JP2008541718A - スモール熱ショックタンパク質を用いた目的タンパク質の製造方法 - Google Patents
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Abstract
本発明によれば、目的タンパク質の製造のための培養工程及び分離・精製工程にsHSPsを添加する場合、プロテアーゼによるタンパク質損失を防止することにより、高収率の目的タンパク質を得ることができる。また、全体細胞酵素または部分精製された酵素を用いる反応工程にsHSPsを添加する場合、プロテアーゼによる酵素の損失を防止することにより、酵素を用いた生物変換の収率を高めることができる。
Description
大腸菌W3110(ATCC39936)の染色体DNA、シュードモナス・プチダ(Pseudomonas putida)KT2440(ATCC47054)の染色体DNA及びサッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae)の染色体DNAを、サムブルーク(Sambrook)等の方法により分離・精製した(Sambrook et al., Molecular Cloning, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY, 1989)。
配列番号2: 5'-cccaagcttttaatggtgatgatggtgatggttgatttcgatacggcgcgg-3'
配列番号3: 5'-ggaattcatgcgtaacttcgatttatccccactg-3'
配列番号4: 5'-cccaagcttttaatggtgatgatggtgatggctatttaacgcgggacgttcgct-3'
配列番号5: 5'-ggaattcatgaccatgactactgctttc-3'
配列番号6: 5'-cccaagcttttaatggtgatgatggtgatggttcagcgctggttttt-3'
配列番号7: 5'-ggaattcatgtcatttaacagtccatttt-3'
配列番号8: 5'-cccaagcttttaatggtgatgatggtgatggttaccccacgattcttgaga-3'
前記実施例1に従い製作されたIbpA、IbpBまたはHSP26タンパク質をコードする遺伝子を含む組換えプラスミドである、pTac99IbpAH、pTac99IbpBH、pTac99ppIbpAH及びpTac99HSP26Hによってそれぞれ形質転換された組換え大腸菌XL1−Blue(Stratagene, USA)を、抗生剤であるアンピシリン(ampicillin)50mg/Lの添加されたLB培地(酵母抽出液5g/L、トリプトファン10g/L、塩化ナトリウム10g/L)で培養した。
目的タンパク質は細胞の溶解溶液(lysis solution)内でプロテアーゼに攻撃されやすいため、多くの損失が発生する。本実施例では、目的タンパク質としてのヒト血清アルブミンを溶解溶液で希釈し、2時間にかけて常温でプロテアーゼであるトリプシン(trypsin)を多様な濃度で共に培養した。プロテアーゼの濃度は、目的タンパク質に対して、0、1/10、1/20、1/30、1/50に変化させた。sHSPsは、大腸菌由来のIbpAとIbpB、サッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP26を用いた。
本実施例では、他のプロテアーゼとしてのプロテイナーゼKを用いて、上記と同じ実験を行った。目的タンパク質としてのヒト血清アルブミンを溶解溶液で希釈し、2時間にかけて常温で多様な濃度のプロテイナーゼKと共に培養した。プロテアーゼの濃度は、目的タンパク質に対して、0、1/300、1/1000、1/3000、1/10000に変化させた。sHSPとしては、大腸菌由来のIbpAとIbpB、サッカロマイセス・セレヴィシエ由来のHSP26を用いた。
以上の実施例では、目的タンパク質の分離・精製工程におけるsHSPsを添加した場合、sHSPsがプロテアーゼによる目的タンパク質の分解を防止するということを例示した。しかし、ほとんどの微生物培養の際、プロテアーゼが生成されることを勘案すると、目的タンパク質を製造する培養過程にsHSPsを添加するか、目的タンパク質製造用細胞をsHSPsの遺伝子で形質転換し、培養させて、目的タンパク質とsHSPsを同時に発現させる場合、プロテアーゼによる目的タンパク質の分解を防止することができるということは、当業者にとって明らかなことである。
Claims (20)
- 目的タンパク質が発現された細胞またはその培養液から目的タンパク質を分離・精製する方法において、プロテアーゼによる目的タンパク質の分解を防止するために分離・精製過程に有効量のスモール熱ショックタンパク質(sHSPs)を添加することを特徴とする、目的タンパク質の分離・精製方法。
