JP2008073046A - 異種タンパク質の製造方法並びにタンパク質の分泌方法 - Google Patents
異種タンパク質の製造方法並びにタンパク質の分泌方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2008073046A JP2008073046A JP2007248136A JP2007248136A JP2008073046A JP 2008073046 A JP2008073046 A JP 2008073046A JP 2007248136 A JP2007248136 A JP 2007248136A JP 2007248136 A JP2007248136 A JP 2007248136A JP 2008073046 A JP2008073046 A JP 2008073046A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- gene
- lpp
- coli
- fermentation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 222
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 143
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 66
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 51
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 title claims description 4
- 101150074251 lpp gene Proteins 0.000 claims abstract description 99
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 91
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 91
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 80
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 26
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 118
- 101100082540 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) pcp gene Proteins 0.000 claims description 62
- 101150082324 lpp1 gene Proteins 0.000 claims description 14
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 12
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 9
- 108010090127 Periplasmic Proteins Proteins 0.000 claims description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- 101150115693 ompA gene Proteins 0.000 claims description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 4
- 101150009573 phoA gene Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 3
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 claims description 3
- 230000004075 alteration Effects 0.000 claims description 3
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 3
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 claims description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 53
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 42
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 40
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 36
- 108010025880 Cyclomaltodextrin glucanotransferase Proteins 0.000 description 22
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 19
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 19
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 17
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 16
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 16
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 16
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 16
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 15
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 15
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 15
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 108010079944 Interferon-alpha2b Proteins 0.000 description 13
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 12
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 11
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 11
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- 102100040018 Interferon alpha-2 Human genes 0.000 description 10
