ES2712706T3 - Uso de hidroxitirosol para reducir la cantidad de ácido láctico en plasma - Google Patents
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Abstract
Uso de un extracto de oliva que contiene hidroxitirosol para disminuir en seres humanos sanos la cantidad de ácido láctico acumulada en el plasma sanguíneo, en el cuerpo y en las células musculares durante el ejercicio.
Description
DESCRIPCION
Uso de hidroxitirosol para reducir la cantidad de acido lactico en plasma
Esta invencion se refiere al uso de extractos de oliva que contienen hidroxitirosol para disminuir en seres humanos sanos la cantidad de acido lactico acumulada en el plasma sanguineo, en el cuerpo y en las celulas musculares durante el ejercicio y para incrementar en seres humanos sanos los niveles de glucation en los musculos asociados al ejercicio.
Antecedentes de la invencion
Se ha descrito el hidroxitirosol (HT) para uso en una composicion para mantener o restaurar la salud muscular que resulta del dano ocasionado durante el ejercicio. Vease la patente internacional WO 2006/053872 (publicada el 26 de mayo de 2006). Sin embargo, no se especifico la fuente del HT, y las acciones descritas se atribuyen generalmente a la capacidad antioxidante del HT. Por el contrario, se ha encontrado que al menos algunas de las propiedades beneficiosas del HT no son atribuibles a su capacidad antioxidante.
En la formulacion de productos nutricionales para el consumo tanto humano como animal, con frecuencia es deseable usar ingredientes naturales. Se ha encontrado, que puede usarse un extracto de oliva totalmente natural como fuente sustituta de HT en la fabricacion de productos nutricionales, que puede mejorar la salud muscular, y proteger el musculo del dano inducido por el ejercicio a traves de mecanismos que no estan directamente asociados a la actividad antioxidante.
La patente japonesa JP 2005 058115 describe un extracto de oliva para uso para condimentar productos alimenticios y bebidas. La patente japonesa JP 58 146241 describe una goma de mascar que comprende un extracto de aceite de oliva. La patente internacional WO 2006/053872 describe el uso de hidroxitirosol como antioxidante para prevenir el dano muscular debido al ejercicio. La patente internacional WO 03/020026 describe el uso de una composicion que comprende extracto de artemisia opcionalmente junto con extracto de hoja de olivo para incrementar la fortaleza de las celulas musculares y las celulas musculares. La patente internacional WO 03/082259 describe el uso de extractos fenolicos de olivas para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer. La patente japonesa JP 2002 153238 describe el uso de un glucosido que puede extraerse de la oliva en el envejecimiento sano y en la prevencion de la arterioesclerosis. La patente de Ee. UU. 6,399,116 describe un extracto de Rhodiola crenulata que contiene diversos principios activos que se dice que bajan los niveles de acido lactico. La patente europea EP 1639902 describe una proantocianidina, en particular de extracto de la corteza de pino, que puede reducir el nivel de acido lactico en el ejercicio fisico.
Breve descripcion de la invencion
La invencion se define por las reivindicaciones.
Esta invencion se refiere al uso de extractos de oliva segun las reivindicaciones 1 y 5. Los extractos de oliva pueden usarse para preparar nutraceuticos que mejoren la salud muscular y, en particular, para proteger los musculos durante el ejercicio, mejorar la recuperacion de lesiones durante el ejercicio y aliviar la mialgia relacionada con el ejercicio. Si bien el extracto de oliva se usa como alimento humano, tambien puede aplicarse a animales, en particular a aquellos dedicados a ejercicio o trabajo intenso, tales como los animales para carreras (perros, camellos, caballos) y animales que remolcan cargas pesadas (caballos de granja, perros de trineo y similares).
Se ha encontrado que el extracto de oliva puede proteger los musculos al menos de dos maneras que no estan directamente asociadas a sus propiedades antioxidantes.
