JP2008203138A - 蛍光検出装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 そこで、本発明は、蛍光被写体からの蛍光を検出する蛍光検出装置であって、前記蛍光被写体を照明する光源と、前記蛍光被写体へ向かう光を遮断するシャッター手段と、前記シャッター手段と光源の間に配置された光出力計測手段と、前記蛍光被写体の発した蛍光を検出する撮像素子と、前前記撮像素子の蓄積時間、又は前記シャッター手段の開閉時間の少なくとも何れか一方を変更する変更手段とを備え、前記変更手段は、前記光出力計測手段の計測結果よりノイズ画像を撮影するための蓄積時間を演算する演算手段と、前記演算結果の前記蓄積時間で撮影したノイズ画像を用い蛍光を検出して形成した撮影画像を補正する補正手段とを有する蛍光検出装置を提供するものである。
【選択図】 図1
Description
冷却CCDを使う方法は、冷却CCDが非常に高価であるため装置の値段が高く、実用性が低い。
発光被写体からの発光を検出する発光検出装置であって、
前記発光被写体を照射する光源と、
前記光源からの光を遮蔽するシャッター手段と、
前記光源からの光を検出するための光出力計測手段と、
前記発光被写体から発光した光を検出する撮像素子と、
前記光出力計測手段の出力にもとづいて、設定時間を変更するための変更手段とを備える発光検出装置を提供するものである。
蛍光被写体からの蛍光を検出する蛍光検出装置であって、
前記蛍光被写体を照明する光源と、
前記蛍光被写体へ向かう光を遮断するシャッター手段と、
前記シャッター手段と光源の間に配置された光出力計測手段と、
前記蛍光被写体の発した蛍光を検出する撮像素子と、
前前記撮像素子の蓄積時間、又は前記シャッター手段の開閉時間の少なくとも何れか一方を変更する変更手段とを備え、
前記変更手段は、前記光出力計測手段の計測結果よりノイズ画像を撮影するための蓄積時間を演算する演算手段と、
前記演算結果の前記蓄積時間で撮影したノイズ画像を用い蛍光を検出して形成した撮影画像を補正する補正手段とを有する蛍光検出装置を提供するものである。
ダーク画像を取得する装置であって、
光源からの光を検出するための光出力計測手段を備え、
前記光出力計測手段の計測結果をもとに、撮像素子の蓄積時間を変更する変更手段とを備え、
前記蓄積時間をもとに、ダーク画像を取得する装置を提供するものである。
本発明を図示の実施の形態に基づいて詳細に説明する。
図1は本発明を実施した一実施例形態の蛍光検出装置の構成図である。
次にこのような構成の装置を用いて、前記DNAチップ上の標識蛍光画像を撮影する方法について述べる。まず、検査者は、DNAチップのハイブリダイゼーション反応等の準備に先立ち操作パネル19を操作し装置に電源を投入する。電源の投入により変更手段7は、装置のイニシャライズを行うとともにレーザー光源4の電源をONする。これによりレーザー光源4は、レーザー光を発する。
レーザー出力が一定の安定状態に達するウェイティング時間終了後、光出力計測手段7でレ−ザー光出力を測定する。
すなわち td=tf=tp+δt
レーザー出力が安定している場合には、PDの出力電流を電圧変換しその電圧値をもとに、レーザー出力を計測してもよい。しかし、本実施例に使用するような、出力変動のある光源を使う場合、決められた時間蓄積し、高い周波数の変動の影響をなくして計測するほうがより正確な計測ができる。これは、蛍光被写体への光照射中も光を蓄積可能である。
次に、蛍光画像補正のためのノイズ画像であるダーク画像を撮像する。ダーク画像とは、撮像素子に光の入力がないダークな状態で撮影する画像であり電気的なノイズを表す。
操作者は、ハイブリダイゼーション反応等の準備の完了したDNAチップをトレイにのせ、パネル19を操作し、不図示の暗箱の蓋を開き、トレイを配置し蛍光撮影をスタートさせる。パネル19への入力により蛍光撮影が行われることを検知した変更手段7は、ダーク画像撮影中の場合は、その撮影動作を中止し、暗箱の蓋を閉じて、カセット2aを撮影光軸の上に配置する等の蛍光撮影の準備を行う。そして撮像素子3の蓄積を開始した後、レーザーシャッター5を開放する。図2(C)にレーザーシャッター開閉のタイミングチャートを示す。レーザー光は、ビームエクスパンダー9で広げられ、ビームホモジナイザー10で被写体面におけるビーム断面の強度分布が均一な光束に変換されDNAチップの蛍光標識を励起する。蛍光フィルター13は、励起光の反射光及び散乱光を遮断し、標識の発した蛍光のみを透過する。透過した蛍光は、撮影光学系14により撮像素子3上に結像し、蛍光画像を形成する。