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 9
- 230000001130 anti-lysozyme effect Effects 0.000 description 9
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 9
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 7
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 7
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 6
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 6
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 6
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 5
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5,6-trinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-3,5-dinitrooxy-6-(nitrooxymethyl)oxan-4-yl] nitrate Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O1)O[N+]([O-])=O)CO[N+](=O)[O-])[C@@H]1[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 3
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 3
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 3
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100295756 Acinetobacter baumannii (strain ATCC 19606 / DSM 30007 / JCM 6841 / CCUG 19606 / CIP 70.34 / NBRC 109757 / NCIMB 12457 / NCTC 12156 / 81) omp38 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- VFGBXFZXJAWPOE-PEOIOWGVSA-N CCCCCC[C@H]1OC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H]1C Chemical compound CCCCCC[C@H]1OC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H]1C VFGBXFZXJAWPOE-PEOIOWGVSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- VFGBXFZXJAWPOE-UHFFFAOYSA-N Globomycin Natural products CCCCCCC1OC(=O)CNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C1C VFGBXFZXJAWPOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 2
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 2
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 2
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 101100084022 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) lapA gene Proteins 0.000 description 2
- 101000777492 Stichodactyla helianthus DELTA-stichotoxin-She4b Proteins 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 101150042295 arfA gene Proteins 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010081886 globomycin Proteins 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 101150087557 omcB gene Proteins 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 101150015622 pyk gene Proteins 0.000 description 2
- 101150053304 pykF gene Proteins 0.000 description 2
- 102200070479 rs28933693 Human genes 0.000 description 2
- 102220215286 rs757333753 Human genes 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-IUCAKERBSA-N 2,2-dichloro-n-[(1s,2s)-1,3-dihydroxy-1-(4-nitrophenyl)propan-2-yl]acetamide Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@@H](CO)[C@@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 101100301559 Bacillus anthracis repS gene Proteins 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 206010061765 Chromosomal mutation Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 101100247969 Clostridium saccharobutylicum regA gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- DYDCUQKUCUHJBH-UWTATZPHSA-N D-Cycloserine Chemical compound N[C@@H]1CONC1=O DYDCUQKUCUHJBH-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- DYDCUQKUCUHJBH-UHFFFAOYSA-N D-Cycloserine Natural products NC1CONC1=O DYDCUQKUCUHJBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 230000008836 DNA modification Effects 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Diphosphoinositol tetrakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701832 Enterobacteria phage T3 Species 0.000 description 1
