JP2008273860A - 柚子果皮に由来するNF−κB/Th2亢進抑制剤およびその用途 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】柚子果皮から調製された疎水性画分を有効成分とする、NF-κB亢進およびTh2亢進の少なくとも一方の亢進を抑制するために用いられる、NF-κB/Th2亢進抑制剤を提供する。当該疎水性画分は、下記の特性を有するものである:
−シリカゲル薄層クロマトグラフィーにおいて、展開液としてアセトニトリルを用いて展開した場合のRf値が1である。
【選択図】なし
Description
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(I-1)柚子果皮から調製された疎水性画分を有効成分とする、NF-κB亢進およびTh2亢進の少なくとも一方の亢進を抑制するために用いられる、NF-κB/Th2亢進抑制剤。
(I-2)前記疎水性画分が下記の特性を有するものである、(I-1)に記載するNF-κB/Th2亢進抑制剤:
−シリカゲル薄層クロマトグラフィーにおいて、展開液としてアセトニトリルを用いて展開した場合のRf値が1である。
(I-3)前記疎水性画分が、柚子果皮の有機溶媒抽出物をシリカゲルに吸着させた場合に、当該シリカゲルからアセトニトリルによって脱離回収される画分である、(I-1)または(I-2)に記載するNF-κB/Th2亢進抑制剤。
(I-4)前記疎水性画分が、下記の工程を経て柚子果皮から調製されるものである、(I-1)乃至(I-3)のいずれかに記載するNF-κB/Th2亢進抑制剤:
(a) 柚子果皮を低級アルコールまたは含水低級アルコールで抽出し、溶媒を留去する、
(b) 溶媒留去した柚子果皮抽出物を低級アルコールに溶解し、これをアセトニトリルに懸濁したシリカゲルと混合した後、溶媒を留去する、
(c) 溶媒留去したシリカゲルを、アセトニトリルを移動相とする順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して、アセトニトリルを通液して溶出画分を回収する。
(II-1)(I-1)乃至(I-4)のいずれかに記載するNF-κB/Th2亢進抑制剤を有効成分とする医薬品組成物、食品組成物、化粧品組成物または飼料組成物。
(II-2)NF-κB亢進またはTh2亢進によって誘発される病態または疾病の予防または改善に用いられる、(II-1)に記載する医薬品組成物、食品組成物、化粧品組成物または飼料組成物。
(II-3)NF-κB亢進またはTh2亢進によって誘発される病態または疾病がアレルギー疾患である、(II-2)に記載する医薬品組成物、食品組成物、化粧品組成物または飼料組成物。
(II-4)NF-κBの亢進によって誘発される病態または疾病が悪性腫瘍である、(II-3)に記載する医薬品組成物、食品組成物、化粧品組成物または飼料組成物。
(II-5)(II-1)乃至(II-4)のいずれかに記載する食品組成物であって、固形または液状の製剤形態を有することを特徴とする食品。
(II-6)固形または液状の製剤形態を有する食品添加剤である、(II-5)記載の食品。
(III-1)下記の工程を有する、(I-1)乃至(I-4)のいずれかに記載するNF-κB/Th2亢進抑制剤の有効成分を調製する方法:
(a) 柚子果皮を低級アルコールまたは含水低級アルコールで抽出し、溶媒を留去する、
(b) 溶媒留去した抽出物を低級アルコールに溶解し、これをアセトニトリルに懸濁した疎水性シリカゲルと混合した後、溶媒を留去する、
(c) 溶媒留去したシリカゲルを、アセトニトリルを移動相とする順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供する。
(d) アセトニトリルを通液して溶出する画分を、NF-κB/Th2亢進抑制剤の有効成分として回収する。
