JP5414316B2 - 肝障害抑制剤 - Google Patents
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Description
項1.メリッサソウおよびクミクスチンからなる群から選択される少なくとも1種の植物の加工物を含む肝障害抑制剤。
項2.上記加工物がメリッサソウとクミクスチンの加工物であり、メリッサソウとクミクスチンとの混合比が7:3〜4:6(重量比)である、項1に記載する肝障害抑制剤。
項3.上記加工物が上記植物の溶媒抽出物またはその乾燥物である、項1または2に記載する肝障害抑制剤。
項4.肝障害がアルコールによる肝障害である、項1乃至3のいずれかに記載する肝障害抑制剤。
項5.メリッサソウの加工物およびクミクスチンの加工物を含む飲食品であって、メリッサソウの加工物とクミクスチンの加工物の混合比が7:3〜4:6(重量比)である飲食品。
メリッサソウ(英名:Lemon balm、学名:Melissa officinalis、和名:コウスイハッカ、セイヨウヤマハッカ)は、従来からその花部や葉部が料理や飲み物の香味付けやハーブティーに広く使用されていることからわかるように、長年にわたって食経験のあるシソ科の植物である。
クミクスチン(別名:ネコノヒゲ)は、シソ科の低木状多年生草植物(Orthosiphon aristatus (Blume) Miq.またはOrthosiphon stamineus Benth.)であり、従来から利尿作用や腎炎症状を軽減することが知られているが、最近では健康茶として注目され使用されている。
本発明の肝障害抑制剤は、前述するメリッサソウ加工物またはクミクスチン加工物のいずれか一方、または両方の組み合わせ物を含有するものであり、斯くして優れた肝障害抑制作用を有することを特徴とする(実験例参照)。特に本発明の肝障害抑制剤は、アルコールの影響によって肝細胞がダメージを受けているアルコール性肝障害に対して有効に作用する。
本発明の飲食品は、前述するメリッサソウ加工物およびクミクスチン加工物を含有し、メリッサソウ加工物とクミクスチン加工物との混合比が7:3〜4:6(重量比)であることを特徴とする。
(1)メリッサソウエキス:アムラ薬品(株)のメリッサソウ乾燥エキス(メリッサソウ葉部の熱水抽出物の乾燥粉末)(品番85.646)を使用。
(2)クミクスチンエキス:アムラ薬品(株)のジャワ茶乾燥エキス(クミクスチン地上部のエタノール抽出物の乾燥粉末)(品番85.901)を使用。
(3)マリアアザミエキス:アスク薬品株式会社のマリアアザミ乾燥エキス(マリアアザミ果実部位をエキサンで脱脂した後、エタノール抽出したものを濃縮した乾燥粉末)(品番012.088)を使用。
(4)赤シソエキス:
赤シソの生葉100gを精製水1000mLに加え、93℃に加熱しながら60分間熱水抽出した。この抽出溶液を濾過し、固形分を取り除いた後に、スプレードライヤーで乾燥させて粉末状の赤シソエキス粉末を得た。なお、スプレードライヤーによる乾燥は、上記の抽出液を回転数10000rpmのアトマイザーに落下させ、150℃の空気の熱風を供給しながら行った。
ALT(alanine aminotransferase)は、別名GPT(glutamaic-pyruvic transaminae)と称される、ピリドキサールリン酸を補酵素とするアミノ基転移酵素である。ALT(GPT)は肝細胞にのみ局在する酵素であって、本来肝臓の細胞の中にあるものの、肝細胞が破壊されると血中に漏れ出てくるため、アルコール性肝障害、肝炎ウイルスまたは薬物などで肝臓の細胞が壊れているか否かを測定する指標として、すなわち肝障害の有無やその程度(進展状態)を測るバロメーターとして広く使用されている。
(1)日本エスエルシー株式会社より購入した6週齢ラット(♂)から、かん流法により肝臓細胞を単離して初代培養肝細胞を得た。これを48ウェルプレート(非コラーゲンコート)(秋田住友ベーク(株)製)にコンフルエント(1×105cells/cm2)となるようにまき、WEI培地(1nM インスリン・デキタメタゾン、10%FBS、1%ペニシリンストレプトマイシン含有)で、37℃、5%CO2条件下で4時間培養する。
(2)4時間後にWEI培地を取り除き、被験試料(終濃度0〜8mg/mL)、及びPBS(Con)を溶かしたWEII培地(10%FBS、1%ペニシリンストレプトマイシン)で2時間培養する。
(3)得られた培養物を1000rpm 4℃ 3minで遠心分離し、各ウエルの上清を96well plateに200μLずつ回収する。
