JP2008523810A - 真核細胞をトランスフェクトするための固定化分解性カチオンポリマーを持つ固体表面 - Google Patents
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Abstract
Description
(i)式(A)もしくは(B)のカチオン化合物またはその組み合わせ:
R2は、式:−(CH2)a−の直鎖アルキレン基(式中、aは2〜10の整数である)であり;
R3は、式:−(CbH2b)−の直鎖または分岐鎖アルキレン基(式中、bは2〜10の整数である)であり;
R4は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、もう一つの式A、または式Bであり;
R5は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、もう一つの式A、または式Bであり;
R6は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、式A、またはもう一つの式Bであり;
R7は、式:−(CcH2c)−の直鎖または分岐鎖アルキレン基(式中、cは2〜10の整数である)であり;そして
R8は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、式A、またはもう一つの式Bである];
(ii)末端1級または2級アミノ基を持つカチオン性樹状または分岐ポリアミドアミン(PAMAM);
(iii)カチオン性ポリアミノ酸;または
(iv)カチオン性多糖質(polycarbohydrate);
から選択され、前記分解性リンカー分子は式:
A(Z)d
[式中、Aは少なくとも一つの分解可能な結合を有するスペーサー分子であり、Zはアミノ基と反応する反応性残基であり、dは2以上の整数であって、AおよびZは共有結合によって結合される]
によって表される。
(i)式(A)もしくは(B)のカチオン化合物またはその組み合わせ:
R2は、式:−(CH2)a−の直鎖アルキレン基(式中、aは2〜10の整数である)であり;
R3は、式:−(CbH2b)−の直鎖アルキレン基(式中、bは2〜10の整数である)であり;
R4は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、もう一つの式A、または式Bであり;
R5は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、もう一つの式A、または式Bであり;
R6は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、式A、またはもう一つの式Bであり;
R7は、式:−(CcH2c)−の直鎖または分岐鎖アルキレン基(式中、cは2〜10の整数である)であり;そして
R8は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、式A、またはもう一つの式Bである];
(ii)末端1級または2級アミノ基を持つカチオン性樹状または分岐ポリアミドアミン(PAMAM);
(iii)カチオン性ポリアミノ酸;および
(iv)カチオン性多糖質
などから選択することができるが、これらに限定されるわけではない。
A(Z)d
[式中、Aは少なくとも一つの分解可能な結合を有するスペーサー分子であり、Zはアミノ基と反応する反応性残基であり、dは2以上の整数であって、AおよびZは共有結合によって結合される]。
分子量600のポリエチレンイミンオリゴマー(PEI−600)と2,4−ペンタンジオールジアクリレート(PDODA)とから誘導されるポリマーの合成を、分解性カチオンポリマーを製造するための一般手順として記載する。塩化メチレン25ml中のPEI−600 4.32gを、ピペットまたはシリンジを使って、バイアルに加えた。2.09gのPDODAを、上記PEI−600溶液に、撹拌しながら素早く加えた。反応混合物を室温(20℃)で4時間撹拌した。次に、50mlの2M HClを加えることにより、反応混合物を中和した。白色沈殿物を遠心分離し、塩化メチレンで洗浄し、減圧下に室温で乾燥した。
実施例1に示したように分解性カチオンポリマーを製造した。トランスフェクション効率を評価するために、線状ポリエチレンイミン(L−PEI)系ポリマーおよび脂質系ポリマーを使って、インビトロで哺乳動物細胞中にプラスミドDNAをトランスフェクトした。L−PEI系ポリマーとしてはjetPEI(Qbiogene)トランスフェクション試薬を使用した。リポフェクトアミン2000(Invitrogen)およびN−[1−(2,3−ジオレオイルオキシ)プロピル]−N,N,N−トリメチルアンモニウム塩(DOTAP:Sigma−Aldrich)を、脂質系ポリマーとして使用した。分解性カチオンポリマーおよびDOTAPをメタノールに溶解し、jetPEIおよびリポフェクトアミン2000を脱イオン水で希釈した。平底96ウェル細胞培養プレート(底面積:各ウェルにつき0.32cm2;BD Biosciences)を、これらのポリマー溶液で処理した。底に固着した実際の量は以下のとおりだった:(a)分解性カチオンポリマー;1ウェルあたり3μg、したがって9.4μg/cm2、(b)jetPEI;1ウェルあたり1μl、(c)リポフェクトアミン2000;1ウェルあたり0.375μg、(d)DOTAP;1ウェルあたり2および4ピコモル。これらのプレートを減圧下に室温で乾燥し、使用するまで真空パック中に密封した。
