ペプチド模倣薬、抗体、炭水化物、及び医薬品が含まれる。薬剤を、ランダムスクリーニング、合理的選択を含めたさまざまな手段によって、また、例えばコンピュータモデリングのようなタンパク質又はリガンドのモデリング法を用いる合理的設計によって、選択及びスクリーニングすることができる。用語「合理的に選択された」又は「合理的に設計された」は、本発明の相互作用ドメインの立体配置に基づいて選択された化合物を規定することを意味する。当該技術分野において通常の技術を有する者に理解されるように、非天然修飾を有する高分子も、用語「化合物」の範囲内である。例えば、医薬産業において周知であり、ペプチド類似体として一般に称されるペプチド模倣薬は、本明細書に記載のようなモデリングによって作製することができる。
本明細書において「異常な脈管形成」とは、血管の異常増殖を表す。異常な脈管形成と関連する疾患の例としては、加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、並びに乳癌、肺癌、結腸癌、及び前立腺癌のような各種の癌が挙げられる。
本明細書において「化学療法剤」とは、異常増殖細胞の増殖能を直接的又は間接的に阻害する化合物を表す。化学療法剤は、例えば細胞のアポトーシスを誘導することによって、異常増殖細胞を破壊することが望ましい。化学療法剤の例には、アルキル化剤、代謝拮抗剤、天然産物及びそれらの誘導体、ホルモン及びステロイド（合成類似体を含む）、並びに合成物質が含まれる。アルキル化剤（例えばナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、及びトリアゼン）の例には、ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標））、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホルアミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、及びテモゾロミドが含まれる。代謝拮抗剤（葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体、及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含む）には、例えばメトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、及びゲムシタビンが含めることができる。天然産物及びその誘導体（ビンカ・アルカロイド、抗腫瘍抗生物質、酵素、リンホカイン、及びエピポドフィロトキシンが含まれる）には、例えばビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、パクリタキセル（パクリタキセルはタキソール（登録商標）として市販されている）、ミトラマイシン、デオキシコフォルマイシン、マイトマイシンＣ、Ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン（特にＩＦＮ−α）、エトポシド、及びテニポシドが含まれる。ホルモン及びステロイド（合成類似体を含む）には、例えば１７−α−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、タモキシフェン、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、又はゾラデックスが含まれる。合成物質（白金配位錯体などの無機錯体を含む）の例には、シスプラチン、カルボプラチン、ヒドロキシウレア、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミゾール、及びヘキサメチルメラミンが含まれる。
本明細書全体を通して、「約」という用語は、値を決定するために用いられる装置又は方法に関する誤差の標準偏差を値が含むことを示すために用いられる。
利点
サイトカインアンタゴニスト分野の最新アプローチには、可溶性受容体、サイトカインに対するモノクローナル抗体、サイトカイン模倣体、アンチセンス技術、及びキナーゼ阻害剤の開発が含まれる。しかしながら、これらの戦略は薬物開発においてほとんど成功していない。事実、これらのアプローチは、毒性が高く、２次的効果を生ずることが多い。
例えば、ＩＧＦ−１Ｒアンタゴニストには、モノクローナル抗体（ファイザー、ＣＰ−７５１，８７１（第Ｉ相臨床試験）；Ｉｍｃｌｏｎｅ、ＩＭＣ−Ａ１２；メルク、７Ｃ１０；シェリング・プラウ、１９Ｄ１２）及びチロシンキナーゼ阻害剤（Ｉｎｓｍｅｄ、ＩＮＳＭ１８ ＰＰＰ；Ｂｉｏｖｉｔｒｉｕｍ、カロリンスカ研究所；ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＡＥＷ５４１、ノバルティス；ＢＭＳ−５３６９２４、ＢＭＳ−５５４４１７、ブリストル・マイヤーズ スクイブ）が含まれる。モノクローナル抗体は、前臨床試験で有効であるが、生産経費が高く、治療効果を得るには高用量を必要とする。チロシンキナーゼ阻害剤の分野では、Ｂｉｏｖｉｔｒｉｕｍ化合物ｐｉｃｒｏｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎ（ＰＰＰ）（Ｇｉｒｎｉｔａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６４：２３６−２４２、２００４；Ｖａｓｉｌｃａｎｕら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２３：７８５４−７８６２、２００４）のみが臨床段階に入っており、チロシンキナーゼ阻害剤の中で最大の選択性が得られている；注目に値するのは、非ＡＴＰ結合ポケット標的化配列（ＡＴＰ結合ポケット）が、ＩＲ（インスリン受容体）と８４％以上同一であることである。これとは対照的に、本発明の抗ＩＧＦ−１Ｒ化合物は、より選択的で生産経費が低いため、魅力的な治療オプションである。
特異性の低いサイトカイン受容体の細胞内領域を標的とする薬物候補とは異なり、本発明の化合物は、細胞外のサイトカイン受容体特異的標的と結合するように設計されている。それ自体、本発明の化合物は、薬理反応を生ずる標的細胞に接近するために、細胞膜を前もって透過処理したり、他に傷つけたりする必要がない。
更に、本発明の化合物は非競合的アンタゴニストとして機能するため、標的受容体を阻害するために必要となる化合物の量は競合的阻害剤よりも少量である。更に、本発明の化合物は簡便に合成される。
本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明、図面及び請求の範囲から明らかになるであろう。
詳細な説明
本明細書に記載されているのは、以前から利用可能であったサイトカイン受容体アンタゴニスト及びアゴニストの欠点を克服する非競合的で有効且つ選択的な細胞外サイトカイン受容体アンタゴニスト及びアゴニストである。本発明のアンタゴニストを、サイトカイン及びそれらの受容体の不適切な発現並びに活性化による疾患又は障害の治療に使うことができる。ＩＧＦ−１Ｒアンタゴニストで治療できる疾患及び障害の例としては、癌、異常な血管新生、加齢黄斑変性症、並びに乾癬のような増殖性及び／又は炎症性皮膚疾患のような増殖性疾患が含まれる。
また、本明細書に記載されているのは、リード化合物として同一若しくは類似の分子構造又は形状を有するように構築された誘導体化合物であるが、加水分解若しくはタンパク質分解の感受性、又はそれらの生物学的特徴（例えば、受容体に対する親和性の増加）のいずれかがリード化合物と異なっていてもよい。
本明細書に記載のサイトカインアンタゴニスト及びアゴニストを同定する方法は、ドメインの間の領域、２つのβシート間の長いループ、及び受容体の膜近傍領域を含めた細胞外可動領域の位置決定に基づいており、該領域は、適当な立体構造及び／又は受容体サブユニットのオリゴマー化及び／又はその結果生ずる活性化に重要である。これらの領域は、例えば、結晶学データ、モデル構造、データベー、及び配列アライメントなどを用いて決定することができる。例えば、標的領域は、ＩＬ−１Ｒ及びＩＧＦ−１Ｒの結晶学によって提供された結晶構造データ、並びに公表されたＩＬ−４Ｒのモデル構造を基にして、本明細書において確定した。スイスプロット及びＮＣＢｉのようなデータベース並びにＣＬＵＳＴＡＬＷ及びＭＯＴＩＦＳＣＡＮプログラムでの配列アライメントは、受容体ドメインを構成する多数の領域と、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の可動領域に対する構造的類似性との比較を可能にした。サイトカイン受容体の可動領域は、オリゴマー化に直接関与する必要がないことは特記すべきである。実際、オリゴマー化を促進する領域又は受容体シグナル伝達に必要な立体構造変化に関わる領域も、本発明の範囲内にある。
ペプチド
本明細書に記載のサイトカイン受容体アゴニスト又はアンタゴニストは、サイトカイン受容体活性を阻害するユニークな機構及び作用部位を有する。特に、本明細書に記載のアンタゴニストペプチドは、戦略上、膜近傍領域、サイトカイン受容体のドメイン間の可動領域、及びオリゴマー化部位を含めた少なくとも１つの細胞外可動領域に位置し、該部位は、シグナル伝達を可能にする受容体の適切な立体構造に重要である。望ましくは、可動領域は、受容体の適当なオリゴマー化が起こり、その結果活性化されるために必要である。
本明細書に記載のサイトカイン受容体小断片又はペプチドは、サイトカイン受容体の特定の立体構造を促進し、安定化することができ、その結果、受容体活性を阻害又は活性化する。しかしながら、本明細書に記載のアンタゴニストは、必ずしもオリゴマー化部位を直接妨げるとは限らない。代わりに、アンタゴニストは、例えば、サイトカイン受容体の細胞外ドメインの（ホモ２量体及びヘテロ２量体受容体の）相補的タンパク質鎖のオリゴマー化を直接的又は間接的に妨げることによって、アンタゴニスト活性を発揮することができる。この過程は、サイトカインの酵素機能に関わる細胞内受容体ドメインの活性化を事実上妨げる。次に、疾患の発現の部分的原因となるリガンド及び／又は細胞結合受容体の過剰発現を導くシグナル伝達がそれによって妨げられる。
あるいは、サイトカイン受容体小断片ペプチド又は誘導体を用いて、シグナル伝達能力を有する活性なサイトカイン受容体構造を助成又は安定化することができる。そのようなペプチドは、アゴニストと考えられる。
本明細書中に記載の本発明の望ましい化合物は、ＩＧＦ−１受容体の生物活性を阻害し、また受容体を通してシグナル伝達を妨げることによってその活性を阻害するペプチド及び擬似ペプチドである。ＩＧＦ−１の仲介する出来事を阻害すると、例えば、腫瘍細胞のアポトーシス性、抗増殖性及び抗遊走性応答が起こり、該応答は、乳房、前立腺、結腸及び肺の癌のような様々な型の癌の予防又は治療に、虚血性及び糖尿病性網膜症の場合の異常な血管新生の阻害に（Ｋｏｎｄｏら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１１１：１８３５−１８４２、２００３；Ｓｍｉｔｈら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、５：１３９０−１３９５、１９９９；Ｐｉｅｔｒｚｋｏｗｓｋｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１２：３８８３−３８８９、１９９２；Ｈａｙｒｙ及びＹｉｌｍａｚ、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．、２７：２０６６−２０６７、１９９５）並びに、加齢による黄斑変性に（Ｌａｍｂｏｏｉｊら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．、４４：２１９２−２１９８、２００３；Ｒｏｓｅｎｔｈａｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３２３：１２０３−１２０８、２００４）に有益である。さらに、ＩＧＦ−１Ｒをコードする遺伝子の発現を減少させる能力を有するアンチセンス分子は、増殖性及び／又は炎症性皮膚疾患の影響を改善できる（ＷＯ００／７８３４１号）。また、本明細書中に記載のペプチド及び擬似ペプチドのような他の化合物を用いて、乾癬のような増殖性及び／又は炎症性皮膚疾患を治療することもできる。
表１には、サイトカイン受容体ファミリーの様々な代表的構成物の可動領域の位置を、可動領域から誘導し、該配列が標的とする特定の構成物に対する該配列の特異性で選択したペプチド配列の例と共に、列挙している。上記説明により、多数のペプチドを、本発明の標的化領域から誘導することができ、本明細書中に記載されたペプチドは、例として示しているに過ぎない。
Figure 2008542685
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阻害ペプチドの同定アッセイ
一般に、サイトカイン受容体アンタゴニスト（例えば、ペプチド、ペプチド模倣薬、小分子又は他の薬剤のような、候補あるいは試験化合物又は薬剤）の選択は、サイトカイン受容体、例えばＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ又はＩＧＦ−１Ｒ、の生物活性を測定するアッセイに基づいてよい。本明細書中に記載のアッセイには、天然又は組み換えのサイトカイン受容体を用いる。細胞画分及びサイトカイン活性のアンタゴニストについての無細胞スクリーニングアッセイは、原位置で精製して、又は組換えサイトカイン受容体を精製して用いることができる。細胞に基づくアッセイには、サイトカイン受容体を天然で発現する細胞、又は組換えサイトカイン受容体を含む細胞を用いることができる。すべての場合において、サイトカイン受容体の生物活性を、直接又は間接的に測定できる。このようして、サイトカイン受容体活性の阻害剤又は活性化剤を同定できる。阻害剤又は活性化剤それ自身を、標準組み合わせ化学技術によってさらに修飾すると、同定した元来の化合物の改良された類似体を提供できる。
本発明の化合物は、サイトカイン（例えば、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−４又はＩＧＦ−１）、並びにサイトカインの生成に影響する、またそれによって影響を受けると考えられる多くの因子、及びサイトカイン受容体へのサイトカインの結合、の生物学的役割を理解するためのインビボでのユニークな道具として有用である。本発明のアンタゴニストは、サイトカイン受容体と結合する他の化合物の開発にも有用である。なぜなら、本発明のペプチドアンタゴニストは、構造と活性の間の関係に重要な情報を提供し、そのような開発を容易にするからである。
例えば、本明細書中に記載の化合物を競争阻害剤としてアッセイ中に用いて、類似の新規ペプチド受容体アンタゴニストについてスクリーンする、又は特徴付けすることができる。そのようなアッセイ、並びにサイトカイン受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ又はＩＧＦ−１Ｒ）の発現を定量するアッセイでは、本発明のペプチド又はペプチド模倣薬を修飾することなく用いることができる、又はそれらを標識化する（例えば、検出可能なシグナルを直接又は間接的に提供する部分と共有結合又は非共有結合で連結する）ことができる。標識の例には、１２５Ｉ、１４Ｃ及び３Ｈのような放射性標識、アルカリホスファターゼ及び西洋ワサビペルオキシダーゼのような酵素（米国特許第３，６４５，０９０号）、ビオチン及びアビジンのようなリガンド、並びに生物発光、リン光、化学発光又は蛍光標識を含む発光化合物（米国特許第３，９４０，４７５号）が含まれる。
別法では、サイトカイン受容体複合体の活性を調節する試験化合物の能力の測定を、サイトカイン受容体標的分子の下流エフェクターの活性を調節する試験化合物の能力を測定することによって、行うことができる。例えば、エフェクター分子上の試験化合物の活性を測定してよい。
この分野又は薬剤発見及び開発に熟練した当業者らは、試験化合物の正確な起源が本発明の方法に重要でないことを理解している。そのような試験化合物の例としては、限定するものではないが、植物、真菌、原核細胞、又は動物からの抽出物、発酵ブイヨン及び合成化合物、並びに現存化合物の修飾物が含まれる。限定するわけではないが、サッカライド、脂質、ペプチド、及び核酸を基本とする化合物を含む、任意の数の化学化合物を無作為又は直接合成（例えば半合成又は全合成）する数多く方法もまた、入手できる。合成化合物ライブラリーは、Ｂｒａｎｄｏｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（メリマク、ニューハンプシャー州）及びアルドリッチケミカル（ミルウォーキー、ウィスコンシン州）より商品として入手できる。代わりの方法として、細菌、真菌、植物及び動物抽出物の形の天然化合物ライブラリーは、Ｂｉｏｔｉｃｓ（サセックス、英国）、Ｘｅｎｏｖａ（スラウ、英国）、Ｈａｒｂｏｒ Ｂｒａｎｃｈ Ｏｃｅａｎｏｇｒａｐｈｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｆｔ．Ｐｉｅｒｃｅ、フロリダ州）及びＰｈａｒｍａＭａｒ，Ｕ．Ｓ．Ａ．（ケンブリッジ、マサチューセッツ州）を含む、多数の源から商品として入手できる。さらに、所望であれば、天然及び合成生成物のライブラリーは、本技術分野で既知の方法に従って、例えば標準抽出法及び分画法によって、作られる。さらに、所望であれば、任意のライブラリー又は化合物は、化学的、物理的又は生化学的標準法を用いて容易に修飾される。
例えば、サイトカイン受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ又はＩＧＦ−１Ｒ）の活性を調節する、又はサイトカイン受容体をアンタゴナイズする本明細書中に記載の化合物の能力を阻害あるいは増強する化合物を同定するために、サイトカイン受容体複合体又は（天然あるいは組換え株のいずれかの）その生物学的に活性な部分を発現する細胞を試験化合物と接触させて、試験化合物がサイトカイン受容体生物活性を調節する能力を測定する、細胞ベースのアッセイを用いることができる。細胞ベースのアッセイには、増殖アッセイ、チロシンリン酸化アッセイ、遊走アッセイ及びサイトカイン受容体の生物活性を測定する任意のその他のアッセイが含まれる。
試験化合物の活性を測定するアッセイでは、サイトカイン受容体又は本発明の相互作用ペプチドあるいはペプチド模倣薬を免疫化すること、非複合型の相互作用タンパク質の１つ又は両方からの複合型の分離を容易にすること、並びにアッセイを自動化すること、が望ましい。サイトカイン受容体タンパク質への試験化合物の結合、又は試験化合物の存在下及び不在下での標的化合物とのサイトカイン受容体タンパク質の相互作用（例えば、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＲＳ−１の場合）を、反応物を含むのに適した任意の容器内で行うことができる。そのような容器の例としては、マイクロタイタープレート、試験管及び微量遠心管が含まれる。
さらに、１つ又は両方のタンパク質をマトリックスと結合できるようにするドメインを加えて、融合タンパク質を提供できる。例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ／ＩＧＦ−１Ｒ融合タンパク質又はグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ／ＩＧＦ−１Ｒ融合タンパク質を、グルタチオンセファロースビーズ（シグマケミカル、セントルイス、ミズーリ州）又はグルタチオン誘導化マイクロタイタープレート上に吸収し、次いで、試験化合物、又は試験化合物と非吸収標的タンパク質あるいはサイトカイン受容体タンパク質のいずれかと結合し、複合体形成を助ける条件（例えば塩及びｐＨについての生理学的条件）で混合物をインキュベートする。インキュベーションの後、ビーズ又はマイクロタイタープレートのウェルを洗浄し、任意の非結合成分を除去し、さらに、複合体の形成を、例えば上記のように、直接又は間接のいずれかで測定した。別法としては、複合体をマトリックスから解離させ、さらに、サイトカイン受容体結合又は活性のレベルを標準技術を用いて測定することもできる。
（技術分野で周知の）マトリックス上にタンパク質を固定化する他の技術もまた、本発明のスクリーニングアッセイに用いることができる。例えば、サイトカイン受容体タンパク質（例えば、ＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ又はＩＧＦ−１Ｒ）又はサイトカイン受容体と相互作用する分子のいずれかを、ビオチン及びストレプトアビジンと結合することによって固定化することができる。ビオチニル化されたサイトカイン受容体タンパク質又はサイトカイン受容体相互作用分子を、本技術分野で既知の技術（例えばビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ロックフォード、イリノイ州）を用いて、ビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド）から製造し、ストレプトアビジンでコートされた９６ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウェルに固定化できる。別の方法では、サイトカイン受容体タンパク質又はサイトカイン受容体相互作用分子との反応性を有する抗体は、サイトカイン受容体タンパク質がその相互作用分子と結合することを妨げないが、プレートのウェルに粘着でき、非結合の標的又はサイトカイン受容体タンパク質を、抗体結合によってウェルの中にトラップした。そのような複合体を検出する方法には、ＧＳＴ固定化複合体に関する上記の方法に加えて、サイトカイン受容体タンパク質又は標的分子と反応する抗体を用いる複合体の免疫検出、並びにサイトカイン受容体又はサイトカイン受容体相互作用分子と関連する酵素活性を検出することによる酵素結合アッセイが含まれる。
また、インビボでの実験モデルを用いてインビトロアッセイも行えることが、理解されるであろう。
インビトロアッセイ
擬似ペプチドが、サイトカインタンパク質あるいはその部分、又は標的タンパク質の上流あるいは下流のリン酸化状態を調節する能力を、例えば、インビトロでのキナーゼアッセイを用いて、試験することができる。簡潔に言えば、サイトカイン受容体標的分子（例えば、該分子を発現する細胞株からの免疫沈降受容体）を、放射性ＡＴＰ、例えばγ−３２Ｐ−ＡＴＰ、と共に、ＭｇＣｌ２及びＭｎＣｌ２を含むバッファー、例えば１０ｍＭ ＭｇＣｌ２及び５ｍＭ ＭｎＣｌ２を含むバッファー中でインキュベートできる。インキュベーションの後、免疫沈降した受容体標的分子を、還元条件下で、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分離し、膜、例えば２フッ化ポリビニリデン（ＰＶＤＦ）膜、に移し、オートラジオグラフすることができる。オートラジオグラフ上への検出可能な帯の出現は、受容体基質がリン酸化されたことを示している。また、リン酸化された基質のホスホアミノ酸分析を行い、受容体基質上の残基がリン酸化されているかを決定することもできる。簡潔に言えば、ラジオリン酸化タンパク質バンドをＳＤＳゲルから切り取り、部分的酸加水分解を行うことができる。次に、生成物を１次元電気泳動によって分離し、例えばホスホイメージャーで分析し、ニンヒドリン染色のホスホアミノ酸標準と比較することができる。そのようなアッセイは、例えば、Ｔａｍａｓｋｏｖｉｃら、（Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、３８０（５）：５６９−７８、１９９９）に記載されている。
特に、ＩＬ−１Ｒを標的とする候補ペプチドを、軟骨細胞及び網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞内で、ＰＧＥ２キナーゼレベル、ＩＬ−６及びコラーゲナーゼ発現で試験でき；ＩＧＦ−１Ｒを標的とする候補ペプチドを、Ｄｕｌ４５（ヒト前立腺癌）及びＰＣ１２（褐色細胞種）細胞内、Ａｋｔ活性で試験でき；ＩＬ−４Ｒを標的とする候補ペプチドを、Ｔヘルパー及び肺動脈内皮細胞（ＰＡＥＣ）内、Ａｋｔ活性で、さらにＰＡＥＣ細胞内、ＶＸＡＭ−１発現で試験できる。
望ましくは、候補ペプチドは、ＩＧＦ−１受容体が、ＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＨｅｐＧ２細胞のような癌細胞の細胞増殖を調節する能力を強化又は阻害する能力について、トリチル化チミジン取り込み法で、試験される。例えば、候補ペプチドは、細胞増殖を調節するＩＧＦ−１受容体能力を阻害する能力について、例えば、Ｂａｋｅｒら、（Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆ．、２８：１−１５、１９９５）；Ｃｈｅｖｉｒｏｎら、（Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆ．、２９：４３７−４４６、１９９６）；Ｅｌｌｉｏｔｔら、（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１８：３５６４−３５７３、１９９９）；及びＨｕら、（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２９０：２８−３７、１９９９）に記載のアッセイを用いて、試験される。
例えば、候補ペプチドは、ＩＧＦ−１Ｒあるいはその部分、又は上流あるいは下流の標的タンパク質のリン酸化状態を調節する能力を、ＩＧＦ−１受容体経路内で、例えばインビトロでのキナーゼアッセイを用いて、試験できる。さらに、ＩＧＦ−１Ｒを標的とする候補ペプチドを、癌細胞上での抗アポトーシス及び移動への影響について、試験できる。ペプチド存在下での抗アポトーシス効果を、細胞生命力を測定するＭＴＴ染色で試験でき、また、移動効果を、Ｂｏｙｄｅｎ容器、創傷閉鎖アッセイ、マトリゲル内での運動性で試験できる。
インビボアッセイ
上記アッセイを、さらなる開発のために、有望なリード化合物を検出するための最初の、又は基本のスクリーンとして、用いてもよい。さらに、リードペプチドを、これらの受容体を発現する哺乳動物ガン細胞株を用いる様々なアッセイ又は他のアッセイを含んでよいさらなる２次スクリーンで評価できる。
３次スクリーンには、臨床上の症状について動物モデルで同定された阻害剤の研究が含まれてよい。このように、本明細書中に記載されたような同定化合物（例えばペプチド又は擬似ペプチド）を望ましくは、ラット又はマウスのような適当な動物モデルでも試験する。例えば、ペプチドを動物モデルに用いると、そのような薬剤での治療の効率、毒性又は副作用を測定できる。代わりに、本明細書中に記載されたような同定薬剤を動物モデルに用いて、そのような薬剤の作用メカニズムを測定することもできる。さらに、本発明は、本明細書中に記載のような治療（例えば、癌、又はＩＧＦ−１受容体の調節解除又は機能不全と関連する他の病気の治療）のために上記スクリーニングアッセイによって同定された新規薬剤の使用を含む。そのようなアッセイに用いうる動物モデルには、限定するものではないが、ヌード、免疫抑制マウスでの異種移植片移植の腫瘍増殖モデル、脈管形成の虚血性モデル、及びトランスジェニック動物を含む任意の他の既知動物モデルが含まれる。
ペプチドの調製
本発明のペプチド又はペプチド誘導体を、合成（例えば排他的固相合成、部分的固相合成、フラグメント縮合、伝統的溶液合成）及び組み換え技術を含む、当業者らに周知の任意のペプチド合成法によって、得ることができる。例えば、ペプチド又はペプチド誘導体を、固相ペプチド合成によって得ることができ、簡潔に言えば、該合成は、Ｃ末端アミノ酸のカルボキシル基を樹脂（例えばベンズヒドリルアミン樹脂、クロロメチル化樹脂、ヒドロキシメチル樹脂）とカップリングし、引き続いてＮ−α保護アミノ酸を加えることからなる。保護基は、当技術分野で既知の任意のそのような基であってよい。新規アミノ酸のそれぞれを成長する鎖に加える前に、鎖に加えた前のアミノ酸の保護基を除去する。そのような固相合成は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、８５：２１４９、１９６４）；Ｖａｌｅら（Ｓｃｉｅｎｃｅ、２１３：１３９４−１３９７、１９８１）、米国特許第４，３０５，８７２号及び第４，３１６，８９１号、Ｂｏｎｄｏｎｓｋｙら（Ｃｈｅｍ．Ｉｎｄ．、Ｌｏｎｄｏｎ、３８：１５９７、１９６６）；及びＰｉｅｔｔａ及びＭａｒｓｈａｌｌ（Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．、６５０、１９７０）によって記載されている。適当な樹脂へのアミノ酸のカップリングもまた、当技術分野では熟知されており、米国特許第４，２４４，９４６号（Ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｉｎ Ｈｏｕｖｅｒ−Ｗｅｙｌ、有機化学法、第Ｅ２２ａ巻、ペプチド及びペプチド模倣薬の合成、編集長Ｍｕｒｒａｙ Ｇｏｏｄｍａｎ、Ｔｈｉｅｍｅ．Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ．ニューヨーク）に記載されている。
本発明の化合物製造の任意のプロセスの間、関係する任意の分子上の敏感な反応基を保護することが必要及び／又は望ましくあってよい。このことは、有機合成における保護基、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｍｅ及びＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、１９９１、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、ニューヨーク；及び、ペプチド：化学と生物学、Ｓｅｗａｌｄ及びＪａｋｕｂｋｅ、２００２、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、Ｗｈｅｉｎｈｅｉｍ、１４２頁；に記載されているような、基を保護する慣用の手段によって成し遂げられてよい。例えば、α−アミノ保護基には、アシル型保護基（例えば、トリフルオロアセチル、ホルミル、アセチル）、脂肪族ウレタン保護基（例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、シクロヘキシルオキシカルボニル）、芳香族ウレタン型保護基（例えば、フルオレニル−９−メトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、Ｃｂｚ誘導体）及びアルキル型保護基（例えば、トリフェニルメチル、ベンジル）が含まれる。アミノ酸側鎖保護基には、ベンジル（Ｔｈｒ及びＳｅｒ用）、Ｃｂｚ（Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ）、メチルエチル、シクロヘキシル（Ａｓｐ、Ｈｉｓ）、Ｂｏｃ（Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｃｙｓ）等が含まれる。保護基は、好都合な次の段階で、本技術分野で既知の方法を用いて、除去されてよい。
