JP2008520219A - 筋回復のための抗酸化化合物の使用 - Google Patents
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Abstract
【選択図】 なし
Description
[式中:
RはH、OHまたはCH3Oであり得;
R1はH、(CH2)nOR2であり得
ここで:nは1、2もしくは3であり、
R2はH、COCH3であるか、または
であり、
ここで、mは1、2もしくは3であり、
但し、RおよびR1は同時にHではない]
に従う可食の化合物を使用して、筋肉の健康を保持または回復することができることを見出した。
雄性Lewisラット(12〜14週齢の間)を使用した。断頭後、横隔膜を迅速に摘出し、小さなストリップ(幅約2mmおよび長さ1cm)を切り取り、続いて、95%O2および5%CO2の混合物を通気したKrebs緩衝液、pH7.4を含有するサーモスタット付き器官槽にマウントした。各横隔膜ストリップをアイソメトリック・トランスデューサーに垂直に接続した。Krebs緩衝液の組成は、(mM):NaCl(117.5)、KCI(5.6)、MgSO4(1.18)、CaCl2(2.5)、NaHPO4(1.28)、NaHCO3(25)およびグルコース(5.5)であった。実験中、15分間ごとに緩衝液を変えた。白金電極により、各筋肉ストリップの長さ全体に沿って、フィールド刺激を作製した。
材料
ヒドロキシチロソールは、Cayman Chemical,Ann Arbor、米国から入手した。チロソールおよびKO2は、Fluka,Buchs、瑞国から購入した。ホモバニリンアルコール、2−メトキシフェノール、フェノール、およびジヒドロローダミン−123(DHR−123)は、Sigma,St.Louis、米国から入手した。カテコールは、Janssen Chimica,Geel、白国から入手した。リポ酸は、Asta Medicac AG,Frankfurt、独国から購入した。一酸化窒素は、AGA,Hamburg、独国から購入した。他のすべての化学物質は、分析用純度のものであった。
化合物のONOOH誘導性DHR−123酸化に対する保護は、クーイ(Kooy)ら(Peroxynitrite−mediated oxidation of dihydrorhodamine 123.Free Radic Biol Med,16;149−56)により記載されるように測定した。簡単に説明すると、5μM DHR−123および多様な濃度のスカベンジャーを、100mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.4)中、37℃で、インキュベートした。続いて、10μlのアリコートを迅速にボルテックスしながら試験管にピペッティングすることによって、ONOOHを添加し、0.7μMの最終濃度に到達させた。それぞれ500および536nmの励起および蛍光波長で、蛍光測定を実施した。効果を、DHR−123(IC50)の酸化の50%阻害を付与するスカベンジャーの濃度として表す。
50mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.8)におけるキサンチン(150μM)およびキサンチンオキシダーゼ(XO)(5.5mU/ml)の反応によって、O2・−を発生させた。O2・−ラジカルを、ニトロブルーテトラゾリウム(NBT、50μM)によって検出した。NBTは、O2・−によるそのホルマザンへの還元を経験する。この還元速度を、2分間の間に、560nmで分光光学によりモニターした。多様な濃度のスカベンジャーを添加し、37℃でインキュベートした。反応は、XOの添加によって開始した。O2・−スカベンジング能を、NBT(IC50)の還元の50%減少を付与するスカベンジャーの濃度として表す。XOの活性に対するスカベンジャーの可能な阻害効果を調整するために、最も高い濃度のスカベンジャーを、37℃でインキュベートし、続いて、2分間の間に、尿酸塩形成の速度を、293nmで測定した。
37℃、50μM HTおよび5U/mlチロシナーゼ(Sigma,St.Louis、米国)を含有する145mMリン酸緩衝液、pH7.4において、HT(Cayman Chemical,Ann Arbor、米国)の酸化を実施した。チロシナーゼおよびHTのインキュベーションは、キノン(HTQ)の形成をもたらす。反応は、分光光学および高速液体クロマトグラフィー(HPLC)により、モニターした。240nm/minのスキャンスピードで、スペクトルを記録した。インキュベーション混合物のHPLC分析を、Supelcosil LC318カラムを使用して実施した。カラムを、0.1%(v/v)トリフルオロ酢酸および5%(v/v)アセトニトリルを含有する蒸留水で、1分間あたり1mlの流速で溶出させた。280nmでのダイオードアレイ検出(DAD)を使用した。アスコルビン酸がHTQと反応する能力を、以下のとおりに決定した。最初に、HTQを、2分半の間に形成させた。続いて、150μMアスコルビン酸(Sigma,St.Louis、米国)をHTQに添加し、混合物を、直ちに手動でHPLC中へ3分間で注入した。
Claims (10)
- 前記化合物は、ヒドロキシチロソール、その酢酸塩またはその前駆体である、請求項1または2に記載の使用。
- 前記組成物は、別の抗酸化剤をさらに含んでなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載の使用。
- 前記さらなる抗酸化剤はビタミンCである、請求項4に記載の使用。
- 前記組成物は、飲料、栄養補助食品、食物または飼料である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の使用。
- 前記食物、飼料または飲料は、式(1)に従う前記化合物の1回摂取量あたり少なくとも1mgを含んでなる、請求項6に記載の方法。
- 請求項9に記載の組成物を含んでなる食物、飲料、栄養補助食品または飼料。
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