opti−MEM I(Invitrogen)25μl中のpEGFP−N1プラスミド(Clontechから購入)25または50ngを各ウェルに加え、室温に25分間保った。次に、10%ウシ血清(Invitrogen)を含むダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)(Invitrogen)100μl中の293細胞5×104個を加え、7.5%CO2下、37℃でインキュベートした。24〜36時間のインキュベーション後に、落射蛍光顕微鏡(IX70,オリンパス)を使ってEGFP蛍光を観察することにより、トランスフェクション効率を見積った。
記載した方法の細胞毒性を評価した。実施例3に示したようにトランスフェクトした293細胞の細胞形状を顕微鏡観察によって比較した(図1)。分解性ポリマーを使ってトランスフェクトされた細胞は、無傷の293細胞に似た正常な形態を示した。しかしL−PEI系ポリマー(jetPEI)および脂質系ポリマー(リポフェクトアミン2000)を使ってトランスフェクトしたものは円形化した。分解性カチオンポリマーは細胞を傷つけずに遺伝子を送達することができると、本発明者らは結論した。
さまざまな量の分解性カチオンポリマーを細胞培養装置上に固着させ、トランスフェクション効率を評価した。実施例2に示したプロトコールと同じプロトコールにより、96ウェル細胞培養プレートを分解性カチオンポリマーでコーティングした。実際のポリマー量は以下のとおりとした:1ウェルあたり2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、10および20μg。次に、実施例3で述べたようにトランスフェクションを行い、トランスフェクトされた細胞を7.5%CO2下、37℃でインキュベートした。細胞を播種する前に加えたプラスミドDNAの量は、1ウェルあたり0.13、0.25、0.50または1.0μgだった。40時間のインキュベーション後に、蛍光を発する細胞のパーセンテージおよび細胞の状態を、落射蛍光顕微鏡によって見積った。トランスフェクション後のEGFP陽性細胞のパーセンテージを図2に示す。高いトランスフェクション効率は、1ウェルあたり0.25および0.5μg(したがって0.78〜1.6μg/cm2)のプラスミドDNAで、1ウェルあたり2.5〜5.0μg(したがって7.8〜16μg/cm2)の範囲の分解性カチオンポリマーに、割り当てられた。
特殊な目的のために(例えば細胞成長を助けるために)細胞培養装置の表面にコーティングのある製品が販売されている。通常、そのコーティング材料は、コラーゲンまたはフィブロネクチンのような一種のタンパク質である。それらは温度の影響を受けやすいので、これらの細胞培養装置は冷蔵貯蔵を必要とし、それが(それらが嵩高い場合は特に)短所である。そのため、室温における安定性は重要な特徴である。
非分解性ポリマーを以下のように製造した:ポリエチレンイミン(Aldrich、製品番号:408727)約5gをジクロロメタン50mlに溶解した後、2.0M塩化水素−ジエチルエーテル溶液(Aldrich、製品番号:455180)100mlを加え、よく混合してポリマー塩酸塩を形成させた。次に、そのポリマー塩酸塩を遠心分離器で収集し、ジエチルエーテル150mlですすいだ。ジエチルエーテルによるこのすすぎを2回行った。すすぎ後に得られた沈殿物を減圧条件下に室温で3時間乾燥した。次に、乾燥した粉末を、使用時まで、乾燥剤と共に4℃で保存した。
分解性カチオンポリマーを実施例1に示したように製造した。非分解性カチオンポリマーは実施例7で述べたようにして得た。両ポリマーをメタノールに溶解し、一つに混合してコーティング溶液を作った。各ポリマーの最終濃度は分解性カチオンポリマー40μg/mlおよび非分解性カチオンポリマー10μg/mlとした。次に、平底96ウェル細胞培養プレート(底面積:各ウェルにつき0.32cm2;BD Biosciences)を、これらのコーティング溶液で処理した。実際には、25μlのコーティング溶液を各ウェルに分注し、減圧条件下で乾燥させることにより、メタノールを除去した。これらのコーティング条件では、1μgの分解性カチオンポリマーが96ウェルプレートの各ウェルに固着されたので、分解性カチオンポリマーの密度は3.1μg/cm2になった。また、0.25μgの非分解性カチオンポリマーが96ウェルプレートの各ウェル上に固着されたので、非分解性カチオンポリマーの密度は0.78μg/cm2になった。全部で1.25μgのポリマーが96ウェルプレートの各ウェルに固着されので、ポリマーの密度は3.9μg/cm2になった。この実施例で製造した細胞培養装置を乾燥剤と共にマイラーバッグに真空密封し、さらに使用するまで、室温で貯蔵した。
分解性カチオンポリマーを実施例1に示したように製造した。非分解性カチオンポリマーは実施例7で述べたようにして得た。両ポリマーをメタノールに溶解し、一つに混合してコーティング溶液を作った。各ポリマーの最終濃度は分解性カチオンポリマー80μg/mlおよび非分解性カチオンポリマー10μg/mlとした。次に、平底12ウェル細胞培養プレート(底面積:各ウェルにつき3.8cm2;BD Biosciences)を、これらのポリマー溶液で処理した。コーティング溶液100μlを各ウェルに分注し、減圧条件下で乾燥させることにより、メタノールを除去した。これらのコーティング条件では、8.0μgの分解性カチオンポリマーが12ウェルプレートの各ウェルに固着されたので、分解性カチオンポリマーの密度は2.1μg/cm2になり、1.0μgの非分解性カチオンポリマーが12ウェルプレートの各ウェル上に固着されたので、非分解性カチオンポリマーの密度は0.26μg/cm2になった。全部で9.0μgのポリマーが12ウェルプレートの各ウェルに固着されたので、ポリマーの密度は2.4μg/cm2になった。この実施例で製造した細胞培養装置を乾燥剤と共にマイラーバッグに真空密封し、さらに使用するまで、室温で貯蔵した。