- 101100235845 Escherichia coli (strain K12) lpp gene Proteins 0.000 description 1
- 101100412434 Escherichia coli (strain K12) repB gene Proteins 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 241001302584 Escherichia coli str. K-12 substr. W3110 Species 0.000 description 1
- 108010046276 FLP recombinase Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100040019 Interferon alpha-1/13 Human genes 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 108010036940 Levansucrase Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108010079246 OMPA outer membrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700006385 OmpF Proteins 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 241000191998 Pediococcus acidilactici Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 101150100857 RIOX2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000012722 SDS sample buffer Substances 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 101100114425 Streptococcus agalactiae copG gene Proteins 0.000 description 1
- 101100309436 Streptococcus mutans serotype c (strain ATCC 700610 / UA159) ftf gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 101100398653 Yersinia pestis lamB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000001064 anti-interferon Effects 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- WHWDWIHXSPCOKZ-UHFFFAOYSA-N hexahydrofarnesyl acetone Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)=O WHWDWIHXSPCOKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002410 histidine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 101150012518 lamB gene Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 101150005075 lpp2 gene Proteins 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 101150102636 mlpA gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 101150073640 ompF gene Proteins 0.000 description 1
- 101150093139 ompT gene Proteins 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 108010049023 pediocin PA-1 Proteins 0.000 description 1
- FLTWKHKMXZLDNR-CVMNUACMSA-N pediocin ach Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)OC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1N=CN=C1)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(C)C)[C@@H](C)O)C1C=NC=N1 FLTWKHKMXZLDNR-CVMNUACMSA-N 0.000 description 1
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 101150044854 repA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 101150025220 sacB gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/245—Escherichia (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
【解決手段】lpp遺伝子中又はlpp遺伝子のプロモーター領域に突然変異を有し、かつシグナルペプチドをコードするシグナル配列と機能的に結合されている異種のタンパク質をコードする遺伝子を有するE.コリ菌株を、工業的規模で、Ca2+イオンを4mg/lより高い濃度で含有するか又はMg2+イオンを48mg/lより高い濃度で含有する発酵培地中で発酵させ、その際、該E.コリ菌株が、異種のタンパク質を発酵培地中に分泌し、かつ該タンパク質を発酵培地から分離することを特徴とする方法によって解決される。
【選択図】なし
Description
1. 可溶性タンパク質として細胞内産生;
2. 封入体("インクルージョンボディー")として細胞内産生;
3. ペリプラズムへの分泌。
1)分泌された標的タンパク質のN末端アミノ酸残基が、必ずしもメチオニンである必要はなく、産物の天然の開始アミノ酸と同一であってよいこと、
2)ペリプラズムもしくは発酵培地におけるプロテアーゼ活性が、細胞質中よりも明らかに低いこと、
