JP2007534768A - 細菌感染症を治療するためのダルババンシン組成物 - Google Patents

細菌感染症を治療するためのダルババンシン組成物 Download PDF

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Abstract

本発明は、細菌感染症を治療するための方法及び組成物を提供する。この組成物は、低レベルの溶媒の存在下で、A0、A1、B1、B2、C0、C1、イソB0、及びMAGを含む因子の組合せであることができる。本発明の方法は、細菌感染症、特に皮膚軟組織のグラム陽性菌感染症の治療のために、ダルババンシン製剤を投与することを含む。投薬レジメンは、ダルババンシンの反復投与量での投与を含み、これは時には少なくとも1週間血流中の治療的レベルを維持し、細菌感染症に対する延長された治療的作用を提供する。腎患者への投薬レジメンも含まれる。

Description

発明の分野
本出願は、ダルババンシン(Dalbavancin)組成物及び細菌感染症の治療法におけるそのような組成物の使用法に関する。
関連出願の相互参照
本出願は、2003年11月14日に出願された米国特許出願第10/714,261号の一部継続出願である、2004年4月27日に出願された米国特許出願第10/834,395号の一部継続出願である、2005年4月26日に出願された米国特許出願第[代理人整理番号第892,280-225号]を基にした国際出願であり、これは2002年11月18日に出願された米国特許仮出願第60/427,654号、2003年7月8日に出願された第60/485,694号、2003年8月13日に出願された第60/495,048号、及び2003年8月19日に出願された第60/496,483号の恩恵を請求するものである。
発明の背景
米国疾病管理予防センター(CDCP)によると、院内血流感染症は、米国における主要な死因である。米国において年間に挿管される中心静脈カテーテル(CVC)700万件の約5％が、少なくとも1種の血流感染症エピソードに関連している(約350,000件/年)。カテーテル-関連の血流感染症は、細菌の静脈カテーテルを介した血流への侵入時に発生し、生命を脅かし得る。
皮膚軟組織感染症(SSTI)(合併型及び／又は非合併型皮膚・皮膚構造感染症(SSSI)としても公知)は、一般的医学的状態であり、外傷又は外科手技に続発することが多い。黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)及び化膿性連鎖球菌(Streptococcus pyogenes)は、深部組織感染症の患者から最も頻繁に単離される病原菌であるが、健康な皮膚において認められるものを含むあらゆる病原生物が感染症を引き起こし得る。多くのSSTIは、重症度が軽度から中等度であり、経口抗菌剤及び局所清浄により良好に治療することができる。対照的に、より重症な又は合併感染症は、リスク因子(例えば、易感染性血管、糖尿病)のある患者及び／又は難治性もしくは多剤耐性の細菌により引き起こされた感染症を伴う患者において頻繁に発生し、これは強力な静脈内抗菌療法及び攻撃的外科的挫滅組織除去を必要とすることがある。
ブドウ球菌は、臨床的及び治療上の問題点があり、1960年代初期から院内感染症に関連して増えている。コアグラーゼ-陽性メチシリン耐性黄色ブドウ球菌 (MRSA)は、長い間市中感染症及び院内感染症の両方で問題となっており、いくつかのコアグラーゼ-陰性ブドウ球菌が、特にICUの危篤状態の患者の治療において、日和見ヒト病原菌として認められている。臨床上の懸念の別の大きい原因は、世界中の多くの地域でペニシリン-耐性肺炎連鎖球菌(Streptococcus pneumoniae)菌の単離が増加していることである。
糖ペプチド抗生物質バンコマイシン及びテイコプラニンは、多剤耐性グラム陽性菌、特にMRSA、コアグラーゼ-陰性ブドウ球菌(CoNS)、及び腸球菌により引き起こされた重篤な院内感染症に使用されている。バンコマイシン及びテイコプラニンは、MRSAにより引き起こされた感染症に使用され、並びに最近まで、全ての単離体は、均質に感受性であった。しかしテイコプラニンに加えバンコマイシンに対し中等の感受性又は耐性を持つ黄色ブドウ球菌の単離体が、報告される頻度が増している。耐性機構を基に"VanA"、"VanB"又は"VanC"と分類される多くのバンコマイシン-耐性菌が報告されている。従って別の治療の選択肢が必要である。
テイコプラニンは、ほとんどのグラム陽性菌に対し少なくともバンコマイシンと同等に活性があり、引き起こされる有害事象がより少ないように見える。治療の両型は、完全な回復を実現するために、少なくとも1日1回の投薬を必要とする。現在、これらの病原体の一部により引き起こされる重症感染症の治療的選択肢は、極めて制限されている。バンコマイシンに対するグラム陽性病原体の耐性出現は、非常に望ましい有効性の増大の可能性がある新規抗生物質の利用可能性を作り出している。
加えて、現在利用可能な療法よりもより少ない投薬頻度のレジメンは、特に非経口、例えば静脈内又は筋肉内への抗生物質投与に関して、患者の快適さを増大するために望ましい。非経口手段による複数日間毎日の抗生物質投与の必要性のために、時には入院が必要であり、より少ない頻度の投薬は、そのような治療を外来ベースで行うことを可能にするために有利である。
少ない頻度の投薬は、抗生物質投与レジメンの望ましい特徴であるが、投与された抗生物質の「医薬ウインドウ」、すなわち毒性プロファイルは、治療される患者において重症の有害反応を引き起こすことによる危険な治療を伴わずに、大量の単回投与量の投与を可能にするために、十分に許容できるものでなければならない。更に、例え抗生物質が適切な医薬ウインドウを示すとしても、より少ない頻度の投薬は、抗生物質が、望ましい投薬間隔よりも長く治療的有効性を維持するような、適当な血清半減期を示す場合にのみ可能である。抗生物質の血清半減期は、薬物のin vivoの寿命及び血清レベルが依然殺菌効果がある最低トラフレベルに達する時点までの投与後の長さの両方を示す。初回量の抗生物質の投与後の経時的血清トラフレベルは、in vivoにおける抗生物質の最小殺菌レベルを維持するために、更なる投与量が投与されなければならない時点を示す。
近年成功している糖ペプチド抗生物質は、天然の糖ペプチドから理論的に合成されている。例えば、半合成糖ペプチドダルババンシンは、当初アクチノマズラ(Actinomadura)培養物から単離された(Malabarbaら、1998、米国特許第5,750,509号明細書)、天然の抗生物質A 40926から合成された。ダルババンシンは、バンコマイシン又は抗生物質リネゾリドよりも、様々な細菌株に対するより大きい有効性を示し、並びに皮膚軟組織感染症の新規治療の可能性を示している(例えば、Jabesら、Antimicrob. Agents Chemother., 48:1118-1123 (2004)参照)。米国特許第５，７５０，５０９号明細書に従い、ダルババンシンは、そのN15アミノにモノメチル部分を伴う、糖ペプチド抗生物質であり(番号付けについては図1参照)、このN15-モノメチルアミノは、遊離しているか(すなわち、-NHCH3)、又はt-ブトキシカルボニル、カルボベンジルオキシ、アリールアルキルもしくはベンジルなどのアミノ保護基により保護されている。あるダルババンシン成分を作製する方法は、米国特許第5,750,509号明細書に開示されており、同じく少量のダルババンシンのN15,N15-ジアルキルアナログを生成しているが、これらの分子は特徴付けられなかった。
前記病原体を考慮し、抗生物質耐性菌を含む、1種又は複数の細菌に対する活性を有する更なる抗生物質は、商業的価値があり、当該技術分野における長い間の必要性を満足するであろう。
発明の概要
本発明は、ダルババンシンによる細菌感染症の治療又は予防のための、組成物、方法及びキットを提供する。驚くべきことに、ダルババンシンの安定化された製剤は、in vivoにおける抗菌特性は維持しつつ、約5〜7日又はそれよりも長い間隔で1回の治療レジメンを可能にする、医薬ウインドウに加え延長された血清半減期の両方を示すことがわかっている。
従ってひとつの局面において、少なくとも5日間、個体におけるダルババンシンの治療的又は予防的に有効な血漿レベルを提供するのに十分な量のダルババンシン単位投与量、安定剤、及び医薬として許容される担体を含有する医薬組成物が提供される。
本発明の医薬組成物は、医薬として許容される水性製剤などの、個体への投与のための医薬として許容される形に一般に製剤される。このような医薬組成物は、非経口、例えば、静脈内又は筋肉内経路で投与されることが好ましい。従ってこの好ましい態様において、これら医薬組成物は典型的には無菌である。
一部の態様において、ダルババンシンの単位投与量は、乾燥散剤(例えば、凍結乾燥した)形で投与され、及び個体への投与前に、無菌の水性製剤のような、医薬として許容される担体中で再構成される。ひとつの態様において、医薬として許容される担体は、水中に5％デキストロースを含有する。本発明の医薬組成物は、細菌感染症の治療又は予防が必要な哺乳類、例えばヒトへ、投与することができる。一部の態様において、医薬組成物は、グラム陰性菌に対し有効な(例えば、殺菌性の)抗生物質及び／又はダルババンシンが無効であるグラム陽性種、例えばVanAバンコマイシン-耐性菌株に対し有効な抗生物質のような、ダルババンシンでない少なくとも1種の抗生物質を含有することができる。
本発明は、室温で安定したダルババンシン医薬組成物の組成、製造法、及びそれによる細菌感染症の治療又は予防法を提供する。
一部の態様において、個体への投与前の乾燥粉末(例えば、凍結乾燥された)製剤及び／又は水性製剤としての貯蔵時の1種又は複数のダルババンシン成分の分解を阻害するために、1種又は複数の安定化物質が使用される。経時的に、分解は、in vivoにおける有害作用を引き起こす可能性のある、より少ない活性及び／又は不活性の成分の望ましくない形成を生じる。好ましい安定化剤は、非イオン性成分、例えば糖質又は糖アルコール、例えば、単糖、二糖、もしくは多糖、又はそれらの誘導体、例えば、マンニトール、乳糖、ショ糖、ソルビトール、グリセロール、セルロース、トレハロース、マルトースもしくはデキストロース、又はそれらの混合物を含む。
ひとつの態様において、本発明は、安定したダルババンシンを含有する医薬組成物を包含する。
別の態様において、本発明は、ダルババンシン及び安定化剤を含有する医薬組成物を包含する。
更に別の態様において、本発明は、pH約1〜7、より好ましくは2〜6のダルババンシン及び安定化剤を含有する医薬組成物を包含する。別の態様において、この組成物は、pH約3〜5である。この安定化剤は、炭水化物又はアミノ酸を含有することができる。この炭水化物は、マンニトール、乳糖、又はマンニトール及び乳糖の組合せであってよい。マンニトール及び乳糖は、等量又は非等量で添加することができる。ひとつの態様において、等量のマンニトール及び乳糖が添加され、及びpHは約pH4.5に調節される。
別の態様において、本発明は、pH約3で、ダルババンシン及びマンニトールを含有する医薬組成物も包含する。ひとつの態様において、組成物のpHは約3.3である。別の態様において、この組成物は更に乳糖を含有する。添加される乳糖及びマンニトールは、等量又は非等量であって良い。
別の態様において、本発明は、ダルババンシン及び安定化剤を含有する医薬組成物も包含し、ここでこの安定化剤は、マンニトール及び乳糖を含む。マンニトール及び乳糖は、等量で添加することができる。この組成物のpHは、任意に1〜7、より好ましくは2〜6、より好ましくは3〜5、より好ましくは4〜5、より好ましくは約4.5である。
糖ペプチド、特にダルババンシンは、グリコシド連結のために、非常に不安定である。これは、室温で若干分解し、40℃でより分解する。先に説明された製剤の一部は、特別な貯蔵条件が必要である。特に冷蔵が望ましいことがある(例えば、-40〜10℃、あるいは-20〜9℃、より好ましくは2〜8℃)。これらの製剤は更に、滅菌することができる。これらは、投与された場合に、安定した透明な粒子-非含有の溶液を形成するであろう。この溶液は、安定しなければならず、沈殿を含まない。
先に説明された医薬組成物は、好ましくは約25℃で約2年後に、約4％を超えず、より好ましくは約3％を超えず、より好ましくは約2％を超えず、より好ましくは約1％を超えず、より好ましくは約0.5％を超えずに分解される。あるいは、先に説明された医薬組成物は、約25℃で約2年後に、約4％を超えないMAGを有し、より好ましくは約3％を超えないMAGを有し、より好ましくは約2％を超えないMAGを有し、より好ましくは約1％を超えないMAGを有し、より好ましくは約0.5％を超えないMAGを有する。
別の態様において、先に説明された医薬組成物は、約40℃で約3〜6ヶ月後に、好ましくは約6％を超えず、より好ましくは約5％を超えず、好ましくは約4％を超えず、好ましくは約3％を超えず、好ましくは約2％を超えず、好ましくは約1％を超えずに分解される。あるいは、先に説明された医薬組成物は、約40℃で約3〜6ヶ月後に、好ましくは約6％を超えないMAGを有し、より好ましくは約5％を超えないMAG、好ましくは約4％を超えないMAG、好ましくは約3％を超えないMAG、好ましくは約2％を超えないMAG、及び更により好ましくは約1％を超えないMAGを有する。特にこれらの化合物を冷蔵庫又は室温で貯蔵することができないような場所(例えば、第三世界及びインディアン保留地)において、40℃で安定した化合物が望ましい。
更に別の態様において、これらの医薬組成物は、約2〜8℃で約2年後に、3％を超えず、より好ましくは約2％を超えず；より好ましくは約1％を超えず；より好ましくは約0.5％を超えずに分解する。あるいはこれらの医薬組成物は、約2〜8℃で約2年後に、3％を超えないMAGを有し、より好ましくは約2％を超えないMAGを有し；より好ましくは約1％を超えないMAGを有し；より好ましくは約0.5％を超えないMAGを有する。
本発明は、任意のダルババンシン因子の組合せを含有することができるダルババンシン組成物を含む。これらの因子は、ダルババンシン因子A0、A1、B1、B2、C0、C1、イソB0、及びMAGを含む。
本発明は、ダルババンシン組成物中の溶媒レベルを低下するための、乾燥プロセスも含む。この方法は、ダルババンシン、水、及び溶媒を含有する湿潤ダルババンシンを提供するステップ、湿潤ダルババンシンの水レベルが約20％(w/w)未満になるまで、温度約30℃以下及び約50mbar以下の真空圧で湿潤ダルババンシンを乾燥するステップを含む。その後水が、湿潤ダルババンシンへ添加され、乾燥ステップが繰り返される。これらの水を添加するステップ及び湿潤ダルババンシンを乾燥するステップは、溶媒レベルが約3.0％(w/w)未満になるまで繰り返される。これらのステップは、1、2、3、4、5、6回、又は所望の溶媒含量に達するのに必要な回数繰り返すことができる。同様に、本発明は、低レベルの溶媒を有するダルババンシン組成物を含むこともできる。一部の態様において、溶媒レベルは、3.0％(w/w)未満、あるいは2.5％(w/w)未満、あるいは2.0％(w/w)未満、あるいは1.5％(w/w)未満、あるいは1.0％(w/w)未満、あるいは0.5％(w/w)未満、あるいは0.1％(w/w)未満である。この溶媒はアセトンであってよい。あるいはこの溶媒は、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノール、エーテル、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、クロロホルム、1,4-ジオキサン、トリクロロエチレン、ベンゼン、四塩化炭素、1,2-ジクロロエタン、1,1-ジクロロエタン、1,1,1-トリクロロエタン、アセトニトリル、クロロベンゼン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、1,2-ジメトキシエタン、N,N-ジメチルアセトアミド、N,N-ジメチルホルムアミド、1,4-ジオキサン、2-エトキシエタノール、エチレングリコール、ホルムアミド、ヘキサン、2-メトキシエタノール、メチルブチルケトン、メチルシクロヘキサン、N-メチルピロリドン、ニトロメタン、ピリジン、スルホラン、テトラリン、トルエン、1,1,2-トリクロロエタン、キシレン、酢酸、アニソール、1-ブタノール、2-ブタノール、酢酸ブチル、tert-ブチルメチルエーテル、クメン、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、エチルエーテル、ギ酸エチル、ギ酸、ヘプタン、酢酸イソブチル、酢酸イソプロピル、3-メチル-1-ブタノール、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、2-メチル-1-プロパノール、ペンタン、1-ペンタノール、1-プロパノール、2-プロパノール、酢酸プロピル、1-1,ジエトキシプロパン、1,1-ジメトキシメタン、2,2-ジメトキシプロパン、イソオクタン、イソプロピルエーテル、メチルイソプロピルケトン、メチルテトラヒドロフラン、石油エーテル、トリクロロ酢酸、及びトリフルオロ酢酸のいずれかであることができる。加えて、乾燥プロセスは、温度約28℃以下、あるいは温度約26℃以下、あるいは温度約24℃以下、あるいは温度約22℃以下、あるいは温度約20℃以下、あるいは温度約15℃以下、あるいは温度約10℃以下で実行することができる。乾燥手法の真空圧は、約50mbar以下、あるいは約45mbar以下、あるいは約40mbar以下、あるいは約35mbar以下、あるいは約30mbar以下、あるいは約25mbar以下、あるいは約20mbar以下、あるいは約15mbar以下、あるいは約10mbar以下、あるいは約5mbar以下であってよい。加えて水レベルは、約25％(w/w)未満、あるいは約20％(w/w)未満、あるいは約15％(w/w)未満であってよい。
乾燥プロセスは、低い溶媒含量に加え、ダルババンシン組成物中に存在するMAGの量も低下することができる。存在するMAGの量は、HPLC分配の約5％未満、あるいはHPLC分配の約4.5％未満、あるいはHPLC分配の約4.0％未満、あるいはHPLC分配の約3.5％未満、あるいはHPLC分配の約3.0％未満、あるいはHPLC分配の約2.5％未満、あるいはHPLC分配の約2.0％未満、あるいはHPLC分配の約1.5％未満、あるいはHPLC分配の約1.0％未満、あるいはHPLC分配の約0.8％未満、あるいはHPLC分配の約0.6％未満、あるいはHPLC分配の約0.5％未満、あるいはHPLC分配の約0.4％未満、あるいはHPLC分配の約0.3％未満、あるいはHPLC分配の約0.2％未満、あるいはHPLC分配の約0.1％未満であることができる。
本発明は同じく、ダルババンシン因子B2及びイソB0を含有する医薬組成物も含む。B2及びイソB0の各含量は、独立してHPLC分配の約3.0％を超えないことができ、あるいは独立してHPLC分配の約2.5％を超えないことができ、あるいは独立してHPLC分配の約2.0％を超えないことができ、あるいは独立してHPLC分配の約1.5％を超えないことができ、あるいは独立してHPLC分配の約1.0％を超えないことができ、あるいは独立してHPLC分配の約0.5％を超えないことができ、又はあるいは独立してHPLC分配の約0.1％を超えないことができる。
加えて本発明は、ダルババンシン因子B2、イソB0、及びMAGを含有する医薬組成物も含む。B2、イソB0、及びMAGの各含量は、独立してHPLC分配の約3.0％を超えないことができ、あるいは独立してHPLC分配の約2.5％を超えないことができ、あるいは独立してHPLC分配の約2.0％を超えないことができ、あるいは独立してHPLC分配の約1.5％を超えないことができ、あるいは独立してHPLC分配の約1.0％を超えないことができ、あるいは独立してHPLC分配の約0.5％を超えないことができ、又はあるいは独立してHPLC分配の約0.1％を超えないことができる。
本発明は、それが必要な患者へ少なくとも1種の先に説明された医薬組成物を提供すること、及び無菌の安定した粒子-非含有の透明なダルババンシンの治療的有効量を患者へ投与することを含む、細菌感染症を治療する方法も含む。この方法は更に、単回の治療的有効継続量を投与することを更に含むことができる。単回治療的継続量は、初回量後、約5〜10日間、又は約1週間に投与することができる。単回治療的継続量は、ダルババンシンの介入量を伴わずに、約5〜10日間、又は約1週間に投与することができる。別の態様において、本方法は、反復継続量を投与することを含んでもよい。反復継続量は、約5〜10日間隔で、又は1週間間隔で、投与することができる。反復継続量は、ダルババンシンの介入量を伴わずに、約5〜10日間隔で、又は1週間間隔で投与することもできる。この方法は、初回量の投与後感染症をモニタリングし、及び任意に、それに従い継続量(複数)を調節する更なるステップも含むことができる。
本発明は、無菌の安定した粒子-非含有の透明なダルババンシンを治療的有効量を患者へ投与することを含む、腎機能不全患者の細菌感染症を治療する方法も含む。この機能不全は、軽症から重症の範囲であることができる。ひとつの態様において、治療的有効量は、少なくとも100mg/Lの患者のピーク濃度(Cmax)を実現する。別の態様において、治療的有効量は、少なくとも13,000mg・h/Lの患者曝露(曲線下面積)を実現する。この方法は、ダルババンシン約300〜1200mg、あるいは約400mg、あるいは約500mg、あるいは約600mg、あるいは約700mg、あるいは約800mg、あるいは約900mg、あるいは約1000mg、あるいは約1100mg、あるいは約1200mgの単回投与量を投与することを含んでよい。
腎機能不全患者の細菌感染症を治療する方法は、反復投与量のダルババンシンを投与することも含むことができる。ひとつの態様において、ふたつの投与量は、約5〜約10日間をあけて、例えば約1週間間をあけて投与しても、あるいは約10〜約18日間間をあけて、例えば約2週間(又は14日)間をあけて投与してもよい。あるいは、投与頻度は、例えば毎週2回投与、毎週3回投与、又は毎週多数回投与であることができる。あるいは投薬間隔は、例えば約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25日又はそれよりも長く間をあけることができる。与えられる投与回数は、例えば1、2、3、4、5、6回又はそれよりも多い投与であることができ、初回量後の各投与は、選択された投与間隔で与えられる。
ひとつの態様において、初回投与量は約750mgであり、及び2回目(又は継続)投与量は約250mgであることができる。別の態様において、初回投与量は約750mgであることができ、及び2回目(又は継続)投与量は約150mgであることができる。別の態様において、初回投与量は約750mgであり、及び2回目(又は継続)投与量は約125mgであることができる。別の態様において、初回投与量は約1000mgであり、及び2回目(又は継続)投与量は約500mgであることができる。
別の態様において、初回投与量は、約200mg〜約1500mg、あるいは約200mg〜約1300mg、あるいは約100mg〜約1500mg、あるいは約200mg〜約1400mg、あるいは約300mg〜約1300mg、あるいは約400mg〜約1200mg、あるいは約500mg〜約1100mg、あるいは約600mg〜約1000mg、あるいは約1000mg、あるいは約950mg、あるいは約900mg、あるいは約850mg、あるいは約800mg、あるいは約750mg、あるいは約700mg、あるいは約650mg、あるいは約600mg、あるいは約550mg、又はあるいは約500mgであることができる。2回目投与量又は継続量は、約200mg〜約1500mg、あるいは約200mg〜約1300mg、あるいは約100mg〜約1500mg、あるいは約200mg〜約1400mg、あるいは約300mg〜約1300mg、あるいは約400mg〜約1200mg、あるいは約500mg〜約1100mg、あるいは約600mg〜約1000mg、あるいは約600mg、あるいは約550mg、あるいは約500mg、あるいは約450mg、あるいは約400mg、あるいは約350mg、あるいは約300mg、あるいは約250mg、あるいは約200mg、あるいは約150mg、又はあるいは約100mgであることができる。投薬レジメンにおいて、前記初回投与量のいずれかを、前記2回目投与量又は継続量のいずれかと組合せることができることが理解される。
腎臓患者又は健常者への反復投薬レジメンにおいて、初回と2回目(又は継続)投与量の比は、因子により定義することができる。初回投与量の量は、2回目投与量の量の約1倍よりも多いことができる。あるいは初回投与量は、2回目(又は継続)投与量の約1.5倍よりも多い、約2倍よりも多い、約2.5倍よりも多い、約3倍よりも多い、約3.5倍よりも多い、約4倍よりも多い、約4.5倍よりも多い、約5倍よりも多い、約5.5倍よりも多い、又は約6倍よりも多いことができる。
同様に、2回目(又は継続)投与量の量は、初回投与量の約6倍未満である。あるいは、2回目(又は継続)投与量は、初回投与量の量の約5.5倍であるか、あるいは約5.0倍未満、あるいは約4.5倍未満、あるいは約4.0倍未満、あるいは約3.5倍未満、あるいは約3.0倍未満、あるいは約2.5倍未満、あるいは約2.0倍未満、あるいは約1.5倍未満、あるいは約1.0倍未満であることができる。
腎機能不全患者の細菌感染症を治療する方法は、ダルババンシンの単回投与量を投与することを含むことができる。患者は、軽症、中等度、重度、又は末期の腎機能不全であることができる。この単回投与量の量は、約1200mg、あるいは約1150mg、あるいは約1100mg、あるいは約1050mg、あるいは約1000mg、あるいは約950mg、あるいは約900mg、あるいは約850mg、あるいは約800mg、あるいは約750mg、あるいは約700mg、あるいは約650mg、あるいは約600mg、あるいは約550mg、あるいは約500mgであることができる。この単回投与量の量は、約250mg〜約1300mg、あるいは約300mg〜約1200mg、あるいは約350mg〜約1100mg、あるいは約400mg〜約1000mg、あるいは約450mg〜約1000mg、あるいは約500mg〜約1000mg、あるいは約550mg〜約950mg、あるいは約600mg〜900mg、あるいは約650mg〜約850mgであることもできる。
本発明は、ダルババンシンを提供し及び安定化剤を添加することを含む、先に説明された医薬組成物を製造する方法も含む。ひとつの態様において、安定化剤は、炭水化物又は糖質である。別の態様において、安定化剤は、マンニトール、乳糖、又はそれらの組合せである。
更に別の態様において、この方法は、必要ならば組成物のpHを調節するステップを更に含む。ひとつの態様において、pHは約1〜7、より好ましくは約2〜6、より好ましくは約3〜5に調節される。pHは、pH調節剤により調節することができる。pH調節剤は、アルカリ金属及びアルカリ土類金属の無機塩基、例えばNaOH、Ca(OH)2、KOH、及びMg(OH)2を含む。アルカリ金属及びアルカリ土類金属の無機酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩も、pH調節剤として使用することができる。リン酸、ホウ酸、硫酸及び他のイオウ-含有酸の全てのような、無機弱酸及び両性酸のアルカリ塩及びアルカリ性塩は、pH調節剤として使用することができる。リシン、メグルミン、アルギニン、n-メチルグルコサミンなどのアミノ酸も、pHを調節するために使用することができる。全てのアミン、フェノール、弱カルボン酸、ジカルボン酸、ヒドロキシカルボン酸及びそれらの塩を含む有機塩基も、組成物のpHを調節するために使用することができる。
別の局面において、少なくとも5日間個体においてダルババンシンの治療的に有効な血漿レベルを提供するのに十分量のダルババンシン及び医薬として許容される担体の少なくとも1種の単位投与量を投与することを含む、それが必要な個体において細菌感染症を治療する方法が提供される。ダルババンシンの治療的に有効な血漿レベルは一般に、血漿1L中にダルババンシン少なくとも約4mgである。ひとつの態様において、投与されるダルババンシン用量は、臨床的に有効な量であり、テイコプラニン及びバンコマイシンなどの標準の薬物療法と比べ低下した有害な副作用を有する。
ダルババンシンは、単回投与量として又は反復投与量として投与することができる。一部の態様において、ダルババンシンの約100mg〜約4000mg、例えば3000mgの単回投与量が投与される。様々な態様において、ダルババンシン単回投与量は、少なくとも約0.1、0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、又は3gのいずれかを含むことができる。
別の態様において、2種の投与量が、約5〜約10日間間をあけて、例えば約1週間間をあけて投与される。初回投与量は、ダルババンシン約500〜約5000mgであり、及び2回目投与量は、ダルババンシン約250mg〜約2500mgである。時には初回投与量は、2回目投与量に含まれるダルババンシン量の約1.5〜約3倍、時には少なくとも約2倍含まれる。例えば初回投与量は、約1000mgであり、及び2回目投与量は、約500mgダルババンシンであることができる。別の態様において、初回投与量は約1200mgであり、及び2回目投与量は約600mgであることができる。2種の投与量が投与される方法において、2回目投与量の投与前の個体におけるダルババンシンの血漿トラフレベルは、一般に少なくとも約4mg、時には少なくとも約10mg、時には少なくとも約20mg、より頻繁には少なくとも約30mgダルババンシン/L血漿であることができ、更により頻繁には少なくとも約40mgダルババンシン/L血漿である。
頻繁に、本発明の方法は、非経口投与、例えば静脈内投与を含む。一部の態様において、投与は、少なくとも約30分間又はそれよりも長く投与が生じるように制御された投与速度で経静脈的である。
本発明の方法は、例えば、黄色ブドウ球菌又は化膿連鎖球菌の皮膚軟組織感染症のような、グラム陽性菌感染症の治療に使用することができる。一部の態様において、感染症は、ペニシリン-耐性及び／又は多剤耐性である。
別の局面において、少なくとも約1日、3日、5日、1週間、又は10日もしくはそれよりも長く、個体のダルババンシンの予防的に有効な血漿レベルを提供するのに十分量の少なくとも1種のダルババンシン単位投与量及び医薬として許容される担体を投与することを含む、細菌感染症を予防する方法が提供される。このダルババンシン用量は、例えば約100mg〜約1000mgである。一部の態様において、ダルババンシンは、医療処置又は入院の前、途中又は後に投与される。
本発明の治療的又は予防的方法は、ダルババンシンでない少なくとも1種の抗生物質、好ましくはグラム陰性菌に対し有効である抗生物質及び／又はVanA菌のような、ダルババンシンが有効でないグラム陽性菌に対し有効である抗生物質の投与を含む。
別の局面において、個体において少なくとも約5日間治療的に有効な血漿レベルを又は少なくとも約1日間ダルババンシンの予防的に有効な血漿レベルを提供するのに十分な量の少なくとも1種のダルババンシンの単位投与量、並びに細菌感染症の治療又は予防法における使用説明書を備えるキットが提供される。キットは、2種の単位剤形を含み、第1の剤形は、第2の剤形中に含まれるダルババンシン量の1.5〜3倍、時には少なくとも約2倍含む。キットは、好ましくはグラム陰性菌に対し有効な、ダルババンシンでない抗生物質を含むこともできる。
ひとつの態様において、乾燥散剤(例えば凍結乾燥された)ダルババンシン組成物を含む第1の容器、及びダルババンシン組成物と混合するための予め決定された量の生理的に許容できる水溶液を含む第2の容器を備えるキットが提供される。このような溶液は、好ましくは無菌の水溶液である。ひとつの態様において、キットは、ダルババンシン組成物を個体へ投与する送達手段、例えば注射器又は静脈内投与手段を備える。
本発明は、感染性微生物に対し有用性のあるN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物も提供する。本発明の化合物は、SSTI及び他の細菌感染症のような、微生物感染症の治療及び／又は予防において有用である。
本発明は、一部、それまで公知のN15-モノアルキル抗生物質化合物、例えばダルババンシン化合物と少なくとも同等、又は更により大きい抗菌活性を有するN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の発見も基にしている。加えて、下記実施例において説明されるような、本発明のある種のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、それまで公知のN15-モノメチルダルババンシン化合物などのN15-モノアルキル抗生物質化合物と比較して、微生物の広範なスペクトルに対する活性を示す。
ひとつの局面において、本発明は、式(I)のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を提供する。
Figure 2007534768
本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物(図26に従い番号付けられた原子を有する)は、アミノ末端窒素上に2個のアルキル置換基を有する。別の表現をすると、式(I)のR1及びR1’は、アルキルである。本発明の最も好ましい態様において、R1及びR1’はメチルである。式(I)の他の置換基は、以下に詳述されている。好ましい置換基は、当業者に公知の抗生物質A 40926化合物及び／又はダルババンシン化合物において認められるものを含む。例えば好ましい態様において、G及びMは、以下の項目において説明される、アミノグルクロニル及びマンノピラノシル部分のような、グリコシル部分である。ある態様において、アミノグルクロニル部分は、例えば脂肪酸によりアシル化されており、及びある態様において、マンノピラノシル部分はアセチル化されている。
ある態様において、XはOHである一方で、更なる態様においてXはアミノアルキルアミノである。アミノアルキルアミノ基は、当業者に公知の任意のアミノアルキルアミノ基であることができ、これは米国特許第5,750,509号明細書に開示されたものを含む。好ましい態様において、XはN,N-ジメチルアミノプロピルアミノである。下記実施例に詳細に説明されたように、式(I)の化合物(式中、Xはアミノアルキルアミノである)は、米国特許第5,750,509号明細書に開示されたもののような、対応するダルババンシン化合物と同等又はより大きい抗生物質活性を示す。Xがアミノアルキルアミノである化合物は好ましいが、XがOHである化合物は、例えばXがアミノアルキルアミノである本発明の化合物の調製に有用であり、及びこれらはそれら自身微生物感染症を治療及び／又は予防するために有用であることもできる。
別の局面において、本発明は、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び第2の化合物を含有する組成物を提供する。第2の化合物は、当業者に公知の任意の化合物であることができる。特定の態様において、第2の化合物は、抗生物質化合物、例えば抗生物質A 40926化合物又はダルババンシン化合物である。更なる態様において、第2の化合物は、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物でもある。本発明の例証的組成物は、抗生物質A 40926化合物及び／又は更に式(I)の化合物を含むダルババンシン化合物の混合物を含む。特定の態様において、これらの組成物は、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物で濃厚化される。この濃厚化は、この組成物の抗生物質A 40926化合物及び／又はダルババンシン化合物に関してであるか、又はこの組成物の他の化合物、又は両方に関してであることができる。ある態様において、本発明は、本発明の精製されたN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物、単離された本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物、又は精製及び単離された本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を含有する組成物を提供する。
更なる局面において、本発明は、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を含有する医薬組成物を提供する。好ましい組成物は、式(I)の化合物を含み、ここでXはアミノアルキルアミノである。この組成物は更に、他の活性成分を更に含み、これは当業者に公知の抗生物質A 40926化合物及び／又はダルババンシン化合物を含む。ある態様において、医薬組成物は更に、医薬として許容される担体、賦形剤又は希釈剤を含有する。特定の態様において、本発明は、例えば微生物感染症の治療及び／又は予防に使用するための、本発明の化合物の医薬単位剤形を提供する。
更なる局面において、本発明は、ダルババンシン因子B0及びB2を含む、医薬として許容されるビヒクルによる再構成に適している、無菌の安定した粒子-非含有のダルババンシン散剤を含有する剤形を提供する。名称B2、C2、及びN15,N15-ジメチルダルババンシンB0は、互換的に使用される。ひとつの態様において、因子B0の含量は、HPLC分配の約75％以上、あるいはHPLC分配の約80％以上、あるいはHPLC分配の約85％以上、あるいはHPLC分配の約90％以上、あるいはHPLC分配の約95％以上である。B2の含量は、HPLC分配の約4.0％以上、あるいはHPLC分配の約5.0％以上、あるいはHPLC分配の約6.0％以上、あるいはHPLC分配の約7.0％以上、あるいはHPLC分配の約8.0％以上、あるいはHPLC分配の約9.0％以上、あるいはHPLC分配の約10.0％以上、あるいはHPLC分配の約15.0％以上、あるいはHPLC分配の約20.0％以上、あるいはHPLC分配の約25.0％以上、あるいはHPLC分配の約30.0％以上、あるいはHPLC分配の約40.0％以上である。特定の成分の％HPLC分配は、総クロマトグラフィー面積に対する各単独成分の面積の比較により計算することができる。この剤形は更に、少なくとも1種の追加因子、例えばダルババンシン因子A0、A1、B1、C0、又はC1を含むことができる。
更なる局面において、本発明は、ダルババンシン因子B0及びB2を含有する医薬組成物を提供する。ひとつの態様において、因子B0の含量は、HPLC分配の約75％以上、あるいはHPLC分配の約80％以上、あるいはHPLC分配の約85％以上、あるいはHPLC分配の約90％以上、あるいはHPLC分配の約95％以上である。B2の含量は、HPLC分配の約3.0％以上、あるいはHPLC分配の約4.0％以上、あるいはHPLC分配の約5.0％以上、あるいはHPLC分配の約6.0％以上、あるいはHPLC分配の約7.0％以上、あるいはHPLC分配の約8.0％以上、あるいはHPLC分配の約9.0％以上、あるいはHPLC分配の約10.0％以上、あるいはHPLC分配の約15.0％以上、あるいはHPLC分配の約20.0％以上、あるいはHPLC分配の約25.0％以上、あるいはHPLC分配の約30.0％以上、あるいはHPLC分配の約40.0％以上である。先に定義されたように、特定の成分の％HPLC分配は、総クロマトグラフィー面積に対する各単独成分の面積の比較により計算することができる。この医薬組成物は更に、少なくとも1種の追加因子、例えばダルババンシン因子A0、A1、B1、C0、又はC1を含むことができる。
別の局面において、本発明は、B2成分の希釈化(de-enrichment)も提供する。ひとつの態様において、因子B2の含量は、HPLC分配の約5.0％以下、あるいはHPLC分配の約4.5％以下、あるいはHPLC分配の約4.0％以下、あるいはHPLC分配の約3.5％以下、あるいはHPLC分配の約3.0％以下、あるいはHPLC分配の約2.5％以下、あるいはHPLC分配の約2.0％以下、あるいはHPLC分配の約1.5％以下、あるいはHPLC分配の約1.0％以下、あるいはHPLC分配の約0.5％以下、あるいはHPLC分配の約0.1％以下である。