本発明が対象とするNF-κB/Th2亢進抑制剤は、前述するようにNF-κB亢進抑制作用およびTh2亢進抑制作用を有するものであって、そのNF-κB亢進抑制作用を利用して専らNF-κBの亢進を抑制する目的で使用されるもの(NF-κB亢進抑制剤)、そのTh2亢進抑制作用を利用して専らTh2の亢進を抑制する目的で使用されるもの(Th2亢進抑制剤)、およびNF-κB亢進抑制作用とTh2亢進抑制作用を利用して、NF-κBとTh2の亢進を同時に抑制する目的で使用されるもの(NF-κB及びTh2亢進抑制剤)が含まれる。
(a) 柚子果皮を低級アルコールまたは含水低級アルコールで抽出し、溶媒を留去する(抽出工程)、
(b) 溶媒留去した柚子果皮抽出物をアセトニトリルに懸濁したシリカゲルと混合した後、溶媒を留去する(シリカゲル吸着工程)、
(c) 溶媒留去したシリカゲルを、アセトニトリルを移動相とする順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して、アセトニトリルを通液して溶出画分を回収する(分画回収工程)。
抽出工程は、柚子果皮から疎水性成分を抽出する工程である。抽出する対象の柚子果皮は、生のまま破砕、粉砕または圧搾されていてもよく、またそのまま又は破砕、粉砕または圧搾された状態で乾燥処理されたものであってもよい。抽出には、低級アルコールまたは水を含む低級アルコール(含水低級アルコール)が好適に使用される。低級アルコールとしては、通常、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノールおよびペンタノールなどの炭素数1〜6、好ましくは炭素数1〜4の低級アルコールを挙げることができるが、好ましくはエタノールである。含水低級アルコールを使用する場合、そのアルコール濃度として好ましくは80〜99.9%、より好ましくは90〜99.9%、特に好ましくは95〜99.9%である。
本工程は、上記で調製した柚子果皮抽出物をシリカゲルに吸着担持させる工程である。ここでシリカゲルとしては、平均比表面積530m2/g、平均細孔容積0.72mL/g、平均細孔径550nmの物性を持つものを使用することができる。
本工程は、柚子果皮抽出物を吸着させたシリカゲルから、柚子果皮抽出物の疎水性成分を分画回収する工程である。
(II-1) 抗悪性腫瘍を目的とした用途
前述の通り、本発明のNF-κB/Th2亢進抑制剤は、そのNF-κB亢進抑制作用に基づいて、当該NF-κBの亢進によって誘発される悪性腫瘍の発生を防止する作用を有している。このため、本発明のNF-κB/Th2亢進抑制剤は、抗悪性腫瘍を目的とした用途、具体的には抗悪性腫瘍剤、特に悪性腫瘍の発症の予防若しくは改善を目的とした医薬品、食品、化粧品または飼料の有効成分として使用することができる。従って、本発明は、上記NF-κB/Th2亢進抑制剤を有効成分として含有する、悪性腫瘍の発症の予防若しくは改善を目的または効果とする医薬品組成物、食品組成物、化粧品組成物、または飼料組成物に関する。なお、ここでいう悪性腫瘍の発症の予防には、悪性腫瘍の再発が含まれる。
また、本発明のNF-κB/Th2亢進抑制剤は、そのNF-κB亢進作用に基づいて、当該NF-κBの亢進によって誘発される遅延型アレルギー反応の発生を防止する作用を有している。また本発明のNF-κB/Th2亢進抑制剤は、そのTh2亢進作用に基づいて、Th2免疫細胞の亢進およびそれに伴って生じる好酸球、炎症性サイトカイン(IL-5、IL-13、IL-4)およびIgE抗体の産生によって誘発されるI型アレルギー反応、またはTh2免疫細胞の亢進が関与するII型アレルギー反応やIII型アレルギー反応の発生を防止する作用を有している。
本発明が対象とする上記の医薬組成物は、経口投与または非経口投与〔皮下投与、経皮投与、経肺投与、経粘膜投与(点鼻など)、直腸投与など〕の形態の別を問わない。
本発明が対象とする食品組成物には、上記の本発明のNF-κB/Th2亢進抑制剤を飲食物の製造原料の一つとして配合することによって調製されるものが含まれる。