分解性カチオンポリマーを実施例1に示したように製造した。非分解性カチオンポリマーは実施例7で述べたようにして得た。両ポリマーをメタノールに溶解し、一つに混合してコーティング溶液を作った。各ポリマーの最終濃度は分解性カチオンポリマー80μg/mlおよび非分解性カチオンポリマー10μg/mlとした。次に、平底6ウェル細胞培養プレート(底面積:各ウェルにつき9.6cm2;BD Biosciences)を、これらのコーティング溶液で処理した。コーティング溶液200μlを各ウェルに分注し、減圧条件下で乾燥させることにより、メタノールを除去した。これらのコーティング条件では、16μgの分解性カチオンポリマーが6ウェルプレートの各ウェルに固着されたので、分解性カチオンポリマーの密度は1.7μg/cm2になり、2.0μgの非分解性カチオンポリマーが6ウェルプレートの各ウェル上に固着されたので、非分解性カチオンポリマーの密度は0.21μg/cm2になった。全部で18μgのポリマーが6ウェルプレートの各ウェルに固着されたので、ポリマーの密度は1.9μg/cm2になった。この実施例で製造した細胞培養装置を乾燥剤と共にマイラーバッグに真空密封し、さらに使用するまで、室温で貯蔵した。
哺乳動物細胞を10cm細胞培養ディッシュでインキュベートし、リン酸緩衝食塩水ですすぎ、トリプシン溶液で処理した。次に、トリプシン処理した細胞を、血清を含む適当な細胞培養培地に希釈することにより、細胞懸濁液を調製した。この実施例で使用した細胞密度を表4に示す。
哺乳動物細胞を10cm細胞培養ディッシュでインキュベートし、リン酸緩衝食塩水ですすぎ、トリプシン溶液で処理した。次に、トリプシン処理した細胞を、血清を含む適当な細胞培養培地に希釈することにより、細胞懸濁液を調製した。この実施例で使用した細胞密度を表4に示す。
哺乳動物細胞を10cm細胞培養ディッシュでインキュベートし、リン酸緩衝食塩水ですすぎ、トリプシン溶液で処理した。次に、トリプシン処理した細胞を、血清を含む適当な細胞培養培地に希釈することにより、細胞懸濁液を調製した。この実施例で使用した細胞密度を表4に示す。
Claims (31)
- 生体分子との複合体を形成していないトランスフェクション試薬を含む組成物でコーティングされた固体支持体を含む装置。
- 固体支持体が、ポリスチレン樹脂、エポキシ樹脂およびガラスからなる群より選択される、請求項1の装置。
- コーティングが固体支持体の表面上にある、請求項1の装置。
- トランスフェクション試薬のコーティング量が約0.1〜約100μg/cm2である、請求項3の装置。
- トランスフェクション剤がポリマーである、請求項1の装置。
- ポリマーがカチオンポリマーである、請求項5の装置。
- トランスフェクション剤が分解性カチオンポリマーを含む、請求項1の装置。
- 分解性カチオンポリマーが、1以上の分解性リンカーによって連結されたカチオン化合物またはカチオンオリゴマーを含む、請求項7の装置。
- トランスフェクション剤が非分解性カチオンポリマーをさらに含む、請求項7の装置。
- 非分解性カチオンポリマー対分解性カチオンポリマーの比が重量比で1:0.5〜1:20である、請求項9の装置。
- トランスフェクション試薬が、複数のカチオン分子と、前記カチオン分子を分枝状に連結する少なくとも一つの分解性リンカーとを含み、前記カチオン分子が、
(i)式(A)もしくは(B)のカチオン化合物またはその組み合わせ:
R2は、式:−(CH2)a−の直鎖アルキレン基(式中、aは2〜10の整数である)であり;
R3は、式:−(CbH2b)−の直鎖アルキレン基(式中、bは2〜10の整数である)であり;
R4は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、もう一つの式A、または式Bであり;
R5は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、もう一つの式A、または式Bであり;
R6は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、式A、またはもう一つの式Bであり;
R7は、式:−(CcH2c)−の直鎖アルキレン基(式中、cは2〜10の整数である)であり;そして
R8は、水素原子、炭素原子数2〜10のアルキル、式A、またはもう一つの式Bである];
(ii)末端1級または2級アミノ基を持つカチオン性樹状または分岐ポリアミドアミン(PAMAM);
(iii)カチオン性ポリアミノ酸;および
(iv)カチオン性多糖質;
からなる群より選択され、前記分解性リンカー分子が、式:
A(Z)d
[式中、Aは少なくとも一つの分解可能な結合を有するスペーサー分子であり、Zはアミノ基と反応する反応性残基であり、dは2以上の整数であって、AおよびZは共有結合によって結合される]