別の局面において、本発明は、それが必要な対象において微生物感染症を治療及び／又は予防する方法を提供する。これらの方法は、有効量のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は本発明の組成物の対象への投与を含むことができる。本発明は、バシラス、コリネバクテリウム、リステリア、腸球菌、ブドウ球菌、連鎖球菌、ナイセリア、又はクロストリジウム属の感染症、特に黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、溶血性ブドウ球菌、化膿連鎖球菌、肺炎連鎖球菌、A及びC群連鎖球菌、エンテロコッカス・フェカーリス、枯草菌、淋菌、又はクロストリジウム・ディフィシルのような、グラム陽性又は抗生物質-耐性細菌感染症の予防又は治療を包含している。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物、組成物及び本発明の方法で予防又は治療することができる他の感染症は、グラム陰性菌感染症、例えばバルトネラ、ブルセラ、カンピロバクター、エンテロバクター、エシェリヒア(更には他のプロテオバクテリア)、フランシセラ、ヘリコバクテリア、ヘモフィルス、クレブシラ、レジオネラ、レプトスピラ、モルガネラ、モラクセラ、プロテウス、プロビデンシア、シュードモナス、サルモネラ、セラチア、シゲラ、ステノトロホモナス、ビブリオ、及びエルシニア属感染症、特に大腸菌、プロテウス・ブルガリス、緑膿菌、及びカンジダ・アルビカンスのような酵母の感染症を含む。
発明の詳細な説明
定義
本発明の化合物、そのような化合物を含有する医薬組成物、並びにそのような化合物及び組成物を使用する方法を説明する場合、下記の用語は、特に記さない限りは以下の意味を有する。
「抗生物質A 40926化合物」は、当業者に公知の糖ペプチド抗生物質を意味する。抗生物質A 40926化合物の例は、米国特許第4,935,238号明細書、同第4,868,171号明細書及び同第4,782,042号明細書に開示されており、それらの内容は本明細書に参照として組入れられている。
「ダルババンシン化合物」は、米国特許第5,750,509号明細書及び米国特許出願第2004/0142883号明細書に開示された糖ペプチド抗生物質を意味し、それらの内容は全体が本明細書に参照として組入れられている。当業者に公知の例のダルババンシン化合物の系統的名称は、リストマイシンAアグリコン, 5,31-ジクロロ-38-デ(メトキシカルボニル)-7-デメチル-19-デオキシ-56-O-(2-デオキシ-2-((10-メチル-1-オキソウンデシル)アミノ)-β-D-グルコピラヌロノシル)-38-(((3-(ジメチルアミノ)プロピル)アミノ)-カルボニル)-42-O-α-D-マンノピラノシル-N15-メチル-である。例は、図26及び27に説明されたものを含む。ダルババンシン化合物は、任意に56及び42位に糖鎖部分を伴い、並びに任意に糖鎖上の脂肪酸のようなアシル基を伴う化合物を含む。ダルババンシン化合物は、当業者に公知の天然の抗生物質A-40926に由来することもできる。ダルババンシン化合物の例は、ダルババンシンA0、A1、B0、B1、C0及びC1のような、米国特許出願第2004/0142883号明細書に開示されたものを含む。
下記項目において詳細に説明される「N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物」は、本発明の化合物、すなわち、2個のアルキル基をそのN15窒素上に有する抗生物質化合物を意味する。本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、抗生物質A 40926化合物、又はダルババンシンA0、A1、B0、B1、C0及びC1のような、ダルババンシン化合物に由来することができる。
下記項目において詳細に説明される「N15,N15-ジメチル抗生物質化合物」は、本発明の化合物、すなわち、2個のメチル基をそのN15窒素上に有する抗生物質化合物を意味する。
「アシル」は、ラジカル-C(O)R(式中、Rはアルキルである。)を意味する。
「アルキル」は、好ましくは1〜約11個の炭素原子、より好ましくは1〜8個の炭素原子、更により好ましくは1〜6個の炭素原子を有する一価の飽和脂肪族ヒドロカルビル基を意味する。炭化水素鎖は、直鎖又は分枝鎖のいずれかであることができる。この用語は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、n-ヘキシル、n-オクチル、tert-オクチルなどの基により例示される。用語「低級アルキル」は、1〜6個の炭素原子を有するアルキル基を意味する。
「アルキレン」は、直鎖又は分枝鎖であることができる、好ましくは1〜11個の炭素原子、より好ましくは1〜6個の炭素原子の、二価の飽和脂肪族ヒドロカルビル基を意味する。この用語は、メチレン(-CH2-)、エチレン(-CH2CH2-)、プロピレン異性体(例えば、-CH2CH2CH2-及び-CH(CH3)CH2-)などの基により例示される。
「アミノ」は、ラジカル-NH2を意味する。
「アルキルアミノ」は、ラジカル-NH-アルキル又は-N(アルキル)2を意味する。
「アミノアルキルアミノ」は、-NR-(アルキル)-NR'R"の形のラジカルを意味する(式中、各R、R'及びR"は独立して水素、アルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロヘテロアルキル、置換されたシクロヘテロアルキル、ヘテロアリール又は置換されたヘテロアリール基である。)。好ましいR、R'及びR"基は、水素及びアルキルを含む。アミノアルキルアミノ基の例は、米国特許5,750,509号明細書に開示されており、その内容は全体が本明細書に参照として組入れられている。
「カルボキシ」は、ラジカル-C(O)OHを意味する。
「ジアルキルアミノ」は、ラジカル-NRR'を意味する(式中、R及びR'は、各々独立して、本明細書に定義されたような、アルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロヘテロアルキル、置換されたシクロヘテロアルキル、ヘテロアリール又は置換されたヘテロアリール基を表している。)。
「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを意味する。好ましいハロ基は、フルオロ又はクロロのいずれかである。
特定の成分の「％HPLC分配」は、特定成分に対応するピーク面積を、総クロマトグラフィー面積に対し比較することにより計算される。
「医薬として許容される」は、米国連邦又は州の政府の(研究又は販売用途に関する規制当局により)承認されること、又は動物、より特定するとヒトにおける使用のための、米国薬局方もしくは他の認められた局方に収載されることを意味する。
「医薬として許容される塩」は、医薬として許容でき及び親化合物の望ましい医薬活性を有する本発明の化合物の塩を意味する。このような塩は以下を含む：(1)塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンチルプロピオン酸、グリコール酸、グルタル酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、ソルビン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、3-(4-ヒドロキシベンゾイル)安息香酸、ピクリン酸、シンナム酸、マンデル酸、フタル酸、ラウリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、1,2-エタン-ジスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、4-クロロベンゼンスルホン酸、2-ナフタレンスルホン酸、4-トルエンスルホン酸、樟脳酸、樟脳スルホン酸、4-メチルビシクロ[2.2.2]-オクト-2-エン-1-カルボン酸、グルコヘプトン酸、3-フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、tert-ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、安息香酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などの、有機酸又は無機酸により形成された、酸付加塩；又は、(2)親化合物中に酸性プロトンが存在する場合に形成される、塩で、(a)例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオンもしくはアルミニウムイオンなどの金属イオンにより、又は例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、及びバリウムの水酸化物、アンモニアなどのアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の水酸化物により、交換されたもの、又は、(b)脂肪族、脂環式、又は芳香族有機アミン、例えばメチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、N-メチルグルタミンなどの有機塩基との配位体；のいずれか(例えば、第5,606,036号明細書参照)。
塩は更に、単なる例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなど、及びこの化合物が塩基性官能性を有する場合には、無毒の有機酸もしくは無機酸の塩、例えば塩酸、臭化水素酸、酒石酸、メシル酸、酢酸、マレイン酸、シュウ酸などの塩を含む。用語「医薬として許容されるカチオン」は、酸性官能基の無毒の医薬として許容されるカチオン性対イオンを意味する。このようなカチオンは、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム及びテトラアルキルアンモニウムカチオンなどにより例示される。
「医薬として許容されるビヒクル」は、それと共に本発明の化合物が投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤又は担体を意味する。
「溶媒和物」は、非共有分子間力により結合された、化学量論的又は非化学量論的な量の溶媒を更に含む、本発明の化合物又はそれらの塩を意味する。溶媒が水である場合は、溶媒和物は水和物である。
「予防する」又は「予防」は、疾患又は障害を獲得する(すなわち、疾患に曝露されたか又は素因を有するが、まだその疾患の症状を経験もしくは顕在化していない対象において、発症していない疾患の、少なくとも1種のその疾患の臨床症状を引き起こすこと)リスクの低下を意味する。好ましくは、予防は、まだ疾患もしくは障害に罹患していない対象、又は疾患もしくは障害の症状を未だ示していない対象、例えばまだ感染していないもしくは感染の症状をまだ示していない対象における、化合物又は組成物の使用を意味する。
「対象」は、ヒトを含む。用語「ヒト」、「患者」及び「対象」は、本明細書において互換的に使用される。
「治療的有効量」は、疾患を治療する対象へ投与される場合に、疾患に関するそのような治療を実現するのに十分である、化合物又は組成物の量を意味する。「治療的有効量」は、とりわけ、化合物、疾患及びその重症度、並びに治療される対象の年齢、体重などに左右される。
任意の疾患又は障害を「治療する」又は「治療」は、ひとつの態様において、対象に存在する疾患又は障害を改善する(すなわち、疾患の発生又はそれらの少なくとも1種の臨床症状に抵抗又は軽減する)ことを意味する。別の態様において、「治療する」又は「治療」は、少なくとも1種の生理的パラメータを改善することを意味し、これは対象により識別できないことがある。さらに別の態様において、「治療する」又は「治療」は、生理的(例えば、認められる症状の安定化)又は生理学的(例えば、生理的パラメータの安定化)又は両方のいずれかで、疾患又は障害を変調することを意味する。更に別の態様において、「治療する」又は「治療」は、疾患又は障害の開始を遅らせることを意味する。
同じ分子式を有するがそれらの原子の結合の性質もしくは配列、又はそれらの原子の空間配置が異なる化合物は、「異性体」と称されることが理解される。それらの原子の空間配置が異なる異性体は、「立体異性体」と称される。
互いに鏡像でない立体異性体は「ジアステレオマー」と称され、及び互いに重なることができない鏡像であるものは「エナンチオマー」と称される。化合物が不斉中心を有する場合、例えば、4種の異なる基に結合される場合、エナンチオマーの対が可能である。エナンチオマーは、その不斉中心の絶対配置により特徴付けることができ、並びにカーン・プレローグ表示則に従い(R)もしくは(S)と称されるか、又は分子が偏光面を回転する方法で特徴付け、右旋性又は左旋性(すなわち、各々(+)-又は(-)-異性体)と称される。キラル化合物が、個々のエナンチオマーのいずれか又はそれらの混合物として存在することができる。同じ割合のエナンチオマーを含有する混合物は、「ラセミ混合物」と称される。
ある態様において、本発明の化合物は、1個又は複数の不斉中心を有し；従ってそのような化合物は、個別の(R)-又は(S)-エナンチオマーとして、又はそれらの混合物として生成することができる。例えば式のいずれかの位置で立体化学の定義により特に記さない限りは、本明細書及び「特許請求の範囲」中の特定の化合物の説明又は命名は、個々のエナンチオマー及びそれらの混合物、ラセミ体又はその他の全てを含むことが意図されている。立体化学の決定及び立体異性体の分離の方法は、当該技術分野において周知である。特定の態様において、本発明は、塩基による処理時の本明細書に引用された化合物の立体化学を提供する。
本発明は、新規ダルババンシン医薬組成物、この医薬組成物の製造法、及びこれらの新規組成物を使用する細菌感染症の治療法を提供する。特に本発明は、活性ダルババンシン成分の著しい分解を伴わずに長期間冷蔵又は室温で、より好ましくは少なくとも1年間室温で、より好ましくは少なくとも2年間室温で貯蔵することができる、殺菌活性を有する安定したダルババンシン組成物を提供する。
本発明は、ダルババンシンの改善された投薬レジメン及び新規組成物、並びに抗生物質-耐性菌感染症の改善された治療法も提供する。特に本発明は、5〜7日又はそれよりも長い期間に1回の投薬レジメンで投与される、MRSAのような、1種又は複数の抗生物質耐性の細菌株に対する活性を有するダルババンシン組成物を提供する。
ダルババンシンは、科学文献においてBI 397又はVER001とも称され、これは半合成糖ペプチド混合物であり、その特性は、米国特許第5,606,036号明細書、同第5,750,509号明細書、同第5,843,679号明細書、及び同第5,935,238号明細書に開示されている。
本明細書において使用される用語「ダルババンシン」は、1種又は複数の、好ましくは2種又はそれよりも多い、場合によっては3種又はそれよりも多い、場合によっては4種又はそれよりも多い、場合によっては5種又はそれよりも多い、以下に説明される「A0」、「A1」、「B0」、「B1」、「C0」、「C1」、「B2」、「C2」、「D0」、及び「D1」と称される密接に関連したホモログ、又は単量体、多量体(すなわち、二量体又はより高次の多量体)、互変異性体、エステル、溶媒和物、又はそれらの医薬として許容される塩を含有する組成物を意味する。本明細書において使用される「二量体」又は「多量体」は、ホモ二量体もしくはホモ多量体、すなわち、同じダルババンシンホモログの単量体で構成された二量体もしくは多量体、又はヘテロ二量体もしくはヘテロ多量体、すなわち、少なくとも2種の異なるダルババンシンホモログの単量体で構成された二量体もしくは多量体のいずれかを意味する。これらの因子(factor)は、C2(a.k.a. B2)を除き、N-アシルアミノグルクロン酸部分の脂肪酸側鎖の構造が異なる。C2成分の質量分析は、末端アミノ基上への追加のメチレン基の存在を示している。ダルババンシンは、アシルグルクロナミン部分を欠いている以下に説明された非-ホモログ変種である「MAG」を含むことが多い。個別に、ダルババンシンホモログ及びMAGは、本明細書において「ダルババンシン成分」と称されることが多い。
ダルババンシンは、Malabarba and Donadio, Drugs of the Future, 24(8): 839-846 (1999)に説明されたような、天然の糖ペプチド複合体A-40,926の化学修飾により調製される。ダルババンシンの主成分は、因子B0であり、これは全複合体の＞75％を占める。
ダルババンシン組成物中に存在する各成分の量は、例えば、ダルババンシンの前駆体である天然の糖ペプチド複合体A-40926の調製に使用される発酵条件(例えば、米国特許第5,843,679号明細書参照)、A-40926の発酵ブロスからの回収に使用される条件、A-40926の糖部分のカルボキシル基の選択的エステル化に使用される化学反応、ペプチジルカルボキシル基のアミド化に使用される条件、N-アシルアミノグルクロン酸機能のカルボキシル基のエステルのケン化に使用される条件、ダルババンシンの合成混合物からの回収に使用される条件などを含む、様々な要因により指示される。
好ましい態様において、ダルババンシン組成物は、少なくとも約80〜約98質量％のB0成分を含有する。特に好ましい態様において、ダルババンシンは、下記の量のB0を含有する。
Figure 2007534768
ひとつの態様において、ダルババンシン組成物又は製剤は、成分C0、C1及びC2(B2)を、もし含むとして、最小量含有する。別の態様において、ダルババンシン組成物又は製剤は、成分C0、C1及びC2(B2)のいずれも含まない。
個々のダルババンシン因子は、先にHPLCにより精製され及びNMRにより特徴決定されている。米国特許第5,750,509号明細書において、Malabarbaらは、抗生物質A 40926誘導体を開示し、これはN-アシルアミノグルクロニル部分上にカルボキシ、(C1-C4)アルコキシ-カルボニル、アミノカルボニル、(C1-C4)アルキルアミノカルボニル又はヒドロキシメチル置換基を、及びこの分子の63位にヒドロキシル又はポリアミン置換基を有することを特徴としている。本発明の化合物は、糖ペプチド耐性腸球菌及びブドウ球菌に対し高いin vitro 活性を有することがわかった。しかしMalabarbaらは、医薬として恩恵がある因子の組合せを認めず、アシルグルクロナミン部分を欠いている分解産物の同定もしくは特徴決定もしなかった。Malabarbaらは、MAGをモニタリングせず、無菌型を生成しなかった。Malabarbaらは、単に少量をHPLCにより精製しただけで、定量的質量分析を行わなかった。
ダルババンシン成分のいくつかの化学構造は、下記式IIに示される。
Figure 2007534768
全ての前記ダルババンシン成分は、多くのグラム陽性菌に対し殺菌活性を有する。しかしホモログでないひとつのダルババンシン成分で「MAG」と称されるものは、他の成分に存在するアシルグルコロンアミン部分を欠いており、in vivo及びin vitroの両方において殺菌効果が他のダルババンシン成分よりも低い(表2及び3参照)。MAGは、1種又は複数の他のダルババンシン成分の分解産物と考えられる。従って好ましい態様において、ダルババンシン中のMAGの量は、MAGを含む存在する全ダルババンシン成分の約4、3.5、3、2.5、2、1.5、1又は0.5モル％未満である。
Figure 2007534768
Figure 2007534768
最終薬物質中の追加の修飾は、発酵プロセス、引き続きの化学ステップ、又は乾燥に始まる。イソB0(RRT 0.76)は、ダルババンシン中心構造中の不安定なプロトンのエピマー化により生じるダルババンシンB0のジアステレオマーである。これは、前駆体A-40926の塩基による脱アセチル化時に生じ、A-40,926のジアステレオマーを形成する。このジアステレオマーは引き続き、以下の化学修飾ステップによりイソB0へ転換される。イソB0は、HPLC放出法において良く分解され、APIにおいて検出された唯一の立体異性体である。実験室データは、イソB0は、エステル型(MA-A-1)をダルババンシンへ転換する塩基性加水分解手法時には形成されないことを明らかにしている。イソB0は、NMR及びMSにより特徴付けられ、ダルババンシンB0と同等であるin vivo生物活性が明らかにされている。
ダルババンシン組成物中のイソB0レベルは、約3.5％未満、あるいは約3.0％未満、あるいは約2.5％未満、あるいは約2.0％未満、あるいは約1.5％未満、あるいは約1.0％未満、あるいは約0.5％未満、あるいは約0.4％未満、あるいは約0.3％未満、あるいは約0.2％未満、又はあるいは約0.1％未満である。
ダルババンシン組成物中のイソB0レベルは、あるいは約0.5％〜約3.0％、あるいは約0.5％〜約2.8％、あるいは約0.5％〜約2.5％、あるいは約0.5％〜約2.3％、あるいは約0.5％〜約2.0％、あるいは約0.5％〜約1.8％、あるいは約0.5％〜約1.5％、あるいは約0.5％〜約1.3％、又はあるいは約0.5％〜約1.0％、又はあるいは約0.1％〜約0.5％であってよい。
ダルババンシン組成物中の イソB0のレベルは、あるいは約1.0％以上、あるいは約1.5％以上、あるいは約2.0％以上、あるいは約2.5％以上、あるいは約3.0％以上、あるいは約3.5％以上、あるいは約4.0％以上、あるいは約4.5％以上、又はあるいは約5.0％以上である。
ダルババンシンは、ペプチドグリカンのD-アラニル-D-アラニン-末端とする前駆体に結合することにより、細菌細胞壁の生合成を阻害すると考えられる。ダルババンシンの二量体又はより高次の多量体は、親油性側鎖の細菌の細胞膜との相互作用による更なる殺菌特性を有することができる。例えばMalabarba及びCiabattiら、Current Medicinal Chemistry, 8: 1759-1773 (2001)を参照のこと。ダルババンシン多量体に関する更なる労作は、2003年11月14日に出願された、米国特許出願第10/714,166号明細書(代理人整理番号34231-20052.00)、名称「Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections」に見ることができ、その開示は、全体が本明細書に参照として組入れられている。
In vitro、非臨床、及び臨床のデータは、ダルババンシンは、MRSA及びCoNS、並びにバンコマイシンに対する感受性が悪いか又は耐性がある全ての連鎖球菌並びにVanB及びVanC表現型を含む非-VanA腸球菌種により引き起こされる重篤なグラム陽性菌感染症の治療に恩恵があることを示している。
ダルババンシンは、ブドウ球菌(一部のテイコプラニン-耐性菌を含む)に対し、テイコプラニン及びバンコマイシンよりも、in vitroにおいてより活性がある。ダルババンシンは、ペニシリン-耐性菌を含む、連鎖球菌に対し、テイコプラニン又はバンコマイシンよりもより良い活性を有する。ダルババンシンは、ほとんどの薬物耐性菌を含む、多くのグラム陽性菌に対し、in vitro及びin vivoにおいて活性がある。
ダルババンシンは、典型的にはダルババンシン組成物として個体へ投与される。本明細書において使用される用語「ダルババンシン組成物」又は「ダルババンシン製剤」は、先に定義したダルババンシン、及び1種又は複数の他の非-ダルババンシン成分、例えば医薬として許容される担体、安定化剤、緩衝剤、又は他の類似成分を含有する組成物、典型的には医薬組成物を意味する。
実施例1に示したように、ダルババンシンは、1週間の投与間隔で有効である。従って他の治療選択肢に対するダルババンシンの利点は、この抗生物質を1週間に1回を基本に投薬することができることであり、これにより患者の服薬遵守を最大化し、及び非経口抗生物質投与のための入院の必要性を最小化するか又は長さを短縮する可能性がある。より少ない投薬頻度は、外来ベースの治療を可能にし、従って治療の経費が削減される。更に実施例1に示したように、2回目投与量は初回投与量の約半分であるダルババンシン初回用量の投与の約1週後の2回目投与量は、予想外に治療有効性の著しい改善を提供する。
使用法
ダルババンシンの単回投与量及び反復投与量レジメンを含む、様々な投薬レジメンが、これまでに報告されている。Leightonらは、最適用量比(負荷量(LD)/維持量(MD))が10:1である反復-用量の投与を報告した。この研究において、用量漸増は、1120mgの単回用量(SD)へ、及び1日目の500mg BID、それに続く6連続日の100mg/日の反復用量レジメンであった。Leightonら、「Dalbavancin : Phase I Single and Multiple-Dose Placebo Controlled Intravenous Safety, Pharmacokinetic Study in Healthy Volunteers」、41st ICAAC Abstracts, Chicago, IL, September 22-25 2001, Abstract No. 951, p. 25。
Leightonらは、他の単回及び反復用量の投与も報告している。単回用量試験において、報告された用量漸増は、一連の140mg、220mg、350mg、500mg、630mg、840mg、及び1120mgまで進められた。反復用量相において、この投薬は、負荷量からなり、12時間間をあけて2回の等用量として投与され、引き続き維持量が投与された。出発レジメンは、負荷量150mg BID、それに続く維持量30mg/日を6日間であった。用量漸増は以下のように進めた：200mg BID/40mg、300mg BID/60mg；400mg BID/80mg、及び500mg BID/100mg。Leightonら、「Dalbavancin : Phase I Single and Multiple-Dose Placebo Controlled Intravenous Safety, Pharmacokinetic Study in Healthy Volunteers 」、41st ICAAC, Chicago, IL, December 2001, Poster No. 951。
Whiteらは、70mg、140mg、220mg、又は360mgの単回0.5時間の静脈内注入の投薬レジメンを報告した。反復用量レジメンは、7日間毎日70mgの投与からなった。Whiteら、「V-Glycopeptide: Phase 1 Single and Multiple-Dose Placebo Controlled Intravenous Safety, Pharmacokinetic, and Pharmacodynamic Study in Healthy Subjects」、40th ICAAC, Toronto, Canada, September 17-20, 2000, Poster No. 2196 and Abstract No. 2196。前述の参考文献は全て、全体が本明細書に参照として明確に組入れられている。
新規方法は、細菌感染症治療が必要な個体への、ダルババンシンの投与のために提供される。治療は、予防、療法、又は治癒(cure)を含む。方法は、治療的又は予防的有効量のダルババンシンの1種又は複数の単位投与量の投与を含む。
本明細書において使用される「治療的有効量」は、望ましい治療的転帰(例えば、細菌感染症の軽減又は排除)をもたらすダルババンシンの量を意味する。治療的有効量は、1種又は複数の投与量で投与することができる。「予防的有効量」は、例えば医療処置又は入院により、細菌感染症に易罹患性の及び／又は接触する個体、又は細菌感染症の個体に曝露された個体へ投与された場合に、将来の細菌感染症を予防又は軽減するのに十分なダルババンシンの量を意味する。ダルババンシンは一般に、医薬として許容される担体中で投与される。
ダルババンシンは、水に自在に可溶性である塩酸塩として提供されることが多い。
典型的には、ダルババンシンは、個体へ投与された場合に、数日間、時には少なくとも約5日間、1週間、又は10日間にわたりダルババンシンの治療的又は予防的に有効な血漿レベルを提供するのに十分量のダルババンシンを含有するダルババンシン製剤中の「単位投与量」として投与される。
本明細書において使用される「個体」は、脊椎動物、典型的には哺乳類、時にはヒトを意味する。
先に説明されたダルババンシンの全てのホモログは、時には9日間又はそれよりも長い、血漿中の延長された半減期を示すが、MAGは、他のホモログよりもより短い半減期を有すると考えられる。長い半減期は、バンコマイシン又はテイコプラニンよりもより長い用量間隔を可能にする。実施例1に説明されたように、バンコマイシンについて使用されることが多い1日2回の投薬スケジュール、又は一般にテイコプラニンについて使用される1日1回のスケジュールとは対照的に、ダルババンシンの毎週の投薬は、細菌感染症の管理において有効である。より少ないダルババンシン投薬頻度は、特にこの治療レジメンによる改善された簡便性及び患者の服薬遵守に関して、バンコマイシン及びテイコプラニンに勝る重大な治療上の利点を提供する。驚くべきことに、高投与量(すなわち、驚くほど高くかつ長期持続する血清レベルを生じる)を投与することができ、及び他の利用可能な治療選択肢よりも頻度が低い。より少ない頻度の投薬を実現するのに必要な濃度で、ダルババンシンは最低の有害作用をin vivoにおいて示し、これは大きい医薬ウインドウを明らかにするという理由、並びに更に全治療プロトコールに関してダルババンシンの血液レベルは最低殺菌レベルを上回って維持され、これはダルババンシンの延長された血清半減期を明らかにするという理由で、ダルババンシンに関して利用可能な新規用量レジメンは、改善された有効性を生じる。延長された血清半減期と組合わされた大きい医薬ウインドウの組合せは、ダルババンシンのより少ない投薬頻度を可能にする。
加えて、ダルババンシンは、好ましくは1種又は複数のダルババンシン成分の分解を阻害する安定化剤と共に製剤される。ひとつの好ましい態様において、ダルババンシンは、マンニトール:ダルババンシンの質量比1:2で製剤される。別の好ましい態様において、ダルババンシンは、マンニトール:乳糖:ダルババンシンの質量比1:1:4で製剤される。
一部の態様において、ダルババンシン製剤は、数日間、時には少なくとも約5〜約10日間、時には少なくとも約1週間、薬物の治療的有効な(すなわち、殺菌)血漿レベルを生じる用量で投与される。一般にダルババンシンは、少なくとも5日間、血漿中に最低殺菌濃度約4mg/lを上回る濃度で維持される。時にはダルババンシンは、少なくとも5日間、時には少なくとも約1週間又はそれよりも長く、少なくとも約5mg/l、時には少なくとも約10mg/l、時には少なくとも約20mg/l、時には少なくとも約30mg/l、時には少なくとも約40mg/lの血漿レベルで維持される。ダルババンシンの血漿レベルは、液体クロマトグラフィー、質量分析、又は微生物バイオアッセイのような、当該技術分野において周知の方法で測定することができる。血漿中ダルババンシンの定量法の例は、実施例5に提供される。
ダルババンシン血漿濃度レベルの上限は一般に、治療される患者集団中の許容し難い有害作用を阻害する用量により示される。
ダルババンシン組成物は、単回投与量又は反復投与量で投与することができる。単回投与量として投与される場合、ダルババンシン組成物は、in vivoにおいて少なくとも5日間、好ましくは少なくとも7日間、及びより好ましくは少なくとも10日間、抗菌特性を実現するために十分なダルババンシン量を含有するように製剤されることが好ましい。
反復投与量が使用される場合、ダルババンシンは、2週間又はそれよりも長く、毎週投与することができる。ひとつの態様において、ダルババンシンは、少なくとも2回投与量で、時には約5〜約10日間間をあけて2回投与量で、より頻繁には2週間にわたり週1回投与される。実施例1に示されたように、そのような投薬レジメンは、従来の抗生物質治療プロトコールに勝る著しい利点を提供する。
ダルババンシン組成物は、2日又はそれよりも長く、又は少なくとも1週間間をあけて反復投与量で、もしくは2週間に1回又はそれよりも多い投与量で、投与することもできる。一部の態様において、ダルババンシン組成物は、毎週、引き続き隔週、又は毎月投与される。一部の態様において、ダルババンシンは、毎週の間隔で、2、3、4、5、6週間、又はそれよりも長く投与される。
最も有利であるのは、比較的高く、頻度の低い投与量が使用されるために、毎日の投薬が必要ないことである。単回又は反復投与量は、例えば約0.1〜約5gの範囲であることができる。約0.1〜約4g、例えば約3gの単回投与量が、様々な感染症治療のために投与され得る。例えば毎週の反復投与量が投与される場合、各投与量は、例えば約0.25〜約5.0gの範囲である。
感染症を治療するために単回投与量が投与される態様に関して、この投与量の量は、例えば約0.1〜約5g、又は約0.5〜約4g、又は約1〜約3.5g、又は約2〜約3g、例えば約3gであってよい。一部の態様において、単回投与量約1、1.5、2、2.5、又は3gが、細菌感染症の治療のために投与される。単回投与量が予防のために投与される態様に関して、投与量の量は、例えば約0.1〜約3g、又は約0.1〜約1g、例えば約0.5又は約0.25gである。
反復用量を含む投薬計画において、個々の用量は、同じ又は異なることができる。一部の態様において、初回に比較的高い投与量が投与され、すなわち例えば1回又は複数回の継続量よりも、約1.5〜10倍高い、ある場合は9倍高い、別の場合は8倍高い、別の場合は7倍高い、別の場合は6倍高い、別の場合は5倍高い、別の場合は4倍高い、別の場合は3倍高い、別の場合は2倍高い。例えば、初回投与量は約0.5g〜約5g、及び2回目投与量は約0.25g〜約2.5gであることができ、初回投与量は約0.8g〜約2g、及び2回目投与量は約0.4g〜約1gであることができ、又は初回投与量は約0.4g〜約3g、及び2回目投与量は約0.2g〜約1.5gであることができる。
一部の態様において、初回用量が、継続用量の約2倍多いダルババンシンを含有するような少なくとも2種の用量が投与される。ひとつの態様において、初回用量はダルババンシン約1gを含み、及び継続用量は約0.5gを含有する。別の態様において、初回用量はダルババンシン約0.5gを含み、及び継続用量は約0.25gを含む。
一部の態様において、ダルババンシン組成物は、2日間もしくはそれよりも長く、又は少なくとも約1週間間をあけて、等量又は異なる量の2回投与量で投与される。時には約0.2〜約1.5gのダルババンシンの2回投与量が、約5〜約10日間間をあけて、より頻繁には約1週間間をあけて投与される。一部の態様において、初回用量ダルババンシン約1g及び2回目用量ダルババンシン約0.5gが、約1週間間をあけて投与される。
反復投薬レジメンにおいて、投与の間の時間は、例えば約5〜約10日間の範囲、時には約1週間、あるいは約2週間であることができる。投与頻度は、例えば週2回の投与量、又は週に複数回の投与量であることができる。投薬間隔、又は投与間の時間は、例えば約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25日間又はそれよりも長いことができる。与えられる投与回数は、例えば1、2、3、4、5、6回又はそれよりも多い投与であることができ、与えられる初回量後の各投与量は、選択された用量間隔の後に与えられる。
反復投薬計画において、時には「トラフレベル」、又はダルババンシン初回投与量後及び2回目投与量の投与直前の血漿中ダルババンシンレベルは、少なくとも約4mg/lである。好ましくは約1週間のような投薬間隔の終わりのトラフレベルは、少なくとも約20mg/l、より好ましくは少なくとも約30mg/l、及び更により好ましくは少なくとも約40mg/lである。
ダルババンシンは、非経口的に、例えば、筋肉内(i.m.)、静脈内(i.v.)(ボーラス又は緩徐な注入)、皮下(s.c)、腹腔内(i.p.)、又は髄腔内(i.t.)投与することができる。投薬スケジュール及び投与される実際の用量は、感染症の性質及び重症度、患者の年齢、体重及び全身の健康状態、並びにダルババンシンに対する特定の患者の忍容性などのような因子に応じて変動することができるが、医療関係者には確認可能であろう。ひとつの態様において、ダルババンシンの1g静脈内投与量に、1週間後の0.5g静脈内投与量が続く。
例えば静脈内のような、この薬物の患者への投与及び送達は、制御された速度で行うことができ、その結果血中濃度は、余りにも急激には上昇せず、又は沈殿が生じることもない。一部の態様において、ダルババンシンは、薬物が血流中の内在性タンパク質(複数)と複合体を形成するのに適当な速度で投与される。特定の理論に結びつけられることは意図しないが、例えばヒト血清アルブミンのような内在性タンパク質は、in vivo においてダルババンシンホモログ単量体の1種又は2種の分子と複合体を形成することができると考えられる。十分量のダルババンシンが存在する場合、ダルババンシンホモログの最大2分子が、内在性タンパク質へ結合すると考えられ、及び更に、この複合体は、ダルババンシンの個別のホモログ分子の2個の異なる結合部位での結合により形成されると考えれられる。あるいは、二量体ダルババンシンは、内在性タンパク質上の単独の結合部位へ結合することが可能である。先に考察されたダルババンシン-内在性タンパク質複合体に関する更なる詳細は、2003年11月14日に出願された、米国特許出願第10/713,924号明細書(代理人整理番号34231-20053.00)、名称「Compositions and methods for treating bacterial infections with protein-dalbavancin complexes」において開示されており、その開示は全体が本明細書に参照として組入れられている。
注入期間は、例えば約1分〜約2時間、あるいは約15分〜約2時間であることができる。例えば、投与量が約0.5〜約1gである場合、約30分間の注入期間を使用することができる。制御された速度条件下での静脈内投与は、in vitroにおいて生理的pHで液相中で実現され得る値を大きく超えない体内ダルババンシン濃度を生じることができる。理論により限定されることを欲するものではないが、これは、ダルババンシンと、血漿中のダルババンシンの溶解度をin vitro試験と比べ上昇する血清アルブミンのような内在性タンパク質(複数)との複合体の形成に起因している。
In vitro又はex vivoにおけるダルババンシン複合体の形成は、例えば少なくとも約1分間、少なくとも約10分間又は少なくとも約20分間のような、より迅速な投与を可能にする。このような複合体は、ヒト血清アルブミン及び／又は他の内在性タンパク質の、ダルババンシンとの混合、これによるin vitro又はex vivoにおける複合体形成、並びにその後のこの複合体の治療される患者への投与により実現することができる。あるいは、ヒト血清アルブミン又は他の内在性タンパク質は、自家給源からエルカ、又はそのタンパク質の遺伝子を含むように修飾された微生物から発現により得ることができる。
投与されるダルババンシンの量は、本明細書に開示された任意の用量であってよい。ダルババンシン投与量は一般に、延長された期間、頻繁には少なくとも5日間、より頻繁には約1週間又はそれよりも長く、薬物が治療的又は予防的に有効な(すなわち、殺菌性)血漿レベルを維持するように選択される。少なくとも約1週間(又は約5〜約10日間)殺菌濃度を生じ及び維持するダルババンシン投与量の投与が、好ましい。殺菌濃度は、24時間にわたり、in vitro実験の開始時に存在する細菌の少なくとも99％殺傷するのに必要なダルババンシンの濃度と定義される。血漿中ダルババンシン最小殺菌濃度は、典型的には約4mg/lである。
治療される適応症の例は、合併型及び非合併型の両方の皮膚軟組織感染症(SSTI)(合併型及び非合併型皮膚・皮膚構造感染症(SSSI)としても公知)、血流感染症(BSI)、カテーテル-関連した血流感染症(CRBSI)、骨髄炎、人工関節感染症、手術時の予防、心膜炎、院内又は地域で獲得された肺炎、肺炎球菌肺炎、有熱性好中球減少症の経験的治療、関節腔感染症、及び医療用具感染症(例えば、ペースメーカー及び心臓内除細動器)を含む。ブドウ球菌、連鎖球菌、ナイセリア、又はクロストリジウム属の感染症、特に黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、溶血性ブドウ球菌、化膿連鎖球菌、A及びC群連鎖球菌、淋菌、又はクロストリジウム・ディフィシルなどの、グラム陽性菌又は抗生物質-耐性菌の感染症を、治療することができる。
本発明は、皮膚軟組織感染症(SSTI)の治療法を提供する。この治療の恩恵を受ける患者は、深部又は表在性感染症のいずれかを有する。SSTIは、深部軟組織に関連し、及び／又は例えば大膿瘍、感染性潰瘍、大火傷、又は深部及び過度の蜂巣炎のように、重要な外科的介入が必要である。感染した外科的創傷を治療することもできる。ダルババンシンはin vivoにおいてタンパク質と複合するので、皮膚を治療するダルババンシンの有効性は、予想外であり、驚くべき結果である(実施例5参照)。
皮膚・皮膚構造感染症の臨床的出現(clinical presentation)は、軽度の毛包炎から重症の壊死性筋膜炎まで変動する。獲得様式は、地域で獲得された皮膚・皮膚構造感染症によって変動し、時には職業上の曝露又は余暇活動から生じた損傷が先行することがあり、及び通常病原体の大きい多様性に関連している。病院で獲得された皮膚・皮膚構造感染症は一般に、外科手技、褥瘡の発生、及びカテーテル挿管に関連している。術後感染症は、第三の頻度の高い院内感染症であり、院内感染に関する国家的調査システム(NNIS)に報告された全ての院内感染症の17％を占める。最も頻繁な感染源は、患者の体内叢である。黄色ブドウ球菌、コアグラーゼ-陰性ブドウ球菌、及び腸球菌が、SSTIから最も頻繁に単離される病原体である。
