JP2008200051A - 細胞巨大分子合成の阻害が減少したアルファウイルスベクター - Google Patents
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Abstract
【解決手段】単離された核酸分子であって、組換えアルファウイルス粒子に作動可能に組み込まれた場合に、野生型アルファウイルスと比較して、哺乳動物細胞における発現後に宿主細胞に指向される巨大分子合成の50%阻害に到達するのに必要な時間を増加させる、改変されたアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子を含む、核酸分子。
【選択図】なし
Description
本発明は、部分的に、国立衛生研究所により認可された助成金番号AI 17377の下での政府の援助でなされた。政府は、本発明において一定の権利を有し得る。
本発明は、一般的に組換えDNA技術に関する;さらに詳細には、1つ以上の異種遺伝子産物の発現を指向するために有用な組換えベクターの開発に関する。
アルファウイルスは、トガウイルス科の一群の血清学的に関連した、節足動物に運搬されるウイルスを含む。これらのウイルスは全世界に分布しており、そして自然界では蚊から脊椎動物へのサイクルを介して存続する。鳥、齧歯類、馬、霊長類およびヒトは、アルファウイルス脊椎動物病原性物質保有者(reservoir)/宿主として規定されるものの仲間である。
簡潔に述べると、本発明は、RNAベクターレプリコン、アルファウイルスベクター構築物、真核生物重層ベクター開始系、および組換えアルファウイルス粒子を提供する。これらは、細胞巨大分子合成(例えば、タンパク質またはRNA合成)の阻害の減少、遅延、または非存在を示し、それによってCPEの発達または細胞死が減少して、遅延して、または存在せずに、タンパク質発現、遺伝子療法などのためのこれらのベクターの使用を可能にする。このようなベクターは、広範な種々のアルファウイルス(例えば、セムリキ森林ウイルス、ロスリバーウイルス、ヴェネズエラウマ脳炎ウイルス、またはシンドビスウイルス)から構築され得、そして多数の異種配列(例えば、タンパク質に対応する配列、アンチセンスRNAに対応する配列、非コードセンスRNA配列に対応する配列、またはリボザイムに対応する配列)を発現するように設計され得る。
含む。
・本発明はさらに、以下を提供し得る:
・(項目1) 単離された核酸分子であって、組換えアルファウイルス粒子に作動可能に組み込まれた場合に、野生型アルファウイルスと比較して、哺乳動物細胞における発現後に宿主細胞に指向される巨大分子合成の50%阻害に到達するのに必要な時間を増加させる、改変されたアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子を含む、核酸分子。
・(項目2) 単離された核酸分子であって、組換えアルファウイルス粒子に作動可能に組み込まれた場合に、野生型と比較して減少したレベルのベクター特異的RNA合成を有し、そして野生型組換えアルファウイルス粒子と比較して同一またはより大きいレベルの、ウイルス連結領域プロモーターから転写されたRNAによりコードされるタンパク質を有する、アルファウイルス非構造タンパク質遺伝子を含む、核酸分子。
・(項目3) アルファウイルスベクター構築物であって、cDNAからのインビトロでのウイルスRNAの合成を開始する5’プロモーター、アルファウイルスRNAの転写を開始する5’配列、項目1または2に記載の核酸分子を含む4つ全てのアルファウイルス非構造タンパク質を作動可能にコードする核酸分子、アルファウイルスRNAポリメラーゼ認識配列、および3’ポリアデニレート域を含む、アルファウイルスベクター構築物。
・(項目4) 真核生物系において翻訳可能なアルファウイルスRNAベクターレプリコンであって、アルファウイルスRNAの転写を開始する5’配列、項目1または2に記載の核酸分子を含む4つ全てのアルファウイルス非構造タンパク質を作動可能にコードする核酸分子、アルファウイルスRNAポリメラーゼ認識配列、および3’ポリアデニル域を含む、アルファウイルスRNAベクターレプリコン。
・(項目5) 薬学的組成物であって、項目4に記載のアルファウイルスRNAベクターレプリコンおよび薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤を含む、薬学的組成物。
・(項目6) 組換えアルファウイルス粒子であって、1つ以上のアルファウイルス構造タンパク質、脂質エンベロープ、および項目4に記載のRNAベクターレプリコンを含む、組換えアルファウイルス粒子。
・(項目7) 上記アルファウイルス構造タンパク質および脂質エンベロープが異なるアルファウイルス種に由来する、項目6に記載の組換えアルファウイルス粒子。
・(項目8) 項目6または7に記載の組換えアルファウイルス粒子および薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤を含む、薬学的組成物。
・(項目9) 項目6または7に記載の組換えアルファウイルス粒子で感染させた、宿主細胞。
・(項目10) ゲノム核酸またはRNAベクターレプリコン核酸を実質的に全く含まない、トガウイルスキャプシド粒子。
・(項目11) 1つ以上のアルファウイルス糖タンパク質を含む脂質エンベロープをさらに含む、項目10に記載のキャプシド粒子。
・(項目12) アルファウイルスエンベロープをさらに含む、項目10に記載のキャプシド粒子。
・(項目13) 上記キャプシドが、アルファウイルス、ルビウイルス、フラビウイルス、およびペスチウイルスからなる群より選択されるトガウイルスに由来する、項目10に記載のキャプシド粒子。
・(項目14) 項目10〜13のいずれか1項に記載のキャプシド粒子および薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤を含む、薬学的組成物。
・(項目15) アルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、DNAからのRNAの合成を開始する5’プロモーター、1つ以上の機能的なアルファウイルス構造タンパク質をコードする核酸分子、発現カセットの転写に作動可能に連結された選択マーカー、および転写終結を制御する3’配列を含む、アルファウイルス構造タンパク質発現カセット。
・(項目16) アルファウイルスパッケージング細胞株であって、項目15に記載のアルファウイルス構造タンパク質発現カセットを含む細胞を含む、アルファウイルスパッケージング細胞株。
・(項目17) アルファウイルスプロデューサー細胞株であって、安定に形質転換されたアルファウイルス構造タンパク質発現カセット、ならびに項目4に記載のRNAベクターレプリコン、項目3に記載のアルファウイルスベクター構築物、および項目18に記載の真核生物重層ベクター開始系からなる群より選択されるベクターを含む細胞を含む、アルファウイルスプロデューサー細胞株。
・(項目18) 真核生物重層ベクター開始系であって、cDNAからのアルファウイルスRNAのインビボでの5’合成を開始し得る5’プロモーター、アルファウイルスRNAの転写を開始する、上記5’プロモーターに続く配列、項目1または2に記載の核酸分子を含む4つ全てのアルファウイルス非構造タンパク質を作動可能にコードする核酸分子、アルファウイルスRNAポリメラーゼ認識配列、および3’ポリアデニレート域を含む、真核生物重層ベクター開始系。
・(項目19) 項目18に記載の真核生物重層ベクター開始系を含む、宿主細胞。
・(項目20) 項目18に記載の真核生物重層ベクター開始系および薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤を含む、薬学的組成物。
・(項目21) 選択された異種配列を脊椎動物または昆虫に送達するための方法であって、項目3に記載のアルファウイルスベクター構築物、項目4に記載のアルファウイルスRNAベクターレプリコン、項目6に記載の組換えアルファウイルス粒子、または項目18に記載の真核生物重層ベクター開始系を、脊椎動物または昆虫に投与する工程を包含する、方法。
・(項目22) 組換えアルファウイルス粒子を作製する方法であって、以下の工程:
(a)項目18に記載の真核生物重層ベクター開始系、項目4に記載のRNAベクターレプリコン、および項目6に記載の組換えアルファウイルスベクター粒子からなる群より選択されるベクターを、組換えアルファウイルス粒子の生成を可能にするに十分な条件下および時間で、項目16に記載のパッケージング細胞の集団に導入する工程;ならびに
(b)組換えアルファウイルス粒子を収集する工程、
を包含する、方法。
・(項目23) 選択されたタンパク質を作製する方法であって、以下の工程:
(a)選択された異種タンパク質をコードし、そして、項目18に記載の真核生物重層ベクター開始系、項目4に記載のアルファウイルスRNAベクターレプリコン、および項目6に記載の組換えアルファウイルスベクター粒子からなる群より選択されるベクターを、上記選択されたタンパク質の生成を可能にするに十分な条件下および時間で、項目16に記載のパッケージング細胞の集団に導入する工程;ならびに
(b)上記パッケージング細胞により生成されるタンパク質を収集する工程、
を包含する、方法。
・(項目24) 選択されたタンパク質を作製する方法であって、項目18に記載の真核生物重層ベクター開始系を、上記選択されたタンパク質の発現を可能にするに十分な条件下および時間で、宿主細胞に導入する工程を包含する、方法。
・(項目25) 項目4に記載のアルファウイルスRNAベクターレプリコンを含む、宿主細胞株。
以下の用語を明細書を通して使用する。他に示されていなければ、これらの用語を以下のように定義する:
「ゲノムRNA」とは、標的細胞内でインビボにおけるそれ自身の増幅または自己複製を指向するのに必要な遺伝情報の全てを含むRNAをいう。それ自身の複製を指向するために、RNA分子は、1)1つ以上のポリメラーゼ、レプリカーゼ、あるいはウイルスもしくは宿主細胞由来タンパク質、核酸、またはリボヌクレオタンパク質と相互作用し、RNA増幅過程を触媒し得る他のタンパク質をコードし得;そして2)複製に必要なシスRNA配列(これは、その自己コード化タンパク質、または非自己コード化細胞由来タンパク質、核酸もしくはリボヌクレオタンパク質、あるいはこれらの任意の成分間の複合体により、複製過程で結合され得る)を含み得る。アルファウイルス由来ゲノムRNA分子は、以下の順でのエレメントを含むべきである:複製のためにシスで必要な5’ウイルスまたは欠陥干渉性RNA配列(単数または複数)、発現されたとき生物学的に活性なアルファウイルス非構造タンパク質(例えば、nsP1、nsP2、nsP3、nsP4)をコードする配列、複製のためにシスで必要な3’ウイルス配列、およびポリアデニレート域。アルファウイルス由来ゲノムRNAベクターレプリコンはまた、特定の実施態様において、サブゲノムフラグメントのウイルス転写を防ぐか、増大させるか、または減少させるように改変され得るウイルスサブゲノム「連結領域」プロモーター、および発現されたとき生物学的に活性なアルファウイルス構造タンパク質(例えば、C、E3、E2、6K、E1)をコードする配列を含み得る。一般に、用語ゲノムRNAは、+極の分子、または「メッセージ」センスをいい、そしてゲノムRNAは、任意の公知の天然に存在するアルファウイルスとは異なる長さであり得る。好ましい実施態様において、ゲノムRNAは、任意のアルファウイルス構造タンパク質(単数または複数)をコードする配列を含まず、むしろそれらの配列は、異種配列と置換される。ゲノムRNAが組換えアルファウイルス粒子中にパッケージングされる場合、これは、アルファウイルス構造タンパク質と相互作用を開始させるように作用して粒子形成に至る1つ以上の配列を含まなければならず、好ましくは、用いられるパッケージング系により効率的にパッケージングされる長さである。
上記のように、本発明は、例えば、RNAベクターレプリコン、アルファウイルスベクター構築物、真核生物重層ベクター開始系、および組換えアルファウイルス粒子を含む、新規な遺伝子送達ビヒクルを提供する。簡略には、プラスミドDNA、インビトロで転写されたRNA、または粒子に基づく、本発明のベクターの細胞への導入は、野生型由来アルファウイルスベクターの発現レベルと比較して等価であるかまたは高いレベルの異種遺伝子発現をもたらす。しかし、予想外に、合成されるベクター特異的RNAのレベルは、本発明の遺伝子送達ビヒクルを含む培養細胞においては、野生型由来ベクターと比較して少なくとも約5〜10倍低い。さらに、このような遺伝子送達ビヒクルは、宿主細胞中への導入の後に、野生型由来ベクターと比較して阻害が減少した、遅延した、または存在しない、宿主細胞に指向される巨大分子合成を示す。
上記のように、本発明は、アルファウイルスに基づく広範囲な種々のベクター(例えば、RNAベクターレプリコン、アルファウイルスベクター構築物、真核生物重層ベクター開始系、および組換えアルファウイルス粒子)ならびにこのようなベクター構築物および粒子を利用するための方法を提供する。簡略には、上記のベクターの調製における使用のために適切な野生型アルファウイルスをコードする配列は、本明細書中に提供される開示が与えられれば、天然に存在する供給源または寄託所(例えば、アメリカンタイプカルチャーコレクション, Rockville, Maryland)から容易に入手され得る。さらに、野生型アルファウイルスは、野生型アルファウイルスに感染した細胞における宿主細胞に指向される巨大分子合成のレベルと、本発明の遺伝子送達ビヒクルを含む細胞における宿主細胞に指向される巨大分子合成のレベルとを比較するために利用され得る。
アルファウイルスに基づくベクターからのインビボ異種遺伝子発現の持続は、いくつかの機構(宿主細胞に指向される巨大分子合成の阻害を含む)により影響される。しかし、本発明の前には、非細胞変性表現型をもたらす、コードまたは非コードベクターウイルス特異的配列の変化を選択するかまたは同定するための明白な方法は存在しなかった。従って、本発明の1つの局面では、宿主細胞に指向される巨大分子合成の阻害が減少しているかまたは存在しない、アルファウイルス由来遺伝子送達ビヒクルを単離および/または構築するための方法が提供される。
a.DI粒子を含むウイルスストックからの選択
非細胞変性性アルファウイルス改変体を単離するための1つのアプローチは、野生型ウイルス調製物における欠陥妨害(DI)粒子の存在を利用する。簡略には、特定のRNAウイルス(例えば、ラブドウイルス(例えば、水疱性口内炎ウイルス)およびアルファウイルス(例えば、シンドビスウイルスおよびセムリキ森林ウイルス))は高度に細胞変性性であるが、これらはそれにもかかわらずDI粒子の存在下で培養細胞において長期間持続した感染を確立する。定義によれば、DI粒子は、野生型ウイルスに由来し、そしてDIによる自律的複製を防ぐ野生型ゲノムからの1つ以上の変異(例えば、欠失、再編、ヌクレオチド置換など)を含む。一般に、DI粒子のゲノムは、野生型ウイルスと比較して小さく、かつ複雑度が低く、そしてタンパク質をコードする領域を欠失しているが、複製のためにシスで必要とされる領域は維持している。このようなシス配列は、しばしば重複および/または再編されている。特定のアルファウイルス(例えば、シンドビスウイルス)の場合、DI RNAゲノムの配列および編成は分析されており、そして野生型ウイルスゲノムの一番端の3’末端由来の最小限50ntを含み、そしてその5’末端では、野生型配列または細胞tRNA(例えば、tRNAAsp)配列のいずれかをウイルス配列に加えて含むことが見出されている。全ての場合において、変異DIゲノムの増殖および維持は、感染細胞において親のヘルパーウイルスの同時存在を必要とする。しかし、それらの遺伝構造の結果として、DIゲノム複製は、その野生型対応物に対して非常に優れており、そして比較して豊富である。この特徴は、野生型ゲノム複製の妨害、感染性ウイルスの非存在または低レベルの生成、および細胞の長期間存続する感染の確立をもたらす。