Primera, el extracto de oliva disminuye la cantidad de acido lactico que se puede acumular en el plasma sanguineo, en el cuerpo y en las celulas musculares durante el ejercicio. Esto permite que el participante haga ejercicio o entrene durante un periodo de tiempo mas prolongado y que haga ejercicio con mas intensidad al tiempo que se minimice la mialgia posejercicio.
Segunda, el extracto de oliva incrementa los niveles de glutation en el musculo asociados al ejercicio. Esto significa que el extracto de oliva esta activando los mecanismos antioxidantes propios del cuerpo, ademas de que actua como antioxidante por si solo. Asi, puede usarse un extracto de oliva para aumentar la capacidad antioxidante propia del cuerpo en el mantenimiento de la salud muscular.
El extracto de oliva puede usarse para mejorar la salud muscular administrando un extracto de oliva a un animal (incluyendo seres humanos) antes del ejercicio, durante el ejercicio, o poco despues, para mantener la salud muscular y prevenir el dano muscular ocasionado durante el ejercicio. Una composicion nutraceutica que comprenda extracto de oliva es eficaz en la mejora de la salud muscular en un animal, incluyendo los seres humanos, que es objeto de mialgia, dolor muscular y lesion muscular, posejercicio.
Descripcion de las figuras
La figura 1 es la programacion del estudio del ejemplo 1.
La figura 2 muestra la concentracion de lactato en plasma (en porcentaje de cambio de los valores de referencia) como una funcion del tiempo, * P < 0,05 (hidroxitirosol frente a placebo) para el grupo de 8 sujetos.
La figura 3 compara la concentracion de GSH (glutation reducido), GSSG (glutation oxidado (dimero)) y la actividad de la GR (glutation reductasa) en los dos grupos (valores posejercicio comparados con valores preejercicio) en el grupo de 8 sujetos.
La figura 4 muestra el incremento en GSH, GSSH y GR despues de ejercicio comparado con los valores de referencia (medias ± SEM (error estandar de la media, por sus siglas en ingles) para el grupo de 8 sujetos).
El extracto de oliva disminuye la acumulacion de acido lactico
Se ha encontrado que los extractos de oliva disminuyen la acumulacion de las concentraciones de acido lactico/lactato durante el ejercicio, y en el ejercicio, en el plasma, en el cuerpo y en el musculo. El consumo de energia de las celulas musculoesqueleticas puede incrementarse hasta 100 veces cuando se va del reposo a ejercicio de alta intensidad. Esta alta demanda de energia puede exceder la capacidad aerobica de las celulas musculares y una gran fraccion del ATP requerido tendra que venir del metabolismo anaerobico. El ejercicio de alta intensidad tambien conduce a un rapido descenso en la funcion contractil conocida como fatiga musculoesqueletica. Asi, una consecuencia del metabolismo anaerobico es el descenso en la funcion contractil.
La degradacion anaerobia del glucogeno conduce a una acumulacion intracelular de acidos inorganicos de los cuales el acido lactico es cuantitativamente el mas importante. El acido lactico, que es un acido fuerte, se disociara en iones lactato e iones hidrogeno; el propio lactato llega a ser una fuente de energia para las celulas musculares. Por lo tanto, la acidificacion de los musculos baja la produccion de energia muscular y produce fatiga y dolor muscular. La produccion de lactato incrementada coincide con la acidosis celular y sigue siendo un buen marcador indirecto para las condiciones metabolicas celulares que inducen la acidosis metabolica.
Como los iones lactato e hidrogeno se refuerzan en las celulas durante el ejercicio o trabajo fisico mas prolongado, un sistema «cotransportador» retira iones hidrogeno de las celulas musculares, conservandose, asi, unas condiciones de pH relativamente favorables, previniendose la acumulacion de iones hidrogeno en el musculo. El entrenamiento de enduro mejora la capacidad de este sistema de cotransporte.
El sistema de transporte de hidrogeno no es la unica manera en que las celulas musculares pueden prevenir el refuerzo de acido durante el ejercicio. Esta tambien el sistema de intercambio Na+/H+, que basicamente bombea iones hidrogeno fuera de las celulas musculares e introduce iones sodio para reemplazarlos (el lactato no participa en este procedimiento). Como sistema de transporte de hidrogeno, este intercambio consume energia y el intercambio de Na+/H+ parece ser criticamente importante durante el ejercicio.