さらに、本発明のペプチドは、類似体及び他の修飾変異体を含むが、保護基と共に有機相内で、ＦＭＯＣプロトコールに従って、合成されてよい。望ましくは、ペプチドを、Ｃ１８クロマトグラフィカラムを用いた高圧液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を行い、１０〜６０％のアセトニトリル勾配で溶出して、７０％の収率で精製する。ペプチド分子量を、質量分析（Ｆｉｅｌｄｓ，Ｇ．Ｂ．『固相ペプチド合成法』、Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第２８９巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ出版、１９７７）によって、確かめることができる。
別法として、本発明のペプチドを、例えばペプチドをコードするポリヌクレオチド配列、を用いて組換体系で調製してもよい。ペプチドは、同一ペプチド内に１以上の上記修飾含んでいてもよい。また、本発明には、本明細書中に記載したペプチド又はその誘導体の薬学上許容しうる塩複合体も含まれる。
合成されたペプチド又はペプチド誘導体の精製を、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換、サイズ排除及び親和性）、遠心分離、沈殿又はペプチド及びペプチド誘導体を精製するための任意の標準的技術を含む、標準的方法で行ってもよい。例えば、薄層クロマトグラフィ又は逆相ＨＰＬＣを用いてもよい。本技術分野で周知の、また、ペプチド単離及び精製に適当な他の精製技術を用いてもよい。
本発明による化合物の調製方法は、立体異性体混合物を生じさせるが、これらの異性体は、分離クロマトグラフィのような慣用の技術によって分離できる。化合物をラセミ型に製造してもよいが、個々の鏡像異性体を、鏡像異性体特異的合成又は（ラセミ体）分割のいずれかによって、製造してもよい。化合物を、例えば、光学活性酸との塩形成によってジアステレオマー対を形成させるような標準技術によって鏡像異性体をそれらの成分に分割し、その後、分別結晶させ、さらに遊離塩基を再生させてもよい。また、化合物を、ジアステレオマーエステル又はアミドの形成によって分割し、その後キラル補助物を除去してもよい。別の方法として、化合物をキラルＨＰＬＣカラムを用いて分割してもよい。
ペプチド誘導体及びペプチド模倣薬の製造
天然アミノ酸のみからなるペプチドに加えて、ペプチド模倣薬又はペプチド類似体も本発明に包含される。ペプチド類似体は、鋳型ペプチドの性質と類似した性質を有する非ペプチド薬剤として、医薬品工業で良く用いられる。非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣体」又はペプチド模倣薬と呼ばれる（Ｆａｕｃｈｅｒｅら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、５４：２８３−２８７、１９８６；Ｅｖａｎｓら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３０：１２２９−１２３９、１９８７）。治療的に有効なペプチドと構造的に関連するペプチド模倣薬を用いて、等価の、あるいは増強された治療効果又は病気予防効果を生み出すことができる。一般に、ペプチド模倣薬は、天然発生の受容体結合ポリペプチドのような、模範となるポリペプチド（即ち、生物学的又は薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に類似しているが、所望により、１以上のペプチド結合が、本技術分野で周知の方法（Ｓｐａｔｏｌａ、ペプチド骨格修飾、Ｖｅｇａ Ｄａｔａ、１（３）：２６７、１９８３；Ｓｐａｔｏｌａら、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．、３８：１２４３−１２４９、１９８６；Ｈｕｄｓｏｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ。Ｓｃｉ．、１４：１７７−１８５、１９７９）；及びＷｅｉｎｓｔｅｉｎ．Ｂ．、１９８３、アミノ酸の化学と生化学、ペプチドとタンパク質、Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ニューヨーク）によって、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シス及びトランス）、−ＣＨ２ＳＯ−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、−ＣＯＣＨ２−などのような結合に置換されている。そのようなペプチド模倣薬は、より経済的な生産、より大きい化学的安定性、薬理学的性質（例えば、半減期、吸収、力価、効力など）の強化、抗原性の減少及びその他を含む、天然発生ポリペプチドより上の重要な長所を有することができる。
ペプチドは、インビトロでの野生型ＩＧＦ−１の阻害に有効であるが、インビボでの該ペプチドの有効性は、プロテアーゼの存在により減少するであろう。血清プロテアーゼは特異的な基質が必要である。基質は、Ｌ−アミノ酸と切断されるペプチド結合を有する必要がある。さらに、エキソペプチダーゼは、血清中のプロテアーゼ活性の最も顕著な成分であり、通常ペプチドの第１ペプチド結合に作用し、遊離Ｎ末端を必要とする（Ｐｏｗｅｌｌら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．、１０：１２６８−１２７３、１９９３）。これと比較すると、修飾形ペプチドを用いることが、都合よいこともある。修飾ペプチドは、ＩＧＦ−１に関する生物活性を与える元来のＬ−アミノ酸ペプチドの構造特性を保持しているが、都合よいことに、プロテアーゼ及び／又はエキソペプチダーゼによる切断を容易には許さない。
連続配列の１以上のアミノ酸を同型Ｄ−アミノ酸と系統的に置換する（例えば、Ｌ−リジンの代わりにＤ−リジン）と、より安定なペプチドを生成できる。このように、本発明のペプチド誘導体又はペプチド模倣薬は、すべてＬ、すべてＤ、又はＤ、Ｌ混合のペプチドであってよい。ペプチダーゼは、基質としてＤ−アミノ酸を利用できない（Ｐｏｗｅｌｌら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．、１０：１２６８−１２７３、１９９３）ため、Ｎ末端又はＣ末端のＤ−アミノ酸の存在は、ペプチドのインビボでの安定性を増加させる。逆Ｄ−ペプチドは、Ｄ−アミノ酸を含むペプチドであり、Ｌ−アミノ酸を含むペプチドと比較して逆配列にアレンジされている。従って、Ｌ−アミノ酸ペプチドのＣ末端残基は、Ｄ−アミノ酸ペプチドではＮ末端になる。逆Ｄ−ペプチドは、同じ３次構造を保持しており、それ故、Ｌ−アミノ酸ペプチドと同じ活性を保持しているが、インビトロ及びインビボでの酵素分解に対してより安定であり、従って、元来のペプチドより大きい治療効果を有する（Ｂｒａｄｙ及びＤｏｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：６９２−６９３、１９９４；Ｊａｍｅｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：７４４−７４６、１９９４）。逆Ｄ−ペプチドに加えて、共通配列又は実質上同一の共通配列変異型を含む束縛されたペプチドを、本技術分野で周知の方法（Ｒｉｚｏ及びＧｉｅｒａｓｃｈ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６１：３８７−４１８、１９９２）によって作り出すことができる。例えば、束縛ペプチドは、ジスルフィド架橋を形成する能力を持つシステイン残基を加え、それによって環状ペプチドにすることによって作り出すことができる。環状ペプチドは、遊離Ｎ端又はＣ末端を持たない。従って、該ペプチドは、もちろんエンドペプチダーゼに感受性であるが、ペプチドの末端を切断せず、エキソペプチダーゼによるタンパク質分解を許さない。Ｎ末端又はＣ末端Ｄ−アミノ酸を有するペプチド及び環状ペプチドのアミノ酸配列は、それぞれＮ末端又はＣ末端Ｄ−アミノ酸残基の存在又は環状構造を除いて相当するペプチド配列と通常同一である。
アミノ及びカルボキシ末端のような環状化するために選択された位置に、適当なＳ−保護システイン又はホモシステイン残基を取り込む一方で、分子内ジスルフィド結合を含む環状誘導体を慣用の固相合成によって製造することができる（Ｓａｈら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、４８：１９７、１９９６）。鎖の組み立てが完成した後、（１）相当する２つの遊離ＳＨ官能基を結果として支持体上で酸化することでＳ−保護基を選択的に除去し、Ｓ−Ｓ結合を形成し、その後慣用法で支持体から生成物を取り出し、適当な精製法を行うこと；又は（２）完全な側鎖脱保護と同時に支持体からペプチドを除去し、次いで非常に薄い水溶液内で遊離ＳＨ官能基を酸化すること；のいずれかによって、環状化を行うことができる。
環状化するために選ばれた位置に、適当なアミノ及びカルボキシ側鎖保護アミノ酸誘導体を取り込む一方で、分子内アミド結合を含む環状誘導体を慣用の固相合成によって製造してもよい。環状化するために選択された位置に、適当なアミノ保護側鎖を有するアミノ酸残基及び適当なＳ−保護システイン又はホモシステイン残基を有するアミノ酸残基を取り込む一方で、分子内Ｓ−アルキル結合を含む環状誘導体を慣用の固相化学によって製造することができる。
ペプチドのサブ配列内の天然アミノ酸を非天然発生アミノ酸で置換することもまた、タンパク質分解への耐性を授けることができる。そのような置換は、例えば、生物活性に影響を及ぼうこと無く、Ｎ末端上に作用するエキソペプチダーゼによるタンパク質分解への耐性を授けることができる。非天然発生アミノ酸の例としては、α，α−２置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、Ｃ−α−メチルアミノ酸及びβ−メチルアミノ酸が含まれる。本発明に有用なアミノ酸類似体には、限定するものではないが、β−アラニン、ノルバリン、ノルロイシン、４−アミノ酪酸、オルニチン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、システイン酸、シクロヘキシルアラニン、２−アミノイソ酪酸、６−アミノヘキサン酸、ｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、ο−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン及びその他の非慣用のアミノ酸が含まれてよい。さらに、非天然発生アミノ酸でのペプチドの合成は、本技術分野では日常的である。
ペプチドのＮ末端又はＣ末端上に作用するペプチダーゼに対する耐性を付与するためのもう１つの有効な方法は、ペプチド末端に化学基を加えることであり、そうすることによって修飾されたペプチドは、もはやペプチダーゼの基質とはならない。１つのそのような化学修飾は、ペプチドの片方又は両方の末端のグリコシル化である。ある化学修飾、特にＮ末端グリコシル化では、ヒト血清中のペプチドの安定性が増加することが示された（Ｐｏｗｅｌｌら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．、１０：１２６８−１２７３、１９９３）。血清の安定性を強化するその他の化学修飾には、限定するものではないが、アセチル基のような１〜２０炭素の低級アルキルからなるＮ末端アルキル基の付加、及び／又はＣ末端アミド又は置換アミド基の付加が含まれる。特に、本発明は、Ｎ末端アセチル基及びＣ末端アミド基を持つペプチドからなる修飾ペプチドを含む。
また、本発明によって、誘導体がペプチドの望ましい機能的活性を保持している限りにおいて、さらなる化学部分、正常でないペプチド部分を含む他の型のペプチド誘導体が含まれる。そのような誘導体の例としては、（１）アミノ末端又はもう１つの遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体であって、該アシル基は、アルカノイル基（例えばアセチル、ヘキサノイル、オクタノイル）、アロイル基（例えばベンゾイル）又はＦ−ｍｏｃ（フルオレニルメチル−Ｏ−ＣＯ−）のようなブロック基；（２）カルボキシ末端又はもう１つの遊離カルボキシ又はヒドロキシル基のエステル；（３）アミノ又は適当なアミンとの反応によって作り出されるカルボキシ末端又はもう１つの遊離カルボキシル基のアミド；（４）ホスホリル化誘導体；（５）抗体又は他の生体リガンドと結合した誘導体及びその他の型の誘導体：が含まれる。
本発明のペプチドへのさらなるアミノ酸残基の付加より生ずるより長いペプチド配列も本発明に包含される。そのようなより長いペプチドは、上記ペプチドと同じ生物活性（例えば、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−４又はＩＧＦ−１受容体の活性化阻害）を有すると期待されるであろう。実質上多数の付加アミノ酸を有するペプチドを排除しないが、いくつかの大きいポリペプチドは、有効な配列を覆い、それによって例えば、ＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ又はＩＧＦ−１Ｒとの結合を阻害する立体構造を取りうると認識される。このような誘導体は、競合的アンタゴニストとして作用することができた。このように、本発明は、伸長を有する本明細書中に記載のペプチド又はペプチド誘導体を包含し、伸長はペプチド又は誘導体のサイトカイン受容体（例えばＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ又はＩＧＦ−１Ｒ）調節活性を破壊しないことが望ましい。
本発明に含まれるその他の誘導体は、直接、又はアラニン残基の短い伸びあるいはタンパク質分解の推定部位による（例えばカテプシンによる、例えば米国特許第５，１２６，２４９号及び欧州特許第４９５ ０４９号を参照されたい）ようなスペーサーを通してのいずれかで、互いに共有結合した本発明の２つ同一の、又は２つの異なるペプチドからなる２重ペプチドである。本発明のペプチドの多量体は、同一あるいは異なるペプチド又はその誘導体から形成される分子のポリマーからなる。
また、本発明は、別のタンパク質のアミノ酸にそのアミノ末端あるいはカルボキシ末端又はその両方で連結した、本明細書中に記載のペプチド又はそのフラグメントを含むキメラ又は融合タンパク質であるペプチド誘導体を包含する。そのようなキメラ又は融合タンパク質は、タンパク質をコードする核酸の組み換え発現によって、作り出されてもよい。例えば、キメラ又は融合タンパク質は、本発明のペプチドの少なくとも６つのアミノ酸を含んでよく、望ましくは、本発明のペプチドと等価又はより大きい機能的活性を有する。
本発明のペプチド誘導体を、置換、付加又は欠落によってアミノ酸配列、又はアミノ酸残基を変えることによって作り、望みの通り、機能的に等価な分子又は機能的に強化あるいは縮小された分子を提供することができる。本発明の誘導体には、限定するものではないが、基本のアミノ酸配列として、本明細書中に記載のペプチド（例えば、ＶＥＧＦＲペプチド２．１、２．２あるいは２．３、又はＡＰＧ−２０１、ＡＰＧ−２０２、ＡＰＧ−２０３、ＡＰＧ−２０４、ＡＰＧ−２０５あるいはＡＰＧ−２０６ペプチド、又はＡＰＩ−１０１、ＡＰＩ−１０３あるいはＡＰＩ−１０６、又はＡＰＩ−４０１、ＡＰＩ−４０２、ＡＰＩ−４０３、ＡＰＩ−４０４あるいはＡＰＩ−４０５ペプチド）のアミノ酸配列のすべて又は部分を含み、機能的に等価なアミノ酸残基の置換を含む変化した配列を含む該誘導体が含まれる。例えば、配列内の１以上のアミノ酸残基を、機能的に等価として作用する類似の極性を持つ別のアミノ酸によって置換することができ、その結果生ずるのはサイレント変化である。配列内でのアミノ酸の置換を、そのアミノ酸が属するクラスの別のメンバーから選択してもよい。例えば、正に荷電した（塩基性）アミノ酸には、アルギニン、リジン及びヒスチジンが含まれる。非極性（疎水性）アミノ酸には、ロイシン、イソロイシン、アラニン、フェニルアラニン、バリン、プロリン、トリプトファン及びメチオニンが含まれる。非荷電の極性アミノ酸には、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン及びグルタミンが含まれる。負に荷電した（酸性）アミノ酸には、グルタミン酸及びアスパラギン酸が含まれる。アミノ酸グリシンは、非極性アミノ酸ファミリー又は非荷電（中性）極性アミノ酸ファミリーのいずれかに含まれてよい。アミノ酸の１つのファミリー内で行われる置換は、一般的に、保守的置換であると理解される。
ペプチド模倣薬の同定アッセイ
上記のように、本発明の方法によって同定されたペプチドの骨格幾何学及び薬剤運搬提示（ペプチド模倣薬）を模写するために作製した非ペプチド化合物は、より高い代謝安定性、より高い有効性、より長い作用期間及びよりよいバイオアベイアビリティの属性を持つこともある。
本発明のペプチド模倣薬化合物を、生物学的ライブラリー；空間的に番地付けできる平行の固相又は液相ライブラリー；脱回旋を必要とする合成ライブラリー法；「１ビース−１化合物」ライブラリー法；及び、親和性クロマトグラフィ選択を用いる合成ライブラリー法：を含む本技術分野で知られている組み合わせライブラリー法で、任意の多数の方法を用いて得ることができる。生物学的ライブラリー法は、ペプチドライブラリーに限定されるが、その他の４つの方法は、ペプチド、非ペプチドオリゴマー又は小分子化合物のライブラリーに適用できる（Ｌａｍ、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．、１２：１４５、１９９７）。分子ライブラリーの合成法の例は、本技術分野内、例えば、Ｄｅｗｉｔｔら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６９０９、１９９３）；Ｅｒｂら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：１１４２２、１９９４）；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８、１９９４）；Ｃｈｏら（Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６１：１３０３、１９９３）；Ｃａｒｅｌｌら（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９、１９９４及び同書：２０６１）並びにＧａｌｌｏｐら（Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３７：１２３３、１９９４）内で認められる。化合物のライブラリーを、溶液内（例えばＨｏｕｇｈｔｅｎ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１３：４１２−４２１、１９９２）、又はビーズ上（Ｌａｍ、Ｎａｔｕｒｅ、３５４：８２−８４、１９９１）、チップ（Ｆｏｄｏｒ、Ｎａｔｕｒｅ．３６４：５５５−５５６、１９９３）、細菌又は胞子（米国特許第５，２２３，４０９号）、プラスミド（Ｃｕｌｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：１８６５−１８６９、１９９２）又はファージ上（Ｓｃｏｔｔ及びＳｍｉｔｈ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：３８６−３９０、１９９０）又はルシフェラーゼ、及び適当な基質の生成物への転換を測定することによって検出される酵素標識に提供してもよい。
いったん本発明のペプチドが同定されると、限定するわけではないが、溶解度差（例えば沈殿）、遠心分離、クロマトグラフィ（例えば親和性、イオン交換、サイズ排除等）を含む任意の数多くの標準法によって、又はペプチド、ペプチド模倣薬又はタンパク質の精製に用いられる任意のその他の標準技術によって、単離したり精製したりすることができる。同定された興味のあるペプチドの機能性を、本技術分野で既知の任意の機能アッセイを用いて評価することができる。望ましくは、細胞内シグナル伝達の下流の受容体機能を評価するアッセイが用いられる（例えば細胞増殖）。
例えば、本発明のペプチド模倣薬化合物を、以下の３段階のプロセス：（１）本発明のペプチドを走査してサイトカイン受容体（例えばＶＥＧＦＲ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−４Ｒ又はＩＧＦ−１Ｒ）に対する認識及び活性に必要な２次構造の領域を同定するプロセス；（２）高次構造上保持されているジペプチド代理物を用いて骨格の結合構造を明らかにし、これらの代理物と関連する有機土台（organic platform）を提供するプロセス；及び（３）最善の有機土台を用いて天然ペプチドの望ましい活性を真似るように設計された候補ライブラリーに有機薬剤運搬を提示するプロセス：を用いて得ることができる。さらに詳細な３つの段階は以下の通りである。段階１では、優勢候補ペプチドを走査して、該ペプチドの構造を簡略化して該ペプチド活性の必要性を同定する。一連の起源ペプチドの類似体を合成する。段階２では、最善のペプチド類似体を、立体構造上保存されたジペプチド代理物を用いて調査する。インドリジディン−２−オン、インドリジディン−９−オン及びキノリジディノンアミノ酸（それぞれ、Ｉ２ａａ、Ｉ９ａａ及びＱａａ）を、最善のペプチド候補の骨格構造を研究するための土台として用いる。これらの、及び関係する土台（Ｈａｌａｂら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、５５：１０１−１２２、２０００；及び、Ｈａｎｅｓｓｉａｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５３：１２７８９−１２８５４、１９９７）をペプチドの特別な領域に導入して、異なる方向に薬剤運搬を向けることができる。これら類似体の生物学的評価は、活性についての立体構造上の要求を真似た改良されたリードペプチドを同定する。段階３では、最も活性なリードペプチドからの土台を用いて、天然ペプチド活性の原因となる薬剤運搬の有機代理物を提示する。薬剤運搬及び骨格は平行合成様式で兼ね合わせられる。ペプチド誘導及び上記段階を、本技術分野で既知の方法を用いた他の手段で行うこともできる。
ペプチド、ペプチド誘導体、ペプチド模倣薬及び本発明のその他の小分子から求められた構造と機能の関係を用いて、同様又はよりよい性質を有する類似の分子構造を精製し製造することができる。従って、本発明の化合物には、本明細書中に記載のペプチドの構造、極性、荷電特性及び側鎖の性質を共にする分子も含まれる。
要約すると、本明細書中の開示に基づいて、当業者らは、サイトカイン受容体活性を阻害する化合物の同定に有用なペプチド及びペプチド模倣薬スクリーニングアッセイを開発できる。そのようにして同定された化合物もまた、これらの受容体を活性化することが示されるであろう。本発明のアッセイを、低スループット、高スループット又は超高スループットスクリーニング様式で行ってもよい。本発明のアッセイには、自動操作によるアッセイも含まれる。
医薬組成物
本発明のペプチド、ペプチド誘導体及びペプチド模倣薬は、サイトカイン受容体と関連する症状又は疾患（例えばＩＧＦ−１の過剰発現又はＩＧＦ−１受容体による異常なシグナル伝達）の治療に有用である。一般に、そのような治療には、それを必要とする患者に有効量のペプチド、ペプチド誘導体あるいはペプチド模倣薬又はペプチド、ペプチド誘導体あるいはペプチド模倣薬を含む組成物を投与して、サイトカイン受容体生物活性を阻害することが含まれる。例えば、ペプチド（例えばＶＥＧＦＲペプチド２，１、２．２あるいは２，３、又はＡＰＧ−２０１、ＡＰＧ−２０２、ＡＰＧ−２０３、ＡＰＧ−２０４、ＡＰＧ−２０５あるいはＡＰＧ−２０６、又はＡＰＩ−１０１、ＡＰＩ−１０３あるいはＡＰＩ−１０６ペプチド、又はＡＰＩ−４０１、ＡＰＩ−４０２、ＡＰＩ−４０３、ＡＰＩ−４０４あるいはＡＰＩ−４０５ペプチド）又はそのペプチド誘導体及び適当な医薬担体を含む有効量の治療組成物を患者に投与して、ペプチドによって標的化されたサイトカイン受容体の生物活性を阻害し、サイトカイン受容体を通しての異常なシグナル伝達（例えばＩＧＦ−１Ｒの過剰生成を通して、あるいは本質的に活性な受容体を通してのＩＧＦ−１受容体の過剰刺激又は任意のその他の欠損）と関連する徴候を防ぐ、あるいは改善する、又は疾患、病気又は症状を治療することができる。患者は望ましくは哺乳動物（例えばヒト）である。
本発明のペプチド、ペプチド誘導体及びペプチド模倣薬を、サイトカイン受容体生物活性の阻害が長所であってよい任意の疾患、症状又は疾患での、徴候の治療、予防又は回復に用いてよい。そのような疾患、症状又は疾患には、限定するものではないが、以下の例：癌、特に乳房、肺、結腸及び前立腺癌：が含まれる。その他の症状には、糖尿病性網膜症及び未熟児網膜症、黄斑変性、並びに乾癬のような増殖性及び／又は炎症性皮膚疾患が含まれる。
医薬組成物は、経口投与型、局所クリーム、坐薬、鼻スプレー及び吸入器並びに注射及び浸剤溶液を含む様々な形であってよい。医薬組成物を製造する方法は、本技術分野で良く知られている。
本発明の範囲内にある組成物は望ましくは、逆の副作用を防ぎつつ望ましい治療効果の達成に有効な量で活性薬剤（例えばペプチド、ペプチド誘導体又はペプチド模倣薬）を含む。活性薬剤の薬学上許容しうる製造物及び塩は、本発明の範囲内にあり、本技術分野でよく知られている。ポリペプチドアンタゴニスト等の投与に関して、投与される量は望ましくは、逆の副作用を防ぐように選択される。特定の疾患、疾患又は症状の治療に有効な治療組成物又は医薬組成物の量は、疾患の性質及び重さ、作用の標的部位、患者の体重、特別な食餌制限に依存し、次いで患者、同時に行われる薬物療法、投与経路及び当業者らに理解されているその他の因子に依存する。投薬は、疾患の範囲及び患者からの異なるパラメーターのような慣用の因子に従って、医者によって適合することができる。典型的には、０．００１〜１００ｍｇ／Ｋｇ／日を患者に投与する。有効な服用量を、インビトロで又は動物モデル試験システムから誘導した服用量応答曲線から推定してもよい。例えば、ラットでの研究より得られたデータを基礎にしてヒトの有効なｍｇ／ｋｇ服用量を得るために、ラットでの有効なｍｇ／ｋｇ服用量を６で割る。
様々な送達系が知られており、ペプチド、ペプチド誘導体あるいはペプチド模倣薬又は本発明の医薬組成物の投与に利用できる。本発明の医薬組成物を、静脈内又は筋肉内注射、脳室内又は鞘内注入（中心神経系投与）、経口、局所、皮下、結膜下、又は鼻腔内、皮内、舌下、膣、直腸あるいは硬膜経由を含む、任意の適当な経路によって投与することができる。
本技術分野で周知のその他の送達系を、本発明の医薬組成物、例えば水溶液、微小粒子内カプセル化又はミクロカプセル、の送達に用いることもできる。
本発明の医薬組成物もまた、制御された放出系内に送達することができる。例えば、重合化素材を用いることができる（例えば、Ｓｍｏｌｅｎ及びＢａｌｌ、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ、Ｄｒｕｇ ｐｒｏｄｕｃｔ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ、１９８４、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ；Ｒａｎａｄｅ及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ、薬物送達システム、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ ｓｅｒｉｅｓ、２００３、第２版、ＣＲＲＣ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。代わりに、ポンプを用いてもよい（Ｓａｕｄｅｋら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３２１：５７４、１９８９）。
また、本発明の化合物は、化合物分子を結合する個々の担体としてモノクローナル抗体を用いることによって、送達されてもよい。また、本発明の化合物を、薬剤放出の制御到達に有用な生分解性ポリマー、例えばポリ乳酸、ポリオルトエステル、架橋された両親媒性ブロックコポリマー及びヒドロゲル、ポリヒドロキシ酪酸、並びにポリジヒドロピラン、に連結してもよい。
上記のように、本発明の医薬組成物には、望ましくは、薬学上許容しうる担体と組み合わせた、ペプチド、ペプチド誘導体又はペプチド模倣薬が含まれる。用語担体は、ペプチド、ペプチド誘導体又はペプチド模倣薬を投与するための希釈液、アジュバント、賦形剤又はベヒクルを表す。そのような医薬担体には、水、及び鉱物油、野菜油（例えば落花生油、大豆油、ゴマ油）、動物油又は合成由来の油を含む油のような無菌液体が含まれる。グリセロール及びデキストロース水溶液並びに食塩水もまた、本発明の医薬組成物の液体担体として用いられてよい。担体の選択は、ペプチド、ペプチド誘導体又はペプチド模倣薬の性質、その溶解性及びその他の生理学的性質並びに送達及び適用の標的部位のような、本技術分野で良く認識されている要素に依存する。例えば、血液脳関門を通ることのできる担体を、神経中心系内での疾患の徴候又は病状（例えば炎症）の治療、予防又は改善に用いる。適当な医薬担体の例としては、レミントン：薬学の科学と実践、Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ、２００３、第２１版、Ｍａｒｋ出版社に記載されている。
本発明の医薬組成物に含まれてよい医薬として適当なさらなる素材には、吸収増強剤、ｐＨ制御剤及び緩衝液、容量オスモル濃度調整剤、保存剤、安定剤、抗酸化剤、界面活性剤、濃化剤、緩和剤、分散剤、香味剤、着色剤及び湿潤剤が含まれる。
適当な医薬賦形剤の例としては、水、グルコース、スクロース、ラクトース、グリコール、エタノール、グリセロールモノステアレート、ゼラチン、小麦粉（例えば米粉）、チョーク、ステ亜リン酸ナトリウム、麦芽、塩化ナトリウム等が含まれる。本発明の医薬組成物は、溶液、カプセル、錠剤、クリーム、ゲル及び粉放出保持調合剤等の形を取ることができる。組成物を、慣用の結合剤及びトリグリセリドのような担体と共に、坐薬として調合することもできる（レミントン：薬学の科学と実践、Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ、２００３、第２１版、Ｍａｃｋ出版社を参照されたい）。そのような組成物は、患者に適当な投与の形を提供するために適当な量の担体と共に、治療上有効な量の治療組成物を含む。調合物を、投与の様式及び作用の標的部位（例えば特定の器官又は細胞の型）に合わせて設計する。
本発明の医薬組成物を、中性又は塩の形で調合できる。医薬として許容可能な塩には、遊離アミノ基と形成される塩及び遊離カルボキシル基と反応する塩が含まれる。医薬工業で通常用いられる無毒なアルカリ金属、アルカリ土類金属及びアンモニウム塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、バリウム、アンモニウム及びプロタミン亜鉛塩が含まれ、該塩は本技術分野で周知の方法によって製造される。また、本発明の化合物を適当な有機酸又は無機酸と反応させることによって一般に製造される無毒な酸付加塩も含まれる。塩には、例として、臭化水素酸塩、塩酸塩、吉草酸塩、シュウ酸塩、オレイン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、酢酸塩、リン酸塩、チソレート（tysolate）、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、ナプシル酸塩などが含まれる。