SSTI感染症の症状は、紅斑、圧痛又は疼痛、熱又は局所的ほてり、ドレナージ又は排泄、膨潤又は硬変、発赤、又は動揺である。本発明の方法による治療により恩恵を受ける患者は、深部もしくは合併感染症、又は外科的介入が必要な感染症を有する患者、又は糖尿病もしくは末梢血管疾患の患者である。これらの感染症は、ブドウ球菌又は連鎖球菌種のようなグラム陽性菌、例えば黄色ブドウ球菌又は化膿連鎖球菌により引き起こされることが多い。皮膚軟組織細菌感染症の治療法は、治療的有効量のダルババンシンを、先に考察された量及び投薬レジメンに従い、治療が必要な個体へ投与することを含む。一部の態様において、ダルババンシン組成物は、頻繁には約5〜約10日間間をあけて、より頻繁には約1週間間をあけて、2回投与で、静脈内投与される。一部の態様において、初回用量は、ダルババンシン2回目用量の少なくとも2倍を含有する。ひとつの態様において、初回用量は約1000mgであり、及び2回目用量は約500mgである。別の態様において、初回投与量は約1200mgであってよく、及び2回目投与量は約600mgであってよい。
本発明は、細菌感染症、例えば黄色ブドウ球菌、又はナイセリアもしくはクロストリジウム属の細菌により引き起こされた感染症の発症の予防的防止法も提供する。本発明の予防的方法において、予防的有効量のダルババンシンが、例えば医療処置を通じ、細菌感染症の罹患に易罹患性である個体へ投与される。頻繁にはダルババンシンは、少なくとも約1日間、少なくとも約3日間、少なくとも約5日間、又は少なくとも約1週間又はそれよりも長く、予防的に有効な血漿レベルを提供するのに十分な量で投与される。ダルババンシン組成物は、感染症を防止するステップとして術前又は術後に、非経口的に、例えば、筋肉内(i.m.)、静脈内(i.v.)、腹腔内(i.p.)、皮下(s.c)、又は髄腔内(i.t.)注射により投与することができる。ダルババンシン組成物は、手術のような侵襲的医療処置の直前又は直後、もしくはその間に、又は1日以上、もしくは約1週間処置の前又は後に、又は病院のような診療施設に滞在中、感染症を防止するために投与されてよい。予防的方法は、個体が細菌に感染した個体に曝露されたか又はおそらく曝露されるような状況を含む、個体が細菌感染症にもしかすると又はおそらく罹るいずれかの状況において使用することができる。予防的方法のために、ダルババンシン組成物は、単回投与量、又は数日間から約1週間間をあけて投与される同量又は異なる量の2回もしくはそれよりも多い投与量のいずれかで投与することができる。ひとつの態様において、ダルババンシン組成物は、血流関連の感染症を防止するために、静脈内カテーテル挿管の前又は同時に投与されてよい。
予防的方法のために、ダルババンシン組成物は、先に説明された任意の投薬計画に従い、単回投与量又は反復投与量で投与されてよい。頻繁には、ダルババンシン組成物は、約0.1〜約3g、又は約0.1〜約1g、例えば約0.25g又は約0.5gを含有する、単回投与量で投与される。ひとつの態様において、単回投与量約0.25gが、約2分間〜約1時間、例えば約30分間の時間枠で、静脈内投与される。別の態様において、ダルババンシン組成物は、別の医薬(例えば抗生物質)治療の投与と同時に静脈内投与される。
先に説明されたいずれかの治療的又は予防的方法において、ダルババンシン組成物は、少なくとも1種の他の抗生物質と同時又は逐次投与される。一部の態様において、1種又は複数のグラム陰性菌種及び／又はダルババンシンが無効なグラム陽性菌株に対し有効な(例えば殺菌)少なくとも1種の他の抗生物質が、ダルババンシンに追加して投与される。一部の態様において、ダルババンシン及び少なくとも1種のグラム陰性菌種に対し有効な(例えば殺菌)の少なくとも1種の抗生物質が、ダルババンシン組成物中の混合物として投与される。
薬物動態
マウス、ラット、ウサギ、イヌ及びミニブタを用い、ダルババンシンの動物試験を行った。
様々なバリデーション法を用い、ダルババンシンを定量した。ダルババンシンAPIは、5ホモログ(A0、A1、B0、B1及びB2)からなる。抗菌活性を基にした方法は、全ての微生物学的活性のあるダルババンシン成分を測定した。クロマトグラフィー法により、主成分B0を成分B1と組合せて測定し(一緒にダルババンシンの90％〜95％)、結果を総ダルババンシンに関して報告した。液体シンチレーションカウント(LSC)及び放射化学検出を伴う液体クロマトグラフィー(LC/RC)は、放射標識された薬物が与えられた動物の血漿、尿及び糞便中のダルババンシン及び代謝産物の測定を可能にした。ダルババンシン及び薬物-由来の放射活性が臨床的に関連のある投与量を投与された動物の血漿中に定量される場合は、薬物及び放射活性の濃度-時間曲線は重ねることができた。このことは、血漿中の薬物-由来の放射活性は事実上全て、未変化の薬物であることを示している。
この薬物はIV投与量の投与後に、被験臓器及び組織の全てへ、体中広範に分布した。ダルババンシンは、ラット及びミニブタの皮膚を透過した。ダルババンシン速度論は、種を超えて予想可能な様式で挙動した。血漿クリアランス(CL)は、種の体重に比例することがわかった。加えてダルババンシンは、ラット胎盤を通過し、及び胎仔ラット血漿中で認められた。
ダルババンシンは、肝シトクロムP450イソ酵素の基質、インヒビター又はインデューサーではない。この薬物は、ラット、イヌもしくはヒトの肝ミクロソーム；ラット、イヌもしくはヒトの肝細胞；又は、ヒト腎ミクロソームにより、in vitro において代謝されない。ダルババンシンは、単離されたヒト肝ミクロソームによる、マーカー基質の代謝に影響しなかった。ダルババンシンのラットへの投与は、あらゆるP450活性を誘導しなかった。
同様のダルババンシン代謝産物プロファイルが、種を超えて観察される。2種の代謝産物(OH-ダルババンシン及びMAG)が、ラット、イヌ、及びヒトの尿中に観察された。両代謝産物は、ヒト血漿中で検出不能であるか又は検出限界(＜0.4mg/L)に近く、ダルババンシンよりも抗菌活性が少なく、及びin vivo活性に(あったとしても)ほとんど寄与しなかった。臨床に関連した投与量により、動物血漿中に同様の結果が認められた。
この薬物は、排泄の二重経路(腎及び糞便)を有し、未変化の薬物及び代謝産物として排泄される。ダルババンシンは、ラット、イヌ、及びヒトの尿及び糞便中に排泄される。投与量のほとんどは、未変化の薬物として尿中に排泄される。OH-ダルババンシン及びMAGも、尿中に認められる。一部の未変化の薬物は、動物糞便中に微量の代謝産物と共に認められる。ヒト糞便は、微生物学的に活性のあるダルババンシン成分を含有した。ダルババンシンは、ラット乳汁中にも排泄される。従ってダルババンシンは、代謝、尿排泄、及び糞便排泄を介して、体から除去される。このことは、投与量調節が、患者の背景因子を基に必要とされないことを予想するであろう。驚くべきことに、重度腎不全(クレアチニンクリアランスCLCR 30mL/分未満)の患者は、正常腎患者(クレアチニンクリアランスCLCR 80mL/分以上)よりも、より高レベルを実現した。1日目に投与量1gを受け取った重度患者は、1日目に100mg及び8日目に500mg受け取った正常患者と類似したレベルを明らかにした。
医薬組成物
本発明は、前述の方法に従いダルババンシンが投与のために製剤された医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、組成物が個体へ投与された場合に、数日間、頻繁には少なくとも約3日間、少なくとも約5日間、又は少なくとも約1週間もしくはそれよりも長く、ダルババンシンの治療的又は予防的に有効な血漿レベルを提供するのに十分な量のダルババンシン、及び医薬として許容される担体を含有するダルババンシン単位投与量の形であることができる。一般に、ダルババンシンの治療的又は予防的に有効な血漿レベルは、少なくとも約4mg/L血漿である。ダルババンシンの血漿レベルは、先に説明されたような、当該技術分野において周知の方法により測定することができる。
ダルババンシンは、任意に医薬として許容される無毒の塩として、任意に個体への投与のための医薬として許容される形であることができる。
ダルババンシンの適当な塩の例は、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、コハク酸、クエン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、グルタミン酸、樟脳酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、シンナム酸などの、有機酸及び無機酸の両方との標準の反応により形成される塩を含む。ダルババンシンと塩を形成することができる塩基の代表例は、アルカリ金属又はアルカリ土類金属の水酸化物、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、及びバリウムの水酸化物など、アンモニア並びに脂肪族、脂環式、又は芳香族有機アミン、例えばメチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、ピコリンなどである(例えば米国特許第5,606,036号明細書参照)。
一部の態様において、例えば静脈内注射のような、非経口投与に適している、ダルババンシンの医薬として許容される水性製剤が提供される。そのような水性製剤を調製するために、当該技術分野において周知の方法が使用され、任意の医薬として許容される担体、希釈剤、賦形剤又は他の当該技術分野において通常使用される添加剤が、使用される。ひとつの態様において、静脈内注射のための医薬として許容される水性製剤は、5％デキストロースを含有する。
ダルババンシンは、非経口投与で投与され、すなわち投与経路は、皮膚又は粘膜の1個又は複数の層の下側又は層を通る注射による投与である。この経路は、ヒト体のこれらの非常に効率的保護障壁を迂回するので、微生物及び不溶性粒子を含まない非経口剤形の桁外れの純度が実現されなければならない。このような剤形の調製に使用されるプロセスは、無菌性及び治療有効性に関し製品の必要な品質を作出及び維持する良好な製造実践を具体化しなければならない。加えてこの形は、実用的及び通常の剤形に関して室温での貯蔵時に、安定しなければならない。
バルク薬物材料を、非経口投与に適した剤形へ転換するための、一般に利用可能ないくつかの常法が存在する。これらの方法は一般に、「Remington's Pharmaceutical Sciences」18版、1990("Remington")に概説されている。
蒸気滅菌
USPは、加圧容器内で、少なくとも15分間、最低121℃で、加圧下で飽和蒸気を使用する、蒸気滅菌を規定している。その固形の薬物は、オートクレーブ中に配置され、蒸気滅菌を受ける。その液体形の薬物は、直接オートクレーブ中に配置されるか、又は密封容器中に入れられオートクレーブ中に配置され、及び同じ種類の蒸気滅菌を受ける。
乾式加熱滅菌
乾式加熱滅菌において、バルク薬物材料に、比較的低い湿度で、高温が施される。乾式加熱は、湿式加熱よりも効率が悪いので、蒸気滅菌に使用されるものよりも、より長い曝露時間及びより高温が必要である。その目的は、酸化的プロセスによる微生物の殺傷である。精密かつ正確な時間-温度サイクルの確立は日常的ではないので、使用される温度の典型は、140〜170℃で1〜3時間である。
放射線滅菌
放射線照射による滅菌では、電磁放射又は粒子放射のいずれかを使用することができる。光エネルギーで構成される電磁放射は、紫外線、γ線、x-線、及び宇宙線を含む。コバルト-60又はセシウム-137などの放射性物質から放出されるγ線照射は、最も頻繁に使用される電磁波滅菌の給源である。最も広範に使用される粒子放射は、β粒子又は電子線である。
濾過滅菌
濾過滅菌は、液体流れから微生物を除去するが、破壊しないプロセスである。このような濾過は、他の滅菌法に対し不安定である溶液について選択される法である。
無菌的フリーズドライ(凍結乾燥)
この方法は、濾過滅菌、それに続く溶液の凍結後溶液を昇華させることによる、滅菌された薬物を溶液から分離するステップ、薬物物質を残存するステップを使用する。この方法は典型的には、以下のステップを含む：
1)バルク薬物を水溶液中に溶解するステップ、
2)この溶液を、メンブレン濾過により滅菌するステップ、
3)滅菌した溶液を、開放した予め滅菌したバイアルに充填し、フリーズドライチャンバーに配置するステップ、
4)このバイアル中の溶液を凍結するステップ、
5)チャンバーを排気し、低温下で氷を昇華させるステップ、
6)温度を室温又はそれ以上に上昇し、残留水を除去するステップ。
無菌水(流れ)の添加を伴う無菌的フリーズドライ(凍結乾燥)
本方法は、濾過滅菌、それに続くフリーズドライ(凍結乾燥)による溶液からの滅菌された薬物の分離、並びに流れの形の滅菌水を添加するステップを使用する。
沈殿滅菌
この方法は、濾過滅菌、それに続く滅菌された薬物の溶液からの沈殿のステップを使用する。より詳細に述べると、バルク薬物が、最初に高温(室温以上)で水に溶解され、次に加熱された溶液が、無菌的条件下で濾過され、あらゆる微生物を除去し、その後薬物を溶液から沈殿するために、濾過された溶液を冷却する。沈殿された薬物は次に、濾過又は遠心により溶液から分離され、無菌的条件下での粉末充填により、容器に充填される。このような粉末充填を実施するために、この薬物は、良好な流れ特性を有さなければならず−この粉末は、一般に顆粒状の非晶質及び均質な粒度でなければならない。
非経口投与のための医薬組成物は、ダルババンシン及び生理的に許容できる希釈剤、例えば注射用無菌又は脱イオン水、生理食塩水、5％デキストロース、水混和性溶媒(例えば、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど)、非-水性ビヒクル(例えば、トウモロコシ油、綿実油、ピーナッツ油、及びゴマ油などの油)、又は他の常用される希釈剤を含有する。この製剤は追加的に、可溶化剤、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又は他の公知の可溶化剤、溶液を安定化する緩衝剤(例えば、クエン酸、酢酸、及びリン酸の塩)及び／又は酸化防止剤(例えば、アスコルビン酸又は亜硫酸ナトリウム)を含有することができる(例えば米国特許第6,143,739号明細書参照)。他の適当な医薬担体及びそれらの製剤は、「Remington's Pharmaceutical Sciences」、E. W. Martinに記されている。当該技術分野において公知であるように、本発明の医薬調製物は、許容できるレベルの粒子を含む(例えば、粒子-非含有)及び非-パイロジェン性(例えば、米局方(USP)の注射剤要件に合致)であるように調製することもできる。
ひとつの態様において、医薬組成物は、時には安定化剤又は安定化剤混合物を含有する、ダルババンシンの乾燥(例えば、凍結乾燥)された投与量を、ある量の水及び好ましくは脱イオン水に、凍結乾燥物質を溶解するのに十分な容量で溶解することにより提供される。典型的には、溶解に十分な量の水は約10mLであり、及び得られるダルババンシン溶液のpHは、3.0以上、及び約3.5〜4.5である。この溶液は更に、第二の希釈剤、時には静脈内投与用の点滴バッグ中に含まれる量の5％デキストロースに希釈され、このダルババンシン溶液のpHは約5〜5.5に上昇する。別の態様において、点滴バッグ中のダルババンシン溶液のpHは、約4.5である。第二の希釈剤は、注射用脱イオン水及び滅菌水であってよい。ひとつの態様において、水性希釈剤は5％デキストロースである。
非経口投与用の医薬組成物は、ダルババンシン殺菌効果が維持されるような条件下で、任意に賦形剤を含有する、先に説明したような治療的又は予防的有効量のダルババンシンの1種又は複数の単位投与量を含有し、無菌バイアル中に作製される。この組成物は、乾燥型(例えば凍結乾燥された)散剤であってよい。使用前に、この散剤は、生理的に許容できる希釈剤で再構成され、その後患者への投与のために注射器に吸引される。先に説明された医薬製剤は、例えば、e-ビームもしくはγ線滅菌法、又は濾過滅菌を含む許容できる手段により滅菌することができる。
非経口投与のための典型的製剤は、約0.1〜約100mg、約0.5〜約50mg、約1〜約10mg、又は約2〜約4mgダルババンシン/最終調製物mlのようなダルババンシン濃度を含んでよい。
一部の態様において、本発明の医薬組成物は、ダルババンシン及び1種又は複数の追加の抗生物質の混合物を含有する。好ましくは、混合物中の少なくとも1種の非-ダルババンシン抗生物質は、例えばアズスレオナムのように、1種又は複数のグラム陰性菌に対し、又はイルネゾリドもしくはダプトマイシンのように、ダルババンシンが無効である1種又は複数のグラム陽性菌に対し、有効(例えば殺菌性)である。この混合物は、先に説明されたような、医薬として許容される担体も含有する。
一部の態様において、本発明の医薬組成物は、活性のより低い又は不活性の物質、ホモログ、又は関連物質、例えばMAGへの、1種又は複数のダルババンシン成分の分解を阻害する1種又は複数の安定化物質を含有する。本明細書において使用される「安定化物質」又は「安定化剤」は、組成物中のダルババンシンの1種又は複数の構成成分、例えばB0を安定化する物質を意味する。「安定化有効量」は、ダルババンシン組成物の1種又は複数の成分の長期安定性を増強するのに十分な安定化剤の量を意味する。一部の態様において、安定化有効量は、その各々は単独では安定化作用をもたらすのに十分な量では存在しないような、2種又はそれよりも多い安定化物質の混合物によりもたらされる。
安定化剤の例は、例えば糖のような非イオン性物質、例えば単糖、二糖もしくは多糖、又はそれらの誘導体、糖アルコール、もしくはポリオールなどを含む。このような安定化物質は、例えばマンニトール、乳糖、ショ糖、ソルビトール、グリセロール、セルロース、トレハロース、マルトース、ラフィノース、デキストロース、低及び高分子量デキストラン、又はそれらの混合物である。
安定化剤は、糖に加え、アミノ酸であることもできる。アミノ酸安定化剤は、天然及び合成のアミノ酸及びアミノ酸誘導体を含む。好ましい態様において、アミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びアスパラギンである。安定化剤は、シクロデキストリン、環式アミド、例えばナイアシンアミド及びベンズアミド、サリチル酸、並びにそのオルト-、メタ-、パラ-置換されたヒドロキシル酸及びエステルであることができる。
追加の安定化剤に加え、化合物のpH調節は、組成物の安定性を増大することがわかった。安定性を増大又は最大化するこの組成物の特定のpHは、添加される安定化剤の種類及び量によって決まる。pHは、好ましくは約1〜7、より好ましくは2〜6、より好ましくは3〜5、より好ましくは4〜5、より好ましくは約4.5である。
ひとつの態様において、この医薬組成物は、質量比1:2のマンニトール:ダルババンシンを含有する。別の態様において、医薬組成物は、質量比1:1:4のマンニトール:乳糖:ダルババンシンを含有する。驚くべきことに、マンニトール及び乳糖の組合せは、いずれかの物質単独よりも、より大きい安定化作用をもたらすことがわかった。本発明の医薬組成物のpHは、例えば約3〜約5、例えば約3.5又は約4.5であることが多い。
一部の態様において、1種又は複数の手法を用い、MAGの形成を減少することができる。例えばマンニトール及び／又は乳糖のような安定化物質存在下でのダルババンシンの凍結乾燥は、形成されるMAGの量を低下するために使用することができる。
ダルババンシン組成物の貯蔵は、安定性を増大するために、約5℃のように、周囲温度よりも低いことが多い。
乾燥
高分子量の天然の生成物からのアセトン除去は、アセトンはそれらと付加物を形成するのために、極めて困難である。その除去は、固形生成物中のアセトンと置き換わる水の存在下で実現することができる。更にダルババンシンの乾燥プロセスは、MAGを形成する可能性のために、より繊細であり、これはpH、温度、減圧及び時間により左右される。MAG形成を最小化し乾燥プロセスを加速するために、低エンドトキシン水が、アセトンと置き換わるために乾燥プロセス時に、生成物に添加又は噴霧される。過剰な水は、追加の乾燥時間により後で減少される。
乾燥は、減圧下で実施される(内部温度＜25℃)。アセトンのほとんどが生成物から除去された時、低エンドトキシン水約20％(w/w)が、固形生成物に噴霧され、同じ条件での乾燥が継続される。この乾燥プロセス後に、アセトン及びカールフィッシャー(K.F.)分析が行われ、残留アセトンが1.5％未満になるまで、追加の水が固形生成物に噴霧される。
試験25
乾燥、20〜30℃、50mbar
この手法は最初に、回転蒸発器を用い、実験室でシミュレーションした。ダルババンシンバッチ027を、水を添加せずに30℃で乾燥し、6.4％のMAG及び3.2％のアセトンを含有する生成物を得た。この乾燥ダルババンシンバッチ(バッチ027、HCl/ダルババンシン比1.7mol/mol)126gを、1Lの丸底フラスコに投入し、固形物に、水25mLを2時間毎に噴霧し、水浴の温度を20〜30℃に維持し、50mbarに減圧した。ダルババンシン試料を、特定時点で採取し、アセトン、K.F.及びMAG分析を行った。得られたデータを、表4Aに示す。この表に報告されたMAGの割合は全て、実際量と出発量の間の差異である。
Figure 2007534768
この実験は、同一条件下で、乾燥により多くの時間をかけて行い、水分含量を15％以下に低下した。
乾燥、30℃、10mbar
ダルババンシンバッチ027の125g、MAG 6.4％(HPLC面積％)を、先の実験と同じ装置を用い、30℃及び10mbarで24時間乾燥した。得られた結果を、表4Bに示す。
Figure 2007534768
これらの実験室実験から、乾燥プロセスは、固形生成物への水の添加により、単純化することができると結論付けることができる。これらの結果は、ダルババンシンのMAGへの分解は、加水分解ステップであり、水の増加は分解プロセスを増加すると予想したので、予想外であった。この方法で、アセトンは生成物から迅速に除去され、これにより乾燥時間が短縮され、及び追加のMAGの形成が避けられた。更に、より低い残圧は、乾燥プロセスの著しい短縮を生じることが認められる(表4B)。アセトンレベルが、大量の水の存在下で低下されたことも驚かれた。
回転乾燥機でのダルババンシン乾燥
湿潤ダルババンシンを、回転乾燥機DR 216へ投入し、最大減圧(＜50mbar)、29〜32℃(外部温度)で乾燥した。開始時に、内部温度は、30℃から17〜18℃へと低下させ、その後上昇し始めた時に、生成物試料を分析のために採取した(水17.2％及びアセトン9.5％)。この時点で、低エンドトキシン水(約20％w/w)を、乾燥機へと噴霧し、攪拌された生成物上に噴霧し、追加の試料を定時に分析のために採取した。2時間後、低エンドトキシン水を再度噴霧し、アセトン量を0.5％未満とした(表4C)。
Figure 2007534768
水の存在及び非存在下での乾燥の比較
この試験は、水の非存在下(バッチ027)及び存在下(027/R)で実行された、ダルババンシンバッチ027と027/Rの乾燥プロセス間の比較である。ダルババンシンバッチ027(14.6kg)及び027/R(8.3kg)を、減圧下、25〜35℃(内部温度)で、回転乾燥機(DR216)を用いて乾燥した。バッチ027は、水を添加せずに乾燥した。対照的に、バッチ027/Rには、低エンドトキシン水を各々400mLを4回追加し噴霧した。各乾燥時に、ダルババンシン試料を、分析のために特定時点で採取した。結果は、表5に報告した。バッチ027に関して、MAGは、乾燥プロセスの最後にのみ決定した。
Figure 2007534768
フルスケール生成データ
下記表6において、2002及び2004のフルスケールキャンペーン(campaign)間のプロセス及びMAGレベルをまとめている。
Figure 2007534768
2002プロセスにおいて、ダルババンシン生成物は、減圧下、30℃未満で乾燥される。この生成物には、様々な時点で、低エンドトキシン水が噴霧される。乾燥は、アセトン含量が0.5％未満になるまで継続される。
2004プロセスにおいて、ダルババンシンAPIが、遠心により回収され、冷アセトン(0〜10℃)で洗浄され、減圧下で乾燥される(内部温度＜25℃)。MAGは、ダルババンシンの主な分解物(degradant)であり、その形成は温度に依存している。乾燥プロセス時に、最終的にアセトン含量1.5％未満(GC)を実現するために、アセトンを置き換えるために、水が添加される。表5から明らかなように、水の存在下での低温乾燥は、予想外に低量のアセトン存在(Lot 027/Rの0.27％を、Lot 027の3.14％と比較)、並びに予想外に低い量のMAG分解産物(Lot 027/Rの1.81％を、Lot 027の6.46％と比較)に繋がった。
従って、ダルババンシン乾燥法は、アセトンを置き換えるために、水をダルババンシン生成物へ添加するステップを含む。好ましい添加される水の量は、推定最終乾燥生成物の約20％である。あるいは水の量は、推定最終乾燥生成物の約15％、あるいは約25％、あるいは約30％、あるいは約40％、あるいは約45％、あるいは約50％である。
ダルババンシン乾燥法は、約100torr及び温度約25℃未満で、水を添加せずに、ダルババンシン生成物を約2時間乾燥するステップを含むことができる。その後低エンドトキシン水が、生成物へ噴霧され、次に生成物が約2時間以上乾燥される。その後アセトンレベルが、試料採取され、チェックされる。このレベルが約1.5％よりも多いならば、追加の水が生成物へ噴霧され、再度生成物が、アセトンレベルが約1.5％未満になるまで乾燥される。
製造
全てのバルク溶液製造操作は、クラス100,000(グレードD)領域で行われる。無菌充填は、クラス100(グレードA)積層空気流れ領域で行われる。
適当な製造容器に、理論バッチ容量の注射用水約80％を投入した。この溶液を混合し、温度を15〜3O℃で維持する。ダルババンシンを添加し、溶解するまで混合した。少なくとも1種の安定化剤を溶液に添加し、溶解するまで混合する。注射用水を添加し、この溶液を最終容量とし、必要ならば0.1N HCl又は1.0N NaOHのいずれかで適当なpHに、pHを調節する。このバルク溶液を、2枚の0.2μm滅菌フィルターを連続して通し、滅菌した受け容器へと濾過することにより滅菌する。(必要ならば、フィルターの透明性を補助するか又は滅菌フィルターの粒子負荷を減少するために、プレフィルターを使用することができる)。この溶液は、無菌の/パイロジェン除去したI型ガラスバイアルへ、無菌的に充填する。無菌のシリコン処理した凍結乾燥用栓を、凍結乾燥位置へ一部挿入し、このバイアルを凍結乾燥チャンバーへ移す。
凍結乾燥プロセスは、代表的バイアルについて、熱電対探針を用いモニタリングした。バイアルは-45℃で凍結し、3時間放置し、その後真空とする。貯蔵温度は-25℃に調節される。全ての熱電対が-29℃又はより温かい場合は、貯蔵温度は0℃に調節される。全ての熱電対が-5℃又はより温かい場合は、貯蔵温度は+30℃に調節される。全ての熱電対が+27℃又はより温かい場合は、バイアルは14±2時間放置される。チャンバーを、0.2μmフィルターを通し濾過した無菌の窒素の導入により大気圧に戻し、その後これらのバイアルを、凍結乾燥棚を潰す(collapsing)ことにより密封する。バイアルはその後、チャンバーから取り出し、アルミニウムの封をした。
全ての成分及び装置は、適当なプロセスにより滅菌される。バイアルは、温度が低くとも255℃の熱風炉中で短くとも3時間洗浄滅菌される。栓は、温度123〜125℃、チャンバー圧約33psiで、蒸気オートクレーブをかけた。無菌範囲内の滞留時間は、典型的には50〜60分間である。
滅菌プロセスのバリデーションには、蒸気及び乾熱両滅菌サイクルについて、「オーバーキル」法を用いる。全ての滅菌サイクルは、天然の微生物に関して、少なくとも微生物生存確率10-6を提供するような十分な致死率を提供する。全てのサイクルは、log12以上の減少を提供するのに十分な致死率でデザインした。乾熱サイクルは、最低log3エンドトキシン減少をもたらすであろう。
安定性試験
ダルババンシンは、凍結乾燥プロセス時に分解することがわかった。安定化剤の添加は、安定性試験時の活性成分B0の分解量を減少することがわかった。
様々なダルババンシン凍結乾燥製剤の25℃及び40℃での安定性を経時的に、図1-4に示した。FDA指針に基づき、40℃で3〜6ヶ月間安定している生成物は、室温で2年間安定していると推定される。図1A、2A、3A及び4Aは、殺菌活性ダルババンシン成分のひとつであるダルババンシン成分B0量の減少を示している。前述のように、成分B0は、ほとんどのダルババンシン組成物の主成分のひとつでもある。図1B、2B、3B及び4Bは、1種又は複数の他のダルババンシン成分の分解産物と考えられる活性の低い成分であるMAG量の増加を示す。表7は、安定性試験に使用した各製剤の組成、図1-4に示された結果の一覧である。これらの組成のいずれかを使用し、安定した無菌の粒子-非含有の剤形を作製することができる。
Figure 2007534768
図1B及び2Bにみられるように、他の非-ダルババンシン成分を伴わずダルババンシンを含有し、並びに25℃及び40℃で、各々、調節されたpH(pH約3.01)でない組成物Dに関して、T=0で既に、存在するMAGの有意な量(4％より多い)が存在する。より高い温度で、MAGの形成は、はるかに速い速度で増加した。40℃で3及び6ヶ月後、組成物Dは、各々、21.0％MAG及び23.7％MAGを有した(図2B参照)。これは、純粋なダルババンシンは高度に不安定であり、及びダルババンシンの単なる凍結乾燥は、著しい分解を生じることを暗示している。加えて、通常の乾燥も、MAG分解産物の形成を生じる。ダルババンシンの一部の製剤には、-20℃での貯蔵が必要である。
pHが上昇した場合、他の非-ダルババンシン成分の添加を伴わずに、その安定性が増加する。組成物Dは、調節されたpHではなく、約3.01のpHを有した。組成物Bは、pH3.69に調節した。組成物Fは、pH4.5に調節した。図1A及び2Aに認められるように、pHが上昇するにつれ、B0の最初の分解は減少し、及び経時的に全体的分解も減る。同様に図1B及び2Bにおいて、より高いpHに調節した場合、両方の温度で最初に及び経時的にの両方で、組成物中の少ないMAG形成が存在した。
マンニトールの添加も、ダルババンシンの安定性を有意に増加することが示された。経時的な因子B0の分解及びMAGの増加も、同じく調節されたpHではないがマンニトールを含有しない、組成物Dとの比較において、有意に低下した。組成物E(62.5mgマンニトール、約pH3.01)において認められるように、最初の-凍結乾燥プロセス及び経時的の両方において、例えpH調節を伴わなくとも、安定性には有意な改善が存在した。T=Oの時点で、T=25℃(図1A参照)及びT=40℃で(図2A参照)で存在するMAGの約2％が存在し、これは組成物DにおいてT=0で存在するMAG量の半分未満である。
pHが上昇するにつれ、及びマンニトール量は一定を維持する場合に、ダルババンシンの安定性も上昇した。組成物E、C、及びGの比較は、pHが約3.01から3.8へ、4.5へと上昇するにつれ、ダルババンシンの分解量も減少したことを示している。図1A及び2Aに認められるように、pHが上昇するにつれ、B0の最初の分解は減少し、及び全体的分解も経時的に減少する。同様に、図1B及び2Bにおいて、より高いpHに調節された組成物において、最初及び経時的の両方で、MAG形成は減少した。
pHを一定に保ちながらマンニトール量の増加も、安定性の増加を生じる。例えば、各々pH4.5でマンニトール62.5mg及び125mgを含有する化合物L及びKは、T=0時にB0量は同様であるが、12ヶ月後のB0量の割合の変化は、化合物Kが有意に低い。同様のパターンが、各々pH5.0でマンニトール62.5mg及び125mgを含有する化合物J及びIについても見ることができる。
マンニトールのみを含有する組成物のpHの変化は、B0分解量の変化を生じたが、予測可能な傾向は存在しなかった。化合物L、J及びHは、各々pH4.5、5.0及び5.3で、マンニトール62.5mgを含有した。12ヶ月後のB0の変化の割合(％)は、25℃で、各々、1.0、1.2及び0.7であった。化合物O、K及びIは、各々、pH3.3、4.5及び5.0で、マンニトール125mgを含有した。これらの組成物の12ヶ月後のB0の変化の割合(％)は、25℃で、各々、0.5、0.1及び0.3であった。注目すべきことに、40℃で2ヶ月後、成分B0の量は、化合物Oにおいてわずかに1.9％及び化合物Mにおいて1.0％減少した(図4A参照)。
図3Aに認められるように、化合物O(マンニトール125mg、pH3.3)に関するB0の変化の割合(％)は、マンニトール125mgを含有する組成物に認められる他の差異に類似しており(組成物I及びK参照)、T=0でのB0の最初の分解量は、化合物O(88.3％B0)よりも有意に低い。このことは、各々、B0を85.3％及びB0を85.5％含有する化合物K(pH4.5)及び化合物I(pH5.0)を比較した場合に、特別である。化合物Oに存在するB0の量及びMAGの量の間の差異(図3A及び3B参照)は、大概、先に説明されたように、B0は分解しMAGを形成する唯一のダルババンシン成分ではないという事実により説明することができる。
乳糖も、ダルババンシンの適当な安定化剤であるように見える。pH4.5で乳糖125mgを含有する化合物Nに関して、B0の12ヶ月間にわたる変化(％)は、25℃でわずかに0.6であった。40℃で2ヶ月後、B0の変化(％)は、わずかに1.4であった。しかし乳糖単独では、ダルババンシンに加え、マンニトールを安定化するようには見えない。pH4.5で、化合物K(マンニトール125mg)のB0成分は、40℃で2ヶ月後にわずかに1.0減少した。
マンニトール及び乳糖の組合せは、ダルババンシンを安定化するようにも見え、特に好ましい。マンニトール及び乳糖は、同様の安定化特性を有する。しかしマンニトールは、利尿性である。従って好ましい態様において、マンニトールの量が最小化される。化合物Mは、マンニトール及び乳糖の各々を62.5mg含有する。図3Aに認められるように、25℃で12ヶ月にわたるMAGの変化の割合(％)は、わずかに0.6であった。加えて、図4Aに認められるように、MAGの量は、40℃で3ヶ月後に2.1％減少した。これは、化合物N(乳糖125mg)及びK(マンニトール125mg)について認められたものよりも少ない分解であり、両方とも40℃で3ヶ月後に、MAG量2.9％の増加を示した。他の製剤において使用されたマンニトール及び乳糖の各量の半分の組合せは、ダルババンシン安定性のより大きい増加につながることは、予想外であった。
約pH4.5におけるマンニトール及び乳糖で安定化されたダルババンシンの追加の安定性データが、様々な温度について、下記表8A-Dで報告されている。
Figure 2007534768
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更なる長期安定性試験からのデータを、表9-11に列記されている。ダルババンシン製剤の安定性を決定するために、試料は、二重移動相勾配及びUV検出システムを使用する、逆相HPLCにより分析した。ダルババンシン含量は、外部参照標準を用いて決定した。ダルババンシン成分の分配率(％)は、各単成分の面積を、全ての主要薬物成分の総面積と比較することにより計算した。不純物の分配率(％)は、個々の不純物の各面積を、総クロマトグラフィー面積と比較することにより計算した。
試料は、HPLCアッセイ、バイオアッセイ、水分含量、微生物限界、pH、HPLC分配、又は総不純物について試験した。結果は、表9-11に示した。T=0時にMAG 1.5％を有するバッチ025に関する安定性データは、表9A、10A、及び11Aに示した。以下に説明したような異なる乾燥プロセスの結果として、T=0時にMAG 0.8％を有するバッチ020005/Rに関する安定性データは、表9B、10B、及び11Bに示した。
ダルババンシンは、-20℃での貯蔵時に良好な安定性を示し(表9A-B参照)、バイオアッセイ、HPLCアッセイ、HPLC分配、又は総不純物において有意な変化はなかった。そのpHは、未変化に維持され、及び水分含量のわずかな増加が認められた。
MAG含量の約2.9％の増加及び因子B0の対応する減少約3.6％により証明された分解は、5℃で36ヶ月で認められた(表10A参照)。総不純物に傾向は認められず、バイオアッセイ及びpHは本質的に未変化であり続けた。同様の結果が、バッチ020005において認められる(表10B参照)。
MAGの増加約10.2％及び因子B0の減少約8.5％を伴う、より広範な分解が、25℃での貯蔵時に12ヶ月で認められた(表11A参照)。他の因子、関連物質及びpHのレベルは、未変化のままであった。水分含量は約1.6％増加した。
Figure 2007534768
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滅菌された生成物の安定性試験も行った。試料は、ケーキ及び溶液の外観、再構成時間、pH、HPLCアッセイ、バイオアッセイ、水分含量、無菌性、HPLC分配、及び関連物質について試験した。結果は、表12-14に示した。
凍結乾燥された生成物は、5℃で貯蔵時に、HPLCアッセイ又はHPLC分配のわずかな変化のみを伴い、良好な安定性を示した(表12A及びB参照)。温度が上昇するにつれ(表13及び14参照)、MAGの対応する増加を伴い、因子B0が減少した。他の因子は、温度により影響を受けるようには見えなかった。生成物の外観及びpHは、温度により影響を受けるようには見えなかった。同じく再構成時間の明らかな傾向を決定することは不可能であり、可溶化された生成物の目視検査には、数秒を必要とするように思われた。
Figure 2007534768
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光安定性
注射用ダルババンシン(500mgバイアル)を、同じくラベルを付けたバイアルにおいて、光安定性について評価した。10個のラベルを付けたバイアルを、アルミホイルで包んだ10個のラベルを付けたバイアルからなる暗所対照と共に、光安定性チャンバーへ入れた。被験試料は、120万ルクス時間以上及び200ワット時/m2以上集積された(integrated)近紫外エネルギーに曝露した。試料は、外観、溶液の外観、pH、湿分、及びHPLCアッセイについて評価した。この評価の結果は、表15に示した。
Figure 2007534768
光曝露試料及び暗所対照試料の比較は、効能、API成分レベル、及び総不純物においてわずかな変化を伴うが、同等であり続けた。
光曝露した試料は、RRT 0.85で非常に低レベルの特定されない不純物の存在を明らかにし、これは暗所対照試料においては検出されなかった。この成分のHPLC/MSによる評価は、これがダルババンシンBホモログの1-塩素誘導体であることを示している。
これらの結果を基に、注射用ダルババンシンは、その即時包装において、光安定性であると考えられた。
改善された有効性及び減少した副作用
高用量レベルでのダルババンシンの毎週の投薬(すなわち、驚くほど高く及び長期持続する血清レベルを生じる)は、本明細書の実施例において明らかにされたように、毎日又は1日2〜4回でさえ投与される通常の抗生物質のより少ない投与量の標準療法により認められるものと同様の、又はより良い、驚くほど良好な安全性プロファイルを示している。ダルババンシンの驚くほどの高用量(すなわち、驚くほど高く及び長期持続する血清レベルを生じる)は、他の抗生物質よりも少ない頻度で、有害な副作用を伴わずに投与され、改善された有効性及び患者の服薬遵守をもたらす。
実施例1において考察されたように、ダルババンシンによる治療は、有害事象の低い発生率を生じる。重篤な有害事象とは、死亡を生じ、生命を脅かし、入院もしくは入院期間の延長をもたらし、又は持続性もしくは重大な不能もしくは無能であるような、任意の投与量で生じる有害な薬物経験を含む。実施例1において説明された第II相試験において、下痢、嘔吐、高血糖症、四肢の疼痛、吐気、及び便秘などの有害反応の90％は、重症度が軽度から中等度であった。実施例1の治験におけるダルババンシンの使用は、被験薬治療に関連した重篤な有害事象を生じなかった。
キット
本発明は同じく、細菌感染症の治療又は予防の方法において使用するためのキットも提供する。このキットは、例えば少なくとも1単位投与量のダルババンシンを含む本発明の医薬組成物、及び細菌感染症の治療又は予防のための使用に関する医療従事者への情報を提供する説明書を備える。説明書は、印刷物で、又はフロッピー（登録商標）ディスク、CD、もしくはDVDなどの電子媒体の形で、又はそのような説明を入手することができるウェブサイトアドレスの形で、提供されることができる。時には、ダルババンシンの単位投与量は、個体へ投与された場合に、ダルババンシンの治療的又は予防的に有効な血漿レベルが少なくとも5日間個体において維持されるような用量を含む。一部の態様において、キットは、2回目用量よりも約1.5〜約3倍高いダルババンシン初回用量を含むことが多い、少なくとも5日間間をあけて、時には約1週間間をあけて投与される2つの単位剤形を含む。ダルババンシンは、無菌の水性医薬組成物又は乾燥散剤(例えば、凍結乾燥された)組成物として含まれることが多い。