Durante una actividad muscular intensa, el pH intracelular puede caer aproximadamente 0,5 unidades de pH. Hay dos lineas principales de evidencia que se han usado para relacionar este descenso en el pH con la disfuncion contractil en la fatiga. Primera, los estudios sobre fatiga muscular humana con frecuencia han demostrado una buena correlacion temporal entre el descenso del pH muscular y la reduccion de la produccion de fuerza o energia. Segunda, los estudios sobre fibras musculoesqueleticas de piel han demostrado que la acidificacion puede reducir tanto la fuerza isometrica como la velocidad de acortamiento (Hakan Westerblad et al. 2002 News Physiol Sci 17: 17-21).
Hasta ahora se conoce relativamente poco, excepto para el ejercicio, sobre como puede estar influida de manera positiva la presencia de iones hidrogeno en el musculo. Aunque se conoce poco sobre el mecanismo, se encuentra que el pH intracelular del musculo esqueletico disminuye a medida que se acumula el acido lactico. Una disminucion de pH o la presencia de acido lactico puede sentirse como fatiga muscular. Las posibles explicaciones para este fenomeno pueden ser que el pH bajo o la presencia de acido lactico inhibe a las enzimas tales como la fosfofructocinasa que interviene en el mantenimiento del suministro energetico muscular. Algunos articulos relacionan el pH bajo o la presencia de acido lactico y el rendimiento reducido del musculo tal como la fuerza de salida.
Sorprendentemente se ha encontrado, de acuerdo con esta invencion, que la ingesta de hidroxitirosol en forma de extracto de oliva disminuye el contenido de acido lactico en el plasma sanguineo, en el cuerpo y en las celulas musculares.
El extracto de oliva reduce la fatiga muscular y el dolor muscular y la mialgia posejercicio que se relacionan con un alto contenido de lactato en el musculo. Asi, los extractos de oliva que contienen hidroxitirosol pueden usarse para prevenir, o disminuir la fatiga muscular, para prevenir o reducir el dolor muscular asociado al ejercicio y para permitir una recuperacion mas rapida de la fatiga muscular, el dolor muscular o la mialgia posejercicio.
La fatiga muscular, el dolor muscular y la mialgia posejercicio debidos al refuerzo de acido lactico pueden estar presentes despues del ejercicio fisico. Para prevenir el efecto de la disminucion de pH en las celulas musculares, el uso de extractos de oliva que contengan hidroxitirosol da como resultado una salud muscular mejor por la bajada de la fatiga muscular y permite, por lo tanto, un rendimiento muscular mejor. El ultimo efecto es especialmente evidente en el ejercicio fisico o en la practica de deportes a largo plazo, asi, preferiblemente en circunstancias en donde el ejercicio lleva entre media hora y ocho horas, preferiblemente entre media hora y dos horas.
Se observo que preferiblemente el extracto de oliva que contenia hidroxitirosol se tomaba antes del ejercicio o durante el ejercicio. Preferiblemente, el hidroxitirosol se consume por via oral, pero no es una goma de mascar. En una prueba, se consumio el hidroxitirosol en un tiempo entre diez minutos y una hora antes del ejercicio y se observo que el nivel de lactato en el plasma sanguineo disminuia durante el ejercicio y despues del ejercicio comparado con un experimento de referencia en donde se uso un placebo.
Se uso extracto de oliva que contenia hidroxitirosol para disminuir y prevenir los espasmos musculares y para permitir una recuperacion mas rapida de los espasmos musculares. Este espasmo puede resultar de estres fisico (por ejemplo, el ejercicio), estres mental (por ejemplo, estres en el trabajo o por examenes) o de enfermedades relacionadas con el estres como lesion por esfuerzo repetido (RSI, en ingles).