本発明が対象とする化粧品組成物には、上記の本発明のNF-κB/Th2亢進抑制剤を各種化粧品の製造原料の一つとして配合することによって調製されるものが含まれる。具体的な化粧品の例としては、ローション(ボディーローションを含む)、乳液(ボディー乳液を含む)、クレンジングクリーム、マッサージクリーム、ナイトクリーム、パックなどの基礎化粧料;日焼け止めクリームなどのクリーム;ファンデーション、おしろい、口紅、ほほ紅、アイシャドーなどのメークアップ化粧料;石けん、洗顔料、液体石けん、入浴剤などを挙げることができる。
本発明が対象とする飼料組成物には、上記の本発明のNF-κB/Th2亢進抑制剤を各種飼料の製造原料の一つとして配合することによって調製されるものが含まれる。また本発明が対象とする飼料には、上記NF-κB/Th2亢進抑制剤をそのまま又は飼料に使用可能な担体や添加剤とともに、顆粒剤、粉末剤、錠剤、丸剤、カプセル剤(硬カプセル剤および軟カプセル剤が含まれる)、およびドライシロップ剤などの固形製剤;または液剤、ドリンク剤(溶液、乳化液または懸濁液)、およびシロップなどの液状製剤の形態に調製した飼料添加剤やサプリメントが含まれる。対象とする動物の種類は特に制限されず、家畜やペットを始め、各種の実験動物(ウサギ、ラット、マウス、犬、サルなど)を挙げることができる。
(1-1) 柚子果皮抽出物の調製
黄化完熟した柚子(2005年12月上旬収穫)の果皮を使用した。果皮は、果汁を搾り取った後、冬期天日干しで十分に乾燥させ、黒色に変化したものをソックスレー固液連続抽出装置でエタノール(99.9%)抽出した。次いで、抽出したエタノール溶液を減圧下で濃縮し、残ったエタノールを大気圧下で留去した。柑橘臭を持つ水飴状の褐色液体を柚子果皮抽出物として下記の実験で使用した。
上記で調製した柚子果皮抽出物(水飴状の褐色液体)5gをメタノール5mLに溶解し、任意量のアセトニトリルで懸濁したシリカゲル20g(フジシリシア社、BW-300SP)を加えた。この懸濁液を良く撹拌し、メタノールとアセトニトリル媒体を加熱留去することにより、柚子果皮抽出物が吸着したシリカゲル粉末を得た。
黄化完熟したカボス(2005年12月上旬収穫)の果皮を使用する以外は、上記柚子の果皮と同様に処理して、柑橘臭を持つ水飴状の褐色液体を調製した。これをカボス果皮抽出物として下記の実験で使用した。
完熟したグレープフルーツ(赤)(2005年米国産)の果皮を使用する以外は、上記柚子の果皮と同様に処理して、柑橘臭を持つ水飴状の褐色液体を調製した。これをグレープフルーツ(赤)果皮抽出物として下記の実験で使用した。
完熟したグレープフルーツ(白)(2005年米国産)の果皮を使用する以外は、上記柚子の果皮と同様に処理して、柑橘臭を持つ水飴状の褐色液体を調製した。これをグレープフルーツ(白)果皮抽出物として下記の実験で使用した。
NF-κBはすべての細胞に存在し、免疫機能を司るタンパク質である。生体内では、このNF-κBが適切に機能することで、正常な免疫応答が働き、またストレスから細胞の死滅が防止されている。しかし、その活性が異常に高まると、ヒトを含むすべての哺乳類において腫瘍発生やアレルギー反応が誘発され、悪性腫瘍、花粉症やアトピー症状を発症することになる。このため、NF-κBの異常な活性(NF-κB亢進)を抑制しコントロールすることは、抗悪性腫瘍ならびに遅延型アレルギーの抑制につながる。
(1-1)細胞の調製
ヒト胎児腎由来細胞HEK293 (以後、「293細胞」という)は、15% FBS、2mM L-グルタミン、Penicillin-Streptomycin(PC/SM)添加Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM、GIBCO)で培養(37℃、5%CO2)維持した。
(a)ほぼコンフルエントに293細胞が増殖した継代培養フラスコからDMEM培地を吸引除去し、PBS 5mLで1回洗浄する。