- 前記sHSPsはアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)由来のIbpA、アラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana)由来のsHSPs、ブラディリゾビウム・ジャポニカム(Bradyrbizobium japonicum)由来のHSPB、HSPH、HSPC、HSPF、ブルセラ・スイス(Brucella suis)由来のIbpA、ブルクネラ・アフィディコラ(Bruchnera aphidicola)由来のsHSPs、ブルクネラ・アフィド(アシルソ・シフォン・ピサム)(Bruchnera aphid(Acyrthosiphon pi sum))由来のIbpA、シトラス・トリステザ・ウイルス(Citrus tristeza virus)由来のsHSPs、大腸菌(E.coli)由来のIbpA、IbpB、ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori)由来のIbpB、ヒト(Human)由来のHSP27、α,β-クリスタリン(α,β-crystallin)、メサノコッカス・ジャナシィ(Methanococcus jannaschii)由来のHSP16.5、メタノピラス・カンドレリ(Methanopyrus kandleri)由来のIbpA、マウス(Murine)由来のHSP25、マイコバクテリウム・レプラエ(Mycobacterium leprae)由来のsHSPs、ヒト型結核菌(Mycobacterium tuberculosis)由来のHSP16.3、ピレルラ種(Pirellula sp. )由来のIbpB、ピサム・サチバム(エンドウ豆)(Pisum sativum(pea))由来のHSP18.1、プラスモジウム・ファルシパラム(Plasmodium falciparum)由来のsHSPs、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP26、サルモネラ・エンテリカ亜種エンテリカ・セロバー・タイフィ)Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi)由来のIbpA、IbpB、サルモネラ・ティフィムリウム(Salmonella typhimurium)由来のIbpA、IbpB、シェワネラ・オンエイデンシス(Shewanella oneidensis)由来のIbpA、フレクスナー赤痢菌(Shigella flexneri)由来のIbpA、IbpB、シノリゾビウム・メリロティ(Sinorhizobium meliloti)由来のIbpA、ストレプトコッカス・ピオゲネス(Streotocuccus pyogenes)由来のIbpA、ストレプトミセス・コエリコロール(Streptomyces coelicolor)由来のsHSPs、スルホロブス・ソルファタリカス(Sulfolobus solfataricus)由来のsHSPs、シネココッカス・ブルカヌス(Synechococcus vulcanus)由来のHSP16、サーモアナエロバクター・テングコンジェンシス(Thermoanaerobacter tengcongensis)由来のIbpA、サーモプラズマ・アシドフィラム(Thermoplasma acidophilum)由来のIbpA、エルシニア・ペスティス(Yersinia pestis)由来のIbpA、IbpBよりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項1に記載の目的タンパク質の分離・精製方法。
- 前記sHSPsは大腸菌由来のIbpA、大腸菌由来のIbpB、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA及びサッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP2よりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項2に記載の目的タンパク質の分離・精製方法。
- 細胞培養による目的タンパク質の製造方法において、プロテアーゼによる目的タンパク質の分解を防止するために培養過程に有効量のsHSPsを添加することを特徴とする、目的タンパク質の製造方法。
- 前記sHSPsはアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)由来のIbpA、アラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana)由来のsHSPs、ブラディリゾビウム・ジャポニカム(Bradyrbizobium japonicum)由来のHSPB、HSPH、HSPC、HSPF、ブルセラ・スイス(Brucella suis)由来のIbpA、ブルクネラ・アフィディコラ(Bruchnera aphidicola)由来のsHSPs、ブルクネラ・アフィド(アシルソ・シフォン・ピサム)(Bruchnera aphid(Acyrthosiphon pi sum))由来のIbpA、シトラス・トリステザ・ウイルス(Citrus tristeza virus)由来のsHSPs、大腸菌(E.coli)由来のIbpA、IbpB、ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori)由来のIbpB、ヒト(Human)由来のHSP27、α,β-クリスタリン(α,β-crystallin)、メサノコッカス・ジャナシィ(Methanococcus jannaschii)由来のHSP16.5、メタノピラス・カンドレリ(Methanopyrus kandleri)由来のIbpA、マウス(Murine)由来のHSP25、マイコバクテリウム・レプラエ(Mycobacterium leprae)由来のsHSPs、ヒト型結核菌(Mycobacterium tuberculosis)由来のHSP16.3、ピレルラ種(Pirellula sp. )由来のIbpB、ピサム・サチバム(エンドウ豆)(Pisum