変更手段7は、蛍光画像Ifから、前記のように求めた固定パターン画像Idを引き算し解析用の蛍光画像を作成する。図3は、DNAチップの蛍光プローブを撮影した蛍光画像を表す図であり、プローブ蛍光の部分が、明部としてアレー状に配列しており、背景部分は黒である。しかし、この黒部分には、撮像素子の出す固定パターンノイズ成分等も含まれるため、補正が必要である。
前記実施例においては、蛍光撮像時の蓄積時間を常に一定にし、どのカセットの蛍光画像に対しても、同一の固定パターンノイズ画像をそのまま使えるようにした。しかし、励起光の露光時間に対応して蓄積時間も制御し、その蓄積時間を記録して、固定パターンノイズ画像を補正し、蛍光画像の補正に用いても良い。その実施例を次に示す。
固定パターンノイズ画像Idは、蓄積時間tdで撮影したダーク画像di1,di2、di3より演算して求めたものであるから、精度良く蛍光画像を補正するためには、蛍光画像の蓄積時間t1〜t4に応じて補正する必要がある。図7(A)に蓄積時間tdの固定パターンノイズ画像の各画素に対応した画像データを示す。各画素のアドレス(i,j)に対応した画像データをNd_td(i.j)で表す。同様に撮像時間t1の固定パターンノイズ画像の各アドレスに対応した画素値を図7(B)に示すようにNd_t1(i,j)とあらわすとNd_t1(i,j)は、Nd_td(i,j)及び蓄積時間t1、tdを用いて以下の式で表すことができる。
Nd_t1(i,j)=Nd_td(i,j)*t1/td
固定パターンノイズには、時間に大きさが比例するセンサーの出す暗電流成分と、時間に比例しない読出し回路に依存する読出しノイズ成分よりなる。したがって、より正確には、平均的な読出しノイズ画像Nd_ro(i,j)を記憶しておき
Nd_t1(i,j)=(Nd_td(i,j)−Nd_ro(i,j))*t1/td+Nd_ro(i,j)
を計算しても良いが、蛍光撮影のように、蓄積時間が十分長い場合には、固定パターンノイズ画像の画素値は時間に比例するとして近似してもよい。以上と同様の計算により、各蓄積時間に対応した固定パターンノイズ画像データNd_t1(i,j)〜Nd_t4(i、j)を求め各カセット対応した蛍光画像データfi1(i,j)〜fi4(i,j)より減算し、固定パターンノイズの補正を行う。
以上説明した実施例は、蛍光検出部のみの実施例について説明したが、検体DNAの増幅、蛍光標識、ハイブリダイゼーション反応、検出までの一連の動作を一気に行う遺伝子診断システムにこの検出系を組み込んだ場合にさらに効果は大きい。組み込むシステムとしては、DNA増幅システム、標識システム、ハイブリダイゼーションシステムがあり、これらをすべて組み込んでも、一部を組み込んだシステムでもよい。
本発明においては、光出力計測手段をもちいることにより、微弱な信号をより精度よく検出することが可能になる。さらに、微弱な信号を増幅させるために、ロックインアンプ等を用いたロックイン検出を利用してもよい。ロックイン検出を行う場合は、光の変調信号を作らなくてはならないが、これは、レーザー光源4で変調信号を作成する方法や、シャッター手段5で変調する方法や、別途変調用のシャッタ手段をレーザー光源4と蛍光被写体1の間に設ける方法がある。変調のための駆動信号(変調信号)はMPUボード7aに送られる。変調された光で励起された蛍光被写体は、変調された強度で蛍光を発光し、その蛍光を撮像素子3で検出する。撮像素子で検出された信号と駆動信号を参照信号としてMPUボード7で画素ごとの信号を得て、画像を形成する。処理の都合によっては、演算手段のMPUボードとロックイン検出の演算処理を行うMPUボードを別々に設けてもよい。この方法を用いれば、ホワイトノイズが低減できる。