(b)トリプシンおよび1mM EDTAを含有するPBS 3mLにて、フラスコ底部に付着している293細胞を浮遊化させ、ピペットで懸濁させた後、15%FBS、L-グルタミン、PC/SM添加DMEMを20mL加え、また細胞を懸濁する。
(c)12ウェルのプレートの各ウェルに、0.6mLずつ細胞懸濁培養液を移し(5x104/well)、60〜80%コンフルエントになるまで培養(約一晩)したプレートを遺伝子導入実験 (トランスフェクション)に使用する。
NF-κB結合配列を有し、NF-κB依存的にホタルルシフェラーゼの転写・翻訳を誘導するベクター NF-κB-luc(Dr. M. Lienhard Schmitz. Department of Immunochemistry, German Cancer Research Center, Im Neuenheimer Feld 280, 69120 Heidelberg, Germany.より入手)をNF-κB活性化を測定するためのリポータープラスミドとして、また、ラウス肉腫ウイルス(RSV)プロモーター依存的にβガラクトシダーゼを発現するRSV-βgal(Dr. Kuan The Jeang, Molecular Virology Section, Laboratory of Molecular Microbiology, NIAID, the National Institutes of Health, Bethesda, Maryland 20892, USA.より入手)をトランスフェクションモニターとして、それぞれ使用した。さらにTax投与実験系においては、HTLV-1 LTR依存的にTaxタンパク質を発現するベクターHpXを用いた(Iha, H., Kibler, K.V., Yedavalli, V.R., Peloponese, J.M., Haller, K., Miyazato, A., Kasai, T., Jeang, K.T. (2003) Segregation of NF-κB activation through NEMO/IKKγ by Tax and TNF-α: implications for stimulus-specific interruption of oncogenic signaling. Oncogene 22(55), 8912-8923)。
Tax投与実験系では、(1-1)で調製したトランスフェクション実験用細胞に、NF-κB-luc(0.1μg)、pRSV-βgal(0.1μg)、ベクターHpXおよびpcDNA3(Invitrogen) (0.5μg)を、またTNF-α投与実験系では、(1-1)で調製したトランスフェクション実験用細胞に、NF-κB-luc(0.1μg)、pRSV-βgal(0.1μg)、およびpcDNA3(Invitrogen) (0.5μg)を、それぞれ導入(トランスフェクション)した。
96ウェルプレートの各ウェルに細胞溶解液を5μLずつ分注し、直ちにルシフェラーゼアッセイ用基質Luciferase Assay Substrate (Promega)50μLまたはβ-ガラクトシダーゼアッセイ用基質Galacto-Star(登録商標): Galacto-Star(登録商標)Reaction Buffer Diluent(Applied Biosystems) 1:50混合液基質を自動分注し、蛍光強度を測定するルミノメーター(GloMax(商標)96 Microplate Luminometer、Promega)で解析した。
NF-κB活性(%)は、最低3回の同一実験から得られたルシフェラーゼアッセイ測定値をβ-ガラクトシダーゼアッセイ測定値で割り標準化した後、平均値±SDで示した。トランスフェクション操作から24時間後にコントロール用にPBSを加えた細胞のルシフェラーゼ値及びβ-ガラクトシダーゼ値を常に基準値(100%)とし、それに対する相対値から各細胞のNF-κB活性を算出した。
各被験試料について、Taxで誘発したNF-κB亢進に対する抑制効果(図A)、およびTNF-αで誘発したNF-κB亢進に対する抑制効果(図B)を調べた結果を図4に示す。