sativum(pea))由来のHSP18.1、プラスモジウム・ファルシパラム(Plasmodium falciparum)由来のsHSPs、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP26、サルモネラ・エンテリカ亜種エンテリカ・セロバー・タイフィ)Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi)由来のIbpA、IbpB、サルモネラ・ティフィムリウム(Salmonella typhimurium)由来のIbpA、IbpB、シェワネラ・オンエイデンシス(Shewanella oneidensis)由来のIbpA、フレクスナー赤痢菌(Shigella flexneri)由来のIbpA、IbpB、シノリゾビウム・メリロティ(Sinorhizobium meliloti)由来のIbpA、ストレプトコッカス・ピオゲネス(Streotocuccus pyogenes)由来のIbpA、ストレプトミセス・コエリコロール(Streptomyces coelicolor)由来のsHSPs、スルホロブス・ソルファタリカス(Sulfolobus solfataricus)由来のsHSPs、シネココッカス・ブルカヌス(Synechococcus vulcanus)由来のHSP16、サーモアナエロバクター・テングコンジェンシス(Thermoanaerobacter tengcongensis)由来のIbpA、サーモプラズマ・アシドフィラム(Thermoplasma acidophilum)由来のIbpA、エルシニア・ペスティス(Yersinia pestis)由来のIbpA、IbpBよりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項4に記載の目的タンパク質の製造方法。
- 前記sHSPsは大腸菌由来のIbpA、大腸菌由来のIbpB、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA及びサッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP2よりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項5に記載の目的タンパク質の製造方法。
- 細胞培養による目的タンパク質の製造方法において、培養過程でプロテアーゼによる目的タンパク質の分解を防止するためにsHSPsの遺伝子で組換えられた細胞を用いることを特徴とする、目的タンパク質の製造方法。
- 前記sHSPsの遺伝子で組換えられた細胞は、染色体にsHSPsの遺伝子が挿入された細胞、又はsHSPsの遺伝子を含む組換えベクターで形質転換された細胞であることを特徴とする、請求項7に記載の目的タンパク質の製造方法。
- 前記sHSPsの遺伝子で組換えられた細胞は、sHSPsの遺伝子と目的タンパク質の遺伝子が融合タンパク質(fusion protein)の形として発現されるように組換えられた細胞であることを特徴とする、請求項7に記載の目的タンパク質の製造方法。
- 前記sHSPsはアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)由来のIbpA、アラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana)由来のsHSPs、ブラディリゾビウム・ジャポニカム(Bradyrbizobium japonicum)由来のHSPB、HSPH、HSPC、HSPF、ブルセラ・スイス(Brucella suis)由来のIbpA、ブルクネラ・アフィディコラ(Bruchnera aphidicola)由来のsHSPs、ブルクネラ・アフィド(アシルソ・シフォン・ピサム)(Bruchnera aphid(Acyrthosiphon pi sum))由来のIbpA、シトラス・トリステザ・ウイルス(Citrus tristeza virus)由来のsHSPs、大腸菌(E.coli)由来のIbpA、IbpB、ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori)由来のIbpB、ヒト(Human)由来のHSP27、α,β-クリスタリン(α,β-crystallin)、メサノコッカス・ジャナシィ(Methanococcus jannaschii)由来のHSP16.5、メタノピラス・カンドレリ(Methanopyrus kandleri)由来のIbpA、マウス(Murine)由来のHSP25、マイコバクテリウム・レプラエ(Mycobacterium leprae)由来のsHSPs、ヒト型結核菌(Mycobacterium tuberculosis)由来のHSP16.3、ピレルラ種(Pirellula sp.)