適当な包装が提供される。本明細書において使用される「包装」は、このシステムにおいて習慣的に使用され、並びに個体への投与に適したダルババンシン組成物を定められた境界内に保持することが可能である、固形マトリックス又は物質を意味する。このような物質は、ガラス及びプラスチック(例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、及びポリカーボネート)ボトル、バイアル、紙、プラスチック、及びプラスチック箔が積層された封筒などを含む。e-ビーム滅菌技術が使用される場合、包装は、内容物の滅菌を可能にするのに十分に低い密度でなければならない。
キットは任意に、例えば注射器又は静脈内投与用用具のようなダルババンシンの投与のための用具、並びに/又は乾燥散剤(例えば、凍結乾燥された)組成物を投与のために調製するための、無菌溶液、例えば、5％デキストロースのような希釈剤も含む。
本発明のキットは、前記方法において説明されたように、ダルババンシンに加え、ダルババンシンと共に使用するための非-ダルババンシン抗生物質又は非-ダルババンシン抗生物質の混合物を含むことができる。
下記実施例において、以下の略号は、下記の意味を有する。略号が定義されない場合は、その一般に受入れられた意味を有する。
AcOH＝酢酸
AcONa＝酢酸ナトリウム
aq.＝水性
AST＝アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ
ALT＝アラニンアミノトランスフェラーゼ
BV＝床容量
CV＝変動係数
d＝直径
D＝ダルトン
DCC＝ジシクロヘキシルカルボジアミド
DMEPA＝3-(ジメチルアミノ)-プロピルアミン
DMSO＝ジメチルスルホンアミド
eq＝当量
EU＝エンドトキシン単位
g＝グラム
GC＝ガスクロマトグラフィー
HCl＝塩酸
H2O＝水
HOBT＝1-ヒドロキシベンゾチアゾール一水和物
HPLC＝高速液体クロマトグラフィー
H2SO4＝硫酸
IPA＝イソプロピルアミン
IU＝国際単位
KF＝フッ化カリウム
kg＝キログラム
L＝リットル
LC/MS/MS＝液体クロマトグラフィー/質量分析/質量分析
LDH＝乳酸デヒドロゲナーゼ
LSC＝液体シンチレーションカウント
m3＝立方メートル
MeOH＝メタノール
mg＝ミリグラム
mL＝ミリリットル
mol＝モル
MW＝分子量
N＝ノーマル(normal)
NaOH＝水酸化ナトリウム
NMP＝N-メチル-2-ピロリドン
QTD＝定量的組織分配
Rt＝持時間
sd＝標準偏差
TEA＝トリエチルアミン
下記実施例は、本発明を例示するが、限定しないことが意図されている。
実施例1. 深部皮膚軟組織感染症におけるダルババンシン週1回の有効性及び安全性
この無作為化比較試験は、ダルババンシンの2種の投与量レジメンの安全性及び有効性を評価した。深部皮膚構造が関与した又は外科的介入が必要な皮膚軟組織感染症(SSTI)の成人患者を、3群に無作為化した：試験アーム1は、ダルババンシン1100mgを静脈内注射(IV)により1日目に受け取った；試験アーム2は、ダルババンシン1gをIVで1日目に、及びダルババンシン500mgをIVで8日目に受け取った；試験アーム3は、「標準治療」を受け取った。臨床及び微生物学的反応並びに有害事象を評価した。
分析集団
62名の患者が本試験に無作為に割当てられた；全員、研究治療の少なくとも1回投与量を受け取った。4種の試験集団を、安全性及び有効性について評価し、以下のように定義した：意図した治療に基づく解析(ITT)集団は、被験薬の少なくとも1回投与量を受け取った患者全員を含んだ(全ての無作為化された試験対象)。微生物学的意図した治療に基づく解析(MITT)集団は、ベースラインで培養-確認されたグラム陽性病原体を有した全てのITT患者であった。臨床的に-評価可能な集団は、以下のように定義した：1)全ての試験選択基準を満たし、2)経口逓減(step-down)療法について(治療群の標準にのみ適用される)以外は、4日目以降のグラム陽性感染症に関する抗菌療法において変化を有さず、3)経過観察(FU)評価来院時に来院し(治療の失敗はなし)、及び4)プロトコールで承認されない併用抗菌薬を受け取らない(治療の失敗はなし)。微生物学的に評価可能な集団は、ベースライン時に培養-確認されたグラム陽性病原体を有した臨床的に-評価可能な患者のサブセットであった。
試験集団は表16に示した。
Figure 2007534768
対象の平均年齢は、50〜55歳であった(18〜86歳の範囲)。治療アームを超えた年齢の明らかな差異はなかった。治療アームを超えた性別の差異もなかったが、全般的に本試験には、同数の男性及び女性が登録した。この患者集団は、主に白人であった。これらの結果は、ITT集団及び臨床的に評価可能な集団の両方に一致した。
62名の患者が登録し、試験アーム1に20名、及び試験アーム2及び3に各21名が登録した。標準の治療に関する最も一般的な比較対象は、クリンダマイシン、セフトリアキソン、バンコマイシン及びセファゾリンであった。試験アーム3の治療の平均期間は、15日間であった。
ベースライン病原体及び易罹患性
62名のITT患者のうち、66％(14名単回投与量ダルババンシン、13名2回投与量ダルババンシン、14名標準治療)は、治療前の単離されたグラム陽性病原体を有した(MITT集団)。最も一般的な病原体は、黄色ブドウ球菌であった。ベースライン時の病原体の分布を、表17に示した。
Figure 2007534768
臨床反応及び微生物学的反応
3種の治療レジメンの実践的有効性は、患者の臨床反応及び文書化されるか又は推定された微生物学的反応の評価により決定した。有効性の主要エンドポイントは、臨床的に評価可能な集団の経過観察来院時の臨床反応であった。EOT及びFUの両来院時の臨床反応は、成功(治癒又は改善)又は失敗(不確定な結果を含む)として分類した。成功として分類された患者は、それらの感染症について、追加の全身性抗菌治療を受け取ってはならなかった。失敗は、SSTIの1種又は複数の局所的又は全身的徴候及び症状の持続として定義し、その結果新たな又は追加の全身の抗菌物質による治療が、SSTIに必要であった。
微生物学的転帰、副次的有効性変数は、微生物学的に文書化されたSSTI(すなわち、少なくとも1種の同定されたベースライン病原体)を有する患者の亜集団において評価した。微生物学的反応は、ベースライン時に同定された各グラム陽性病原体について評価した(すなわち、根絶、根絶と推定、持続、持続と推定)。経過観察培養が実行されなかった患者について、ベースライン病原体に関する微生物学的反応は、臨床反応を基に推定した。EOT及びFU来院時の患者による微生物学的反応は、成功(すなわち、全てのグラム陽性生物が根絶されたか又は根絶と推定)又は失敗(すなわち、少なくとも1種のグラム陽性生物が持続するか又は持続していると推定され、複数の病原体が部分的に根絶された)としてとして等級化した。EOT及びFUの両来院時に、コロニー形成及び超感染症(superinfection)を評価した。FU来院時に、患者の細菌学的反応は、再発も含んだ。
臨床的有効性
臨床的成功率は、表18に示した。臨床的に-評価可能な集団において、単回投与量ダルババンシン患者の61.5％、2回投与量ダルババンシンの94.1％、及び標準治療群の76.2％は、FU評価時に成功として分類した。ベースライン時に深部又は合併型SSTIと分類されたこれらの患者の探索的亜分析において、2回投与量ダルババンシン療法は、各々58.3％及び73.7％である、単回投与量ダルババンシン及び標準と比較して、より高度な臨床成功率(93.8％)を提供した。
EOT及びFU両評価時に同様の成功率が、支持的ITT及び微生物学的-評価可能な集団において認められ、2回投与量ダルババンシンによる治療後のより好ましい反応への一貫した傾向を伴った(表17)。MITT集団において、メチシリン-耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)を伴う患者のFU評価時の臨床成功率は、単回投与量ダルババンシンについて50％(3/6)、2回投与量ダルババンシンについて80％(4/5)、及び標準治療レジメンにより治療した患者について50％(1/2)であった。
Figure 2007534768
微生物学的有効性
異なる病原体に関する異なる治療レジメンの成功率を、表19に示した。微生物学的に-評価可能な集団に関して、全ての生物に関するFU評価時の根絶/推定された根絶率は、単回投与量ダルババンシンについて58.3％(7/12)、2回投与量ダルババンシンについて92.3％(12/13)、及び標準治療群の患者について70.6％(12/17)であった。持続した単離体について、ダルババンシンMICの変化は存在しなかった。FU時に、黄色ブドウ球菌根絶率は、単回投与量ダルババンシン(50％)及び標準治療(60％)による治療と比べ、2回投与量ダルババンシン群(90％)のほうが高かった。同様の知見が、MITT集団について観察され；2回投与量ダルババンシンは、MRSA単離体の80％を根絶した(表19)。
Figure 2007534768
微生物学的に評価可能な集団及びMITT集団に関して、EOT及びFU時の微生物学的成功率を表20にまとめた。同等の微生物学的成功率が、2回投与量ダルババンシン及び標準治療レジメンで処置された患者で両来院時に報告された(約64％〜77％)のに対し、ダルババンシンの単回投与量が投与された者は、より低い成功率を有した(＜40％)。微生物学的に-評価可能な集団におけるEOT/FUでの微生物学的成功率は、臨床反応知見が似ていた：単回投与量ダルババンシンに関して38.5％/27.3％、2回投与量ダルババンシンに関して72.7％/72.7％、及び標準治療法に関して71.4％/64.3％。同様の知見が、MITT集団について認められた(データは示さず)。
Figure 2007534768
薬物動態解析
ダルババンシン治療群に無作為化された患者について、血液5mlを、ダルババンシン血漿濃度の決定のために8日目に得た。8日目にダルババンシン投与量500mgを受け取るように無作為化された患者について、血液を、2回目投与量の投与直前に得た。追加の5ml血液試料を、単回投与量ダルババンシン群に無作為化された患者について10及び24日目に得、並びにダルババンシン2回投与量を受け取った患者について20及び34日目に得た。
ダルババンシン血漿濃度は、バリデーションされた液体クロマトグラフィー及び質量分析法を用いて決定した。定量下限は、血漿について500ng/mlであった。
単回投与量レジメンにおいて試験8、10及び24日目に採取した平均ダルババンシン濃度は、各々、31.1±7.1、25.2±4.8、及び10.2±3.5mg/l(平均±SD)であった。試験8(2回目投与量前)、20及び34日目の2回投与量レジメン後のダルババンシン濃度は、各々、30.4±8.2、21.2±10.0、及び9.0±4.4mg/lであった。予想されたように、全ての患者は、初回投与量後第一週を通じ20mg/lよりもより大きいダルババンシン濃度を有し、20mg/lを上回るレベルが、8日目に500mg IVの投与量の追加で翌週も維持された。一般に、最低殺菌濃度は、約4〜10mg/lであった。
安全性評価
被験薬の少なくとも1回投与量を受け取った各患者(ITT集団)は、異常な臨床試験結果及び生命徴候を含む、有害事象(AE)のモニタリングを通じ、薬物安全性について評価した。AEは、治験担当医がそれらの重症度(軽度、中等度、重度、生命を脅かす)に応じ、及び被験薬との関係(無関係、おそらく関係なし、もしかすると関係がある、又はおそらく関係あり)により等級化した。
AEデータのまとめを、表21に示した。有害反応の大部分(90％)は、重症度が軽度から中等度と考えられた。全ての重篤な有害反応(5名の患者において8事象)は、被験薬治療と無関係であった。少なくともひとつの治療の緊急性のあるAE(19例の単回投与量ダルババンシン、16例の2回投与量ダルババンシン、21例の標準治療)が報告された全患者の約59％は、治験担当医が、被験薬ともしかすると関係がある、又はおそらく関係があると分類した事象を経験した。特に薬物-関連したAEは、11例(55％)の単回投与量ダルババンシン、10例(48％)の2回-ダルババンシン、及び12例(57％)の標準治療の患者で報告された。ダルババンシン及び標準の治療の両方の治療群で最も頻繁に報告された薬物-関連したAEは、下痢及び嘔吐であった。異なる治療群に関する観察されたAEの型のまとめは、表22に示している。
ダルババンシン-治療した患者で、AEのために治療を早期中断したものはなかった。標準治療レジメンの21名の患者中3名(14％)は、AEのために治療を早期中断し、これは1日目におそらく薬物に関連している蕁麻疹を発症した患者、及び被験薬に無関係のAEを有した患者2名(緑膿菌超感染症及び上昇したバンコマイシントラフレベル)を含んだ。
Figure 2007534768
Figure 2007534768
考察
本オープン-ラベル無作為化第II相試験は、ダルババンシンは、SSTI成人の治療に有効であることを示している。登録した患者の大半は、深部又は合併型感染症(＞90％)、外科的介入が必要な必要な感染症(〜70％)を有したが、約45％は糖尿病であった。
週2回のダルババンシン投与量は、単回投与量ダルババンシン又は標準の治療レジメンのいずれよりも、数字上より高い臨床反応率を有した。ITT及び臨床的に-評価可能な集団の両方から得たデータは、2つの逐次毎週の注射可能な投与量のダルババンシン(1000mg、毎週500mg)のレジメンは、SSTIの治療に有効であることを示唆している。標準治療群は、期間の中央値13日間治療した。経過観察時に、2回投与量ダルババンシンで治療した臨床的に-評価可能な患者の94％は、臨床的に成功と見なしたのに対し、標準治療レジメンを与えた患者では76％及び単回投与量ダルババンシンを受け取った患者では61.5％であった。
黄色ブドウ球菌は、ベースライン時に最も頻繁に単離された生物であった。この試験において、患者の約83％は、黄色ブドウ球菌に感染し、全黄色ブドウ球菌株の38％はMRSAであった。ほとんどの感染症(80％)は、単独の病原体により引き起こされた。MRSAを含むグラム陽性単離体に対するダルババンシンのMICは、0.016〜0.25mg/Lであった。
微生物学的成功率は、臨床的に-評価可能な集団の臨床反応に匹敵した。一緒にした全ての生物に関して、2回投与量の毎週のダルババンシンレジメンによる治療(92％)は、単回投与量ダルババンシン(58％)及び標準の治療療法(71％)と比べて、治療と評価2週目でより高い根絶率を提供した。全般的に、黄色ブドウ球菌根絶率は、各々患者の90％、50％、及び60％であった。MITT集団に関して、MRSAに関して根絶率は、2回投与量ダルババンシンレジメンについて80％であるのに対し、単回投与量ダルババンシン及び標準の治療療法の両方について50％であった。
単回投与量及び2回投与量の毎週の治療期間の最後に得られたダルババンシン濃度(各々、10日目及び20日目)は、2回目毎週の投与量後にほとんど薬物の蓄積がないことを同様に示唆した。2回投与量レジメンで観察された臨床成功のより高い率は、時間-依存型の殺傷を示し、ここで薬物又は薬物曝露の持続したレベルが、1週間間をあけたダルババンシンの2回投与量で提供された。毎週の投薬間隔の最後に測定されたダルババンシン血漿レベルは、本試験で認められたものを含む、SSTIの大半に寄与する病原体に関して報告されたMIC90よりも実質的により大きかった(＜0.03〜0.5mg/L)。これらのレベルは、最小殺菌濃度4〜10mg/lも上回った。
有害反応の全般的率は、ダルババンシンレジメン及び標準の治療の両群について類似していた。胃腸の薬物-関連した有害事象(すなわち、下痢及び嘔吐)は、3種の治療群について最も一般的に報告された。これらの事象の大半は、軽度で自己-限定的であった。ダルババンシン-処置した患者で、有害反応のために試験を早期に中断したものはなく、報告された糖ペプチドが原因の重篤な有害事象もなかったが、更に標準治療群の14％は、有害作用のために中断した。従って新規用量レジメンは、標準の治療との比較において低下した有害副作用を有した。本試験のデータは、ダルババンシンは何らかの程度の臨床的に有意な肝毒性も腎毒性も誘導することの証拠を認めなかった。
2回投与量ダルババンシンレジメンは、合併型SSTIの患者の治療に有効であるように見える。両投与量でのダルババンシンは、本臨床試験では忍容性があり、有害事象プロファイルは標準治療群のそれに類似していた。
実施例2. カテーテル-関連した血流感染症(CR-BSI)の治療における週1回のダルババンシンの有効性及び安全性
本試験は、グラム陽性菌病原体に起因したカテーテル-関連した血流感染症(CR-BSI)の成人の治療における、ダルババンシンの週1回投薬レジメンの安全性及び有効性(臨床的及び微生物学的)を、標準の治療療法であるバンコマイシンと比較し評価した。
方法
選択/除外基準に合致する疑わしい又は既知のグラム陽性病原体(複数)によるCR-BSI患者を、このオープン-ラベル比較多施設試験の2種の治療アームの一方に無作為化した。ダルババンシンは、毎週ダルババンシンにおいて週1回で投与し、及び比較対象(バンコマイシン)は、バンコマイシンを毎日投与した。黄色ブドウ球菌感染症患者には、カテーテル除去が必要であり；コアグラーゼ-陰性ブドウ球菌(CoNS)感染症の患者に関して、カテーテル管理は、治験担当医の指示に従い残した。有効性は、臨床的には追加の抗菌剤の理由のない(warranted)、CR-BSIの臨床徴候及び症状の改善又は寛解を、及び微生物学的にはベースライン時の根絶もしくは存在又は他の病原体を基にした。安全性及びダルババンシン血漿濃度も評価した。
解析集団
約80名の患者が、計画された(各治療アーム1及び3に40名)；67名の患者を解析した(毎週ダルババンシン33名及びバンコマイシン34名)。毎日のダルババンシンの患者7名は、安全性解析にのみ含んだ。75名の患者は無作為化し、及び74名は米国内の13施設で治療され；64名の患者は本試験を完了した。疾病素因の特徴は概して、試験アームを超えて同様であった。患者の平均年齢は、毎週のダルババンシンは54歳(20〜78歳の範囲)であり、及びバンコマイシンは57歳(19〜85歳の範囲)であった。男性及び女性は、全体として同等であり；毎週ダルババンシンにおいて男性がわずかに多く、及びバンコマイシンにおいて女性がより多かった。ほとんどの患者は、白人であり(＞65％)、おそらくCR-BSIを有し、及び非穿孔(non-tunneled)カテーテルは有さないとして分類された。微生物学的ITT集団に関して、両方の治療アームに関する最も一般的な病原体は、CoNS及び黄色ブドウ球菌であった。各々試験アーム1及び3について、黄色ブドウ球菌単離体の5/11(45.4％)及び9/12(75.0％)は、メチシリン-耐性(MRSA)として同定された。
診断及び主な選択基準
黄色ブドウ球菌に関して少なくともひとつの血液培養陽性、又は全ての他の生物について少なくとも2種陽性の血液培養物として定義された(皮下採取した試料から少なくとも1種の培養物)の文書化されたグラム陽性菌血症を伴う患者が、選択された。加えて他の選択基準全てに合致し、以下に記したふたつの条件の各々にも合致した患者を登録した：
1. 菌血症の以下の徴候の少なくとも2種：直腸、経口(測定した温度に0.5℃加える)、鼓室で又は中心カテーテル経由で測定した中心(core)温度＞38.0℃又は＜36.0℃；WBCカウント＞12,000/mm3もしくは＜4,000/mm3、又は分画カウントは、＞10％バンド型(band form)を示し；頻脈(心拍数＞100bpm)；頻呼吸(呼吸＞20呼吸/分)；一過性低血圧(収縮期血圧＜90mmHg)
2. そのカテーテル以外に菌血症の臨床症状発現の明らかな原因はない(カテーテル部位の局所的徴候及び症状がある)。
治療
治療は、黄色ブドウ球菌感染症患者について14日間、及び他の全ての病原体について7〜14日間維持した。ダルババンシンの長い半減期のために、被験薬療法の期間は、毎週のダルババンシンで与えられるダルババンシンの各投与量について7日間と仮定した。ダルババンシンは、1日目に1000mg負荷量で及び8日目に500mg投与量で静脈内投与した。バンコマイシンは、12時間毎に1000mg投与量で静脈内投与した(又は薬物レベルを基に投与量-調節した)。
評価基準
有効性を、臨床的及び微生物学的反応を基に評価した。主要転帰パラメータは、微生物学的意図した治療に基づく解析(ITT)集団におけるtest-of-cure(TOC)来院時の全般的反応であった。安全性は、有害事象(AE)、臨床検査試験、生理的試験、生命徴候及びECGに関するデータの収集及び分析により評価した。ダルババンシン血漿濃度は、最大7回決定した(1日目の初回投与量の前後、4±2日目、8日目の2回目投与量の前後、治療終了時(EOT)及びTOC)。試験時のアーム2の除外(elimination)のために、患者から得た素因データ及び安全性データのみを説明し；有効性は評価しなかった。
統計学的方法
有効性、安全性、及びダルババンシン濃度データを、記述的統計を用いて示した。主要有効性分析について、95％信頼区間も決定し、及び主要有効性変数を用いる予後因子解析について、ロジスティック回帰を使用した。
有効性の結果
主要有効性分析、TOC時の微生物学的ITT集団の全般的反応に関して、ダルババンシンを毎週のダルババンシンで受け取った患者(87.0％、95％CI：73.2, 100.0)は、バンコマイシンを受け取った患者(50.0％、95％CI：31.5, 68.5)よりもより高い成功率を有した。
副次的有効性分析に関して、全般的成功、臨床的成功、並びに病原体別、感染症の種類別、ベースライン時のカテーテルの状態別、並びにEOT及びTOCの微生物学的ITT及び評価可能な集団におけるカテーテルの種類別の全般的及び臨床的成功は、ダルババンシン試験アームにおいてバンコマイシン試験アームよりもより高かった。患者別の微生物学的成功は、EOT時にこれらの治療アームについて類似していたが、TOC時にはダルババンシン試験アームにおいてより高かった。CoNSに関して、病原体別の微生物学的成功は、EOT及びTOCの両方においてダルババンシン試験アームにおいてより高かった。EOTまでにカテーテル部位でのほとんどの徴候及び症状は、両試験アームについて寛解された。
安全性の結果
有害事象(AE)は、71名の患者において報告された(95.9％)。AEを報告する患者の数は、試験アームにわたり類似していたが、より多くのAEが、バンコマイシン群よりもダルババンシン群において報告された。最も一般的なAEは、下痢、便秘、貧血及び低血圧であった。ほとんどのAEの強度は、治験担当医により軽度又は中等度と判断された。被験薬と(もしかすると又はおそらく)関連があると考えられた有害事象は、試験アームにわたり均等に分布された。ダルババンシン試験アームの1名の患者(3％)は、無関係の重篤でないAEにより、ダルババンシンを中断し；試験からの脱落につながるAEはなかった。バンコマイシン試験アームの3名の患者(8.8％)は、比較対象の中断につながるAEを有した；2AEは、試験からの脱落につながった。SAE分布は、治療群間で同様であり；ダルババンシン試験アームにSAEはなく、及びバンコマイシン試験アームのSAEの1例が、被験薬に関連すると考えられた。本試験において死亡例は5例あった。死亡を生じた全てのAEは、試験投薬に無関係であった。臨床的に意味のある臨床検査値異常は、いずれの試験アームにも存在しなかった。臨床検査値でAEと報告されたものはほとんどなかった。SAE又は被験薬の中断につながるものもなかった。
上昇した拡張期血圧は、全ての治療群にわたり、最も一般的な臨床的に意味のある異常な変化であった。高血圧は、3/74患者についてAEとして報告された(4.1％、2患者ダルババンシン、1患者バンコマイシン)；わずかに1名の患者(ダルババンシン服用)が、試験投薬に関連したと考えられたAEとしての上昇した血圧を有した。ダルババンシンは、心拍数、房室伝導又は心室伝導に影響を示さなかった。QTc値に対する平均差は、バンコマイシン群と比較して、ダルババンシン群について7msecより大きかった。薬物療法時の外れ値の頻度に関して治療間で有意差は認められなかった。
従って初回IV投与量1000mg、その1週後に2回目IV投与量500mgで投与されたダルババンシンは、忍容性が良好であり、グラム陽性病原体により引き起こされたCR-BSIの治療に非常に有効であり、バンコマイシンよりも優れた反応率を有した。
実施例3. 健常対象におけるダルババンシンの薬物動態及び腎排泄
本試験の主要目的は、ダルババンシンの薬物動態を特徴決定し、及びこの薬物の治療的投与量を受け取る健常対象において腎排泄率を計算することであった。これは、オープンラベル無比較試験であった。
被験薬治療
年齢18〜65歳の健常男性又は女性対象に、30分かけた点滴により、ダルババンシン1000mgIV単回投与量を投与した。
女性1名又は男性5名の6名の対象が、登録し、被験投薬を受け取り、本試験の全ての局面において完了した。3名の対象は白人であり、3名の対象はアフリカ系アメリカ人であった。平均年齢は29.8歳(22〜63歳)であった。平均身長は、68.6インチ(63〜75)及び平均体重は179.6ポンド(140〜244)であった。
薬物動態
血液及び尿(24時間収集)を、試験1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、及び42日目に採取した。血液試料は、ヘパリン処理したチューブに採取し、遠心した。血漿を、分離し、-20℃でアッセイ時まで凍結保存した。血漿及び尿試料を、バリデーションされたLC/MS/MS法を用い、ダルババンシンについてアッセイした。アッセイの定量下限は、尿及び血漿について500ng/mLであった。
ダルババンシン薬物動態パラメータを、WinNonlin(商標)ソフトウェア(Pharsight Corporation)を用い非-コンパートメント法で概算した。ピーク濃度(Cmax)値は、観察されたデータから直接得た。血漿濃度- 時間曲線(AUC)下面積を、線形台形則を用いて計算した。クリアランス(CL)は、投与量/AUCとしてコンピュータ処理した。消失半減期(t1/2)は、対数濃度対時間曲線の対数-直線部分の線形回帰により概算した。分布容積(Vz)の概算は、回帰パラメータを用いて算出し、定常状態の分布容積(Vss)は、投与量を積算し及びAUCで除算した一次モーメント曲線下面積(AUMC)から算出した。尿中に排泄されたダルババンシンの累積量は、尿排泄率の積分(AURC)により決定した。CLR又は腎クリアランスは、比として計算した：CLR＝AURC/AUC。
ダルババンシン血漿濃度対時間を、全ての対象について図5に示した。薬物動態パラメータは、表23に示した。濃度は、全ての対象について類似していた。ピーク血漿濃度は約300mg/Lであり、点滴終了直後に到達した。ダルババンシンは、10Lを超えるみかけの分布容積を示し、細胞外液中に良好に分布された。
ダルババンシンは、t1/2の9〜12日間でゆっくり排泄された。総薬物クリアランスは、0.0431±0.0074L/時間であった。推定された尿中に未変化で排泄された薬物の割合は、投与された投与量の42％であり、腎クリアランスは0.018L/時間と推定された。対象にわたり観察された変動性は、全ての薬物動態パラメータにわたり、22％未満の変動係数で低かった。
Figure 2007534768
安全性評価
有害事象は、重症度及び被験薬との関係について記録しかつ評価した。臨床検査データ(化学パネル、分画したCBC、尿分析)は、収集し、ベースラインからの変化及び逸脱値について評価した。ECG、生理的試験、及び生命徴候を得、ベースラインからの変化を評価した。
ダルババンシンは、本試験において忍容性がよかった。対象の死亡又は重篤な有害事象は、本試験中は報告されず、AEのために試験から早期脱落したものはなかった。
全ての志願者は、少なくとも1種のAEを報告したが、全て軽度であった。3名の志願者は、試験投薬にもしかすると関係があるAEを報告した：1名の対象において、上昇したALT(値46IU/L、正常値の上限40IU/L)；好酸球(値0.5x103/μL、正常値上限0.4x103/μL)、上昇したLDH(値303IU/L、正常値の上限90IU/L)、上昇したALT(値54IU/L、正常値の上限40IU/L)、上昇したAST(値42IU/L、正常値の上限40IU/L)で、全て1名の対象；並びに、1名の対象において耳鳴り。
ベースライン後の血液学、化学、生命徴候、及びECGの結果に、傾向は認められなかった。
考察
ダルババンシンの単回1000mg IV投与量は忍容性がよかった。1000mgの単回静脈内注入後、45mg/lを上回るダルババンシンの血漿濃度が、少なくとも7日間維持された。これは、殺菌性であることがわかっている濃度(4〜32mg/l)よりも高かった。このことは、週1回のレジメンでのダルババンシンの使用を支持している。尿消失プロファイルは、約40％尿中に排泄されたので、腎排泄は、重要な消失経路であることを示している。この知見は、動物における観察に一致している。腎臓は独占的消失経路ではないので、ダルババンシンの投薬調節は、腎不全患者においては不要である。
実施例4. 腎不全対象におけるダルババンシンの薬物動態
これらは、軽度、中等度及び重度の腎不全の対象に投与された場合の、静脈内ダルババンシンの安全性及び薬物動態を試験するために行われた、オープンラベル試験であった。
被験薬治療
年齢18〜80歳の男性及び女性対象が登録に適格であった。対象は、それらの性別、身長及び体型についての理想体重の-10％〜+50％であった。
薬物動態
連続した血液試料を、投与前及び点滴終了後少なくとも2週間採取し、バリデーションされたLC-MS/MS法を用い、ダルババンシンについてアッセイした。
ダルババンシン薬物動態パラメータは、非-コンパートメント法で概算した。ピーク濃度(Cmax)値は、観察されたデータから直接得た。血漿濃度- 時間曲線(AUC)下面積を、線形台形則を用いて計算した。
健常な腎不全対象及び最も重度腎不全の対象(重症RI)の薬物動態パラメータを、表24に示した。
Figure 2007534768
考察
重度腎不全の患者について、ダルババンシン単回投与量500又は1000mgが、対象へ投与された。表24から明らかなように、14日後、単回投与量1000mgを受け取った重度腎不全患者は、AUC14(mg.h/L)約22000を有し、これは予想外に2回投与量レジメン1000mg＋500mgの正常患者(AUC14mg.h/Lが23000)と類似していた。
軽度の腎不全患者について、ダルババンシンの用量調節は不要であった。ダルババンシン濃度及び薬物動態パラメータは、軽度の腎不全対象と正常な腎機能の対象において類似していた。加えてダルババンシンは、正常又は軽度の腎機能不全の対象において忍容性がよかった。Dowell, J. et al. "Dalbavancin Dosage Adjustments Not Required for Patients with Mild Renal Impairment"、2003年 ECCMID Meeting, Glasgowにて発表(Clinical Microbiology and Infection, vol9 (Supplement 1) page 291；2003)、及びStogniew, M. et al. "Pharmacokinetics Attributes of Dalbavancin: Well Distributed and Completely Eliminated with Dual Routes of Elimination" 、2003 ECCMID Meeting Glasgowにて発表(Clinical Microbiology and Infection, vol9 (Supplement 1) page 291-292；2003)参照、これらは両方とも明確に本明細書に参照として組入れられている。
実施例5. 腎不全及び末期腎疾患
ダルババンシン消失の主要経路は、未変化及びOH-ダルババンシンの両方の尿への排泄であり、おそらくこの薬物は、程度の異なる腎不全患者において使用されるであろう。このため、ダルババンシンの様々な程度の腎不全対象における安全性及び薬物動態象を、臨床試験VEROO 1-3、VEROOl-11及びVER001-13において試験した。
臨床試験VER001-3は、試験された用量(70mg)が、臨床試験において提唱される比較的多い毎週用量と比べて非常に低いと決定されたので、早期に終結した(5対象が登録；3対象はダルババンシンを受け取った)。臨床試験VER001-13は、軽度及び中等度の腎不全の対象を試験し、並びに臨床試験VER001-11は、重度腎不全対象及び末期腎疾患(ESRD)対象を試験した。マッチした対照対象を、全ての試験に登録した。腎不全は、概算したクレアチニンクリアランスにより定義した：軽度＝51〜79mL/分、中等度＝31〜50mL/分、及び重度＜30mL/分。ESRD対象は、試験の経過を通じて透析に頼っていた(毎週3回)。単回投与量1000mg IVダルババンシンを、軽度及び中等度の腎不全対象において試験し、投与量500mgダルババンシンを、ESRD対象において試験し、単回投与量500及び1000mgを重度の腎不全対象において試験した。
ダルババンシンは、これらの腎不全試験の各々において、忍容性がよかった。有害事象を報告する対象の同様の割合が、各試験群において認められた。報告された有害事象の多くは、重症度が軽度又は中等度であり、被験投薬とは無関係であった。ダルババンシンを受け取っている間に、いずれの試験対象においても、臨床的に意味のある臨床検査値異常はなかった。
臨床試験VER001-13において、正常腎機能の対象及び軽度腎不全の対象へのダルババンシン投与は、同等の濃度-時間プロファイルを60日間の試料採取期間に示した。相対治療期間にもかかわらず、投与後7日間の濃度-時間プロファイルは、正常腎機能対象及び軽度又は中等度腎不全のいずれの対象においても同等であった。濃度のわずかな上昇が、14日目以降中等度腎不全対象において認められ、この濃度は比較的低く40mg/L以下であった。これらの対象における1000mgダルババンシン投与後のダルババンシン血漿濃度-時間プロファイルを、図18に示した。ダルババンシン薬物動態パラメータは表25に示した。用量調節は、軽度又は中等度腎不全患者においては不要であった(CLCR＞30mL/分)。本試験からの知見は、集団薬物動態分析(CLCR＞50mL/分)において試験した患者と一致した。
臨床試験VER001-11においてダルババンシンは、正常腎機能の対象、重度腎不全対象、及びESRD対象に投与した。この試験で認められたダルババンシン濃度-時間プロファイルは、図19に示した。濃度は、最初の12時間を通じ、正常腎機能の対象、及び重度腎不全又はESRDの対象において類似していたが、小さい漸増性の差異が、重度腎不全対象において認められた。濃度は、投与後最初の1週間を通じ≦40％増加し、プロファイルの残りの期間を通じ差は増加し続けた。ESRD対象は、それらの1回目透析の前又は後にダルババンシンを受け取る対象に分割した。濃度-プロファイルの差異は、これらのふたつの亜群間で注目されなかった。しかしESRD対象における濃度は、正常腎機能対象に類似していたが、これは定期的透析計画(3回/週)による、腎不全の補償を示している。この薬物透析レベルに対応する透析のレベルは、測定するには小さすぎた。
重度腎不全対象及びESRD対象におけるダルババンシン薬物動態パラメータ(VER001-11)は、表25において、軽度又は中等度腎不全対象(VER001-13)と比較した。単回投与量500及び1000mgを、重度腎不全対象において試験し；濃度及び曝露は、投与量に比例した(図20、表25)。相対治療期間内の個体薬物曝露(AUC0-7日)は一般に、個体CLCRにわたり一致し、曝露の小さい増加のみが重度腎不全対象について認められた(図21)。曝露の差異は、全濃度-時間プロファイルにわたり試験した場合に、より大きかった。無限大まで外挿した血漿濃度-時間曲線下面積(AUC0-inf)は、重度腎不全対象において97％増加した。ESRD対象は、AUC0-infのわずかに45％の増加を有し、これは定期的透析計画による、不充分な腎の補償を反映している。
薬物動態パラメータを基に及びこれらのデータのシミュレートを基に、用量調節が、重度腎不全患者においては推奨される。用量調節の意図は、2回投与量相対治療期間(14日間)の濃度及び曝露をマッチさせつつ、薬物への過剰曝露を最小化することである。9種のシミュレートした用量レジメンの総量を、重度腎不全対象において試験した。これらのシミュレーションの結果は、図22にまとめ、これは相対治療期間の曝露、対、全体の曝露を示している。750mgダルババンシン、その1週間後の250mgダルババンシンの投与量は、CLCR＜30mL/分の患者について推奨される用量調節である。この用量レジメンは、20mg/Lを上回る濃度を維持し、正常腎機能の対象について観察された治療曝露と合致し、過剰曝露を最小化した。図23は、以下についてシミュレートしたダルババンシン濃度-時間プロファイルを示している：i)1000mg(1日目)＋500mg(8日目)を受け取る正常腎機能対象、ii)1000mg(1日目)＋500mg(8日目)を受け取る重度腎不全対象、及びiii)750mg(1日目)＋250mg(8日目)の推奨用量調節を受け取る重度腎不全対象。定期的透析療法(週2〜3回)を受ける患者は、透析により若干の補償された薬物クリアランスを有し、用量調節は不要であった。
Figure 2007534768
実施例6. 肝不全
ダルババンシンは、腎及び非-腎の両経路から排泄され、ダルババンシンはおそらく様々な程度の肝機能不全患者において使用されるであろう。程度の異なる肝機能不全患者におけるダルババンシンの安全性及び薬物動態は、臨床試験VER001-12において試験された。本試験に、軽度、中等度、又は重度肝機能不全(Child-Pughスコア、各々、5〜6、7〜9、及び10〜15)の他は健常な対象が登録し、正常肝機能の対照対象とマッチさせた。対象へは、1日目にダルババンシン単回1000mgIV投与量が、引き続き8日目にダルババンシンの500mgIV投与量が投与された。
ダルババンシンの濃度及び曝露は増加せず、肝機能不全の程度の増加を伴わなかった(図24)。正常肝機能の対象及び軽度肝機能不全の対象へのダルババンシン投与は、60日の試料採取期間にわたり、同等の濃度-時間プロファイルを生じた。中等度肝機能不全の対象及び重度肝機能不全の対象へのダルババンシン投与は、正常肝機能の対象と比較した場合に、わずかな減少を生じた。この薬物は、全群について忍容性がよかった。
正常肝機能の対象及び軽度肝機能不全の対象のダルババンシンへの曝露は、同等であった(表26)。ダルババンシン曝露の減少及びCLの増加の傾向は、中等度肝機能不全対象及び重度肝機能不全対象において明らかであった。全般的に、薬物動態パラメータの対象間変動は低く、一般に30％以下であったが、ダルババンシン薬物動態パラメータは、高及び低肝機能不全群の間で統計学的差があり、この曝露パラメータの範囲は、有意に重複した(図25)。
ダルババンシン薬物動態パラメータの変化は、薬物の分布容積により影響を受けることは明らかである。分布容積は、CL及びAUCの様式に比例又は反比例して増加した。本薬物の最終消失半減期は、これらの群について事実上変化しなかった。中等度及び重度肝機能不全の対象は、有意に腹水が多く及び浮腫を有し、より大きい薬物分布容積を有し、その結果薬物曝露がわずかに遅い。
群にわたるプロファイルを通じた濃度の重複が存在し、平均濃度は、意図された治療期間14日間を通じ、全群で20mg/Lを上回った。群にわたる薬物曝露の重複も存在した(図25)。例え平均曝露が減少したとしても、重度肝機能不全対象は、依然相対治療期間(14日間)を通じ、療法に必要なパラメータを超える薬物曝露を有した。ダルババンシンの用量調節は、いずれの程度の肝機能不全患者にも不要である。
Figure 2007534768
実施例7. 等温滴定熱量計を使用するダルババンシンタンパク質結合
ダルババンシンのタンパク質への結合は、等温滴定熱量計(ITC)により、20mMリン酸、150mM NaCl、pH7.4中、25及び37℃で、Microcal VP-ITC装置を使用し測定した。典型的実験において、25x10μlタンパク質(〜150μM)を、ダルババンシン溶液(〜5μM)を含有する熱量計セルに注入した。実際のタンパク質及びダルババンシン濃度は、280nmでの吸光度の測定により決定した。対照実験は、同一条件下でのタンパク質の希釈熱を説明するために、タンパク質の緩衝液(ダルババンシン非含有)への注入を含んだ。比較のために、必要な若干の修飾を伴う同様の実験を、テイコプラニンを用いて行った。
ダルババンシンによる実験は、以下の各タンパク質と行った：ヒトアルブミン；イヌアルブミン；ラットアルブミン；ウシアルブミン；及び、ヒトα-糖タンパク質。テイコプラニンは、ヒトアルブミン及びα-糖タンパク質と試験した。ふたつの異なる温度での結合親和性の比較は、表27に示した。