実験例1のTax誘発実験系を用いて、柚子果皮抽出物、ならびに、同様に柑橘類である、カボス果皮抽出物、グレープフルーツ(赤)果皮抽出物、およびグレープフルーツ(白)果皮抽出物について、同様にしてTax誘発性NF-κB亢進に対する抑制効果を調べた。
被験試料として、柚子果皮抽出物、カボス果皮抽出物、グレープフルーツ(赤)果皮抽出物、およびグレープフルーツ(白)果皮抽出物を用いる以外は、実験例1のTax誘発実験系に従って同様に実験を行った。
結果を図5に示す。図からわかるように、Taxによって過剰活性化されたNF-κBが、柚子果皮抽出物1mgを投与することによって約37%にまで抑制された。また、柚子果皮抽出物の投与量を増加することに伴って、NF-κB亢進に対する抑制効果(言い換えれば、抗悪性腫瘍効果)が高まる、すなわち濃度依存性が認められた。しかしながら、柚子と同様に柑橘類である他の果実(カボス、グレープフルーツ(赤、白))の果皮抽出物には殆ど、NF-κB亢進抑制効果は認められなかった。
実験例2で使用した柚子果皮抽出物、カボス果皮抽出物、およびグレープフルーツ果皮抽出物を、下記条件のHPLCにかけ、フラボノイド(ナリルチン、ナリンギン、ヘスペリジン、ネオヘスペリジン)の含有量を比較した。
カラム:ODS ナカライテスクC18 AR-II、
カラムサイズ:4.6 mmI.D.×150 mm、
移動相:リン酸緩衝液(pH 7.0, 20 mM, NaH2PO4/Na2HPO4)/メタノールの65/35(v./v.)混合液、流速:1.0 mL/min、
カラム温度:30℃、
検出:254 nmの吸光度。
調製例(1-1)〜(1-3)で調製した柚子果皮抽出物(NFE)、柚子果皮抽出物の水溶性画分(NFE(WS))、および柚子果皮抽出物の疎水性画分(NFE(OS))を用いて、Tax誘導性NF-κB亢進抑制効果、およびTax発現に対する影響を調べた。
(1-1)Tax誘導性NF-κB亢進抑制
柚子果皮抽出物(NFE)、柚子果皮抽出物の水溶性画分(NFE(WS))、および柚子果皮抽出物の疎水性画分(NFE(OS))を使用する以外は、実験例1のTax誘発実験系に従って同様にして実験を行った。
上記で調製した、各細胞溶解液中の総タンパク量10μgを、それぞれβメルカプトエタノール入りSDSサンプルバッファと2:1の容量比で混和し、これをSDS-PAGEにかけて展開した。次いで、PVDF-membrane(ミリポア社)に転写し、抗Tax抗体(田中勇悦博士、琉球大学医学部免疫学講座より入手)を用いて、Taxの発現量を検出した。
結果を図7に示す。図7からわかるように、Tax誘発性NF-κB亢進抑制作用は、柚子果皮抽出物の水溶性画分には認められなかった。このことから、柚子果皮抽出物の疎水性画分にNF-κB亢進抑制効果を発揮する活性成分が含まれていること、実験例1〜3で示した柚子果皮抽出物のNF-κB亢進抑制作用は当該疎水性画分に含まれている活性成分に起因するものであることが判明した。
調製例(1-1)および(1-2)で調製した柚子果皮抽出物(NFE)および柚子果皮抽出物の疎水性画分(NFE(OS))を用いて、TNF-α、Tax、IKK(inhibitor of NF-kappa B kinase)αおよびβ、またはNIK(NF-kappa B-inducing, kinase)によって誘導されるNF-κB亢進に対するこれらの抑制効果を調べた。なお、実験は実験例1の方法に準じて行った。
(1)実験方法
(1-1) アレルギー性気管支喘息病態マウス に対する柚子果皮抽出物の投与
実験1
図10に示すプロトコールに従って、マウスに炎症誘発剤である卵白アルブミン(以下、「OVA」という)とアラム(水酸化アルミニウムゲル:Alum)を3週間にわたって腹腔内投与して作成した、アレルギー性気管支喘息モデルマウスに、OVAと、調製例(1-1)で調製した柚子果皮抽出物、または調製例(1-3)で調製したカボス果皮抽出物を交互に隔日毎に投与し、炎症細胞数の増減を評価した。