によって表される、請求項1の装置。 - カチオン化合物またはカチオンオリゴマーが、ポリ(L−リジン)(PLL)、ポリエチレンイミン(PEI)、ポリプロピレンイミン(PPI)、ペンタエチレンアミン、N,N’−ビス(2−アミノエチル)−1,3−プロパンジアミン、N,N’−ビス(2−アミノプロピル)−エチレンジアミン、スペルミン、スペルミジン、N−(2−アミノエチル)−1,3−プロパンジアミン、N−(3−アミノプロピル)−1,3−プロパンジアミン、トリ(2−アミノエチル)アミン、1,4−ビス(3−アミノプロピル)ピペラジン、N−(2−アミノエチル)ピペラジン、樹状ポリアミドアミン(PAMAM)、キトサン、およびポリ(2−ジメチルアミノ)エチルメタクリレート(PDMAEMA)からなる群より選択される、請求項8の装置。
- リンカー分子が、ジ−および多価−アクリレート、ジ−および多価−アクリルアミド、ジ−および多価−イソチオシアネート、ジ−および多価−イソシアネート、ジ−および多価−エポキシド、ジ−および多価−アルデヒド、ジ−および多価−アシルクロリド、ジ−および多価−スルホニルクロリド、ジ−および多価−ハライド、ジ−および多価−無水物、ジ−および多価−マレイミド、ジ−および多価−N−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ジ−および多価−カルボン酸、ならびにジ−および多価−a−ハロアセチル基からなる群より選択される、請求項8の装置。
- リンカー分子が、1,3−ブタンジオールジアクリレート、1,4−ブタンジオールジアクリレート、1,6−ヘキサンジオールジアクリレート、2,4−ペンタンジオールジアクリレート、2−メチル−2,4−ペンタンジオールジアクリレート、2,5−ジメチル−2,5−ヘキサンジオールジアクリレート、ポリ(エチレングリコール)ジアクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、ペンタエリトリトールテトラアクリレート、ジ(トリメチロールプロパン)テトラアクリレート、ジペンタエリトリトールペンタアクリレート、および少なくとも三つのアクリレート側基またはアクリルアミド側基を持つポリエステルからなる群より選択される、請求項8の装置。
- ポリマーの分子量が500da〜1,000,000daである、請求項8の装置。
- ポリマーの分子量が2000da〜200,000daである、請求項8の装置。
- カチオン化合物またはカチオンオリゴマーの分子量が50da〜10,000daである、請求項8の装置。
- リンカー分子の分子量が100da〜40,000daである、請求項8の装置。
- 固体支持体がディッシュの底、マルチウェルプレート、または連続表面である、請求項1の装置。
- 室温で少なくとも5ヶ月はトランスフェクション活性を有意に失わずに貯蔵することができる、請求項1の装置。
- 細胞トランスフェクションの方法であって、
請求項1の装置に、トランスフェクトされるべき核酸を含む溶液を加えること;
その装置に真核細胞を加えること;および
その細胞および核酸溶液をインキュベートして細胞トランスフェクションを起こさせること
を含む方法。 - インキュベーションが5分〜3時間である、請求項21の方法。
- インキュベーションが10分〜90分である、請求項21の方法。
- 核酸がDNA、RNA、DNA/RNAハイブリッドおよび化学修飾核酸からなる群より選択される、請求項21の方法。
- DNAが環状(プラスミド)、直鎖状、断片または一本鎖オリゴヌクレオチド(ODN)である、請求項24の方法。
- RNAが一本鎖(リボザイム)または二本鎖(siRNA)である、請求項24の方法。
- 細胞が哺乳動物細胞である、請求項21の方法。
- 細胞の少なくとも一部が細胞分裂を起こす、請求項21の方法。
- 細胞が形質転換細胞または初代細胞である、請求項21の方法。
- 細胞が体細胞または幹細胞である、請求項21の方法。
- 細胞が植物細胞である、請求項21の方法。
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Cited By (2)
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Families Citing this family (38)
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US6692700B2 (en) | 2001-02-14 | 2004-02-17 | Handylab, Inc. | Heat-reduction methods and systems related to microfluidic devices |
US7010391B2 (en) | 2001-03-28 | 2006-03-07 | Handylab, Inc. | Methods and systems for control of microfluidic devices |
US6852287B2 (en) | 2001-09-12 | 2005-02-08 | Handylab, Inc. | Microfluidic devices having a reduced number of input and output connections |
US7829025B2 (en) | 2001-03-28 | 2010-11-09 | Venture Lending & Leasing Iv, Inc. | Systems and methods for thermal actuation of microfluidic devices |