欠陥妨害粒子を含むウイルスストックからの選択に加えて、本発明での使用に適切なウイルス改変体は、精製ウイルスストック(DI粒子を含まない)から入手され得る。このウイルスストックは、感受性培養細胞の感染の前にランダム変異誘発に供されるか、または培養細胞でのRNA複製の間に非特異的変異を作製させるかのいずれかである。簡略には、最初のウイルスストックは、天然の単離株またはそれに由来する生物学的改変体として入手され得るか、または培養細胞を、ゲノムcDNAクローンまたはインビトロで転写されたRNAを含む感染性核酸分子でトランスフェクトすることにより作製され得る。所望の場合、次いで、ウイルスストックは、物理的または化学的変異誘発に供され得る(好ましいとはいえ、このような変異誘発は必要ではない)。化学的変異誘発の場合、好ましい実施態様は、容易に利用され得る変異誘発剤(例えば、亜硝酸、5−アザシチジン、N−メチル−N’−ニトロ−N−ニトロソグアニジン、またはエチルメタンスルホン酸(Sigma, St. Louis, MO))をウイルス感染の前に利用する。ランダム変異誘発の後に、特異的選択手順を適用して、以下の実施例2により詳細に記載するような所望の表現型を有するウイルス改変体が単離される。
関連するアプローチにおいて、変異は、ウイルスストックを用いずに、むしろウイルスのクローン化ゲノムcDNAを用いて入手され得る。このウイルスは、その後、感染性ウイルスRNAをインビトロで(例えば、シンドビスウイルス(Riceら, J. Virol. 61: 3809−3819, 1987; Dubenskyら, J. Virol. 70: 508−519, 1996)、SFV(Liljestromら, J.Virol. 65: 4107−4113, 1991), VEE(Davisら, Virology 183: 20−31, 1991)、ロスリバーウイルス(Kuhnら, Virology 182: 430−441, 1991)、ポリオウイルス(Van Der Werfら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 2330−2334, 1986))またはインビボで(シンドビスウイルス(Dubenskyら、同書)、ポリオウイルス(RacanielloおよびBaltimore, Science 214: 916−919, 1981))転写するために使用され得る。簡略には、感染性核酸は、直接に、または上記の方法の1つを用いて行った変異誘発の後のいずれかに、感受性培養細胞(例えば、ヒト起源の細胞を含む、哺乳動物細胞)中に導入される。あるいは、ベクター核酸は、粒子中に最初にパッケージングされ得、そして粒子は選択のために標的細胞集団にベクターを送達するために使用され得る。続いて、所望の表現型を有するウイルス改変体を単離するための特異的選択手順が適用され、そして以下に記載される。
別のアプローチにおいて、変異は、ウイルス由来発現ベクターの任意の領域(調節領域、非翻訳領域、またはタンパク質コード遺伝子領域を含む)において作製され得る。例えば、本発明の1つの局面において、宿主細胞に指向される巨大分子合成の阻害が低減しているかまたは存在しないウイルス改変体を選択するための方法が提供される。この方法は、(a)細胞に真核生物重層ベクター開始系、RNAベクターレプリコン、または免疫原性細胞表面タンパク質の発現を行う(ベクター含有細胞の検出に適切な)組換えアルファウイルス粒子、あるいは選択マーカー(薬物または非薬物マーカーのいずれかであって、ここで、非ベクター含有細胞は、例えば、ネオマイシン、ハイグロマイシン、フレオマイシン、gpt、ピューロマイシン、またはヒスチジノールのような薬物の添加の際に殺傷される)を導入する工程;(b)所望の表現型を示すベクター含有細胞を選択する条件下でそしてそれに十分な時間で細胞をインキュベートまたは培養する工程;その後、(c)所望の表現型のベクターを含む細胞を単離する工程、および(d)原因の変異についてベクターを分析する工程を含む。
本明細書中でより詳細に議論するように、本明細書中に提供される方法を利用して選択または作製されたウイルス改変体は、所望の表現型を示す広範囲な種々の組換え遺伝子送達ビヒクルを構築するために利用され得る。特定の実施態様では、遺伝子送達ビヒクルは、nsP2遺伝子のLeu−Xaa−Pro−Gly−Gly(「LXPGG」)モチーフ内に変異を含む。簡略には、nsP2遺伝子の公開された配列が利用可能であるアルファウイルスについては、高度に保存されたアミノ酸モチーフ−Leu−Xaa−Pro−Gly−Gly−(「LXPGG」)が観察される。標準的なタンパク質モデリングアルゴリズム(ChouおよびFasman, Adv. Enzym. 47: 45−148, 1978)により推定されたように、このモチーフの残基は、構造中におそらくβターンを含む。シンドビスウイルスにおけるnsP2のプロリン726は、このモチーフの中心の残基である。他のアルファウイルスにおける対応するモチーフを以下の表に例示する。
上記のように、本発明は、アルファウイルスに由来するDNAおよびRNAの両方の構築物を提供する。簡略には、本発明の1つの局面では、cDNAからのウイルスRNAの合成をインビトロで開始する5’プロモーター、アルファウイルスRNAの転写を開始する5’配列、4つの全てのアルファウイルス非構造タンパク質を作動可能にコードする核酸分子(上記のような単離された核酸分子、アルファウイルスRNAポリメラーゼ認識配列、および3’ポリアデニレート域を含む)を含むアルファウイルスベクター構築物が提供される。他の局面では、アルファウイルスRNAの転写を開始する5’配列、4つ全てのアルファウイルス非構造タンパク質を作動可能にコードする核酸分子(上記の単離された核酸分子、アルファウイルスRNAポリメラーゼ認識配列、および3’ポリアデニレート域を含む)を含むRNAベクターレプリコンが提供される。上記の好ましい実施態様では、上記の構築物はさらに、ウイルス連結領域を含む。これらの局面のそれぞれは、以下でより詳細に議論される。
上記のように、本発明の特定の実施態様において、インビトロ転写のプロセスによりcDNAからのウイルスRNAの合成を開始する5’プロモーター(例えば、DNA依存性RNAポリメラーゼプロモーター)を含むアルファウイルスベクター構築物が提供される。好ましい実施態様では、このようなプロモーターは、例えば、バクテリオファージT7、T3、およびSP6 RNAポリメラーゼプロモーターを含む。同様に、インビボで(すなわち細胞内で)cDNAからのウイルスRNAの合成を開始する5’プロモーター(例えば、DNA依存性RNAポリメラーゼプロモーター)を含む真核生物重層ベクター開始系が提供される。特定の実施態様では、このようなRNAポリメラーゼプロモーター(アルファウイルスベクター構築物または真核生物重層ベクター開始系のいずれか)は、原核生物および真核生物の両方に由来し得、そして例えば、細菌のβ−ガラクトシダーゼおよびtrpEプロモーター、ならびに真核生物ウイルスのシミアンウイルス40(SV40)(例えば、初期または後期)、サイトメガロウイルス(CMV)(例えば、即時型)、モロニーマウス白血病ウイルス(MoMLV)またはラウス肉腫ウイルス(RSV)LTR、および単純ヘルペスウイルス(HSV)(チミジンキナーゼ)のプロモーターを含む。
上記のように、好ましい実施態様では、本発明のアルファウイルスベクター構築物およびRNAベクターレプリコンは、アルファウイルスRNAの転写を開始し得る5’配列(5’末端CSEまたは5’シス複製配列ともいう)を含む。このような配列の代表例は、野生型シンドビスウイルスのヌクレオチド1〜60、および塩基150〜210に沿ったより少ない範囲のヌクレオチド、tRNAAspのヌクレオチド10〜75(アスパラギン酸、Schlesingerら、米国特許第5,091,309号)、ならびに転写を開始する他のアルファウイルス由来の5’配列を含む。−鎖ゲノムコピーの3’末端に対応する配列、nsPレプリカーゼ複合体により結合される配列、およびおそらくさらなる宿主細胞因子(ここからポジティブ鎖ゲノムRNAの転写が開始される)は、これらの配列相補物である。
本明細書中に提供されるアルファウイルスベクター構築物およびRNAベクターレプリコンはまた、4つ全てのアルファウイルス非構造タンパク質(上記の所望の表現型を提供する配列を含む)をコードする配列を必要とする。簡略には、アルファウイルス非構造タンパク質をコードする広範な種々の配列は、本明細書中に明白に提供されるものに加えて、本発明において利用され得、従って、用語「アルファウイルス非構造タンパク質」の範囲内にあると判断される。例えば、遺伝コードの縮重のために、1つより多くのコドンが、所定のアミノ酸をコードし得る。従って、アルファウイルス非構造タンパク質をコードする広範な種々の核酸配列が作製され得る。さらに、多数の任意の位置でのアミノ酸の置換、付加、または欠失は、機能的または生物学的に活性な非構造タンパク質を依然として提供し得る。本発明の状況においては、アルファウイルス非構造タンパク質は、これらがベクター構築物の自己複製(すなわち、ウイルス核酸の複製および必然的にではないが感染性ウイルスの生成)を促進する場合、生物学的に活性であると判断され、そして経時的に行われる代謝的標識またはRNase保護アッセイにより容易に決定され得る。このような誘導体を作製するための方法は、本明細書中に提供される開示が与えられれば、当業者により容易に達成され得る。
非構造タンパク質1は、−鎖RNA合成の開始(または継続)のために必要とされる。これはまた、転写の間に、ゲノムおよびサブゲノムのアルファウイルスRNAの5’末端のキャッピングにおいて役割を果たす。なぜなら、nsP1は、メチルトランスフェラーゼ活性(MiおよびStollar, Vir. 184: 423−427, 1991)およびグアニルトランスフェラーゼ活性(StraussおよびStrauss, Microbiol. Rev. 58(3): 491−562, 1994)の両方を有するからである。nsP1はまた、nsP2のプロテイナーゼ活性を調節する。なぜなら、nsP1含有ポリタンパク質は、nsP2とnsP3との間で非効率的に切断されるからである(de Grootら, EMBO J. 9: 2631−2638, 1990)。
非構造タンパク質2は、ウイルスRNAの複製および非構造ポリタンパク質のプロセシングに関与する多機能性タンパク質である。このタンパク質のN末端ドメイン(最初の460アミノ酸にほぼまたがる)は、RNA複製および転写の間に二重鎖のねじれを戻すのに活性であるヘリカーゼであると考えられる。本発明によるベクターにおける26SサブゲノムmRNA(目的の遺伝子(単数または複数)をコードする)の合成は、機能的nsP2を必要とする。シンドビスウイルスのアミノ酸残基460〜807の間のnsP2のC末端ドメインは、非構造ポリタンパク質を、nsP1/nsP2、nsP2/nsP3、およびnsP3/nsP4連結部の間でトランスおよびシスでタンパク質分解により切断する。アルファウイルスnsP2 C末端ドメインの一次配列のアラインメントは、nsP2がパパイン様プロテイナーゼであることを示唆する(HardyおよびStrauss, J. Virol. 63: 4653−4664, 1988)。
非構造タンパク質nsP3は、ウイルス複製におけるそれらの正確な役割は十分には理解されていないとはいえ、2つの異なるドメインを含む。種々のアルファウイルスにおいてN末端ドメインは、322〜329残基長の範囲であり、そして任意の2つのアルファウイルス間で最小51%のアミノ酸配列同一性を示す。しかし、C末端ドメインは、公知のアルファウイルス間で長さも配列も保存されておらず、そして複数の変化が許容される(Liら, Virology, 179: 416−427)。タンパク質は、高度にリン酸化された状態で複製複合体と会合して見出される。そのゲノム中にnsP3/nsP4連結部の間でオパール終結コドンを含むアルファウイルスにおいて、オパール終結シグナルの読み通しが存在するか否かに依存して、2つの異なるタンパク質が生成される。読み通しは、ポリタンパク質の切断後に7個のさらなるカルボキシ末端アミノ酸を含むnsP3タンパク質を生じる。nsP3がウイルスRNA合成の何らかの能力に必要とされることは明白である。なぜなら、このタンパク質の特定の変異体はRNAネガティブであり、そしてP123ポリタンパク質は−鎖RNA合成に必要とされるからである。
nsP4は、ウイルスにコードされるRNAポリメラーゼであり、そしてこのような酵素に特有のGDDモチーフを含む(KamerおよびArgos, Nucleic Acids Res. 12: 7269−7282, 1984)。従って、nsP4は、アルファウイルスRNA複製に不可欠である。nsP4の濃度は、感染細胞において厳密に調節される。ほとんどのアルファウイルスにおいて、nsP4の翻訳は、nsP3コード領域とnsP4コード領域との間のオパールコドンの読み通しを必要とし、他の非構造タンパク質と比較して細胞内レベルが低い。さらに、nsP4の大半は、N末端規則経路(Gondaら, J. Biol. Chem. 264: 16700−16712, 1989)による分解を通して代謝的に不安定である。しかし、分解シグナルを隠す複製複合体とのその会合に起因して、いくらかのnsP4は安定である。従って、アミノ末端残基を改変することによる酵素の安定化は、本明細書中に記載されるベクターによりコードされるタンパク質のより長期間の発現を促進するのに有用であることを証明し得る。安定化アミノ末端残基は、メチオニン、アラニン、およびチロシンを含む。
アルファウイルスウイルス連結領域は、通常、サブゲノムmRNAの転写開始を制御する;従って、このエレメントはまた、サブゲノムmRNAプロモーターとも呼ばれる。シンドビスウイルスの場合、通常のウイルス連結領域は、代表的には、ほぼヌクレオチド数7579で始まり、そして少なくともヌクレオチド数7612を通って連続する(そしておそらくそれを越える)。最小では、ヌクレオチド7579〜7602(5’−ATC TCT ACG GTG GTC CTA AAT AGT−配列番号1)が、サブゲノムフラグメントの転写に必要であると考えられる。この領域(ヌクレオチド7579〜7602)を、本明細書中以下で「最小の連結領域コア」という。
上記のように、本発明のアルファウイルスベクター構築物またはRNAベクターレプリコンはまた、アルファウイルスRNAポリメラーゼ認識配列(「アルファウイルスレプリカーゼ認識配列」、「3’末端CSE」、または「3’シス複製配列」ともいう)を含むべきである。簡略には、ポジティブ鎖ゲノムRNAの3’末端領域に位置するアルファウイルスRNAポリメラーゼ認識配列は、このウイルスがネガティブ鎖の合成によって複製を始める認識部位を提供する。アルファウイルスRNA ポリメラーゼ認識配列として、広範な種々の配列が利用され得る。例えば、1つの実施態様において、ポリメラーゼ認識が、認識配列としてなお機能し得る最小の領域(例えば、ヌクレオチド11,684〜11,703)まで端が切断されているシンドビスウイルスベクター構築物が利用され得る。本発明の別の実施態様において、E1 sP遺伝子の下流の非翻訳領域全体からウイルスゲノムの3’末端までがポリメラーゼ認識部位を含む(例えば、ヌクレオチド11,382〜11,703)、シンドビスウイルスベクター構築物が利用され得る。
全長ゲノムアルファウイルスcDNAクローンのサイズのため、インビトロでの全長のキャップされたRNA分子の転写は、むしろ効率が悪い。これは、トランスフェクトされたRNAのインビトロ転写量に対して、ウイルスの感染中心に関して低いトランスフェクション効率をもたらす(プラーク形成により測定される)。このような効率の悪さはまた、インビトロでのアルファウイルス発現ベクターの転写に関連する。従って、感染サイクルを開始する能力または異種配列の発現を指向する能力について候補cDNAクローンおよび他のアルファウイルスcDNA発現ベクターを試験することは、cDNAクローンが、DNA分子として感受性細胞にトランスフェクトされ、これが次いでインビボでウイルスRNAの合成を指向する場合、非常に促進され得る。
本発明の別の局面では、真核生物標的細胞に感染し得るRNAアルファウイルスベクターを含有する組換えアルファウイルス粒子の作製が記載される。簡略には、このような組換えアルファウイルス粒子は、一般に、本明細書中に記載されるような1つ以上のアルファウイルス構造タンパク質、脂質エンベロープ、およびRNAベクターレプリコンを含む。