被験マウス(ICR雄性マウス)計30匹を、(1)蒸留水(Control)群、および(2) OVA単独暴露群、(3)OVA+柚子果皮抽出物0.5mg群の3群(1群10匹ずつ)に分けて、上記実験1と同様の実験を行った。
被験マウスを心臓採血にて屠殺した後、気管支上部より、留置針を挿入し、テルモシリンジにて0.8 mlの生理食塩水を2回注入して気管支肺胞洗浄液(BALF)を回収した。これを2000回転にて10分間遠心分離し、上清と沈渣に分離した。沈渣に生理食塩水を0.1 ml加え、この沈渣液をチュルク液にて希釈し、ビルケル・チュルク血球計算盤にて白血球数を測定した。残りの沈渣溶液は総細胞数が5万個になるように生理食塩水を加えて調整し、これをサクラ自動細胞収集装置(サクラ精製株式会社、東京)によって、2000回転にて10分間遠心し、沈渣の塗沫標本を作製し、ディフクイック染色を行った。
実験1の結果
実験1の各群((1)蒸留水(Control)群、(2) OVA単独暴露群、(3)OVA+柚子果皮抽出物4mg群、(4)OVA+カボス果皮抽出物4mg群)について、気管支の洗浄液に含まれる炎症細胞の数を計測した結果を表1に示す。この数値が高いほど、気管支の炎症が激しいことを意味する。
実験2の各群((1)蒸留水(Control)群、(2) OVA単独暴露群、(3)OVA+柚子果皮抽出物0.5mg群)について、気管支の洗浄液に含まれる炎症細胞の数を計測した結果を表2と図11に示す。
人間の免疫応答は、図12に示すように、細胞性免疫(IV型、V型)と液性免疫(I型、II型、III型)に分けられる。これらの経路はすべて、マクロファージが抗原(花粉、ダニ、真菌、結核菌)を取り込むことによって、マクロファージから分化したナイーブT細胞Th0から開始される。このTh0細胞は、Th1細胞かTh2細胞に分化される。このTh1細胞とTh2細胞が、細胞性免疫と液性免疫の分岐点となる。
(1-1)好酸球の測定
実験例6の実験2で用いた各被験マウス群((1)蒸留水(Control)群、(2) OVA単独暴露群、(3)OVA+柚子果皮抽出物0.5mg群)(1群10匹のうち8匹使用)のマウスを用いて実験を行った。マウスを心臓採血して屠殺した後、気管支上部より、留置針を挿入し、テルモシリンジにて0.8 mlの生理食塩水を2回注入して行い気管支肺胞洗浄液(BALF)を回収した。その後2000回転にて10分間遠心分離し、上清と沈渣に分離した。沈渣に生理食塩水を0.1 ml加え、この沈渣液をチュルク液にて希釈し、ビルケル・チュルク血球計算盤にて白血球を測定した。残りの沈渣溶液は総細胞数が5万個になるように生理食塩水を加えて調整し、これをサクラ自動細胞収集装置(サクラ精製株式会社)によって、2000回転にて10分間遠心分離し、沈渣の塗沫標本を作製し、ディフクイック染色を行った。好酸球数は、1標本200個数え、各々細胞数のパーセンテージを算出し、これらを総細胞数に乗じて細胞数を求めた。
BALF上清中のサイトカイン(IL-5,IL-13)をEnzyme-linked immunosorbent assays(ELISA)法にてマイクロプレートリーダーを用いて測定した。IL-5はELISA キット(Endogen, Cambridge, MA)を用いて、IL-13は同様のキット(R&D Systems Inc., Minneapolis, U.S.A)によって測定した。吸光度の測定は主波長450 nm、副波長540 nmで行った。各サイトカインの濃度は各々のプレートに設定した標準液吸光度標準曲線から求めた。IL-5、IL-13の検出限界値は、それぞれ5 pg/ml、1.5 pg/mlである。
IgE抗体価の測定は、レビスOVA-IgEマウスキット(ELISAキット、シバヤギ社)を用いて行った。OVA固相化した96ウェルプレート上に50倍希釈した被験マウスの血清を10μlずつ分注し、キットの測定法に従ってマイクロプレートリーダーにて定量した。吸光度測定は、主波長450 nm、副波長620 nmで行った。