US8895311B1 (en) | 2001-03-28 | 2014-11-25 | Handylab, Inc. | Methods and systems for control of general purpose microfluidic devices |
US9453251B2 (en) | 2002-10-08 | 2016-09-27 | Pfenex Inc. | Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens |
EP3718635A1 (en) | 2003-07-31 | 2020-10-07 | Handylab, Inc. | Processing particle-containing samples |
US8852862B2 (en) | 2004-05-03 | 2014-10-07 | Handylab, Inc. | Method for processing polynucleotide-containing samples |
EP1774017B1 (en) | 2004-07-26 | 2013-05-15 | Pfenex Inc. | Process for improved protein expression by strain engineering |
US7358223B2 (en) | 2004-10-04 | 2008-04-15 | Nitto Denko Corporation | Biodegradable cationic polymers |
US9572886B2 (en) | 2005-12-22 | 2017-02-21 | Nitto Denko Corporation | Agent for treating myelofibrosis |
EP2001990B1 (en) | 2006-03-24 | 2016-06-29 | Handylab, Inc. | Integrated system for processing microfluidic samples, and method of using same |
US10900066B2 (en) | 2006-03-24 | 2021-01-26 | Handylab, Inc. | Microfluidic system for amplifying and detecting polynucleotides in parallel |
US11806718B2 (en) | 2006-03-24 | 2023-11-07 | Handylab, Inc. | Fluorescence detector for microfluidic diagnostic system |
US7998708B2 (en) | 2006-03-24 | 2011-08-16 | Handylab, Inc. | Microfluidic system for amplifying and detecting polynucleotides in parallel |
US8883490B2 (en) | 2006-03-24 | 2014-11-11 | Handylab, Inc. | Fluorescence detector for microfluidic diagnostic system |
WO2008061165A2 (en) | 2006-11-14 | 2008-05-22 | Handylab, Inc. | Microfluidic cartridge and method of making same |
US9580719B2 (en) | 2007-04-27 | 2017-02-28 | Pfenex, Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
WO2008134461A2 (en) | 2007-04-27 | 2008-11-06 | Dow Global Technologies, Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
US9618139B2 (en) | 2007-07-13 | 2017-04-11 | Handylab, Inc. | Integrated heater and magnetic separator |
US9186677B2 (en) | 2007-07-13 | 2015-11-17 | Handylab, Inc. | Integrated apparatus for performing nucleic acid extraction and diagnostic testing on multiple biological samples |
US8287820B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-10-16 | Handylab, Inc. | Automated pipetting apparatus having a combined liquid pump and pipette head system |
ES2648798T3 (es) * | 2007-07-13 | 2018-01-08 | Handylab, Inc. | Materiales de captura de polinucleótidos y métodos de utilización de los mismos |