また、本発明は、ペプチド又はペプチド誘導体を修飾し、その結果、患者により安定に投与される（例えば、ひとたび投与されたならば、非修飾型と比較して、より長い半減期又はより長い有効期間を有する）。そのような修飾は、本発明が関連する当業者らによく知られている（例えばＰＥＧ化としても知られるポリエチレングリコール誘導体、ミクロカプセル化等）。
本発明のサイトカイン受容体アンタゴニストを、単独で、又はサイトカイン受容体関連疾患あるいは症状の徴候を治療、予防あるいは改善するために有用なその他の活性剤と組み合わせて、投与してよい。このように、本発明の組成物及び方法を、サイトカイン活性（例えばサイトカイン受容体の合成、放出及び／又は該受容体との結合）を調節する、又はサイトカイン受容体関連疾患（例えば、乳癌、肺ガン、前立腺癌又は結腸癌）の徴候を減少する能力を示すその他の薬剤と組み合わせて用いることができる。そのような薬剤の例としては、限定するものではないが、モノクローナル抗体（ファイザー、ＣＰ−７５１、８７１；Ｉｍｃｌｏｎｅ、ＩＭＣ−Ａ１２；メルク、７Ｃ１０；シェリング・プラウ、１９Ｄ１２）又はチロシンキナーゼ阻害剤（Ｉｎｓｍｅｄ、ＩＮＳＭ１８ＰＰＰ；Ｂｉｏｖｉｔｒｉｕｍ、Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｃｉｒｎｉｔａら、２００４；Ｖａｓｉｌｃａｎｕら、２００４）；ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、ＡＥＷ５４１、Ｎｏｖａｒｔｉｓ（Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ ＣＳ、２００４）；ＢＭＳ−５３６９２４、ＢＭＳ−５５４４１７、ブリストル・マイヤーズ スクイブ）が含まれる。また、本発明の化合物を、化学療法関連薬剤と一緒に投与することもできる。
適当な化学療法剤は、当業者らに既知である。特に、化学療法剤として用いうる化合物のクラスには、アルキル化薬剤、代謝拮抗薬剤、天然の生成物及びそれらの誘導体、ホルモン及びステロイド（合成類似体を含む）、並びに合成物が含まれる。アルキル化剤（例えばナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、及びトリアゼン）の例としては、ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標））、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホルアミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、及びテモゾロミドが含まれる。代謝拮抗剤（葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体、及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含む）には、例えば、メトトレキサセート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、及びゲムシタビンが含まれてよい。天然産物及びそれらの誘導体（ビンカ・アルカロイド、抗腫瘍抗生物質、酵素、リンホカイン、及びエピポドフィロトキシンが含まれる）を用いてもよく、それらには、例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、パクリタキセル（パクリタキセルはタキソール（登録商標）として市販されている）、ミトラマイシン、デオキシコフォルマイシン、マイトマイシンＣ、Ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン（特にＩＦＮ−α）、エトポシド、及びテニポシドが含まれる。ホルモン及びステロイド（合成類似体を含む）には、例えば、１７−α−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、タモキシフェン、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、又はゾラデックスが含まれる。合成物（白金配位複合体のような無機複合体を含む）の例としては、シスプラチン、カルボプラチン、ヒドロキシウレア、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミゾール、及びヘキサメチルメラミンが含まれる。
本発明は、以下の非制限の実施例によって、より詳細に説明される。実施例は、実例としてのみ提供され、本発明の範囲を制限するものとして解釈すべきではない。
以下の実施例内に記載された全ペプチドは、ＦＭＯＣ（フルオレニルメチルオキシカルボニル）固相合成法に従って、有機相中保護基を伴って、合成された。ペプチドを、ＨＰＬＣ、Ｃ１８精製カラムを用い、１０〜６０％のアセトニトリル勾配で溶出して、収率７０％で精製した。ペプチドの分子量をマススペクトロメトリーで確かめた。天然アミノ酸を用いた場合、分子量は、本技術分野で既知の標準遺伝子工学技術によって得ることができる。
ＶＥＧＦＲ２アンタゴニスト
本発明のＶＥＧＦＲアンタゴニストを同定する方法は、受容体の適当な立体構造及びサブユニットのオリゴマー化とその結果生じる活性化に重要である受容体の膜近傍領域とドメインの間の領域を含む細胞外可動領域の位置決定に基礎を置いている。これらの領域は、結晶学によって提供される結晶構造データに基づいて決定された。これらの領域と結合できるアンタゴニストは、オリゴマー化を妨害することによってシグナル伝達をブロックする。該方法によって同定された領域を、図３−１及び図３−２中で、下線を引き灰色で示している。該領域の１つは、リガンドが結合するＩＧ様３ドメインの下流、すなわち残基３２０〜３５０に位置する。また、リガンド結合位置を図１に示している。第２の領域は、２つのサブユニットのＩｇ様４オリゴマー化ドメイン、すなわち残基３５０〜４００で同定された。第３の領域は、細胞膜と受容体の接合点、すなわち残基７４５〜７７０で同定された。この領域はダイマーの安定性に重要である。これらの領域は、リガンド結合を妨害しないので、これらの領域を標的とする任意のアンタゴニスト（例えばペプチド又は小分子）はリガンド結合部位の競合相手ではなく（非競合的アンタゴニストであり）、受容体の自己リン酸化に必要なオリゴマー化を妨げる、又は制限する。最大で１２のアミノ酸を有する３つのＤ−ペプチド（２．１、２．２及び２．３と名付ける）を、該領域のアミノ酸配列から誘導し、アンタゴニストとして試験した。上記のように、Ｄ−ペプチドは、様々なプロテアーゼによって分解されにくいようなので、小断片ペプチド以上に好ましい。（また、標準的方法を用いて、小断片をプロテアーゼ耐性にすることもできた。）特定のペプチドを、ＶＥＧＦＲ−ｆｌｋ−１に対する特異性故に興味をもたれ、同定した可動領域から誘導することができた全ペプチドの中から選択し：配列アライメントを、選択された３つのペプチドとの特異性を示すＶＥＧＦＲファミリー（ＰＤＧＦＲ、Ｆｌｔ−１）の別の受容体と行った。そのようなアライメントは、その他の特異的ペプチド、又は代わりとしてのより一般的なアンタゴニストの選択を可能にする。ＶＥＧＦＲに関連して本明細書中で議論された位置決定に関連する原理を、類似の形態を共有するその他の型のサイトカイン受容体にも適用できることが分かるはずである。
３つのペプチドの位置を図１に表し、また、リガンド結合領域、本来のオリゴマー化ドメイン、及びチロシンキナーゼドメイン（灰色の方形）も示している。図３−１及び図３−２では、ＶＥＧＦＲイソ型ＢＥＧＦＲ−２のドメインを、個々のドメインの開始点を矢印で印して示している。本発明のアンタゴニストが結合して受容体のオリゴマー化及び／又は活性化を妨げうる領域を箱で囲むか、下線を引いた。下線を引いた配列は、ドメインの間の領域を示し、これに対して囲った配列は、膜近傍領域を示す。ペプチド２．１、２．２及び２．３が誘導された領域を、斜体で示し、下線を引いた。本発明によるペプチドが標的とする配列に下線を引き箱で囲った。
インビトロでのペプチドの特徴
アッセイに用いるＶＥＧＦが有効で細胞毒性を持たない濃度を決定するために、ＶＥＧＦの投与量応答曲線を、２種類の細胞、すなわちＦｌｋ−１遺伝子をトランスフェクトした微小血管内皮細胞及び肺動脈内皮細胞（ＰＡＥＣ）で作製した。次に、ＶＥＧＦのペプチド２．１、２．２及び２．３（２ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、トリチウム化チミジン取り込み法によって、これら２種類の細胞の増殖を測定した。細胞を、異なるペプチドと共に、異なる濃度、３７℃でプレインキュベートした。それらを、ＶＥＧＦ（２ｎｇ／ｍｌ）と共に２４時間インキュベートした。細胞を２４時間、３Ｈ−チミジンと接触させ、洗浄し溶解した。放射能をシンチレーションカウンターで測定した。
図２Ａ及び図２Ｂに示すように、ペプチド２．１及び２．２は、微小血管内皮細胞のＶＥＧＦ誘導増殖を完全に破棄し、ＰＡＥＣ内では、ＥＣ５０がそれぞれ９μＭであった。さらに、ＶＥＧＦＲイソ型Ｆｌｋ−１又はＦｌｔのいずれかをｃＤＮＡでトランスフェクトしたＰＡＥＣを用いると、該ペプチドはＶＥＧＦＲ Ｆｌｔイソ型含有細胞の生体機能の調節に有効でないことが分かったため、該ペプチドの選択性が証明された（データには示していない）。
インビボでのペプチドの特徴
虚血性網膜症モデル
選択したペプチドの有効性を、インビボでの虚血性網膜症モデルで、ＶＥＧＦ活性化に高依存する現象で証明した。仔ラットを、８０％Ｏ２、次いで酸素正常状態（２１％Ｏ２）に晒した。ペプチドを硝子体内に最終濃度１０μＭで注射した。次いで、網膜を回収し、ＡＤＰアーゼ法で着色して、スライド上に載せた。網膜の写真をコンピュータに連結した顕微鏡で撮り、血管密度をＩｍａｇｅｐｒｏソフトウエアで評価した。図２Ｃに示したように、この実験から、試験した全ペプチドがインビボでの血管新生の誘導を阻害することが、証明された。ペプチド２．２は、血管新生の最も有効な阻害剤であることが示された。本発明の特異的ペプチドは、Ｆｌｋ−１受容体の可動領域を妨害することによって、ＶＥＧＦでのＦｌｋ−１の活性化によって生じる影響を妨げることが示された。
ＩＧＦ−１受容体アンタゴニスト
本明細書中に記載されているのは、受容体の活性を阻害するための、ＩＧＦ−１Ｒ受容体複合体の細胞外ドメインと相互作用するペプチド、その誘導体及びペプチド模倣薬である。重要なことは、これらペプチド、ペプチド誘導体及びペプチド模倣薬は、ＩＧＦ−１受容体のαサブユニットのＩＧＦ−１結合ドメインとは相互作用せず、従って、非競合的ペプチドアンタゴニストであると考えられる。本発明のＩＧＦ−１Ｒアンタゴニストの例は、表２に列挙した配列より誘導される。
Figure 2008542685
特別な理論に制限されるわけではないが、ＩＧＦ−１受容体アンタゴニストは、ＩＧＦ−１受容体の立体構造を特殊なものに変える、又は安定化し、その結果受容体活性を阻害する。本明細書中に記載されているように、本発明のペプチド、ペプチド誘導体及びペプチド模倣薬は、非競合様式でＩＧＦ−１に依存する細胞内シグナル伝達を阻害する。特に、これらのペプチドは、ＩＧＦ−１受容体シグナル伝達に応答する細胞内受容体ドメインの活性化を効率よく阻害する。細胞形質導入に次いで起こる、特定の疾患あるいは疾患の部分的原因となる増殖、遊走及び生存経路の活性化を導く事柄は、それによって妨げられる。本発明に包含されるペプチド及びペプチド誘導体の例を以下に示す。
ＡＰＧ−２０１
ＡＰＧ−２０１は、ＩＧＦ−１Ｒの生物活性をアンタゴナイズし、以下の式Ｉ：
Ｓ１Ｌ２Ｆ３Ｖ４Ｐ５Ｒ６Ｐ７Ｅ８Ｒ９Ｋ１０（配列番号２６） 式Ｉ
によって表される配列を含み、式中：
Ｓ１は、残基なし、セリン、スレオニン、バリン又はηであり；式中、ηは中性親水性アミノ酸であり、限定するものではないが、例として、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン及び（Ｄｅｔｔｗｉｌｅｒ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００３年１月１０日、６８（１）、１７７−９に記載されているように）ホモセリン、アロスレオニン及びヒドロキシプロリンが含まれ、
Ｌ２は、残基なし、ロイシン、アラニン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はφであり、式中φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を有するα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような１〜１０の炭素の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのようなアリールアルキルアミンであり、
Ｆ３は、残基なし、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン又はΣであり；式中、Σは、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を有するα−アミノ酸であり、例として、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン及びΛが含まれ；該Λは、中性脂肪族アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミン、の様な炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような芳香族又はアリールアルキルアミン；チロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルグリシン、ホモセリン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン並びに４−クロロフェニルアラニンであり、
Ｖ４は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はφであり；式中、φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、の様な疎水性側鎖を有するα−アミノ酸φ；限定するモノではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、１〜１０の炭素の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミン；であり、
Ｐ５は、残基なし、プロリン、アラニン、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（ＭｅＡｌａ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、ジエチルチアゾリジンカルボン酸（Ｄｔｃ）又はΩであり、Ωは、構造制約生成アミノ酸（Ｈａｎｅｓｓｉａｎら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６２（３）、４６５−４７３、１９９７；Ｈａｌａｂら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、５５（２）、１０１−１２２、２０００：Ｃｌｕｚｅａｕ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６９（５）、１５０４−１５１２、２００４；Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり、その非限定の例としては、アゼチジン−２−カルボン酸、ピペコリン酸、イソニペコチン酸、４−（アミノメチル）安息香酸、２−アミノ安息香酸、及びニペコチン酸が含まれる。
Ｒ６は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又は、限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル及び４−グアニジノフェニルメチルグリシルのようなアルギニン代理物（Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり、
Ｐ７は、残基なし、プロリン、アラニン、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（ＭｅＡｌａ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、ジエチルチアゾリジンカルボン酸（Ｄｔｃ）又はΩであり、Ωは、立体配座的に束縛されて作られたアミノ酸（Ｈａｎｅｓｓｉａｎら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６２（３）、４６５−４７３、１９９７；Ｈａｌａｂら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、５５（２）、１０１−１２２、２０００；Ｃｌｕｚｅａｕ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６９（５）、１５０４−１５１２、２００４；Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり、その非限定の例としては、アゼチジン−２−カルボン酸、ピペコリン酸、イソニペコチン酸、４−（アミノメチル）安息香酸、２−アミノ安息香酸及びニペコチン酸が含まれ、
Ｅ８は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸又はΨであり；Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン又は１級アリールアルキルアミンを持つ、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり、その例には、限定するものではないが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン及び４−フェニル−ベンジルアミンが含まれ、
Ｒ９は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又は、限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル及び４−グアニジノフェニルメチルグリシルのようなアルギニン代替物（Ｆｕｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり、
Ｋ１０は、残基なし、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又は、限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル及び４−グアニジノフェニルメチルグリシルのようなアルギニン代替物（Ｆｕｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）である。
Ｇ１−Ｓ１Ｌ２Ｆ３Ｖ４Ｐ５Ｒ６Ｐ７Ｅ８Ｒ９Ｋ１０（配列番号２６） 式ＩＩ
Ｓ１Ｌ２Ｆ３Ｖ４Ｐ５Ｒ６Ｐ７Ｅ８Ｒ９Ｋ１０−Ｇ２（配列番号２６） 式ＩＩＩ
Ｇ１−Ｓ１Ｌ２Ｆ３Ｖ４Ｐ５Ｒ６Ｐ７Ｅ８Ｒ９Ｋ１０−Ｇ２（配列番号２６） 式ＩＶ
式中：
Ｇ１は、ペプチドのアミノ末端に結合しており、残基なし、水素、１〜８の炭素の直鎖あるいは分枝鎖のアルキル基又はアシル基（アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル又はイソブタニルのような）であり、
Ｇ２は、ペプチドのカルボキシ末端に結合しており、残基なし、水素、ＮＨ２、限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンの様な１〜１０の炭素の脂肪族アミン；限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような芳香族あるいはアリールアルキルアミンである。
ＡＰＧ−２０２
ＡＰＧ−２０２は、ＩＧＦ−１Ｒの生物活性をアンタゴナイズし、以下の式：
Ｅ１Ｓ２Ｄ３Ｖ４Ｌ５Ｈ６Ｆ７Ｔ８Ｓ９Ｔ１０（配列番号２７） 式Ｖ
で表される配列を含み、式中、
Ｅ１は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、αアミノアジピン酸又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン又は１級アリールアルキルアミンを有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であって、その例としては、限定するものではないが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン及び４−フェニル−ベンジルアミンが含まれ、
Ｓ２は、残基なし、セリン、スレオニン、バリン又はηであり、ηは、中性親水性アミノ酸であって、その例としては、限定するものではないが、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、及び（Ｄｅｔｔｗｉｌｅｒ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００３年１月１０日、６８（１）：１７７−９に記載されているような）ホモセリン、アロスレオニン及びヒドロキシプロリンが含まれ、
Ｄ３は、残基なし、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であって、その例としては、限定するものではないが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン及び４−フェニル−ベンジルアミンが含まれ、
Ｖ４は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような疎水性側鎖を有するα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン：又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミンであり、
Ｌ５は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような疎水性側鎖を有するα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような芳香族あるいはアリールアルキルアミンであり、
Ｈ６は、残基なし、ヒスチジン、リジン、アルギニン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又は、限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシ、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル及び４−グアニジノフェニルメチルグリシルのようなアルギニン代替物（Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり、
Ｆ７は、残基なし、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン又はΣであり、Σは、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を有するα−アミノ酸であり、その例には、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン及びΛであり、Λは、中性脂肪族アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような芳香族あるいはアリールアルキルアミン；チロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルグリシン、ホモセリン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン及び４−クロロフェニルアラニンであり、
Ｔ８は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン又はΣであり、Σは、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を有するα−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン及びチロシンが含まれ、
Ｓ９は、残基なし、セリン、スレオニン、バリン又はηであり、ηは、中性親水性アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、及び（Ｄｅｔｔｗｉｌｅｒ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００３年１月１０日、６８（１）、１７７−９に記載のような）ホモセリン、アロスレオニン及びヒドロキシプロリンが含まれ、
Ｔ１０は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン又はΣであり、Σは、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を有するα−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン及びチロシンが含まれる。
Ｇ１−Ｅ１Ｗ２Ｄ３Ｖ４Ｌ５Ｈ６Ｆ７Ｔ８Ｓ９Ｔ１０（配列番号２７） 式ＶＩ
Ｅ１Ｗ２Ｄ３Ｖ４Ｌ５Ｈ６Ｆ７Ｔ８Ｓ９Ｔ１０−Ｇ２（配列番号２７） 式ＶＩＩ
Ｇ１−Ｅ１Ｗ２Ｄ３Ｖ４Ｌ５Ｈ６Ｆ７Ｔ８Ｓ９Ｔ１０−Ｇ２（配列番号２７） 式ＶＩＩＩ
式中、
Ｇ１は、ペプチドのアミノ末端に結合しており、残基なし、水素、１〜８の炭素の直鎖あるいは分枝鎖のアリル基、又はアシル基（アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル又はイソブタニルのような）であり、
Ｇ２は、ペプチドのカルボキシ末端に結合しており、残基なし、水素、ＮＨ２、限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン及びシクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような芳香族あるいはアリールアルキルアミンである。
ＡＰＧ−２０３
ＡＰＧ−２０３は、ＩＧＦ−１Ｒの生物活性をアンタゴナイズし、以下の式：
ａ１−ａ２−Ｎ１Ａ２Ｓ３Ｖ４−ａ３−ａ４−ａ５（配列番号２８） 式ＩＸ
によって表される配列を含み、式中；
Ｎ１は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、αアミノアジピン酸又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン又は１級アリールアルキルアミンを有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン及び４−フェニル−ベンジルアミンが含まれ；
Ａ２は、アラニン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミンシンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような芳香族あるいはアリールアルキルアミンであり；
Ｓ３は、セリン、スレオニン、バリン又はηであり、ηは、中性親水性アミノ酸であり、例としては、限定するものではないが、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、及び（Ｄｅｔｔｗｉｌｅｒ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００３年１月１０日、６８（１）、１７７−９に記載のように）ホモセリン、アロスレオニン及びヒドロキシプロリンが含まれる。
Ｖ４は、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミンであり；
ａ１は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又は、限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル及び４−グアニジノフェニルメチルグリシルのようなアルギニン代理物（Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり；
ａ２は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン又はΣであり、Σは、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を持つα−アミノ酸であり、その例として、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン及びチロシンが含まれ；
ａ３は、残基なし、プロリン、アラニン、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（ＭｅＡｌａ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、ジエチルチアゾリジンカルボン酸（Ｄｔｃ）又はΩであり、Ωは、構造制約生成アミノ酸（Ｈａｎｅｓｓｉａｎら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６２（３）、４６５−４７３、１９９７；Ｈａｌａｂら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、５５（２）、１０１−１２２、２０００；Ｃｌｕｚｅａｕ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６９（５）、１５０４−１５１２、２００４；Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり、その例としては、制限するものではないが、アゼチジン−２−カルボン酸、ピペコリン酸、イソニペコチン酸、４−（アミノメチル）安息香酸、２−アミノ安息香酸及びニペコチン酸が含まれ；
ａ４は、セリン、スレオニン、バリン又はηであり、ηは、中性親水性アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、及び（Ｄｅｔｔｗｉｌｅｒ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００３年１月１０日、６８（１）、１７７−９、ホモセリン、アロスレオニン及びヒドロキシプロリンが含まれ；
ａ５は、ロイシン、アラニン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミンである。
Ｇ１−ａ１−ａ２−Ｘ−ａ３−ａ４−ａ５（配列番号３１） 式Ｘ
ａ１−ａ２−Ｘ−ａ３−ａ４−ａ５−Ｇ２（配列番号３１） 式ＸＩ
Ｇ１−ａ１−ａ２−Ｘ−ａ３−ａ４−ａ５−Ｇ２（配列番号３２） 式ＸＩＩ