上記のように、本発明の遺伝子送達ビヒクルにより、広範な種々のヌクレオチド配列が担持および発現され得る。好ましくは、ヌクレオチド配列は、生存可能な(viable)ウイルスの生成を可能にするのに十分なサイズであるべきである。本発明の状況では、組換えアルファウイルス粒子による任意の測定可能な力価(例えば、プラークアッセイ、ルシフェラーゼアッセイ、またはβ−ガラクトシダーゼアッセイによる)の感染性ウイルスの適切な感受性単層での生成またはRNAもしくはDNAベクターにより生成される異種遺伝子の検出可能なレベルの発現は、「生存可能なウイルスの生成」であると考えられる。これは最小の場合、さらなる異種配列を全く含有しないアルファウイルスベクター構築物であり得る。しかし他の実施態様において、ベクター構築物はさらなる異種配列または外来配列を含有し得る。好ましい実施態様において、異種配列は、少なくとも約100塩基、2kb、3.5kb、5kb、7kbの異種配列、または少なくとも約8kbの異種配列さえも含み得る。
本発明の1つの実施態様において、異種配列はリンホカインをコードする。簡略には、リンホカインは、免疫エフェクター細胞を増殖、活性化または分化するように作用する。リンホカインの代表例としては、γインターフェロン、腫瘍壊死因子、IL−1、IL−2、IL−3、IL−4、IL−5、IL−6、IL−7、IL−8、IL−9、IL−10、IL−11、IL−12、IL−13、IL−14、IL−15、GM−CSF、 CSF−1、およびG−CSF が挙げられる。
本発明の別の実施態様において、異種配列はトキシンをコードする。簡略には、トキシンは細胞の増殖を直接阻害するように作用する。トキシンの代表例は、リシン(Lambら、Eur. J. Biochem. 148 : 265−270, 1985) 、アブリン (Woodら、Eur. J. Biochem. 198 : 723−732, 1991 ; Evensenら、J. of Biol. Chem. 266 : 6848−6852, 1991 ; Collinsら、J. of Biol. Chem. 265 : 8665−8669, 1990 ; Chenら、Fed. of Eur. Biochem Soc. 309 : 115−118, 1992)、ジフテリアトキシン(Twetenら、J. Biol. Chem. 260 : 10392−10394, 1985) 、コレラトキシン(Mekalanosら、Nature 306 : 551−557, 1983 ; Sanchez およびHolmgren, PNAS 86 : 481−485, 1989) ゲロニン(gelonin) (Stirpeら、J. Biol. Chem. 255 : 6947−6953, 1980) 、アメリカヤマゴボウ(Irvin, Pharmac. Ther. 21 : 371−387, 1983) 、抗ウイルスタンパク質(Barbieriら、Biochem. J. 203 : 55−59, 1982 ; Irvinら、Arch. Biochem. & Biophys. 200 : 418−425, 1980 ; Irvin, Arch. Biochem. & Biophys. 169 : 522−528, 1975) 、トリチン(tritin) 、赤痢菌トキシン(Calderwoodら、PNAS 84 : 4364−4368, 1987 ; Jacksonら、Microb. Path. 2 : 147−153, 1987)、シュードモナス外毒素A(Carroll および Collier, J. Biol. Chem. 262 : 8707−8711, 1987)、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(HSVTK) (Fieldら、J. Gen. Virol. 49 : 115−124, 1980)、およびE.coli.グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼを含む。
本発明の他の実施態様において、異種配列はプロドラッグ変換酵素をコードする。簡略には、本発明の状況で利用されるプロドラッグ変換酵素とは、ほとんどまたは全く細胞傷害性のない化合物を毒性産物(プロドラッグ)に活性化する遺伝子産物を意味する。このような遺伝子産物の代表例は、HSVTKおよびVZVTK(ならびにそれらのアナログおよび誘導体)を含み、これらは特定のプリンアラビノシドおよび置換ピリミジン化合物を選択的にモノリン酸化して、これらを細胞傷害性または細胞増殖抑制代謝物に変換する。さらに詳しくは、薬物であるガンシクロビル、アシクロビルまたはそれらの任意のアナログ(例えば、FIAU、FIAC、DHPG) のHSVTKへの曝露は、この薬物を対応する活性ヌクレオチド三リン酸形態にリン酸化する。
本発明の別の実施態様において、異種配列はアンチセンス配列である。簡略には、アンチセンス配列はRNA転写産物に結合するように設計され、これにより特定のタンパク質の細胞性合成を防止するか、または細胞によるこのRNA配列の使用を防止する。このような配列の代表例は、アンチセンスチミジンキナーゼ、アンチセンスジヒドロ葉酸レダクターゼ(MaherおよびDolnick、Arch. Biochem. & Biophys. 253 : 214−220, 1987 ; Bzikら、PNAS 84 : 8360−8364, 1987)、アンチセンスHER2(Coussensら、Science 230 : 1132−1139, 1985)、アンチセンスABL (Fainsteinら、Oncogene 4 : 1477−1481, 1989) 、アンチセンスMyc (Stantonら、Nature 310 : 423−425, 1984) およびアンチセンスras、ならびに任意の細胞周期シグナル伝達成分(例えば、サイクリン、サイクリン依存性キナーゼ、サイクリン依存性阻害剤)またはヌクレオチド生合成経路の任意の酵素をブロックするアンチセンス配列を含む。さらに本発明の他の実施態様において、インターフェロンおよび2ミクログロブリンに対するアンチセンス配列は、免疫応答を減少させるために利用され得る。
本発明の他の局面において、宿主細胞の感染によりリボザイムを生成する遺伝子送達ビヒクルが提供される。簡略には、リボザイムは特異的RNAを切断するために使用され、そして1つの特異的RNA配列のみに作用し得るように設計される。一般的には、リボザイムの基質結合配列は10〜20ヌクレオチド長である。この配列の長さは、標的RNAとハイブリダイズし、そして切断されたRNAからリボザイムを解離するのを可能にするのに十分である。
本発明の他の局面において、広範な種々のタンパク質または他の細胞構成成分が本明細書中に提供される遺伝子送達ビヒクルに担持および/または発現され得る。このようなタンパク質の代表例は、例えばウイルス、細菌、寄生体、または真菌中に見いだされる、天然のまたは改変された細胞成分、ならびに外来タンパク質または細胞構成成分を含む。
1つの実施態様において、免疫原性で非ガン原性の、改変された細胞成分の発現を指向する遺伝子送達ビヒクルが提供される(例えば、WO 93/10814を参照のこと)。本明細書において利用される場合、用語「免疫原性」とは、適切な条件下で免疫応答を引き起こし得る改変された細胞成分をいう。この応答は細胞媒介性でなければならず、そして体液性応答もまた含み得る。用語「非ガン原性」とは、ヌードマウスにおいて細胞形質転換を引き起こさないかまたはガン形成を誘導しない、改変された細胞成分をいう。用語「改変された細胞成分」とは、細胞をガン原性にすることに関連するか、またはガン原性細胞に一般に関連するが細胞をガン原性にすることに必要でも必須でもないタンパク質および他の細胞構成成分をいう。
本発明の他の局面において、外来生物または他の病原性物質からの抗原の免疫原性部分の発現を指向するベクターが提供される。このような抗原の代表例は、細菌性抗原(例えば、E.coli、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、マイコバクテリウムなど)、真菌性抗原、寄生体抗原、およびウイルス抗原(例えば、インフルエンザウイルス、ネコ白血病ウイルス(「FeLV」)、ネコ免疫不全症ウイルス(「FIV」)またはヒト免疫不全症ウイルス(「HIV」)のような免疫不全症ウイルス、A型、B型、およびC型肝炎ウイルス(それぞれ、「HAV」、「HBV」、および「HCV」)、ヒトパピローマウイルス(「HPV」)、エプスタインバーウイルス(「EBV」)、単純ヘルペスウイルス(「HSV」)、ハンタウイルス、TTLVI、HTLVIIおよびサイトメガロウイルス(「CMV」)を含む。本発明の状況で利用される場合、「免疫原性部分」とは、適切な条件下で免疫応答(すなわち、細胞性または体液性)を引き起こし得る各抗原の部分をいう。「部分」とは種々のサイズであり得るが、好ましくは少なくとも9アミノ酸の長さであり、そして抗原全体を含み得る。細胞媒介性免疫応答は、主要組織適合性遺伝子複合体(「MHC」)クラスIの提示、MHCクラスIIの提示、またはその両方を介して媒介され得る。
上記のタンパク質をコードする配列は、種々の供給源(例えば、アメリカンタイプカルチャーコレクション(ATCC 、Rockville、MD)のような寄託機関、またはBritish Bio−Technology Limited (Cowley、Oxford、England)のような商業的供給源を含む)から容易に得られ得る。代表例は、BBG12 (127アミノ酸の成熟タンパク質をコードするGM−CSF遺伝子を含有する);BBG6(γインターフェロンをコードする配列を含有する);ATCC No.39656 (TNFをコードする配列を含有する);ATCC No.20663(αインターフェロンをコードする配列を含有する);ATCC No.31902およびNo.39517(βインターフェロンをコードする配列を含有する);ATCC No.67024(インターロイキン−1bをコードする配列を含有する);ATCC No.39405、No.39452、No.39516、No.39626、およびNo.39673(インターロイキン−2をコードする配列を含有する);ATCC No.59399、No.59398、およびNo.67326(インターロイキン−3をコードする配列を含有する);ATCC No.57592(インターロイキン−4をコードする配列を含有する);ATCC No.59394およびNo.59395(インターロイキン−5をコードする配列を含有する);ならびにATCC No.67153(インターロイキン−6をコードする配列を含有する)を含む。
本発明のさらなる局面では、アルファウイルスパッケージング細胞株およびプロデューサー細胞株が提供される。詳細には、本発明の1つの局面において、アルファウイルスパッケージング細胞株を提供する。ここで、ウイルス構造タンパク質は1つ以上の安定に形質転換された発現ベクターからトランスで供給され、そしてトランスフェクトされ、形質導入され、または細胞内に生成されたベクターRNA転写産物を細胞質においてキャプシド化し得、そして細胞膜を通して感染性パッケージ化ベクター粒子を放出し得る。好ましい実施態様において、パッケージングに必要な構造タンパク質は、RNAベクターレプリコン自身または提供される他の何らかの刺激により誘導された後にのみ高レベルで合成され、そしてこれらの構造タンパク質をコードする転写産物は、天然のウイルス感染の発現レベルを模倣するに十分な発現レベルを可能にする様式で細胞質で増幅し得る。さらに、他の実施態様において、選択マーカーの発現は、構造タンパク質発現カセットに作動可能に連結される。このような連結された選択マーカーは、機能的で安定に形質転換されたPCLの効率的な生成を可能にする。
上記のように、本発明はまた、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、または賦形剤と組み合わせた、本明細書中に記載の遺伝子送達ビヒクルを含む薬学的組成物を提供する。例えば、1つの実施態様では、本発明のRNAまたはDNAベクター構築物は、長期間の保存および輸送のために凍結乾燥され得、そして種々の物質を用いて投与の前に再構成され得るが、好ましくは水を用いて再構成される。特定の例において、最終製剤を等張にする希釈塩溶液もまた使用され得る。さらに、再構成された核酸調製物の活性または物理的保護を増強する成分を含む水溶液を使用することも有利であり得る。このような成分は、サイトカイン(例えば、IL−2)、ポリカチオン(例えば、硫酸プロタミン)、脂質製剤、または他の成分を含む。凍結乾燥または脱水された組換えベクターは、任意の便利な容量の水または、凍結乾燥または脱水されたサンプルの実質的な、そして好ましくは完全な可溶化を可能にする、上記の再構成物質により再構成され得る。
上記のように、本発明はまた、選択された異種配列を脊椎動物(例えば、哺乳動物(例えば、ヒト)または他の温血動物(例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ラット、またはマウス))または昆虫に送達するための方法を提供する。この方法は、脊椎動物または昆虫に、選択された異種配列を発現し得る、本明細書に記載されたような遺伝子送達ビヒクルを投与する工程を含む。このような遺伝子送達ビヒクルは、直接(例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、経口、直腸、眼内、鼻腔内)または種々の物理的方法(例えば、リポフェクション(Felgnerら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 7413−7147, 1989)、直接的DNA注入(Fungら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 353−357, 1983; Seegerら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 5849−5852; Acsadiら, Nature 352: 815−818, 1991);マイクロプロジェクタイルボンバードメント(Williamsら, PNAS 88: 2726−2730, 1991);いくつかのタイプのリポソーム(例えば、Wangら, PNAS 84: 7851−7855, 1987を参照のこと);CaPO4(Dubenskyら, PNAS 81: 7529−7533, 1984);DNAリガンド(Wuら, J. Biol. Chem. 264: 16985−16987, 1989);核酸単独の投与(WO 90/11092);または殺傷されたアデノウイルスに結合されたDNAの投与(Curielら, Hum. Gene Ther. 3: 147−154, 1992);レセプター特異的リガンドを利用して、ポリリジンのようなポリカチオン化合物を介して;ならびにソラレン不活化ウイルス(例えば、センダイウイルスまたはアデノウイルス)を用いて)のいずれかにより投与され得る。さらに、遺伝子送達ビヒクルは、直接(すなわちインビボで)または取り出されていて(エクソビボで)続いて戻される細胞のいずれかで投与され得る。
本発明の1つの局面において、感染性、ガン性、自己免疫性、または免疫疾患を防止、阻害、安定化、または逆転し得る遺伝子送達ビヒクルを投与するための組成物および方法が提供される。このような疾患の代表例として、HIV、HBV、HCV、HTLVI、HTLVII、CMV、EBV、およびHPVのようなウイルス感染症、メラノーマ、糖尿病、移植片対宿主病、アルツハイマー病、および心臓疾患などが挙げられる。より具体的には、本発明の1つの局面において、病原性物質が死滅するかまたは阻害されるかのいずれかであるように、病原性物質に対する免疫応答(体液性または細胞媒介性のいずれか)を刺激するための組成物および方法が提供される。病原性物質の代表例として、細菌、真菌、寄生体、ウイルス、およびガン細胞が挙げられる。