US8182763B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-05-22 | Handylab, Inc. | Rack for sample tubes and reagent holders |
US8105783B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-01-31 | Handylab, Inc. | Microfluidic cartridge |
US8133671B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-03-13 | Handylab, Inc. | Integrated apparatus for performing nucleic acid extraction and diagnostic testing on multiple biological samples |
USD787087S1 (en) | 2008-07-14 | 2017-05-16 | Handylab, Inc. | Housing |
BR112013026451B1 (pt) | 2011-04-15 | 2021-02-09 | Becton, Dickinson And Company | sistema e método para realizar ensaios de diagnóstico molecular em várias amostras em paralelo e simultaneamente amplificação em tempo real em pluralidade de câmaras de reação de amplificação |
JP6117217B2 (ja) | 2011-09-30 | 2017-04-19 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーBecton, Dickinson And Company | ユニット化された試薬ストリップ |
USD692162S1 (en) | 2011-09-30 | 2013-10-22 | Becton, Dickinson And Company | Single piece reagent holder |
EP2773892B1 (en) | 2011-11-04 | 2020-10-07 | Handylab, Inc. | Polynucleotide sample preparation device |
BR112014018995B1 (pt) | 2012-02-03 | 2021-01-19 | Becton, Dickson And Company | sistemas para executar ensaio automatizado |
CN102827756B (zh) * | 2012-06-25 | 2014-04-09 | 华南农业大学 | 应用于大豆下胚轴外植体转化受体系统的农杆菌局部侵染方法和装置 |
PT3523431T (pt) * | 2016-10-05 | 2021-01-04 | Syngenta Participations Ag | Melhoramentos no ou relacionados com o silenciamento de genes |
CN109735573A (zh) * | 2019-02-19 | 2019-05-10 | 武汉普诺赛生命科技有限公司 | 一种瞬时转染试剂及其应用方法 |
EP3798250A1 (en) * | 2019-09-25 | 2021-03-31 | University College Dublin | Hyperbranched cationic polymers useful as nucleic acid delivery vectors for transfecting |
CN112195193A (zh) * | 2020-09-30 | 2021-01-08 | 上海交通大学 | 单链dna在基因转染中的应用 |
CN114904003B (zh) * | 2021-02-09 | 2023-09-29 | 广州立得生物医药科技有限公司 | 可电离的阳离子脂质类似物材料在作为核酸药物递送载体或转染试剂中的应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003509060A (ja) * | 1999-09-17 | 2003-03-11 | ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ | 逆トランスフェクション方法 |
WO2003097107A2 (en) * | 2002-05-14 | 2003-11-27 | Nitto Denko Corporation | Controllably degradable polymeric biomolecule or drug carrier and method of synthesizing said carrier |