式中、
Ｘは、Ｎ１Ａ２Ｓ３Ｖ４（配列番号２９）を表し；また、
Ｇ１は、ペプチドのアミノ末端に付いており、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖あるいは分枝鎖のアルキル基、又は（アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル又はイソブタニルのような）アシル基であり；
Ｇ２は、ペプチドのカルボキシ末端に付いており、残基なし、水素、ＮＨ２、限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような炭素数１〜１０の脂肪族アミン、又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような芳香族あるいはアリールアルキルアミンである。
ＡＰＧ−２０４
ＡＰＧ−２０４は、ＩＧＦ−１Ｒの生物活性をアンタゴナイズするが、以下の式：
Ｉ１Ｒ２Ｋ３Ｙ４Ａ５Ｄ６Ｇ７Ｔ８Ｉ９（配列番号３３） 式ＸＩＩＩ
で表される配列を含み、式中；
Ｉ１は、残基なし、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような芳香族あるいはアリールアルキルアミンであり；
Ｒ２は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又は、限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル及び４−グアニジノフェニルメチルグリシルのようなアルギニン代理物（Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり；
Ｋ３は、残基なし、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又は、限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル及び４−グアニジノフェニルメチルグリシルのようなアルギニン代理物（Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり；
Ｙ４は、残基なし、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン、又はΣ
であり、Σは、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を持つα−アミノ酸であり、例としては、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン及びΛであり、Λは、中性脂肪族アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンの様な、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アラニン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミン；チロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルグリシン、ホモセリン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン又は４−クロロフェニルアラニンであり；
Ａ５は、残基なし、アラニン、イソロイシン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミンであり；
Ｄ６は、残基なし、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン又は脂肪族アミン及び１級アリールアルキルアミンを有する、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン及び４−フェニル−ベンジルアミンが含まれ；
Ｇ７は、残基なし、アラニン、イソロイシン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミンであり；
Ｔ８は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン又はΣであり、Σは、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を持つα−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン及びチロシンが含まれ；
Ｉ９は、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミン；である。
Ｇ１−Ｉ１Ｒ２Ｋ３Ｙ４Ａ５Ｄ６Ｇ７Ｔ８Ｉ９（配列番号３４） 式ＸＩＶ
Ｉ１Ｒ２Ｋ３Ｙ４Ａ５Ｄ６Ｇ７Ｔ８Ｉ９−Ｇ２（配列番号３５） 式ＸＶ
Ｇ１−Ｉ１Ｒ２Ｋ３Ｙ４Ａ５Ｄ６Ｇ７Ｔ８Ｉ９−Ｇ２（配列番号３６） 式ＸＶＩ
式中、
Ｇ１は、ペプチドのアミノ末端に付いており、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖あるいは分枝鎖のアルキル基、又は（アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル又はイソブタニルのような）アシル基であり；
Ｇ２は、ペプチドのカルボキシ末端に付いており、残基なし、水素、ＮＨ２、限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンの様な、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミンである。
ＡＰＧ−２０５
ＡＰＧ−２０５は、ＩＧＦ−１Ｒの生物活性をアンタゴナイズし、以下の式：
Ｅ１Ｎ２Ｆ３Ｌ４Ｈ５Ｌ６Ｌ７Ｌ８Ａ９（配列番号３７） 式ＸＶＩＩ
を特徴とする配列を含み、式中；
Ｅ１は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン又は１級アリールアルキルアミンを持つ、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン及び４−フェニル−ベンジルアミンが含まれ；
Ｎ２は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを持つ、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン及び４−フェニル−ベンジルアミンが含まれ；
Ｆ３は、残基なし、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン又はΣであり、Σは、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を持つα−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン及びΛが含まれ；Λは、中性脂肪族アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような芳香族あるいはアリールアルキルアミン；チロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルグリシン、ホモセリン、３，３−ジヒドロキシフェニルアラニン、及び４−クロロフェニルアラニンであり；
Ｌ４は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミン；であり；
Ｈ５は、残基なし、ヒスチジン、リジン、アルギニン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又は、限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル及び４−グアニジノフェニルメチルグリシルのような、アルギニン代替物（Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり；
Ｌ６Ｌ７Ｌ８は、それぞれ、残基なし、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミン；であり；
Ａ９は、残基なし、アラニン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミン；である。
Ｇ１−Ｅ１Ｎ２Ｆ３Ｌ４Ｈ５Ｌ６Ｌ７Ｌ８Ａ９（配列番号３７） 式ＸＶＩＩＩ
Ｅ１Ｎ２Ｆ３Ｌ４Ｈ５Ｌ６Ｌ７Ｌ８Ａ９−Ｇ２（配列番号３８） 式ＸＩＸ
Ｇ１−Ｅ１Ｎ２Ｆ３Ｌ４Ｈ５Ｌ６Ｌ７Ｌ８Ａ９−Ｇ２（配列番号３７） 式ＸＸ
式中、
Ｇ１は、ペプチドのアミノ末端に付いており、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖あるいは分枝鎖のアルキル基、又は（アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニルあるいはイソブタニルのような）アシル基であり；
Ｇ２は、ペプチドのカルボキシ末端に付いており、残基なし、水素、ＮＨ２、（限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような）炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、フェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミンである。
ＡＰＧ−２０６
ＡＰＧ−２０６は、ＩＧＦ−１Ｒの生物活性をアンタゴナイズし、次の式：
ａ１−ａ２−ａ３−Ｔ１Ｖ２Ｌ３Ｓ４Ｎ５Ｌ６−ａ４（配列番号３９） 式ＸＸＩ
を特徴とする配列を含み、式中：
Ｔ１は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン又はΣであり、Σは、疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を持つα−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン及びチロシンが含まれ；
Ｖ２は、残基なし、バリン、アラニン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミン；であり；
Ｌ３は、残基なし、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミン；であり；
Ｓ４は、セリン、スレオニン、バリン又はηであり、ηは中性親水性アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、及び（Ｄｅｔｔｗｉｌｅｒ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００３年１月１０日、６８（１）、１７７−９に記載のような）ホモセリン、アロスレオニン及びヒドロキシプロリンが含まれ；
Ｎ５は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン又は１級アリールアルキルアミンを持つ、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン及び４−フェニル−ベンジルアミンが含まれ；
Ｌ６は、残基なし、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン又はΦであり、Φは、限定するものではないが、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシンのような、疎水性側鎖を持つα−アミノ酸；限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンのような、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミン；であり；
ａ１は、残基なし、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又は、限定するものではないが、３−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、及び４−グアニジノフェニルメチルグリシルの様なアルギニン代替物（Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）であり；
ａ２は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸又はΨであり、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを持つ、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり、その例としては、限定するものではないが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、４−フェニル−ベンジルアミンが含まれ；
ａ３は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン又は、限定するものではないが、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル及び４−グアニジノフェニルメチルグリシルの様なアルギニン代替物（Ｆｅｎｇ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６６（４）、１１８１−１１８５、２００１）である。
Ｇ１−ａ１−ａ２−ａ３−Ｘ−ａ４（配列番号３９） 式ＸＸＩＩ
ａ１−ａ２−ａ３−Ｘ−ａ４−Ｇ２（配列番号４０） 式ＸＸＩＩＩ
Ｇ１−ａ１−ａ２−ａ３−Ｘ−ａ４−Ｇ２（配列番号４１） 式ＸＸｉＶ
式中、
Ｘは、Ｔ１Ｖ２Ｌ３Ｓ４Ｎ５Ｌ６（配列番号４２）を表す。
Ｇ１は、ペプチドのアミノ末端に付いており、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖あるいは分枝鎖のアルキル基、又はアシル基（アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル又はイソブタニルのような）であり；
Ｇ２は、ペプチドのカルボキシ末端に付いており、残基なし、水素、ＮＨ２、限定するものではないが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、シクロヘキシルアミンの様な、炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は、限定するものではないが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン及びフェニルエチルアミンのような、芳香族あるいはアリールアルキルアミンである。
インビトロでの抗ＩＧＦ−１Ｒペプチドの特徴
ＩＧＦ−１Ｒ及びＩＲ（インスリン受容体）は、構造的に非常に似ており、高い相同性（全体で７０％、触媒部位では８４％）を共にする（図２１−１〜図２１−３）。構造類似性は、抗ＩＧＦ−１Ｒアンタゴニストの開発で懸念される主な事柄の１つである。なぜなら、選択性が欠如すると、該化合物がＩＲと交差反応することによって、糖尿病を誘発しうるからである（Ｅｎｔｉｎｇｈ−Ｐｅａｒｓａｌｌ及びＫａｈｎ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７９、３８０１６−３８０２４、２００４；Ｂａｓｅｒｇａ、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ、７５３−７６８、２００５；Ｇａｒｂｅｒ、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、７９０−７９２、２００５）。他方、膜近傍の細胞外及び細胞内の領域は、チロシンキナーゼドメインより配列の相同性が少なく、従って、特異性が授与される。特異性かつ選択性を有する抗ＩＧＦ−１Ｆアンタゴニストを設計するために、該領域を標的とする。
特に、実施例１に記載の方法を用いて、ＩＧＦ−１Ｒへのアンタゴニストを作り出す。このような領域の正確な位置を、これらの領域の１つを標的とし、ＩＧＦ−１Ｒに特異性を示す小断片ペプチド又は修飾ペプチドの配列の例と共に、前記の表１に記載している（図２２−１及び図２２−２も共に参照されたい）。次に、３つのＤ−ペプチド（ＡＰＧ２０１、ＡＰＧ２０２及びＡＰＧ２０４を名付けた）をこれらの領域のアミノ酸配列から誘導すると、該ペプチドはアンタゴニストとして作用する。これらのペプチドアンタゴニストの配列は、以下の通り：ＡＰＧ−２０１、ＡＰＧ−２０２及びＡＰＧ−２０４である。該配列は、通常、ＩＧＦ−１Ｒの小断片ペプチドに相当するが、該小断片ペプチドはイソロイシンを含んでいるのに対して、該配列の場合、経済的理由から、該イソロイシンを合成ペプチド内ではロイシンに置換した。
ペプチドの親和性を、ＩＧＦ−１Ｒを発現及び過剰発現する細胞への結合研究を用いて、測定することができる。ＩＧＦ−１Ｒと同じファミリーの受容体を発現する細胞のバイオアッセイを行うことによって選択性を試験し、別のファミリーのサイトカインの受容体に対して特異性を試験する。
ＩＧＦ−１によって誘発された増殖を、Ａ５４０癌腫細胞内、ペプチドＡＰＧ２０１、ＡＰＧ２０２及びＡＰＧ２０４並びにＩＧＦ−１の存在下（１０ｎｇ／ｍｌ−図８Ａ及び１ｎｇ／ｍｌ−図８Ｂ）で、トリチル化チミジン取り込み法に従って、測定した。細胞を、異なるペプチド、異なる濃度、すなわち１０−７、１０−６及び１０−５Ｍで、前もって３７℃インキュベートした。次に、細胞を、ＩＧＦ−１（１０ｎｇ／ｍｌ又は１ｎｇ／ｍｌ）と共に２４時間インキュベートし、３Ｈ−チミジンと２４時間接触させ、洗浄し、そして溶解した。放射能のレベルをシンチレーションカウンターで測定した。
図８Ａ及び図８Ｂに示したように、該ペプチドは、Ａ５４９癌腫細胞でのＩＧＦ−１誘導増殖を完全に排除した（ＡＰＧ−２０２ではＥＣ５０＝１０−８Ｍ、ＡＰＧ−２０１では１０−６Ｍ）。
さらに、インビトロでのアンタゴニストの試験は、表３Ａに記載したように行う。
Figure 2008542685
また、我々は、その他の癌細胞の型（ＭＣＦ−７乳癌細胞、ＨｅｐＧ２肝臓癌細胞、及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳腺癌細胞）で増殖を誘発するＩＧＦ−１へのＩＧＦ−１Ｒアンタゴニストペプチドの効果について試験した。異なる癌細胞を、異なる濃度のペプチドと共に、プレインキュベート（４５分）し、その後ＩＧＦ−１（５０ｎｇ／ｍｌ）（３７℃）で２４時間刺激し；また、仔ウシの血清もＩＧＦ−１で刺激する２４時間前に排除し、その他の有糸分裂剤による増殖への影響を除いた。次に、３Ｈ−チミジン（１μＣｉ／ｍｌ）を２４時間加え、その後、細胞を５％の冷ＴＣＡで３回洗浄し、０．１Ｎ ＮａＯＨ／０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００で溶解した。放射能をシンチレーションカウンターで測定した。実験は、２重にして３回繰り返した（図１５）。
ペプチドＡＰＧ−２０３、２０４、２０５及び２０６は、最大で９０％の効力で、ＭＣＦ−７の増殖を阻害した（力価：０．１ｎＭ〜６０ｎＭ）（図１６及び表３Ｂ）。ＭＣＦ−７細胞は、エストロゲン受容体（ＥＲ）感受性細胞であり、ＩＧＦ−１の存在下で増殖する。ＩＧＦ−１Ｒは、ＥＲ感受性細胞内で過剰発現され、これらの細胞を従来のアポトーシスによる抗癌剤に応答しないようにするＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲＳ／ＰＩ−３Ｋによって生存及び増殖経路を活性化する。また、ＩＧＦ−１Ｒは多分、ＩＧＦ−１の影響を強調するＩＲＳ−１の過剰発現を誘発する（Ｂａｒｔｕｃｃｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６１、６７４７−６７５４、２００１）。もう１つの乳癌細胞株（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１；ＥＲ非感受性）では、ＡＰＧ−２０１、２０３及び２０４は、ナノモルで有効性を示す；このことは、ＡＰＧ−２０２及び２０５の場合（１μＭ）にはない。ＨｅｐＧ２肝臓癌細胞株では、ペプチドＡＰＧ−２０３及び２０６は、それぞれ５０％及び１００％の効力で増殖を阻害する。ＨｅｐＧ２細胞では、本質的なＩＧＦ−１誘導増殖は、より低濃度のペプチドによって阻害されるようだ（図１６）。
Figure 2008542685
ＩＧＦ−１Ｒの最も上流での発生する活性化工程の１つを阻害するペプチドの効力を測定するために、我々は、ＡＰＧ−２０４及びＡＰＧ−２０６ペプチド存在下でのＩＧＦ−１誘発チロシン自己リン酸化について試験した。
細胞を、抗ＩＧＦ−１Ｒペプチド（１０−６Ｍ）と共に４５分間、そしてＩＧＦ−１（５０ｎｇ／ｍｌ）と共に１５分間又は５分間、インキュベートした。ウエスタンブロット（リン酸化したチロシン抗体及びＩＧＦ−１Ｒ抗体）を、非変性条件下、全細胞溶解物について行った（図１７）。
ＡＰＧ−２０６は、ＩＧＦ−１誘発リン酸化の７０％より多くを阻害したが、ＡＰＧ−２０４はより効力が小さかった（３０％）（図１７及び表３Ｂ）。ＡＰＧ−２０６ペプチドは、β鎖と相互作用し（図１４を参照されたい）、ＡＰＧ−２０６は、活性化ループの立体構造をアロステリックに変えるであろう（Ｆｏｕｌｓｔｏｎｅら、２０５、１４５−１５３、２００５）。
ＩＧＦ−１受容体とインスリン受容体の間の１次配列相同性が高い（図２１−１〜図２１−３）と仮定すれば、ペプチドがＩＧＦ−１Ｒに真に選択的であることを保証するために、インスリン受容体に対するペプチドの活性を確かめた。その他の成長因子、すなわちＶＥＧＦ受容体、に対する選択性も測定した。
ＩＲ−ｃＤＮＡをトランスフェクトしたＣＯＳ細胞を、４５分間、ペプチド（ＡＰＧ−２０３、ＡＰＧ−２０４又はＡＰＧ−２０６）で前処理し、インスリンで５分間処理した。ウエスタンブロットを、非変性条件下、インスリン受容体特異的Ｙリン酸化抗体で行った（図１８Ａ）。抗ＩＧＦ−１Ｒペプチド存在下での肺動脈内皮細胞（ＰＡＥＣ）のＶＥＧＦ１６５誘発増殖もまた、上記条件下で確かめられた（図１８Ｂ）。ＡＰＧ−２０４及び２０６ペプチドは、ＩＲリン酸化を阻害せず、また、その他の成長因子受容体、すなわちＶＥＧＦＲ２に対しても活性を及ぼさなかった。
抗ＩＧＦ−１Ｒペプチドのエキソビボ活性
そのマイトジェン的及びアポトーシス的影響に加えて、ＩＧＦ−１もまた、血管運動緊張に影響を与える（Ｏｌｔｍａｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．、２７９、Ｅ１７６−Ｅ１８１、２０００：Ｖｅｃｈｉｏｎｅら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、３７、１４８０−１４８５、２００１）、注目すべきは血管弛緩を原因とすることによって影響を与えることを、いくつかの研究で示した。我々は、ＩＧＦ−１に応答する大動脈血管運動へのＡＰＧ２０３−２０６化合物の影響について試験した。
最初に、大動脈を、異なる濃度のペプチド及びフェニレフリンと共にインキュベートすると、大動脈狭窄を誘発した。次に、ＩＧＦ−１（２５ｎｇ／ｍｌ）を加えると、血管弛緩を誘発した。結果は、ペプチドを一緒にインキュベートしなかった対照の大動脈と比較して、示している。血管の直径を、デジタル画像解析機を用いて、測定した。血管の直径を、前狭窄剤の局所適用の前後で記録した。製造物が安定化した後、リガンド（ＩＧＦ−１、２５ｎｇ／ｍｌ）を、安定な血管拡張が認められるまで加えた。次に、ペプチドを、１０−８Ｍ〜１０−６Ｍの異なる濃度で加えた。血管拡張の逆戻りを、例えば、Ｈｏｕら（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｉｎｔｅｇｒ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２８４、Ｒ９２８−Ｒ９３５、２００３）、Ｈｏｕら（Ｓｔｒｏｋｅ、５１６−５２４；考察５２５、２０００）、及びＨｏｕら（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｉｎｔｅｇｒ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２８１、Ｒ３９１−Ｒ４００、２００１）に記載のように、目で確認し測定した。３重の測定を２種類の動物について行った。
エキソビボでの組織上への直接的なＡＰＧ化合物の効力が証明される限りにおいて、ＡＰＧ−２０６及び２０３は、特に、ＩＧＦ−１誘発血管弛緩を妨げる活性を持つ（図１９）。
抗ＩＧＦ−１Ｒペプチドのインビボ活性
成長因子として、ＩＧＦ−１は、発育中の網膜の脈管形成を行う（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９８．５８０４−５８０８、２００１；Ｋｏｎｄｏら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１１１、１８３５−１８４２、２００３）。ＩＧＦ−１ノックアウトマウス網膜（Ｐ５の仔ラット）は、対照マウスと比較して、血管増殖を１５％阻害する（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９８．５８０４−５８０８、２００１；Ｋｏｎｄｏら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１１１、１８３５５−１８４２、２００３）。虚血誘発増殖性網膜症のモデルで、Ｓｍｉｔｈ及びその共同研究者ら（Ｓｍｉｔｈら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、５、１３９０−１３９５、１９９９）は、ＩＧＦ−１Ｒ、ＪＢ３の競合的アンタゴニストを注射し、これにより、Ｐ１７の仔ラットの網膜に誘発される血管新生が５３％阻害され、異常な血管系形成でＩＧＦ−１Ｒが果たす主要な役割が示され、これにより、脈管形成の治療上の標的としてのＩＧＦ−１Ｒを確認した。
我々は、網膜の発達性脈管形成へのＡＯＧ２０３及び２０６の影響を研究した。スプラーグ・ドーリー仔ラットは、無菌水中の２μｇのペプチドをＰ５の硝子体内に注射された。仔をＰ６で犠牲にし、網膜をレクチン（Ｇｒｉｆｆｏｎｉａ ｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａ）で染色し、プレートに塗布し、血管領域を、ＩｍａｇｅＰｒｏソフトウエアを用いて定量した。
ＡＰＧ−２０６で２４時間処理した後、網膜血管増殖は、１５％阻害され、ノックアウトマウスのデータと矛盾しない。このようなインビボでの知見は、特に、癌での脈管形成の前後と特に関連している。網膜脈管形成は、癌の血管新生のモデルとして本技術分野で認識されている（Ｃａｍｐｏｃｈｉａｒｏ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２２（４２）、６５３７−６５４８、２００３）。
さらに、ＡＧＦ−２０６は、マウス内への異種移植でヒト乳癌細胞（ＭＣＦ−７）の増殖を顕著に制限する。ＭＣＦ−７細胞をＰＢＳ中に懸濁し、５週齢のヌードマウス（ＮＣｒヌード、Ｔａｃｏｎｉｃｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の脇腹領域の皮下に接種した。動物を毎日モニターし、腫瘍サイズを、Ｖｅｒｎｉｅｒ ｃａｌｉｐｅｒで２日毎に、標準式を用いて測定した：例えば、Ｋｕｍａｒら（Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．、１６３、２５３１−２５４１、２００３）及びＬｉｎｄｎｅｒら（Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、８、３２１０−３２０８、２００２）に記載されている様に、腫瘍の体積及び重さを以下の式に従って評価できる：体積（ｍｍ３）＝（４／３）×πａ２×ｂ、及び重さ（ｍｇ）＝（ａ２×ｂ）／２、式中、ａ＜ｂであり、ａ及びｂは、それぞれ幅及び長さ（ｍｍ）を表す。（また、歯の圧痕型を用いて腫瘍の容量を測定してもよい。いったん硬化したならば、このような型を水で充たし、腫瘍体積の正確な測定ができる。）ひとたび、腫瘍が目で確認でき、一貫して増殖するようになったならば（接種後１５日）、ＡＰＧ−２０６を、１日に１回、腹腔内投与した；対照動物にはベヒクルを与えた。腫瘍の例を図２５Ｂに示している。図２５Ａに示すように、ＡＰＧ−２０６は、インビボでのヒト乳癌細胞の自発的増殖速度を有意に減少し（ｐ＜０．０２）；ＡＰＧ−２０６で認められるる変化は、基準線（点の水平線）から最少差である。図２５Ａに示した結果は、処理４日後の、腫瘍サイズの増加の平均±ＳＥＭ（倍）であり、その後動物を殺した。
ヒト肝臓癌のＨｅｐＧ２異種移植モデル内でのＡＰＧ−２０６ペプチドのインビボ活性
ＨｅｐＧ２細胞を、ＰＢＳ内に懸濁し、５週齢ヌードマウス（ＮＣｒヌード、Ｔａｃｏｎｉｃｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の脇腹領域に皮下接種した。動物を毎日、体重及び腫瘍サイズについてモニターし、該重量及びサイズは、標準式を用いて２日毎にＶｅｒｎｉｅｒカリパスで測定した。腫瘍の体積及び重量は、以下の式：体積（ｍｍ３）＝（４／３）×πａ２×ｂ、及び重量（ｍｇ）＝（ａ２×ｂ）／２、ａ＜ｂ（４２，５０）；式中ａ及びｂは、それぞれ幅及び長さ（ｍｍ）を表す：に従って概算できる（Ｋｕｍａｒら、Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．、１６３、２５３１−２５４１、２００３）。ひとたび、腫瘍が目で確認でき、一貫して増殖するようになったならば（接種後１５日）、ＡＰＧ−２０６を、毎日２回、腹腔内投与した；対照動物にはベヒクルを与えた。処理９日後に投与を中止し、動物を４日後に殺した。歯の圧痕型を用いて、摘出された腫瘍の体積を最終的に測定した。ひとたび硬化したならば、このような型を水で充たし、腫瘍の体積の正確な測定ができる。腫瘍の例を図３６Ｃに示す。図３６Ａ及び図３６Ｂに示すように、ＡＰＧ−２０６は、インビボでのヒト肝臓癌細胞の自発的増殖速度を有意に減少させた（ｐ＜０．０４）。また、食塩水接種マウス内では腫瘍の増殖が続いているのに比べて、腫瘍の増殖は治療の停止後マウス内で完全に停止した。図３６Ａに示した結果では、腫瘍サイズの増加は平均±ＳＥＭ（倍）である。肝臓癌腫瘍増殖は、対照と比較して、食塩水接種マウス内で、７５％の体重減少を伴い、悪液質を引き起こした。そのような体重減少は、図３６Ｄから分かるように、ＡＰＧ−２０６で治療したマウスでは、防げた。
脈管形成阻害及び腫瘍増殖阻害についてのその他のアッセイも本技術分野で既知であり、例えば、米国特許第５，８５４，２２１号及び第５，６３９，７２５号に記載されており、その全内容を本明細書中に援用する。一般に、そのようなインビボでのアッセイシステムでは、通常、肺又は肉趾の様なあらかじめ決められた位置に悪性細胞株を注射することによって、マウス内への適当な実験的腫瘍を最初に誘発させることを含む。腫瘍を移植し増殖させた後、試験される薬剤をマウスに投与し、再び、通常一定期間の後、異なる量を投与する。アッセイの終了時に、その他の事柄の中から、腫瘍の増殖及び転移の存在の点からマウスを分析した。薬剤の病気予防効果の研究を助けるアッセイシステムでは、薬剤を、腫瘍細胞株注入に近接した側頭に投与してよい。この方法で、薬剤が腫瘍形成を妨げることができるか否かを全体的に決定できる。