多くの感染性疾患、ガン、自己免疫疾患、および他の疾患には、ウイルス粒子と細胞、細胞と細胞、または細胞とそれら自身もしくは他の細胞により生成された因子の相互作用が関与する。ウイルス感染では、ウイルスは普通、感受性細胞の表面のレセプターを介して細胞に入る。ガンまたは他の増殖状態(例えば再狭窄)では、細胞は他の細胞または因子由来のシグナルに不適切に応答し得るかまたはまったく応答し得ないか、または特定の因子は変異、過剰発現、または過少発現されて適切な細胞周期制御の損失をもたらし得る。自己免疫疾患では、「自己」マーカーが不適切に認識される。本発明においては、そのような相互作用は、相互作用におけるパートナーのいずれかに対するアナログをインビボで生成することによりブロックされ得る。あるいは、細胞周期制御は、存在しないかまたは過少発現されるブロッキング因子を用いて、ある期から別の期(例えば、G1期からS期への移行)を防ぐことにより回復され得る。このブロッキング作用は細胞内、細胞膜上、または細胞外で起こり得る。そしてブロッキング剤に対する遺伝子を有するアルファウイルスベクターの作用は、感受性細胞の内部から、または病原性相互作用を局所的にブロックするブロッキングタンパク質の一種を分泌することによるかのいずれかにより媒介され得る。
上記の技術と類似の技術が、病原性物質または遺伝子の機能を阻害し得る物質(または「緩和剤」)の発現を指令する遺伝子送達ビヒクルを生成するのに使用され得る。本発明において「機能を阻害し得る」とは、緩和剤が機能を直接阻害するか、または例えば細胞中に存在する物質を、通常は病原性物質の機能を阻害しないものから、機能を阻害するものに変換することにより、間接的に阻害するかのいずれかであることを意味する。ウイルス疾患についてのそのような機能の例として、吸着、複製、遺伝子発現、アセンブリ、および感染細胞からのウイルスの放出が挙げられる。ガン性細胞、ガン促進成長因子、または制御されない増殖条件(例えば、再狭窄)についてのこのような機能の例として、生存性(viability)、細胞複製、外部シグナルに対する感受性の改変(例えば、接触阻害)、および抗ガン遺伝子タンパク質の生成の欠如またはその変異型の生成が挙げられる。
本発明の1つの局面において、遺伝子送達ビヒクルは、例えばウイルス疾患または悪性疾患における病原性物質の機能を妨害し得る遺伝子の発現を指向する。このような発現は、本質的に連続的であるか、または病状または特定の細胞型のいずれかに関連する別の物質(「同定物質」)の細胞における存在に応答するかのいずれかであり得る。さらにベクターの送達は、上記のように、ベクターの侵入を特異的に所望の細胞型(例えば、ウイルス感染細胞または悪性細胞)に標的化することにより制御され得る。
病原性物質を阻害するための別のアプローチは、病原性条件を発現する細胞にとって毒性である緩和剤を発現することである。この場合、遺伝子送達ビヒクルからの緩和剤の発現は、非病原性細胞の破壊を避けるために、病原性物質に関連した物質(例えば、病原性状態を同定する特異的ウイルスRNA配列)の存在により制限されるべきである。
1.可溶性CD4が遊離のウイルスを阻害することが示されているが、細胞内でのHIV envへのCD4の結合は、生存可能なウイルス粒子の形成を阻害し得る。しかし、このタンパク質は膜に結合したままであり、そして構造的に内因性CD4(患者はこれに対して免疫学的に寛容(tolerant) であるはずである)と同一であるため、全身性のクリアランスおよび可能な免疫原性の問題はない。
特異的なRNA配列に応答して細胞中で緩和剤を発現する上記の技術はまた、同定タンパク質を発現する細胞における特定の遺伝子(例えば、特定のウイルスが有する遺伝子)の検出を可能にし、それによりそのウイルスを有する細胞の検出を可能にするように改変され得る。さらにこの技術は、ウイルスに関連する同定タンパク質を有する細胞の臨床サンプルにおけるウイルス(例えば、HIV)の検出を可能にする。
上記のように、本発明はまた、アルファウイルスに感染した標的細胞中の免疫系の1つ以上のエレメントを抑制し得る遺伝子送達ビヒクルを提供する。簡単に説明すると、不適切なまたは好ましくない免疫応答(例えば慢性肝炎、または骨髄のような異種組織の移植)の特異的ダウンレギュレーションは、移植(MHC)抗原の表面発現を抑制する免疫抑制性ウイルス遺伝子産物を用いて操作され得る。C群アデノウイルスであるAd2およびAd5 は、ウイルスのE3領域にコードされる19kd糖タンパク質(gp19)を有する。このgp19分子は細胞の小胞体中のクラスIMHC 分子に結合し、そしてクラスIMHCの末端グリコシル化および細胞表面へのその移動を防止する。例えば、骨髄移植の前に、ドナー骨髄細胞はgp19の発現の際に、MHCクラスI移植抗原の表面発現を阻害するgp19コード遺伝子送達ビヒクルを用いて感染され得る。これらのドナー細胞は、移植片拒絶の危険性が低く移植され得、そして移植患者は最小限の免疫抑制療法を必要とし得る。このことは、ほとんど合併症もなく、ドナー−レシピエントの許容されるキメラ状態が存在するのが可能であり得る。いわゆる自己免疫疾患の部類(ループスエリテマトーデス(lupus erythromiatis)、多発性硬化症、慢性関節リウマチまたは慢性B型肝炎感染を含む)を処置するのに、同様の処置が使用され得る。
本発明のさらに1つの局面は、治療用タンパク質を発現し得る遺伝子配列を供給するため遺伝子送達ビヒクルを用いて、脊椎動物または昆虫の細胞を形質転換することに関する。本発明の1つの実施態様において、遺伝子送達ビヒクルは、代謝、免疫調節、ホルモン調節、酵素的または膜関連構造機能における、遺伝性または非遺伝性の遺伝子欠陥を防止、阻害、安定化または逆転し得る治療用タンパク質を発現するように設計される。この実施態様はまた、個々の細胞を形質導入し得る遺伝子送達ビヒクルを記載し、これにより治療用タンパク質が特定の細胞または組織から全身的にまたは局所的に発現され得、これにより治療用タンパク質は、(a)存在しないかもしくは欠陥のある細胞性タンパク質もしくは酵素の置換、または(b)欠陥のある、発現量の少ない細胞性タンパク質もしくは酵素の補充生成を行い得る。このような疾患は、嚢胞性線維症、パーキンソン病、高コレステロール血症、アデノシンデアミナーゼ欠損症、β−グロビン障害、血友病AおよびB、ゴーシェ病、糖尿病および白血病を含み得る。
上記のように、本発明はまた、遺伝子送達ビヒクルを提供し、この遺伝子送達ビヒクルは、他の機能の中でも、1つ以上のサイトカインまたはサイトカインレセプターの発現を指向し得る。簡単に述べれば、ガン治療剤としてのそれら役割に加え、サイトカインは、特定の病状を生じるネガティブな効果を有し得る。例えば、ほとんどの休止T細胞、B細胞、大型の顆粒状リンパ球および単球は、IL−2R(レセプター)を発現しない。正常な休止細胞におけるIL−2R発現の欠如とは対照的に、IL−2Rは、特定の白血病(ATL、毛様細胞性白血病、ホジキン病、急性および慢性の顆粒球性白血病)、自己免疫疾患を患う患者の異常細胞によって発現され、そして同種移植片拒絶に関連する。興味深いことに、これらの患者のほとんどにおいて、IL−2Rの可溶性形態の血清濃度が上昇する。従って、本発明の特定の実施態様では、可溶性形態のサイトカインレセプターの血清濃度を増大することによって、治療が達成され得る。例えば、IL−2Rの場合には、遺伝子送達ビヒクルが、可溶性のIL−2RおよびIL−2Rの両方を生成するために操作され得、これにより高い親和性の可溶性レセプターが作られる。この構成において、血清IL−2レベルが減少し、パラクリンループを阻害する。この同じストラテジーはまた、自己免疫疾患に対しても有効であり得る。特に、いくつかの自己免疫疾患(例えば、慢性関節リウマチSLE)はまた、IL−2の異常発現に関係するので、レセプターの血清レベルを増加させることによってIL−2の作用をブロックすることもまた、このような自己免疫疾患を処置するために利用され得る。
本発明の1つのさらなる局面は、パッケージング/プロデューサー細胞株における野生型アルファウイルスの蔓延を制限するための、遺伝子送達ビヒクル自殺ベクターの使用に関する。簡略には、1つの実施態様において、遺伝子送達ビヒクルは、ベクターの連結領域の3’配列、およびパッケージング細胞株発現ベクターの5’アルファウイルス構造配列との間のRNA組換え事象から生じる、野生型アルファウイルス配列に特異的な、アンチセンスまたはリボザイム配列から構成される。アンチセンスまたはリボザイム分子は、特異的組換え配列の存在下においてのみ、温度安定性であり、そしてアルファウイルスパッケージング/プロデューサー細胞株においては、その他の効果を何も有さない。あるいは、毒性分子(例えば、本明細書中以下で開示される分子)はまた、野生型アルファウイルスの存在下のみで発現するベクターに関して発現され得る。
本発明の1つのさらなる局面は、悪性新生物の侵襲性を阻害または低減するための、遺伝子送達ビヒクルの使用に関する。簡略には、特に悪性疾患の程度は、代表的には腫瘍の血管新生に関係する。腫瘍の血管新生の1つの原因は、いくつかの腫瘍により発現される可溶性腫瘍血管新生因子(TAF)(Paweletzら、Crit. Rev. Oncol. Hematol. 9:197, 1989)の生成である。本発明の1つの局面において、腫瘍血管新生は、TAFに特異的なアンチセンスまたはリボザイムRNA分子を発現するために遺伝子送達ビヒクルを利用することによって遅らされ得る。あるいは、抗血管新生因子(Mosesら、Science 248:1408, 1990; Shapiroら、PNAS 84:2238, 1987)が、単独または上記のリボザイムもしくはアンチセンス配列との組み合わせのいずれかで、腫瘍の血管新生を遅らせるかまたは阻害する目的で、発現され得る。あるいは、遺伝子送達ビヒクルはまた、周辺組織上のTAFレセプターに対して特異的な抗体を発現するために用いられ得る。
本発明の他の局面において、脊椎動物または昆虫に遺伝子送達ビヒクルを投与するための方法が提供される。簡略には、遺伝子送達ビヒクルの最終的な投与様式は、通常特定の治療適用、ベクターの効力を増加させる最良の様式、および最も便利な投与経路に依存する。一般的に、この実施態様は、例えば(1)血流への直接注入;(2)特定の組織または腫瘍への直接注入;(3)経口投与;(4)鼻内吸入;(5)粘膜組織への直接塗付;または(6)脊椎動物もしくは昆虫への形質導入自己細胞のエクスビボ投与により、送達されるように設計され得る遺伝子送達ビヒクルを含む。本発明の特定の実施態様において、エクスビボ適用のためには、細胞はまず宿主から取り出され、少なくとも部分的に精製された細胞集団(例えば、CD34+幹細胞、T細胞など)を生じるためにポジティブおよび/またはネガティブに選択され、本発明の遺伝子送達ビヒクルの1つを用いて形質導入、トランクフェクトもしくは感染され、そして同じ宿主または別の個体のいずれかに再導入され得る。
さらに別の実施態様において、遺伝子送達ビヒクルは、感染細胞中の転写因子の増殖制御活性を調節するために利用され得る。簡略には、転写因子は、配列特異的トランス活性化または抑制を介して、遺伝子発現のパターンに直接的に影響を与える(Karin, New Biologist 21 : 126−131, 1990)。従って、変異された転写因子がガン遺伝子のファミリーを表すことは驚くべきことではない。遺伝子送達ビヒクルは、例えば、その調節されない増殖が腫瘍形成性転写因子により活性化される腫瘍細胞、ならびにホモダイマーおよびヘテロダイマーのトランス活性化または抑制性の転写因子複合体の形成において共同して結合を促進または阻害するタンパク質に対する制御を復帰させるために使用され得る。
本発明の別の局面において、トガウイルス(アルファウイルスを含む)遺伝子送達ビヒクルが、真核生物細胞中(エクソビボ、インビボ、または確立された細胞株)で1つ以上の組換えタンパク質の発現を指向するために利用され得る。本明細書中で使用される「組換えタンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、酵素、またはそれらのフラグメントをいう。このアプローチを使用して、治療用または他の商業的実用性を有するタンパク質が、費用に関してさらに効率よく生成され得る。さらに、真核生物細胞中で生成されたタンパク質は、原核生物細胞中で発現されたタンパク質と比較して翻訳後により確実に修飾(例えば、グリコシル化、硫酸化、アセチル化など)され得る。さらに、このような系は種々の化学的化合物(例えば、精製化学薬品または特別な化学薬品)のインビボ生成に使用され得る。
以下の物質がアメリカンタイプカルチャーコレクションに寄託された:
実施例1
SIN1の単離および特徴付け
以下には、宿主の巨大分子合成の減少した阻害を示し、そして同じウイルスの溶解性、細胞病原性野生型株と比較して、脊椎動物細胞中での持続感染を確立し得るポジティブ鎖RNAウイルスの同定および分子の特徴付けが記載される。例えば、シンドビスウイルスが、アルファウイルス属の代表的な原型として使用される。
シンドビスウイルス改変体株の単離、分子クローニング、および特徴付けを記載する。この株は、細胞変性性の非存在下で生産的な持続感染を確立し得るが、野生型ウイルスと同等のウイルスのレベルを生成する。
SIN−1の実質的に低減された細胞病原性の発達に関連する、シンドビスゲノムの変異(単数または複数)を特徴づけるために、SIN−1ビリオンからゲノムRNAを単離し、逆転写させ、そして非構造タンパク質遺伝子を含む得られたcDNAを、以下にさらに完全に記載するように配列決定した。
pRSIN−1gクローンのSIN−1特異的ヌクレオチド配列を、ジデオキシ鎖終結法によって決定した。ウイルス配列の8,000bpの配列比較は、本明細書中に記載のSIN−1クローンとGenBank(GenBank受託番号第J02363号、遺伝子座:SINCG)において提供されるシンドビスウイルス(HRsp株)配列との間の複数の差異を明らかにした。SIN−1(図6)、SINCG(図7)、およびToto1101(図8)の間の配列における差異を以下に示す。
SIN−1ゲノムの種々の領域によって、存続性の確立のための表現型の位置をマッピングするために、Toto1101プラスミドの対応する野生型シンドビスウイルス領域を置換した(Riceら, J. Virol. 61:3809−3819, 1987)。以下の表に例示するように、種々のSIN nsP遺伝子によって、pRSIN−1gから精製した制限酵素フラグメントを使用して、Toto1101野生型シンドビスウイルスバックグラウンドを置換した。
宿主巨大分子合成の減少した阻害を示すポジティブ鎖RNAウイルスの単離および特徴付け
宿主細胞巨大分子合成の減少した阻害、遅延した阻害、または阻害なしの所望の表現型を示すウイルス改変体の誘導は、野生型ウイルスの配列と異なる配列の生成、特徴付け、および単離に依存する。しかし、実施例1を除いて、このウイルスに基づく巨大分子合成の阻害の改変、または溶解性ではなく存続性の感染を導くウイルスの生成の改変を生じるコードまたは非コードウイルス配列変化を選択または同定するための、明白な方法または以前に開示された方法は全く存在しない。この実施例は、特異的な方法を提供し、そしてこれらの障害を克服することを可能にする。
宿主巨大分子合成の減少した阻害、遅延した阻害、または阻害なしを生じるか、あるいは存続性感染を確立するウイルス改変体の生物学的誘導を、細胞内での自然突然変異を可能にするか、あるいは最初に所望のウイルスストックを物理的、化学的、または他の人工的な変異誘発に供した後に感受性細胞を感染させ、そして変異したウイルスを有するこれらの細胞集団について連続的に富化することにより、実施し得る。事前の変異誘発は、必要ではないが、適切な変異の発生を促進することが可能である。選択は、所望の改変体に感染した細胞が、野生型ウイルス感染細胞よりも有意に長い期間生存する能力に基づく。以下の実施例は、例としてシンドビスウイルスを使用して、詳細な方法を提供する;しかし、詳細な説明において記載したように、他のウイルスが容易に代用される。