La RSI se refiere a un amplio intervalo de lesiones musculoesqueleticas tales como el sindrome del tunel carpiano, bursitis o tendinitis. Tambien cubre trastornos de las extremidades superiores de origen laboral, lesiones por sobreuso ocupacionales o trastornos traumaticos acumulados. Estas lesiones pueden ocurrir, por ejemplo, en empleados dedicados al uso continuado del teclado de computadora. Otro termino usado, a veces, para estos tipos de lesiones es el trastorno a causa de trabajo repetitivo (RMI, en ingles), un sindrome por uso excesivo asociado a la perdida de funcion en una extremidad resultante del movimiento repetitivo o la carga estatica sostenida.
Ventajosamente, los extractos de oliva que contienen hidroxitirosol pueden usarse para la fabricacion de un nutraceutico, preferiblemente un medicamento para la disminucion del nivel de lactato en el plasma sanguineo, en el musculo o en el cuerpo y/o para prevenir o disminuir la fatiga muscular, el dolor muscular, la mialgia o los espasmos musculares o para recuperarse mas rapido de la fatiga muscular, el dolor muscular, la mialgia o los espasmos musculares posejercicio. Los extractos de oliva de esta invencion son utiles en el caso del rendimiento de un atleta de elite, asi como despues de un ejercicio o el rendimiento de una persona menos entrenada.
Niveles de glutation
La presente invencion tambien se refiere al uso de extractos de oliva que contienen hidroxitirosol para incrementar el nivel de glucation presente en el plasma sanguineo, en el cuerpo y en el musculo durante el ejercicio y despues del ejercicio.
El glutation es un aminoacido tripeptido producido en el higado principalmente a partir de cisteina. Actua como antioxidante celular por inhibicion de la proliferacion de radicales libres. Los antioxidantes actuan de diversas maneras para reducir los efectos de los radicales libres en las celulas musculares. Pueden actuar disminuyendo el dano ocasionado por los radicales libres, haciendo que dejen de formarse en un primer momento, u oxidandolos por combinacion con ellos y neutralizando sus efectos perjudiciales por estabilizacion. La ingesta de antioxidantes puede afectar directamente a los radicales libres en el musculo. El glutation es un antioxidante celular que se ha demostrado que reacciona en los radicales libres en el musculo y que ya esta presente en el cuerpo. Esta presente en su mayoria en forma reducida, glutation (GSH). El ciclo del glutation elimina H2O2 (peroxido de hidrogeno) en una reaccion catalizada por peroxidasa GSH:
2 GSH H2O2 ^ GSSG (forma oxidada) 2 H2O
La ausencia o la funcion reducida de este sistema de defensa hace a la celula muscular vulnerable al estres oxidativo.
El «ejercicio regular», es decir, el que no es tan intenso como el observado en atletas de elite o profesionales puede asociarse a un incremento compensatorio en las defensas celulares frente al dano de los radicales libres. Estas defensas implican varios mecanismos tales como una actividad enzimatica antioxidante aumentada y cambios en las respuestas inmunitarias protectoras. Estas enzimas antioxidantes se sintetizan en el cuerpo e incluyen ciertos tioles, glutation y ubiquinona. Los antioxidantes importantes, que no pueden sintetizarse en el cuerpo, deben tomarse en la dieta. Estos incluyen vitaminas C, E y betacaroteno. Estudios transversales indican que los atletas tienen mayores niveles de enzima antioxidante que los individuos sedentarios. Si esto es verdad, se podria concluir que los individuos fisicamente activos pueden ser, por supuesto, mas resistentes al dano por radicales libres. Los estudios de entrenamiento tambien han confirmado que parece ser una relacion entre distancia de entrenamiento semanal y capacidad antioxidante. Cuanto mas entrenados los individuos, mas probable es que puedan contrarrestar un incremento en radicales libres generado por el ejercicio. El «atleta de fin de semana» que puede hacer ejercicio de
manera intensa solo en ocasiones, debe presentar mas riesgo de dano oxidativo a las celulas. El mensaje clave que tiene que entender un nutricionista es que, puesto que el ejercicio intenso puede agotar la reserva de vitaminas antioxidantes, la densidad de nutrientes y la calidad de la dieta deben dirigirse a proporcionar cantidades adecuadas de estas vitaminas. No se puede asumir que una dieta equilibrada normal siempre vaya a ser adecuada para proporcionar suficientes niveles antioxidantes.
