JP2008255020A - 抗老化皮膚外用剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】活性成分を内包したタンパク質ナノ粒子を含む、抗老化皮膚外用剤。
【選択図】なし
Description
好ましくは、タンパク質ナノ粒子の平均粒子サイズは10〜100nmである。
好ましくは、0.01〜50重量%のタンパク質ナノ粒子を含有する。
好ましくは、タンパク質の重量に対して、0.1〜100重量%の活性成分を含有する。
好ましくは、活性成分は、イオン性物質または脂溶性物質である。
好ましくは、タンパク質はコラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種である。
好ましくは、架橋剤は酵素を用いることができる。
酵素としては、タンパク質の架橋作用を有するものであれば特に限定されないが、好ましくはトランスグルタミナーゼを用いることができる。
(a)カゼインをpH8以上11未満の塩基性水性媒体に混合させる工程;
(b)工程(a)で得た溶液に少なくとも1種の活性成分を添加する工程;及び
(c)工程(b)で得た溶液をpH3.5〜7.5の水性媒体に注入する工程;
(a)カゼインをpH8以上11未満の塩基性水性媒体に混合させる工程;
(b)工程(a)で得た溶液に少なくとも1種の活性成分を添加する工程;及び
(c)工程(b)で得た溶液のpH をカゼインの等電点からpH1以上離れたpHまで下降させる工程;
本発明の抗老化皮膚外用剤は、活性成分を内包したタンパク質ナノ粒子を含むことを特徴とする。
保湿成分としては、例えば、カンテン、ジグリセリン、ジステアリルジモニウムヘクトライト、ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、へキシレングリコール、ヨクイニンエキス、ワセリン、尿素、ヒアルロン酸、セラミド、リピジュア、イソフラボン、アミノ酸、コラーゲン、ムコ多糖、フコダイン、ラクトフェリン、ソルビトール、キチン・キトサン、リンゴ酸、グルクロン酸、プラセンタエキス、海藻エキス、ボタンピエキス、アマチャエキス、オトギリソウエキス、コレウスエキス、マサキ抽出物、コウカエキス、マイカイ花エキス、チョレイエキス、サンザシエキス、ローズマリーエキス、デュークエキス、カミツレエキス、オドリコソウエキス、レイシエキス、セイヨウノコギリソウエキス、アロエエキス、マロニエエキス、アスナロエキズ、ヒバマタエキス、オスモインエキス、オーツ麦エキス、チューベロースポリサッカライド、冬虫夏草エキス、大麦エキス、オレンジ抽出物、ジオウエキス、サンショウエキス、ヨクイニンエキスなどを挙げることができる。また、カゼインナノ粒子の場合は、カゼイン自体が保湿性を有する。
本発明において、活性成分は、タンパク質ナノ粒子の形成時に添加してもよいし、ナノ粒子の作成後に添加してもよい。
さらに、本発明においては、架橋処理後に有機溶媒を留去し、水分散することが好ましい。有機溶媒を留去前に水を加えてもよく、留去後に水を加えても良い。
(a)カゼインをpH8以上11未満の塩基性水性媒体に混合させる工程;
(b)工程(a)で得た溶液に少なくとも1種の活性成分を添加する工程;及び
(c)工程(b)で得た溶液をpH3.5〜7.5の水性媒体に注入する工程;
(a)カゼインをpH811未満以上の塩基性水性媒体に混合させる工程;
(b)工程(a)で得た溶液に少なくとも1種の活性成分を添加する工程;及び
(c)工程(b)で得た溶液のpH を等電点からpH1以上離れたpHまで下降させる工程;
また、カゼインとイオン性多糖または別種のイオン性タンパク質との混合粒子により、イオン性活性成分を内包することも見出された。
以下の実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
カゼイン(乳由来・和光純薬製)100mgを、pH10、50mMリン酸バッファー10mLに混合させる。クマリン6(和光純薬製)0.015mgをエタノール0.1mLに溶解させる。この2種の溶液を混合し、塩酸を加えpHを7.5に調整したところ、カゼインナノ粒子が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー(株)製ナノトラックを用い測定したところ、29nmであった。