第２世代ＩＧＦ−１Ｒアンタゴニストペプチドの特徴
ＡＰＧ−２０３及びＡＰＧ−２０６の誘導体を切り縮めて、活性に重要なペプチド領域を決定した。ペプチドを、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイで効力及び力価についてアッセイした。手短に言えば、３Ｈ−チミジン取り込み増殖アッセイを、ＩＧＦ−１（５０ｎｇ／ｍｌ）及び異なる濃度のペプチドの存在下で、ヒトＩＧＦ−１Ｒ ｃＤＮＡをトランスフェクトしたＮＩＨ３Ｔ３細胞で行った。
ＮＩＨ３Ｔ３−ＩＧＦ−１Ｒ細胞内では、端を切り取っていないペプチドは、標準のペプチドＡＰＧ−２０６より良好なＩＣ５０を示した。ＡＰＧ−２０６のＣ末端からのアミノ酸の除去は、力価を低下させたが、（アゴニスト応答を示す２０６．４を除くと）効力に傷をつけなかった。にもかかわらず、ＡＰＧ−２０６．６でセリンを除去すると、活性が完全に消滅した（図２３Ａ〜図２３Ｄ並びに表４及び表５）。
Figure 2008542685
Figure 2008542685
興味あることに、Ｎ末端側からペプチドの端を切り取ると、親ペプチドＡＰＧ−２０６と比較して１００％に効力が改善される。
このような結果から、ペプチドのＣ末端部分は、活性に重要であり、ペプチドを６アミノ酸に減少させても、なお、大きな効力及び力価を示すと、考えられる。さらなる突然変異分析を用いて、ＡＰＧ−２０６の作動様式を決定することができる。
ＡＰＧ−２０４との架橋実験
ＮＩＨ３Ｔ３−ＩＧＦ−１Ｒ細胞を、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）バッファーｐＨ８．０（反応バッファー）中に１０７細胞／ｍｌの濃度で再度懸濁し、氷冷した反応バッファーで３回洗浄した。個々のサンプルについての反応混合物は、１０６細胞及び１０７ｃｐｍの１２５Ｉ−ＡＰＧ−２０４を含んでいた。また、１つのサンプルは、１０３Ｍの冷ＡＰＧ−２０４ペプチドを含んでいた。負の対照では、ＮＩＨ３Ｔ３−ＩＧＦ−１Ｒ細胞をバッファーに置き換えた。次に、個々のサンプル容量を、反応バッファーで２５０μｌにした。サンプルを、室温及び／又は３７℃で、４５分間インキュベートし、ペプチドを結合させた。次に、非透過性架橋剤ＢＳ３（ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート）を最終濃度が２．５ｍＭになるように加え、サンプルを４℃で３０分間インキュベートし、ＢＳ３の活性インターナリゼーションを最少にした（１１．４Å）（Ｐｉｅｒｃｅ）（Ｐａｒｔｉｓ、Ｊ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．、２９３、２６３−２７７、１９８３；Ｃｏｘら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４５、１７１９−１７２６、１９９０；及び、Ｋｎｏｌｌｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６６、２７９５−２８０４、１９９１）。反応を、２０ｍＭ ＴＲＩＳ ｐＨ７．５で１５分間室温でクエンチした。細胞を、４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、１５０μｌのＲＩＰＡバッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、ｐＨ７．４：１５０ｍＭ ＮａＣｌ；１ｍＭ ＥＤＴＡ；２ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４；１ｍＭ ＮａＦ；１％ＮＰ−４０；０．２５％デオキシコール酸ナトリウム）を加えて氷上で３０分間溶解した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動を還元及び非還元条件下で細胞溶解物について行い、ゲル上には個々のサンプルを１０，０００ｃｐｍ負荷した。次いで、オートラジオグラフィ及び抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体とのウエスタンブロット分析を行った。
図２４Ａから図２４Ｃに示すように、オートラジオグラムでは、非還元条件下で、ＩＧＦ−１Ｒを示す２５０ｋＤａにバンドが現れた。負の対照（ＩＧＦ−１Ｒ細胞なしでの１２５Ｉ−ＡＰＧ−２０４ペプチド）では、ペプチド架橋に対していかなる非特異的ペプチドも示さなかった。また、非放射性ＡＰＧ−２０４は、ほとんどすべての１２５Ｉ−ＡＰＧ−２０４を置き換えることができた。このような結果から、設計されたペプチドは、ＩＧＦ−１Ｒと結合すること、さらに認められる生体影響は、抗ＩＧＦ−１Ｒペプチドの結合に依存することが、分かる。
インターロイキン４（ＩＬ−４）受容体アンタゴニスト
実施例１に記載した研究方法を用いて、ＩＬ−４Ｒへのアンタゴニストを作製した。該領域の正確な位置を、該領域の１つを標的とし且つＩＬ−４Ｔに特異性を示す小断片ペプチド配列又は修飾ペプチドの配列の例と共に、上記表１に記載している。ＩＬ−４Ｒ及びＩＬ−１３Ｒは、類似したＩＬ−４Ｒα鎖を共有しているが、２つの受容体は、別個の機能を示す。ＴＨ２細胞上にある主な受容体は、ＩＬ−４の受容体であり、該受容体の大部分は、ＩＬ−４Ｒα及びＩＬ−４γｃ鎖からなる。しかしながら、ＩＬ−４Ｒαから誘導されるＩＬ−４Ｒ活性の修飾因子は、ＩＬ−１３Ｒ活性をも調節すると予想される。
ＩＬ−４Ｒを発現又は過剰発現する細胞上への結合研究を用いて、親和性を測定する。ＩＬ−４Ｒと同じファミリーの受容体を発現する細胞でバイオアッセイを行うことによって選択性を試験し、また、別のファミリーのサイトカイン受容体に対して、特異性を試験した。
ＩＬ−４によって誘発される増殖を、Ａ５４９癌腫細胞で、ペプチドＡＰＩ−４０１、ＡＰＩ−４０２、ＡＰＩ−４０３、ＡＰＩ−４０４及びＡＰＩ−４０５並びにＩＬ−４（１ｎｇ／ｍｌ）の存在下、トリチル化チミジン取り込み法に準じて、測定した。細胞を、３７℃で別のペプチドと共にプレインキュベートし、次に、ＩＬ−４（１ｎｇ／ｍｌ）と共に２４時間インキュベートした。細胞を３Ｈ−チミジンと２４時間接触させ、洗浄し、そして溶解した。放射能レベルをシンチレーションカウンターで測定した。用いたペプチドアンタゴニストの配列は、以下の通り：ＡＰＩ−４０１ ＹＲＥＰＦＥＱＨＬＬ（配列番号１０５）；ＡＰＩ−４０２ ＳＤＴＬＬＬＴＷＳ（配列番号１０６）；ＡＰＩ−４０３ ＬＹＮＶＴＹＬＥ（配列番号１０７）；ＡＰＩ−４０４ ＬＡＡＳＴＬＫＳＧＬＳ（配列番号１０８）；及び、ＡＰＩ−４０５ ＫＰＳＥＨＶＫＰＲ（配列番号１０９）；である。一般に、配列は、ＩＬ−４Ｒの小断片ペプチドの配列と一致するが、但し、小断片ペプチドはイソロイシンを含んでいる。前述したように、合成ペプチドでは、イソロイシンをロイシンで置き換えた。
図１０に示したように、５ペプチドの内４ペプチドは、ＩＬ−４によるＡ５４９癌腫細胞の増殖停止を妨げた。さらに、インビトロでのアンタゴニストの試験を、表６に記載のように、行った。
Figure 2008542685
インターロイキン１（ＩＬ−１）受容体アンタゴニスト
ＩＬ−１の２つの異なる受容体をクローン化し、その特徴を調べた；ＩＬ−１Ｒは、ＩＬ−１の生物学的効力を生成し、ＩＬ−１ＲＩＩは、天然のアンタゴニストである。さらに、受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）は、受容体複合体のシグナルトランスデューシングサブユニットと推定されるが、該タンパク質を同定した。ＩＬ−１Ｒ Ｉ型は、主に、Ｔ細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、軟骨細胞、滑膜細胞及び上皮細胞に認められる。生体効果を生成するためには、ＩＬ−１Ｒは、ＩＬ−１と結合し、次に、シグナル伝達に必要なＩＬ−１ＲａｃＰに結合する必要がある。ＩＬ−１Ｒの細胞外部分は、ＩＬ−１に結合する３つのＩｇ様ドメインを含む。注目したいのは、ＩＬ−１ＲａｃＰの細胞外部分に対して向けられた抗体を含む研究では、後者はサイトカインと相互作用せず、それ故、非競合的ペプチド模倣薬設計の優れた標的であり得た。
標的とされたＩＬ−１受容体複合体の領域は、可動領域を含むＩＬ−１Ｒの第３ドメインであり、アクセサリータンパク質と相互作用するが、リガンドとは相互作用しない。ＩＬ−１ＲａｃＰ上のこれに相当するドメインは、ＩＬ−１Ｒ及びＩＬ−１ａｃＰの膜近傍領域、並びにＩＬ−１ＲａｃＰの第２細胞外ドメインと第３細胞外ドメインの間の領域である。これらの領域の正確な位置を、これら領域の１つを標的としＩＬ−１Ｒに対して特異性を示す小断片ペプチド又は修飾ペプチドの配列の例と共に、上記の表１に記載した。
小断片ペプチド又は誘導体の親和性を、ＩＬ−１Ｒを発現もしくは過剰発現している細胞への結合研究を用いて測定する。ＩＬ−１Ｒとして同じファミリーの受容体（例えばＩＬ−１８Ｒ）を発現する細胞でバイオアッセイを行うことにより、選択性について試験し、別のファミリーのサイトカインの受容体に対して、特異性を試験する。
ＩＬ−１の増殖効果を、ペプチドＡＰＩ−１０１、ＡＰＩ−１０３及びＡＰＩ−１０６並びにＩＬ−１の存在下（１ｎｇ／ｍｌ、図９Ａ）、トリチル化チミジン取り込み法に準じて、Ａ５４９癌腫細胞で測定した。細胞に、異なるペプチドを異なる濃度、すなわち１０−６Ｍ、１０−５Ｍ及び１０−４Ｍで加え、３７℃でプレインキュベートし、次にＩＬ−１（１０ｎｇ／ｍｌ又は１ｎｇ／ｍｌ）を加え、２４時間インキュベートした。次に、細胞を３Ｈ−チミジンと２４時間接触させ、洗浄し、さらに溶解した。放射能レベルをシンチレーションカウンターで測定した。用いたペプチドアンタゴニストの配列の例は、次の通り：ＡＰＩ−１０１ ＡＰＲＹＴＶＥＬＡ（配列番号１１０）；ＡＰＩ−１０３ ＭＫＬＰＶＨＫＬＹ（配列番号１１１）；及び、ＡＰＩ−１０６ ＶＧＳＰＫＮＡＶＰＰＶ（配列番号１１２）：である。一般に、これらの配列は、ＩＬ−１Ｒの小断片ペプチドに相当するが、小断片ペプチドは、イソロイシンを含んでいる。合成ペプチドでは、経済的理由から、このイソロイシンを保存性のあるロイシンに置き換えた。
図９Ａ及び図９Ｂに示したように、ペプチドは、ＡＰＩ−１０１及び１０３ではＣＥ５０＝１０−６Ｍで；ＡＰＩ−１０６では１０−５Ｍで、Ａ５４９癌腫細胞のＩＬ−１誘導増殖を排除した。
次の実験目標は、（消化路通過時のペプチドの安定性を確かめるために）頸静脈より、又は胃に直接のいずれかで、同定ペプチドを注入することにより、同定ペプチドが天然のサイトカインの生理学的作用をインビボで逆転できるか否かを確かめることである。３００ｇのスプラーグ・ドーリーラットを、イソフルラン（２．５〜４％）で麻酔した。ＩＬ−１βを頸静脈より注入した。注入毎の前後（１０分）にさらなる分析を行うため、血液を頸動脈より採取した。次に、ペプチドを、所望の濃度で、直接カテーテルで胃又は頸動脈へ注入した。動脈血圧及びその他の生理学的特性を全期間にわたってモニターした。
ＩＬ−１βをラットに上記のいずれかの方法で投与した場合、該ＩＬ−１βによって誘導される重い低血圧が認められた。以下のペプチドは、低血圧を防止できるアンタゴニストの例を構成する。
ＡＰＩ−１０１．１０（標的：ＩＬ−１Ｒのアクセサリータンパク質の膜近傍部分、ＡＰＩ−１０１の誘導体）：
１）ＩＬ−１β注入（５μｇ／ｋｇ）後、頸静脈静脈注入によって投与した場合、該ペプチドは濃度１０−８Ｍで９５％、低血圧を防止した。このことは、ペプチドがＩＬ−１βの影響を逆戻りさせることによって、インビボで動物内の降圧剤効果を持つことを示した（データは示していない）。
２）胃に直接投与した場合、ペプチドは、１０−５Ｍの濃度で、ＩＬ−１β誘導低血圧を６０％減少させた。この結果は、１０１．１０ペプチドの経口投与もなお、ＩＬ−１β誘導低血圧に主な影響を維持することを、示した（データは示していない）。
その他の実験では、仔ブタ軟膜脈管の血管運動性変異について調べ、さらにＩＬ−１βの血管拡張効果へのサイトカイン受容体小断片の特別な効果について評価した。脳をヨークシャー仔ブタより摘出した。軟膜脈管を晒した脳のスライスを、９５％Ｏ２−５％ＣＯ２で平衡化したクレブスバッファー（ｐＨ７．４）を含む２０ｍｌ浴のろう床にピンで留め、３７℃に維持した。微小管を可視化し、切開用顕微鏡上に載せたビデオカメラを用いて記録した。血管直径を、デジタルイメージアナライザーを用いて測定し、収縮剤Ｕ４６６１９を１０−７Ｍで局所適用する前後で像を記録した。血管運動性安定化後、血管拡張が安定化するまで、ＩＬ−１βを加えた。次にペプチドを１０−１０から１０−１５Ｍの異なる濃度で注入した。血管拡張の反転（すなわち血管狭窄）を可視化し、上記の方法に従って測定した。仔ブタの脳の微小血管系にＩＬ−１β誘導血管拡張が認められた。阻害活性を持つサイトカイン小断片ペプチドの例を以下に示す。
１） ＡＰＩ−１０１及び１０１．１０（膜近傍部分のアクセサリータンパク質）は、ＩＣ５０＝１８２ｎＭ（ＡＰＩ−１０１）及び１０．８ｎＭ（ＡＰＩ−１０１．１０）でＩＬ−１βによって誘導された血管拡張を妨げることができた。投与されたペプチドの濃度の範囲は、１０−１０から１０−５Ｍであった（データは示していない）。
２） ＡＰＩ−１０８（Ｉｇ−３ヒンジ領域のアクセサリータンパク質）は、ＩＣ５０＝１．９ｎＭで血管拡張を妨げることができた（データは示していない）。投与されたペプチドの濃度範囲は、１０−１０から１０−５Ｍであった。
これらの結果から、受容体の１成分の２つの可動領域を標的とすることにより、我々は、非常に低いＩＣ５０とそれによる非常に高い効力でＩＬ−１β活性を妨げることができた。
インビボでのＩＬ−１Ｒ活性へのサイトカイン受容体小断片の効果を評価するその他の方法は、ラット血清内でのＰＧＥ２レベルを測定することによる。ラット血液サンプルを、インビボでの実験（例えば、ＩＬ−１誘導低血圧に関するプロトコール）から収集し、１５分間最大速度で遠心分離した。次に、血清は、Ｗａａｔｅｒｓ精製カラムを通過させ、脂質部分を分離した。サンプルを蒸発させ、ＰＧＥ２量を、市販のキット（Ｃｅｄｅｒｌａｎｅ）を用いて、放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）で定量した。
サイトカイン受容体小断片ペプチドがインビボで低血圧を防ぐことができるならば、該ペプチドは、ＰＧＥ２の合成もまた、防ぐことができるはずである。それ故、プロスタグランジンを、上記実験に用いたラット血清中で測定した（例えば、動脈圧変動測定）。特定のサイトカイン受容体小断片ペプチドで得られた結果の例を以下に記載する。
１） ＡＰＩ−１０１．１０は、ペプチドを頸静脈に注射した場合、インビボで８０％、ＰＧＥ２合成を妨げることができた。同一結果は、ペプチドを直接胃に注入した場合にも得られた（データは示していない）。
これらの実験から、サイトカイン受容体の異なる可動領域から誘導された同定ペプチド（この特別な例として、受容体ＩＬ−１Ｒ／ＩＬ−１ＲａｃＰ）は、有効であり、ＩＬ−１βの様々な生理学的影響の逆行に、インビトロ及びインビボで有効であり且つ非常に強力であることが分かる。
これらの実験から、サイトカイン受容体活性を調節する特別なサイトカイン小断片ペプチドを選択するために用いられる方法の有効性及び特異性が明確に示される。さらに、上に示した（ＩＬ−１Ｒ／ＩＬ−１ＲａｃＰ受容体での）特別な実験は、どのようにして特別なサイトカイン受容体小断片ペプチド（所望であれば、誘導及び／又は保護してもよい）を選択できるかの完全な例として供給され、インビボでのその効力及び力価よりも、インビトロでのその調節活性を試験する。また、インビトロで示された調節活性は、インビボ状況にも当てはめることができることを示している。
さらに、インビトロでのペプチドの安定性及び選択性を、表７に記載した試験で確かめる。
Figure 2008542685
更なるＩＬ−１Ｒアンタゴニスト
以下のＡＰＩ−１０１配列（ＡＰＲＹＴＶＥＬＡ（配列番号１１３））から誘導されたさらなるＩＬ−１Ｒアンタゴニストを表８に示す。全アミノ酸は、Ｄ−アミノ酸であるが、ＡＰＩ−１０１．１３５のアステリスクは、残基（Ｒ）がＬ−アミノ酸であることを示している。
Figure 2008542685
ＡＰＩ−１０１アンタゴニストの有意な効果が示されたので、ＡＰＩ−１０１と誘導体での構造と機能の関連データを提供し、活性に最も重要な領域を同定するために、実験を行った。それ故、アラニン精査変異をＡＰＩ−１０１で行った。他のアミノ酸を、アラニンの場所に用いて、精査実験を行った。
変異させたペプチドの効力及び阻害活性を、ＩＬ−１誘導ＰＧＥ２合成の阻害を測定することによって、測定した。ＡＰＩ−１０１．１のみが、親ペプチドＡＰＩ−１０１と比較して、内皮細胞内で及び軟骨細胞で効力をわずかに改善した。他方、ＡＰＩ−１０１．５、ＡＰＩ−１０１．６及びＡＰＩ−１０１．７は、両方の細胞型でほぼすべての活性を失っており、このことは、標的としたＶＥＬＡ領域がペプチドの活性に重要であることを示唆している。全ペプチドを、濃度１０−６Ｍで試験した。
血管運動性の研究もまた、ＡＰＩ−１０１アラニン精査ペプチドで行った。ＡＰＩ−１０１、ＡＰＩ−１０１．１、ＡＰＩ−１０１．３及びＡＰＩ−１０１．６はすべて、ＩＬ−１β（７５ｎｇ／ｍｌ）によって誘導された血管拡張を逆行させ、また、ＡＰＩ−１０１．１は、ＡＰＩ−１０１以上のわずかな阻害活性の増加を示し、血管拡張の７０％を除去した。
全体的には、変異又は置換は、ＡＰＩ−１０１の活性以上にペプチド誘導体の活性を有意に増加させることはないが、ペプチドの活性に重要な領域についての情報が得られた。
活性を改善するために、又はＡＰＩ−１０１活性に重要な該ＡＰＩ−１０１内の領域上で得られるアラニン精査判定を確認するために、ペプチドのＮ末端からアミノ酸の端を漸次切り取った。端を切り取ったペプチドを、トリチル化チミジン摂取プロトコールで、ＩＬ−１βが誘導するＷＩ−３８（ヒト肺線維芽細胞）の増殖についてアッセイした。ＩＬ−１Ｒ誘導増殖を６５％除去するＡＰＩ−１０１と比較して、ＡＰＩ−１０１．１０及びＡＰＩ−１０１．１１は、ＩＬ−１β誘導増殖の１００％を除去した。
ＩＬ−１誘導ＰＧＥ２の合成もまた、ＡＰＩ−１０１の短鎖型誘導体で決定した。ＡＰＩ−１０１．１０は、ＷＩ−３８及び内皮細胞でＩＣ５０＝０．２ｎＭ及び１．２ｎＭであり、ＡＰＩ−１０１（それぞれ７９０ｎＭ及び２２０ｎＭ）と比較して最も有効かつ強力な短鎖型ペプチドであった。ＡＰＩ−１０１．１１及びＡＰＩ−１０１．１２は、力価及び効力で減少を示し、このことから、アルギニン以後のペプチドの短鎖型は、その力価及び効力に影響を及ぼすことが示唆された。
ＡＰＩ−１０１誘導体の細胞毒性もまた、２種類の細胞：ＷＩ−３８及び脳微小血管内皮細胞で測定した。細胞生存度を、前述（Ｂｅａｕｃｈａｍｐら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、９０、２２７９−２２８８、２００１；Ｂｒａｕｌｔら、Ｓｔｒｏｋｅ、３４、７７６−７７８、２００３）の通り、アッセイした。内皮細胞及び線維芽細胞を、様々な濃度のペプチドと共に、３７℃で２４時間インキュベートした。ＰＢＳ中のＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニル−テトラゾリウムブロミド）を最終濃度５００μｇ／ｍｌで増殖培地に加えた。ＭＴＴと共に、細胞を２時間３７℃でインキュベートした。次に、増殖培地を吸引し、２４：１イソプロパノール：１Ｎ ＨＣｌ溶液２００μｌを、それぞれのウェルに加え、細胞を溶解した。生存細胞を、ホルマザンと名付けられた測定可能な比色（青色）製造物内のＭＴＴ製造物で（ミトコンドリアを通して）形質転換した。ホルマザン生成（及び細胞生存度）を、６００ｎｍで溶解物１００μｌの光学密度を測定することによって、定量した。細胞は、１０−５Ｍペプチドに２４時間晒した場合には、全く毒性を示さなかった。
また、血管運動性実験を行い、ＩＬ−１によって誘導された血管拡張へのＡＰＩ−１０１．１０（インビトロで最も高い活性を示したペプチド）の効果を評価した。ＡＰＩ−１０１．１０は、１０．８ｎＭで最大のＩＣ５０を示し、ＡＰＩ−１０１（１８２ｎＭ）より１００倍強力であった。ペプチドＡＰＩ−１０１．９、ＡＰＩ−１０１．１１及びＡＰＩ−１０１．１２は、１０−１０Ｍから１０−５Ｍの濃度範囲で、ＡＰＩ−１０１より良好なＩＣ５０を示した。このように、エキソビボでの実験では、ＡＰＩ−１０１．１１及びＡＰＩ−１０１．１２は、親ペプチドと比較して、有意に改善された阻害活性を示した。
ＡＰＩ−１０１誘導体であるＡＰＩ−１０１．１０（及びその他）についてもまた試験し、（消化系を通してのペプチドの安定性を確認するために）、頸動脈経由及び胃内に直接注入することにより、該ペプチドがインビボで天然リガンドの生理学的作用を逆行させることができるか否かについて評価した。スプラーグ・ドーリーラット（３００ｇ）にイソフラン（２．５〜４％）で麻酔した。天然リガンド（ＩＬ−１β）又はベヒクル（食塩水）を頸動脈管を通して注入した（５μｇ／ｋｇ）。血液を、頸動脈から採血し、次に、個々の注入前及び１０分後にＰＧＥ２を測定した。ペプチドを、頸静脈内又は直接胃内（静脈内ｉｖに用いる投与量の５倍）へのいずれかで（ＩＣ５０値及び細胞外空間に相当する分配量に基づく投与量を）投与した。動脈血圧及び心拍数を、連続してモニターし（Ｇｏｕｌｄ）、温度及び血液ガス（Ｒａｄｉｏｍｅｔｅｒ）は、前述（Ｌｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２７３、Ｒ１２８３−Ｒ１２９０、１９９７；Ｈａｒｄｙら、Ｐｅｄｉａｔｒ．ｒｅｓ．、４６、３７５−３８２、１９９９；Ｎａｊａｒｉａｎら、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．、８７、１１４９−１１５６、２０００）の通り、日常の実験で測定した。実験は、３回繰り返した。
ＩＬ−１βにより誘導された重症の低血圧が、上記のいずれかの方法によってラットに投与した場合に、認められた。以下のペプチドは、インビボでの低血圧を妨げることのできるアンタゴニストの例を構成する。
１）ＡＰＩ−１０１．１０：ＩＬ−１βを注入（５μｇ／ｋｇ）した後に頸静脈注入によって投与した場合、１０−８Ｍの濃度で９５％低血圧を妨げる（すなわち、ＩＬ−１誘導低血圧を和らげた）。ＡＰＩ−１０１．９様のその他の誘導体もまた、ＩＬ−１βによるこの生理学的影響を妨げることができるが、ペプチドＡＰＩ−１０１．１０、１０１．１０１又はペプチド模倣薬、１０１．１０９、１０１．１１１（図２６）及び１１．１１２よりは効果が少なかった。しかし、食塩水の対照よりは有意に良好であった。このことは、ペプチドが動物内インビボでＩＬ−１βの効果に逆行することによって、高血圧性効果を有していることを、明確に示している。
２）濃度１０−５Ｍで胃内に直接投与した場合、ペプチドは、ＩＬ−１β低血圧を６０％妨げた。この結果は、ＡＰＩ−１０１．１０ペプチドを腸内投与しても未だ、ＩＬ−１β誘導低血圧は主な影響を残しており、消化系に沿って効力及び安定性を維持することができることを、示している。
上記のように、インビボでのＩＬ−１Ｒ活性について、本発明のＩＬ−１受容体アンタゴニストの影響を評価するもう１つの方法は、ラット血清内のＰＧＥ２レベルを測定することによる方法である。いま１度、ペプチドを頸静脈内に注入した場合、ＡＰＩ−１０１．１０が、試験したＡＰＩ−１０１誘導体の中で、ＰＧＥ２合成の妨げに最も効果的であることが示された。ペプチドを胃に直接注入した場合には、より大きく阻害された。
ＡＰＩ−１０１．１０の更なる最適化
ＡＰＩ−１０１．１０を、最適化の最終回から、最も活性なペプチドとして同定した。このように、Ｎ末端から９〜７アミノ酸を先端切除したＡＰＩ−１０１は、インビトロ、エキソビボ及びインビボで、効力を危うくすることなく力価を改善できた。
ＡＰＩ−１０１．１０（配列番号１０）のアルギニンを、シトルリンに置換し、Ｎ末端付近のグアニジンを尿素基に変換した。その他の変異（例えば、ＡＰＩ−１０１．１０２及びＡＰＩ−１０１．１０３でＥをＱに）及びＣ末端短鎖型ペプチド（ＡＰＩ−１０１．１０８）もまた、ペプチドの力価及び効力を改善した。ＰＥＧ２の測定を、仔ブタ脳微小血管内皮細胞及びＷＩ−３８ヒト線維芽細胞で行った。いくつかの変異体は長所を有し、力価の主な増加をもたらした。例えば、ＡＰＩ−１０１．１０３及びＡＰＩ−１０１．１０７は、ヒトＷＩ−３８細胞内で、ＩＣ５０＝０．０５ｐＭ及び０．１ｐＭで、１０００倍以上の良好な力価を示した。
次に、これら新規の誘導ペプチドについて、エキソビボでの実験を行った。脳組織をペプチド及びＩ−１βと共にインキュベートし、ｃＧＭＰを市販のキット（アマシャム・バイオサイエンス、ｃＧＭＰアッセイｂｉｏｔｒａｃｋ（登録商標）システム）で測定した。ＡＰＩ−１０１．１０は、すでに、ＩＬ−１β誘導のｃＧＭＰ生成（１０−６Ｍ）の８５％を阻害し、ＡＰＩ−１０１．１０３及び１０１．１０６は、ｃＧＭＰ生成を９０％より多く阻害する。このように、負に荷電したグルタミンの除去及びスレオニンの除去は、アンタゴニストの力価を改善することができる。注目すべきことに、ＡＰＩ−１０１．１０の活性は、（データは示していないが）Ａｍｇｅｎ ｄｒｕｇ Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）（ＩＬ−１の選択的遮断剤）の活性よりすぐれていることが示された。
まとめると、結果は、ＡＰＩ−１０１が効力を持ち且つ有効なＩＬ−１受容体アンタゴニストであることを明確に示している。さらに、ＡＰＩ−１０１から出発して、発見者らは、系統立てた様式で、さらにより効力があり且つ有効なアンタゴニスト（ＡＰＩ−１０１のＩＣ５０と１０１．１００系の誘導体のＩＣ５０の比較によって示した）を誘導することができた。それ故、本発明は、新規ＩＬ−１Ｒ／ＩＬ−ＲａｃＰ受容体アンタゴニストを同定する方法、及びＩＬ−１Ｒ／ＩＬ−ＲａｃＰを含む経路内での欠如による疾患又は疾患を治療又は予防する方法を提供する。また、当業者らは、本発明の教え及び本技術分野での一般知識の状態に基づき、以下に記載するように、ペプチド模倣薬及びその他の誘導体を誘導できる。
ラット炎症性腸疾患（ＩＢＤ）モデルにおけるＡＰＩ−１０１の効力
ＩＢＤはヒト人口で高頻度で起こる胃腸管の慢性炎症である。ペプチドＡＰＩ−１０１．１０がトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）で誘発されるＩＢＤ動物モデルでなおその他の炎症の進行を妨げることができるか否かを確認するために、以下の実験を行った。ＴＮＢＳは、好中球及びマクロファージの経壁浸潤、急性腸管炎症の特徴である潰瘍裂（fissuring ulcerations）及び粘膜下組織線維症、並びにＣｒｏｈｎ病（Ｂｏｕｍａ及びＳｔｒｏｂｅｒ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３、５２１−５３３、２００３）を特徴とするＩＬ−１２仲介ＴＨ−１応答の原因となる。
結腸炎症を、ハプテン−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を雄のスプラーグ・ドーリーラット（１７５〜２００ｇ）の直腸内／結腸に投与することにより誘発させた（Ｂｏｕｍａ、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．、２００３；Ｍｏｒｒｉｓ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１９８９）。５０％エタノール（容量／容量）中に溶解したイソフラン及びＴＮＢＳで動物を麻酔した。ポリエチレンチューブ（ＰＥ５０）を用いて、１２０ｍｇ／ｍｌ（ＴＮＢＳ）を結腸内に投与した（全容量０．２５ｍｌ／ラット）。カニューレを肛門から８ｃｍ挿入し、溶液の排出を防ぐために、ＴＮＢＳ投与後少なくとも１５分間そのままにしておいた。ＴＮＢＳ投与の２時間前、ＡＰＩ−１０１誘導体ＡＰＩ−１０１．１０（１．１ｍｇ／ｍｌ）又は０．９％食塩水を尻尾の血管から静脈内投与した（全容量０．３ｍｌ）。次に、ＡＰＩ−１０１．１０（２．２ｍｇ／ｋｇ、様々なペプチドについてｔ１／２＝２〜３時間を元にした血圧実験に用いた６回の投与量）又は０．９％食塩水を、腹腔内アルゼットポンプを用いて連続的に注入した。第３グループ（対照）は、ＴＮＢＳを注入しなかった。ＴＮＢＳ投与から６日後、ラットをＣＯ２吸入で殺した。６日を終点として選択した。その理由は、７日で、自発的組織再生が始まり、これが、試験されるペプチド又はペプチド誘導体の治療効果を覆い隠す可能性があるためである。結腸を除去し、肉眼で見て（粘着、潰瘍、変色及び出血について）、また、組織学的に（好中球浸潤、上皮損傷、陰窩彎曲及び潰瘍について）試験した。（Ａｎｔｈｏｎｙら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈ．、７６、２１５−２２４、１９９５；Ｐａｄｏｌら、Ｅｕｒ．Ｊ．ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．、１２、２５７−２６５、２０００；Ｄｉｅｌｅｍａｎら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６８、６９８８−６９９６、１９９７；Ｔｏｒｒｅｓら、Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、４４、２５２３−２５２９、１９９９）。グループ当たり２匹の動物について研究した。
組織学的横断区分を身体中央に近い肛門領域から４〜６ｃｍに切断し、ヘマトキシリン／エオシン法で着色した。炎症性腸疾患のＴＮＢＳモデルは、（例えばヒト内の）クローン病の炎症性特性及び組織浸潤を再生する。形態学上、ＴＮＢＳを注入された動物の結腸は、重要な炎症を示唆する腸壁の厚化、浮腫及び変色を示した。ＡＰＩ−１０１．１０で前処理した動物からの結腸の巨視的特徴は、対照動物のそれと似ている。組織学的形態は、上皮層及び陰窩内への好中球の浸潤、上皮内層損傷並びに陰窩の損失からなる。ＡＰＩ−１０１．１０での動物の前処理は、ＴＮＢＳ誘発結腸損傷を予防した。ＡＰＩ−１０１．１０で処理した結腸内の陰窩の組織及び無傷性（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）は、未だいくらかの炎症がある場合でさえ、維持される（巨視的分析実験より、ＡＰＩ−１０１．１０投与量の半量を使用した）。上皮内層の損傷は、ＡＰＩ−１０１．１０処理動物で完全に予防される。それ故、本発明のＩＬ−１Ｒアンタゴニストもまた、炎症性腸疾患の動物モデルにきわめて有効である。
ＡＰＩ−１０１．１０との架橋実験及び放射性リガンド結合実験