Se ha encontrado que la ingesta de extractos de oliva que contienen hidroxitirosol influye en el sistema del glutation en el plasma sanguineo, en el cuerpo y en el tejido muscular. Incluso mas sorprendentemente, los extractos de oliva que contienen hidroxitirosol regulan hacia arriba el sistema del glutation en el plasma sanguineo, en el cuerpo y en el tejido muscular durante el ejercicio y despues del ejercicio, dando como resultado un incremento del nivel de glutation. El incremento en el nivel de glutation conduce a un incremento del nivel de antioxidante total en el plasma sanguineo y en el musculo. Como una posible consecuencia de esto, se reducira la cantidad de peroxidos presente en el tejido muscular, que conducira a un rendimiento muscular incrementado.
Los extractos de oliva que contienen hidroxitirosol pueden usarse para la fabricacion de un nutraceutico, preferiblemente un medicamento para incrementar el nivel de glutation en el plasma sanguineo, en el musculo o en el cuerpo y/o el rendimiento muscular comparado con el nivel sin el uso de hidroxitirosol.
Formulaciones
Los extractos de oliva que contienen hidroxitirosol pueden usarse en cualquier forma adecuada tal como un alimento 0 una bebida, como alimento para usos nutricionales especiales, como suplemento dietetico, como nutraceutico o incluso en piensos o alimento para mascotas.
El extracto de oliva que contiene hidroxitirosol puede anadirse en cualquier fase durante el tratamiento normal de estos productos. Los productos alimenticios adecuados incluyen, por ejemplo, barras de cereales, articulos de panaderia tales como tartas y galletas y tambien alimentos liquidos tales como sopas y polvos para sopa. Las bebidas adecuadas incluyen bebidas alcoholicas y no alcoholicas, asi como preparaciones liquidas a las que hay que anadir agua potable y alimentos liquidos. Las bebidas no alcoholicas son preferiblemente agua mineral, bebidas para deportistas, bebidas bajas en calorias, zumos de fruta, limonadas, tes y bebidas concentradas tales como inyecciones. Las bebidas para deportistas pueden ser hipotonicas, hipertonicas o isotonicas. Las bebidas para deportistas pueden estar disponibles en forma liquida, como concentrados o como polvo (para disolverse en un liquido, como por ejemplo agua). Los ejemplos de alimentos para usos nutricionales especiales incluyen las categorias de alimento deportivo, alimentos para adelgazamiento, formulas infantiles y alimentos para uso clinico. El termino «suplemento dietetico» como se usa en la presente memoria indica un producto tomado por la boca que contiene un compuesto o una mezcla de compuestos destinados a suplementar la dieta. El compuesto o la mezcla de compuestos en estos productos pueden incluir: vitaminas, minerales, hierbas u otros ingredientes botanicos y aminoacidos. Los suplementos dieteticos pueden ser tambien extractos o concentrados y pueden encontrarse en muchas formas tales como comprimidos, capsulas, geles blandos, capsulas recubiertas de gel, liquidos o polvos. El termino nutraceutico como se usa en la presente memoria indica la utilidad en el campo de aplicacion tanto nutricional como farmaceutico. El nutraceutico puede estar en cualquier forma que sea adecuada para administrar al cuerpo del animal, incluyendo el cuerpo de un ser humano, especialmente en cualquier forma que sea convencional para la administracion oral, por ejemplo, en forma solida tal como (aditivos/suplementos para) alimento o pienso, premezcla para alimento o pienso, comprimidos, pildoras, granulos, caramelos confitados, capsulas y formulaciones efervescentes tales como polvos y comprimidos, o en forma liquida tal como soluciones, emulsiones o suspensiones como, por ejemplo, bebidas, pastas y suspensiones oleosas. Asimismo, puede anadirse un suplemento multivitaminico y mineral a las composiciones nutraceuticas para obtener una cantidad adecuada de un nutriente esencial, que falta en algunas dietas. El suplemento multivitaminico y mineral tambien puede ser util para la prevencion de enfermedades y la proteccion contra perdidas y deficiencias nutricionales debidas al estilo de vida. El nutraceutico puede comprender ademas los aditivos habituales, por ejemplo, edulcorantes, saborizantes, azucar, grasa, emulgentes, conservantes. La nutricion tambien puede comprender otros componentes activos tales como proteinas (hidrolizadas) como se describe, por ejemplo, en la patente internacional WO02/45524. Puede haber tambien otros antioxidantes en la nutricion, por ejemplo, flavonoides, carotenoides, ubiquinonas, rutina, acido lipoico, catalasa, glutation(GSH) y vitaminas, tales como por ejemplo C y E o sus precursores.