関連するアプローチにおいて、自然変異またはランダム変異誘発を、ウイルスストック上ではなく、むしろインビトロまたはインビボで感染性ウイルスRNAへと転写され得るウイルスのクローン化されたゲノムcDNAを使用して、実行した。例えば、事前の変異誘発において、プラスミドpRSINg(バクテリオファージSP6プロモーター(Dubenskyら, J. Virol. 70:508−519, 1996)に機能的に連結した全長のゲノムシンドビスcDNAを含有する)を、コンピテントなE. coli XL1−Redミューテーター細胞中に形質転換し、そしてアンピシリンプレート上にプレーティングしてコロニーを得る。少なくとも200のコロニーをランダムに選択し、プールし、そして一晩の増殖のためにアンピシリンを含有する10mlのブロス培養物中に接種する。プラスミドDNAを培養から調製し、種々の変異を有するpRSINgの異種集団を得る。DNAをXba Iを用いて直線化し、そして以前に記載されたようにSP6ポリメラーゼを使用してインビトロで転写した(Riceら, J. Virol. 61:3809−3819, 1987)。RNA転写物を、シンドウイルス感染サイクルの開始のために、エレクトロポレーション(LiljestromおよびGaroff, Bio/Technology 9:1356−1361, 1991)によって所望の細胞タイプ(例えば、BHK細胞)中へ引き続きトランスフェクトした。あるいは、変異誘発されていないテンプレートからインビトロ転写されたRNAもまた、トランスフェクトし得る。存続性感染を確立するか、あるいは宿主巨大分子合成の減少した阻害、遅延した阻害、または阻害なしを示すウイルス変異体の選択を、上記のように実施する。所望の表現型を有する選択されたウイルス改変体を、限界希釈またはプラーク精製によって単離し、cDNAクローニングに供し、そして改変体表現型を担う配列を上記のように単離および特徴付けする。
1.免疫原性タンパク質を発現するベクター
別のアプローチにおいて、自然細胞内変異またはランダム変異誘発を、ウイルスに基づく発現ベクターのウイルス由来配列上で実施する。これらの配列は、非コード領域および調節領域、ならびに非構造タンパク質コード領域を含む。特定の例においては、構造タンパク質コード配列もまた含まれる。このようなランダム変異誘発または自然細胞内変異を、インビトロまたはインビボでRNAへと転写され得るウイルス由来ベクターのクローン化cDNAと共に、本発明に記載される任意の技術を使用して実施し得る。例えば、複製にコンピテントなシンドビスウイルス発現ベクターを使用して、感染細胞に添加された特異的抗体によって結合され得る免疫原性細胞表面タンパク質または他のペプチドを発現させ得る。機能性ベクターを有する細胞を、ベクターにコードされる異種抗原の発現、およびコードされる抗原に特異的な抗体によって結合される能力によって同定する。選択プロセスを長期間にわたって生存する細胞(上記を参照のこと)に限定することにより、所望の表現型を示すベクター改変体を有する細胞のみを富化する。
5’−ATATATCTAGA/GCCATGGGCCACACACGGAGGCAG−3’
逆方向プライマー:hB7.1RB(5’−制限部位/B7.1配列)(配列番号25)
5’−ATATAGGATCC/CTGTTATACAGGGCGTACACTTTC−3’。
あるいは、抗生物質耐性マーカーは、所望の表現型を示すウイルスベクター改変体の選択のために使用され得る。例えば、シンドビスベクターpRSIN−luc(Dubenskyら、同書)を、上記のランダム変異誘発に供し、そしてランダム変異を含む異種プラスミドの集団を単離する。さらに、ネオマイシン(G418)耐性をコードする遺伝子を、隣接するXhoIおよびNotI制限部位を含むように設計される以下のオリゴヌクレオチドプラスミドを使用して、標準的な3サイクルのPCR増幅によって、1.5分間の伸長で、プラスミドpcDNA3(Invitrogen, San Diego, CA)から単離する:
正方向プライマー:NeoFX(5’−制限部位/neo 配列)(配列番号26)
5’−ATATACTCGAG/ACCAUGATTGAACAAGATGGATTG−3’
逆方向プライマー:NeoRN(5’−制限部位/neo 配列)(配列番号27)
5’−TATATAGCGGCCGC/TCAGAAGAACTCGTCAAGAAG−3’
増幅に続いて、DNAフラグメントを、QIAquick−spinで精製し、XhoIおよびNotIで消化し、そしてXhoIおよびNotIで同じく消化し、仔ウシ腸管アルカリホスファターゼで処理し、そしてGENECLEAN IIを使用して0.7%アガロースゲルからその以前のルシフェラーゼ挿入物と離して精製したpRSIN−lucベクターの変異した集団に連結する。ネオマイシン耐性マーカーの変異したpRSINベクターへの連結は、neor発現ベクター(pRSIN−neoと称される)の異種集団を作製する。E.coliを形質転換せずそして個々のクローンを単離せずに、連結したベクターの全体の集団をSacIで直線化し、そして上記のように、インビトロでのSP6転写反応のためのテンプレートとして使用する。ランダムに変異誘発したneorベクター転写物の異種集団を、シンドビス複製サイクルの開始および異種遺伝子発現のために所望の細胞型(例えば、BHK細胞)にエレクトロポレーションする。トランスフェクションの約12〜24時間後、細胞をトリプシン処理し、そしてG418を含む培地に再プレーティングする。続いて、培地を、死滅細胞を除去するために約24時間間隔で交換し、そして50%の新たな培地と50%の馴化培地との混合物からなるG418含有培地で置き換える。培地交換を、大部分の死滅細胞が洗い流された後に低減させ、そして細胞増殖巣が形成し始める。この選択を使用して、機能的なウイルス由来ベクターを含み、所望の表現型(ネオマイシン耐性によって実証されるような)を示す生細胞のみを、富化する。所望の表現型を表示する変異体ベクター改変体ゲノムを、RNAzol B(Tel−Test, Friendswood, TX)を使用して、細胞溶解物から直接RNAを収集することによって単離する。あるいは、細胞を、欠陥ヘルパーシンドビスRNA(pR−dlnsPSIN, Dubenskyら、同書)でトランスフェクトし、これは、細胞上清において、パッケージングされたpRSIN−neoベクター含有粒子の産生を生じ、続くベクターRNA単離(上記)のために遠心分離によって濃縮され得る。各場合において、ベクターRNAを、cDNAクローニングに供し、そして先に記載のように、改変体表現型を担う配列を単離および特徴付けする。
正方向プライマー:5’BAMHI−Neo(配列番号118)
5’−ATATAGGATCCTTCGCATGATTGAACAAGATGGATTGC−3’
逆方向プライマー:3’BAMHI−Neo (配列番号57)
5’−ATATAGGATCCTCAGAAGAACTCGTCAAGAAGGCGA−3’。
SINIに基づくRNAベクターレプリコンの調製
A.SIN−1基本ベクターの構築
SIN−1由来ベクター骨格を構築し、そしてバクテリオファージRNAポリメラーゼプロモーターを含むプラスミドDNAに挿入した。その結果、インビトロでの転写は、感受性細胞への導入に際して自己複製分子(レプリコン)として作用するRNA分子を産生した。基本SIN−1 RNAベクターレプリコンは、以下の順序のエレメントから構成された:SIN−1 nsPs遺伝子、サブゲノム性RNAプロモーター領域、ポリリンカー配列(異種配列挿入物を含み得る)、SIN−1 3’非翻訳領域(NTR)、およびポリアデニル化配列。感受性細胞へのトランスフェクションに続いて、RNAベクターレプリコンの自律複製は、ウイルスについて生じ、そして異種配列は、非常に豊富なサブゲノム性mRNA分子として合成され、次いで、異種遺伝子産物のための翻訳テンプレートとして役割を果たす。
正方向プライマー:SP6−1F(ApaI部位/SP6プロモーター/SIN nt 1−18):(配列番号12)
5’−TATATGGGCCCGATTTAGGTGACACTATAGATTGACGGCGTAGTACAC
逆方向プライマー:SIN5160R(SIN nt 5160−5140):(配列番号28)
5’−CTGTAGATGGTGACGGTGTCG。
第2のフラグメントを、以下のプライマー対とのPCR反応において生成した:
正方向プライマー:5079F(SIN nt 5079−5100):(配列番号29)
5’−GAAGTGCCAGAACAGCCTACCG
逆方向プライマー:SIN7643R(緩衝配列/XhoI部位/SIN nt 7643−7621):(配列番号30)
5’−TATATCTCGAGGGTGGTGTTGTAGTATTAGTCAG。
正方向プライマー:SIN11386F(緩衝配列/NotI部位/SIN nt 11386−11407):(配列番号31)
5’−TATATATATATGCGGCCGCCGCTACGCCCCAATGATCCGAC
逆方向プライマー:SIN11703R(緩衝配列/SacIおよびPmeI部位/T40/SIN nt 11703−11698):(配列番号32)
5’−CTATAGAGCT CGTTTAAACT TTTTTTTTTT TTTTTTTTTT TTTTTTTTTT TTTTTTTTTG AAATG。
SIN1に基づくDNAベクターの調製
A.プラスミドDNA SIN−1由来発現ベクターの構築
シンドビスウイルス感染性周期の効率的な開始は、RNAポリメラーゼIIの発現カセット内に含まれるゲノムcDNAクローンから、インビボで生じ得る。(Dubenskyら、J. Virol 70:508−519, 1996)。DNAフォーマットから機能的なアルファウイルス遺伝子を発現する能力は、2つの新規なアルファウイルスに基づく遺伝子発現系が開発されることを可能にする:(1)遺伝的な免疫に適用される、プラスミドDNAに基づくベクター、および(2)ベクターレプリコンおよびDHプラスミドDNAで同時トランスフェクトした細胞における、パッケージングされたアルファウイルス粒子の産生。以前に、感染シンドビスウイルスRNAおよびそれに由来する相補体ベクターを産生するための分子的アプローチは、バクテリオファージRNAポリメラーゼプロモーターからのcDNAクローンのインビトロでの転写、続いての許容細胞へのトランスフェクションに主に限定された。
オリゴヌクレオチド1:(配列番号33)
5’−TCGATCCTAGGA
(配列番号37)
5’−TATATATGAGCTCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTC
逆方向プライマーBGHTTR(緩衝配列/EcoRI部位/pCDNA3 nt 1180−1154):
(配列番号38)
5’−TATATGAATTCATAGAATGACACCTACTCAGACAATGCGATGC。
5’−TATATATATATGCGGCCGCCGCTACGCCCCAATGATCCGAC
ネスティッドプライマー:pAHDV1F(ポリ(A)/HDV RBZ nts 1−46):(配列番号39)
5’−AAAAAAAAAA GGGTCGGCAT GGCATCTCCA CCTCCTCGCG GTCCGACCTG GGCATC
逆方向プライマー:SacHDV77R(緩衝配列/Sac I 部位/HDV RBZ nts 77−27):(配列番号40)
5’−TATATGAGCTCCTCCCTTAGCCATCCGAGTGGACGTGCGTCCTCCTTCGGATGCCCAGGTCGGACCGCG。
正方向プライマー:pCBgl233F (緩衝配列/Bgl II認識配列/CMVプロモーター nts 1−22):(配列番号41)
5’−TATATATAGATCTTTGACATTGATTATTGACTAG
逆方向プライマー:SNCMV1142R(SIN nts 8−1/CMV プロモーター nts 1142−1108):(配列番号42)
5’−CCGTCAATACGGTTCACTAAACGAGCTCTGCTTATATAGACC。
正方向プライマー:CMVSIN1F(CMV プロモーター nts 1124−1142/SIN nts 1−20):(配列番号43)
5’−GCTCGTTTAGTGAACCGTATTGACGGCGTAGTACACAC
逆方向プライマー:SIN 3182R(SIN nts 3182−3160):(配列番号44)
5’−CTGGCAACCGGTAAGTACGATAC
上記のプライマーを3つの温度サイクルプログラムで3分間の伸長時間を用いたPCR反応において使用した。
正方向プライマー:pCBgl233F:(配列番号41)
5’−TATATATAGATCTTTGACATTGATTATTGACTAG
逆方向プライマー:(SIN nts 2300−2278):(配列番号45)
5’−GGTAACAAGATCTCGTGCCGTG。
正方向プライマー:
WT100F 5’−GTC CGT TTG TCG TGC AAC TGC(配列番号105)
SIN−1100F:5’−GTC CGT TTG TCG TGC AAC TGA(配列番号106)
逆方向プライマー:
SIN2300R
PCRプログラム:(95℃−30秒、72℃−2分)20サイクル
プライマーセット2:
正方向プライマー:
WT3524F 5’−CAA TCT TCC TCA CGC CTT AGC(配列番号107)
SIN−13524F 5’−CAA TCT TCC TCA CGC CTT AGT (配列番号108)
逆方向プライマー:
SIN5448R
PCRプログラム: (95℃−30秒、60℃−30秒、72℃−2分)20サイクル
プライマーセット3:
正方向プライマー:
WT7592F 5’TCC TAA ATA GTC AGC ATA GTA
(配列番号109)
SIN−17592F 5’TCC TAA ATA GTC AGC ATA GTT(配列番号110)
逆方向プライマー:
SIN7643R 5’−TATATCTCGAGGGTGGTGTTGTAGTATTAGTCAG(配列番号111)
PCRプログラム:(95℃−30秒、60℃−30秒、72℃−2分)20サイクル。
pBG/SIN−1 ELVS 1.5またはpBG/wt ELVS 1.5ベクターを、トランスフェクトしたBHK細胞において、分泌されたアルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼレポーター遺伝子発現のパターンを比較した。pBG/wt ELVS 1.5プラスミドは、SIN−1改変体というよりは野生型シンドビスウイルス由来の配列を含む。pBG/wt ELVS 1.5発現ベクターの構築は、pBG/SIN−1 ELVS 1.5発現ベクターについての本明細書中の記載と、ベクター構築のためのテンプレートとして野生型シンドビスウイルス(Dubenskyら、WO 95/07994)由来の全長のゲノムcDNAを用いたこと以外は全く同じであった。pBG/wt ELVS 1.5発現ベクターの構築は以前に(Dubenskyら、前出)記載されており、従って、株(および、それゆえ配列)は異なっているが、pBG/wt ELVS 1.5発現ベクターおよびpBG/SIN−1 ELVS 1.5発現ベクターに含まれるシンドビスウイルス特異的領域は同じである。
pBG/SIN−1 ELVS 1.5−SEAP 18±1.7
pBG/wt ELVS 1.5−SEAP 94±10.7
pCDNA3 0.13±0.04。
プラスミドDNA SIN−1由来発現ベクターの改変
アルファウイルスに基づくベクターからの標的細胞における異種遺伝子の発現レベルは、宿主の属およびベクター構成を含むいくつかの要素によって影響される。例えば、BHK細胞におけるβ−ガラクトシダーゼ発現レベルは、いくつかのヒト細胞(例えば、pBG/ELVSベクターでトランスフェクトされたHT1080)と比較して、10〜100倍高い。pBG/wt ELVS 1.5−βgalプラスミドDNAでトランスフェクトしたBHKおよびいくつかのヒト細胞株におけるレポーター遺伝子発現のレベル(実施例4を参照のこと)を、意図されるインビボ標的属由来の細胞型におけるベクター特異的発現の相対的レベルを樹立するために比較した。pBG/wt ELVS 1.5−βgalプラスミド、または従来のプラスミド発現ベクターでトランスフェクトしたBHK細胞およびヒト線維肉腫株のHT1080(ATCC CCL 121)細胞における、β−ガラクトシダーゼ発現のレベルを決定した。CMVプロモーター駆動pUC由来発現プラスミドマルチクローニング部位(Invitrogen, San Diego, CA)へのlac Z遺伝子(Promega, Madison, WI)の挿入により、従来のプラスミドベクターを構築した。そしてこれはpCMV−β−galとして識別される。図12Aに示す本研究の結果は、pBG/wt ELVS 1.5−βgalプラスミドDNAでトランスフェクトしたHT1080細胞におけるβ−ガラクトシダーゼ発現のレベルは、BHK細胞と比較しておおよそ100倍低いことを実証する。RNAポリメラーゼII発現をシンドビスウイルスベクターレプリコン発現から分離するために、細胞をまた、pCMV−β−galでトランスフェクトした。この実験において、BHK細胞と比較して、pCMV−β−galプラスミドでトランスフェクトしたHT1080細胞における発現は5〜10倍減少したが、pBG/wt ELVS 1.5−βgalプラスミドDNAでトランスフェクトしたHT1080細胞における発現はおおよそ100倍減少した。従って、この結果は、pBG/wt ELVS 1.5−βgalプラスミドDNAでトランスフェクトしたHT1080細胞におけるレポーター遺伝子発現の劇的な減少は、部分的に、これらのヒト細胞におけるシンドビスウイルスベクターレプリコンの減少された活性によることを示す。