WO2004065636A1 (en) * | 2003-01-13 | 2004-08-05 | Nitto Denko Corporation | Solid surface for biomolecule delivery and high-throughput assay |
WO2004076557A1 (en) * | 2003-02-25 | 2004-09-10 | Nitto Denko Corporation | Biodegradable polyacetals |
JP2007534317A (ja) * | 2004-02-18 | 2007-11-29 | 日東電工株式会社 | 真核細胞トランスフェクションのための培養装置および方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20020006664A1 (en) * | 1999-09-17 | 2002-01-17 | Sabatini David M. | Arrayed transfection method and uses related thereto |
CA2427916C (en) * | 2000-11-03 | 2012-01-17 | The Regents Of The University Of Michigan | Surface transfection and expression procedure |
EP1513538A4 (en) * | 2002-06-14 | 2007-08-22 | Mirus Bio Corp | Novel methods for introducing polynucleotides into cells |
US20040048260A1 (en) * | 2002-09-10 | 2004-03-11 | Fu-Hsiung Chang | Transfection of nucleic acid |
GB0320627D0 (en) * | 2003-09-03 | 2003-10-01 | Imp College Innovations Ltd | Methods |
US7125709B2 (en) * | 2004-02-10 | 2006-10-24 | Nitto Denko Corporation | Culture device and method for eukaryotic cell transfection |
-
2005
- 2005-12-14 JP JP2007546895A patent/JP4739352B2/ja not_active Expired - Fee Related
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003509060A (ja) * | 1999-09-17 | 2003-03-11 | ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ | 逆トランスフェクション方法 |
WO2003097107A2 (en) * | 2002-05-14 | 2003-11-27 | Nitto Denko Corporation | Controllably degradable polymeric biomolecule or drug carrier and method of synthesizing said carrier |
WO2004065636A1 (en) * | 2003-01-13 | 2004-08-05 | Nitto Denko Corporation | Solid surface for biomolecule delivery and high-throughput assay |
WO2004076557A1 (en) * | 2003-02-25 | 2004-09-10 | Nitto Denko Corporation | Biodegradable polyacetals |
JP2007534317A (ja) * | 2004-02-18 | 2007-11-29 | 日東電工株式会社 | 真核細胞トランスフェクションのための培養装置および方法 |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20160040524A (ko) * | 2013-06-28 | 2016-04-14 | 에트리스 게엠베하 | Rna를 세포에 도입하기 위한 조성물 |
JP2016524898A (ja) * | 2013-06-28 | 2016-08-22 | エスリス ゲーエムベーハーethris GmbH | 細胞内へのrna導入用組成物 |
KR102285326B1 (ko) * | 2013-06-28 | 2021-08-04 | 에트리스 게엠베하 | Rna를 세포에 도입하기 위한 조성물 |
JP2021185168A (ja) * | 2014-11-10 | 2021-12-09 | エスリス ゲーエムベーハーethris GmbH | Bmpをコードするrnaの送達による骨形成誘導 |
JP7373528B2 (ja) | 2014-11-10 | 2023-11-02 | エスリス ゲーエムベーハー | Bmpをコードするrnaの送達による骨形成誘導 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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