由来のIbpB、ピサム・サチバム(エンドウ豆)(Pisum sativum(pea))由来のHSP18.1、プラスモジウム・ファルシパラム(Plasmodium falciparum)由来のsHSPs、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP26、サルモネラ・エンテリカ亜種エンテリカ・セロバー・タイフィ)Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi)由来のIbpA、IbpB、サルモネラ・ティフィムリウム(Salmonella typhimurium)由来のIbpA、IbpB、シェワネラ・オンエイデンシス(Shewanella oneidensis)由来のIbpA、フレクスナー赤痢菌(Shigella flexneri)由来のIbpA、IbpB、シノリゾビウム・メリロティ(Sinorhizobium meliloti)由来のIbpA、ストレプトコッカス・ピオゲネス(Streotocuccus pyogenes)由来のIbpA、ストレプトミセス・コエリコロール(Streptomyces coelicolor)由来のsHSPs、スルホロブス・ソルファタリカス(Sulfolobus solfataricus)由来のsHSPs、シネココッカス・ブルカヌス(Synechococcus vulcanus)由来のHSP16、サーモアナエロバクター・テングコンジェンシス(Thermoanaerobacter tengcongensis)由来のIbpA、サーモプラズマ・アシドフィラム(Thermoplasma acidophilum)由来のIbpA、エルシニア・ペスティス(Yersinia pestis)由来のIbpA、IbpBよりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項7に記載の目的タンパク質の製造方法。
- 前記sHSPsは大腸菌由来のIbpA、大腸菌由来のIbpB、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA及びサッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP2よりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項10に記載の目的タンパク質の製造方法。
- 目的タンパク質が発現された細胞またはその培養液からクロマトグラフィーを用いて目的タンパク質を分離・精製する方法において、プロテアーゼによる目的タンパク質の分解を防止するためにそのレジン(resin)又はビーズ(bead)に有効量のsHSPsが固定されているクロマトグラフィーを用いることを特徴とする、目的タンパク質の分離・精製方法。
- 前記sHSPsはアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)由来のIbpA、アラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana)由来のsHSPs、ブラディリゾビウム・ジャポニカム(Bradyrbizobium japonicum)由来のHSPB、HSPH、HSPC、HSPF、ブルセラ・スイス(Brucella suis)由来のIbpA、ブルクネラ・アフィディコラ(Bruchnera aphidicola)由来のsHSPs、ブルクネラ・アフィド(アシルソ・シフォン・ピサム)(Bruchnera aphid(Acyrthosiphon pi sum))由来のIbpA、シトラス・トリステザ・ウイルス(Citrus tristeza virus)由来のsHSPs、大腸菌(E.coli)由来のIbpA、IbpB、ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori)由来のIbpB、ヒト(Human)由来のHSP27、α,β-クリスタリン(α,β-crystallin)、メサノコッカス・ジャナシィ(Methanococcus jannaschii)由来のHSP16.5、メタノピラス・カンドレリ(Methanopyrus kandleri)由来のIbpA、マウス(Murine)由来のHSP25、マイコバクテリウム・レプラエ(Mycobacterium leprae)由来のsHSPs、ヒト型結核菌(Mycobacterium tuberculosis)由来のHSP16.3、ピレルラ種(Pirellula sp.)由来のIbpB、ピサム・サチバム(エンドウ豆)(Pisum sativum(pea))由来のHSP18.1、プラスモジウム・ファルシパラム(Plasmodium falciparum)由来のsHSPs、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP26、サルモネラ・エンテリカ亜種エンテリカ・セロバー・タイフィ)Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi)由来のIbpA、IbpB、サルモネラ・ティフィムリウム(Salmonella typhimurium)由来のIbpA、IbpB、シェワネラ・オンエイデンシス(Shewanella oneidensis)由来のIbpA、フレクスナー赤痢菌(Shigella flexneri)由来のIbpA、IbpB、シノリゾビウム・メリロティ(Sinorhizobium meliloti)由来のIbpA、ストレプトコッカス・ピオゲネス(Streotocuccus pyogenes)由来のIbpA、ストレプトミセス・コエリコロール(Streptomyces coelicolor)由来のsHSPs、スルホロブス・ソルファタリカス(Sulfolobus solfataricus)由来のsHSPs、シネココッカス・ブルカヌス(Synechococcus vulcanus)由来のHSP16、サーモアナエロバクター・テングコンジェンシス(Thermoanaerobacter tengcongensis)由来のIbpA、サーモプラズマ・アシドフィラム(Thermoplasma acidophilum)由来のIbpA、エルシニア・ペスティス(Yersinia pestis)由来のIbpA、IbpBよりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項12に記載の目的タンパク質の分離・精製方法。