Figure 2007534768
希釈熱の補正後、積分された熱作用を、標準Microcal ORIGINソフトウェアパッケージにより、単純な一-部位結合モデルを用い、非-線形回帰により解析した。各注入に関する生データ(μcal/秒)を積分し、添加毎の総熱作用を得、次に注入物質の量で除算し、注入物質のkcal/moleを得た。同じ積分を、対照希釈作用に適用し、これを実際の滴定データから減算した。これは、結合度が放出された(吸収された)総熱に比例する、示差的結合曲線を提供した。その後これを、様々な標準結合モデルに関して、非-線形回帰法で解析した。最も簡単なモデルは、単純な非-競合結合平衡と推定され、3種のパラメータを得た：
Ka(＝1/Kdiss)は、結合会合(解離定数)
ΔH＝結合のエンタルピー(結合に関連したシグナルサイズ)
N＝結合部位の数(結合モデルが正しいと仮定)
非-競合結合と仮定し、Nは、試料中の利用可能な結合部位全てを飽和するのに必要な、注入物質のモルの(相対)数である。ダルババンシン実験について、ダルババンシンは「試料」であり、及びタンパク質(HSAなど)は「注入物質」である。これらの予備的結果は、結合は、ダルババンシンの溶解不良のために、比較的弱いことを示し、結合の化学量論(N)を明確に決定することは困難である。しかし図6に見られるように、全ての場合においてこのデータは、N＜1によくフィットした(すなわち、タンパク質対ダルババンシンは1対1未満)。結果的にN＝0.5値は、予想されるように全てのダルババンシンに結合するにはタンパク質のモル数の半分のみを要することを意味する。別の表現をすると、各タンパク質は見かけ上2個のダルババンシン分子に結合する。ダルババンシンは、1:1でタンパク質に結合する二量体を形成することが可能である。結合の化学量論的モデルの結果は、1:1結合を示すテイコプラニンとは異なり、2個のダルババンシン分子が、1個のタンパク質分子に結合することを示唆している。
表28は、濃度範囲1〜500μMの抗生物質に関する計算された結合した割合(％)を示し、ここでヒト血清アルブミン(6x10-4M)及びα-糖ペプチド(1.5x10-5M)の生理的濃度を推定した。これを臨床状況に関連付けるために、ヒトにおけるダルババンシンのピーク濃度は約300mg/L又は165μMとした。
Figure 2007534768
これらの実験において、ダルババンシンのヒト血清アルブミンへの結合は、98％を超えた。結合した分画は、選択されたダルババンシン濃度範囲、すなわち1〜500μMにわたりほとんど一定であった。この範囲は、ヒトにおける治療的濃度を包含している。ダルババンシンのα-糖タンパク質への結合は、テイコプラニンのそれよりもはるかに大きい、ダルババンシンは、起源の異なる血漿タンパク質への高い能力(capacity)及び低い親和性を明らかにし、試験した全ての種から得たタンパク質にわたり同様のKa値を有した。これらの結果は、ダルババンシンの独特な薬物動態特性のいくつかを説明している。2:1のダルババンシン:タンパク質複合体の結合及び形成も、延長された半減期、及び細胞外水容積に近いみかけの分布容積を説明している。低親和性は、1％に近い遊離画分の化合物について予想されたものを大きく超える、観察されたin vivo活性の説明を補助する。血漿タンパク質の高い能力は、化合物の生理的pHでの溶解不良にもかかわらず実現される比較的高い血漿濃度の説明を補助する。
実施例8. ラットにおけるダルババンシンの薬物動態特性及び組織分配
2種の試験を、ラットへ20mg/kg [3H]-ダルババンシンを単回IV注入投与し、行った。投与後70日間にわたり、排泄物及び40種を超える異なる組織を収集し、薬物-由来の放射活性の組織分配及び薬物動態を決定した。
HPLC-精製した[3H]-ダルババンシンを、これらの試験において用いた。放射標識した薬物は、トリチウム交換及びHPLCによる精製により作成した。
ラット物質収支試験
物質収支試験を行い、雄ラットへのダルババンシン単回静脈内(IV)注入後の、ダルババンシンの排泄パターンを決定した。
15匹の雄のSprague-Dawleyラットは、3H-ダルババンシン(20mg/kg、100μCi/ラット)の単回IV投与量を受け取った。投与量の投与後、尿及び糞便を、投与後14、36及び70日間、24時間間隔で収集した(3ラット/最終収集時)。水及びメタノールケージ洗浄液も、収集した。収集期間の最後に剖検した。全ての試料を、液体シンチレーションカウンター(LSC)により、総放射活性量について分析した。
ラットにおける3H-ダルババンシンのIV投与後、薬物-由来の放射活性は、尿(排泄された放射活性の〜2/3)及び糞便(排泄された放射活性の〜1/3)の両方中に消失された。投与された放射活性の約半分は、第1週以内に尿及び糞便中に消失され、これはほぼ1週目の血漿t1/2と一致した。投与後70日目には、わずかに投与量の4.5％が死体中に残存した。ケージ洗浄液からは無視できる放射活性が回収された。事実上投与された全放射活性は、試験期間中に(尿。糞便、死体、ケージ洗浄液、及びトリチウム交換)で説明された。
ラットの定量的組織分布(QTD)試験
雄ラットへのダルババンシンの単回IV注入後のダルババンシンの組織分布を評価するために、定量的組織分布試験を行った。
41匹の雄のSprague-Dawleyラットは、3H-ダルババンシン(20mg/kg、50μCi/ラット)の単回IV投与量を受け取った。ラット(3匹/時点)は、投与後12、24、48、72、96、120、144、168、336、840、1176及び1680時間で安楽死させ、血液、血漿及び組織(死体を含む)を採取した。全ての試料は、LSCで分析した。
濃度-時間プロファイルを、腎臓、肝臓、脾臓、血液、血漿、肺及び皮膚を含む、40を超える組織について決定した。皮膚を含む組織中の薬物-由来の放射活性の濃度及びt1/2値は、血漿で認められる値と同等であった。ダルババンシンは、注入後12時間以内に薬物-由来の放射活性の定量可能な濃度で、全ての組織に迅速かつ広範に分布することがわかった。ほとんどの組織は、投与後24時間以内に、最大濃度(Cmax)に到達した。5日間で回収された放射活性は、いずれの単独組織においても、投与量の＜5％であった。投与後70日目までに、死体のみ投与された放射活性の＞1％(2.34％)を保持した。従ってダルババンシンは、いずれの単独組織、臓器、又は血液細胞成分にも蓄積しなかった。CNSの放射活性濃度は低いが、この健常動物モデルにおいて検出可能であった。ダルババンシンは、血漿と同様に高い又はより高い薬物-由来の放射活性の濃度により、皮膚に浸透することがわかった。薬物-由来の放射活性の血液対血漿の比は、経時的に比較的一定であり続け、＜1であった。
QTD試験の一部として、胆汁試料を胆管挿管ラット(4匹の動物)から投与後384時間(16日間)収集した。投与量のほぼ11％が、投与後384時間にわたり回収された。これは、糞便中に認められた薬物-由来の放射活性の大部分を表している。
実施例9. ダルババンシン薬力学活性
抗菌療法の目的は、侵襲する病原体を根絶するために適当な期間、感染部位に有効濃度を提供することである。抗菌活性をin vitroで評価する主な方法は、最小阻害濃度及び最小殺菌濃度(MIC及びMBC)の決定である。しかしこれらのパラメータは、処方されたインキュベーション期間の正味の作用のみを測定し、抗菌活性の時間経過を特徴付けない。MBCは、殺菌活性の速度及び程度が薬物の濃度上昇により増強され得るかどうかを決定しない。更にMIC決定は、薬物除去後に残存する細菌に対する阻害活性があるかどうかを測定しない。
殺菌活性の速度、その濃度又は曝露時間依存性、及び抗生物質作用後の効果の存在又は非存在は、抗菌活性の時間経過より明確に説明し、並びに最適投薬レジメンを決定するための重要な薬力学パラメータであることを示唆する試験の数が、増えている。例えば、β-ラクタム系抗生物質による殺菌は、ほとんど濃度依存性を示さず、殺傷度は、曝露期間に大きく依存した。加えてβ-ラクタムは、グラム陰性菌に対し短い抗生物質有効濃度後効果(PAE)を有するか又はこれを有さない。従って、薬物レベルをMIC以上に十分な期間維持する投薬レジメンは、最良の有効性を示すと推定される。これは、いくつかの動物モデルにおいて確認されている。他方で、フルオロキノロンは、濃度-依存型の殺傷を示し、延長されたin vivo抗生物質有効濃度後効果を示す。投薬頻度よりもむしろ薬物量が、これらの薬物の有効性の重要な決定因子であることが推定される。これも、いくつかの動物モデルにおいて確認されている。より重要なことに、β-ラクタム及びフルオロキノロンの両方の有効性についての薬物動態/薬力学パラメータの大きさは、動物感染症モデルとヒト感染症において類似している。
下記試験は、ダルババンシンのin vivo薬力学特徴を特徴付けるためにデザインした。好中球減少症マウスの実験的大腿部感染症モデルにおけるダルババンシンのin vivo 有効性に関する投薬レジメンの影響を決定した。試験は、[1]どの薬物動態パラメータ(ピーク血清レベル、濃度-時間曲線下面積(AUC)、MICを超える血清レベルの期間)が、ダルババンシン有効性を最もよく推測するか、及び[2]有効性に必要なPK/PDパラメータの大きさは、ペニシリン-耐性肺炎球菌及びメチシリン-耐性黄色ブドウ球菌を含む一般的なグラム陽性菌間で類似しているかどうか；を調べるために実行した。最後に、大腿部及び肺炎の両感染症モデルに対し肺炎球菌及び黄色ブドウ球菌の両方に対するダルババンシン活性の感染部位の作用を決定した。
試験生物及びダルババンシンに対するMIC
試験生物及びそれらのダルババンシンに対するMICを、表29に列記した。MICは、標準NCCLS微量希釈法によりMHBで決定した。肺炎球菌によるMIC決定のために、MHBには、3％溶解ウマ血液を補充した。全てのMICは、少なくとも2つ組で行った。
Figure 2007534768
5種の肺炎球菌及び6種のブドウ球菌生物を使用した。肺炎球菌に対するダルババンシンMICは、0.004〜0.03mg/Lの範囲であった。黄色ブドウ球菌単離体に対するダルババンシンMICは、肺炎球菌に対するものよりも狭くかつより高く、0.06〜0.12mg/Lの範囲であった。
薬物動態
大腿部-感染した好中球減少症Swiss ICRマウスのダルババンシンの血漿薬物動態を、図44に示した。本試験及び全ての他の試験において好中球減少症は、シクロホスファミドの試験前4日間の150mg/kg、試験前1日の100mg/kg、及び感染開始後試験終了時まで48時間毎の100mg/kgの注射により作出した。好中球数は、試験期間中は100/mm3未満であり続けた。投与量2.5、5、10、20、40、及び80mg/kgを試験した。薬物は、容量0.2mlの腹腔内注射により投与した。ヘパリン処理したキャピラリーチューブに、投薬後0.5、1、2、4、6、24、48、72及び96時間後に眼窩後部からの吸引により、血液を3匹のマウス群から採取した。血漿を分離し、ダルババンシン血漿濃度を、試験生物として枯草菌を使用する微生物学的アッセイを用いて決定した。ピークレベルは、4〜6時間で認められた。ダルババンシンの半減期は、線形最小二乗回帰により決定した。AUCは、平均濃度から台形則により計算した。AUCは、24、36、48、72、96時間に概算し、無限に外挿した。24h AUCは、6で除算した6-日目AUCとして計算した。ダルババンシンは、線形の薬物動態を示した。半減期は、延長され、7.6〜13.1時間を変動した。
タンパク質結合
ブロス中、罹患したマウスの血清、ヒト血清、及びアルブミンの黄色ブドウ球菌の2種の菌株に関するダルババンシンMICを比較することにより、血清及び血清タンパク質への薬物結合の影響を調べた(表30)。ブロス中の両菌株のMICは、0.12mg/Lであった。95％マウス血清中のMIC(算術的)は、32mg/Lに上昇した。マウス血清限外濾過のMICは、わずかに0.5mg/Lに上昇し、これはMICの大きな差は、タンパク質結合によるものであることを示唆している。ヒト血清及びアルブミンによる同様試験は、わずかに8mg/Lの上昇を示した。ブロスとマウス血清間のMIC差異を基に、タンパク質結合度を、99.6％であると概算した。この結合度は、引き続きの薬力学分析において考察した。ヒト血清の結合度は、96％であると概算した。
Figure 2007534768
感染症モデル
マウス大腿部-感染症モデルを、様々な試験を通じ全ての生物について用いた。この良く確立されたモデルにおいて、試験生物の約106cfuが、療法開始前2時間に、一方又は両方の大腿部へ注射された(0.1ml中)。その後の試験での療法開始時の大腿部中の生物数は、107.15-7.59 cfu/大腿部を変動した。マウス肺-感染症モデルを、肺炎球菌又は黄色ブドウ球菌のいずれかの単独の単離体でのみ使用した。このモデルにおいて、マウスは、麻酔をかけたマウスの鼻孔を介した、50ulの(約108.5 cfu/ml)の鼻腔内接種により感染させた。接種後2時間で、治療を開始し、この時点でマウスは107.4-7.6 cfu/肺を有した。
In Vivo死滅時間
肺炎球菌及び黄色ブドウ球菌のin vivo菌株死滅に対するダルババンシン単回投与量の経時的作用を、図45及び46に示した。各点は、4大腿部の平均を表している。16倍の範囲の5種の投与量レベルを使用した。黄色ブドウ球菌に対する試験において使用した投与量レベルは、5〜80mg/kgであった。肺炎球菌に対する試験において使用した投与量レベルは、0.625〜10mg/kgであった。両種に関する殺傷度は、広範であった(試験した最高投与量の＞2log)。しかし肺炎球菌単離体の殺傷度及び速度は、ブドウ球菌のそれよりも大きかった。2種の最高投与量のダルババンシンによる試験は、黄色ブドウ球菌の死滅を生じた。肺炎球菌に対する試験で使用した5種の投与量レベルは、罹患したマウスの大腿部において、ほぼ4logの生物の負荷(burden)を減らした。
投薬レジメン試験
これらの試験において、投与量及び用量間隔が変動する反復投薬レジメンが、144時間(6日間)マウス群に容量0.2mlで腹腔内投与された。選択された投薬間隔は、12、24、36、及び72時間であった。5種の異なる投与量(2倍の増量)を使用した。黄色ブドウ球菌に対する試験は、30〜480mg/kg/6dの範囲の総投与量(mg/kg/6d)レベルを使用した。肺炎球菌に対する試験は、0.6125〜10mg/kg/6dの範囲の総投与量(mg/kg/6d)レベルを使用した。図47及び48は、好中球減少症マウスの大腿部における菌株肺炎球菌及び黄色ブドウ球菌に関する異なる投薬間隔でのダルババンシンの用量-反応曲線を示している。各点は、4個の大腿部の平均を示している。一般に投薬間隔の延長は、用量-反応曲線の左側へのわずかなシフトを生じ、このことは多い投与量が頻繁に投与されるレジメンがより有効であることを示している。
各用量-反応曲線は、最大作用モデルを用い、数学的にも特徴付けた。この方法は、Hill式を用い、非-線形回帰により最大作用(Emax)、Emaxの50％を得るために必要な投与量(P50)、及び投与量-反応相関の勾配を概算する。これらのパラメータから、本発明者らは、144時間の治療期間にわたり正味の静菌作用をもたらすのに必要な投与量、更には生物負荷の1及び2log低下をもたらすのに必要な投与量を算出した。各薬物生物組合せ及び様々な投薬レジメンに関する静的(静的)投与量並びに1及び2 log殺傷に関連した投与量を、表31に示した。
Figure 2007534768
肺炎球菌に対する試験における12時間から36時間への用量レジメンの増加は、3種の微生物学的エンドポイントに関連した投与量に認知可能な変化を生じなかった。しかし、72時間の投薬間隔での有効性は、より少ない薬物を必要とした。同様の関係が、黄色ブドウ球菌に対する試験においても認められた。黄色ブドウ球菌に対し1及び2 log殺傷を生じる投薬レジメンは、36及び72時間間隔であった。
有効性との薬力学パラメータ相関
本発明者らは、144時間の療法の終了時に大腿部の細菌数を試験した各用量レジメンに関して、[1]ピーク/MIC比、[2]AUC/MIC比、及び[3]血清レベルがMICを超える投薬間隔の割合に関連することにより、有効性と最良に相関したPK/PDパラメータを決定した。特に試験しなかったこれらの投与量に関するPK/PDパラメータ値は、最も近い試験した投与量の値から外挿した。log cfu/大腿部とピーク/MIC比の間の関係、24-時間AUC/MIC比、及び血清レベルがMICを超える時間の割合を、肺炎球菌について図49、及び黄色ブドウ球菌について図50に示した。各点は、4大腿部の平均を示している。両方の生物に関して、24-時間AUC/MIC及びピーク/MIC比に関して、強力な相関関係が認められた。しかし24h AUC/MIC比へのデータの回帰は、最も強力な相関関係を生じた。これらの図に示したデータも、異なるPK/PDパラメータを投与量の代わりに使用したこと以外は、前述のものと同じ最大投与量-反応モデルによって分析した。R2は、有効性と各PK/PDパラメータの間の関係について観察された決定係数を表す。決定係数(又はR2)は、各PK/PDパラメータに寄与することができる細菌数の変動の割合を表し、AUC/MIC及びCmax/MICの両方について高かった。
PK/PDパラメータの大きさ又は標的
静菌作用に必要なAUC/MICが複数の病原体について類似しているかどうかを決定するために、本発明者らは、肺炎球菌5菌株及び黄色ブドウ球菌6菌株に対しダルババンシンの24-及び72-時間投薬レジメンのin vivo活性を療法の6日後に試験した。これらの様々な菌株に対するダルババンシンの用量-反応曲線を、図51及び52に示した。図51及び52において、投与量は、試験の6日間にわたる遊離薬物の平均24h AUC/MIC比で表した。一般に、用量-反応曲線の形は、全ての菌株について類似していた。用量-反応曲線の位置は、生物のMICに関連していた。しかし肺炎球菌生物の用量-反応曲線は、左側にわずかにシフトした。この曲線のシフトは、肺炎球菌に対するほうがブドウ球菌よりも必要な薬物が少ないことを示唆している。静菌投与量、1 log及び2 log殺傷並びに関連した遊離薬物24-hr AUC/MIC及びCmax/MICを、表32に示した。細菌殺傷の程度は、ほとんどの菌株について比較的類似していた。全ての菌株は、6日間試験にわたりcfu の4 log10よりも大きい下落を示した。
Figure 2007534768
Figure 2007534768
24時間投薬を利用するダルババンシンレジメンに関して、肺炎球菌及び黄色ブドウ球菌に対する静菌作用に関連した遊離薬物の24h AUC/MIC値は、各々、17.6±6.9及び265±143であった。これらの用量-反応曲線は急勾配であり、1及び2 log殺傷に関連した24h AUC/MIC値は、認知可能に高くはなかった。用量-反応曲線により示唆されるように、24h AUC/MICを基に肺炎球菌に対する療法は、12〜23倍少ない薬物が必要である。黄色ブドウ球菌に関して、MBCは、MICよりも2〜4倍高かった。黄色ブドウ球菌のAUC/MBCを考慮する場合、これらの値は、肺炎球菌よりもわずかに4〜8倍高かった。
少ない投薬頻度(72時間毎)を使用するレジメンに関して、肺炎球菌及び黄色ブドウ球菌に対する静菌作用に関連した遊離薬物24h AUC/MIC値は、各々、7.2±4.5及び160±67であった。3種のin vivo微生物学的エンドポイント(静的投与量、1及び2 log殺傷)を実現するのに必要なPK/PDの大きさは、より間の開いた投薬レジメンについてより低かった。ダルババンシンが72時間毎に投与される場合、様々なエンドポイントに関連した24h AUC/MIC値は、薬物が25時間毎に投与される場合よりも1.3〜2.4倍低かった。
肺炎球菌のペニシリン-耐性及び黄色ブドウ球菌のメチシリン-耐性は、ダルババンシン有効性に必要な24h AUC/MICに影響を及ぼさなかった。
好中球のダルババンシン活性に対する影響
好中球のダルババンシンの活性に対する作用を決定するために、本発明者らは、肺炎球菌感染した正常マウス及び好中球減少症両マウスにおいて薬物の24-時間投薬の用量-反応曲線を比較した。引き続きの用量-反応曲線を、図53に示した。各点は、4大腿部の平均値を表す。静菌投与量、及び1及び2 log殺傷に関連した投与量を、Hill式を用い非-線形回帰から概算したパラメータから算出した。正常及び好中球減少症両マウスにおいてこれらのエンドポイントを実現するのに必要な投与量(mg/kg/6d)は、表33に示した。好中球の存在は、有効性に必要な投与量の1.7-〜2.1-倍の減少を生じた。しかしこれらの差異は、統計学的に有意ではなかった。
Figure 2007534768
ダルババンシン活性に対する感染部位の影響
ダルババンシン活性に対する感染部位の影響を決定するために、本発明者らは、大腿部及び肺感染症モデルの両方において薬物の24-時間投薬による用量-反応曲線を比較した(図54)。肺炎球菌及び黄色ブドウ球菌の両方を、これらのモデルにおいて使用した。肺炎球菌を利用するふたつのモデルにおける用量-反応曲線は、ほぼ同一であった。同様の黄色ブドウ球菌に対する試験において、肺モデルにおける用量-反応曲線は、左側にシフトし、これはこの部位の感染症に有効であるのにより少ない薬物が必要であることを示唆している。しかしブドウ球菌試験における信頼区間は、大きく、これらの差異に有意性はなかった。
結論
前記試験は、様々な病原体に対するダルババンシンのin vivo薬力学活性を特徴としている。これらは以下のようにまとめることができる。
・ダルババンシンは、大腿部及び肺感染の両様式において肺炎球菌及び黄色ブドウ球菌の両方に対しin vivo殺菌活性を生じた。
・ダルババンシンの有効性は、投与量-依存していた。
・投与量-依存したPK/PDパラメータ、24h AUC/MIC及びCmax/MICは、ダルババンシンin vivo活性と強力に相関した。24h AUC/MICパラメータによる投与量-反応データの回帰は、最高の決定係数を生じた。これらのモデルにおいて最も間のあいた投薬間隔での療法は、より有効であった。
・微生物学的作用に関連した24h AUC/MIC値は、試験した種内の菌株間で類似していた。肺炎球菌及び黄色ブドウ球菌のβ-ラクタム耐性は、ダルババンシンin vivo活性に影響を及ぼさなかった。
・肺炎球菌に対する有効性は、黄色ブドウ球菌に対するよりも低い24h AUC/MIC値が必要であった。このことは、MIC及びMBCの種間差により一部説明することができる。
・正味の静菌作用、1又は2 log殺傷をベースにした肺炎球菌に対する有効性は、これらの感染症モデルにおいて、6日間の療法にわたる遊離薬物AUC/MICほぼ100が必要であった。同様にベースにした黄色ブドウ球菌に対する有効性は、ほぼ1000の6日間にわたる遊離薬物AUC/MICが必要であった。
・好中球減少症は、in vivoダルババンシン活性に対し最低の影響を有した。
実施例10. HPLC-MS/MSによる血漿中ダルババンシンの定量決定
以下に説明したように、HPLC-MS/MS法が、血漿中のダルババンシンの定量測定のために開発された。
ダルババンシン較正及び品質管理標準の調製
1000μg/ml溶液を調製するために、ダルババンシンを脱イオン水に溶解し、ダルババンシンのストック液を調製し、引き続き脱イオン水中に連続希釈し、500、50及び10μg/ml溶液を調製した。
較正標準100、60、及び40μg/mlダルババンシン濃度を、ヒト血漿を前述のように調製した適当な容量の1000μg/mlダルババンシンストック液でスパイクすることにより調製した。較正標準20及び10μg/ml濃度は、ヒト血漿を適当な容量の500μg/mlダルババンシンストック液でスパイクすることにより調製し、並びに較正標準0.5μg/mlは、ヒト血漿を適当な容量の10μg/mlダルババンシンストック液でスパイクすることにより調製した。
90及び30μg/mlダルババンシンの品質管理標準は、ヒト血漿を前述のように調製した適当な容量の1000μg/mlダルババンシンストック液でスパイクすることにより調製した。品質管理標準1.5μg/mlは、ヒト血漿を適当な容量の50μg/mlダルババンシンストック液でスパイクすることにより調製した。
内部標準作業液の調製
A-40926のジエチル-アミノ-プロピル-アミノ誘導体である内部標準BI-K0098の30μg/mlの作業液を、以下のように調製した。約10mgのBI-K0098を、約10mlの移動相A(80％1OmMギ酸アンモニウム/ギ酸、pH3(v/v)、10％アセトニトリル(v/v)、及び10％2-プロパノール(v/v))に溶解し、1000μg/ml内部標準ストック液を調製した。次にこのストック液(300μl)を移動相Aにより容量10mlに希釈し、30μg/ml内部標準溶液を作製した。
分析用試料の調製
血漿中ダルババンシン濃度の定量測定のための試料は、以下のように調製した。先に説明したように調製した較正又は品質管理標準50μlに、内部標準作業標準液100μlを添加し混合した。この混合物を、5分間室温で平衡とし、その後アセトニトリル250μlを添加した。次にこの混合物を、10秒間激しく混合し、引き続きALC微量遠心機4214上で、約10,000rpm で1分間遠心した。上清を、透明なチューブへ移し、Savant Speed-Vacシステムにおいて約40℃で蒸発乾固した。その後試料は、150μlの移動相A中に再懸濁した。
分析法
先に説明したように分析のために調製した50μl試料を、Phenomenex Jupiter C18カラム(50x2mm、C18 5μm300A)に注入し、流量0.3ml/分で勾配HPLC条件下で分析した。勾配条件は以下であった：最初、80％移動相A/20％移動相B(20％10mMギ酸アンモニウム/ギ酸、pH3(v/v)、40％アセトニトリル(v/v)、40％2-プロパノール(v/v))；1分間、20％移動相A/80％移動相B；2分間、20％移動相A/80％移動相B；2.5分間、最初の条件に戻す。
HPLCシステムは、PE SCIEX API-2000トリプル四重極質量分析計に連結し、陽性イオン化モードのTurboIonSpray操作と組合せた。イオン給源からスプレーを作製するために、空気を使用した。プローブ温度は、500℃に設定し、窒素をカーテンガスとして使用した。衝突ガスとして窒素を使用する、多反応モニタリング(MRM)を利用した。被検体は、イオン輸送後のモニタリングにより検出した：ダルババンシンについて909.3Da →1429.3 Da、及び内部標準(BI-K0098)について923.3 Da→1457.3 Da。質量分析の夾雑を避けるために、クロマトグラフィー試行開始後1分及び2.5分で、ポスト-カラムフロー分岐(diversion)を行った。
データ分析の獲得には、Software Sample ccontrol 1.4を用い、並びにクロマトグラフィーピークの積分及び統計データの評価には、Software MacQuan 1.6を使用した。
較正曲線
アッセイ法の直線性は、較正曲線を作製する較正標準のアッセイにより評価した。血漿試料中のダルババンシン濃度は、ダルババンシンと内部標準の間のピーク面積比の計算により決定した。
0.5〜100μgダルババンシン/ヒト血漿mlの分析範囲にわたるダルババンシン濃度の較正曲線は、式：y＝A＋Bx(重み付けた1/x)(式中、Aは曲線の切片を表し、Bは、曲線の勾配を表し、xは、較正標準のダルババンシン濃度(μg/ml)を表し、及びyは、ダルババンシンの内部標準に対するピーク面積比を表す)により構成した。3個の個別の較正曲線を構成した。結果は、ダルババンシン/内部標準面積比及びダルババンシン濃度は、分析範囲にわたり直線的に変動したことを示した。定量下限(LLOQ)は、ダルババンシン0.5μg/ヒト血漿mlであった。較正曲線の勾配は再現性があり、及びそれらの相関係数は0.9995よりも大きかった。
血漿中ダルババンシンの安定性
血漿試料中のダルババンシンの安定性を、前述のように調製した、ヒト血漿試料の3つ組の品質管理標準の、ふたつの異なる濃度1.5及び90μg/mlでの分析により試験した。検出可能なダルババンシン濃度は、凍結-解凍処置の3サイクルの後安定していた。処理した試料中のダルババンシン濃度は、室温で24時間後安定していた。ゼロ時試料に関するダルババンシン濃度の低下は、認められなかった。
実施例11. ダルババンシン質量分析
溶液中のダルババンシン多量体の性質を調べ、ダルババンシン多量体のダルババンシン単量体に対する集団比に影響を及ぼす条件を、エレクトロスプレーイオン化質量分析(ESI-MS)により決定した。
実験は、Applied Biosystem API HI＋TurboIonSpray源、Triple Quadrupoleアナライザー、陽性イオンモードのオペレーションを備えた質量分析装置を用いて行った。最適化された条件を、下記表34に示す。
Figure 2007534768
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溶液中のダルババンシン
装置パラメータを、8:2水:イソプロパノール溶液中に溶解したダルババンシン0.1mg/mlを含有する、ダルババンシン溶液に調整した。溶液中のダルババンシンスペクトルを、溶液の直接注入後、500〜2000amuの範囲で得た。図7に示したように、得られたスペクトルは、ダルババンシン多量体の存在を示している。限定的でない例として、スペクトルの1痕跡が、B0のホモ多量体に寄与し、これは(2nM＋y(+3))イオン種として存在し、ここでnは、ホモ多量体の多重度を示す正の整数であり、例えば多量体がホモ二量体である場合n＝1であり、多量体がホモ四量体である場合n＝2であり、Mは、単量体の質量を表し、y＝n及び+3は、正の3価のイオン帯電を示す。例えばn＝1、y＝1及びM＝B0の質量である場合、B0のホモ二量体が提供される。このホモ二量体種は、質量分析において、(2M +3)イオン痕跡に割当てられる。
ダルババンシン濃度のダルババンシン多量体対単量体の集団比に対する影響
ダルババンシン濃度の多量体対単量体の集団比に対する影響を、先に説明された条件を用いる質量分析により評価した。スペクトルは、ダルババンシン溶液の濃度20、40、60、及び80μg/mLでの直接注入により得た。大きいピークの強度はダルババンシン濃度の関数として報告され、ダルババンシン多量体対単量体の集団比は、図8に示されたように決定した。
このデータは、ダルババンシン多量体対ダルババンシン単量体の集団比は、濃度の増加と共に増加することを示している。これは、個体へ投与される高薬物負荷能を説明することを補助することができる。単量体のデポとしての多量体の役割は、沈殿を形成し及び個体へ投与され得る濃度を増大する高濃度試料の傾向を軽減する。多量体の存在は、個体へのダルババンシン投与量の迅速な投与を可能にもする。
ダルババンシン多量体対単量体の集団比の決定法の非限定的例は、例えば、図7のイオンA及びBのピーク強度間の比の決定により提供される。ピークA強度のピークB強度による除算は、ダルババンシン多量体対単量体の集団比のひとつの測定値を提供する。
pHのダルババンシン多量体対単量体の集団比に対する影響
溶液pHの多量体対単量体の集団比に対する影響を、先に説明された装置条件で、以下の溶液pH値で評価した：2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、及び5.5。ダルババンシン多量体対単量体の集団比を、各pH値について決定し、図9のように、pHに対しプロットした。ダルババンシン多量体対単量体の集団比は、pHの上昇と共に増加することが決定された。
理論に限定されるものではないが、第一のダルババンシン単量体のカルボキシラート基などのイオン基は、第二のダルババンシン単量体上の第3級窒素基のような反対に帯電したイオンとイオン性相互作用することにより、ダルババンシン多量体の安定性を補助すると考えられる。このようなイオン相互作用は、pHの影響を受け得る。より高いpHでダルババンシンの多量体としての存在の増加傾向は、多量体安定化においてイオン性相互作用が重要であることの指標であると考えられる。特に、ダルババンシン多量体は、おそらくある種の官能基、例えばカルボキシラート基は低pH値でプロトン化されるので、多量体安定性に寄与するイオン相互作用の破壊のために、低いpHで不安定化されると考えられる。
溶液イオン強度のダルババンシン多量体対単量体の集団比に対する影響
溶液のイオン強度のダルババンシン多量体対単量体の集団比に対する影響を、質量分析により決定した。質量スペクトルは、Ultramark 1621,、カフェイン及びMRFA(L-メチオニル-アルギニル-フェニルアラニル-アルギニン)を使用し、エレクトロスプレーモードで予め調整しかつ較正したFinnigan LCQDecaイオントラップ装置上のエレクトロスプレー陽性モードから得た。全ての質量スペクトルは、表35に列記した条件を用いて記録した。調べた試料パラメータを、表36に列記している。
Figure 2007534768
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試料水溶液を、Harwardシリンジポンプを介して、10μL/分で注入し、及び図10〜12に示された質量スペクトルを得た。
得られたスペクトルは、ダルババンシン多量体対単量体の集団比は、イオン強度の影響を受けることを示している。緩衝液濃度の上昇は、多量体質量痕跡の減少、ここではダルババンシン多量体対単量体の集団比の減少に対応していた。
前述のように、ダルババンシン多量体安定性にイオン相互作用は重要であると考えられる。イオン強度の増加は、多量体質量痕跡の減少に相関するという事実は、多量体安定性におけるイオン相互作用の役割を立証している。しかし、多量体質量痕跡は更に高イオン強度であるので、別の第二の相互作用が多量体安定化に関与している。
理論に結びつけられるものではないが、ダルババンシン多量体種の安定化において疎水的相互作用は重要であると考えられる。これらの非-共有ダルババンシン多量体の安定化が単にイオン相互作用に起因する場合、イオン強度の増加は、多量体質量種の全体の喪失を生じることが予想される。すなわち、溶液のイオン強度が上昇すると、多量体を安定化するイオン相互作用は、溶液中のイオンの増加した集団により破壊され、これにより単量体がより容易に会合することが予想される。結果的に、溶液イオン強度は、多量体の単量体成分への解離を駆動し、生じる質量スペクトルは、いずれの多量体質量痕跡も含まないであろう。しかし、例え高イオン強度(例えば100mMギ酸アンモニウム)であっても、ダルババンシン多量体の存在は、質量分析において検出される。従ってダルババンシン多量体は、少なくとも一部疎水的相互作用により安定化されるように見える。
構造が類似した化合物
ダルババンシンの改善された有効性は、少なくとも一部はその多量体形成能によると考えられる。この独自の特性は、例え非常に構造的に類似した化合物であっても共有されないと考えられる。化学構造がダルババンシンに類似した化合物を、多量体を形成するその能力について、質量分析により調べた。質量スペクトルは、Ultramark 1621,、カフェイン及びMRFA(L-メチオニル-アルギニル-フェニルアラニル-アルギニン)を使用し、エレクトロスプレーモードで予め調整しかつ較正したFinnigan LCQDecaイオントラップ装置上のエレクトロスプレー陽性モードから得た。全ての質量スペクトルは、表37に列記した条件を用いて記録した。調べた試料パラメータを、表38に列記している。試料水溶液を、Harwardシリンジポンプを介して、10μL/分で注入し、及び図13〜14に示された質量スペクトルを得た。
Figure 2007534768
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同様の糖ペプチド抗生物質(テイコプラニン)は、様々な濃度で溶液中に多量体性複合体を示さなかった。このことは、構造的に類似した化合物は、溶液中で多量体種を形成することに失敗すること、及びこの現象は、ダルババンシンの活性において重要な役割を果たしていることの指摘を裏付けている。
実施例12. タンパク質-ダルババンシン複合体のマトリックス-支援レーザー脱離/イオン化飛行時間型(MALDI-TOF)質量分析
10μl HSA、0.150mMを、10μlダルババンシン溶液(0.075mM、0.15mM、0.3mM及び1.5mM)と混合し、37℃で60分間インキュベーションした。この試料を、乾燥液滴法を用い、分析のために調製した。スペクトルは、標準ウシ血清アルブミンを用いて予め調整しかつ較正したBRUKER FLEX III, tof質量分析器上で得、200レーザーショットにより作製されたスペクトルを獲得しかつ平均化した。マトリックス：アセトニトリル/H2O(50:50)中に飽和されたDHB-9(2,5-ジヒドロキシ-安息香酸)を9部、アセトニトリル/H2O(50:50)中に飽和されたシナピン酸を1部。試料溶液0.5μl及びマトリックス溶液0.5μlを混合し、レーザー標的上に配置した。
ダルババンシンは、単量体として、タンパク質へ結合する(1 HSA＋1ダルババンシン)。非常に高いダルババンシン対タンパク質比(1:2、1:10)では、タンパク質1分子につきダルババンシン2分子を含有する複合体の存在が認められる。
実施例13. ダルババンシンのN,N'-ジアセチル-Lys-D-Ala-D-AIaへのヒト血清アルブミン存在下での結合の等温滴定熱量分析
ダルババンシンの細胞壁標的ペプチドアナログであるN,N'-ジアセチル-Lys-D-Ala-D-Alaへのダルババンシンの結合を、HSAの存在下、25℃で濃度範囲にわたり(最大600μM)、等温滴定熱量計(ITC)により調べ、一部37℃での測定を追加した。HSAは、ダルババンシンの溶解度を増加し、トリ-ペプチドリガンドへのその結合親和性を低下した。結果を、バンコマイシンのそれと比較した。観察された作用は、比較的低HSA濃度でプラトーに達し、これはリガンドの溶液中遊離したダルババンシン及び(より弱く)ダルババンシン-HSA複合体への結合を可能にする非-競合的結合モデルと一致した。
予備的実験は、血清タンパク質の非存在下で、ダルババンシン及びバンコマイシンは同様の結合プロファイルを示すことを明らかにした：両方とも、N,N'-ジアセチル-Lys-D-Ala-D-Alaへの発熱結合を生じるが、ジペプチド(D-Ala-D-Ala)又はLys-D-Ala-D-乳酸への結合の証拠はなかった。ダルババンシン/トリ-ペプチド相互作用に関して、データは、同じ条件下のバンコマイシン同様、温度に応じて、Kdiss＝1〜10μMの結合と一致した。HSAの存在下で、ダルババンシンの溶解度は有意に増加し、及びトリ-ペプチドへの結合親和性は、抗生物質に関するHSAの競合的又は非-競合的結合と一致した様式で低下した。本実施例において説明された実験は、以下の目的でデザインされた：(a)ダルババンシン/トリ-ペプチド測定値を異なる温度(25及び37℃)及び異なるHSA濃度で比較すること；(b)測定された数値と比較するための結合モデルを構築するためにこれらのデータを使用すること。
ダルババンシンは、Biosearch Italiaから供給された。他の試薬は、Sigmaから得た：バンコマイシン塩酸塩(Sigma V-2002, fw 1485.7)、N,N'-ジアセチル-Lys-D-Ala-D-Ala(Sigma D-9904, fw 372.4)、ヒトアルブミン(HSA；Sigma A-3782； mw 69,366)。
抗生物質及びペプチドは、HSA含有する水性緩衝液(20mMリン酸Na、150mM NaCl、pH7.4)に溶解し、実験直前に穏やかに攪拌した。ペプチド濃度は、質量について決定した。ダルババンシン濃度は、質量について又はモル消光率ε＝12430(ダルババンシン、A280 1%＝68.42)、ε280＝6690(バンコマイシン)を使用する、UV吸光度のいずれかにより決定した。HSA濃度は、UV吸光度で決定した(HSA、ε280＝37,700；A280 1%＝5.44)。スペクトルは、1cm経路長の石英キュベットで、Shimadzu UV-160A又はUV-1601分光光度計を用い、室温で記録し、吸光度が0.1〜1Aの範囲となるよう、必要ならば、試料は緩衝液で定量的に希釈した。
等温滴定熱量測定を、Microcal VP-ITC装置を、標準の操作手法で25℃及び37℃で使用し行った。例えば、Wisemanら、Anal. Biochem. (1989) 179, 131-137；Cooperら、Philos. Trans. R. Soc. Lond. Ser. A-Math. Phys. Eng. Sci. (1993) 345, 23-35；Cooper, A、Isothermal Titration Microcalorimetry、C. Jones, B. Mulloy及びA. H. Thomas(編集)、Microscopy, Optical Spectroscopy, and Macroscopic Techniques、Humana Press, Totowa, NJ, (1994) p 137-150；Cooper, A.、Microcalorimetry of Protein- protein Interactions、J. E. Ladbury及びB. Z. Chowdhry(編集)；Biocalorimetry: The Applications of Calorimetry in the Biological Sciences. Wiley, (1998) p 103-111；並びに、Cooper, A.、Curr. Opin. Chem. Biol. (1999) 3, 557-563参照のこと。熱量測定用セル中での泡の形成を防止するために、試料は負荷前に脱気した。各実験は典型的には、抗生物質溶液(〜20〜100μM)を含有する熱量計セル(容量〜1.4ml)への、ペプチド溶液(〜1mM)の25x10μl注入を含んだ。対照実験は、ペプチド希釈の発熱を決定するために、同一条件下での、リガンドの緩衝液への注入に関連し、これらの値は、分析前の生結合データの相関に使用した。ダルババンシン/トリ-ペプチド結合実験は、各温度で数回繰返した。ITC結合データは、標準Microcal ORIGIN(商標)ソフトウェアを用いて解析し、みかけの結合部位数(N)、結合親和性(Kass ＝1/Kdiss)及び結合エンタルピー(ΔH)を決定した。