3)場合により必要となるジスルフィド結合の形成が、酸化条件下で、かつペリプラズム性のシャペロンによって可能となること
である。
1. 細胞を分解せねばならないこと
2. 標的タンパク質を多くの宿主タンパク質から精製せねばならないこと
である。
a)産生系を用いて、同種のタンパク質又はまったく特定のタンパク質しか細胞外で十分に高い収率で製造できないこと、又は
b)系が原則的に種々のタンパク質の製造のために適している場合に、それによって今まで経済的観点から低い収率しか達成されなかったこと、又は
c)培養に引き続き、例えば標的タンパク質と融合相手との開裂のような更なる工程を行わねばならず、これは、後処理を費用のかかるものにすること、又は
d)タンパク質を発酵培地中に高い収率で分泌できる分泌菌株の作製が、費用のかかる突然変異誘発法及びスクリーニング法によってのみ可能であること
である。
E.コリ野生株W3110(米国微生物系統保存機関(ATCC):27325)のlpp欠失突然変異体をλ−レコンビナーゼを用いて作製するために、DatsenkoとWannerの方法(2000年、Proc.Natl.Acad.Sci.USA.97:6640−5)に従って実施した。その際、まずポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって、プライマーとしてオリゴヌクレオチドlpp1(配列番号4)とlpp2(配列番号5)を使用し、かつ鋳型としてプラスミドpKD3(大腸菌ストックセンター(CGSC):7631)を使用して、クロラムフェニコール耐性遺伝子を有し、かつlpp遺伝子の上流領域もしくは下流領域のそれぞれ50塩基対から隣接されている直鎖状DNA断片を作製した。
菌株W3110の染色体中のlpp野生型遺伝子とlpp1アレルとの交換は、相同組み換えによって実施した。そのために、以下のように実施した:
遺伝子合成によって、lpp1アレルと、lpp野生型遺伝子の3′側にあるDNA領域の約200塩基対とを有するDNA分子(配列番号8)を製造した。更に、このDNA分子は、両末端に、それぞれ制限酵素BamHIのためのそれぞれ1つの切断部位を有する。そのlpp1アレルは、配列番号8の塩基8〜245を含む。lpp野生型遺伝子(配列番号1)との差異において、lpp1アレルは、lpp遺伝子の位置229に塩基置換(CからT)を有し、それは未処理のLppタンパク質において位置77のアルギニン残基のシステイン残基への交換をもたらす。遺伝子合成によって作製された配列番号8を有するDNA分子を、完全に制限酵素BamHIによって切断した。クローニングベクターpKO3(Link他著(1997年)、J.Bacteriol.179:6228−37;Harvard Medical School,Department of Genetics,200 Longwood Ave,Boston,MA 02115)を、まず同様に制限酵素BamHIによって切断した。前記のように直鎖化されたプラスミドを、後に該ベクターの再ライゲーションを回避するために、引き続きアルカリ性ホスファターゼで処理した。前記のようにして切断されたDNA分子を互いにライゲーションした。こうして作製されたプラスミドを、pKO3−lpp1と呼称した(図1)。菌株W3110を、CaCl2法によってプラスミドpKO3−lpp1で形質転換し、その際、アンピシリンを用いてプラスミド保有細胞について選択した。lpp野生型遺伝子とlpp1アレルとの引き続いての交換は、相同組み換えの機構を介して、Link他(1997)に記載される手順に従って行った。前記の交換が正確な塩基で染色体中の正しい位置で行われたことは、染色体のlpp領域を、PCRによってオリゴヌクレオチドpykF(配列番号6)とynhG2(配列番号7)を使用し、かつ誤認されたlpp1突然変異体の染色体DNAを鋳型として使用してまず増幅させ、そして引き続きそのPCR産物を同一のオリゴヌクレオチドと一緒に配列決定することによって調べた。
lpp1突然変異体と同様にlpp遺伝子中に1つの点突然変異のみを有するW3110の染色体lpp3突然変異体を作製する際に、実施例2と同様に実施したが、配列番号8を有するDNA断片の代わりに、同様に遺伝子合成によって製造された配列番号9を有するDNA分子を使用したことが異なる。このDNA分子は、lpp3アレル(塩基211〜447)と、lpp野生型遺伝子の5′側にあるDNA領域の約200塩基対とを有する。更に、このDNA分子は、両末端に、それぞれ制限酵素BamHIのためのそれぞれ1つの切断部位を有する。lpp3アレルは、配列番号1との差異において、lpp遺伝子の位置41に塩基置換(GからA)を有し、これは、まだ処理されていないLppタンパク質において位置14のグリシン残基のアスパラギン酸残基への交換をもたらす。それぞれBamHIで切断されたプラスミドpKO3と、lpp3アレルを有するDNA分子のDNA断片のライゲーションによって作製されたプラスミドpKO3−lpp3(図2)を、前記のように菌株W3110中に形質転換した。Link他による手順によって、最後に菌株W3110lpp3が得られた。菌株の調査は、実施例2に記載されるように実施した。
配列番号10を有し、クレブシエラ・ニューモニアエM5a1由来のシクロデキストリン−グリコシルトランスフェラーゼ(CGTアーゼ)遺伝子を有するDNA断片(Genbank番号M15264)を、遺伝子合成によって製造した。このDNA断片を、発現ベクターpJF118ut(図3)中にクローニングした。該ベクターは、DSMZ−ドイツ微生物細胞培養収集館(Braunschweig)で番号DSM18596として寄託されている。pJF118utは、公知の発現ベクターpKK223−3(Amersham Pharmacia Biotech)の誘導体であり、β−ラクタマーゼ遺伝子とテトラサイクリン耐性遺伝子の他に、さらに同様にプラスミド上に存在するLacIq遺伝子産物によって再始動されかつ例えばD−ラクトースもしくはイソプロピル−β−D−チオガラクトピラノシド(IPTG)のようなインデューサーによってスイッチオンすることができるtacプロモーターをも有する。プラスミドpJF118utを、制限酵素EcoRIで完全に切断し、かつそれぞれ直鎖状DNA断片の5′末端で突出した塩基を、S1ヌクレアーゼで分解した。前記のようにして予備調製されたベクターDNA分子を、CGTアーゼを含むDNA断片(配列番号10)とT4−リガーゼを使用してライゲーションした。菌株DH5αを、ライゲーションバッチでCaCl2法に従って形質転換し、その際、アンピシリン(100mg/l)によってプラスミド保有細胞について選択した。アンピシリン耐性形質転換体から、再びプラスミドを単離し、そして制限分析によって調査した。前記のようにして作製された、CGTアーゼ遺伝子の発現がtacプロモーターの制御下にあるプラスミドを、pCGTと呼称した(図4)。
試験バッファー:5mMのトリス塩酸バッファー(>pH6.5)、5mMのCaSO4・2H2O
基質:試験バッファー(pH6.5)中の10%のNoredux溶液
試験バッチ:1mlの基質溶液+1mlの遠心分離され、場合により希釈された培養上清(5分、12000rpm)+3mlのメタノール
反応温度:40℃
・ 溶液を予熱する(約5分、40℃で)。
A=活性
G=CDの含有率(mg/l)=試験バッチ:単位表面×104/標準溶液(10mg/ml)/単位表面
V1=試験バッチにおける希釈係数(前記のように実施した場合:V1=5)