カゼインNa(乳由来・和光純薬製)10mgをpH9、50mMリン酸バッファー1mLに混合させる。グリチルレチン酸(和光純薬製)1.7mgをエタノール0.25mLに溶解させる。カゼイン溶液に攪拌下、グリチルレチン酸溶液を滴下し、この混合液を、外設40℃、800rpmの攪拌条件で、1mLをマイクロシリンジを用いて、pH5、200mMのリン酸バッファー水10mL中に注入したところ、グリチルレチン酸を内包したカゼインナノ粒子の水分散液が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー(株)製マイクロトラックを用い測定したところ、83nmであった。
カゼイン(乳由来・和光純薬製)20mg、プロタミン硫酸塩(和光純薬製)1mgをpH10、50mMリン酸バッファー1mLに混合させる。α−リポ酸1mgをイオン交換水に溶解させる。この2種の溶液を混合し、外設40℃、800rpmの攪拌条件で、1mLをマイクロシリンジを用いて、pH5、200mMのリン酸バッファー水10mL中に注入したところ、カゼインナノ粒子が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、日機装(株)製ナノトラックを用い測定したところ、48nmであった。
カゼインNa(乳由来・和光純薬製)10mgをpH9、50mMリン酸バッファー1mLに混合させる。酢酸トコフェロール1.7mgをエタノール0.25mLに溶解させる。カゼイン溶液に攪拌下、酢酸トコフェロール溶液を滴下し、この混合液を、外設40℃、800rpmの攪拌条件で、カゼイン溶液1mLをマイクロシリンジを用いて、200mMのリン酸バッファー水10mL中に注入したところ、酢酸トコフェロールを内包したカゼインナノ粒子の水分散液が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー(株)製マイクロトラックを用い測定したところ、124nmであった。
エタノール0.5mL、カゼイン(乳由来・和光純薬製)20mg、pH10、50mMリン酸バッファー1mLを混合させる。β-カロテン(和光純薬製)0.5mgをエタノール0.25mLに溶解させる。カゼイン溶液に攪拌下、β-カロテン溶液を滴下し、この混合液を、外設40℃、800rpmの攪拌条件で、マイクロシリンジを用いて、pH5、300mMのリン酸バッファー水10mL中に注入することで、カゼインナノ粒子が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、日機装(株)製ナノトラックを用い測定したところ、88nmであった。
酸処理ゼラチン10mg、TG-S(味の素製)5mgを水1mLに溶解させる。外設40℃、800rpmの攪拌条件で、ゼラチン溶液1mLをマイクロシリンジを用いて、グリチルレチン酸1.7mgを溶解したエタノール10mL中に注入したところ、ゼラチンナノ粒子が得られた。外設55℃で5時間静置し、ゼラチンナノ粒子を酵素架橋する。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー(株)製マイクロトラックを用い測定したところ、80nmであった。
カゼインNa(乳由来・和光純薬製)10mgをpH9リン酸バッファー1mLに混合させる。パルミトイルアスコルビン酸(和光純薬製)1mgをエタノール0.2mLに溶解させる。この2液を混合し、外設40℃、800rpmの攪拌条件で、カゼイン溶液1mLをマイクロシリンジを用いて、pH5のリン酸バッファー水10mL中に注入したところ、パルミトイルアスコルビン酸を内包したカゼインナノ粒子の水分散液が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー(株)製マイクロトラックを用い測定したところ、124nmであった。
カゼイン(乳由来・和光純薬製)10mgをpH10、50mMリン酸バッファー1mLに混合させる。レチノイン酸1mgをエタノール0.3mLに溶解させる。カゼイン溶液にポリリジン1%水溶液0.2mLを加え、攪拌下、レチノイン酸溶液を滴下し、この混合液を、外設40℃、800rpmの攪拌条件で、カゼイン溶液1mLをマイクロシリンジを用いて、pH5、200mMのリン酸バッファー水10mL中に注入したところ、レチノイン酸を内包したカゼインナノ粒子の水分散液が得られた。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計(大塚電子(株)製DLS−7000)を用い測定したところ、69nmであった。