ラット胸腺から新たに単離した胸腺細胞を、ＰＢＳ（リン酸緩衝溶液）バッファーｐＨ８．０（反応バッファー）内に１０７細胞／ｍｌの濃度で再懸濁し、氷冷した反応バッファーで３回洗浄した。個々のサンプルの反応混合物は、１０６細胞及び１０７ｃｐｍの１２５ＡＰＩ−１０１．１０；を含んでいた。また、１つのサンプルは、１０３Ｍの冷ＡＰＩ−１０１．１０ペプチドを含んでいた。負の対照には、ごく微量のＩＬ−１Ｒを含むＨＥＫ−２９３細胞を用いた。次に、個々のサンプル容量を反応バッファーで２５０μｌに上げた。サンプルを室温及び／又は３７℃で４５分間インキュベートし、ペプチドを結合させた。次に、非透過性架橋剤ＢＳ３（ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート）を、最終濃度が２．５ｍＭになるように加え、サンプルを４℃で３０分間インキュベートし、ＢＳ３（１１．４Å）（Ｐｉｅｒｃｅ）の活性内面化を最少にした（Ｐａｒｔｉｓ、Ｊ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．、２９３、２６３−２７７、１９８３；Ｃｏｘら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４５、１７１９−１７２６、１９９０；及び．Ｋｎｏｌｌｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６６、１７９５−２８０４、１９９１）。反応を２０ｍＭ ＴＲＩＳ ｐＨ７．５で１５分間室温でクエンチした。細胞を４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、１５０μｌのＲＩＰＡバッファー（５０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ ｐＨ７．４；１５０ｍＭ ＮａＣｌ；１ｍＭ ＥＤＴＡ；２ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４；１ｍＭ ＮａＦ；１％ＮＰ−４０；０．２５％デオキシコール酸ナトリウムを用いて氷上３０分間で溶解した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動を、細胞溶解物について、還元及び非還元条件下、ゲル上に個々のサンプル当たり１０，０００ｃｐｍを負荷することによって、行った。次に、オートラジオグラフィ及び抗ＩＬ−１Ｒ抗体とのウエスタンブロット分析を行った。図３２Ａに示した結合実験を、６ｎＭのＩ１２５−ＡＰＩ−１０１．１０で行い、放射性ペプチドの置換を、異なる濃度の冷ペプチド（非放射性）で行った。１００万の新たに単離した胸腺細胞を、６ｎＭのＩ１２５−ＡＰＩ−１０１．１０及び異なる濃度の冷１０１．１０と共にインキュベートし、攪拌しながら４５分間３７℃にインキュベートした。反応を冷Ｔｒｉｓ ｐＨ７．５バッファーで停止させ、細胞を遠心分離し、ＰＢＳバッファーで４回洗浄し、上記の通り溶解した。Ｉ１２５−ＩＬ−１α（１００ｐＭ）との結合を、同一条件で、ＩＬ−１αと共に２時間インキュベーションし、非放射性の１０１．１０（５００ｎＭ）と４５分間プレインキュベーションした。放射能の定量は、全細胞溶解物について、Ｐａｃｋａｒｄ Ｃｏｂｒａｌｌオートガンマカウンターで行った。
図３２Ａに示したように、オートラジオグラムは、非還元条件下では全ＩＬ−１Ｒを表す２００〜１８０ｋＤａにバンドが現れ、これは図３２Ｂに示されたウエスタンブロットで検出されたバンドに相当する。ＨＥＫ−２９３負の対照は、架橋していないことが示された。また、非放射性ＡＰＩ−１０１．１０は、ほぼすべての１２５Ｉ−ＡＰＩ−１０１．１０を置き換えることができた。このような結果から、設計したペプチドは、ＩＬ−１Ｒと結合し、認められた生理学的効果は、抗ＩＬ−１Ｒペプチドの結合に依存していることが、分かる。
図３３Ａ〜図３３Ｃは、単離された新鮮な胸腺細胞でのＩ１２５−ＡＰＩ−１０１．１０ペプチドの放射性リガンド結合を示している。図３３Ａは、非放射性ＡＰＩ−１０１．１０の濃度を上昇させての放射性１０１．１０の置換を示している。この結果から、ＡＰＩ−１０１．１は１μＭの親和性でＩＬ−１Ｒと結合し、その結合は（置換が投与量応答依存性であることから）特異的であることが分かる。図３３Ｂは、ＩＬ−１Ｒを含まない細胞内では、１０１．１０の結合が起こらないことを示しており、図３３Ｃは、ＡＰＩ−１０１．１０は、放射性ＩＬ−１αを置換できないことを示しており、それ故、ペプチドの結合部位は、天然リガンドＩＬ−１の結合部位とは異なる。
ＰＭＡ（ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート）誘発性皮膚炎のインビボモデルにおけるＡＰＩ−１０１．１０の効力
炎症皮膚モデルでのＡＰＩ−１０１．１０の局所適用の効力を確かめるために、１０μｌの０．０５％（アセトン中）の刺激剤ＰＭＡを、５週齢の雄ＣＤ−１ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）の耳に適用し、接触性皮膚炎を誘発させた。右耳にはベヒクルのみを適用し、左耳にはペプチド又はＩＬ−１Ｒａ類似体Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）（アムジェン）を適用した。ＰＥＧで希釈した最終濃度１０−５Ｍのペプチド１０μｌを、ＰＭＡで炎症を誘発した後４５分及び４時間に適用した。ＩＬ−１Ｒアンタゴニスト（ＩＬ−Ｒａ）の市販類似体、Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）を、５０μｇ／１０μｌＰＥＧの濃度で、正の対照として適用した。薬剤を、溶液の粘度に適応したピペットチップを用いて適用した。ペプチド処理後１８時間で、動物を犠牲にして、耳を切り取り、その重さ及び体積をカリパーで測定した。耳の腫れ（％）を測定した：１００×（ａ−ｂ）：式中、ａは処理した左耳の厚さであり、ｂは対照の右耳の厚さである。
図３４Ａ及び図３４Ｂにラットの耳の写真を示している。図３４Ａは炎症を起こしていない食塩水中での耳を示し、図３４Ｂは、ＰＭＡ誘発による炎症を起こした耳を示す。図３４Ｂは明らかに、ペプチド処理した耳と未処理の耳の色並びに微小血管新生が異なることを示している。ＰＭＡで処理した耳は、ＡＰＩ−１０１．１０で処理した耳より赤みを帯びており、微小血管が多いことを示している。図３５Ａ及び図３５Ｂは、ＰＭＡ誘発皮膚炎へのＡＰＩ−１０１．１０の効力をグラフで示している。図３５Ａは、ラットの耳へのＡＰＩ−１０１．１０の局所適用が腫れの５０％を抑えることができることを示している。図３５Ｂは、処理した耳が、ＰＭＡ誘発炎症耳と比較して重量の減少を示したため、腫れ及び炎症の抑制を示している。これらの結果は、ＡＰＩ−１０１．１０は有効であり、接触性皮膚炎への局所適用で、医療的に用いうることを示している。
ペプチド模倣薬ＡＰＩ−１０１．１０９、ＡＰＩ−１０１．１１０
本発明のアンタゴニストの効力及び力価をさらに改善するために、ペプチド模倣薬を合成し、インビトロでスクリーニングした。ペプチド模倣薬はＡＰＩ−１０１．１０又はＡＰＩ−１０１．１０７から誘導され、その１次構造は：ＡＰＩ−１０１．１０９ ＲＹ（ＨｙＶａｌ）ＰＥＬＡ；及びＡＰＩ−１０１．１１０ ＴＹ（Ｉ２ａａ）ＥＬＡ（図２６）：であり、式中、ＨｙＶａｌは、β−ヒドロキシバリンであり、Ｉ２ａａは、インドリジン−２−オンアミノ酸（２−オキソ−３−アミノ−アザビシクロ［４．３．０］ノナン−９−カルボン酸）である。これらのペプチド模倣薬もまた、Ｄ−ペプチドである。
方法論
固体支持体の製造
ベンズヒドリルアミン樹脂塩酸塩（２ｇ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｔｅｃｈ、ロット番号１１９８８、１００〜２００メッシュ、１．２ミリモル／ｋｇ充填）を、各々１０ｍｌ／ｇの以下の薬剤：５％ＤＩＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２；ＣＨ２Ｃｌ２；ＤＭＦで１分間、３回洗浄した。樹脂を、Ｎ−（Ｆｍｏｃ）アミノカプロン酸（１．２７ｇ、３．６ミリモル、１５０モル／％）、ＴＢＴＵ（１．２７ｇ、３．９６ミリモル、１６５モル％）、ＤＩＥＡ（６９０μｌ、３．９６ミリモル、１６５モル％）及びＨＯＢｔ（５３５ｍｇ、３．９６ミリモル、１６５モル％）のＤＭＦ（２０ｍｌ、１０ｍｇ／ｇ樹脂）中溶液で処理し、負のＫａｉｓｅｒ試験が認められたときには、１時間攪拌した。樹脂を、１０ｍｇ／ｇの以下の溶液：ＤＭＦ（３×１分）及びイソプロピルアルコール（３×１分）で順序を変えて洗浄した。次に、樹脂をＤＭＦ中ピペリジン（２０％ｖ／ｖ、２０ｍｌ、１×２分、１×３分、１×１０分）で、次に１０ｍｇ／ｇ ＣＭＦ（３×１分）及びイソプロピルアルコール（３×１分）で順序を変えて、処理した。樹脂を、４−［（Ｒ，Ｓ）−α−１（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキシ−ホルムアミド］−２，４−ジメトキシベンジル］−フェノキシ酢酸（Ｋｎｏｒｒリンカー、１．９４ｇ、３．６ミリモル、１５０モル％）、ＴＢＴＵ（１．２７ｇ、３．９６ミリモル、１６５モル％）及びＤＩＥＡ（６９０μｌ、３．９６ミリモル、１６５モル％）のＤＭＦ（２０ｍｌ）中溶液内で、１時間攪拌した。次に、樹脂を、１０ｍｌ／ｇの以下の溶液；ＤＭＦ（３×２分）、イソプロピルアルコール（３×２分）及びＣＨ２Ｃｌ２（３×２分）で洗浄した。樹脂を高真空下で１晩乾燥させ、３．６６ｇの樹脂を得た。
充填の決定
ピペリジン（２０ｇ）及びＤＭＦ（２０ｇ）を混合した。サンプルバイアル中のこの量の溶液（２０ｍｌ、１８．０８ｇ）に乾燥樹脂（２０ｍｇ）を加え、アルゴン蒸気を通すことにより、懸濁液を穏やかに攪拌した。５０分後、樹脂を静置した。溶液のアリコート（１ｍｌ）をエタノールで５０倍に希釈し、吸光度を３０１ｎＭ［（Ｎ−（９−フルオレニル−メチル）ピペリジン、ＵＶλｍａｘ２６７ｎＭ（ε１７５００）、２９０（５８００）及び３０１（７８００））で測定した。２つの別々の定量（平均）からＡ３０１＝０．０７８５であった。以下の方程式：［ｃ（ミリモル／ｇ）＝（ＯＤ×５０×１０２）／７８００］からｃ＝０．５０ミリモル／ｇであった（Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．、１３、３５−４２、１９７９）。
ペプチド合成
アミノ酸を、Ａｄｂａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｔｅｃｋ（ルイビル、ケンタッキー州）から購入し、以下の誘導体：Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ・Ｈ２Ｏ、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｅ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ：として用いた。（Ｒ）−β−ヒドロキシ−Ｎ−（Ｆｍｏｃ）−Ｎ−（Ｆｍｏｃ）バリンを、（Ｒ）−β−ヒドロキシ−Ｎ−（Ｂｏｃ）バリンからＢｏｃ基を除去（１：１ ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）／ＣＨ２Ｃｌ２）し、アセトン水溶液中のＦｍｏｃ−ＯＳｕ及びＮａＨＣＯ３で保護（Ｃａｐａｔｓａｎｉｓら、１９８３）し、次にシリカゲルのクロマトグラフィ（１：１：９８ ＭｅＯＨ／ＨＯＡｃ／ＣＨＣＬ３）によって精製し、さらにアセトニトリル水溶液から凍結乾燥することによって、製造した（収率７８％）（Ｄｅｔｔｗｉｌｅｒ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６８、１７７−１７９、２００３）。（３Ｒ，６Ｒ，９Ｒ）−２−オキソ−３−［Ｎ−（Ｆｍｏｃ）アミノ］−１−アザビシクロ［４．３．０］−ノナン−９−カルボン酸を、（３Ｒ，６Ｒ，９Ｒ）−メチル２−オキソ−３−アミノ−１−アザビシクロ［４，３，０］−ノナン−９−カルボキシレート（代わる代わるＤ−グルタミン酸から製造した（Ｌｏｍｂａｒｔ及びＬｕｂｅｌｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６１、９４３７−９４４６、１９９６））から、アセトン水溶液中のＦｍｏｃ−ＯＳｕ及びＮａＨＣＯ３でＦｍｏｃ−保護（Ｃａｐａｔｓａｎｉｓら、１９８３）し、次に、メチルエステルで選択的に加水分解（Ｐａｓｃａｌ及びＳｏｌａ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．、３９、５０３１−５０３４、１９９８）することによって、製造した。ペプチド合成を、０．１ミリモルのスケール（２００ｍｇ樹脂）で行い、ＤＭＦ中のピペリジン（１０ｍｌ／ｇ樹脂、２０％ｖ／ｖ、１×２分、１×３分、１×１０分）で脱保護し、次にＤＭＦ（１０ｍｇ／ｇ樹脂、５×１分）で洗浄した。ＤＭＦ中のＴＢＴＵ溶液（０．２５Ｍ、２ｍｌ）に溶解したＦｍｏｃ保護アミノ酸（０．５ミリモル、５００モル％）を樹脂に加えた。樹脂を攪拌（５分）後、ＤＩＥＡ（０．６ミリモル、６００モル％）を加え、攪拌を１時間続けた。樹脂をＤＭＦで洗浄し（１０ｍｌ／ｇ樹脂、５×１分）、カップリング効率をＫａｉｓｅｒ試験を用いて測定した。樹脂を、カップリングし、リンスし、配列を脱保護する間、ボルテックス機械装置を用いて攪拌した。Ｒｐ−ＨＰＬＣ分析を、アセトニトリル／水／ＴＦＡ混合物（溶液Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及び溶液Ｂ＝ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ、以下を参照されたい）を用いてＡｌｌｔｅｃｈ Ｃ１８カラム（寸法２５０ｍｍ×４．６ｍ）で行った。流速は０．５ｍｌ／分であり、検出は２１４ｎｍで行った。
ペプチド模倣薬ＡＰＩ−１０１．１０９（ＫＨ−Ｃ２９０９９）
側鎖同時脱保護での樹脂（１８０ｍｇ）からの切断を、ＴＦＡ（８２．５％）、チオアニソール（５％）、水（５％）、フェノール（５％）及びトリエチルシラン（２．５％）を含む２０ｍｌ／ｇカクテルで樹脂を処理し、ボルテックス機械装置で１時間室温で攪拌することによって、行った。次に、ろ過し、ＴＦＡでリンス（２×１ｍｌ）し、Ｅｔ２Ｏ中０℃で沈殿させることによって、ペプチドを得た。粗ペプチドを、ＨＣｌ溶液（１Ｍ）から凍結乾燥することによって２塩酸塩として単離すると白い粉末（１８ｍｇ）が得られ、該粉末は、溶離液５〜４０％Ｂ／Ａを用い２０分以上かけて行ったｒｐ−ＨＰＬＣ（ＲＴ＝１４．６分）によって、９０％以上の純度を示した。Ｃ３９Ｈ６４Ｎ１１Ｏ１１（ＭＨ＋）から計算されたＬＲＭＳは、８６２であり、８６２であることが分かった。
ペプチド模倣薬ＡＰＩ−１０１．１１０（ＫＨ−Ｃ５０１１０）
側鎖同時脱保護による樹脂（２２ｍｇ）からの切断は、樹脂をＴＦＡ（８２．５％）、チオアニソール（５％）、水（５％）、フェノール（５％）及びトリエチルシラン（２．５％）を含む２０ｍｌ／ｇのカクテルで処理し、ボルテックス機械装置で１時間、室温で攪拌することによって、行われた。次に、ろ過し、ＴＦＡ（２×１ｍｌ）でリンスし、Ｅｔ２Ｏ中、０℃での沈殿させることにより、ペプチドを得た。粗ペプチドを、ＨＣｌ溶液（１Ｍ）から凍結乾燥することによって２塩酸塩として単離すると白い粉末（５．７ｍｇ）が得られ、該粉末は、溶離液５〜４０％Ｂ／Ａを用い２０分以上かけて行ったｒｐ−ＨＰＬＣ（ＲＴ＝１９．８分）によって、８５％以上の純度であることが分かった。Ｃ３８Ｈ６０Ｎ１１Ｏ１１（ＭＨ＋）から計算されたＬＲＭＳは、８３０であり、８３０であることが分かった。
結果
内皮細胞上でのＩＬ−１誘発ＰＧＥ２合成アッセイを、ペプチド模倣薬スクリーニングアッセイとして用いた。ペプチド模倣薬化合物ＡＰＩ−１０１．１１０は、ＩＣ５０＝０．２ｐＭの力価を有し、該値は、２倍の効力を有するＡＰＩ−１０１．１０７より１０倍高い。ＡＰＩ−１０１．１０９化合物もまた、ＰＧＥ２を阻害する力価（ＩＣ５０）を改善したが、そのＫＤは、高すぎて、有効な薬剤とはならなかった。
ラットＩＢＤモデルにおけるＡＰＩ−１０１．１０、ＡＰＩ−１０１．１０７、及びＡＰＩ−１０１．１１３の効力
リードペプチドＴＴＩ−１０１．１０は、これまでＡＰＩ−１０１．１０と呼ばれ、ＴＴＩ−１０１．１０７及びＴＴＩ−１０１．１１３もまた、これまではそれぞれ１０１．１０７及び１０１．１１３、又はそれぞれＡＰＩ−１０１．１０７及びＡＰＩ−１０１．１１３と呼ばれてきたが、該ペプチドは、上記の動物モデルＩＢＤでの炎症特性を防ぐことを証明するために、さらなる実験を行った。結腸炎症を、上記のように、ハプテントリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）の直腸／結腸内投与によって誘発した。ＴＮＢＳ投与２時間前、ペプチド、ペプチド模倣薬又は０．９％食塩水を、尻尾の血管を通して静脈内に投与した（様々なｍｇ／ｋｇ／日）（全量０．３ｍｌ）。連続注入するために、ＡＰＩ−１０１．１０（又はその他のペプチドあるいはペプチド模倣薬）（２．２ｍｇ／ｋｇ、様々なペプチドのｔ１／２＝２〜３時間に基づく血圧実験で用いた投与量の４倍）又は０．９％食塩水を、腹腔内にアルゼットポンプを用いて連続的に注入した。第３のグループ（対照）には、ＴＮＢＳを注射しなかった。間欠性投与では、ＴＮＢＳ投与１５分後、１０１．１０（０．２５〜１ｍｇ／ｋｇ）、１０１．１７（０．２ｍｇ／ｋｇ）、１０１．１１３（０．０５〜１ｍｇ／ｋｇ）を、間欠性腹腔内注射（ｉｐ）によって投与した。また、これらのＩＬ−１Ｒアンタゴニストを、１日に２度与え（ＢＩＤ）、レミケード（登録商標）（抗ＴＮＦα）（１０ｍｇ／ｋｇ）及びデキサメサゾン（０．７５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に、１日１回のみ投与した（ｑｄ）。１０１．１０、１０１．１１３（１及び２．５ｍｇ／ｋｇ）及び５−ＡＳＡ（５０ｍｇ／ｋｇ）の直腸内投与（ｉｒ）を、ＴＮＢＳ投与の１時間後に１日に２回、但し５−ＡＳＡのみは１日に１回、行った。最後に、１０１．１０（１〜５ｍｇ／ｋｇ）を、栄養（ｐｏ）により１日２回経口投与した。ＴＮＢＳ投与から４８時間後、ラットをＣＯ２吸入により殺した。結腸を取り出し、巨視的に（粘着、潰瘍化、変色及び出血）並びに組織学的に（好中球浸潤、上皮損傷、陰窩歪曲及び潰瘍化）評価した。グループ当たり１〜７匹の動物を、治療に関して、研究した。ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性を組織溶解物で測定した。
結果
表９Ａに示したように、本発明のアンタゴニスト（例えば、ペプチド、ペプチド誘導体及びペプチド模倣薬）を、異なる投与量で腹腔内へ連続及び間欠的に注入することにより、潰瘍形成、陰窩損失及び上皮内層損傷のような炎症による組織損傷を防いだ。１０１．１０及び１０１．１０７を含む腹腔内浸透ポンプ（連続注入）を受けた動物は、ＭＰＯ活性が顕著に減少し、巨視的及び組織学的得点はＫｉｎｅｒｅｔ（登録商標）への効力で優れているか、又は等価であった（表９Ａ）。１０１．１０、１０１．１０７（１濃度のみ）及び１０１．１１３の間欠投与では、１日に２度の投与で投与量に依存した効力を示し、その効力は、ＩＢＤ、いわゆるデキサメサゾン、レミケード（登録商標）及び５−ＡＳＡとして最近使用されている薬剤で認められる効力より優れている。結腸損傷の巨視的所見に得点を付け（４人の観察者）、ペプチド処理した動物（ＢＩＤ）は、粘着が少なく、（ＴＮＢＳ処理動物と比較して５０％より少ない）潰瘍形成を示した。また、動物は、かなりより活発に見えた。
Figure 2008542685
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ペプチドの間欠注入で処理した動物は、ＴＮＢＳ対照と比較して、２０〜５０％のより少ない好中球浸潤を示した。組織切片試験は、ペプチド処理動物が炎症誘導結腸損傷の特徴をほとんど示さないこと示した。用いた組織学的損傷得点付けシステムを表９Ｂに示す。その他の得点システムは、本発明が属する熟練者によって、用いられ適合されうる。従って、表９Ａに示すように、ＴＮＢＳ誘導後の本発明の薬剤の投与は、結果として、潰瘍及び上皮内層並びに結腸炎症の量を減少させる。残存するミエロペルオキシダーゼの活性が高いのは、好中球浸潤が処置前にすでに起こっていたという事実による。
本発明のペプチド及びペプチド模倣薬は、その他の手段で投与でき、且つＴＮＢＳ、ＡＰＩ−１０１．１０及びＡＰＩ−１０１．１１３で生成した炎症を減じ得ることを示すために、直腸内に注入した。上記のように、炎症レベルを巨視的組織学的にアッセイした。表９Ａに示されるように、ＡＰＩ−１０１．１０（２．５ｍｇ／ｋｇ／日）は、ＭＰＯ活性を実質上（５０％）減少し、結腸組織損傷を部分的に防いだ。
また、ＡＰＩ−１０１．１０を、その他の手段：栄養（１日２回）：で投与し、消化管を通過する間のペプチドの安定性を証明した。５．０ｍｇ／ｋｇ／日の濃度で、ＡＰＩ−１０１．１０は炎症特性並びにＭＰＯ活性を実質上減少し、それによって本発明の化合物の安定性が確認される。
ＴＴＩ−１０１．１０７ペプチド誘導体及び模倣体
リードペプチドとしてＴＴＩ−１０１．１０７（ＩＣ５０＝１．２ｐＭ）を用いて、一連の類似体をいくつか設計し、合成し、試験して、各々の残基の重要性を確認した。
構造対活性
表１０に示すように、末端Ｄ−アルギニンをアセチル化して、化合物ＴＴＩ−１０１．１２１とした場合、ペプチドの活性は、完全に失われた。他方、アルギニン残基をオルニチン又はリジンと置換すると、得られたペプチドはその活性を維持している（ＴＴＩ−１０１．１１４及びＴＴＩ−１０１．１１５）。このように、（オルニチンでも有しているように）アルギニンのグアニジン基はペプチド活性に重要であってよいと考えられる。
上記の、ペプチドＴＴＩ−１０１．１０５及び１０１．１０６及びペプチド模倣薬ＴＴＩ−１０１．１０９を用いた、Ｄ−スレオニン及びＤ−バリン残基での置換によって得られたデータから、これら領域周辺にはターン領域の可能性が仮定され、２つのペプチド模倣薬を、（３Ｒ，６Ｒ，９Ｒ；ＴＴＩ−１０１．１１０）と（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ；ＴＴＩ−１０１．１１２）−インドリザジン−２−オンアミノ酸（Ｒ−及びＳ−Ｉ２ａａ）の両方を採り入れることによって作製した。このようなペプチド模倣薬（図２７Ａに示す）は、それぞれＩＩ型及びＩＩ’型βターンを模倣している。ペプチド模倣薬ＴＴＩ−１０１．１１０は、親ペプチド１０１．１０７の活性に匹敵する１９ｐＭの活性を示した。
グルタミンの位置の重要性について、ＴＴＩ−１０１．１１７、ＴＴＩ−１０１．１１８及びＴＴＩ−１０１．１２３を用いて示した。上記の３ペプチドでは、グルタミンがそれぞれアスパラギン酸塩、アスパラギン、及びアラニンで置換されている。結果は、カルボキシレート又はカルボキサミドを除去することがペプチド機能に有害であることを示している（表１０）。
Ｃ末端のＤ−ロイシニル−Ｄ−アラニン残基を試験するために、欠失及び置換された一連の誘導体：ＴＴＩ−１０１．１１３、ＴＴＩ−１０１．１１９、及びＴＴＩ−１０１．１２０を作製した。Ｄ−アラニン残基の欠失は、７〜３０ｐＭの活性を有するヘキサペプチドＴＴＩ−１０１．１１３を生ずる（表１０）。ロイシン残基の修飾は、結果として活性範囲を無くす。
上記のデータに基づき、２つのその他の擬似化合物を合成した：ＴＴＩ−１０１．１２４（ｒｙ［Ｒ−Ｉ２ａａ］ｅｌ、ＩＣ５０＝２．４μＭ、効力１００％）及びＴＴＩ−１０１．１２５（（Ｄ−ｏｒｎ）ｙ［Ｒ−Ｉ２ａａ］ｅｌａ、ＩＣ５０＝９０ｐＭ、効力１００％）（図２７Ｂ）。
１０１．１１３ペプチドの誘導体
リードペプチド（１０１．１０７ ｒｙｔｐｅｌａ、１０１．１０ ｒｙｔｖｅｌａ、及び１０１．１１３ｒｙｔｐｅｌ）を基にして、もう１つの一連の類似体を作製して、ペプチド及び誘導体の構造−活性（構造−機能の関係）の関係について試験した。塩基性アミノ酸末端アルギニンの重要性を探ると、一連の類似体は、グアニジン部分を塩基性アミンで置き換えた場合に活性が比較的減少することを示した。実際に、化合物ＴＴＩ−１０１．１２６、ＴＴＩ−１０１．１３３及びＴＴＩ−１０１．１３４は、活性をほとんど又は全く示さなかった（表１１）。アルギニン「Ｒ」がＤ−アミノ酸ではなくＬ−アミノ酸であるＴＴＩ−１０１．１３５の様に、立体化学を逆にした場合、活性は低下するが完全には失われなかった（表１１）。
さらに表１１に示したように、ペプチド１０１．１１３の活性は、フェノール基を有する芳香族残基チロシンを、芳香族残基フェニルアラニン（１０１．１３２）又はトリプトファン（１０１．１２８）と置換した場合も、比較的減少した。ＴＴＩ−１０１．１２７内の水酸基の除去は、ペプチドの活性を完全に無くしたが、チロシンをトリプトファンで置換した場合、活性は低下するが未だ維持されていた。
バリンによるＣ末端ロイシンの置換もまた、活性減少の原因となり、表１１中のＴＴＩ−１０１．１２９（ｒｙｔｐｅｖ ４００ｎＭ；５０％）で認められるように、疎水性残基の長さの重要性が示された。
リードペプチド（ＴＴＩ−１０１．１２５）を基にして、もう１つの一連の模倣体を製造し、本発明の化合物の構造−活性についてさらに調査した。
チロシン、ロイシン及びアラニン残基をそれぞれアザ−アミノ酸で置き換えて、シリーズ１０１．１３６から１０１．１４０（図２８Ａ及び図２８Ｂ）及び１０１．１４１−１０１．１４４（図２９Ａ及び図２９Ｂ）を製造した。アザアミノ酸は酵素分解に対するペプチドの耐性を改善するので、ある類似体で活性が維持されることは、それらのインビボでの作用持続期間を増加させる１つの手段を例示する。このような修飾は、化合物ＴＴＩ−１０１．１４０の開発を導いた。図３０−１〜図３０−３及び図３１−１〜図３１−３は、ペプチド模倣薬１０１．１２５、１０１．１３６−１０１．１４４の構造及び活性、特に活性の増加を示した模倣体１０１−１４０の力価及び効力を示している。
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ＩＬ−１Ｒ、ＩＧＦ−１Ｒ、及びＩＬ−４Ｒアンタゴニストを用いたインビボ追加実験
表１２に、本発明の様々なペプチドを用いて行ったインビボでの実験の性質について、要約した。さらなる詳細を以下に示す。
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ラットの急性敗血症性ショック
また、ペプチドの効力を、急性敗血症性ショックに罹ったスプラーグ・ドーリーラットで確かめる。スプラーグ・ドーリーラット（１６０〜１８０ｇ）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を、９：１キセラジン／ケタミン溶液、濃度１ｍｇ／Ｋｇで麻酔した。呼吸器に連結したチューブでの換気を維持するため、気管切開を行う。カニューレを右頸動脈内に挿入すると、多チャンネルＧｏｕｌｄ装置と連結したＳｔｒａｔｈａｍ圧力変換器で系統的動脈モニターが可能になる。右頸静脈をカニューレし、薬剤投与を可能にする。動物を放射熱下に置き、一定正常温度を保つ。敗血症性ショックを、リポ多糖ボーラス（ＬＰＳ）（１ｍｇ／ｋｇ；シグマ）の系統的注入により起こす。約３０ｍｍＨｇの減少が、約５分後に認められる。
ルイスラットにおけるコラーゲン誘発性関節炎プロトコール
ウシ関節から単離精製したＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）をシグマから得た。ＣＩＩ（２ｍｇ／ｍｌ）を０．０１Ｍ酢酸中で１晩４℃で攪拌して溶解した。次に、溶液を不完全フロイントアジュバント（ＣＩＩ：ＩＣＦＡ、Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、デトロイト、ミシガン州）に懸濁する。Ｌｅｗｉｓ雌ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）（１４０〜１８０ｇ、８週齢）を、０．５ｍｌの懸濁液（０．５ｍｇ ＣＩＩ）を背中皮内へ多数回注射する、又は１あるいは２回の尻尾基底部へ注射することで、免疫化する。次に、急性炎症反応を起こすために、７日後、動物の尻尾基底部に、０．２ｍｌ（０．２ｍｇ ＣＩＩ）を再度注射する。実験中（１〜２４日）の異なる時点で、動物を犠牲にし、中手指節関節接合部サンプルを採取し、固定化し、コートして、６〜７μｍの凍結切片を得る。スライド上でＧｏｌｄｎｅｒ染料及びトルイジンブルーで２重に着色して、関節性炎症の重要性を測定する。デジタル化した像を撮り、ＩｍａｇｅＰｒｏＰｌｕｓ（登録商標）４．１ソフトウエアで分析する。
免疫抑制マウス（ヌードマウス）における腫瘍増殖
結腸Ｃｏｌｏ２０５（登録商標）癌腫細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；ロックビル、メリーランド州）から得る。細胞をＲＰＭＩ−１６４０培地内に維持し、１００ｍｍペトリ皿内、５％ＣＯ２及び９５％空気に維持するように制御した増湿大気内、３７℃で増殖させる。培地に１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン及び１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを加える。
１００μｌのＰＢＳ中の２．５×１０６癌腫結腸Ｃｏｌｏ２０５（登録商標）細胞を、６週齢の免疫不全の雌のマウス（Ｂａｌｂ／ｃ、ｎｕ／ｎｕ；Ｃｈａｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）の背中に皮下注射（針２５Ｇ；ＢＤ、ニュージャージー州）する。おおよそ０．５×０．５ｃｍの大きさの腫瘍細胞の注射５日後、処置を開始し、腫瘍の容量を、２日毎に、以下の式；バーニヤカリパーで、長さ×幅×高さ：に従って測定する。処置開始１４日後、動物を犠牲にし、腫瘍を取り出し、重さ及び体積を測定する。切片を１０％ホルマリンバッファーで２４時間固定し、７０％エタノールに移す。次に、腫瘍をパラフィンでコートし、切片を免疫組織化学目的でカットする。一般的形態を、ヘマトキシリン／エオシン着色で評価する。
ＩＧＦ−１Ｒアンタゴニストを用いた増殖性疾患の治療
増殖性疾患に罹患した患者、例えば、結腸、乳房、前立腺、肺の癌又は増殖性皮膚疾患に罹患した患者を、本明細書中に記載の化合物で治療できる。治療投与量のＡＰＧ−２０１、ＡＰＧ−２０２、ＡＰＧ−２０３、ＡＰＧ−２０４、ＡＰＧ−２０５又はＡＰＧ−２０６ペプチドを患者に投与できる。例えば、患者血液中０．１ｎＭ〜６０ｎＭの間の濃度になる投与量のＡＰＧ−２０６を、３週間の間毎週１回投与し、次に、個人基準に合わせた間隔で、例えば３ヶ月毎、血液病学毒性が治療を邪魔するまで、繰り返し投与した。正確な治療方針は、一般に、主治医又は治療管理者によって決められる。ペプチドを、無菌生理食塩水中、ゆっくりとした静脈内注入で投与してよい。第３注入投与後、特に第２治療サイクル又は治療開始１０週間後、最初の腫瘍サイズ及び転移の減少に着目できる。
その他の態様
ペプチドのスクリーニング及び本発明のペプチドの同定について上記した方法から見て、当業者は、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）受容体又はＩＬ−１０サイトカインファミリーの受容体のような、サイトカイン受容体の既知の可動領域から誘導した５〜２０アミノ酸のペプチドを選択することによって、任意のサイトカイン受容体のペプチド性修飾因子を迅速に開発できるであろう。
ＰＥＤＦは、網膜色素上皮細胞によって合成され、網膜内の抗脈管形成因子である。また、酸化ストレス及びグルタメート外毒性から神経を守る。このように、本発明のアゴニストは、網膜の異常な血管新生の場合及び腫瘍増殖（例えば糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、及び癌）に治療の可能性を有するであろう（例えば、Ｂａｒｎｓｔａｂｌｅ及びＴｏｍｂｒａｎ−Ｔｉｎｋ、Ｐｒｏｇ．Ｒｅｔｉｎ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．、２３、５６１−５７７、２００４）。