V2=試験で使用する前の培養上清の希釈係数;非希釈の場合:V2=1
t=反応時間(分)
MG=分子量(g/モル)(CD=973g/モル)
1ユニット=1マイクロモルの産物/分
ヒルジンは、65個のアミノ酸を有するポリペプチドであり、天然に薬用蛭から単離された。この実施例においては、N末端アミノ酸配列Ala−Thr−Tyr−Thr−Aspを有するヒルジン誘導体の発酵的製造を記載する。
更なる医薬品として関心が持たれる、E.コリのlpp突然変異体によって細胞外で製造できるタンパク質は、インターフェロンα2bである。インターフェロンα2b遺伝子のための発現ベクターの作製において、以下のように実施した:
配列番号11を有し、EP0220714号に記載されるCGTアーゼ−シグナル配列(配列番号3)とインターフェロンα2bのための遺伝子とからなる遺伝子融合物を有するDNA断片を、遺伝子合成によって製造した。このDNA断片を、制限酵素EcoRI及びPstIで切断し、そして同じ制限酵素で切断されている発現ベクターpJF118utとライゲーションした。このクローニングから得られた、インターフェロンα2b遺伝子の発現がtacプロモーターの制御下にあるプラスミドを、pIFN(図5)と呼称した。
1μlの上清を、サンプルバッファーと混合した(2×Tris SDS−サンプルバッファー(Invitrogen カタログ番号LC2676):0.125Mのトリス塩酸(pH6.8)、4%(w/v)のSDS、20%(v/v)のグリセリン、0.005%(v/v)のブロモフェノールブルー、5%のβ−メルカプトエタノール)。更に、定義された量のインターフェロンα2bを、スタンダードとして一緒に施与した。タンパク質の変性を、100℃に5分間加熱し、氷上で2分間冷却し、そして遠心分離することによって実施した。それらのタンパク質を、電気泳動によって、12%のNuPAGE(登録商標)Bis−Tris−Gel(Invitrogen カタログ番号NP0341)中で、1×MES含有ランニングバッファー(Invitrogen カタログ番号NP0002)を用いて分離させた(電気泳動パラメータ:200Vで40分間)。イムノブロットによる検出と定量化を、以下の仕様に従って実施した:
モジュール:Amersham:Hoefer TE 22 Mini Tank Transfer Unit、コード番号:80−6204−26。
Whatmanフィルタとニトロセルロースメンブレンを、適切な大きさに切断し、そして発泡物品(スポンジ)で転写バッファー(Invitrogen カタログ番号LC3675)に気泡なく染み込ませた。
転写条件:I=200mAの一定の電流、U=無制限、運転時間60分
25mlのプレハイブリダイゼーションバッファー中で該メンブレンをインキュベートする。
室温で30分間振り動かす。
25mlのプレハイブリダイゼーションバッファー+0.15μg/ml(→3.75μg)の抗ヒトIFN抗体(Pepro Tech EC,Biozolを経由した カタログ番号:500−P32A)中で該メンブレンをインキュベートする。
室温で90分間又は一晩振り動かす。
1×PBSと一緒に室温で10秒間振り動かし、バッファーを捨てる。
1×PBSと一緒に室温で15分間2回振り動かし、バッファーを捨てる。
25mlのプレハイブリダイゼーションバッファー+25μl(1:1000)のヤギ抗ウサギIgGセイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲート(HRP)(Southern Biotech、Biozolを経由した カタログ番号4050−05)中で該メンブレンをインキュベートする。
室温で60分間振り動かす。
1×PBSと一緒に室温で10秒間振り動かし、バッファーを捨てる。
1×PBSと一緒に室温で15分間2回振り動かし、バッファーを捨てる。
Lumi−Lightウェスタンブロッティング基質(Roche,カタログ番号2015200)を準備する:Lumi−Lightルミノール/エンハンサー溶液とLumi−Light安定ペルオキシド溶液とを1:1の比率で混合する:ニトロセルロースメンブレン当たり3ml。
プレハイブリダイゼーションバッファー:1×PBS中の5%脱脂粉乳
10×PBS:100mMのNaH2PO4、1.5MのNaCl、NaOHでpH7.5、0.5%のTriton100
1×PBS:10×PBSを完全脱塩水で1:10希釈したもの
定量的評価は、Biorad社製のGS−800 Calibrated Densitometerでイムノブロットをスキャンすることによって、Quantity One 1−D分析ソフト(Biorad)を用いて、施与されたスタンダードと比較することによって実施した。
E.コリのlpp突然変異体を用いて、機能的なFab抗体フラグメントを細胞外で製造することもできる。その際、該細胞は、ドメインVLとCLとを含む軽鎖の相応のフラグメント及びドメインVHとCH1とを含む重鎖の相応のフラグメントを同時に合成し、次いでペリプラズム中に分泌し、最後には発酵培地中に分泌せねばならない。細胞質の外で、その際、両方の鎖の機能的なFabフラグメントへの会合が行われる。
配列番号12を有するDNA断片(重鎖)を、遺伝子合成によって製造し、そして該DNA断片は、E.コリのompA遺伝子のシグナル配列と、Fabフラグメントの重鎖(VH−CH1)のための読み枠とからなる遺伝子融合物を含む。この読み枠直後に6個のヒスチジンコドンが引き続き、従って融合タンパク質のC末端を形成している。このヒスチジンタグによって、後に完全に会合されたFabフラグメントの簡単な精製が親和性クロマトグラフィーによって可能となる。このDNA断片を、制限酵素EcoRI及びPstIで切断し、そして同じ制限酵素で切断されている発現ベクターpJF118utとライゲーションした。このクローニングから得られた、重鎖のための遺伝子の発現がtacプロモーターの制御下にあるプラスミドを、pHC−Anti−Lysozym(図6)と呼称した。
E.コリのlpp突然変異体を用いて、機能的な全長抗体を細胞外で製造することもできる。Fabフラグメントの製造と同様に、該細胞は、抗体の軽鎖と重鎖を同時に合成し、次いでペリプラズム中に分泌し、最後には発酵培地中に分泌せねばならない。次いで、細胞質の外で、両方の鎖の機能的な全長抗体への会合が行われる。
配列番号14を有するDNA断片(重鎖)を、遺伝子合成によって製造し、そして該DNA断片は、E.コリのompA遺伝子のシグナル配列と、抗αTF抗体の重鎖のための読み枠とからなる遺伝子融合物を含む。このDNA断片を、まず、制限酵素EcoRI及びPstIで切断し、そして同じ制限酵素で切断されている発現ベクターpJF118utとライゲーションした。このクローニングから得られた、重鎖のための遺伝子の発現がtacプロモーターの制御下にあるプラスミドを、pHC−Anti−TF(図8)と呼称した。
Claims (13)
- 発酵培地中でE.コリ菌株によって異種タンパク質を製造する方法において、lpp遺伝子中もしくはlpp遺伝子のプロモーター領域中に突然変異を有し、かつシグナルペプチドをコードするシグナル配列と機能的に結合されている異種タンパク質をコードする遺伝子を有するE.コリ菌株を、工業的規模において、Ca2+イオンを4mg/lより高い濃度で含有する又はMg2+イオンを48mg/lより高い濃度で含有する発酵培地中で発酵させ、その際、該E.コリ菌株が、その異種タンパク質を発酵培地中に分泌し、そして該タンパク質を発酵培地から分離することを特徴とする方法。