(4)下記方法に従って、GOT・GPTテストワコーキット(和光純薬工業(株)製)でGPT(ALT)の測定を行う。また、同時にcell counting kit((株)同仁化学研究所製)で生細胞数の測定(450nm)を行う。
(a)キットに装備されたGPT酵素液と発色液を1:1(容積比)で混和し、GPT発色液とする。
(b)調製したGPT発色液を100μLずつ96ウエルプレートに加え、37℃恒温機で10分加温する。
(c)各ウエルに1/3希釈した上清を6μLずつ添加し、37℃恒温機で25分加温しながら反応を進める。
(d)キットに装備された反応停止液を200μL添加し、よく撹拌した後に550nmで吸光度を測定する。
結果を表2に示す。表2の括弧内は、植物エキス(メリッサソウエキスおよびクミクスチンエキス)を配合しないで培養した肝細胞(植物エキス濃度:0mg/mL)について測定したALT(GPT)値(100%)に対する相対比を示す。
肝細胞に対するアルコールの影響を調べるために、実験例1と同様の方法で、ラット初代培養肝細胞をWEI培地中で4時間培養した後、WEI培地を取り除き、エタノール(終濃度:3%)、及びPBS(Con)を溶かしたWEII培地(10%FBS、1%ペニシリンストレプトマイシン)で2時間培養した。次いで、実験例1の実験方法の(3)と(4)の方法に従ってGPT(ALT)値を測定した。
実験例2で調製したアルコール性肝障害のモデル肝細胞を用いて、メリッサソウエキスおよびクミクスチンエキスの肝障害抑制作用を調べた。なお、これらの実験には、被験試料として、上記調製例1〜2で調製したメリッサソウエキスおよびクミクスチンエキス、これらの混合物、ならびに上記参考調製例1〜2で調製した赤シソエキスおよびマリアアザミエキスを使用した。
(1) 日本エスエルシー株式会社より購入した6週齢ラット(♂)をかん流法により肝臓細胞を単離して初代培養肝細胞を得た。これを48ウエルプレート(非コラーゲンコート)(秋田住友ベーク(株)製)にコンフルエント(1×105cells/cm2)となるようにまき、WEI培地で、37℃、5%CO2条件下で4時間培養する。
(2)4時間後にWEI培地を取り除き、被験試料〔メリッサソウエキス(終濃度:0〜8mg/mL)、クミクスチンエキス(終濃度:0〜8mg/mL)、メリッサソウエキス(M)とクミクスチンエキス(K)との混合物(混合重量比(M9:K1)、(M8:K2)、(M7:K3)、(M6:K4)、(M5:K5)、(M4:K6)、(M3:K7)、(M2:K8)、(M1:K9))(終濃度:0〜8mg/mL)、赤シソエキス(終濃度:0〜8mg/mL)、およびマリアアザミエキス(終濃度:0〜8mg/mL)〕、及びPBS(Con)を溶かしたWEII培地で2時間培養する。
(3)得られた培養物を1000rpm 4℃ 3minで遠心分離し、各ウエルの上清を96well plateに200μLずつ回収する。
(4)下記方法に従って、GOT・GPTテストワコーキット(和光純薬工業(株)製)を用いて実験例1と同様にGPT(ALT)値の測定を行う。また、同時にcell counting kit((株)同仁化学研究所製)で生細胞数の測定(450nm)を行う。
結果を表3および4に示す。表3および4は、被験試料(植物エキス)を配合しないでエタノール存在下で培養した肝細胞(植物エキス濃度:0mg/mL)について測定したALT(GPT)値(100%、実験例2参照)に対する相対比、および各植物エキスについて算出したIC50値(mg/mL)を示す。
表5および6に記載する処方からなる組成物(処方例1〜20)を、慣用法に従って錠剤として調製した。具体的には、各成分を処方に従って配合し、粉砕、造粒、乾燥、整粒および混合を行い、それを定法に従って打錠して250mgの錠剤に調製した。
表7および8に記載する処方からなる組成物(処方例21〜44)を、慣用法に従って顆粒剤として調製した。具体的には、各成分を処方に従って配合し、定法に従って混合、造粒、乾燥および整粒して2gの顆粒剤に調製した。
表9に記載する処方からなる粉末組成物(処方例45〜55)を調製し、次いで、これを市販の緑茶に溶解し、200gの茶飲料とした。
Claims (3)
- メリッサソウおよびクミクスチンからなる群から選択される少なくとも1種の植物の加工物を含むアルコール性肝障害抑制剤。
- 上記加工物がメリッサソウとクミクスチンの加工物であり、メリッサソウの加工物とクミクスチンの加工物との混合比が7:3〜4:6(重量比)である、請求項1に記載するアルコール性肝障害抑制剤。
- 上記加工物が上記植物の溶媒抽出物またはその乾燥物である、請求項1または2に記載するアルコール性肝障害抑制剤。
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