Figure 2007534768
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HSA存在下でのトリ-ペプチドのダルババンシンへの結合に関するITC実験は、10、25及び37℃での、各々、1.4、3.1及び8.4μMの領域での、結合親和性、平均Kdissに関するデータと一致した(表39)。結合は発熱性である。ここでの濃度計算は、これらの条件下で、Nは0.5に近いことを示唆している。これは、これらの条件下での、ダルババンシン二量体1個当たりのトリ-ペプチド1分子の結合に一致している。これらの結合親和性及び結合エンタルピーは、同じ条件下でバンコマイシンについて得られたものと同等である(表39、及びD. McPhail, A. Cooper, J Chem. Soc. Faraday Trans. (1997) 93, 2283-2289)。バンコマイシンは、高濃度でリガンド-誘導した二量体化されることに注意。
ダルババンシン混合物へのHSAの添加は、トリ-ペプチドとダルババンシンの間のみかけの結合親和性を低下するが、この結合は明らかにより発熱性である(表39)。25℃でのHSA濃度依存性は、図15に示されている。最大35μM HSAまでのみかけのKdissの最初の上昇(弱い)後、より高いHSA濃度で比較的一定に維持され、生理的レベル(600μM)に近づく。高濃度HSAのプラトーレベル(Kdiss〜35μM)は、HSAの非存在下での、ほぼ10-12xより弱い結合親和性に対応している。同様の低下が、37℃で認められる。
HSA作用は、トリ-ペプチドとの相互作用によるものではなかった。HSA存在下でのバンコマイシンのトリ-ペプチドへの結合に関する対照ITC実験は、HSA非存在下で認められるものと同等の結果を生じた(表39参照)。このことは、ペプチドも密接に関連した抗生物質であるバンコマイシンも、溶液中でHSAと相互作用しないことを指摘している。これは、ダルババンシン/トリ-ペプチド相互作用に対するHSAの作用は、HSAとダルババンシンの相互作用に起因するはずであるということに従う。
理論に結びつけることは欲さないが、前記データは、非競合的結合モデルと一致した。このモデルは、トリ-ペプチドリガンド(L)は、ダルババンシン(D)に、遊離状態及び(おそらく異なる親和性で)ダルババンシン-HSA複合体の「両方」で、結合することを仮定している。
Figure 2007534768
みかけの(観察された)リガンド結合解離定数(非-競合的)：
Figure 2007534768
これは、観察されたデータとよく一致する、遊離のHSA濃度に対するKapp.L の双曲線的依存性を示している(図15)。高[HSA]で、これは漸近的(プラトー)値に達する。
Figure 2007534768
このことは、トリ-ペプチドの結合親和性は、ダルババンシンがHSAに結合した場合、約35μMであるのに対し、遊離のダルババンシンについては3μMであることを示唆している(25℃、図)。
更なる機構は、ダルババンシンは、ペプチド又はタンパク質とのその相互作用において、単量体又は二量体として作用することに関して示唆されている。ダルババンシンのバンコマイシン(これは低濃度で曖昧でない1:1結合を示す)の直接比較は、ダルババンシンの低い分子比(低いN)で結合が完全であることを示している(図16)。これは、2:1ダルババンシン:ペプチド複合体と一致する。
しかしHSAの存在下で、みかけのN値は増加し(表39)、1:1複合体化とより一致する。理論に結びつけることは欲さないが、図17に示されたモデルは、ダルババンシン単量体及び二量体のトリ-ペプチドリガンド及びHSAとの可能性のある相互作用を示し、これはこれらの知見と一致している。図17Aは、ダルババンシンは、溶液中で単量体-二量体平衡状態(主に二量体として)であるが、HSA上のふたつの個別の部位には単量体として結合することを示している。これは、血清タンパク質のダルババンシンへの結合について、ITCにより観察されたN＝0.5値に一致する(実施例3)。図17Bは、溶液中のダルババンシン二量体への、及び(より弱い)HSAに結合したダルババンシン単量体への、リガンド結合を示している。これは、可変性のみかけの化学量論的な、トリ-ペプチド及びHSAの両方へのダルババンシンの非-競合的結合と一致する。
まとめると、本実施例は、HSAは、非-競合的機構と一致する様式で、ダルババンシンのトリ-ペプチドリガンドへの結合親和性を低下すること、並びにHSAへ結合したダルババンシンは、低下した親和性にもかかわらず、トリ-ペプチドリガンドへ結合する能力を依然保持することを示している。これらの結果は、ダルババンシンが、単量体-多量体平衡状態であり、溶液中で主に多量体であり、ペプチドリガンドに関して多量体の強力な親和性を伴うモデルとも一致する。遊離及び血清アルブミン結合の両方のダルババンシン単量体は、低下した親和性を伴うペプチドに結合することもできる。
実施例13. A-40926及びダルババンシンの調製
A-40926の調製
発酵により生成された天然の糖ペプチドであるA-40926は、ダルババンシン生成の出発物質であった。これは、Nonomuria種ATCC 39727により、A-40926及びそのアセチル誘導体の混合物として生成された(米国特許第4,935,238号明細書、及びB. Golstainら、Antimicrobial Agent and Chemotherapy, Dec. 1987, p.1961 -1966参照)。アセチル誘導体は、最初に脱アセチル化し、A-40926とした。脱アセチル化後、A-40926は、以下に説明するようなポリアミド上でのカラムクロマトグラフィーにより精製された。以下の説明は、現在の生成法の代表である。ここで報告された量は、産業調製で通常作業される量の約1/4である。
A-40926の脱アシル化
合計約1g/LのA-40926及びそのアセチル誘導体が入った発酵ブロス10m3(23℃)を、攪拌しながら、pH11.4に、NaOH 30％により調節した。攪拌を6時間継続し、その後温度を15℃に低下し、ブロスをマイクロ濾過した(Koch Protosep IV マイクロ濾過、0.12m2セラミックメンブレン0.1μ)。マイクロ濾過時に、プロセスの最後に、20〜25m3の透過物及び4.5〜5m3の保持物質(出発値の1/2)を得るために、この保持物質へ水を連続して添加した。
A-40926を保持した透過物は、HPLCにより分析した。脱アセチル化の完了時に、透過物溶液のpHを、30％硫酸でpH7に調節した(20℃で貯蔵)。本実施例において、A-40926 6.62kgを含有する(268mg/L)濾過したブロス25m3を得た。脱アセチル化の収率は、66.2％であった。マイクロ濾過プロセスが本プロセスにおいて使用されたものよりもより長時間及びより高い抽出容量で実行される場合は、収率は最大90％まで増大することができる。
A-40926のポリアミドカラム上の精製
抽出後、濾過したブロス中に含まれたA-40926を、以下に説明したように、ポリアミドカラム上で精製した。この説明で報告された量は、産業調製における通常の作業量の約1/10であり、現在の生成法の代表である。
500Lのポリアミド樹脂SC6(Macherey Nagelより入手)を、脱イオン水中に懸濁し、カラムへ充填した。その後、カラムを少なくとも2BV(床容量)の、炭酸ナトリウム4kgを水800L中に溶解し、得られた溶液のpHを酢酸調節することにより調製した緩衝液で溶出することにより、樹脂をpH6〜6.5に順化した。
A-40926濾過したブロス(9000L；アッセイ0.275mg/L；A-40926 2475g；pH6±0.2；温度10±3℃)を、樹脂1Lにつき活性約5gで、カラムへ負荷した(活性/樹脂比5〜8g/Lを通常使用した)。このカラムを、以下の溶液で洗浄した：炭酸ナトリウム7.5kgを脱イオン水1500Lに溶解し、酢酸によりpHを調節することにより調製したpH6の溶液3BV(1500L)；炭酸ナトリウム10kgを脱イオン水2000Lに溶解し、酢酸によりpHを調節することにより調製したpH8の溶液4BV(2000L)；炭酸ナトリウム4kgを脱イオン水750Lに溶解し、酢酸によりpHを調節することにより調製したpH9の溶液1.5BV(750L)。
A-40926は、炭酸ナトリウム10kgを脱イオン水2000Lに溶解し、酢酸によりpHを調節することにより調製したpH10の緩衝液4BV(2000L)による溶出により、カラムから回収した。精製されたA-40926を含有する画分(A-40926濃度は、0.5g/Lよりも大きい、及び主成分(B0+B1)のHPLC面積は80％よりも大きい)を収集し、1N HClで中和し、HPLCで分析した。最終の透明な溶液約2000Lを得た。
精製に使用した樹脂は、1.5BVのイソプロパノール/5％NaOHの1:1混合物で再生し、その後5BVの脱イオン水で洗浄した。
A-40926濃縮
カラムから流出する溶液に、数回希釈/濃縮ステップを施し、溶液中の無機塩のほとんどを消失した。溶液を、カットオフ値250Dのメンブレンを使用するナノ濾過により、80Lに濃縮し、脱イオン水80Lに希釈し、ナノ濾過により出発容量(80L)に再濃縮した。この操作は、少なくとも5回繰り返した。最終溶液のpH(80L、pH7.5)を、23％HClによりpH6.3に調節した。その後この溶液を、アセトン80Lに希釈し、そのpHを、23％HClによりpH2.6に調節した。
脱色
チャコールPA 200C(〜0.3g/g A-40926)680gを、先のステップで得た溶液(160L)に、攪拌しながら添加した。攪拌を室温で少なくとも30分間継続し、その後約0.5〜0.6kgのフィルターエイド(DIF-BO)を添加した。この混合物を、フィルターカートリッジを通して濾過した。得られた透明な溶液を、アセトンを10％以下に減少するために、真空下(45℃)で濃縮した。最終容量は約100Lであった。そのpHをNaOH水溶液で6.7に調節し、この濃縮ステップを、通常のナノフィルターを用い、A-40926濃度が約100g/Lとなるまで継続した。濃縮された溶液20Lを得た(A-40926 1884g、94.2g/L)。
沈殿及び乾燥
先の溶液を、攪拌しながらアセトン20Lにより希釈し、そのpHを、10％HClにより5.1に調節した。この溶液に、追加のアセトン5容量(100L)を添加し、A-40926沈殿を完了した。水分含量がこの時点で＜15％である場合、追加のアセトンを添加した。2時間後、懸濁液を遠心し、固形物を新鮮なアセトン3x10Lで洗浄した。母液を分析し、生成物が存在しないことを確認した後廃棄した。
固形A-40926を、残留アセトンが2％以下及び水が10％未満になるまで、静的乾燥機中で、減圧下30〜35℃で乾燥した。次に生成物を50メッシュ篩を通し篩にかけ、精製されたA-40926 2.08kg(HPLCアッセイ81.4％；水6.2％；硫酸塩灰分4.8％)を得た。この収率は、カラムに負荷された活性物から出発して、68.4％であった。
ダルババンシンの合成
ダルババンシン(BI-397)を、天然の糖ペプチドA-40926から、Malabarba及びDonadioの論文(Drugs of the Future, 24(8): 839-846 (1999))に説明されたような、3ステップ合成により調製した。具体的にはA-40926は、最初にエステル化ステップが施されMAを生成し、これは次にアミド化ステップが施され、MA-A-1を生成する。次の最終の加水分解ステップは、MA-A-1をダルババンシンへ転換する。
エステル化ステップ(ステップ1)
下記の説明は、現在使用されている方法の代表である。
H 2 SO 4 96％/MeOH(溶液A)の調製
機械式攪拌機及び温度計を装着した15Lの丸底フラスコにおいて、96％H2SO4 2.28L (A-40926粉末1kg当たり96％H2SO4〜300mL)を、MeOH 7.9Lへ滴下した。外側の氷浴を用い、温度を0〜5℃に維持した。
反応手法
出発物質A-40926(7.6kg；バッチ019、アッセイ85.09％；活性物6.46kg；3.73mol)を、140Lのガラスライニング(glass-lined)反応器中のMeOH(46L)中に懸濁し、得られた懸濁液を0℃±2℃に冷却した。この温度で、懸濁液を、先に調製した溶液A(H2SO4/MeOH)で処理した。得られた溶液を、0℃で22〜26時間攪拌し、その間反応液(反応アリコートは、1:1アセトニトリル/水混合液で100倍希釈した)を、2時間毎にHPLC分析でモニタリングした。HPLC面積％として残留A-40926が5％未満であり、ジエステルが10％を超えない場合に、エステル化は完了したと見なした。
エステル(MA)単離
この反応が完了した時点で、混合物を-5℃(±2℃)に冷却し、同容量の冷水(54L)で希釈し、温度を5℃以下に維持した。生成物(MA)を、溶液のpHを5.5(±0.2)に調節し、トリエチルアミン(TEA)10.2Lをゆっくり添加することにより沈殿させた。攪拌を、0〜2℃で更に1時間継続し、その後得られた固形物を遠心し、水(10L/kg A-40926)で、最後にMeOH(3L MeOH/kg 出発A-40926)で洗浄し、その後10〜15℃で冷却した。MAから硫酸塩を除去するためには、主に水による洗浄を行った。
母液及び洗浄液は個別に分析し、活性物が1〜2％未満含まれる場合は廃棄した。生成物を、真空(50mmHg)中35〜40℃(外部温度)で、残留水が10％未満になるまで乾燥した。MA 7.6kg(活性物5.63kg、3.23mol)を、褐色がかった粉末として得た。
この分析は、以下のHPLC面積％の値を示した：MA 89.8、A-40926 3.2、ジエステル誘導体5.9。HPLCアッセイは、74.2％、活性5.637kg；3.23mol；収率＝86.5％であった。この物質は、更に精製することなく、次ステップで使用した。
アミド化ステップ(ステップ2)
以下の説明は、現在の生成法の代表である。
DMSO/HCl混合液(溶液B)の調製
DMSO(1.6L)を、機械式攪拌機及び温度計を装着した10Lの丸底フラスコに入れ、氷浴で10℃以下に冷却した。その後HCl 37％(1L)を、攪拌しながらゆっくり添加し、混合液の温度を25℃以下に維持した。
アミド化手法(MA-A-1の生成)
出発物質MA 5.95kg(アッセイ76.3％、KF 8.9％；2.68mol)を、1:1 DMSO/MeOH混合液19.2L(〜1.6L DMSO及び1.6L MeOH/kg MA粉末)中に、室温で、攪拌しながら溶解した。1時間攪拌した後、3-(ジメチルアミノ)-プロピルアミン709mL (DMEPA、MW 102.1；密度＝0.812g/mL；5.63mol；1.96mol/mol出発MA)及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物325g(HOBT H2O；MW 153.1；2.04mol；0.71mol/mol出発MA)を、反応混合物へ添加した。攪拌を、完全な溶液が得られるまで継続し、その後溶液B(DMSO/HCl)約2.0Lをゆっくり添加することにより、混合物をpH3〜3.1に調節した(希釈後、水で10倍希釈した反応液のアリコートを測定)。
ジシクロヘキシルカルボジアミド(DCC)溶液を、DCC 1.03kg(4.99mol；MW 206.3；1.74mol/mol MA)を1:1 DMSO/MeOH混合液4.1L中に希釈することにより調製し、これを、攪拌している反応混合物へ10分で添加した。攪拌を5時間継続し、その後残渣MAを5％以下にするために、追加の固形物DCC 51.5g(0.25mol)を、反応混合物へ添加し、イソ尿素のレベルを4〜5％未満に維持した。イソ尿素は、ダルババンシンの過剰なDCCとの更なる反応により生成された副産物の群である。
典型的には更に2時間後(全部で7時間)に、反応が完了した。最後に、混合物を水(60L)で希釈し、DMSO濃度を15％(v/v)に低下し、1N HCl(0.85L)でpH2.3に調節し、あらゆる残留DCCを破壊した。
MA-A-1のダルババンシンへの加水分解(ステップ3)
30分後、混合物を、15％NaOH(8L)でpH12.0〜12.1に調節した。攪拌を4時間継続し、少量の15％NaOHを添加し、混合物をこのpHで維持した。この時点以降、残留MA-A-1は、HPLC面積％として0.2％未満であった。
その後混合物を、1N HCl(19L)によりpH3.0の酸性とし、懸濁液を濾過し、生成されたジシクロヘキシル尿素を除去した。フィルター上の固形ケーキを、脱イオン水(2x20L)で洗浄した。洗浄液及び濾液を一緒に集め、透明な溶液を得、これをHPLCにより分析した。ダルババンシン21.74g/Lを含有する溶液152.8Lを得た(総活性物3322g；1.828mol、収率＝68.2％)。
ダルババンシン精製
以下の説明は、現在の生成法の代表である。
加水分解ステップから得られダルババンシン活性物3322gを含有する溶液152.8Lを、2部分に分け、400Lのポリアミドを含む同一クロマトグラフィーカラムにおいて、各々個別に精製した。これらのふたつの精製試行において、活性物/樹脂比は、各々、4.3及び4.0g/Lであった。
ポリアミドカラム調製
ポリアミド樹脂400Lを含むガラスライニングカラム(内径＝40cm、高さ＝320cm)を、樹脂再生法(下記参照)に従い清浄化し、4LのAcOH(pH＝3.2)で酸性とした脱イオン水2BV(800L)により順化した。
第一部分の精製
DMSO含量を5％(v/v)以下に低下するために、出発溶液第一部分の76.4Lを、H2O(56L)で希釈し、1N HCl(3.4L)でpH2.78へ酸性とした。その後この溶液を、カラムに流量150L/時間で負荷した。負荷後、樹脂を以下の溶液で洗浄した：4BV(1600L)のAcOH(8L)で酸性としたH2O、pH＝3.2；5BV(2000L)のAcONa 0.1M、pH＝8.2；1BV(400L)のAcOH(1L)で酸性としたH2O、pH＝3.2。ダルババンシンは、4BV(2400L)のAcOH(6L)で酸性としたH2O/Me0H(8:2)(pH＝3.4)で溶出した。
溶出ステップ時に、各々50〜60Lの22画分を収集し、及びHPLCにより分析した。9から25画分(ダルババンシン濃度が0.5g/Lを超え、及び(B0+B1)のHPLC面積％が80％)を、一緒にプールし、ダルババンシン1.56kgを含む溶液969Lを得た(収率＝93.9％)。次にこの溶液を、ナノ濾過により濃縮し、ダルババンシン1.38kgを含む溶液125.7Lを得た。不純なダルババンシン145g(8.7％)を含有する透過物850Lは、中和し廃棄した。
樹脂再生
樹脂は再使用前に、以下の溶液で洗浄した：2.5BV(1000L)の1:1 MeOH/酢酸(2.5mL/L)で酸性とした水；2.5BV(1000L)の1:1 0.5％NaOH/イソプロパノール；10BV(4000L)の脱イオン水。その後樹脂は、2BV(800L)の酢酸(2.5mL/L)で酸性とした水で再平衡とした。
第二部分の精製
加水分解ステップから得た出発溶液の第二部分(76.5L)を、DMSO含量を5％(v/v)以下に低下するために、H2O(56L)で希釈し、1N HCl(3L)でpH2.87へ酸性とした。次にこの部分を、先に第一部分の精製において説明したように、精製した。プールした画分(容積＝972L、ダルババンシン1.54kg、収率＝92.7％)を、ナノ濾過により濃縮し、活性物1.46kgの溶液133Lを得た。ダルババンシン73g(4.3％)を含有する透過物850Lは、廃棄した。
2精製ステップから得た濃縮した溶液は、再分析し、一緒にプールし、ダルババンシン2840gを含有する溶液258Lを得た。精製物の収率は、86％であった。総収率は、MAから出発し、58.3％であった。
最後のポリアミド再生
2回目精製試行後、ポリアミドを、2.5BVの1:1のMeOH-AcOH(2.5L)で酸性とした水、pH＝3.4；2.5BVの1:1の0.5％NaOH-イソプロパノール；10BVの脱イオン水で再生した。
ダルババンシンの脱色及び沈殿
1.5mol 1N HCl/molダルババンシン及び0.3gチャコールCGl(0.85kg、NORIT)/gダルババンシンを、先に得た溶液258Lに添加した。この混合物を、室温で少なくとも45分間攪拌した。pHは3.1であった。その後懸濁液を、SEITZ-SCHENKから得たSUPRA DISCカートリッジmod. SDP-EK1上で濾過し、ケーキを、50LのH2O/Me0H 8:2で洗浄した。濾液を分析し、カットオフ値250DのMPS 44メンブレンを使用するナノ濾過により再度濃縮した。ダルババンシン119g/L(pH4.1；MeOH 1.9％、GC)含有する濃縮溶液21.3Lを得た。1N HCl 909mLを最後に添加し、pHを2.63に調節し、これは1.65molHCl/molダルババンシンの塩の(salification)比に相当している。
この溶液(22.2L)を、攪拌しながら、アセトン200Lに注いだ。デカント後に得られた固形物を、遠心し、新鮮なアセトン14Lで洗浄した。その後生成物を、減圧(50mmHg)下35℃で乾燥し、内部温度30℃以下で17時間維持した。乾燥プロセス期間中、低エンドトキシン水(＜250EU/mL)1Lを各0.5Lの2部分に分け、3及び5時間後固形物上に噴霧し、それ以外の方法では除去が困難である残留アセトンを除去した。その後生成物を篩にかけ(50メッシュ)、ダルババンシン2592g(HPLCアッセイ82.4％；水(KF)14％；Cl- 3.0％)を得た。
実施例14 A-40926及びダルババンシン調製の別法
以下に説明した方法は、A-40926及びダルババンシン調製プロセスにおいて使用することができる別法である。
XAD-7 HP上でのA-40926調製
脱アセチル化及び菌糸体マイクロ濾過
A-40926を含有する発酵ブロス150L(pH7)を、適当な反応容器中で室温(24℃)で攪拌し、2.5N NaOH溶液(2.5L)でpH11.5に調節した。4時間攪拌した後、ブロスを15％HClでpH10.6に調節し、0.2μメンブレンを通しマイクロ濾過した。透明な透過物439Lを収集し、その後カットオフ値250DのMPS 44メンブレンを使用するナノ濾過により濃縮した。得られたA-40926濃縮液(58.6L；3.89g/L)を、pH6.4に調節し、使用時まで4℃で貯蔵した。
カラム調製及び精製
XAD-7 HP樹脂(8L)を、1:1水/メタノール溶液中に懸濁し、濾過し、及び蠕動ポンプを備えた適切なガラス-カラム(内径12cm)へ充填した。
その後樹脂を、水で洗浄し、水1Lに炭酸ナトリウム5gを溶解することにより調製した溶液で緩衝した炭酸ナトリウム水溶液(pH6)6BVで平衡とし、酢酸でpHを調節した。
A-40926 194gを含有する濃縮したブロス部分を、XAD-7 HPカラムに負荷した。その後存在する親水性及び着色した物質部分を除去するために、樹脂を、以下の2種の緩衝された溶液で、流量1/2 BV/時で洗浄した：30％水酸化ナトリウムでpH5に調節した、3BV(24L)の0.5％酢酸水溶液；5BV(40L)の5mL酢酸/L水含む水/アセトン8:2混合液。
A-40926は、最後に5mL酢酸/L水で酸性とした8BV(64L)の1:1水/アセトン混合液により溶出した。各4Lの16画分を収集した。A-40926濃度が0.5g/Lよりも多い濃厚な画分(5から15)を一緒に集め、A-40926の163.4g(43L、3.8g/L)を含有する溶液を得た。このカラム収率は、81.3％であった。0.23g/L(45.3g；22.2％)の純度の低いA-40926を含有する他の画分(200L)は、廃棄した。
溶出後、樹脂を、6BV(55L)の0.5％NaOH/イソプロパノール(1:1)混合液で再生し、最終的に10BVの水で中性になるまで洗浄した。
チャコール処理
収集した画分を、37％HCl(70mL)でpH2.5に調節し、その後50gチャコール型PA 200(0.3g/g A-40926)で脱色した。得られた懸濁液を、室温で2時間攪拌し、その後KS 50フィルター(d＝25cm、時間＝2.5時間)で濾過し、わずかに黄色のA-40926溶液45.6Lを得た(3.5g/L；収率＝96.4％)。
濃縮
脱色された溶液を、30％NaOH(230mL)でpH7に調節し、ナノ濾過及び限外濾過により濃縮した。これらの技術の使用は、HPLCクロマトグラフィーにおいてRt＝2〜4分で検出される親水性物質の除去のために重要であった。保持物質が出発容量(4L)の1/10へ濃縮された場合、同量の水を添加し、得られた溶液を再度濃縮した。この濃縮/希釈ステップは、残留アセトンを0.25％まで減らすために、3回繰返した。最終溶液(2.2L、A-40926 146.3g、66.5g/L、収率＝91.5％)を、HPLCにより分析した。精製収率は75.4％であった。
A-40926結晶化
A-40926溶液の300mL部分(A-40926 19.9g)を更に、実験室規模の限外濾過を使用し、100mLへ濃縮し、その後60〜65℃で加熱した。この溶液のpHを7(30％NaOH)に調節し、濃縮液1mLにつき1.2mLの5:1アセトン/イソプロパノール混合液を、この温度で滴下した。得られた混合物を、20℃に冷却した。1.5時間後、得られた固形物を濾過し、アセトンによりフィルター上で洗浄し、40℃で15時間乾燥した。生成物20.6g(HPLCアッセイ82.0％；A-40926 16.9g)を得た。沈殿収率は、84.9％であった。濾過したブロスから出発した全体の収率は約64％であった。
CG-71上でのA-40926調製
カラム調製
CG-71樹脂(350mL)を、ガラス-カラム(内径＝4cm)に充填し、水で洗浄した。樹脂を、水中に炭酸ナトリウム5gを溶解し、酢酸でpH6とすることにより調製した、3BVの炭酸ナトリウム溶液で平衡とした。A-40926 14.7gを含有する250mLの発酵ブロス(pH7)を、このカラム(42g/L樹脂)に負荷した。樹脂を、以下の3種の溶液で洗浄した：1050mL(3BV)の酢酸でpH6に調節した炭酸ナトリウム(5g/L)の水溶液；1750mL(5BV)の酢酸でpH8に調節した炭酸ナトリウム(5g/L)水溶液；3150mL(9BV)の酢酸でpH9に調節した炭酸ナトリウム(5g/L)水溶液。
その後活性物を、10BVの脱イオン水で溶出した。各500mLの20画分を収集した。画分12から15を一緒にプールし、A-40926 11.7gを含有する精製した溶液2.2Lを得た(収率＝79.6％)。その後この溶液を、限外濾過により濃縮し、濃縮溶液を更に脱イオン水で希釈し、再度限外濾過した。得られた溶液を更に、減圧下で50mLに濃縮した。
A-40926結晶化
濃縮された溶液を60℃で加熱し、攪拌しながら5:1アセトン/IPA混合液(60mL)で処理した。その後混合物をゆっくり室温で冷却した。得られた固形物を濾過し、フィルター上でアセトンで洗浄し、減圧下で35℃で80時間乾燥した。精製したA-40926 8.9g(HPLCアッセイ84.2％)を得た。全体の収率は、51％であった。
溶媒としてN-メチル-2-ピロリジン(NMP)を使用するダルババンシン合成における別のアミド化ステップ
MA混合物を、1:1 NMP/MeOH混合液(64mL)に攪拌しながら滴下した。20〜25℃での攪拌を、完全な溶液となるまで継続し、その後DMEPA(2.42mL；1.96mol/eqMA)及びHOBT(1.06g；0.71mol/eqMA)を添加した。この反応混合物のpHを(水で1:10希釈した試料でチェック)を、NMP中15％HCl(57.7mL NMP中にHCl 37％34.0mLを溶解することにより先に調製した)9.37mLにより3.0に調節した。その後、NMP/MeOH 1:1(12.7mL)中のDCC(3.17g；1.57mol/eqMA)溶液を、攪拌しながら添加した。この反応を、HPLCによりモニタリングした。約6時間で、反応は完了した(MA-A-1 88.9％、MA 7.3％、ISO 3.7％)。この実験は、NMPはアミド化反応でDMSOの簡便な代替物であることを示している。全プロセスは、この溶媒変更の影響を受けず、得られた最終ダルババンシンは、他のバッチと化学的に同等であった。
ダルババンシン調製の代替法：1-ポット法
A-40926複合体10g(HPLC力価80.66％、4.6mmole)を、100mLのガラス反応器中の、MeOH 24mLに攪拌しながら、室温で懸濁した。混合物を0℃に冷却し、MeOH 16.4mL中のHCl(g)4g溶液を添加し、生成物を完全に溶解した。その後温度を20℃に上昇しながら、更に24時間攪拌した。
その後、DMSO 40mL及びHOBT 0.4gを、反応混合物へ添加した。
次に1,1-ジメチルアミンプロピルアミンを添加し、得られる反応混合物のpHを3〜3.1に調節した(水で試料を9:1希釈した後測定)。次に1.8gの固形DCCを添加し、攪拌を更に15時間継続した。その後、反応混合物を、1Lのガラス反応器に移し、水80mLで希釈した。その後pHを、15％NaOHの240mLの添加により、12とした。攪拌を更に60分間継続し、混合物を、260mLの15％HCl水溶液でpH2.8の酸性とした。ダルババンシン6.4gを含有する最終の透明な溶液約800mLを得た(収率＝76％)。
HPLC分析は、得られた生成物のプロファイルが、他の製造プロセスにより得られたものと同等であることを示した。
N 15 ,N 15 -ジアルキル抗生物質化合物
本発明は、例えば、哺乳類における微生物感染症の予防及び／又は治療に有用な、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を提供する。便宜上、本明細書の説明において、ダルババンシン化合物は、米国特許第5,750,509号明細書及び図26に示したように番号を付けた。
ある態様において、本発明は、式(III)のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物、又はそれらの医薬として許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：
Figure 2007534768
ある態様において、本発明は、式(IV)のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物、又はそれらの医薬として許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：
Figure 2007534768
式(III)及び(IV)は、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物のペプチド中心を提供する。このペプチドは、式(III)及び(IV)に示されたように、右側にアミノ末端、及び左側にカルボキシ末端を有する7個のアミノ酸を含む。本発明のこの局面に従い、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、2個のアルキル置換基を、アミノ末端窒素上、又はN15に有する。別の表現をすると、式(III)及び(IV)において、R1及びR1'はアルキルである。
好ましい態様において、R1及びR1'はC1-4アルキルである。ある態様において、R1及びR1'は各々独立して、プロピル、エチル及びメチルから選択される。更なる態様において、R1及びR1'は各々独立して、エチル及びメチルから選択される。より好ましい態様において、R1及びR1'の少なくとも一方はメチルである。最も好ましい態様において、R1及びR1'はメチルである。
この分子の残りは、当業者に公知のダルババンシン化合物と同じ方法で修飾することができる。従って、先項で定義されたように、Xは、アミノアルキルアミノ基である。アミノアルキルアミノ基の例は、米国特許第5,750,509号明細書に開示されている。ある態様において、XはN,N-ジメチルアミノプロピルアミノである。
従って特定の態様において、本発明は、式(V)の化合物、又はそれらの医薬として許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：
Figure 2007534768
本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、当業者に公知のように、1種又は複数の位置でグリコシル化することができる。好ましい態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、式(III)又は(IV)のG及びM位でグリコシル化される。特定の態様において、Mは水素又は糖部分である。例えばMは、水素、α-D-マンノピラノシル又は6-O-アセチル-α-D-マンノピラノシルであることができる。特定の態様において、Gは水素又は糖部分である。例えばGは、水素又はグルクロナミンであることができる。
ある態様において、糖部分の一方又は両方は、アシル化もしくはアセチル化されるか、又は両方されてよい。例えばGがグルクロナミンである場合、グルクロナミン部分は、脂肪酸でアシル化され得る。脂肪酸は、当業者に公知の任意の脂肪酸であることができる。特定の態様において、脂肪酸は、8-メチルノナン酸、n-デカン酸、9-メチル-デカン酸、n-ウンデカン酸、10-メチル-ウンデカン酸、n-ドデカン酸、11-メチル-ドデカン酸、n-トリデカン酸、12-メチル-トリデカン酸及びn-テトラデカン酸からなる群より選択される。好ましい態様において、脂肪酸は、C12脂肪酸である。特定の態様において、脂肪酸は10-メチル-ウンデカン酸である。
ある態様において、本発明は、式(VI)の化合物、又はそれらの医薬として許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：
Figure 2007534768
式(VI)において、R2はC10-14アシルである。特定の態様において、R2は、8-メチルノナン酸、n-デカン酸、9-メチル-デカン酸、n-ウンデカン酸、10-メチル-ウンデカン酸、n-ドデカン酸、11-メチル-ドデカン酸、n-トリデカン酸、12-メチル-トリデカン酸及びn-テトラデカン酸からなる群より選択される。好ましい態様において、R2はC12脂肪酸である。特定の態様において、R2は10-メチル-ウンデカン酸である。
下記合成の項に説明されるように、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、ダルババンシン化合物から合成することができる。従って本発明のあるN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、ダルババンシンA0、A1、B0、B1、C0及びC1の糖部分及び脂肪酸を有する。
特定の態様において、本発明は、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物を提供する。N15,N15-ジメチル抗生物質化合物は、N15に2個のメチル基を伴う式(I)又は(II)を含む。N15,N15-ジメチル抗生物質化合物は、先に説明されたように、1個又は複数の糖部分によりグリコシル化することができる。ある態様において、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物は、1個又は複数のこれらの糖部分でアシル化される。好ましい態様において、アシル基は10-メチル-ウンデカン酸である。
好ましい態様において、本発明は、下記構造(VII)のN15,N15-ジメチル抗生物質化合物、又はそれらの医薬として許容される塩もしくは溶媒和物を提供する：
Figure 2007534768
ある態様において、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は精製される。本明細書において使用される用語「精製された」は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が、組成物中の他のダルババンシン化合物と比べ、濃厚化されたことを意味する。例えば、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が生成されている混合物、例えば下記例において説明される発酵ブロス由来の混合物に対して濃厚化され得る。ある態様においてN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、2、3、5、10、100、1000又は10000倍濃厚化される。
更なる態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、単離される。本明細書において使用される用語「単離される」は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が、組成物中の非-ダルババンシン化合物に対して濃厚化されることを意味する。例えばN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物生成されている混合物、例えば下記例において説明される発酵ブロス由来の混合物に対して濃厚化され得る。ある態様においてN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、2、3、5、10、100、1000又は10000倍濃厚化される。
なお更なる態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、精製及び単離される。本明細書において使用される用語「精製及び単離される」は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が、組成物中の非-ダルババンシン化合物に対して及び他のダルババンシン化合物に対して濃厚化されることを意味する。例えばN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が生成されている混合物、例えば下記例において説明される発酵ブロス由来の混合物に対して濃厚化され得る。ある態様においてN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、2、3、5、10、100、1000又は10000倍濃厚化される。
N 15 ,N 15 -ジアルキル抗生物質化合物
本発明は、カルボニル63にカルボン酸基を有するN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物も提供する。これらの化合物は、例えば、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の調製に有用である。ある態様において、これらのN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、哺乳類における微生物感染症の予防及び／又は治療にも有用である。
ある態様において、本発明は、式(VIII)：
Figure 2007534768
のN15,N15-ジメチル抗生物質化合物、又はそれらの医薬として許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
ある態様において、本発明は、式(IX)：
Figure 2007534768
のN15,N15-ジメチル抗生物質化合物、又はそれらの医薬として許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
式(VIII)及び(IX)は、本発明のこの局面のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物のペプチド中心を提供する。このペプチドは、式(III)及び(IV)に示されたように、右側にアミノ末端、及び左側にカルボキシ末端を有する7個のアミノ酸を含む。本発明のこの局面に従い、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、2個のアルキル置換基を、アミノ末端窒素上、又はN15に有する。別の表現をすると、式(I)及び(II)において、R1及びR1'はアルキルである。更に式(VIII)及び(IX)において、Xは、当業者に公知の抗生物質A 40926化合物のように、OHである。