- 請求項1記載の方法において、lpp遺伝子中の突然変異が、lpp遺伝子中もしくはlpp遺伝子のプロモーター領域中の1個以上のヌクレオチドの置換、欠失もしくは挿入であって、lpp遺伝子がもはや発現されないもしくは僅か少しだけ発現されることとなるもの、又はLppタンパク質の機能の低下を伴うLppタンパク質のアミノ酸配列の改変をもたらすものであることを特徴とする方法。
- 請求項1又は2記載の方法において、lpp遺伝子中の突然変異が、配列番号2の位置77のアルギニン残基のシステイン残基との交換をもたらすもの(lpp1突然変異体)であるか、又は配列番号2の位置14のグリシン残基のアスパラギン酸残基との交換をもたらすもの(lpp3突然変異体)であるか、又はlpp遺伝子自体におけるもしくはlpp遺伝子のプロモーター領域における少なくとも1個のヌクレオチドの欠失に基づき、細胞が、ペリプラズム性のタンパク質について高められた漏出性を有することとなるものであることを特徴とする方法。
- 請求項1から3までのいずれか1項記載の方法において、異種タンパク質が、真核生物のタンパク質であることを特徴とする方法。
- 請求項1から4までのいずれか1項記載の方法において、該タンパク質が、1つ以上のジスルフィド結合を有するか又は機能形において二量体もしくは多量体として存在することを特徴とする方法。
- 請求項4記載の方法において、真核生物のタンパク質が、抗体もしくは抗体フラグメント、サイトカイン、成長因子、プロテインキナーゼ又はタンパク質ホルモンであることを特徴とする方法。
- 請求項4から6までのいずれか1項記載の方法において、抗体フラグメントが、工業的規模で、1g/lより高い細胞外収率で製造されることを特徴とする方法。
- 請求項1から7までのいずれか1項記載の方法において、シグナルペプチドをコードする遺伝子が、E.コリのphoA遺伝子もしくはompA遺伝子のシグナル配列をコードする遺伝子又は配列番号3を有するシグナル配列をコードする遺伝子の群から選択されることを特徴とする方法。
- 請求項5から8までのいずれか1項記載の方法後に、複数の種々のサブユニットからなるタンパク質を分泌させる方法において、産生されるべきタンパク質のサブユニットの遺伝子の5′末端が、読み枠内で、タンパク質排出のためのシグナル配列の3′末端と結合されており、その際、タンパク質の異なるサブユニットの遺伝子が、異なるシグナル配列と結合されていることを特徴とする方法。
- 請求項1から9までのいずれか1項記載の方法において、発酵を、5lより高い容量を有する発酵器中で、特に有利には50lより高い容量を有する発酵器中で実施することを特徴とする方法。
- 請求項1から10までのいずれか1項記載の方法において、Ca2+イオンを4mg/lより高く最大で5000mg/lまでの濃度で、有利には10mg/l〜5000mg/lの濃度で、特に有利には40mg/l〜5000mg/lの濃度で含有する又はMg2+イオンを、48mg/lより高く最大で5000mg/lまでの濃度で含有する又はCa2+イオンとMg2+イオンとを前記濃度で含有する発酵培地を使用することを特徴とする方法。
- 請求項1から11までのいずれか1項記載の方法において、発酵培地が、最少塩培地であることを特徴とする方法。
- 請求項1から12までのいずれか1項記載の方法において、発酵を、24〜72時間の時間にわたって実施することを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP06121090.2 | 2006-09-22 | ||
EP06121090A EP1903105B1 (de) | 2006-09-22 | 2006-09-22 | Verfahren zur fermentativen Herstellung von Proteinen |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008073046A true JP2008073046A (ja) | 2008-04-03 |
JP4751374B2 JP4751374B2 (ja) | 2011-08-17 |
Family
ID=37467448
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007248136A Active JP4751374B2 (ja) | 2006-09-22 | 2007-09-25 | 異種タンパク質の製造方法並びにタンパク質の分泌方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20080254511A1 (ja) |
EP (1) | EP1903105B1 (ja) |
JP (1) | JP4751374B2 (ja) |
AT (1) | ATE465241T1 (ja) |
DE (1) | DE502006006800D1 (ja) |
DK (1) | DK1903105T3 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008073047A (ja) * | 2006-09-22 | 2008-04-03 | Wacker Chemie Ag | 異種タンパク質の製造方法、タンパク質の分泌方法並びに前記方法の実施のためのe.コリ菌株 |
JP2010142227A (ja) * | 2008-12-19 | 2010-07-01 | Wacker Chemie Ag | エシェリキア・コリによる異種タンパク質の発酵的製造方法 |
JP2021531784A (ja) * | 2018-07-24 | 2021-11-25 | ワッカー ケミー アクチエンゲゼルシャフトWacker Chemie AG | 新規細菌lpp突然変異体及び組換えタンパク質の分泌産生のためのその使用 |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE102006004871A1 (de) | 2006-02-02 | 2007-08-09 | Wacker Chemie Ag | Mikroorganismenstamm zur Produktion von rekombinanten Proteinen |
ATE501266T1 (de) * | 2006-09-22 | 2011-03-15 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen herstellung von antikörpern |
WO2012106615A1 (en) * | 2011-02-03 | 2012-08-09 | Xoma Technology Ltd. | Methods and materials for enhancing functional protein expression in bacteria |
CN102827904B (zh) * | 2012-08-13 | 2014-06-04 | 安徽大学 | 一种大肠杆菌胞外生产外源蛋白的集成化方法 |
US9616114B1 (en) | 2014-09-18 | 2017-04-11 | David Gordon Bermudes | Modified bacteria having improved pharmacokinetics and tumor colonization enhancing antitumor activity |