5’−CCTATGCGGCGGCGTGGAACCTTTGTGGCTCCTC
逆方向プライマー:EAPRE1802R(配列番号47)
5’−CCTATTGGCCAGCAGACCAATTTATGCCTAC。
5’−CCTATGCGGCCGCTAGACTGGACAGCCAATGACG
逆方向プライマー:EMPMV8241R(配列番号49)
5’−CCTATTGGCCAGCCAAGACATCATCCGGGCAG。
アルファウイルスパッケージング細胞株の構築
本発明において、アルファウイルスパッケージング細胞株(PCL)が提供される。これにより、RNAパッケージングおよび組換えアルファウイルスベクター粒子の形成に必要なウイルス由来構造タンパク質が、1つ以上の安定に形質転換される構造タンパク質発現カセット(単数または複数)によりコードされる。これらのタンパク質の合成は、好ましくは誘導様式で生じ、そして特に好ましい実施態様において、それらのネイティブな「連結領域」プロモーターからのサブゲノムmRNAの転写を介して生じる。誘導性サブゲノム転写は、導入アルファウイルスベクターRNA自体により媒介される(図13)。構造タンパク質発現カセット(単数または複数)からの1次転写に続き、ベクターにコードされた非構造タンパク質によりRNA転写産物の細胞質性増幅が開始され、そして最終的に連結領域プロモーターからの転写および高レベル構造タンパク質発現に導く。構造タンパク質発現カセットは、本発明において以前記載された任意のエレメントを含み、RNA輸送エレメント(例えば、HBV PREおよびMPMV CTE)およびスプライシング配列を含み得る。PCT出願WO 95/07994に記載される方法を用いて、または本発明に記載される新規なアプローチを用いて、このようなPCLおよびこれらの安定に形質転換される構造タンパク質発現カセットを誘導し得る。PCLは、哺乳動物および非哺乳動物の両方の細胞を含む、現存するほとんどいかなる親の細胞株に由来し得る。PCLの誘導のために好ましい実施態様は、ヒト起源の細胞株である。
例えば、アルファウイルス構造タンパク質発現カセットを構築した。これにより、CMV即時型プロモーターからの1次転写は、効率的な細胞質性増幅、およびベクターRNAからの非構造レプリカーゼタンパク質の翻訳後のみの構造タンパク質発現を可能にするRNA分子を生成する。詳細には、DNAに基づくシンドビス欠陥ヘルパー(DH)ベクターのプラスミドpDCMV−dlnsPSIN(Dubenskyら、J. Virol. 70:508−519, 1996)を、3’末端RNAプロセシングのためにδ型肝炎ウイルス(HDV)抗ゲノムリボザイム配列(PerottaおよびBeen, Nature 350:434−436, 1991)、および非構造タンパク質遺伝子欠失の領域中に挿入されたSV40スモールt抗原イントロンの両方を含むように改変した。HDVリボザイム配列の挿入に伴う制限部位の重複により、Dubenskyら(同書)からのさらなるプラスミドpDLTRSINgHDVを出発物質として用いて、改変CMVに基づくDH構築物を再構築した。プラスミドpDLTRSINgHDVはHDVリボザイムを含むLTRに基づくシンドビスゲノムクローンであり、これをBgl IIで消化して、存在するLTRプロモーターおよびシンドビスヌクレオチド1〜2289(Straussら、Virology 133:92−110, 1984に従う番号づけ)を除去し、ウシ腸アルカリホスファターゼで処理し、そしてGENECLEAN IITM(Bio101, San Diego, CA)を用いて0.7%アガロースゲルから精製した。シンドビスゲノムクローンpDCMVSINg(Dubenskyら、同書)のBgl II消化およびGENECLEAN IIを用いる1%アガロースゲルからの精製により、CMVプロモーターを有する対応する5’末端フラグメントを得、次いでBgl II欠失pDLTRSINgHDVベクターに連結して、構築物pDCMVSINgHDVを生成した。HDVリボザイムを有するこのCMVに基づくゲノムプラスミドは、感染性シンドビスウイルスを生成し、そしてBHK細胞へのトランスフェクト後の24時間以内に細胞変性効果を生じることを示した。次いで、HDVリボザイムを含む欠陥ヘルパープラスミドpDCMVdlnsPSINgHDVを、BspE I消化および希釈条件下での再連結により構築し、ヌクレオチド422と7054との間の非構造遺伝子配列を除去した。同時に、SV40イントロンをPCRにより合成し、非構造タンパク質遺伝子欠失の領域に挿入した。SV40イントロン配列の増幅を、テンプレートとしてプラスミドpBR322/SV40(776株、ATCC #45019)および隣接BspE IまたはBamH I部位を含むように設計した以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、30秒間の伸長時間を有する標準的な3サイクルPCRにより達成した。
5’−TATATATCCGGA/AAGCTCTAAGGTAAATATAAAATTTTT−3’
逆方向プライマー:BamSVSAR (5’−制限部位/SV40イントロン配列)(配列番号51)
5’−TATATAGGATCC/TAGGTTAGGTTGGAATCTAAAATACACAAAC−3’。
本発明の他の実施態様において、選択マーカーをアルファウイルス構造タンパク質発現カセットの転写に作動可能に連結した。好ましい実施態様において、この作動可能な連結を、残りのnsP1アミノ酸との融合物としてのマーカーの非構造タンパク質遺伝子欠失の領域への挿入、または内部リボソーム侵入部位(IRES)配列の翻訳制御下での構造タンパク質遺伝子の下流への挿入のいずれかによって達成する。再び、一次構造タンパク質遺伝子mRNA転写産物の増幅および構造タンパク質発現の誘導を、インプットベクターRNA分子および合成されたその非構造タンパク質により制御する。
5’−TCGATCCTAGGA。
5’−GCTCTTAATTAAGAGC。
5’−CTGTTTAAACAGATCTTATCTCGAGTATGCGGCCGCTATGAATTCGTTTAAACGA−3’
PME.MCSII(配列番号55)
5’−TCGTTTAAACGAATTCATAGCGGCCGCATACTCGAGATAAGATCTGTTTAAACAG−3’。
5’−ATATATCCGGA/GTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGCTA
逆方向プライマー:NEO3’BAM(5’−制限部位/neo遺伝子)(配列番号57)
5’−ATATAGGATCC/TCAGAAGAACTCGTCAAGAAGGCGA。
5’−TATATGATATC/AAAAAGCCTGAACTCACCGCGACG
逆方向プライマー:3’HYGROBA(5’−制限部位/hygro遺伝子)(配列番号113)
5’−ATATAGGATCC/TCAGTTAGCCTCCCCCATCTCCCG。
5’−TATATATGAGCTCTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTC
逆方向プライマー:RSVTT2563(制限部位/SV40nts2563〜2588)(配列番号59)
5’−TATATGAATTCGTTTGGACAAACCACAACTAGAATG。
5’−TATATAGATCT/AGTCTTATGCAATACTCTTGTAGT。
5’−GGGATACTCACCACTATATCTCGACGGTATCGAGGTAGGGCACT。
5’−GATATAGTGGTGAGTATCCCCG
逆方向プライマー:3’SinBam(3’−制限部位/シンドビス配列)(配列番号63)
5’−TATATGGATCC/CGGAGATCCTTAATCTTCTCATG。
5’−TATATATGCAT/CCCCCCCCCCCCCAACG
逆方向プライマー:3’EMCVIRES(5’−pcDNA+neo配列/EMCV配列)(配列番号65)
5’−CATGCGAAACGATCCTCATC/CTTACAATCGTGGTTTTCAAAGG。
5’−GATGAGGATCGTTTCGCATGATTGA
逆方向プライマー:3’Neo/pcDNA(3’制限部位/neo配列)(配列番号67)
5’−TATATATGCAT/TCAGAAGAACTCGTCAAGAAGGCGA。
本発明の他の実施態様において、PCLが提供される。ここで、アルファウイルス構造タンパク質は、その天然の翻訳後プロセシングを有する単一のmRNA由来のポリタンパク質として発現されず、むしろ複数のカセットを介して転写される独立したmRNA由来の分離したタンパク質として発現される。このような構成は、複製可能なまたは感染性ウイルスの形成を導く組換えまたは同時パッケージング事象の可能性を非常に少なくする。好ましい実施態様において、キャプシドタンパク質は一つの安定に形質転換されたカセットから発現され、そしてエンベロープ糖タンパク質は、第2の安定に形質転換されたカセットから一緒に発現され、そして各々は、連結領域プロモーターからベクター誘導性様式で発現される(上記)。
5’−ATATACTCGAG/ACCACCACCATGAATAGAGGATTC
逆方向プライマー:SIN3’CNot(5’−制限部位/停止コドン/キャプシド配列)(配列番号69)
5’−TATATGCGGCCGC/TATTA/CCACTCTTCTGTCCCTTCCGGGGT。
5’−ATATACTCGAG/AGCAATG/TCCGCAGCACCACTGGTCACGGCA
逆方向プライマー:3’GLYCO−N(5’−制限部位/糖タンパク質配列)(配列番号71)
5’−ATATAGGCGGCCGC/TCATCTTCGTGTGCTAGTCAGCATC。
5’−ACACATTAATTAA/CGATGCCGCCGGAAGCGAGAA
逆方向プライマー:3’HYGRO/pA−P(5’−制限部位/pDR2配列)(配列番号73)
5’−ACACATTAATTAA/GTATTGGCCCCAATGGGGTCT。
増幅後、DNAフラグメントをQIAquick−spinで精製し、Pac Iで消化し、GENECLEAN IIを使用して精製し、そしてこれもまたPacIで消化し、アルカリホスファターゼで処理し、そしてGENECLEAN IIを使用して精製したプラスミドpBGSVCMVdl−G中に連結する。得られる構築物をpBGSVhygro−Gと称する。
同時パッケージングまたはDHとベクターRNA分子との間の組換えのレベルを減少させて、糖タンパク質遺伝子の翻訳を増強するため、またはパッケージングされた組換えアルファウイルスベクター粒子の細胞もしくは組織特異性を変化させるために利用され得るさらなるアプローチは、他のアルファウイルスまたはトガウイルス由来の構造タンパク質遺伝子を使用する。より詳細には、シンドビスウイルスまたは異なるアルファウイルスベクターとの使用のための、アルファウイルスまたはトガウイルス構造タンパク質遺伝子の多数の組み合わせが意図され得る。例えば、ロスリバーウイルス(RRV)のキャプシドタンパク質遺伝子を、シンドビスウイルスのエンベロープ糖タンパク質遺伝子(同一のまたは異なる構築物から発現される)とともに使用して、実施例3、4、または5に記載のシンドビスウイルス由来ベクターをパッケージングし得る。さらに、RRVキャプシドタンパク質遺伝子の欠失形態を、シンドビス糖タンパク質遺伝子配列の直ぐ上流に配置して、翻訳エンハンサーエレメントとして作用させ得る。別の例として、シンドビスウイルスの構造タンパク質を使用して、セムリキ森林ウイルスRNAベクターをパッケージングし得る。
1.RRV Ava:(nt.7510〜7525)(配列番号74)
5’−ccacgaattcGGTCCTAAATAGATGC
2.RRV Nci1:(nt.7606〜7620)(配列番号75)
5’−ccacaagcttCCGGGCGAGGCCGCC
3.RRV Nci2:(nt.7616〜7630)(配列番号76)
5’−ccacggatCCCGGCGTTCCGTCC
4.RRV Apa1:(nt.8088〜8102)(配列番号77)
5’−ccacaagcttGTGCACTGGGATCTG
5.RRV Apa2:(nt.8097〜8111)(配列番号78)
5’−ccacggatccGTGCACATGAAGTCC
6.RRV Bsp:(nt.8339〜8361)(配列番号79)
5’−ccacaagCTTCcGGaGTTACCCGAGTGACC
7.RRV Afl1:(nt.7820〜7836)(配列番号80)
5’−ccaccttaaGCGTCGGCTTTTTCTTC
8.RRV Afl2:(nt.7892〜7907)(配列番号81)
5’−ccaccttaaGAGAAGAGAAAGAATG
9.SIN Ava:(nt.7591〜7594)(配列番号82)
5’−ccacaagcttGGACCACCGTAGAG
10.SIN Bam:(nt.7325〜7343)(配列番号83)
5’−CCGCGTGGCGGATCCCCTG
11. SIN Bsp:(nt.8418〜8433)(配列番号84)
5’−ccacggatCCGGAAGGGACAGAAG
12.SIN Bsu:(nt.8887〜8902)(配列番号85)
5’−CACGGTCCTGAGGTGC。
PCR反応を、以下に示すプライマー対を使用して、標準的な3サイクルプロトコルで、30秒間の伸長およびVentポリメラーゼを用いて実施して、対応するDNAフラグメント(これもまた以下に示す)を生成した。
フラグメント1:pr1+pr2、RRV6415プラスミド
フラグメント2:pr3+pr4、RRV6415プラスミド
フラグメント3:pr5+pr6、RRV6415プラスミド
フラグメント4:pr3+pr7、RRV6415プラスミド
フラグメント5:pr4+pr8、RRV6415プラスミド
フラグメント6:pr9+pr10、Toto1101プラスミド
フラグメント7:pr11+pr12、Toto1101プラスミド
増幅後、PCR産物を示す酵素で消化し、そしてpUC18プラスミドアナログであるpRS2(これは、さらなるポリリンカー部位を含み、そしてこれもまた同じ酵素の組み合わせで消化した)中に連結した:フラグメント1をEcoR I+Hind IIIで;フラグメント2をBamH I+Hind IIIで;フラグメント3をBamH I+Hind IIIで;フラグメント4をBamH I+Afl IIで;フラグメント5をHind III+Afl IIで;フラグメント6をBamH I+Hind IIIで;そしてフラグメント7をBamH I+Bsu 36Iで切断した。全ての挿入物を配列決定して、PCRの間に人工物が獲得されていないことを確認した。
正方向プライマー:VEE 7553F(5’制限部位/VEEキャプシド配列)(配列番号86)
5’−TATATATATCTCGAGACCGCCAAGATGTTCCCGTTCCAGCCA−3’
逆方向プライマー:VEE 11206R(5’制限部位/VEE E1糖配列)(配列番号87)
5’−TATATATATGCGGCCGCTCAATTATGTTTCTGGTTGGT−3’。
PCR増幅後、約3800 bpのフラグメントを0.7%アガロースゲルからGENECLEAN IIを使用して精製し、そしてXho IおよびNot Iで消化する。次いで、得られるフラグメントをDNAベースのシンドビス発現ベクターpDCMVSIN−luc(上記を参照のこと)(これもまたXho IおよびNot Iで消化して、そのルシフェラーゼレポーター遺伝子インサートを除去し、アルカリホスファターゼで処理し、そして0.7%アガロースゲルからGENECLEAN IIを使用して精製した)中に連結する。得られるVEE構造タンパク質発現構築物をpDCMV−VEEspと称する。次に、プラスミドpDCMV−VEEspを限定部分消化条件下でBspEIで消化して、大部分の非構造タンパク質遺伝子配列を除去し、そして再連結して、構造タンパク質発現DHベクター構築物であるpDCMV−VEEdlを作製する。