El hidroxitirosol esta presente ventajosamente en el extracto de oliva en una cantidad eficaz. Generalmente entre 1 mg y aproximadamente 500 mg de hidroxitirosol en un extracto de oliva es eficaz para que sirva para surtir efecto. Preferiblemente, hay entre 1 mg y 250 mg de hidroxitirosol en el extracto de oliva e incluso se usa mas preferiblemente entre 1 mg y 100 mg en el extracto de oliva.
El nutraceutico que comprende extracto de oliva que contiene hidroxitirosol puede consumirse antes del ejercicio, durante el ejercicio o despues del ejercicio. En el caso en que se use antes del ejercicio, es preferible que se consuma aproximadamente 20 minutos antes. En el caso en que se use despues del ejercicio, es preferible que se consuma dentro de una hora despues, mas preferiblemente inmediatamente despues del ejercicio.
Ademas de productos nutraceuticos adecuados para el consumo de los seres humanos, tambien es posible usar hidroxitirosol en pienso para animales incluyendo alimento para mascotas. Entonces es especialmente adecuado para animales, que se empleen por su fuerza muscular, por ejemplo, caballos (carreras) o perros (es decir, perros para carreras o perros para trineos).
Los siguientes ejemplos no limitantes se presentan para ilustrar mejor la invencion.
Ejemplo 1
Sujetos
Se reclutaron para el presente estudio ocho voluntarios macho sanos sin historial de participacion en ningun programa de ejercicio regular. Las caracteristicas de los sujetos se muestran en la tabla 1, a continuacion. Se informo por adelantado a todos los sujetos sobre la naturaleza y los posibles riesgos de los procedimientos experimentales antes de que se obtuviera su consentimiento informado por escrito. Este estudio estaba homologado por el Comite de Revision de Etica Medica del Academic Hospital Maastricht, Paises Bajos.
Estandarizacion de la dieta y actividad previa al ensayo
Se instruyeron a los individuos para que no consumieran olivas, aceite de oliva, productos de la oliva, zumos de fruta, zumos vegetales, vino, mas de dos tazas de te, mas de una pieza de fruta, mas de dos cucharadas de servir de verduras, chocolate y suplementos que contuvieran antioxidantes durante tres dias previos al ensayo y el propio dia del ensayo. Los voluntarios consumieron una dieta estandar (baja en antioxidantes) la noche antes del dia del ensayo. Se pidio a los individuos que registraran su ingesta de alimento durante todo el periodo de ensayo. Se instruyeron a todos los individuos para que evitaran cualquier tipo de ejercicio fisico pesado durante todo el periodo excepto para la sesion de ejercicios de resistencia.
Estudios
Se estudiaron todos los individuos en dos ocasiones diferentes. Por un diseno cruzado aleatorizado a los sujetos se les administro o extracto de oliva o placebo. Se tomaron bebidas dos veces, la noche antes del ensayo (8:00 p. m.) y 30 minutos antes del comienzo del ejercicio (figura 1). El extracto de oliva (DSM Food Specialties, Delft, Paises Bajos) contenia 200 mg de hidroxitirosol. El placebo era similar en sabor y color.