MA45489A (fr) | 2015-10-22 | 2018-08-29 | Juno Therapeutics Gmbh | Procédés de culture de cellules, kits et appareil associés |
CN113755417A (zh) | 2015-12-11 | 2021-12-07 | 瓦克化学股份公司 | 用于无抗生素发酵制备低分子量物质和蛋白质的微生物菌株和方法 |
US11180535B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-11-23 | David Gordon Bermudes | Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria |
US11129906B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-09-28 | David Gordon Bermudes | Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria |
BR112019022356A2 (pt) | 2017-04-27 | 2020-05-26 | Juno Therapeutics Gmbh | Reagentes de partícula oligoméricos e métodos de uso dos mesmos |
WO2020007493A1 (de) | 2018-07-06 | 2020-01-09 | Wacker Chemie Ag | Bakterienstamm zur freisetzung eines rekombinanten proteins in einem fermentationsverfahren |
US11471497B1 (en) | 2019-03-13 | 2022-10-18 | David Gordon Bermudes | Copper chelation therapeutics |
KR20220031670A (ko) | 2019-08-05 | 2022-03-11 | 와커 헤미 아게 | 발효 방법에서 재조합 단백질 방출용 박테리아 균주 |
US10973908B1 (en) | 2020-05-14 | 2021-04-13 | David Gordon Bermudes | Expression of SARS-CoV-2 spike protein receptor binding domain in attenuated salmonella as a vaccine |
CN115029404B (zh) * | 2021-03-04 | 2024-05-14 | 珠海联邦制药股份有限公司 | 用于lpp单基因敲除或突变的大肠杆菌分泌表达短肽类蛋白的发酵培养基及应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002061090A2 (en) * | 2000-12-14 | 2002-08-08 | Genentech, Inc. | Prokaryotically produced antibodies and uses thereof |
JP2008073047A (ja) * | 2006-09-22 | 2008-04-03 | Wacker Chemie Ag | 異種タンパク質の製造方法、タンパク質の分泌方法並びに前記方法の実施のためのe.コリ菌株 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3891508A (en) * | 1973-06-01 | 1975-06-24 | Joseph M Merrick | Method of rapid identification of gram-negative bacteria |
US4643969A (en) * | 1983-07-25 | 1987-02-17 | The Research Foundation Of State University Of New York | Novel cloning vehicles for polypeptide expression in microbial hosts |
DE3538433A1 (de) * | 1985-10-29 | 1987-05-14 | Consortium Elektrochem Ind | Dna-fragment mit dem cyclodextrin-glycosyl-transferase-strukturgen, expressionsvektor, mikroorganismen zur expression und herstellungsverfahren |
US5618920A (en) * | 1985-11-01 | 1997-04-08 | Xoma Corporation | Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use |
US5223482A (en) * | 1986-11-17 | 1993-06-29 | Scios Nova Inc. | Recombinant Alzheimer's protease inhibitory amyloid protein and method of use |
DE3813107A1 (de) * | 1988-04-19 | 1989-11-02 | Consortium Elektrochem Ind | Sekretormutante von escherichia coli |
DE4009268A1 (de) * | 1990-03-22 | 1991-09-26 | Consortium Elektrochem Ind | Sekretion von hirudinderivaten |
US5521084A (en) * | 1992-11-10 | 1996-05-28 | Biostar, Inc. | Bovine heat shock promoter and uses thereof |
ATE501266T1 (de) * | 2006-09-22 | 2011-03-15 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen herstellung von antikörpern |
-
2006
- 2006-09-22 DE DE502006006800T patent/DE502006006800D1/de active Active
- 2006-09-22 DK DK06121090.2T patent/DK1903105T3/da active
- 2006-09-22 EP EP06121090A patent/EP1903105B1/de active Active
- 2006-09-22 AT AT06121090T patent/ATE465241T1/de active
-
2007
- 2007-09-21 US US11/859,616 patent/US20080254511A1/en not_active Abandoned