- 前記sHSPsは大腸菌由来のIbpA、大腸菌由来のIbpB、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA及びサッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP2よりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項13に記載の目的タンパク質の分離・精製方法。
- 全体細胞酵素又は部分精製された酵素を用いた反応によって基質から目的物質を製造する方法において、プロテアーゼによる前記酵素の分解を防止するために酵素反応過程に有効量のsHSPsを添加することを特徴とする、目的物質の製造方法。
- 前記sHSPsはアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)由来のIbpA、アラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana)由来のsHSPs、ブラディリゾビウム・ジャポニカム(Bradyrbizobium japonicum)由来のHSPB、HSPH、HSPC、HSPF、ブルセラ・スイス(Brucella suis)由来のIbpA、ブルクネラ・アフィディコラ(Bruchnera aphidicola)由来のsHSPs、ブルクネラ・アフィド(アシルソ・シフォン・ピサム)(Bruchnera aphid(Acyrthosiphon pi sum))由来のIbpA、シトラス・トリステザ・ウイルス(Citrus tristeza virus)由来のsHSPs、大腸菌(E.coli)由来のIbpA、IbpB、ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori)由来のIbpB、ヒト(Human)由来のHSP27、α,β-クリスタリン(α,β-crystallin)、メサノコッカス・ジャナシィ(Methanococcus jannaschii)由来のHSP16.5、メタノピラス・カンドレリ(Methanopyrus kandleri)由来のIbpA、マウス(Murine)由来のHSP25、マイコバクテリウム・レプラエ(Mycobacterium leprae)由来のsHSPs、ヒト型結核菌(Mycobacterium tuberculosis)由来のHSP16.3、ピレルラ種(Pirellula sp. )由来のIbpB、ピサム・サチバム(エンドウ豆)(Pisum sativum(pea))由来のHSP18.1、プラスモジウム・ファルシパラム(Plasmodium falciparum)由来のsHSPs、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP26、サルモネラ・エンテリカ亜種エンテリカ・セロバー・タイフィ)Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi)由来のIbpA、IbpB、サルモネラ・ティフィムリウム(Salmonella typhimurium)由来のIbpA、IbpB、シェワネラ・オンエイデンシス(Shewanella oneidensis)由来のIbpA、フレクスナー赤痢菌(Shigella flexneri)由来のIbpA、IbpB、シノリゾビウム・メリロティ(Sinorhizobium meliloti)由来のIbpA、ストレプトコッカス・ピオゲネス(Streotocuccus pyogenes)由来のIbpA、ストレプトミセス・コエリコロール(Streptomyces coelicolor)由来のsHSPs、スルホロブス・ソルファタリカス(Sulfolobus solfataricus)由来のsHSPs、シネココッカス・ブルカヌス(Synechococcus vulcanus)由来のHSP16、サーモアナエロバクター・テングコンジェンシス(Thermoanaerobacter tengcongensis)由来のIbpA、サーモプラズマ・アシドフィラム(Thermoplasma acidophilum)由来のIbpA、エルシニア・ペスティス(Yersinia pestis)由来のIbpA、IbpBよりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項15に記載の目的物質の製造方法。
- 前記sHSPsは大腸菌由来のIbpA、大腸菌由来のIbpB、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA及びサッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP2よりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項16に記載の目的物質の製造方法。
- プロテアーゼによる目的タンパク質の分解を防止するために前記目的タンパク質の処理過程にsHSPsを用いる方法。