ＩＬ−１０ファミリーのサイトカインは、炎症部位上に有益な効果を有し、抗炎症性効果は、創傷治癒、炎症性腸疾患及び乾癬の場合に記載されたことがある。ＩＬ−１０は、Ｔｈ１細胞内の前炎症性因子様ＩＬ−２、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γの生成を減少する。腫瘍部位上へのマクロファージの浸潤を阻害することによって、腫瘍の増殖を減少する（Ｌｉ及びＨｅ、Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、１０．６２０−６２５、２００４；Ａｓａｄｕｌｌａｈら、Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｉｎｆｌａｍｍ．Ａｌｌｅｒｇｙ、３、１８５−１９２、２００４）。
上記の方法を用いて設計されたＩＧＦ−１Ｒ結合ペプチドは、結果として、ο−配置結合とは独立したＩＧＦ−１Ｒのアロステリック調節を起こすらしい。そのように、その他の膜及び細胞内化合物とのＩＧＦ−１Ｒの相互作用の変化は、天然リガンドの結合特性に影響を与えうるらしい。さらに、そのような方法を用いることは、選択的シグナル伝達を強化すると同時に、その他の機能を余分として残すことができるらしい。ＡＰＧ−２０１、ＡＰＧ−２０２、ＡＰＧ−２０３、ＡＡＰＧ−２０４、ＡＰＧ−２０５及びＡＰＧ−２０６ペプチドは、細胞の型に依存して、異なる活性を有することができる。例えば、ＭＣＦ−７の様なＥＲ感受性細胞内では、ＡＰＧ−２０３及びＡＰＧ−２０６は、より有力であるが、ＥＲ非感受性細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）上ほど有効ではない。さらに、ＩＲ−ＩＧＦ−１Ｒ又は可能であればＩＧＦ−１Ｒ／ＥＧＦＲの様なハイブリッドの存在は、別のシグナル伝達経路を活性化することができ、それにより、結果として、異なる親和性及び効力を生じる。それ故、非競合的アロステリックペプチドの開発は、ο−配置リガンドを用いた方法とは別の強力且つ選択的な方法を提供する。
全体では、ＡＰＧ−２０６は、試験した全ペプチドの内、最も堅実な効力及び力価を及ぼす様に思われる。β鎖上の膜近傍及びジスルフィド結合領域（図１４）を標的として設計されたペプチドは、シグナル伝達及び／又はα／β２量体化、それに続く細胞内チロシンキナーゼリン酸化に影響を与えてよい。
本明細書中で議論された態様は、本発明の任意の方法又は組成物に関して実施でき、また、その逆も言える。さらに、本発明の組成物及びキットを用いて、本発明の方法を行うこともできる。
本発明のその他の目的、特徴及び長所は、上の詳細な記述に基づき当業者に明らかになるであろう。そのように、詳細な記述及び具体的実施例は、本発明の具体的態様を表しているが、本発明の精神及び範囲内での様々な変化及び修飾として、例としてのみ与えられている。
個々の特許、特許出願、又は文献を具体的且つ個別的に示して援用するように、ＷＯ２００５／１０５８３０号、並びに全ての特許、特許出願、及び本明細書で言及した文献を同一範囲で本明細書に援用する。
図１は、ＶＥＧＦＲ上でのＶＥＧＦＲアンタゴニストの位置を示した略図である。 図２Ａから図２Ｃは、ペプチドアンタゴニストの細胞増殖及び血管新生に対する効果を示す一連のグラフである。図２Ａは、ＶＥＧＦ（２ｎｇ／ｍｌ）、及びペプチド２．１、２．２、２．３（１０μＭ）の存在下におけるブタ微小血管内皮細胞の増殖アッセイの結果を示す。図２Ｂは、ＶＥＧＦ（２ｎｇ／ｍｌ）及び漸増用量のペプチドの存在下、肺動脈内皮細胞（ＰＡＥＣ）におけるペプチドの用量反応曲線を図示している。図２Ｃは、本明細書に記載のペプチドの硝子体内注射（最終概算眼内濃度１０μＭ）による高酸素状態に曝したラット網膜の血管新生への効果について図示している。 図３−１及び図３−２は、ヒトＶＥＧＦＲ−２（Ｆｌｋ−１）の配列（配列番号４３）である。四角で囲んだ配列又は下線を引いた配列は、ＶＥＧＦＲの同定された可動領域を表す。 図４は、ヒトインターロイキン１受容体（ＩＬ−１Ｒ−α）の配列（配列番号４４）である。四角で囲んだ配列又は下線を引いた配列は、ＩＬ−１Ｒ−αの同定された可動領域を表す。 図５は、ヒトインターロイキン１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲａｃＰ）の配列（配列番号４５）である。四角で囲んだ配列又は下線を引いた配列は、ＩＬ−１ＲａｃＰの同定された可動領域を表す。 図６−１及び図６−２は、ヒトインスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）の配列（配列番号４６）である。四角で囲んだ配列又は下線を引いた配列は、ＩＧＦ−１Ｒの同定された可動領域を表す。 図７は、ヒトインターロイキン４受容体（ＩＬ−４Ｒ）α鎖の配列（配列番号４７）である。四角で囲んだ配列又は下線を引いた配列は、ＩＬ−４Ｒの同定された可動領域を表す。 図８Ａ及び図８Ｂは、ＩＧＦ−１（１０ｎｇ／ｍｌ；図８Ａ）（１ｎｇ／ｍｌ；図８Ｂ）、並びにさまざまな濃度のペプチドＡＰＧ−２０１、ＡＰＧ−２０２、及びＡＰＧ−２０４の存在下における癌腫Ａ５４９細胞の増殖アッセイの結果を示す一連のグラフである。 図９Ａ及び図９Ｂは、ＩＬ−１（１０ｎｇ／ｍｌ；図９Ａ）（１ｎｇ／ｍｌ；図９Ｂ）、並びにさまざまな濃度のペプチドＡＰＧ−１０１、ＡＰＧ−１０３、及びＡＰＧ−１０６の存在下における癌腫Ａ５４９細胞の増殖アッセイの結果を示す一連のグラフである。 図１０は、ＩＬ−４（１ｎｇ／ｍｌ）、並びにさまざまな濃度のペプチドＡＰＩ−４０１、ＡＰＩ−４０２、ＡＰＩ−４０３、ＡＰＩ−４０４、及びＡＰＩ−４０５の存在下における癌腫Ａ５４９細胞の増殖アッセイの結果を示すグラフである。 図１１−１及び図１１−２は、ヒトＩＬ−１Ｒ配列（配列番号４４）と、対応するマウス、ラット、及びウマの配列（配列番号４８、配列番号４９、及び配列番号５０）とのアライメントである。 図１２−１及び図１２−２は、ヒトＩＬ−４Ｒ配列（配列番号４７）と、対応するマウス及びブタの配列（配列番号５１及び配列番号５２）とのアライメントである。 図１３−１〜図１３−３は、ヒトＶＥＧＦＲ２配列（配列番号４３）と、対応するマウス、ラット、及びウズラの配列（配列番号５３、配列番号５４、及び配列番号５５）とのアライメントである。 図１４は、ＩＧＦ−１受容体を図示している。α鎖及びβ鎖並びに抗ＩＧＦ−１Ｒペプチド（矢印）が標的とする領域を示す。 図１５は、ＩＧＦ−１（５０ｎｇ／ｍｌ）存在下における乳癌細胞及び肝臓癌細胞（ＭＣＦ−７及びＨｅｐＧ２）の増殖アッセイの結果を示す一連のグラフである。 図１６は、ＩＧＦ−１（５０ｎｇ／ｍｌ）存在下における乳癌細胞及び肝臓癌細胞（ＭＣＦ−７及びＨｅｐＧ２）についての増殖アッセイの結果を示すグラフである。 図１７は、ＩＧＦ−１誘導性チロシン自己リン酸化ペプチド（ＡＰＧ−２０４及びＡＰＧ−２０６）による阻害を示す一連のウエスタンブロット画像である。 図１８Ａは、抗ＩＧＦ−１Ｒペプチドの選択性を示す一連のウエスタンブロット画像である。図１８Ｂは、抗ＩＧＦ−１Ｒペプチドの存在下における肺動脈内皮細胞（ＰＡＥＣ）のＶＥＧＦ１６５誘導性増殖を示すグラフである。 図１９は、ＡＰＧ−２０３、ＡＰＧ−２０４、ＡＰＧ−２０５、及びＡＰＧ−２０６ペプチドの存在下におけるラット大動脈のＩＧＦ−１誘導性血管弛緩の阻害を示す一連のグラフである。 図２０は、滅菌水中の２μｇペプチドをＰ５にて硝子体内注射したスプラーグ・ドーリー仔ラットの網膜血管の発達阻害を示す画像及びグラフである。 図２１−１〜図２１−３は、ヒトインスリン受容体（配列番号２３）とＩＧＦ−１受容体（配列番号２４）とのアミノ酸配列比較である。 図２２−１及び図２２−２は、ＩＧＦ−１受容体の１次アミノ酸配列（配列番号２５）であり、ペプチドの位置を配列内に示す（四角）。 図２３Ａ〜図２３Ｄは、ＡＰＧ−２０６の第２世代誘導体のＩＧＦ−１誘導性増殖に対する効果を示す一連のグラフである。図２３Ａは、ＩＧＦ−１誘導性増殖のＡＰＧ−２０６による阻害の用量反応曲線を示す。図２３Ｂは、ＩＧＦ−１誘導性増殖のＡＰＧ−２０６．５による阻害の用量反応曲線を示す。図２３Ｃは、ＩＧＦ−１誘導性増殖のＡＰＧ−２０６．７による阻害の用量反応曲線を示す。図２３Ｄは、ＩＧＦ−１誘導性増殖のＡＰＧ−２０６による阻害の用量反応曲線を示す。 図２４Ａ〜図２４Ｃは、ＡＰＧ−２０４がＩＧＦ−１Ｒと結合することを示す一連のオートラジオグラムである。 図２５Ａは、ＡＰＧ２０６がインビボでヒト乳癌細胞（ＭＣＦ−７）の自然増殖速度を有意に低下させる（ｐ＜０．０２）ことを示すグラフである。増殖速度の基準線を点線で示す。図２５Ｂは、ＭＣＦ−７細胞を皮下接種したヌードマウスの腫瘍の画像である。 図２６は、ＡＰＩ−１０１．１０９、ＡＰＩ−１０１．１１１、及びＡＰＩ−１０１．１１０：ｒｙ（１２ａａ）ｅｌａペプチド模倣薬の構造の略図である。 図２７Ａは、ＴＴＩ−１０１．１１０（ＡＰＩ−１０１．１１０ともいう）の模倣誘導体の構造の略図及び特徴付けの結果である。 図２７Ｂは、ＴＴＩ−１０１．１１０の模倣誘導体の構造の略図及び特徴付けの結果である。 図２８Ａは、ＴＴＩ−１０１．１２５（ＡＰＩ−１０１．１２５ともいう）の模倣誘導体の構造の略図である。 図２８Ｂは、ＴＴＩ−１０１．１２５の模倣誘導体の構造の略図である。 図２９Ａは、ＴＴＩ−１０１．１２５の他の模倣誘導体の構造の略図である。 図２９Ｂは、ＴＴＩ−１０１．１２５の他の模倣誘導体の構造の略図である。 図３０−１〜図３０−３は、ＴＴＩ−１０１．１２５の模倣誘導体の構造の概要及び特徴付けの結果である。 図３１−１〜図３１−３は、ＴＴＩ−１０１．１２５の他の模倣誘導体の構造の概要及び特徴付けの結果である。 図３２Ａ及び図３２Ｂは、Ｉ１２５−ＡＰＩ１０１．１０のＩＬ−１Ｒへの化学的架橋を示す一連の画像である。図３２Ａは、ＩＬ−１受容体へのＩ１２５−ＡＰＩ−１０１．１０の結合及び置換を示す。上方のバンドは、アクセサリータンパク質と２量体化した完全な受容体である。７５〜８０ｋＤａのバンドは、ＩＬ−１Ｒサブユニットに連結したペプチドを表す。図３２Ｂは、胸腺細胞溶解物を用いて行ったＩＬ−１Ｒのウエスタンブロットを示す。 図３３Ａ〜図３３Ｃは、ＡＰＩ−１０１．１０のＩＬ−１Ｒへの結合を示す一連のグラフである。図３３Ａは、さまざまな濃度の非放射性ＡＰＩ−１０１．１０存在下における、放射性標識ＡＰＩ−１０１．１０の置換曲線を表す。図３３Ｂは、ＨＥＫ２９３細胞内でのＡＰＩ−１０１．１０の特異的結合を示す。図３３Ｃは、ＡＰＩ−１０１．１０存在下におけるＩＬ−１βの特異的結合を示す。 図３４Ａ及び図３４Ｂは、ＡＰＩ−１０１．１０の存在下及び非存在下におけるホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）誘導性皮膚炎を示す一連の画像である（図３４Ｂ）。食塩水の対照を図３４Ａに示す。 図３５Ａ及び図３５Ｂは、ＰＭＡ誘導性耳介皮膚炎に対するＡＰＩ−１０１．１０の効果を示す一連のグラフである。図３５Ａは、ＰＭＡ誘導性皮膚炎の結果として生ずるラット耳介の腫脹がＡＰＩ−１０１．１０ペプチド存在下で減少することを示す。図３５Ｂは、ＡＰＩ−１０１．１０存在下におけるＰＭＡ誘導性炎症耳介の重量変化を示す。 図３６Ａ〜図３６Ｄは、ＩＧＦ−１ＲアンタゴニストＡＰＧ−２０６が腫瘍増殖を低下させることを示す一連のグラフ及び画像である。図３６Ａ及び図３６Ｂは、ＡＰＧ２０６がインビボでのヒト肝臓癌細胞（ＨｅｐＧ２）の自然増殖速度及び増殖量を有意に低下させる（ｐ＜０．０４）ことを示すグラフである。図３６Ｃは、ＨｅｐＧ２細胞を皮下接種したヌードマウスでＨｅｐＧ２が作り出した腫瘍の画像を示す。図３６Ｄは、腫瘍増殖及び処置中の動物の体重変化のグラフである。

Claims (136)

  1. インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｓ１Ｌ２Ｆ３Ｖ４Ｐ５Ｒ６Ｐ７Ｅ８Ｒ９Ｋ１０を特徴とするアミノ酸配列を含む化合物であって、式中：
    Ｓ１は、残基なし、セリン、スレオニン、バリン、及びηから成る群より選択され、ηは中性親水性アミノ酸であり；
    Ｌ２は、残基なし、ロイシン、アラニン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びφから成る群より選択され、φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；
    Ｆ３は、残基なし、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン、及びΣから成る群より選択され、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸であり；
    Ｖ４は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びφから成る群より選択され、φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；
    Ｐ５は、残基なし、プロリン、アラニン、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（ＭｅＡｌａ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、ジエチルチアゾリジンカルボン酸（Ｄｔｃ）、及びΩから成る群より選択され、Ωは構造制約生成アミノ酸であり；
    Ｒ６は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、及びアルギニン代替物から成る群より選択され；
    Ｐ７は、残基なし、プロリン、アラニン、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（ＭｅＡｌａ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、ジエチルチアゾリジンカルボン酸（Ｄｔｃ）、及びΩであり、Ωは構造制約生成アミノ酸であり；
    Ｅ８は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、及びΨから成る群より選択され、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含む、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；
    Ｒ９は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、及びアルギニン代替物から成る群より選択され；そして
    Ｋ１０は、残基なし、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、及びアルギニン代替物から成る群より選択される、
    前記化合物。
  2. 中性アミノ酸が、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、ホモセリン、アロスレオニン、又はヒドロキシプロリンである、請求項１に記載の化合物。
  3. 疎水性側鎖を含むα−アミノ酸が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンである、請求項１に記載の化合物。
  4. 炭素数１〜１０の該脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項１に記載の化合物。
  5. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項１に記載の化合物。
  6. 疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΛであり、Λは、中性脂肪族アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミン；チロシン；４−ヒドロキシフェニルグリシン；フェニルグリシン；ホモセリン；３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン；又は４−クロロフェニルアラニンである、請求項１に記載の化合物。
  7. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項６に記載の化合物。
  8. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項６に記載の化合物。
  9. 構造制約生成アミノ酸が、アゼチジン−２−カルボン酸、ピペコリン酸、イソニペコチン酸、４−（アミノメチル）安息香酸、２−アミノ安息香酸、又はニペコチン酸である、請求項１に記載の化合物。
  10. アルギニン代替物が、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルである、請求項１に記載の化合物。
  11. １級アリールアルキルアミンが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンである、請求項１に記載の化合物。
  12. アミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１、アミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２、又はアミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１及びアミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２を更に含み、Ｇ１は、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、及びアシル基から成る群より選択され、Ｇ２はペプチドのカルボキシ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、及び芳香族アミン又はアリールアルキルアミンから成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
  13. アシル基が、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルである、請求項１２に記載の化合物。
  14. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項１２に記載の化合物。
  15. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項１２に記載の化合物。
  16. インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｅ１Ｓ２Ｄ３Ｖ４Ｌ５Ｈ６Ｆ７Ｔ８Ｓ９Ｔ１０を特徴とするアミノ酸配列を含む化合物であって、式中：
    Ｅ１は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、及びΨから成る群より選択され、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含む、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；
    Ｓ２は、残基なし、セリン、スレオニン、バリン、及びηから成る群より選択され、ηは中性親水性アミノ酸であり；
    Ｄ３は、残基なし、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、及びΨから成る群より選択され、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含む、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；
    Ｖ４は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは疎水性側鎖を含むα−アミノ酸であり；
    Ｌ５は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは疎水性側鎖を含むα−アミノ酸であり；
    Ｈ６は、残基なし、ヒスチジン、リジン、アルギニン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、及びアルギニン代替物から成る群より選択され；
    Ｆ７は、残基なし、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン、及びΣから成る群より選択され、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸であり；
    Ｔ８は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、及びΣから成る群より選択され、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸を規定し；
    Ｓ９は、残基なし、セリン、スレオニン、バリン、及びηから成る群より選択され、ηは中性親水性アミノ酸であり；そして
    Ｔ１０は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、及びΣから成る群より選択され、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸を規定する、
    前記化合物。
  17. 第１アリールアミンが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンである、請求項１６に記載の化合物。
  18. 中性親水性アミノ酸が、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、ホモセリン、アロスレオニン、又はヒドロキシプロリンである、請求項１６に記載の化合物。
  19. 疎水性側鎖を含むα−アミノ酸が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンである、請求項１６に記載の化合物。
  20. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項１６に記載の化合物。
  21. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項１６に記載の化合物。
  22. アルギニン代替物が、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルである、請求項１６に記載の化合物。
  23. 疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΛであり、Λは、中性脂肪族アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである、請求項１６に記載の化合物。
  24. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項２３に記載の化合物。
  25. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、及びフェニルエチルアミン；チロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルグリシン、ホモセリン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、又は４−クロロフェニルアラニンである、請求項２３に記載の化合物。
  26. アミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１、アミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２、又はアミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１及びアミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２を更に含み、Ｇ１は、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、及びアシル基から成る群より選択され、Ｇ２は、残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、及び芳香族アミン又はアリールアルキルアミンから成る群より選択される、請求項１６に記載の化合物。
  27. アシル基が、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルである、請求項２６に記載の化合物。
  28. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項２６に記載の化合物。
  29. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項２６に記載の化合物。
  30. インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式ａ１−ａ２−Ｎ１Ａ２Ｓ３Ｖ４−ａ３−ａ４−ａ５を特徴とするアミノ酸配列を含む化合物であって、式中：
    Ｎ１は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、及びΨから成る群より選択され、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含む、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；
    Ａ２は、アラニン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは疎水性側鎖を含むα−アミノ酸であり；
    Ｓ３は、セリン、スレオニン、バリン、及びηから成る群より選択され、ηは中性親水性アミノ酸であり；
    Ｖ４は、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；
    ａ１は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、及びアルギニン代替物から成る群より選択され；
    ａ２は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、及びΣから成る群より選択され、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸であり；
    ａ３は、残基なし、プロリン、アラニン、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン（ＭｅＡｌａ）、トランス−４−ヒドロキシプロリン、ジエチルチアゾリジンカルボン酸（Ｄｔｃ）、及びΩから成る群より選択され、Ωは構造制約生成アミノ酸であり；
    ａ４は、セリン、スレオニン、バリン、及びηから成る群より選択され、ηは中性親水性アミノ酸であり；そして
    ａ５は、ロイシン、アラニン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである、
    前記化合物。
  31. １級アリールアルキルアミンが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンである、請求項３０に記載の化合物。
  32. 中性親水性アミノ酸が、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、ホモセリン、アロスレオニン、又はヒドロキシプロリンである、請求項３０に記載の化合物。
  33. 疎水性側鎖を含むα−アミノ酸が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンである、請求項３０に記載の化合物。
  34. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項３０に記載の化合物。
  35. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項３０に記載の化合物。
  36. アルギニン代替物が、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルである、請求項３０に記載の化合物。
  37. 疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、又はチロシンである、請求項３０に記載の化合物。
  38. 構造制約生成アミノ酸が、アゼチジン−２−カルボン酸、ピペコリン酸、イソニペコチン酸、４−（アミノエチル）安息香酸、２−アミノ安息香酸、又はニペコチン酸である、請求項３０に記載の化合物。
  39. インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｇ１−ａ１−ａ２−Ｘ−ａ３−ａ４−ａ５、ａ１−ａ２−Ｘ−ａ３−ａ４−ａ５−Ｇ２、又はＧ１−ａ１−ａ２−Ｘ−ａ３−ａ４−ａ５−Ｇ２を特徴とするアミノ酸配列を含む化合物であって、式中、ＸはＮ１Ａ２Ｓ３Ｖ４であり、Ｎ１、Ａ２、Ｓ３、Ｖ４、ａ１、ａ２、ａ３、ａ４、及びａ５は、請求項３０に記載の通りに定義され、Ｇ１はペプチドのアミノ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、及びアシル基から成る群より選択され、Ｇ２はペプチドのカルボキシ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、及び芳香族アミン又はアリールアルキルアミンから成る群より選択される、前記化合物。
  40. アシル基が、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニ、又はイソブタニルである、請求項３９に記載の化合物。
  41. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項３９に記載の化合物。
  42. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項３９に記載の化合物。
  43. インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｉ１Ｒ２Ｋ３Ｙ４Ａ５Ｄ６Ｇ７Ｔ８Ｉ９を特徴とするアミノ酸配列を含む化合物であって、式中：
    Ｉ１は、残基なし、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり：
    Ｒ２は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物から成る群より選択され：
    Ｋ３は、残基なし、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、又はアルギニン代替物から成る群より選択され；