Ejercicio de resistencia
En el presente estudio se uso el mismo protocolo de ejercicio que el descrito por Koopman et al. 2005 Eur. J. Appl. Physiol. 94:180-187. Los sujetos llegaron al laboratorio a las 8:00 a. m., en un estado de ayuno durante la noche. Los sujetos llevaron a cabo un calentamiento general de 5 min usando un aparato escalador Stairmaster (Jimsa Benelux BV, Rotterdam, Paises Bajos). Despues, la sesion de ejercicios de resistencia se oriento a las extremidades inferiores, con ocho series de diez repeticiones en la prensa horizontal para extremidades inferiores (Technogym BV, Rotterdam, Paises Bajos) y ocho series de diez repeticiones en la maquina de extension para extremidades inferiores (Technogym). Se realizaron los dos ejercicios en el 75 % de 1RM (funcion recuperar memoria) individual de los sujetos con intervalos de descanso de dos minutos entre series y requiriendose en total para completarlos aproximadamente 40 minutos. Se animo verbalmente a todos los sujetos durante el ensayo para completar el protocolo entero. No se midio el gasto energetico durante la sesion de ejercicio. Basandose en mediciones indirectas de calorimetria durante protocolos similares de ejercicio de resistencia, otras habian mostrado unas tasas de gasto energetico variando entre 14 kJ min-1 y 27 kJ min-1 (Ballor et al. Am. J. Clin. Nutr. (1988) 47: 19-25 and Burleson et al. Med. Sci. Sports Exerc. (1998) 30:518-522).
Muestreo de sangre
Se recogio sangre antes del comienzo del ejercicio, durante el ejercicio y hasta dos horas y media despues del ejercicio (figura 1). Se recogieron muestras de sangre en tubos que contenian heparina y se pusieron en hielo. Despues de centrifugacion a 1000 g y 4 °C durante cinco minutos, se almacenaron alicuotas de plasma a -80 °C hasta el analisis.
Los analisis de sangre se dirigieron a marcadores de dano e inflamacion y el nivel de antioxidantes. Los marcadores del dano fueron malondialdehido y carbonilos de proteina y los marcadores de la inflamacion fueron NF-Kp, IL-6, IL-10 y TNFa (despues de la estimulacion de la sangre con LPS). Se midieron varios niveles de antioxidantes: capacidad antioxidante equivalente de Trolox (TEAC, por sus siglas en ingles), acido urico, vitamina E, vitamina C, glucation (GSH y GSSG), superoxido dismutasa, glucation peroxidasa e hidroxitirosol. Adicionalmente, se determinaron los niveles de lactato en plasma.
Biopsias de musculo
Se tomaron muestras de biopsias de los musculos 30 minutos antes del comienzo del ejercicio y 30 minutos despues del ejercicio. Se tomo la segunda biopsia de musculo de la extremidad inferior contralateral. Se obtuvieron biopsias de musculo de la region media del musculo vasto lateral (15 cm por encima de la rotula) y aproximadamente 3 cm por debajo de la entrada por la fascia usando la tecnica de la biopsia percutanea con aguja (Bergstrom 1975, Scand. J. Clin. Lab. Invest. 35: 518-522). Se diseccionaron cuidadosamente las muestras de musculo, se liberaron de todo material no muscular visible y se congelaron rapidamente en nitrogeno liquido. Una parte pequena de la biopsia de musculo se embebio en Tissue-Tek (Sakura Finetek, Zoeterwoude, Paises Bajos) y se congelo rapidamente en isopentano enfriado con nitrogeno liquido. Las biopsias de musculo se almacenaron a -80 °C hasta el analisis.
Los siguientes parametros se midieron en las biopsias de musculo: glutation (GSH y GSSG), acido urico, superoxido dismutasa, glutation reductasa y glutation S-transferasa (Gosker et al. 2005, Respir. Med. 99(1 ):118-125).
Recogida de orina
Se recogio la orina de la manana el dia del ensayo y el dia despues del dia del ensayo. Las alicuotas de orina se congelaron a -80 °C hasta el analisis de 8-isoprostanos y creatinina.
Estadistica
Todos los datos se expresan como medias ± SEM. Se usaron ensayos t pareados para comparar las diferencias entre suplemento previo con extracto de oliva y placebo. El significado estadistico se fijo para P < 0,05.
Tabla 1. Caracteristicas de los sujetos
Media ± SEM
Edad (anos) 22,0 ± 1,9
Peso (kg) 75,4 ± 3,3
Altura (m) 1,82 ± 0,02
IMC (indice de masa corporal) (kgm-2) 22,7 ± 0,8
Prensa extremidades inferiores 1RM (kg) 197 ± 10
Extension extremidades inferiores 1 RM (kg) 117 ± 6
Ejemplo 2
Acumulacion de lactato
Se produjo lactato por produccion de energia anaerobica en el musculo. El lactato se acumula en el musculo y la sangre durante el ejercicio intenso, que disminuye el rendimiento del ejercicio. Se demostro en nuestro estudio que la concentracion de lactato en plasma se incrementa considerablemente durante el ejercicio (figura 2). La concentracion de lactato en plasma subio 14,8 veces durante el ejercicio, cuando se midio a los 30 y a los 60 minutos despues del comienzo del ejercicio, respectivamente. Despues de la ingesta de hidroxitirosol, la concentracion de lactato en plasma se incremento solo 12,8 veces durante el ejercicio (figura 2). El hidroxitirosol disminuyo la concentracion maxima en plasma de lactato durante el ejercicio (figura 2).
Ejemplo 3
Sistema del glutation en el musculo
El glutation un elemento importante en la red antioxidante. El glutation esta presente mayoritariamente en su forma reducida (GSH). La enzima glutation reductasa puede convertir el glutation oxidado (GSSG) en GSH.
El hidroxitirosol aumenta el sistema antioxidante del glutation en el musculo, es decir, el hidroxitirosol ayuda a mantener la funcion optima del musculo y a proteger el musculo de danos a partir de ejercicio exhaustivo por incremento en los niveles de GSH, que conducen de ese modo una mayor relacion GSH/GSSG.
La concentracion de GSH en el musculo despues del ejercicio se incremento en individuos a los que se administro hidroxitirosol, comparado con aquellos a los que se administro placebo (figuras 3 y 4). La concentracion de GSSG en el musculo se incremento menos en el grupo de hidroxitirosol, comparado con el grupo de placebo (figura 3). El hidroxitirosol incremento la actividad de la enzima glutation reductasa despues del ejercicio (figuras 3 y 4). La actividad de la glutation reductasa se incremento menos despues de la ingesta de placebo.
Claims (8)
1. Uso de un extracto de oliva que contiene hidroxitirosol para disminuir en seres humanos sanos la cantidad de acido lactico acumulada en el plasma sanguineo, en el cuerpo y en las celulas musculares durante el ejercicio.
2. El uso segun la reivindicacion 1, en donde la cantidad de hidroxitirosol en el extracto de oliva esta entre 1 mg y 250 mg y preferiblemente entre 1 mg y 100 mg.
3. El uso segun la reivindicacion 1 o 2, caracterizado por que el extracto de oliva esta comprendido en una composicion nutraceutica.
4. El uso segun la reivindicacion 3, caracterizado por que el extracto de oliva se consume aproximadamente 20 minutos antes del ejercicio.
5. Uso de un extracto de oliva que contiene hidroxitirosol para incrementar en seres humanos sanos los niveles de glutation en los musculos asociados al ejercicio.
6. El uso segun la reivindicacion 5, en donde la cantidad de hidroxitirosol en el extracto de oliva esta entre 1 mg y 250 mg y preferiblemente entre 1 mg y 100 mg.
7. El uso segun la reivindicacion 5 o 6, caracterizado por que el extracto de oliva esta comprendido en una composicion nutraceutica.
8. El uso segun la reivindicacion 7, caracterizado por que el extracto de oliva se consume aproximadamente 20 minutos antes del ejercicio.
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