- 前記sHSPsはアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)由来のIbpA、アラビドプシス・サリアナ(Arabidopsis thaliana)由来のsHSPs、ブラディリゾビウム・ジャポニカム(Bradyrbizobium japonicum)由来のHSPB、HSPH、HSPC、HSPF、ブルセラ・スイス(Brucella suis)由来のIbpA、ブルクネラ・アフィディコラ(Bruchnera aphidicola)由来のsHSPs、ブルクネラ・アフィド(アシルソ・シフォン・ピサム)(Bruchnera aphid(Acyrthosiphon pi sum))由来のIbpA、シトラス・トリステザ・ウイルス(Citrus tristeza virus)由来のsHSPs、大腸菌(E.coli)由来のIbpA、IbpB、ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori)由来のIbpB、ヒト(Human)由来のHSP27、α,β-クリスタリン(α,β-crystallin)、メサノコッカス・ジャナシィ(Methanococcus jannaschii)由来のHSP16.5、メタノピラス・カンドレリ(Methanopyrus kandleri)由来のIbpA、マウス(Murine)由来のHSP25、マイコバクテリウム・レプラエ(Mycobacterium leprae)由来のsHSPs、ヒト型結核菌(Mycobacterium tuberculosis)由来のHSP16.3、ピレルラ種(Pirellula sp. )由来のIbpB、ピサム・サチバム(エンドウ豆)(Pisum sativum(pea))由来のHSP18.1、プラスモジウム・ファルシパラム(Plasmodium falciparum)由来のsHSPs、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP26、サルモネラ・エンテリカ亜種エンテリカ・セロバー・タイフィ)Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi)由来のIbpA、IbpB、サルモネラ・ティフィムリウム(Salmonella typhimurium)由来のIbpA、IbpB、シェワネラ・オンエイデンシス(Shewanella oneidensis)由来のIbpA、フレクスナー赤痢菌(Shigella flexneri)由来のIbpA、IbpB、シノリゾビウム・メリロティ(Sinorhizobium meliloti)由来のIbpA、ストレプトコッカス・ピオゲネス(Streotocuccus pyogenes)由来のIbpA、ストレプトミセス・コエリコロール(Streptomyces coelicolor)由来のsHSPs、スルホロブス・ソルファタリカス(Sulfolobus solfataricus)由来のsHSPs、シネココッカス・ブルカヌス(Synechococcus vulcanus)由来のHSP16、サーモアナエロバクター・テングコンジェンシス(Thermoanaerobacter tengcongensis)由来のIbpA、サーモプラズマ・アシドフィラム(Thermoplasma acidophilum)由来のIbpA、エルシニア・ペスティス(Yersinia pestis)由来のIbpA、IbpBよりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項18に記載の方法。
- 前記sHSPsは大腸菌由来のIbpA、大腸菌由来のIbpB、シュードモナス(Pseudomonas)属由来のIbpA及びサッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae)由来のHSP2よりなる群から選ばれた、少なくとも一つ以上であることを特徴とする、請求項19に記載の目的物質の製造方法。
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JP2001061487A (ja) * | 1999-07-29 | 2001-03-13 | F Hoffmann La Roche Ag | 分子シャペロンの共分泌による自然に折り畳まれた分泌タンパク質の製造法 |
JP2004043447A (ja) * | 2002-05-17 | 2004-02-12 | Sekisui Chem Co Ltd | 蛋白質の製造方法 |
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---|---|---|---|---|
JP2001033449A (ja) * | 1998-12-28 | 2001-02-09 | Sekisui Chem Co Ltd | ウイルス抗原の調製法 |
JP2001061487A (ja) * | 1999-07-29 | 2001-03-13 | F Hoffmann La Roche Ag | 分子シャペロンの共分泌による自然に折り畳まれた分泌タンパク質の製造法 |
JP2004043447A (ja) * | 2002-05-17 | 2004-02-12 | Sekisui Chem Co Ltd | 蛋白質の製造方法 |
JP2005084048A (ja) * | 2003-09-08 | 2005-03-31 | Korea Advanced Inst Of Science & Technology | sHSPsを含むタンパク質分解防止用組成物およびこれを用いた2次元ゲル電気泳動法 |
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