本実施例を通して記載のアルファウイルス由来PCLを、組換えアルファウイルス粒子ストックを産生する、そしてRNAまたはDNA分子のいずれかのトランスフェクションによるベクターの導入、以前に産生したパッケージングされたベクター含有粒子での感染、または安定に形質転換された発現カセットからのベクターの細胞内産生を含む多数の異なる方法で使用し得る。ベクター粒子の産生のためのアルファウイルスPCLの有用性を、まずレポーターベクター構築物を用いて実証し、そして後に所望の異種配列を発現する任意の他のベクター構築物に適用し得る。例えば、パッケージングされたシンドビス−β−galベクター粒子のストックを、記載の手順を使用して(LiljestromおよびGaroff、Bio/Technology 9:1356−1361, 1991)、約107のアルファウイルスC/GLYCOまたは他のPCL細胞(上記、ならびに例えば図15、17、および18を参照のこと)の、50 ugのpKSSIN−1−BV−β−galもしくは−luciferase RNA(実施例4)またはpBG/SIN−1 ELVS 1.5−β−galもしくは−luciferase DNA(実施例5)でのエレクトロポレーションにより得る。トランスフェクトされたPCLを所望の温度(例えば、37℃)でインキュベートし、そしてトランスフェクション後約48時間に、上清を回収し、そして0.45ミクロンフィルターの通過により澄明化する。さらなる処方を、本発明の詳細な説明に例証するパラメーターを使用して実施し得る。
アルファウイルスプロデューサー細胞株の構築
宿主細胞巨大分子合成の減少、遅延、または阻害なしを示すDNAベースのアルファウイルスベクターの構築と結びつけられた、上記のようなアルファウイルスPCLの生成(実施例1、2、4、および5)は、アルファウイルスベクタープロデューサー細胞株を誘導するための比較的直線的な機構を提供する。本発明の特定の実施態様において、ベクタープロデューサー細胞株は、1つ以上の安定に形質転換された構造タンパク質遺伝子発現カセット、およびまた上記の表現型を有するアルファウイルスRNA発現ベクター分子を含み、これはトランスフェクトされるか、形質導入されるか、または細胞内で産生され、パッケージングされたベクター粒子の産生を導く。好ましい実施態様において、RNAベクターレプリコンを、安定に形質転換されたDNA分子(真核生物重層ベクター開始系)から細胞内で産生する。このDNA分子は、組み込まれた形態でまたはエピソームDNAとしてのいずれかで存在し、ベクターRNAの転写は所望の時点で提供される1つ以上の刺激により誘導的に制御される。この型のアルファウイルスプロデューサー細胞株構造は、本質的に、以下を含む事象のカスケードを提供する:ベクターRNAの誘導性産生および結果として生じるRNAの自己触媒性細胞質増幅、ベクター供給非構造タンパク質による高レベルの構造タンパク質発現の誘導、発現された構造タンパク質によるベクターRNAのパッケージング、およびパッケージングされたベクター粒子の放出。一旦プロデューサー細胞集団が所望の数に達すると、ベクター複製の低レベル細胞傷害性の潜在力、または非構造タンパク質合成を制御する必要性のために、DNA分子からのベクターRNAの強固に調節された、誘導性の発現は好ましい。なぜなら、それは正鎖対負鎖ベクターRNA比の調節に関連するからである。
本発明の特定の実施態様において、DNAに基づくアルファウイルスベクターが提供される。ここで、自己触媒的増幅が可能であるアルファウイルスベクターRNA分子のインビボ転写は、所望の時点に刺激を適用することによって調節可能であるプロモーターから生じる。このようなDNAに基づくアルファウイルスベクターを、引き続いて、アルファウイルスパッケージング細胞株(PCL)に安定に形質転換して、誘導性アルファウイルスプロデューサー細胞株を作製し得る。それゆえ、本明細書中に記載されるプロデューサー細胞株構成は、「フィードフォワード(feed−forward)」系であり、ここで:1)刺激が細胞に適用され、アルファウイルスベクターRNAの効率的な転写が生じる;2)ベクターRNAは、自己触媒的に複製し、そして非構造タンパク質を生成する;3)非構造タンパク質は、構造タンパク質発現カセットmRNAの増幅および高レベルの構造タンパク質発現を刺激する;そして4)構造タンパク質はベクターRNAと相互作用し、そして培養培地に放出される組換えアルファウイルス粒子の引き続くパッケージングを生じる。任意の以前に記載されたアルファウイルスPCL(1以上の誘導性アルファウイルス構造タンパク質発現カセットで安定に形質転換されている)が、プロデューサー細胞株を派生させるための親株として働き得る。
5’−TATATAGATCTGGCGCGCC/TTTACCACTCCCTATCAGTGATAG−3’
逆方向プライマー:3’CMVpro/SINR(5’−シンドビスnts./CMV nts.)(配列番号89)
5’−TACGCCGTCAAT/ACGGTTCACTAAACGAGCTCTGC−3’。
5’−TAGTGAACCGT/ATTGACGGCGTAGTACACACTATT
逆方向プライマー:SIN2400R(全てのシンドビスnts.)(配列番号91)
5’−CGTTGAGCATAACCGAATCTAC。
5’−ATATAGAGCTCTTAATTAA/TCTTTGTGAAGGAACCTTACTTC
逆方向プライマー:3’ECgptR(5’−制限部位/gpt遺伝子配列)(配列番号93)
5’−ATATAGAGCTC/AGGCGTTGAAAAGATTAGCGACCG。
逆方向プライマー:BGHTTpacR(5’−制限部位/BGH配列)(配列番号94)
5’−TATATATTAATTAA/ATAGAATGACACCTACTCAGACAATGCGATGC。
好ましい実施態様において、DNAに基づくアルファウイルスベクター(野生型または宿主巨大分子合成の減少した阻害、遅延した阻害もしくは阻害なしの所望の表現型を有する)を構築することが望ましくあり得る。ここで、RNAベクター分子の転写(自己触媒性増幅が可能である)は、全ての基底レベルの転写を除去する2つのレベルの調節によって非常に厳密に制御されるプロモーターから生じる。このようなアプローチは、1つの誘導性成分(例えば、上記由来のtet系)と可逆的な転写のサイレンシング成分とを組み合わせ得る。例えば、特定のジンクフィンガータンパク質のKRAB抑制ドメインを使用し得る。
5’−ATATACTCGAGTAGCA/ATGGTGAAACCAGTAACGTTATAC
逆方向プライマー:LacI3’NLSR(5’−NLS/lacI配列)(配列番号96)
5’−GCCCTTTCTCTTCTTTTTTGG/CTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAAC。
5’−CCAAAAAAGAAGAGAAAG/GGCGGTGGTGCTTTGTCTCCT
逆方向プライマー:KRAB3’R(5’−制限部位+停止コドン/KRAB配列)(配列番号98)
5’−ATATAGAGCTCTTA/AACTGATGATTTGATTTCAAATGC。
5’−CGCGCCGAATTGTGAGCGCTCACAATTCGG
LacOsymA oligoを、自己アニールさせてAscI「粘着末端」DNAフラグメントを形成させ、次いでAscIで消化し、アルカリホスファターゼで処理し、そしてGENECLEAN IIを用いて0.7%ゲルから精製したプラスミドptetSIN1gpt−lucに連結する。lacO配列の1つ、2つ、3つ、またはそれ以上のタンデムコピーを含むクローンを配列分析によって同定し、そしてそれらに名称pOItetSIN1gpt−luc、pOIItetSIN1gpt−luc、pOIIItetSIN1gpt−lucなどを与える。次いで、異なるlacOコピー数を有する個々のクローンを、以下に記述するようにトランスフェクトし、そして転写調節の最も厳密なレベルについて試験する。
アルファウイルス由来の空のまたはキメラのウイルス粒子の生成方法
実施例6に示したように、個々の欠陥ヘルパー(DH)発現カセットを、複数のアルファウイルスまたはそれらの改変体由来のエレメントを含むように構築し得る。従って、実施例6に記載のように、ウイルス糖タンパク質の発現のための分割(split)構造遺伝子DHカセットを、異なるアルファウイルス種由来のキャプシド遺伝子および糖タンパク質遺伝子を含むように構築し得る。例えば、このような異種アルファウイルス糖タンパク質DHカセットは、ロスリバーウイルス(RRV)由来のキャプシド遺伝子、およびシンドビスウイルス由来の糖タンパク質遺伝子を含み得る。この構成(configuration)において、RRVキャプシド遺伝子は、糖タンパク質遺伝子の翻訳のレベルを増強するように働く。
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- 本明細書に記載されるような、アルファウイルスベクター。
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WO1999009192A1 (en) * | 1997-08-15 | 1999-02-25 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Semliki forest virus vectors for gene transfer into non-endothelial cardiovascular cells |
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US6329201B1 (en) | 1998-12-31 | 2001-12-11 | Chiron Corporation | Compositions and methods for packaging of alphavirus vectors |
JP2002533124A (ja) | 1998-12-31 | 2002-10-08 | カイロン コーポレイション | Hivポリペプチドの改善された発現およびウイルス様粒子の生成 |
US7935805B1 (en) | 1998-12-31 | 2011-05-03 | Novartis Vaccines & Diagnostics, Inc | Polynucleotides encoding antigenic HIV Type C polypeptides, polypeptides and uses thereof |
WO2000061772A2 (en) * | 1999-04-14 | 2000-10-19 | Chiron Corporation | Compositions and methods for generating an immune response utilizing alphavirus-based vector systems |
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US6767699B2 (en) | 2000-05-31 | 2004-07-27 | Chiron Corporation | Method for the quantitation of alphavirus replicon particles |
AU2001290642A1 (en) | 2000-09-07 | 2002-03-22 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Vectors derived from south african arbovirus no. 86 |
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EP1363663B1 (en) | 2001-01-12 | 2011-03-02 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Nucleic acid mucosal immunization |
DE60236864D1 (de) | 2001-05-31 | 2010-08-12 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Chimere alphavirus-replikon-partikel |
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WO2003004620A2 (en) | 2001-07-05 | 2003-01-16 | Chiron, Corporation | Polynucleotides encoding antigenic hiv type c polypeptides, polypeptides and uses thereof |
CA2452119C (en) | 2001-07-05 | 2013-10-15 | Chiron Corporation | Polynucleotides encoding antigenic hiv type b and/or type c polypeptides, polypeptides and uses thereof |
EP1386926A1 (en) * | 2002-07-29 | 2004-02-04 | Bioxtal | Methods for producing labelled recombinant polypeptides and uses thereof |
WO2004060396A2 (en) | 2002-12-27 | 2004-07-22 | Chiron Corporation | Immunogenic compositions containing phospholpid |
CA2528007C (en) | 2003-06-02 | 2012-03-27 | Chiron Corporation | Immunogenic compositions based on microparticles comprising adsorbed toxoid and a polysaccharide-containing antigen |
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CA2572921C (en) | 2004-07-09 | 2017-01-03 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Replication-competent and propagation-defective venezuelan equine encephalitis (vee) viral adjuvants |
WO2006050394A2 (en) | 2004-11-01 | 2006-05-11 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Combination approaches for generating immune responses |
CA2597921A1 (en) | 2005-02-15 | 2007-04-26 | University Of North Carolina At Chapel Hill | New live virus vaccines |
CN101355960A (zh) | 2005-10-18 | 2009-01-28 | 诺华疫苗和诊断公司 | 使用α病毒复制子颗粒进行粘膜和全身免疫 |
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EP2878674A1 (en) | 2013-11-28 | 2015-06-03 | Fundación Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares Carlos III (CNIC) | Stable episomes based on non-integrative lentiviral vectors |