好ましい態様において、R1及びR1'はC1-4アルキルである。ある態様において、R1及びR1'は各々独立して、プロピル、エチル及びメチルから選択される。更なる態様において、R1及びR1'は各々独立して、エチル及びメチルから選択される。より好ましい態様において、R1及びR1'の少なくとも一方はメチルである。最も好ましい態様において、R1及びR1'はメチルである。
本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、当業者に公知のように、1種又は複数の位置でグリコシル化することができる。好ましい態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、式(VIII)又は(IX)のG及びM位でグリコシル化される。特定の態様において、Mは水素又は糖部分である。例えばMは、水素、α-D-マンノピラノシル又は6-O-アセチル-α-D-マンノピラノシルであることができる。特定の態様において、Gは水素又は糖部分である。例えばGは、水素又はグルクロナミンであることができる。
ある態様において、糖部分の一方又は両方は、アシル化もしくはアセチル化されるか、又は両方されてよい。例えばGがグルクロナミンである場合、グルクロナミン部分は、脂肪酸でアシル化され得る。脂肪酸は、当業者に公知の任意の脂肪酸であることができる。特定の態様において、脂肪酸は、8-メチルノナン酸、n-デカン酸、9-メチル-デカン酸、n-ウンデカン酸、10-メチル-ウンデカン酸、n-ドデカン酸、11-メチル-ドデカン酸、n-トリデカン酸、12-メチル-トリデカン酸及びn-テトラデカン酸からなる群より選択される。好ましい態様において、脂肪酸は、C12脂肪酸である。特定の態様において、脂肪酸は10-メチル-ウンデカン酸である。
ある態様において、本発明は、式(X)：
Figure 2007534768
の化合物、又はそれらの医薬として許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
式(X)において、R2はC10-14アシルである。特定の態様において、R2は、8-メチルノナン酸、n-デカン酸、9-メチル-デカン酸、n-ウンデカン酸、10-メチル-ウンデカン酸、n-ドデカン酸、11-メチル-ドデカン酸、n-トリデカン酸、12-メチル-トリデカン酸及びn-テトラデカン酸からなる群より選択される。好ましい態様において、R2はC12脂肪酸である。特定の態様において、R2は10-メチル-ウンデカン酸である。
下記合成の項に説明されるように、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、抗生物質A 40926化合物から合成することができる。従って本発明のあるN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、抗生物質A 40926因子のA0、A1、B0、B1、C0及びC1の糖部分及び脂肪酸を有する。
特定の態様において、本発明は、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物を提供する。N15,N15-ジメチル抗生物質化合物は、N15に2個のメチル基を伴う式(VIII)又は(IX)を含む。N15,N15-ジメチル抗生物質化合物は、先に説明されたように、1個又は複数の糖部分によりグリコシル化することができる。ある態様において、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物は、1個又は複数のこれらの糖部分でアシル化される。好ましい態様において、アシル基は10-メチル-ウンデカン酸である。
好ましい態様において、本発明は、下記構造(XI)：
Figure 2007534768
のN15,N15-ジメチル抗生物質化合物、又はそれらの医薬として許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
ある態様において、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は精製される。本明細書において使用される用語「精製された」は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が、組成物中の他のダルババンシン化合物と比べ、濃厚化されたことを意味する。例えば、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が生成されている混合物、例えば下記例において説明される発酵ブロス由来の混合物に対して濃厚化され得る。ある態様においてN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、2、3、5、10、100、1000又は10000倍濃厚化される。
更なる態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、単離される。本明細書において使用される用語「単離される」は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が、組成物中の非-ダルババンシン化合物に対して濃厚化されることを意味する。例えばN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物生成されている混合物、例えば下記例において説明される発酵ブロス由来の混合物に対して濃厚化され得る。ある態様においてN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、2、3、5、10、100、1000又は10000倍濃厚化される。
なお更なる態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、精製及び単離される。本明細書において使用される用語「精製及び単離される」は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が、組成物中の非-ダルババンシン化合物に対して及び他のダルババンシン化合物に対して濃厚化されることを意味する。例えばN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物生成されている混合物、例えば下記例において説明される発酵ブロス由来の混合物に対して濃厚化され得る。ある態様においてN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、2、3、5、10、100、1000又は10000倍濃厚化される。
発明の化合物の製造法
本発明の化合物は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物などの調製に関する、当業者に明らかないずれかの方法に従い合成することができる。
例えば、ある態様において、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、当業者に明らかな任意の技術による、対応するN15-モノメチル化合物又は組成物のアルキル化により調製することができる。例えば、N15-モノメチル化合物又は組成物は、計画1に例示したように、HCHO、NaBH3CN、DMF、H2O及びNaHCO3の混合物と室温で接触することにより、メチル化することができる。特定の態様において、N15-モノメチルダルババンシン化合物又は組成物は、水及びDMF中に溶解され、これにホルムアルデヒド及び炭酸水素ナトリウムが添加され、引き続きNaBH3CNが添加され、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物又は組成物を得る。
Figure 2007534768
計画1
対応するN15-モノメチル化合物又は組成物を、例えば米国特許第5,750,509号明細書及び米国特許出願第2004/0142883号明細書に専ら開示されたもののような、公表された技術に従い調製し、これらの内容は全体が本明細書に参照として組入れられている。この化合物又は組成物がそれらのN15窒素上に保護基を持つ限り、当業者に公知の技術によりこれらは除去することができる。
適当な出発物質は、ダルババンシンA0、A1、B0、B1、C0及びC1並びに抗生物質A 40926因子A0、A1、B0、B1、C0及びC1を含む。下記実施例に示されるように、N15,N15-ジメチルダルババンシンB0は、本方法に従い、ダルババンシンB0から調製された。これらのダルババンシン化合物の調製は、広く米国特許出願第2004/0142883号明細書に開示されている。これらのダルババンシン化合物は、下記：
Figure 2007534768
の構造を有する。
更なる態様において、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、抗生物質A 40926発酵ブロスから調製することができる。抗生物質A 40926及び関連化合物を含有する発酵ブロスは、例えば米国特許第5,750,509号明細書及び米国特許出願第2004/0142883号明細書に開示された技術に従い調製することができる。このブロスは、精製し、所望の抗生物質A 40926化合物を得、これは米国特許第5,750,509号明細書及び米国特許出願第2004/0142883号明細書に従い、エステル化、アミド化及び加水分解し、ダルババンシン化合物の混合物を得ることができる。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、当業者に明らかな技術に従い混合物から精製及び／又は単離することができる。下記実施例において、HPLC技術は、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を精製するために使用される。
組成物
別の局面において、本発明は、1種又は複数の本発明の化合物を含有する組成物を提供する。一般に本発明の組成物は、本発明の化合物及び1種又は複数の他の化合物を含有する。他の化合物は、本発明の化合物、当業者に公知の化合物、まだ発見もしくは公表されていない化合物又は他の化合物であることができる。
ある態様において、組成物は、以下の項でより詳細に説明される、医薬組成物である。
特定の態様において、組成物は、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及びダルババンシン又は抗生物質A 40926化合物を含有する。ダルババンシン又は抗生物質A 40926化合物は、当業者に公知の任意のダルババンシン又は抗生物質A 40926化合物であることができる。ダルババンシン化合物の例は、米国特許第5,750,509号明細書及び米国特許出願第2004/0142883号明細書に開示されており、その内容は全体が本明細書に参照として組入れられている。抗生物質A 40926化合物の例は、米国特許第4,935,238号明細書、第4,868,171号明細書及び第4,782,042号明細書に開示されており、それらの内容は全体が本明細書に参照として組入れられている。
ダルババンシン化合物の例は、ダルババンシンA0、A1、B0、B1、C0及びC1を含む。これらのダルババンシン化合物の調製は、米国特許出願第2004/0142883号明細書に開示されている。これらのダルババンシン化合物は更に、前項に説明されている。当然本発明の組成物は、先に例示したダルババンシン化合物に列記されない、追加のダルババンシン化合物を含有することができる。
ある態様において、組成物は、本発明の化合物の多量体を含有する。多量体は、二量体、三量体又はそれよりも高次であることができる。多量体は、ホモ多量体、ヘテロ多量体又はホモ多量体及びヘテロ多量体の混合物であることができる。例えば多量体は、ダルババンシン因子A0、A1、B0、B1、C0、C1、D0、D1、MAG又はイソB0を含む、ダルババンシン組成物中に存在する任意の因子の組合せを含むことができる。例えばこの多量体は、N15-アルキルダルババンシン化合物及びN15,N15-ジアルキルダルババンシン化合物を含んでもよい。ある態様において、本発明は、本発明の化合物のホモ二量体も提供する。更なる態様において、本発明は、本発明の化合物のダルババンシン化合物とのヘテロ二量体も提供する。ダルババンシン化合物は、本発明のダルババンシン又は当業者に公知のダルババンシンであってよい。
ある態様において、本発明の組成物は、ダルババンシン又は抗生物質A 40926化合物に対し、著しい量の本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を含有する。ある態様において、ダルババンシン又は抗生物質A 40926化合物に対する、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、組成物の少なくとも0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、1.6、1.7、1.75、1.8、1.9、2.0、2.5、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、95、96、97、98又は99％である。好ましい態様において、この化合物は式(V)である。
ある態様において、本発明の組成物は、ダルババンシン化合物に対し、著しい量の本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を含有する。ある態様において、ダルババンシン化合物に対する、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、組成物の少なくとも0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、1.6、1.7、1.75、1.8、1.9、2.0、2.5、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、95、96、97、98又は99％である。好ましい態様において、この化合物は式(V)である。
ある態様において、本発明の組成物は、抗生物質A 40926化合物に対し、著しい量の本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を含有する。ある態様において、抗生物質A 40926化合物に対する、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、組成物の少なくとも0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、1.6、1.7、1.75、1.8、1.9、2.0、2.5、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、95、96、97、98又は99％である。好ましい態様において、この化合物は式(V)である。
ある態様において、本発明の組成物は、他の化合物に対し、著しい量の本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を含有する。ある態様において、他の化合物に対し、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、組成物の少なくとも0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、1.6、1.7、1.75、1.8、1.9、2.0、2.5、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、95、96、97、98又は99％である。好ましい態様において、この化合物は式(V)である。
更なる態様において、本発明は、ダルババンシンA0、A1、B0、B1、C0及びC1を、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物と共に含有する組成物を提供し、ここで本発明の化合物の量は、1種もしくは複数の又は全てのダルババンシンA0、A1、B0、B1、C0及びC1に対し濃厚化される。この組成物は、例えば、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が、1種もしくは複数の又は全てのダルババンシンA0、A1、B0、B1、C0及びC1に対し、組成物の少なくとも0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、1.6、1.7、1.75、1.8、1.9、2.0、2.5、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、95、96、97、98又は99％であるように、濃厚化することができる。好ましい態様において、この化合物は式(V)である。
ある態様において、本発明は、ダルババンシンB0及び本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を含有する組成物を提供する。更なる態様において、本発明は、ダルババンシンB1及び本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を含有する組成物を提供する。更なる態様において、本発明は、ダルババンシンB0、ダルババンシンB1及び本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を含有する組成物を提供する。好ましい態様において、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、式(V)である。特に好ましい態様において、本発明は、式(V)の化合物、ダルババンシンB0、及びダルババンシンB1を含有する組成物を提供する。これらの組成物は、精製、単離、又は精製及び単離することができる。ある態様において、これらの組成物は、90、91、92、93、94、95、96、97、98、98.5、99又は99.5％の純度である。「純度」は、組成物が、組成物のそれらの化合物をその量含有することを意味する。例えば、式(V)の化合物、ダルババンシンB0、及びダルババンシンB1を含有する組成物は、組成物中の他の化合物に対し、これら3種の化合物を少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、98.5、99又は99.5％含有する。純度は、例えば％曲線下面積のように、HPLCのような当業者に公知の任意の手段を用い評価することができる。
本発明の組成物において、各成分の量は、質量により、モル量により又は当業者に公知の他の技術により計算することができる。
使用法
細菌感染症の治療が必要な個体への、本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の投与法が提供される。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、式(V)である。治療は、予防、療法、又は救済を含むことができる。方法は、治療的又は予防的有効量のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物を投与することを含む。
本明細書において使用される「治療的有効量」は、疾患を治療するために対象へ投与される場合に、望ましい治療的転帰(例えば、細菌感染症の軽減又は消失)を生じるような、化合物又は組成物の量を意味する。「治療的有効量」は、特に、化合物、疾患及びその重症度、並びに治療される対象の年齢、体重などにより左右され、単回又は複数回の投与量で投与することができる。「予防的有効量」は、例えば、医療処置もしくは入院、又は細菌感染症への個体の曝露などにより、細菌感染症に易罹患性であるか及び／又は接触するであろう個体へ投与された場合に、将来の細菌感染症を予防又は重症度を軽減するのに十分なN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の量を意味する。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物、医薬として許容される担体中で投与することができる。
N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物は、個体へ投与された場合に、治療的又は予防的に有効な血漿レベルの化合物を数日間、少なくとも約5日間、1週間、又は10日間提供するのに十分な量の化合物を含有するN15,N15-ジアルキル抗生物質製剤中の「単位投与量」として投与することができる。一部の態様において、化合物は式(V)である。一部の態様において、化合物は、治療的又は予防的に有効なレベルの化合物を数日間、少なくとも約5日間、1週間、又は10日間提供するのに十分な化合物の量を含有する、製剤の成分である。投薬間隔、又は投与間の時間は、例えば、約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25日又はそれよりも長いことができる。
本明細書において使用される「個体」又は「対象」又は「患者」は、互換的に使用され、脊椎動物、典型的には哺乳類、時にはヒトを意味する。
加えて、本発明の化合物又は組成物は、組成物中に存在する化合物、組成物、及び／又は1種又は複数の他のN15,N15-ジアルキル抗生物質もしくは他の抗生物質成分の分解を阻害する安定化剤と共に製剤することができる。一部の態様において、安定化剤は、マンニトール、乳糖、ショ糖、ソルビトール、グリセロール、セルロース、トレハロース、マルトース、ラフィンノース、及びそれらの混合物からなる群より選択される。ひとつの態様において、製剤は、マンニトールを含有する。別の態様において、製剤は更に乳糖を含有する。ひとつの態様において、組成物は、マンニトール: N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の1:2の質量比で製剤することができる。別の態様において、組成物は、マンニトール:乳糖:N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の1:1:4の質量比で製剤することができる。
一部の態様において、組成物又は他の製剤は、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物、ダルババンシン化合物、又はそれらの組合せを含有する。組成物又は他の製剤は、数日間、時には少なくとも約5〜10日間、時には少なくとも約1週間、薬物の治療的に有効な(すなわち、殺菌性)血漿レベルを生じる用量で投与することができる。例えば、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、少なくとも5日間約4mg/lの最小殺菌濃度で又はこれを上回り血漿中に維持することができる。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、少なくとも約5mg/l、少なくとも約10mg/l、少なくとも約20mg/l、少なくとも約30mg/l、少なくとも約40mg/lの血漿レベルで、少なくとも5日間、少なくとも約1週間又はそれよりも長く維持することができる。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の血漿レベルは、液体クロマトグラフィー、質量分析又は微生物学的バイオアッセイのような、当該技術分野において周知の方法により測定することができる。
N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物血漿濃度レベルの上限について、治療される患者集団において許容し難い有害作用を阻害する用量により示すことができる。
N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、単回投与量又は反復投与量において投与することができる。単回投与量で投与される場合、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、in vivoにおいて少なくとも5日間、あるいは少なくとも6日間、あるいは少なくとも7日間、あるいは少なくとも8日間、あるいは少なくとも9日間、あるいは少なくとも10日間、あるいは少なくとも11日間、あるいは少なくとも12日間、あるいは少なくとも13日間、あるいは少なくとも14日間、あるいは少なくとも15日間抗菌特性を実現するのに十分量のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物(複数)を含有するように製剤することができる。
反復投与量が使用される場合、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、週1回で2週間又はそれよりも長く投与することができる。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、少なくとも2回の投与量で、時には約5〜約10日間間をあけた2回の投与量で、より頻繁には週1回を2週間投与することができる。ある態様において、このようなレジメンは、従来の抗生物質治療プロトコールに勝る十分な利点を提供する。
N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、2日又はそれよりも長い、又は少なくとも1週間間をあけた反復投与量で、又は2週間に1回又は複数回の投与量で投与することもできる。一部の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、毎週、2週間に1回、又は月1回の投与で投与することができる。一部の態様においてN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、週1回の間隔で2、3、4、5、6週間又はそれよりも長く投与することができる。
最も有利なことに、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の毎日の投薬は、より高く、より頻度の低い投与量を使用することができるので、不要である。単回又は反復投与量は、例えば約0.1〜約5gの範囲である。約0.1〜約4g、例えば約3gの単回投与量を、様々な感染症治療のために投与することができる。反復投与量が投与される場合、例えば週1回の、各投与量は例えば約0.25〜約5gの範囲である。
感染症治療のために単回投与量を投与することができる態様に関して、投与量は、例えば約0.1〜約5g、又は約0.5〜約4g、又は約1〜約3.5g、又は約2〜約3g、例えば、約3gである。一部の態様において、約1、1.5、2、2.5、又は3gの単回投与量を、細菌感染症の治療のために投与することができる。単回投与量が予防のために投与される態様に関して、投与量は、例えば約0.1〜約3g、又は約0.1〜約1g、例えば、約0.5〜約0.25gの範囲である。
反復用量を含む投薬計画において、個々の用量は、同じ又は異なることができる。一部の態様において、最初に比較的高い投与量を投与することができ、これは例えば1回又は複数回の継続量よりも約1.5〜3倍高い。例えば1回目投与量は、約0.5g〜約5gであり、及び2回目投与量は約0.25g〜約2.5gであり、1回目投与量は約0.8〜約2gであり及び2回目投与量は約0.4〜約1gであることができ、又は初回投与量は約0.4〜約3gであり、及び2回目投与量は約0.2〜1.5gであることができる。
一部の態様において、少なくとも2種の用量が投与され、ここで初回用量は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物を、継続量の約2倍含有する。ある態様において、初回用量は、約1gのN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物を含有し、及び継続量は約0.5gを含有する。別の態様において、初回用量は、約0.5gを含有し、及び継続量は約0.25gを含有する。
一部の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、2日又はそれよりも多く、又は約1週間間をあけて、同じ又は異なる2種の投与量で投与することができる。例えば、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の約0.2〜約1.5gの2種の投与量は、約5〜約10日間間をあけて、又は約1週間間をあけて投与することができる。ひとつの態様において、N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の初回用量約1g及び2回目用量約0.5gを、約1週間間をあけて投与することができる。
反復投薬レジメンにおいて、投与間の時間は、例えば約5〜約10日間、時には約1週間を変動することができる。投与頻度は、例えば、週2回の投与、又は毎週複数回の投与であることができる。投薬間隔、又は投与間の時間は、例えば、約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25日、又はそれよりも長いことができる。与えられる投与回数は、例えば1、2、3、4、5、6回、又はそれよりも多い投与であることができ、初回量が与えられた後の各投与量は、選択された用量間隔である。
ある態様の反復投薬計画において、初回投与量後、又は2回目投与量の投与直前のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の血漿中の「トラフレベル」又はレベルは、少なくとも約4mg/lであることができる。約1週間のような、投薬間隔の終了時のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物のトラフレベルは、少なくとも約20mg/l、少なくとも約30mg/l、又は少なくとも約40mg/lである。
N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、非経口、例えば筋肉内(i.m.)、静脈内(i.v.)、皮下(s.c)、腹腔内(i.p.)、又は髄腔内(i.t)へ投与することができる。投薬スケジュール及び実際に投与される用量は、感染症の性質及び重症度、患者の年齢、体重及び全身の状態、並びに特定の患者のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物に対する忍容性などの要因に応じて変動することができるが、医療関係者が判断するであろう。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の1g静脈内投与量の1週間後に、0.5gの静脈内投与が続くことができる。
薬物の患者への例えば静脈内への投与及び送達は、血中濃度が余りにも迅速に上昇するか又は沈殿を生じることのないように、制御された速度で行うことができる。一部の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、薬物が血流中の内在性タンパク質(複数)と複合体を形成するのに適当な速度で投与することができる。特定の理論に結びつけることは欲さないが、内在性タンパク質、例えばヒト血清アルブミンは、in vivoにおいてN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の1個又は2個の分子と複合体を形成することができると考えられる。十分量のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が存在する場合、最大2分子のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が、内在性タンパク質に結合することができ、この複合体は、2種の異なる結合部位への、個別のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の結合により形成することができる。あるいは、二量体N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、内在性タンパク質上の単独の結合部位へ結合することが可能である。
N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の注入期間は、例えば約1分〜約2時間であることができる。例えば注入期間約30分を、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物と共に用いることができ、この投与量は、約0.5〜約1gであることができる。制御された速度条件での静脈内投与は、in vitroにおいて生理的pHで液相で実現され得る濃度よりも大きく過剰である体内でのN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の濃度を作製することができる。理論により限定されることを欲するものではないが、これは、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の血清アルブミンのような内在性タンパク質(複数)との複合体の形成により、これはN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物を吸収する能力を増加することができる。
ある態様において、in vitro又はex vivoにおけるN15,N15-ジアルキル抗生物質複合体の形成は、少なくとも約1分間、少なくとも約10分間又は少なくとも約20分間のような、より迅速な投与を可能にする。このような複合体は、ヒト血清アルブミン及び／又は内在性タンパク質の、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物との混合、これによるin vitro又はex vivoにおける複合体の形成、その後の治療される患者への複合体の投与により実現することができる。あるいは、ヒト血清アルブミン又は他の内在性タンパク質は、自家給源から又はタンパク質の遺伝子を含むように修飾された微生物からの発現により得ることができる。
投与されるN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の量は、本明細書において明らかにされた用量のいずれかであることができる。投与量は、1種又は複数のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が、延長された期間、例えば少なくとも5日間、又は約1週間又はより長い期間、治療的又は予防的に有効な(すなわち殺菌性)血漿レベルであり続けるように選択される。殺菌濃度を生じ及び少なくとも約1週間(又は約5〜約10日間)維持するような、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の投与量の投与が、好ましい。殺菌濃度は、24時間にわたるin vitro実験において開始時に存在する細菌の少なくとも約80％、少なくとも約85％、少なくとも約90％、又は少なくとも約95％、96％、97％、98％又は99％を殺傷するために必要なN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の濃度として定義することができる。血漿中のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の最小殺菌濃度は、約4mg/lであることができる。
本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物、組成物、及び方法を用いて予防又は治療することができる適応症の例は、合併型及び非合併型の両SSTI、血流感染症(BSI)、カテーテル-関連血流感染症(CRBSI)、筋髄炎、人工関節感染症、外科的予防、心内膜炎、病院又は地域での獲得性肺炎、肺炎球菌肺炎、有熱好中球減少症の経験に基づいた治療、関節腔感染症、及び医療用具感染症(例えば、ペースメーカー及び心臓内除細動器)を含む。バチラス、コリネバクテリア、リステリア、腸球菌、ブドウ球菌、連鎖球菌、ナイセリア、又はクロストリジウム属感染症、特に黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、溶血性ブドウ球菌、化膿連鎖球菌、肺炎連鎖球菌、連鎖球菌A及びC群、エンテロコッカス・フェカーリス、バチラス・サブチリス、淋菌又はクロストリジウム・ディフィシルなどの、グラム陽性菌又は抗生物質-耐性菌感染症は、予防又は治療することができる。本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物、組成物、及び方法を用いて予防又は治療することができる、他の感染症は、グラム陰性菌、例えばバルトネラ、ブルセラ、カンピロバクター、エンテロバクター、エシェリヒア(他のプロテオバクテリア)、フランシセラ、ヘリコバクター、ヘモフィルス、クレブシラ、レジオネラ、レプトスピラ、モルガネラ、モラクセラ、プロテウス、プロビデンシア、シュードモナス、サルモネラ、セラチア、シゲラ、ステノトロフォモナマス、ビブリオ、及びエルシニア属感染症、特に大腸菌、プロテウス・ブルガリス、緑膿菌の感染症、及び酵母、例えばカンジダ・アルビカンスの感染症を含む。
本発明は、本発明の化合物、組成物及び方法を使用する、他の感染性細菌、例えばヘリコバクター・ピロリ、ボレリア・ブルゴルフェリ(Borelia burgdorferi)、レジオネラ・ニューモフィラ、マイコバクテリウム・スポロゾイテス(種)(例えば、M.ツベルクローシス、M.アビウム、M.イントラセルラレ、M.カンサイ、M.ゴルドナエ)、髄膜炎菌、リステリア・モノサイトゲネス、化膿連鎖球菌(連鎖球菌A群)、ストレプトコッカス・アガラクチアエ(連鎖球菌B群)、連鎖球菌(ビリダンス群)、ストレプトコッカス・ボービス、連鎖球菌(嫌気性菌種)、病原性カンピロバクター種、腸球菌種、ハエモフィラス・インフルエンザ、バシラス・アントラシス、ジフテリア菌、コリネバクテリウム種、豚丹毒菌、ウェルシュ菌、破傷風菌、エンテロバクター・アエロゲネス、クレブシラ・ニュモニアエ、パスツレラ・マルトシダ(Pasturella multocida)、バクテロイデス種、フゾバクテリウム・ヌクラツム、ストレプトバシラス・モニリフォルミス、梅毒トレポネーマ、レプトスピラ、及びイスラエル放線菌の感染症の予防又は治療も包含する。
本明細書に説明された感染症及び障害の予防及び治療は、本発明の化合物、組成物及び方法を用いて実現することができる。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、式(V)である。一部の態様において、対象は、先に1種又は複数の抗生物質、例えばバンコマイシン又はテイコプラニンにより治療されない。別の態様において、対象は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物により先に治療されない。一部の態様において、患者は、抗生物質に対する細菌の抵抗性について先に試験される。別の態様において、患者は、抗生物質に対する細菌の抵抗性について先に試験されない。
本発明は、SSTIを予防又は治療する方法も包含する。この予防又は治療から恩恵を受け得る患者は、深部又は浅部のいずれかの感染症を有する。例えば大膿瘍、感染性潰瘍、大火傷、又は深部広範な蜂巣炎などの、SSTIは、深部軟組織に関係し、及び／又は著しい外科的介入が必要である。感染した外科的創傷も、予防又は治療することができる。
皮膚・皮膚構造感染症の臨床的出現は、軽度毛包炎から重症壊死性筋膜炎まで変動し得る。獲得様式は、地域で獲得された皮膚・皮膚構造感染症によって変動することができ、これは職業的曝露又は余暇活動から生じる障害が先行することが多く、並びに通常は病原体のより大きい多様性に関連している。病院で獲得した皮膚・皮膚構造感染症は、一般に外科手技、褥瘡の発生、及びカテーテル挿管に関連している。術後感染症は、第三の最も頻繁な院内感染症であり、米国院内感染に関する国家的調査(NNIS)に報告された全院内感染症の17％を占める。感染症の最も頻繁な原因は、患者の内在叢である。黄色ブドウ球菌、コアグラーゼ-陰性ブドウ球菌、及び腸球菌種は、SSTIから最も頻繁に単離される病原体である。
SSTI感染症の症状は、紅斑、圧痛又は疼痛、発熱又は局所的ほてり、ドレナージ又は排泄、膨潤又は硬変、発赤、又は動揺を含むことができる。本発明の方法による治療から恩恵を受ける患者は、深部もしくは合併感染症又は外科的介入を必要とする感染症の患者、又は糖尿病又は末梢血管疾患の素因のある患者を含む。これらの感染症は、グラム陽性菌、例えばブドウ球菌又は連鎖球菌種、黄色ブドウ球菌又は化膿連鎖球菌などにより引き起こされることが多い。皮膚軟組織細菌感染症の治療法は、先に考察した量及び投薬レジメンに従い、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物を治療的有効量、治療を必要とする個体へ投与することを含む。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、式(V)である。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、約5〜約10日間間をあけて、又は約1週間間をあけて、2回投与量で静脈内投与される。一部の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の初回用量は、2回目用量の少なくとも2倍を含む。ひとつの態様において、初回用量は約1000mgであり、及び2回目用量は約500mgである。