    Ｙ４は、残基なし、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン、及びΣから成る群より選択され、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸であり；
    Ａ５は、残基なし、アラニン、イソロイシン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；
    Ｄ６は、残基なし、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、及びΨから成る群より選択され、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含む、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；
    Ｇ７は、残基なし、アラニン、イソロイシン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；
    Ｔ８は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、及びΣから成る群より選択され、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸であり；そして
    Ｉ９は、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである、
    前記化合物。
  44. 疎水性側鎖を含むα−アミノ酸が、ノルロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンである、請求項４３に記載の化合物。
  45. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項４３に記載の化合物。
  46. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項４３に記載の化合物。
  47. アルギニン代替物が、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルである、請求項４３に記載の化合物。
  48. 疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΛであり、Λは、中性脂肪族アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミン、チロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルグリシン、ホモセリン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、又は４−クロロフェニルアラニンを規定する、請求項４３に記載の化合物。
  49. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項４８に記載の化合物。
  50. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項４８に記載の化合物。
  51. １級アリールアルキルアミンが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンである、請求項４８に記載の化合物。
  52. アミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１、アミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２、又はアミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１及びアミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２を更に含み、Ｇ１は、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、及びアシル基から成る群より選択され、Ｇ２は、残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、及び芳香族アミン又はアリールアルキルアミンから成る群より選択される、請求項４３に記載の化合物。
  53. アシル基が、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルである、請求項５２に記載の化合物。
  54. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項５２に記載の化合物。
  55. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項５２に記載の化合物。
  56. インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｅ１Ｎ２Ｆ３Ｌ４Ｈ５Ｌ６Ｌ７Ｌ８Ａ９を特徴とするアミノ酸配列を含む化合物であって、式中：
    Ｅ１は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、及びΨから成る群より選択され、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含む、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；
    Ｎ２は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、及びΨから成る群より選択され、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含む、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；
    Ｆ３は、残基なし、フェニルアラニン、トリプトファン、アラニン、及びΣから成る群より選択され、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸であり；
    Ｌ４は、残基なし、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；
    Ｈ５は、残基なし、ヒスチジン、リジン、アルギニン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、及びアルギニン代替物から成る群より選択され；
    Ｌ６、Ｌ７、Ｌ８は、残基なし、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より個別に選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；そして
    Ａ９は、残基なし、アラニン、バリン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンである、
    前記化合物。
  57. １級アリールアルキルアミンが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンである、請求項５６に記載の化合物。
  58. 疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はΛであり、Λは、中性脂肪族アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミン；チロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン、フェニルグリシン、ホモセリン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、又は４−クロロフェニルアラニンである、請求項５６に記載の化合物。
  59. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項５８に記載の化合物。
  60. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項５８に記載の化合物。
  61. 疎水性側鎖を含むα−アミノ酸が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンである、請求項５６に記載の化合物。
  62. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項５６に記載の化合物。
  63. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項５６に記載の化合物。
  64. アルギニン代替物が、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルである、請求項５６に記載の化合物。
  65. アミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１、アミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２、又はアミノ酸配列のアミノ末端に結合したＧ１及びアミノ酸配列のカルボキシ末端に結合したＧ２を更に含み、Ｇ１は、残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、及びアシル基から成る群より選択され、Ｇ２は、残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、及び芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンから成る群より選択される、請求項５６に記載の化合物。
  66. アシル基が、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルである、請求項６５に記載の化合物。
  67. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項６５に記載の化合物。
  68. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項６５に記載の化合物。
  69. インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式ａ１−ａ２−ａ３−Ｔ１Ｖ２Ｌ３Ｓ４Ｎ５Ｌ６−ａ４を特徴とするアミノ酸配列を含む化合物であって、式中：
    Ｔ１は、残基なし、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、及びΣから成る群より選択され、Σは疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸であり；
    Ｖ２は、残基なし、バリン、アラニン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；
    Ｌ３は、残基なし、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；
    Ｓ４は、セリン、スレオニン、バリン、及びηから成る群より選択され、ηは中性親水性アミノ酸であり；
    Ｎ５は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、及びΨから成る群より選択され、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、及び１級アリールアルキルアミンを含む、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；
    Ｌ６は、残基なし、ロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びΦから成る群より選択され、Φは、疎水性側鎖を含むα−アミノ酸；炭素数１〜１０の脂肪族アミン；又は芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンであり；
    ａ１は、残基なし、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、及びアルギニン代替物から成る群より選択され；
    ａ２は、残基なし、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ホモセリン、β−ロイシン、β−フェニルアラニン、α−アミノアジピン酸、及びΨから成る群より選択され、Ψは、疎水性側鎖、芳香族アミン、脂肪族アミン、又は１級アリールアルキルアミンを含む、３−アミノ−５−フェニルペンタン酸−α−アミノ酸であり；そして
    ａ３は、残基なし、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、オルニチン、シトルリン、２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、及びアルギニン代替物から成る群より選択される、
    前記化合物。
  70. 疎水性側鎖Σ又は芳香族側鎖を含むα−アミノ酸が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、アリルグリシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、ヒスチジン、又はチロシンである、請求項６９に記載の化合物。
  71. 疎水性側鎖を含むα−アミノ酸が、ノルロイシン、イソロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、又はアリルグリシンである、請求項６９に記載の化合物。
  72. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項６９に記載の化合物。
  73. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項６９に記載の化合物。
  74. 中性親水性アミノ酸が、ヒドロキシバリン、β，β−ジアルキルセリン、ホモセリン、アロスレオニン、又はヒドロキシプロリンである、請求項６９に記載の化合物。
  75. １級アリールアルキルアミンが、ベンジルアミン、フェニルエチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、又は４−フェニル−ベンジルアミンである、請求項６９に記載のポリペプチド。
  76. アルギニン代替物が、４−アミジノフェニルアセチル、４−アミジノフェニルプロピオニル、４−アミジノフェニルグリシル、４−アミジノフェニルメチルグリシル、４−グアニジノフェニルアセチル、４−グアニジノフェニルプロピオニル、４−グアニジノフェニルグリシル、又は４−グアニジノフェニルメチルグリシルである、請求項６９に記載のポリペプチド。
  77. インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、式Ｇ１−ａ１−ａ２−ａ３−Ｘ−ａ４、ａ１−ａ２−ａ３−Ｘ−ａ４−Ｇ２、又はＧ１−ａ１−ａ２−ａ３−Ｘ−ａ４−Ｇ２を特徴とするアミノ酸配列を含む化合物であって、ＸはＴ１Ｖ２Ｌ３Ｓ４Ｎ５Ｌ６であり、Ｔ１、Ｖ２、Ｌ３、Ｓ４、Ｎ５、Ｌ６、ａ１、ａ２、ａ３、及びａ４は、請求項６９に記載の通りに定義され、Ｇ１はペプチドのアミノ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、炭素数１〜８の直鎖又は分枝鎖アルキル基、及びアシル基から成る群より選択され、Ｇ２はペプチドのカルボキシ末端に結合しており、且つ残基なし、水素、ＮＨ２、炭素数１〜１０の脂肪族アミン、及び芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミンから成る群より選択される、前記化合物。
  78. アシル基が、アセチル、プロピオニル、ブタニル、イソプロピオニル、又はイソブタニルである、請求項７７に記載の化合物。
  79. 炭素数１〜１０の脂肪族アミンが、メチルアミン、イソブチルアミン、イソバレリルアミン、又はシクロヘキシルアミンである、請求項７７に記載の化合物。
  80. 芳香族アミン又はアリールアルキルアミンが、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミンである、請求項７７に記載の化合物。
  81. 配列番号１〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列をコードする単離核酸配列を含むベクター。
  82. 請求項８１に記載のベクターを含む細胞。
  83. 原核細胞である、請求項８２に記載の細胞。
  84. 真核細胞である、請求項８２に記載の細胞。
  85. 請求項１〜８０のいずれか１項に記載の化合物を発現する細胞。
  86. 原核細胞である、請求項８５に記載の細胞。
  87. 真核細胞である、請求項８５に記載の細胞。
  88. 請求項１〜８０のいずれか１項に記載の化合物を含む医薬組成物。
  89. 増殖性疾患を治療する方法であって、治療を必要とする患者に、請求項１〜８０のいずれか１項に記載の化合物を有効用量投与することを含む、前記方法。
  90. 化学療法剤を更に投与することを含む、請求項８９に記載の方法。
  91. 増殖性疾患が、乳癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、又は増殖性皮膚疾患である、請求項８９に記載の方法。
  92. 増殖性疾患が異常な脈管形成を含む、請求項８９に記載の方法。
  93. 異常な脈管形成を治療する方法であって、治療を必要とする患者に、請求項１〜８０のいずれか１項に記載の化合物を有効用量投与することを含む、前記方法。
  94. 患者が、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、又は黄斑変性に罹患している、請求項９３に記載の方法。
  95. インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする、請求項１〜８０のいずれか１項に記載の化合物の能力を阻害又は増強する候補化合物を同定する方法であって：
    請求項１〜８０のいずれか１項に記載の化合物存在下で、候補化合物とインスリン様成長因子１受容体を接触させ；そして、
    候補化合物と接触させない対照と比較して、インスリン様成長因子１受容体の生物活性の増加又は減少をアッセイする、
    ことを含み、対照と比較して生物活性が減少していることは、候補化合物が、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする請求項１〜８０のいずれか１項に記載の化合物の能力を増強することを示しており、対照と比較して生物活性が増加していることは、候補化合物が、インスリン様成長因子１受容体の生物活性をアンタゴナイズする請求項１〜８０のいずれか１項に記載の化合物の能力を阻害することを示す、前記方法。
  96. 請求項１〜８０のいずれか１項に記載の該化合物を、検出可能シグナルを直接的又は間接的に提供する部分で標識する、請求項９５に記載の方法。
  97. 部分が放射性標識である、請求項９６に記載の方法。
  98. 放射性標識が、１２５Ｉ、１４Ｃ、又は３Ｈである、請求項９７に記載の方法。
  99. 部分がアルカリホスファターゼ又は西洋ワサビペルオキシダーゼである、請求項９６に記載の方法。
  100. サイトカイン受容体の非競合的ペプチドアンタゴニストを同定する方法であって、受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有する候補ペプチドを選択し、そして、候補ペプチドの非存在下又は存在下で受容体の生物活性を測定することによって、候補ペプチドが受容体のオリゴマー化及び／又は活性を阻害する能力を測定する工程を含み、候補ペプチド非存在下で測定した生物活性と比較して候補ペプチド存在下で生物活性が減少することによって、候補ペプチドがサイトカイン受容体の非競合的アンタゴニストペプチドとして同定される、前記方法。
  101. 候補ペプチドが、それが由来する受容体の領域に存在しないアミノ酸を少なくとも１つ含有し、少なくとも１つのアミノ酸は、候補ペプチドのアンタゴニスト活性に有意な影響を及ぼさない、請求項１００に記載の方法。
  102. 非競合的ペプチドがプロテイナーゼ耐性である、請求項１００に記載の方法。
  103. 受容体がヒト血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）であり、ペプチドは：
    ａ）残基３２０〜３５０；
    ｂ）残基３５０〜４００；
    ｃ）残基４００〜４４０；
    ｄ）残基４８１〜５６５；
    ｅ）残基６４０〜６８５；及び
    ｆ）残基７４５〜７７０、
    から成る群より選択される残基に位置付けられるヒトＶＥＧＦＲの可動領域に由来する、請求項１００に記載の方法。
  104. 受容体がヒトインターロイキン１受容体（ＩＬ−１Ｒα）であり、ペプチドは：
    ａ）残基１８１〜２００；
    ｂ）残基２０９〜２４０；及び
    ｃ）残基３２０〜３４１、
    から成る群より選択される残基に位置付けられるヒトＩＬ−１Ｒの可動領域に由来する、請求項１００に記載の方法。
  105. 受容体がヒトインターロイキン１受容体（ＩＬ−１Ｒ）アクセサリータンパク質であり、ペプチドは：
    ａ）残基１１５〜１６０；
    ｂ）残基１７０〜２６６；
    ｃ）残基２００〜２１５；
    ｄ）残基２７５〜２９５；
    ｅ）残基３００〜３１５；及び
    ｆ）残基３３０〜３７０、
    から成る群より選択される残基に位置付けられるＩＬ−１Ｒアクセサリータンパク質の可動領域に由来する、請求項１００に記載の方法。
  106. 受容体がヒトインスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）であり、ペプチドは：
    ａ）残基３２０〜３３５；
    ｂ）残基４８７〜５２７；
    ｃ）残基５９５〜６２０；
    ｄ）残基６６０〜６９０；
    ｅ）残基７２５〜７４０；
    ｆ）残基７８０〜７９９；
    ｇ）残基８２０〜８４０；及び
    ｈ）残基９１７〜９４７、
    から成る群より選択される残基に位置付けられるヒトＩＧＦ−１Ｒの可動領域に由来する、請求項１００に記載の方法。
  107. 受容体がヒトインターロイキン４受容体（ＩＬ−４Ｒ）であり、ペプチドは：
    ａ）残基１１２〜１２５；
    ｂ）残基１２５〜２１６；及び
    ｃ）残基２１０〜２４０、
    から成る群より選択される残基に位置付けられるヒトＩＬ−４Ｒの可動領域に由来する、請求項１００に記載の方法。
  108. 受容体がヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）であり、ペプチドは：
    ａ）残基３３５〜３４５；
    ｂ）残基４９５〜５１５；及び
    ｃ）残基６４０〜６５０、
    から成る群より選択される残基に位置付けられるヒトＥＧＦＲの可動領域に由来する、請求項１００に記載の方法。
  109. 受容体がヒト成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）であり、ペプチドは：
    ａ）残基１６０〜２４０；及び
    ｂ）残基２５０〜２７０、
    から成る群より選択される残基に位置付けられるヒトＧＨＲの可動領域に由来する、請求項１００に記載の方法。
  110. サイトカイン受容体の活性を阻害するペプチド模倣薬を同定する方法であって、サイトカイン受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有するサイトカイン受容体アンタゴニストペプチドの非ペプチド化合物を選択し、そしてペプチド模倣薬の受容体活性阻害能を測定する工程を含む、前記方法。
  111. サイトカイン受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有するペプチドである、非競合的細胞外サイトカイン受容体アンタゴニスト。
  112. サイトカイン受容体がヒトＶＥＧＦＲであり、ペプチドは：
    ａ）残基３２０〜３５０；
    ｂ）残基３５０〜４００；
    ｃ）残基４００〜４４０；
    ｄ）残基４８１〜５６５；
    ｅ）残基６４０〜６８５；及び
    ｆ）残基７４５〜７７０、
    から成る群より選択されるＶＥＧＦＲ領域に由来する、請求項１１１に記載のアンタゴニスト。
  113. サイトカイン受容体がヒトＩＬ−１Ｒアクセサリータンパク質であり、ペプチドは：
    ａ）残基１１５〜１６０；
    ｂ）残基１７０〜２６６；
    ｃ）残基２００〜２１５；
    ｄ）残基２７５〜２９５；
    ｅ）残基３００〜３１５；及び
    ｆ）残基３３０〜３７０、
    から成る群より選択されるＩＬ−１Ｒアクセサリータンパク質領域に由来する、請求項１１１に記載のアンタゴニスト。
  114. サイトカイン受容体がヒトＩＬ−１Ｒであり、ペプチドは：
    ａ）残基１８１〜２００；
    ｂ）残基２０９〜２４０；及び
    ｃ）残基３２０〜３４１、
    から成る群より選択されるヒトＩＬ−１Ｒ領域に由来する、請求項１１１に記載のアンタゴニスト。
  115. サイトカイン受容体がヒトＩＧＦ−１Ｒであり、ペプチドは：
    ａ）残基３２０〜３３５；
    ｂ）残基４８７〜５２７；
    ｃ）残基５９５〜６２０；
    ｄ）残基６６０〜６９０；
    ｅ）残基７２５〜７４０；
    ｆ）残基７８０〜７９９；
    ｇ）残基８２０〜８４０；及び
    ｈ）残基９１７〜９４７、
    から成る群より選択されるヒトＩＧＦ−１Ｒ領域に由来する、請求項１１１に記載のアンタゴニスト。
  116. サイトカイン受容体がヒトＩＬ−４Ｒであり、ペプチドは：
    ａ）残基１１２〜１２５；
    ｂ）残基１２５〜２１６；及び
    ｃ）残基２１０〜２４０、
    から成る群より選択されるＩＬ−４Ｒ領域に由来する、請求項１１１に記載のアンタゴニスト。
  117. 請求項１１２に記載のアンタゴニストでＶＥＧＦＲを標的化することを含む、ヒトＶＥＧＦＲ活性を阻害する方法。
  118. 請求項１１３に記載のペプチドでＩＬ−１Ｒアクセサリータンパク質を標的化することを含む、ヒトＩＬ−１ＲａｃＰ活性を阻害する方法。
  119. 請求項１１４に記載のペプチドでＩＬ−１Ｒを標的化することを含む、ヒトＩＬ−１Ｒ活性を阻害する方法。
  120. 請求項１１５に記載のペプチドでＩＧＦ−１Ｒを標的化することを含む、ヒトＩＧＦ−１Ｒ活性を阻害する方法。
  121. 請求項１１６に記載のペプチドでＩＬ−４Ｒを標的化することを含む、ヒトＩＬ−４Ｒ活性を阻害する方法。
  122. アンタゴニストが、ＶＥＧＦＲの配列番号５６、配列番号５７、及び配列番号５８から成る群より選択される配列を有するペプチドである、請求項１１２に記載の方法。
  123. アンタゴニストが、ＩＬ−１Ｒの配列番号９５、配列番号９７、及び配列番号９８から成る群より選択される配列を有するペプチドである、請求項１１３に記載の方法。
  124. アンタゴニストが、ＩＧＦ−１Ｒの配列番号６６、配列番号６９、及び配列番号７１から成る群より選択される配列を有するペプチドである、請求項１１５に記載の方法。
  125. アンタゴニストが、ＩＬ−４Ｒの配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、及び配列番号８４から成る群より選択される配列を有するペプチドである、請求項１１６に記載の方法。
  126. アンタゴニストが、ＶＥＧＦＲの配列番号５６、配列番号５７、及び配列番号５８から成る群より選択される配列を有するペプチドのペプチド模倣薬である、請求項１１２に記載の方法。
  127. アンタゴニストが、ＩＬ−１Ｒの配列番号９５、配列番号９７、及び配列番号９８から成る群より選択される配列を有するペプチドのペプチド模倣薬である、請求項１１３に記載の方法。
  128. アンタゴニストが、ＩＧＦ−１Ｒの配列番号６６、配列番号６９、及び配列番号７１から成る群より選択される配列を有するペプチドのペプチド模倣薬である、請求項１１５に記載の方法。
  129. アンタゴニストが、ＩＬ−４Ｒの配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、及び配列番号８４から成る群より選択される配列を有するペプチドのペプチド模倣薬である、請求項１１６に記載の方法。
  130. サイトカイン受容体活性を伴うシグナルト伝達経路の異常によって特徴付けられる動物の疾患又は病状を治療する方法であって、サイトカイン受容体活性の阻害に有効な条件下で、治療上有効量のサイトカイン受容体小断片ペプチド又はその誘導体を動物に投与する工程を含み、サイトカイン受容体小断片ペプチド又はその誘導体は請求項１１１に記載のアンタゴニストである、前記方法。
  131. サイトカイン受容体活性を伴うシグナル伝達経路の異常によって特徴付けられる動物の疾患又は病状を治療するための医薬組成物であって、有効量のサイトカイン受容体アンタゴニスト小断片ペプチド又はその誘導体を、医薬的に許容可能な担体と共に含み、サイトカイン受容体小断片ペプチド又はその誘導体は請求項１１１に記載のアンタゴニストである、前記医薬組成物。
  132. サイトカイン受容体の非競合的ペプチドアゴニストを同定する方法であって、受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有する候補ペプチドを選択し、そして候補ペプチドの非存在下又は存在下で受容体の生物活性を測定することによって、候補ペプチドが受容体のオリゴマー化及び／又は活性を増加させる能力を測定する工程を含み、候補ペプチド非存在下で測定した生物活性と比較して候補ペプチド存在下で生物活性が増加することによって、候補ペプチドがサイトカイン受容体の非競合的アゴニストペプチドとして同定される、前記方法。
  133. 候補ペプチドが、それが由来する受容体の領域内に存在しないアミノ酸を少なくとも１つ含有し、少なくとも１つのアミノ酸が候補ペプチドのアゴニスト活性に有意な影響を及ぼさない、請求項１３２に記載の方法。
  134. 該非競合的ペプチドがプロテイナーゼ耐性である、請求項１３２に記載の方法。
  135. サイトカイン受容体の活性を活性化するペプチド模倣薬を同定する方法であって、サイトカイン受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有するサイトカイン受容体アゴニストペプチドの非ペプチド化合物を選択し、そしてペプチド模倣薬がサイトカイン受容体の活性を増加させる能力を測定する工程を含む、前記方法。
  136. サイトカイン受容体の可動領域に由来する約７〜約２０アミノ酸を含有するペプチドである、非競合的細胞外サイトカイン受容体アゴニスト。
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