気道上皮をPAS(Periodic acid-Schiff)染色、およびHE(ヘマトキシリン・エオジン)染色した。PAS染色は、多糖類を多く含む構造、主に粘液細胞を赤く染色する。HE染色は、好酸性のもの、主に好酸球を赤く染色する。
(2-1)好酸球、炎症性サイトカイン(IL-5、IL-13)、およびIgE抗体価の測定結果
好酸球、炎症性サイトカイン(IL-5、IL-13)、およびIgE抗体価の測定結果を、表3および図13に示す。
図14の(A)に、PAS染色した被験マウス((1)蒸留水(Control)群、(2) OVA単独暴露群、(3)OVA+柚子果皮抽出物0.5mg群)の気管支の上皮細胞の光学顕微鏡像(×100)を、また(B)にHE染色した被験マウス((1)蒸留水(Control)群、(2) OVA単独暴露群、(3)OVA+柚子果皮抽出物0.5mg群)の気管支上皮細胞の光学顕微鏡像(×200)を示す。
Claims (11)
- 柚子果皮から調製された疎水性画分を有効成分とする、NF-κB亢進およびTh2亢進の少なくとも一方の亢進を抑制するために用いられる、NF-κB/Th2亢進抑制剤。
- 前記疎水性画分が下記の特性を有するものである、請求項1に記載するNF-κB/Th2亢進抑制剤:
−シリカゲル薄層クロマトグラフィーにおいて、展開液としてアセトニトリルを用いて展開した場合のRf値が1である。 - 前記疎水性画分が、柚子果皮の有機溶媒抽出物をシリカゲルに吸着させた場合に、当該シリカゲルからアセトニトリルによって脱離回収される画分である、請求項1または2に記載するNF-κB/Th2亢進抑制剤。
- 前記疎水性画分が、下記の工程を経て柚子果皮から調製されるものである、請求項1乃至3のいずれかに記載するNF-κB/Th2亢進抑制剤:
(1) 柚子果皮を低級アルコールまたは含水低級アルコールで抽出し、溶媒を留去する、
(2) 溶媒留去した柚子果皮抽出物を低級アルコールに溶解し、これをアセトニトリルに懸濁したシリカゲルと混合した後、溶媒を留去する、
(3) 溶媒留去したシリカゲルを、アセトニトリルを移動相とする順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して、アセトニトリルを通液して溶出画分を回収する。 - 請求項1乃至4のいずれかに記載するNF-κB/Th2亢進抑制剤を有効成分とする医薬品組成物、食品組成物、化粧品組成物または飼料組成物。
- NF-κB亢進またはTh2亢進によって誘発される病態または疾病の予防または改善に用いられる、請求項5に記載する医薬品組成物、食品組成物、化粧品組成物または飼料組成物。
- NF-κB亢進またはTh2亢進によって誘発される病態または疾病がアレルギー疾患である、請求項6に記載する医薬品組成物、食品組成物、化粧品組成物または飼料組成物。
- NF-κB亢進によって誘発される病態または疾病が悪性腫瘍である、請求項6に記載する医薬品組成物、食品組成物、化粧品組成物または飼料組成物。
- 請求項5乃至8のいずれかに記載する食品組成物であって、固形または液状の製剤形態を有することを特徴とする食品組成物。
- 固形または液状の製剤形態を有する食品添加剤である、請求項9記載の食品組成物。
- 下記の工程を有する、請求項1乃至4のいずれかに記載するNF-κB/Th2亢進抑制剤の有効成分を調製する方法:
(1) 柚子果皮を低級アルコールまたは含水低級アルコールで抽出し、溶媒を留去する、
(2) 溶媒留去した抽出物を低級アルコールに溶解し、これをアセトニトリルに懸濁したシリカゲルと混合した後、溶媒を留去する、
(3) 溶媒留去したシリカゲルを、アセトニトリルを移動相とする順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供する。
(4) アセトニトリルを通液して溶出する画分を、NF-κB亢進抑制剤の有効成分として回収する。
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