2 カセットトレイ
3 撮像素子
4 光源
5 シャッター手段
6 光出力計測手段
7 変更手段
8 光分離ミラー
9 ビームエクステンダー
10 ビームホモジナイザー
11 拡散版
12 フォトディテクター
13 蛍光フィルター
14 撮像光学系
15 デジタルカメラ
16 搬送ステージ
17 光量計測回路
18 制御インターフェイス
19 操作パネル
Claims (12)
- 発光被写体からの発光を検出する発光検出装置であって、
前記発光被写体を照射する光源と、
前記光源からの光を遮断するシャッター手段と、
前記光源からの光を検出するための光出力計測手段と、
前記発光被写体から発光した光を検出する撮像素子と、
前記光出力計測手段の計測結果にもとづいて、設定時間を変更するための変更手段とを備えることを特徴とする発光検出装置。 - 蛍光被写体からの蛍光を検出する蛍光検出装置であって、
前記蛍光被写体を照明する光源と、
前記蛍光被写体へ向かう光を遮断するシャッター手段と、
前記シャッター手段と光源との光路間に配置された光出力計測手段と、
前記蛍光被写体の発した蛍光を検出する撮像素子と、
前記撮像素子の蓄積時間、又は前記シャッター手段の開閉時間の少なくとも一方を変更する変更手段とを備え、
前記変更手段は、前記光出力計測手段の計測結果よりノイズ画像を撮影するための蓄積時間を演算する演算手段と、
前記演算結果の前記蓄積時間で撮影したノイズ画像を用い蛍光を検出して形成した撮影画像を補正する補正手段とを有することを特徴とする蛍光検出装置。 - 前記光源は、前記蛍光被写体を励起する励起光を発し、且つ
前記蛍光被写体の発した蛍光を透過し前記撮像素子に導き、前記励起光を遮断する蛍光フィルターを有する撮像手段とを備えることを特徴とする請求項1記載の蛍光検出装置。 - 前記光源は、レーザー光源であることを特徴とする請求項1又は2のいずれか記載の蛍光検出装置。
- 前記変更手段は、メモリーに待ち時間を記憶させ、前記光源の点灯からの時間を計時し、前記待ち時間経過後、前記光源からの光出力計測を開始するための信号を送ることを特徴とする請求項1から3のいずれか記載の蛍光検出装置。
- 前記ノイズ画像の撮影は、前記蛍光被写体を配置する前で、且つ前記光源のウェイティング時間の終了後であることを特徴とする請求項1から4のいずれか記載の蛍光検出装置。
- 前記蛍光被写体は複数であり、複数の前記蛍光被写体から得られる複数の前記撮影画像を同一の前記ノイズ画像に基づき補正することを特徴とする請求項1から5のいずれか記載の蛍光検出装置。
- 予め、複数枚の画像を撮影し、前記複数枚の画像より一枚のノイズ画像を作成することを特徴とする請求項1から6のいずれか記載の蛍光検出装置。
- 前記光出力計測手段は、前記蛍光被写体への光照射中も光を蓄積可能であり、且つ前記出力計測手段からの信号に基づき、前記シャッターを閉じるための信号を変更手段に送ることを特徴とする請求項1から請求項7のいずれか記載の蛍光検出装置。
- 前記変更手段は、前記光出力計測手段からの信号により、シャッターを閉じるための信号を前記シャッター手段に送り、且つ撮像素子の蓄積を終了する信号を前記撮像素子へ送る変更手段であり、さらに、蛍光撮影の蓄積時間を計時し記憶する手段と、前記ノイズ画像を蛍光撮影時の前記蓄積時間で補正する第二の補正手段とを有することを特徴とする請求項1から8のいずれか記載の蛍光検出装置。
- 投入された生体のDNAを増幅するDNA増幅システムと、
増幅されたDNAに標識蛍光分子を結合する標識システムと、
標識されたDNAをDNAチップのプローブと結合させるハイブリダイゼーションシステムとの内の少なくとも一つのシステムを有することを特徴とする請求項1から9のいずれか記載の蛍光検出装置。 - ダーク画像を取得する装置であって、
光源からの光を検出するための光出力計測手段を備え、
前記光出力計測手段の計測結果をもとに、撮像素子の蓄積時間を変更する変更手段とを備え、
前記蓄積時間をもとに、前記撮像素子でダーク画像を取得することを特徴とする装置。
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