酸処理ゼラチン10mg、TG-S(味の素製)5mgを水1mLに溶解させる。外設40℃、800rpmの攪拌条件で、ゼラチン溶液1mLをマイクロシリンジを用いて、トコフェロール1.7mgを溶解したエタノール10mL中に注入したところ、ゼラチンナノ粒子が得られた。外設55℃で5時間静置し、ゼラチンナノ粒子を酵素架橋する。
上記粒子の平均粒経は、光散乱光度計、ニッキソー(株)製マイクロトラックを用い測定したところ、95nmであった。
実施例2から6に記載のナノ粒子分散液を室温にて1ヶ月保存後、ニッキソー(株)製マイクロトラックを用い平均粒経を測定した。
比較例1として、合成ポリマー(PLGA)のナノ粒子分散液であるナノインパクト(ホソカワミクロン製)。
試験例1の測定結果を表1に示す。
実施例1で作製したカゼインナノ粒子分散液400μLを染み込ませた2cm角の不織布をヘアレスラット摘出皮膚に貼付し、30分間静置した。この皮膚をOCTコンパウンド(サクラファインテック(株)製)で包埋し、液体窒素で凍結した。これをカールツァイス(株)製クリオスタット(cryostat)を用いて凍結切片を作製し、DAPI入り封入剤でプレパラートガラス上に固定・封入したのち、蛍光顕微鏡観察した。
比較例2:
以下のものについても試験例2と同様に蛍光顕微鏡観察を行った。
カゼイン(乳由来・和光純薬製)100mgを、蒸留水10mLに混合させる。クマリン6(和光純薬製)0.015mgをエタノール0.1mLに溶解させる。この2種の溶液を混合して得られた分散液。
以下のものについても試験例2と同様に蛍光顕微鏡観察を行った。
エタノール50%水溶液に0.15mg/mL濃度のクマリン6を溶解した液。
SDラットに麻酔注射後、実施例1で作製したカゼインナノ粒子分散液400μLを染み込ませた2cm角の不織布を腹部皮膚に貼付し、60分間静置した。この皮膚をOCTコンパウンド(サクラファインテック(株)製)で包埋し、液体窒素で凍結した。これをカールツァイス(株)製クリオスタット(cryostat)を用いて凍結切片を作製し、DAPI入り封入剤でプレパラートガラス上に固定・封入したのち、蛍光顕微鏡観察した。
以下のものについても試験例3と同様に蛍光顕微鏡観察を行った。
エタノール50%水溶液に0.15mg/mL濃度のクマリン6を溶解した溶液。
また、天然高分子を用いることによって、安全性が高い。
更に粒子径が小さいことにより透明性が高い。
Claims (10)
- 活性成分を内包したタンパク質ナノ粒子を含む、抗老化皮膚外用剤。
- タンパク質ナノ粒子の平均粒子サイズが10〜100nmである、請求項1に記載の抗老化皮膚外用剤。
- タンパク質の重量に対して、0.1〜100重量%の活性成分を含有する、請求項1又は2に記載の抗老化皮膚外用剤。
- 活性成分が、抗酸化成分、保湿成分、活性酸素除去剤、抗炎症剤、アンチエイジング剤、コラーゲン合成促進剤、抗しわ剤、ビタミン剤、ミネラル、又はアミノ酸類からなる群より選ばれる少なくとも一種である、請求項1から3の何れかに記載の抗老化皮膚外用剤。
- 活性成分が、イオン性物質または脂溶性物質である、請求項1から4の何れかに記載の抗老化皮膚外用剤。
- タンパク質がコラーゲン、ゼラチン、酸処理ゼラチン、アルブミン、オバルブミン、オバルブミン、カゼイン、トランスフェリン、グロブリン、フィブロイン、フィブリン、ラミニン、フィブロネクチン、又はビトロネクチンからなる群より選ばれる少なくとも一種である、請求項1から4の何れかに記載の抗老化皮膚外用剤。
- ナノ粒子の形成中および/又は形成後にタンパク質が架橋処理されている、請求項1から6の何れかに記載の抗老化皮膚外用剤。
- 酵素を用いて架橋処理を行う、請求項7に記載の抗老化皮膚外用剤。
- 下記の工程(a)から(c)によって作製されるカゼインナノ粒子を含む、請求項1から6の何れかに記載の抗老化皮膚外用剤。
(a)カゼインをpH8以上11未満の塩基性水性媒体に混合する工程;
(b)工程(a)で得た溶液に少なくとも1種の活性成分を添加する工程;及び
(c)工程(b)で得た溶液をpH3.5〜7.5の水性媒体に注入する工程; - 下記の工程(a)から(c)によって作製されるカゼインナノ粒子を含む、請求項1から6の何れかに記載の抗老化皮膚外用剤。
(a)カゼインをpH8以上11未満の塩基性水性媒体に混合する工程;
(b)工程(a)で得た溶液に少なくとも1種の活性成分を添加する工程;及び
(c)工程(b)で得た溶液のpH を等電点からpH1以上離れたpHまで下降させる工程;
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