EP3105311A1 (en) | 2014-02-10 | 2016-12-21 | Univercells NV | System, apparatus and method for biomolecules production |
JP6799066B2 (ja) * | 2016-08-10 | 2020-12-09 | 株式会社GenAhead Bio | 真核細胞のゲノムの標的部位を改変する方法及び標的部位における検出対象核酸配列の存在又は非存在を検出する方法 |
US11141377B2 (en) | 2017-06-15 | 2021-10-12 | Infectious Disease Research Institute | Nanostructured lipid carriers and stable emulsions and uses thereof |
NL2022538B1 (en) | 2019-02-08 | 2020-08-19 | Academisch Ziekenhuis Groningen | Methods for providing purified viral particles of Semliki Forest Virus (SFV), preparations obtainable thereby, and uses thereof. |
AU2021335334A1 (en) | 2020-09-04 | 2023-04-20 | Access To Advanced Health Institute | Genetically-adjuvanted rna vaccines |
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Family Cites Families (53)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ZA802992B (en) | 1979-06-01 | 1981-10-28 | Univ California | Human pre-growth hormone |
US4431740A (en) | 1979-09-12 | 1984-02-14 | The Regents Of The University Of California | DNA Transfer vector and transformed microorganism containing human proinsulin and pre-proinsulin genes |
GR70279B (ja) | 1979-09-12 | 1982-09-03 | Univ California | |
AU561343B2 (en) | 1981-10-19 | 1987-05-07 | Genentech Inc. | Human immune interferon by recombinant dna |
US4769330A (en) | 1981-12-24 | 1988-09-06 | Health Research, Incorporated | Modified vaccinia virus and methods for making and using the same |
US4603112A (en) | 1981-12-24 | 1986-07-29 | Health Research, Incorporated | Modified vaccinia virus |
DE3377363D1 (en) | 1982-03-31 | 1988-08-18 | Ajinomoto Kk | Gene coding for interleukin-2 polypeptide, recombinant dna carrying said gene, cell lines possessing the recombinant dna,and method for producing interleukin-2 using said cells |
US4745069A (en) | 1982-05-25 | 1988-05-17 | Eli Lilly And Company | Cloning vectors for expression of exogenous protein |
JPS5936698A (ja) | 1982-08-20 | 1984-02-28 | Science & Tech Agency | B型肝炎ウイルス遺伝子を組込んだ組換えdnaおよび形質転換動物細胞 |
US4966843A (en) | 1982-11-01 | 1990-10-30 | Cetus Corporation | Expression of interferon genes in Chinese hamster ovary cells |
US4703008A (en) | 1983-12-13 | 1987-10-27 | Kiren-Amgen, Inc. | DNA sequences encoding erythropoietin |
US4892743A (en) | 1983-12-21 | 1990-01-09 | Schering Corporation | Novel hybrid interferon species |
WO1985002862A1 (en) | 1983-12-23 | 1985-07-04 | Monash University | PRODUCTION OF HUMAN INTERFERON-alpha |
US4696898A (en) | 1984-01-16 | 1987-09-29 | Integrated Genetics, Inc. | Vector encoding hepatitis B surface antigen |
AU594014B2 (en) | 1984-03-21 | 1990-03-01 | Research Corporation Technologies, Inc. | Recombinant DNA molecules |
EP0174835A1 (en) | 1984-09-11 | 1986-03-19 | The Upjohn Company | Human tissue plasminogen activator and recombinant DNA compounds |
EP0201153A3 (en) | 1985-02-09 | 1987-10-07 | Beecham Group Plc | Modified enzyme and process for its preparation |
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
GB8508845D0 (en) | 1985-04-04 | 1985-05-09 | Hoffmann La Roche | Vaccinia dna |
JPS63500636A (ja) | 1985-08-23 | 1988-03-10 | 麒麟麦酒株式会社 | 多分化能性顆粒球コロニー刺激因子をコードするdna |
US4810643A (en) | 1985-08-23 | 1989-03-07 | Kirin- Amgen Inc. | Production of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor |
US4777127A (en) | 1985-09-30 | 1988-10-11 | Labsystems Oy | Human retrovirus-related products and methods of diagnosing and treating conditions associated with said retrovirus |
US5017691A (en) | 1986-07-03 | 1991-05-21 | Schering Corporation | Mammalian interleukin-4 |
US5091309A (en) | 1986-01-16 | 1992-02-25 | Washington University | Sindbis virus vectors |
US4800159A (en) | 1986-02-07 | 1989-01-24 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences |
JPS62236493A (ja) | 1986-04-08 | 1987-10-16 | Green Cross Corp:The | HBウイルスのPre S領域を含むHBsAgの製造方法 |
ATE92966T1 (de) | 1986-05-06 | 1993-08-15 | Genetics Inst | Herstellung von m-csf. |
US4987071A (en) | 1986-12-03 | 1991-01-22 | University Patents, Inc. | RNA ribozyme polymerases, dephosphorylases, restriction endoribonucleases and methods |
US5116742A (en) | 1986-12-03 | 1992-05-26 | University Patents, Inc. | RNA ribozyme restriction endoribonucleases and methods |
EP0278940A3 (en) | 1987-01-30 | 1988-12-07 | Smithkline Biologicals S.A. | Hepatitis b virus surface antigens and hybrid antigens containing them |
GB8702816D0 (en) | 1987-02-07 | 1987-03-11 | Al Sumidaie A M K | Obtaining retrovirus-containing fraction |
NO882226L (no) | 1987-05-22 | 1988-11-23 | Zymogenetics Inc | Fibrinolytiske proteiner. |
AU619753B2 (en) | 1987-06-22 | 1992-02-06 | Medeva Holdings B.V. | Hepatitis b surface antigen vaccine |
WO1989001973A2 (en) | 1987-09-02 | 1989-03-09 | Applied Biotechnology, Inc. | Recombinant pox virus for immunization against tumor-associated antigens |
US5254678A (en) | 1987-12-15 | 1993-10-19 | Gene Shears Pty. Limited | Ribozymes |
AP129A (en) | 1988-06-03 | 1991-04-17 | Smithkline Biologicals S A | Expression of retrovirus gag protein eukaryotic cells |
CA1340323C (en) | 1988-09-20 | 1999-01-19 | Arnold E. Hampel | Rna catalyst for cleaving specific rna sequences |
CA2004261A1 (en) | 1988-12-01 | 1990-06-01 | Charles T. Tackney | Synthetic interleukin-6 |
ATE277193T1 (de) | 1989-03-21 | 2004-10-15 | Vical Inc | Expression von exogenen polynukleotidsequenzen in wirbeltieren |
US5240845A (en) | 1989-07-11 | 1993-08-31 | Otsuka Pharmaceutical Factory, Ltd. | Mutated streptokinase proteins |
AU648261B2 (en) | 1989-08-18 | 1994-04-21 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Recombinant retroviruses delivering vector constructs to target cells |
IL95511A (en) | 1989-08-30 | 2000-10-31 | Max Planck Gesellschaft | Neurotrophin-3 a novel neurotrophic factor related to nerve growth and brain derived neurotrophic factor |
IE903130A1 (en) | 1989-09-15 | 1991-03-27 | Regeneron Pharma | Ciliary neurotrophic factor |
US5225337A (en) | 1989-09-25 | 1993-07-06 | Innovir Laboratories, Inc. | Ribozyme compositions and methods for use |
US5246921A (en) | 1990-06-26 | 1993-09-21 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Method for treating leukemias |
AU659645B2 (en) | 1991-06-26 | 1995-05-25 | Inhale Therapeutic Systems | Storage of materials |
WO1993010150A1 (en) | 1991-11-14 | 1993-05-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Expression of neurotrophic factors with heterologous prepro regions |
AU671971B2 (en) | 1991-11-29 | 1996-09-19 | Chiron Corporation | Anti-cancer immunotherapeutic vector constructs |
DK0625204T3 (da) | 1992-02-04 | 2002-07-15 | Chiron Corp | Terapeutiske midler mod hepatitis |
EP0814154B1 (en) | 1993-09-15 | 2009-07-29 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Recombinant alphavirus vectors |
US5631148A (en) | 1994-04-22 | 1997-05-20 | Chiron Corporation | Ribozymes with product ejection by strand displacement |
US5580967A (en) | 1994-05-13 | 1996-12-03 | The Scripps Research Institute | Optimized catalytic DNA-cleaving ribozymes |
-
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Title |
---|
JPN6010037420, J.Virol.,Vol.33,No.1(1980)p.463−474 * |
JPN6010037421, Virology,Vol.228,No.1(1997.Feb.)p.74−83 * |
Also Published As
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