- 2007-09-25 JP JP2007248136A patent/JP4751374B2/ja active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002061090A2 (en) * | 2000-12-14 | 2002-08-08 | Genentech, Inc. | Prokaryotically produced antibodies and uses thereof |
JP2008073047A (ja) * | 2006-09-22 | 2008-04-03 | Wacker Chemie Ag | 異種タンパク質の製造方法、タンパク質の分泌方法並びに前記方法の実施のためのe.コリ菌株 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008073047A (ja) * | 2006-09-22 | 2008-04-03 | Wacker Chemie Ag | 異種タンパク質の製造方法、タンパク質の分泌方法並びに前記方法の実施のためのe.コリ菌株 |
JP2010142227A (ja) * | 2008-12-19 | 2010-07-01 | Wacker Chemie Ag | エシェリキア・コリによる異種タンパク質の発酵的製造方法 |
JP2021531784A (ja) * | 2018-07-24 | 2021-11-25 | ワッカー ケミー アクチエンゲゼルシャフトWacker Chemie AG | 新規細菌lpp突然変異体及び組換えタンパク質の分泌産生のためのその使用 |
JP7242829B2 (ja) | 2018-07-24 | 2023-03-20 | ワッカー ケミー アクチエンゲゼルシャフト | 新規細菌lpp突然変異体及び組換えタンパク質の分泌産生のためのその使用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20080254511A1 (en) | 2008-10-16 |
EP1903105B1 (de) | 2010-04-21 |
DE502006006800D1 (de) | 2010-06-02 |
EP1903105A1 (de) | 2008-03-26 |
JP4751374B2 (ja) | 2011-08-17 |
ATE465241T1 (de) | 2010-05-15 |
DK1903105T3 (da) | 2010-06-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4751374B2 (ja) | 異種タンパク質の製造方法並びにタンパク質の分泌方法 | |
JP5591445B2 (ja) | 異種タンパク質の製造方法、タンパク質の分泌方法並びに前記方法の実施のためのe.コリ菌株 | |
JP4792017B2 (ja) | シグナルペプチド、それをコードするdna配列、該配列を含む発現構築物、プラスミド及び微生物細胞並びに組み換えタンパク質の発酵的製造方法 | |
JP5378191B2 (ja) | エシェリキア・コリによる異種タンパク質の発酵的製造方法 | |
JP4819772B2 (ja) | 全長抗体の製造方法並びに該方法の実施のためのe.コリ菌株 | |
Retallack et al. | Reliable protein production in a Pseudomonas fluorescens expression system | |
CN1954074A (zh) | 多肽的制备方法 | |
JP2005520569A (ja) | バクテリア内で複数のジスルフィド結合を有する蛋白質の分泌とその利用 | |
JP4783351B2 (ja) | Dna構築物並びに融合タンパク質の発酵的製造方法 | |
JP7242829B2 (ja) | 新規細菌lpp突然変異体及び組換えタンパク質の分泌産生のためのその使用 | |
Malik et al. | Periplasmic production of native human proinsulin as a fusion to E. coli ecotin | |
Hernández et al. | Periplasmic expression and recovery of human interferon gamma in Escherichia coli | |
CN109071611A (zh) | 产生重组蛋白的方法 | |
JP6188574B2 (ja) | 発現プロセス | |
Boyd | Use of gene fusions to determine membrane protein topology | |
JP7259131B2 (ja) | 発酵法で組換えタンパク質を放出する細菌株 | |
RU2426780C2 (ru) | ЭКСПРЕССИОННАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК p6E-tTF, КОДИРУЮЩАЯ ВНЕКЛЕТОЧНЫЙ И ТРАНСМЕМБРАННЫЙ ДОМЕНЫ ТКАНЕВОГО ФАКТОРА ЧЕЛОВЕКА И ШТАММ E.coli BL21[DE3]/p6E-tTF-ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ТКАНЕВОГО ФАКТОРА ЧЕЛОВЕКА | |
US20070243583A1 (en) | Artificial disulfide isomerases and uses thereof | |
Senn | Optimizing expression of recombinant porcine growth hormone in E. coli |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100707 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20101006 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20101012 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101108 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20101227 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20101228 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110128 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110329 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110421 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110520 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4751374 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140527 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |