JP2008500810A - 魚製品の鮮度評価方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本特許出願は、2004年3月12日に受理された仮出願60/552,778、及び2004年3月15日に受理された仮出願60/553,059の優先権を主張し、その開示内容全体が、ここで、参照により明示的に組み入れられる。
魚産物から少量のサンプルを切断し、
細胞浸透性の色素及び細胞不透性の蛍光色素のうちの少なくとも一方を有する有効量の着色試薬を前記サンプルに加え、
前記着色試薬が加えられた前記サンプルを予め定められた時間インキュベートし、
以下のパラメータ、前記インキュベートされたサンプルから放出される第1の蛍光の彩度、前記インキュベートされたサンプルから放出される第2の蛍光の彩度、前記サンプルの上部から開始して前記サンプルの前記第1の蛍光が検出される最も離れた点までの第1の距離、及び前記サンプルの上部から開始して前記サンプルの前記第2の蛍光が検出される最も離れた点までの第2の距離のうちの少なくとも1つに基づいて、前記魚産物の鮮度を判定する、魚産物の鮮度評価方法を提供する。
サーモンフィレ
良好な条件で冷凍された2包装のサーモンフィレが、裂かれて8つの部分にされる。それぞれの部分は、約60gであり、なお冷凍されている。4つの部分は、1℃(±0.5℃)の連続した温度の冷室に配置され、他の4つの部分は、4℃に保持された基準の実験室冷蔵庫に配置される。すべてのこれらの部分は、採取されないときには、酸化及び脱水素化を防止するために、再度密閉可能な袋に、保存される。
サーモンフィレのサンプルは、毎日収集され、変化を観測される。正確な測定のために、一定のサンプルの寸法が、重要である。サンプリングのための器具が、魚からサンプルをくり抜くために作成される。本実験に使用される器具は、4.8mmの外形、2.1mmの内径、及び90mmの長さを有する透明のLexan(登録商標)(ポリカーボネート樹脂)筒である。筒の一端は、傾斜されて切断面を形成する(図1参照)。魚産物の身内部に挿入されると、身の一部が、筒の底部開口に押し込まれる。そして、滑らかに捩って持ち上げることにより、サンプルが除去されて筒内に残存する。2mmの外径を有するアプリケータが、サンプルを滑らかに抜き取っていかなる空気空間も除去するために使用可能である。好ましくは、筒は、食品安全の水準を有するように構成され、光学的に透明である。また、他のアクリルまたはポリカーボネート材料も、好適であり得る。このため、そのような器具により得られるサンプルは、概略2.1mm×約5乃至25mmの寸法を有する。この採取は、
・小さい、再現可能なサンプル寸法
・基準サンプル寸法
・清浄な標識付け容器
・高価でなく、廃棄可能で、毒性のない器具
・破壊不能
・筒を通して見ることが可能なサンプル
を含むいくつかの利点を与える。
小容量の着色溶液は、筒の上部開口に加えられ、適切な時間、例えば約10分の間、インキュベートされることができる。典型的には、着色溶液の容量は、1μLから1mLまでの範囲に存し得る。インキュベートされる時間は、1分から1時間の範囲に存し得る。
・簡略性
試薬は同時にサンプルに加えられ、次にサンプルは、引き続く融解中、または融解時点に、3乃至10分間保温される。いかなる洗浄工程も、分析前に必要とはされない。
・特定性及び信頼性
緑色蛍光細胞は活性であり、赤色細胞は不活性である。
・多用途性
生育性/細胞障害分析は、星状細胞のような着性細胞、非着性細胞、及び一定の組織と適合可能である。結果物は、標準のフルオレセイン ロングパスフィルタセットを用いた蛍光顕微鏡技術、及び流体細胞測定または蛍光測定により、分析可能である。2つのプローブの蛍光放射は、容易に分解されて識別可能である。単一または多波長のLEDは、360−520nmからの励起光の範囲を提供するために、使用可能である。他の照明源は、蛍光管、混合ガス管、手に保持されるUV源、投射ランプ、及びレーザを含む。
・単純な計量性
各細胞の測定は、2つの標本群のみを生成し、共着色される細胞は、殆ど存在しない。組織は、「中間」段階の着色に関する混合された標本群を有することが可能である。
反射蛍光像は、保存時間及び温度の結果として着色パターンに発生するいかなる変化も書類に取られることができる。
活性/不活性蛍光分析
着色溶液は、5.0μMカルセインAM及び10.0μMEthD−1ホモダイマを含有する。着色溶液は、Molecular Probesの活性/不活性生育性/細胞障害キット(L3224)から調製される。着色溶液の約10乃至30μLが、サンプル(2.1mm×約2乃至10mm)の上部に加えられる。サンプルの鮮度は、概略5乃至10分インキュベートされた後、蛍光放射の赤及び緑の色変化の比に基づいて、判定可能である。蛍光像は、490±40nmの波長でサンプルを励起して525±20nmで収集されることにより取得される。
概略10乃至30μLトリパン青着色試薬(0.5%w/v)が、サンプル(2.1mm×2〜10mm)の上部へ加えられる。トリパン青色素のサンプルへの浸透深さが測定される。インキュベートする時間は、10分である。サンプルは、1℃で保存されており、室温で標識される。透過/反射光が、サンプルを観察するために使用される。
Claims (29)
- 魚産物から少量のサンプルを切断し、
細胞浸透性の色素及び細胞不透性の色素のうちの少なくとも一方を含む有効量の着色試薬を前記サンプルへ加え、前記細胞浸透性の色素は、細胞間エステラーゼ活性の存在時、第1の蛍光を発する複合物質に転化し、前記細胞不透性の色素は、損傷された細胞膜に浸透して第2の蛍光を発することが可能であり、前記第1の蛍光及び前記第2の蛍光は、前記指示薬が前記細胞浸透性の色素と前記細胞不透性の色素の両方を含む場合、互いに識別可能であり、
前記着色試薬が加えられた前記サンプルを予め定められた時間インキュベートし、
前記インキュベートされたサンプルから放出される第1の蛍光の彩度、前記インキュベートされたサンプルから放出される第2の蛍光の彩度、前記サンプルの上部から開始して前記サンプルの前記第1の蛍光が検出される最も離れた点までの第1の距離、及び前記サンプルの上部から開始して前記サンプルの前記第2の蛍光が検出される最も離れた点までの第2の距離から構成されるグループから選択される少なくとも1つのパラメータに基づいて、前記魚産物の鮮度を判定する、
ことを備える魚産物の評価方法。 - 前記判定ステップは、前記少なくとも1つのパラメータを前記鮮度と前記少なくとも1つのパラメータの間の先に成立している関係と照合することにより実行される、請求項1に記載の方法。
- 前記第1の蛍光及び前記第2の蛍光の前記彩度が、デジタル装置により定量され、前記先に成立している関係は、前記第1の蛍光及び前記第2の蛍光の前記定量した彩度に基づいて定められる、請求項3に記載の方法。
- 前記第1の蛍光及び前記第2の蛍光の前記彩度は、光学装置により画像で記録され、前記鮮度と前記第1の蛍光及び前記第2の蛍光の前記彩度の間の前記先に成立している関係は、基準色チャートにおいて表示される、請求項3に記載の方法。
- 前記着色試薬は、前記細胞浸透性の色素と前記細胞不透性の色素の両方を含む、請求項1に記載の方法。
- 魚産物の前記鮮度の判定は、前記第1の蛍光及び前記第2の蛍光の前記彩度の比を基準にされる、請求項5に記載の方法。
- 魚産物の前記鮮度の判定は、前記第1の距離と前記第2の距離の比を基準にされる、請求項5に記載の方法。
- 前記細胞浸透性の色素がカルセインAMであり、前記細胞不透性の色素がEthD−1ホモダイマ−1であり、従って、前記第1の蛍光が緑色であり、前記第2の蛍光が赤色である、請求項5に記載の方法。
- 前記細胞浸透性の色素がC12−レザズリンであり、前記細胞不透性の色素がSytox(登録商標)緑色色素であり、従って、前記第1の蛍光が赤色であり、前記第2の蛍光が緑色である、請求項5に記載の方法。
- 前記細胞浸透性の色素は、カルセインAM、C12−レザズリンから構成されるグループから選択され、前記細胞不透性の色素は、EthD−1ホモダイマ、YoYo−1、Sytox(登録商標)緑色色素が存するグループから選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記着色試薬は、前記着色試薬が細胞浸透性の色素を含むとき、さらに、トリパン青色素を含む、ことを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 魚産物から少量のサンプルを切断し、
有効量のカルセインAMと有効量のEthD−1ホモダイマを有する着色試薬を前記サンプルに加え、
前記着色試薬が加えられた前記サンプルを予め定められた時間インキュベートし、
前記インキュベートされたサンプルから放出される緑色蛍光の彩度、前記サンプルの上部から開始して前記サンプルの前記緑色蛍光が検出される最も離れた点までの第1の距離の少なくとも1つと、前記インキュベートされたサンプルから放出される赤色蛍光の彩度、前記サンプルの上部から開始して前記サンプルの前記赤色蛍光が検出される最も離れた点までの第2の距離の少なくとも1つとに基づいて、前記魚産物の鮮度を判定する、
ことを備える魚産物の鮮度評価方法。 - 前記鮮度の判定は、前記緑色蛍光及び前記赤色蛍光の前記彩度の比を基準にされる、請求項12に記載の方法。
- 前記鮮度の判定は、前記第1の距離と前記第2の距離の比を基準にされる、請求項12に記載の方法。
- 前記鮮度の判定は、前記緑色蛍光及び前記赤色蛍光の前記彩度を前記鮮度と前記緑色蛍光及び前記赤色蛍光の前記彩度の先に成立している関係と照合することにより実行される、請求項12に記載の方法。
- 前記緑色蛍光及び前記赤色蛍光の前記彩度は、デジタル装置により定量され、前記先に成立している関係は、前記緑色蛍光及び前記赤色蛍光の前記定量した彩度に基づいて定められる、請求項15に記載の方法。
- 前記緑色蛍光及び前記赤色蛍光の前記彩度は、光学装置により画像で記録され、前記鮮度と前記緑色蛍光及び前記赤色蛍光の前記彩度の間の前記先に成立している関係は、基準色チャートにおいて表示される、請求項15に記載の方法。
- 前記着色試薬は、0.1−50μMのカルセインAMを含む、請求項12に記載の方法。
- 前記着色試薬は、0.1−100μMのEthD−1ホモダイマを含む、請求項12に記載の方法。
- 前記着色試薬の前記量は、概略1μL乃至1mLである、請求項12に記載の方法。
- 前記インキュベートするステップの前記予め定められた時間は、概略1乃至45分である、請求項12に記載の方法。
- 前記インキュベートするステップの前記予め定められた時間は、概略5乃至10分であり、前記保温ステップは、室温で実行される、請求項12に記載の方法。
- 前記魚産物は、サーモン、ニジマス、ドーバーソール、及びカラスガレイから構成されるグループから選択される、ことを特徴とする請求項12に記載の方法。
- 魚産物から少量のサンプルを切断し、
有効量のトリパン青色素を含む着色試薬を前記サンプルに加え、
前記着色剤が加えられた前記サンプルを予め定められた時間インキュベートし、
前記インキュベートされたサンプルの上部から開始して前記青色の蛍光が検出される前記インキュベートされたサンプルの最も離れた点までの浸透距離に基づいて、前記魚産物の鮮度を判定する、
ことを備える魚産物の鮮度評価方法。 - 前記鮮度の前記判定は、前記浸透距離を前記鮮度と前記浸透距離の間の先に成立している関係と照合することにより、実行される、ことを特徴とする請求項24に記載の方法。
- 前記着色試薬は、0.1−10ミリモルの前記トリパン青色素を含む、請求項24に記載の方法。
- 前記着色試薬の前記量は、1μL乃至1mLである、請求項24に記載の方法。
- 前記インキュベーションするステップの前記予め定められた期間の時間は、概略2分までからまたは45分である、請求項24に記載の方法。
- 前記インキュベーションするステップの前記予め定められた期間の時間は、概略10乃至30分であり、前記保温は室温で実行される、請求項24に記載の方法。
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