当業者に理解されるように、本明細書に説明された投薬法は、とりわけ、化合物、疾患及びその重症度、並びに治療される対象の年齢、体重などに応じて変動し得るが、医師は過度の実験をせずに評価することができる。
本発明は、細菌感染症、例えば黄色ブドウ球菌、又はナイセリアもしくはクロストリジウム属細菌により引き起こされた感染症の発症を予防的予防する方法も包含する。本発明の予防的方法において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の予防的有効量が、例えば医療処置を介して、細菌感染症に易罹患性である個体へ投与される。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、少なくとも約1日、少なくとも約3日間、少なくとも約5日間、又は少なくとも約1週間又はそれよりも長く、予防的に有効な血漿レベルを提供するのに十分な量で投与することができる。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、感染症に対する予防的ステップとして、手術の前、続けて、又は同時に、例えば非経口的、例えば、i.m.、i.v.、i.p.、s.c.又はi.t.注射などにより投与することができる。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、手術のような侵襲的医療処置、又は感染症予防のために、病院のような診療施設への滞在の直前又は引き続き、1日もしくは複数日間、又は約1週間前又は後、又はその間に投与することができる。予防的方法は、個体が細菌感染した個体へ曝露されるか又は曝露される可能性があるような状況を含む、個体が細菌感染症にもしかすると又はおそらく罹る状況において使用することができる。予防的方法に関して、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、単回投与量、又は約1週間間をあけて7日間投与される同量又は異なる量の2回又はそれよりも多い投与量のいずれかで投与することができる。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、血流に関連した感染症を予防するために、静脈内カテーテル挿管の前又は同時に投与することができる。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、式(V)である。
予防的方法に関して、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、先に説明された投薬計画のいずれかに従い、単回投与量又は反復投与量で投与することができる。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、約0.1〜約3g、又は約0.1〜約1g、例えば、約0.25g又は約0.5gを含有する、単回投与量で投与することができる。ひとつの態様において、約0.25gの単回投与量は、時間枠約2分〜約1時間かけて、例えば、約30分で静脈内投与することができる。別の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、他の医薬(例えば抗生物質)治療の投与と同時に、静脈内投与することができる。
先に説明された治療的又は予防的方法において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、少なくとも1種の他の抗生物質と同時に又は引き続きのいずれかで投与することができる。一部の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物が無効である1種又は複数のグラム陰性菌種及び／又はグラム陽性菌株に対して有効な(例えば、殺菌性)であることができる少なくとも1種の他の抗生物質を、N15,N15-ジアルキル抗生物質に加えて投与することができる。一部の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び少なくとも1種のグラム陰性菌種に対し有効である(例えば殺菌性)少なくとも1種の抗生物質は、ダルババンシン組成物中の混合物として投与することができる。
医薬組成物
本発明は、先に説明された方法に従いN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の製剤された医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、化合物又は組成物が個体へ投与される場合にN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の治療的又は予防的に有効な血漿レベルを、数日間、少なくとも約3日間、少なくとも約5日間、又は少なくとも約1週間又はそれよりも長く提供するのに十分なN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の量、並びに医薬として許容される担体を含有する、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の単位剤形の形であることができる。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の治療的又は予防的に有効な血漿レベルは、少なくとも約4mg/L血漿であることができる。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の血漿レベルは、当該技術分野において周知の方法、例えば液体クロマトグラフィー、質量分析、又は微生物学的バイオアッセイにより測定することができる。当業者に公知であるように、血清中のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、同様の方法を用い血清中で定量化することができる。
N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物は、任意に、個体への投与のための医薬として許容される形、例えば医薬として許容される無毒の塩であることができる。
N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物に適した塩の例は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、コハク酸、クエン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、グルタミン酸、樟脳酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、ケイヒ酸などの、有機酸及び無機酸の両方で標準反応により形成された塩を含む。ダルババンシンと塩を形成することができる、塩基の代表例は、アルカリ金属又はアルカリ土類金属との塩、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、及び水酸化バリウム、アンモニア及び脂肪族、脂環式、又は芳香族有機アミン、例えばメチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、及びピコリンなどを含む(例えば米国特許第5,606,036号明細書参照)。
一部の態様において、例えば静脈内注射のような、非経口投与に適している、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の医薬として許容される水性製剤を提供することができる。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、式(V)である。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の水性製剤を調製するために、当該技術分野において周知の方法を使用し、並びに当該技術分野において通常使用される医薬として許容される担体、希釈剤、賦形剤、又は他の添加剤を、使用することができる。ひとつの態様において、静脈内注射のための医薬として許容される水性製剤は、5％デキストロースを含む。
非経口投与のための医薬組成物は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物及び生理的に許容できる希釈剤、例えば脱イオン水、生理食塩水、5％デキストロース、水混和性溶媒(例えば、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど)、非-水性ビヒクル(例えば、トウモロコシ油、綿実油、ピーナッツ油、及びゴマ油などの油)、又は他の通常使用される希釈剤を含む。この製剤は更に、可溶化剤、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又は他の公知の可溶化剤、溶液を安定化するための緩衝液(例えば、クエン酸、酢酸、及びリン酸)及び／又は酸化防止剤(例えば、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム)などを含有することもできる(例えば、米国特許第6,143,739号明細書参照)。他の適当な医薬担体及びそれらの製剤は、「Remington's Pharmaceutical Sciences」、E. W. Martinに説明されている。当該技術分野において公知であるように、本発明の医薬調製物は、許容できるレベルの粒子を含み(例えば、粒子-非含有)、並びにパイロジェンを含まないように調製することもできる(例えば、米国薬局方の注射剤の必要要件に合致)。
ひとつの態様において、医薬組成物は、時に安定化剤又は安定化剤混合物を含有する、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の乾燥された(例えば凍結乾燥された)投与量を、可溶化に十分な容量の水及び好ましくは脱イオン水の量中に、溶解することにより提供される。例えば、可溶化するのに十分な量の水は、約10mLであることができ、得られるpHは、3.0を上回る、及び約3.5〜4.5であることができる。静脈内投与のためのドリップバッグ中に含まれる量のような、5％デキストロースを含有する第二の量の水性希釈剤のそれへの添加によるこの溶液の希釈は、この溶液のpHを約5〜5.5に上昇する。別の態様において、ドリップバッグ中の溶液のpHは、約4.5であることができる。この水溶液の第二の量は、脱イオン化された又は滅菌された、又は脱イオン化されかつ滅菌され得ることができる。ひとつの態様において、水性希釈剤は5％デキストロースである。他の可溶化法、及びそれらのN15,N15-ジアルキル抗生物質製剤は、当業者には容易に明らかであろう。
非経口投与のための医薬組成物は、殺菌に有効なN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物が保持されるような条件下で、任意に賦形剤を含有し、先に説明されたような治療的又は予防的有効量でN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の1種又は複数の単位投与量を含有する無菌のバイアル中に作製することができる。この化合物又は組成物は、乾燥された(例えば凍結乾燥された)散剤の形であってもよく、そうでなくともよい。使用前に生理的に許容できる希釈剤が添加され、この溶液が患者へ投与するために注射筒に吸い込まれる。先に説明された医薬製剤は、例えばe-ビーム又はγ線滅菌法、又は滅菌濾過を含む、いずれか許容できる手段で滅菌することができる。
非経口投与のための製剤は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物を、最終調製物1ml中にN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物約0.1〜約100mg、約0.5〜約50mg、約1〜約10mg、約1〜約5mg、又は約2〜約4mgのような濃度で含有することができる。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、式(V)である。
一部の態様において、本発明の医薬組成物は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物及び1種又は複数の追加の抗生物質の混合物を含有する。好ましくは、この混合物中の少なくとも1種の非-ダルババンシン抗生物質は、例えば、アズスレオナムのように、グラム陰性菌の1種又は複数の種に対し、及び／又は例えばイルネゾリド(ilnezolide)もしくはダプトマイシンのように、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物が有効でない1種又は複数のグラム陽性菌株に対し、有効(例えば、殺菌性)であることができる。この混合物は、先に説明されたような医薬として許容される担体も含有することができる。一部の態様において、医薬組成物は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物及び1種又は複数の追加の抗生物質を含有する。一部の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質組成物は、式(V)のN15,N15-ジメチル抗生物質化合物を含有する。
一部の態様において、本発明の医薬組成物は、1種又は複数のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物のより活性の少ない又は不活性の物質へ分解を阻害する1種又は複数の安定化物質を含有する。本明細書において使用される用語「安定化物質」又は「安定化剤」は、組成物中に存在する1種又は複数のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物のレベルを安定化する物質を意味する。「安定化に有効量」は、組成物中に存在する1種又は複数のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の長期安定性を増強するのに十分である安定化剤の量を意味する。一部の態様において、安定化の有効量は、各々は単独では安定化作用を提供するのに十分な量では存在することができない、2種又はそれよりも多い安定化物質の混合物により提供される。
安定化剤の例は、例えば、非イオン性物質、例えば糖、例えば、単糖、二糖、もしくは多糖、又はそれらの誘導体、糖アルコール又はポリオールを含む。このような安定化物質は、例えば、マンニトール、乳糖、ショ糖、ソルビトール、グリセロール、セルロース、トレハロース、マルトース、ラフィノース、又はそれらの混合物を含む。
ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質製剤は、マンニトールを含有する。別の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質製剤は、更に乳糖を含有する。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質組成物は、マンニトール:N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の質量比1:2で製剤される。別の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質組成物は、マンニトール:乳糖:N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の質量比1:1:4で製剤される。マンニトール及び乳糖の組合せは、いずれかの物質単独よりもより大きい安定性を提供することができる。本発明の医薬組成物のpHは、例えば約2〜約9、あるいは約3〜約8、あるいは約4〜約7、あるいは約5〜約6、あるいは約3.5〜約4.5であることができる。本発明の医薬組成物のpHは、例えば約9未満、あるいは約8未満、あるいは約7未満、あるいは約6未満、あるいは約5未満、又はあるいは約4未満であることができる。本発明の医薬組成物のpHは、例えば約2よりも大きい、約3よりも大きい、あるいは約3.5よりも大きい、あるいは約4よりも大きい、あるいは約4.5よりも大きい、あるいは約5.0よりも大きい、あるいは約5.5よりも大きい、あるいは約6.0よりも大きい、あるいは約6.5よりも大きい、又はあるいは約7.0よりも大きいこともできる。
一部の態様において、1種又は複数の手法を、MAG(本発明のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物の誘導体又はアシルグルクロンアミン部分を欠いているダルババンシン化合物)及び／又は他の分解物の形成を低下するために使用することができる。例えばマンニトールのような安定化物質の存在下、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の凍結乾燥を使用し、形成されるMAGの量を低下することができる。
N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物を、安定性を増強するために、周囲温度よりも低い、例えば約5℃で貯蔵することができる。
高用量レベルでのN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物の毎週の投薬(すなわち、驚くほど高く及び長期持続される血清レベルを生じる)は、下記実施例において示されるような、毎日又は更には1日2〜4回投与される通常の抗生物質の比較的低い投与量の標準療法で認められるものに類似した又はより良い、驚くほど良好な安全性プロファイルを示すことができる。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物の高用量(すなわち、例えば200〜5000mgの高く及び長期持続される血清レベルを生じる)を、他の抗生物質よりもより少ない頻度で投与することができ、これ有害な副作用を伴わずに、改善された有効性及び患者の服薬遵守を可能にする。
ある態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物による治療は、有害事象の低い発生を生じる。重篤な有害事象とは、死亡を生じ、生命を脅かし、入院又は入院期間の延長を生じるか、又は永久のもしくは著しい不能もしくは不能を生じるような用量で発生するいずれかの有害な薬物経験を含む。
キット
本発明は、細菌感染症の治療又は予防の方法において使用するためのキットも包含している。これらのキットは、例えば、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物の少なくとも1種の単位投与量を含む、本発明の医薬化合物又は組成物、並びに細菌感染症の治療又は予防のための使用に関する情報を医療関係者に提供する説明書を含むことができる。説明書は、印刷物又はフロッピー（登録商標）ディスク、CDもしくはDVDのような電子媒体中の形で、又はそのような指示を入手することができるウェブサイトアドレスの形で、提供される。N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物の単位投与量は、個体へ投与される場合に、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物の治療的又は予防的に有効な血漿レベルを個体において少なくとも5日間維持することができるような、用量を含有することができる。一部の態様において、キットは、少なくとも5日間間をあけて、約1週間間をあけて投与される、又は2回目用量よりも約1.5〜約3倍多いN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物の初回用量含む、2種の単位剤形を含む。一部の態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物は、無菌の水性医薬組成物又は乾燥粉末(例えば凍結乾燥された)組成物として含むことができる。ひとつの態様において、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物は、式(V)である。
一部の態様において、適当な包装が提供される。本明細書において使用される「包装」は、システムにおいて習慣的に使用され、並びに個体への投与に適したN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物及び組成物を固定された限界内に維持することが可能である、固形マトリックス又は物質を意味する。このような物質は、ガラス及びプラスチック(例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、及びポリカーボネート)ボトル、バイアル、紙、プラスチック及び封筒に積層されたプラスチック箔などを含む。e-ビーム滅菌技術が使用される場合は、包装は、内容物の滅菌を可能にするのに十分に低密度でなければならない。
キットは任意に、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物の投与装置、例えば静脈内投与用の注射筒もしくは装置、及び／又は無菌液、例えば、乾燥粉末(例えば凍結乾燥された)組成物を投与のために調製する、5％デキストロースのような希釈剤も備える。
本発明のキットは、前記方法に説明されたN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物と共に使用するために、追加のN15,N15-ジアルキル抗生物質化合物又は組成物、非-ダルババンシン抗生物質又は非-ダルババンシン抗生物質の混合物も含有することができる。
下記合成及び生物学的実験は、本発明の例示をもたらし、本発明の範囲を限定するために構築されるものではない。
実施例15：N 15 ,N 15 -ジメチルダルババンシンB 0 の精製
A-40926の調製及び引き続きのダルババンシン合成は、先に説明されている。本実施例は、本発明に従い調製されたダルババンシン化合物の混合物からの、式(V)のN15,N15-ジメチル抗生物質化合物の精製、すなわち、N15,N15-ジメチルダルババンシンB0の精製を説明している。当業者に明らかであるように、N15,N15-ジメチル-ジメチルダルババンシンB0は、2個のメチル基をN15上に伴う、修飾されたダルババンシンB0である。本実施例及び以下の実施例の目的のために、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物B0は、化合物が依然完全に特徴づけられていない項目で「化合物A」と称される。同じく後の項目における便宜上、N15,N15-ジメチル-ジメチルダルババンシンB0は、ダルババンシンB2と称される。N15,N15-ジメチル抗生物質化合物B0、ダルババンシンB2及び化合物Aは、同じ分子である。
試料調製
本明細書の方法に従い調製されたダルババンシン精製からの有機水溶液約2Lを、アセトニトリル及び水を減圧下蒸発させ、濃縮した。残留物へのジエチルエーテルの添加は、粗固形物6gを得た。水/アセトニトリル混合液90/10v/vへの溶解後、この固形物を、シラン化(silanized)されたシリカゲル(床容量1L；カラム内径=5cm)上で、水(pH3酢酸)/アセトニトリルステップ-溶離勾配を使用し、精製した。化合物A含有画分をプールし、少ない容量(数ml)へ濃縮し、分取HPLC精製を施した。
濃厚化された画分を収集した。アセトニトリルを減圧下蒸発させ凍結乾燥した後、化合物A数μgを回収した。
実施例16：化合物AのN 15 -アミン置換基の同定
化合物Aは、分子量1828Daであり、ダルババンシン成分B0及びB1(MW 1814)よりも14単位大きい。HPLC-ESI-MS分析は、この複合体の他の成分とは異なり、変動は末端アミノ基N15にあることを明らかにした。
メチルアミン基(R-NHCH3)を有する他のダルババンシン化合物は、それらの断片化質量分析(ESI-MS/MS)において、31単位のニュートラル喪失(neutral loss)(-NH2CH3)を示した。化合物Aの断片化スペクトルは、31単位の代わりの 45単位の喪失を示している。この種のニュートラル喪失は、2構造仮説により、説明することができる：N15は、N,N-ジメチルアミン基(R-N(CH3)2、3級アミン)又はN-エチルアミン基(R-NHCH2CH3、2級アミン)であることができる。
加水分解され及び誘導体化された化合物AのHPLC-ESI-MS分析は、これら2つの仮説間で識別することができる。図29は、酸加水分解後にB0から生じた3種のペプチド断片を示している。2種のジ-ペプチド、アミノ基N15及び塩素原子を伴う「AA1+AA3」、及び「AA5+AA7」、並びに塩素原子を伴うトリ-ペプチド「AA2+AA4+AA6」が形成される。他の加水分解産物は、脂肪酸及びDMEP A4(ジメチルアミノ-プロピルアミノ)鎖である。
化合物Aの場合、ジペプチド「AA1+AA3」は、図30に報告されたように異ならなければならない。正確な仮説は、加水分解産物を第1級及び第2級アミンとのみ反応する誘導体化剤と反応することにより、変動することができる(図31参照)。
成分B0のジ-ペプチド「AA1+AA3」は、誘導体化剤の2つの基と反応しなければならない(図31a参照)。化合物Aの場合、ふたつの異なる誘導体化されたペプチド「AA1+AA3」を、アミノ基N15に応じて得ることができる(図31b)。提唱された仮説により理論的に予想された、これらふたつの分子は、質量分析により容易に識別できる分子量を有する。
材料
化合物A
ダルババンシン
塩酸37％、試薬等級、Rudi Pont cod. 750-11
メタノール、HPLC等級、J. T. Backer cod. 8402
AccQ TagTM Chemistry Package,、 Waters cod. WAT052880
加水分解
試料及び標準の両方の加水分解は、PICO-TAG Work Station(Waters, Mildoford, MA, USA)において実施した。
全部で360μgの化合物A及び約1mgのダルババンシン標準を、1％(w/v)フェノールを含有する6N HClの存在下で、105℃で24時間加水分解した。この反応混合物を冷却し、蒸発乾固させ、メタノールで最終容量500Lとした。
誘導体化
Waters AccQ-Fluor(商標)試薬キットを、ペプチド誘導体化のために選択した。AccQ-Fluor試薬は、N-ヒドロキシスクシンイミド-活性化されたヘテロ環式カルバメートアミン誘導体化化合物のひとつである。この誘導体試薬の構造及び反応計画は、計画2に報告した。
Figure 2007534768
「試薬希釈剤」1mlを、「試薬粉末」が入ったバイアルへ添加した。このバイアルを、10秒間激しくボルテックスし、完全に溶解するまで、55℃に温めた。再構成されたAccQ-Fluor試薬を、アセトニトリル中約10mMとした。加水分解された試料又は標準20μlを、円錐形の挿入口を備えたバイアルへ入れ、及び「AccQ-Fluorホウ酸緩衝液」20μlを添加し、短くボルテックスした。この時点で、再構成されたAccQ-Fluor試薬40μlを添加し、この試料を30秒間ボルテックスした。バイアルを、55℃で10分間加熱した。これらの条件において、アミノ基は反応し、及び結果的に副産物は最小化されなければならない。この反応後、試料は直ぐにHPLC分析される。
HPLC-UV-MS分析
Thermo Finnigan Surveyor MSポンプ、ダイオードアレイ検出器及び自動試料採取器
ESIインターフェースを装着したThermoQuest Finnigan LCQ Deca質量検出器
クロマトグラフィー：カラム：AccQ-Tag(商標)(Waters C18 NovoPak 4 _m 3.9x150mm)；カラム温度：37℃；流量：1mL/分；A相：酢酸アンモニウム140mM、pH5(酢酸)；B相：水/アセトニトリル60/40v/v；UV検出：254nm；注入容量：20μL。カラムからの溶離液は、同時にUV及び質量検出ができるように分離した。
質量分析
試料投入条件：キャピラリー温度：200℃
シースガス：N2、40(任意の単位)
補助ガス：N2、20(任意の単位)
試料投入電圧設定：極性：陽性
電源電圧：4.7kV
キャピラリー電圧：10V
チューブレンズオフセット：40V
スキャン条件：スキャンモード：フルms
スキャン範囲：100〜700amu
マイクロスキャンの数：3
最大イオン時間：50ms
結果
ダルババンシンの誘導体化され及び加水分解された断片を、HPLCにより分離し、及びESI-MSにより評価した(データは示さず)。断片AA1+AA3はサイズ737(m/z)を有し、断片AA5+AA7はサイズ689(m/z)を有し、断片AA2+AA4+AA6はサイズ1086(m/z)を有した。
化合物Aの誘導体化され及び加水分解された断片を、HPLCにより分離し、及びESI-MSにより評価した。断片AA1+AA3はサイズ737(m/z)を有し、断片AA5+AA7はサイズ581(m/z)を有し、断片AA2+AA4+AA6はサイズ1086(m/z)を有した。
AA5+AA7のサイズは、化合物AはN15,N15-ジメチル化合物であることを確認した。
実施例17：ダルババンシンB 0 のメチル化
ダルババンシンB0は、全般的に先に概略した方法に従い調製し、及び米国特許出願第2004/0142883号明細書に開示された方法に従い調製した。ダルババンシンB0の試料は、選択的第2級アミンN-メチル化を施し、N15,N15-ジメチル抗生物質B0を得た。次にこの反応混合物を、下記実施例において、HPLC-UV及びHPLC-UV-MSにより分析した。
材料
ダルババンシンB0
水、MmilliQ等級
NaBH3CN、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、Fluka cod. 71435
DMF、N,N-ジメチルホルムアミド、Carlo Erba cod. 444926
HCHO、ホルムアルデヒド溶液、36.5％水溶液、Reidel de Haen cod. 33220.
NaHCO3、炭酸水素ナトリウム、試薬等級
方法
ダルババンシン49.5mgを、丸底フラスコ中の水12.5ml及びDMF 1.5mL中に溶解した(pH3.5)。200μLの3アリコートを採取し、水800μLで希釈した(t0)。36％(v/v)ホルムアルデヒド水溶液76μL及び炭酸水素ナトリウム2.5mg(pH5.8)を、添加した。NaCNBH3の8mgを、攪拌しながら添加した後、炭酸水素ナトリウムを完全に溶解した。この反応混合物の200μLの3アリコートを直ぐに採取し、水800μL及びCH3CN 300μLで希釈し、透明な溶液を得た(t0’)。この反応混合物を、室温で30分間放置した。試料を、200μLの3アリコートで抽出し、各々水800μL及びCH3CN 300μLで希釈することにより、10及び30分後に反応媒体から採取した(t10及びt30)。
30分後、-20℃にフラスコを冷却することにより、この反応を停止した。反応は、HPLC-UV及びHPLC/UV/MS分析によりモニタリングした。
実施例18：N 15 ,N 15 -ジメチル抗生物質B 0 の構造確認
本実施例は、先の実施例からの化合物A及びN15,N15-ジメチル抗生物質B0を同定することを明らかにしている。
反応試料t0、t0'、t10及びt30を、HPLC-UVにより分析し、及び参照標準と比較した。t0'、t10及びt30のクロマトグラフィーは非常に類似しており、メチル化が迅速に生じたことを示している。
図33において、t0'、対、t0のクロマトグラフィーを示した。メチル化されたB0は、先の実施例15の化合物Aと同じ保持時間を示した。これにより、化合物Aは、B0のメチル化された誘導体であり、結果的に化合物Aの脂肪酸鎖は、10-メチルウンデカン酸であるという仮説が、明らかにされた。
HPLC-UV-MSの結果は、前段のHPLC-UV構造的結論を確認した。N15,N15-ジメチル抗生物質B0は、化合物Aのそれと完全に重複した。
従って、化合物AのN15の基は、ジメチルアミン基であり、及びエチルアミンではないことが明らかにされた。成分化合物Aの解明された構造は、図28に示している。
化合物Aの構造は更に、NMR、ESI-MS及びIRにより確認した。NMRスペクトルは、Bruker AMX 600で313Kで記録した。この試料を、DMSO-d6に溶解し、並びにプロトン及び炭素NMR帰属を、COSY-DFTP、ROESY、及びHMQCスペクトルにより決定した。混合時間350msecを、ROESY実験のために選択した。質量分析は、エレクトロスプレーイオン化により250℃でThermoquest Finnigan LCQdecaで陽性モードで測定した。赤外スペクトルは、KBron a Bruker IFS 48装置で記録した。
NMRピーク帰属は、図34に示した。表40は、B0と比較したB2の1H帰属を示している。B2のNMRスペクトルは、ダルババンシンB0と多くの類似性を明らかにしている。脂肪酸鎖は、イソプロピル末端基を含む。プロトン及び炭素化学シフトのほとんどは、B0成分について認められたものとほぼ同じであった。大きい化学シフト偏差は、アミノ酸1に属するシグナルについて観察可能である。特に、2.31ppm(13Cδ40.06ppm)の1重項は、6個のプロトンに対応する積分(integral)及びプロトンx1、1f及び1eとのNOE相関をもたらす。その化学シフト及び双極子の相関は、このシグナルが第一のアミノ酸スピンシステムに属するジメチルアミノ基に起因することを示唆している。
Figure 2007534768
赤外スペクトルは、図35に提供した。ESI-MSは、図36に提供した。このデータは、化合物Aの構造を、ダルババンシンB2(N15,N15-ジメチルダルババンシンB0)として確認した。
実施例19：ダルババンシンB 2 (N 15 ,N 15 -ジメチルダルババンシンB 0 )の活性
N15,N15-ジメチルダルババンシンB0、いくつかのN15-モノメチルダルババンシン化合物及びいくつかの公知の抗生物質を単離し、in vitroにおいてそれらの抗菌活性について試験した。これらの化合物は、先の実施例及び米国特許出願第2004/0142883号明細書に従い調製した。個々のダルババンシン化合物は、HPLCにより精製した。
試料調製
単離したN15-モノメチルダルババンシン化合物及びN15,N15-ジメチル抗生物質化合物を、0.01N HCl:DMSO:95:5v/v中に溶解した。溶解前に、各試料を、HPLCにより分析し、定量した。これらの溶液を、N15-モノメチルダルババンシン化合物について256μg/ml(A0、A1、B0、及びB1のダルババンシン)及びN15,N15-ジメチル抗生物質B0(下記表においては「B2ダルババンシン」と称する)について128μg/mlで調製した。
主要ピークのクロマトグラフィー純度は、面積％、対、総クロマトグラフィー面積で評価し、表41に報告した。
Figure 2007534768
微生物学的特徴決定
試験した化合物は、先に説明され単離されたN15-モノメチルダルババンシン化合物及びN15,N15-ジメチル抗生物質化合物に加え、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物を含有するダルババンシン組成物(「DA025/A」)、バンコマイシン(VA)(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO)、ゲンタマイシン(GE)(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO)、ペニシリンG(Pen.G)(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO)、及びアンホテリシンB(Amph.B)(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO)であった。
微生物
使用した微生物は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC) (Rockville, MD)、SmithKline及びFrench Laboratories (SKF)、並びにUpjohn Company (UC) (Kalamazoo, MI)から入手した参照菌株であった。
最小阻害濃度(MIC)決定
MICは、標準NCCLS手法(NCCLS Document M7-A6, Vol. 23, No. 2, 「Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically」承認されたガイドライン、2003年1月、その全体は本明細書に参照として組入れられている)に従うブロスマイクロ希釈法により、30％成体ウシ血清(BS)(PAA Laboratories GmBH, Haidmannweg Pasching Austria)を伴う又は伴わずに、細菌接種約5x105CFU/mlを用い、決定した。使用した培地は、CaCl2及びMgCl2で、各々、最終濃度20mg/L及び10mg/Lに調節した使用されたカチオン調節したMoller Hintonブロス(Difco Laboratories, Detroit, MI)であった。試験は35℃で20〜24時間インキュベーションした後に行った。
結果
MIC結果は、下記表42にまとめた。グラム陽性菌のパネルに対し、様々な単離されたN15-モノメチルダルババンシン化合物及びN15,N15-ジメチル抗生物質化合物("B2")は、N15,N15-ジアルキル抗生物質化合物を含有するDA組成物と同等又はそれよりもわずかに高かった。試験化合物を溶解するために使用したブランク溶液(HCl 0.01N/DMSO 95:5)は、失活した。
重要なことに、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物("B2")は、グラム陽性菌に対する活性を示し、これはN15-モノメチルダルババンシン化合物と同等又はそれよりも大きかった。例えば、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物("B2")の活性は、範囲のあるグラム陽性菌についてB0の活性と同等又はそれよりも大きかった。
極めて重要なことに、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物("B2")は、範囲のあるグラム陰性菌に対する活性を示した。事実、このアッセイにおいてグラム陰性菌の代表的パネルに対して活性のある化合物は、単に単離されたN15,N15-ジメチル抗生物質化合物("B2")であり、これはMICの範囲16〜32mg/Lの活性を示した。
VA及びGE参照化合物のATCC参照菌株に対するMIC値は、NCCLS値の範囲であった。
Figure 2007534768
実施例20：ダルババンシンB 2 を含有するダルババンシン組成物の調製
精製したダルババンシンB0、ダルババンシンB1、及びダルババンシンB2を含有する組成物を、調製的HPLCにより生成した。
先の方法で調製されたダルババンシン混合物を、HPLCにより精製した。この精製は、Kromasil C18、16μm、100Å細孔サイズ上で実施した。緩衝液システムは、pH5.5に調節した、50mM NH4H2PO4水溶液であった。溶離のための移動相は、66/34緩衝液/アセトニトリル混合液であった。このプロセスは、HPLC分析により、97％のダルババンシンB0、ダルババンシンB1、及びダルババンシンB2を含有する、ダルババンシン組成物を生じた。典型的分析的HPLCクロマトグラフィーは、図37に示し、ダルババンシンB0が約29.901、ダルババンシンB1が約30.79(未標識)及びダルババンシンB2が約33.282であった。
イソB 0 の特徴決定
イソB0の質量分析(図38)は、1プロトン化された分子に相当するm/z1817でイオン、及びカチオン付加物又は部分的給源断片化に起因した他のイオンを示している。分子量1816Da及び断片化パターンは、B成分について認められたものと同じであり、これはB0のジアステレオマーとしてのイソB0の同定を支援している(逆の対掌性を有する1個又は複数の立体中心を伴う同じ分子)。
イソB0のレベルは、pHが様々な調製ステップにおいて大きく増加する場合には、増加することがわかった。従ってイソB0は、ダルババンシンの塩基性処置により調製された。
試料調製(BI-K0096)
イソB0約300mgを、ダルババンシンバッチ027の10gから、水中NaOH(pH12.7)による室温での長時間(約165時間)処置により、得た。中和後反応生成物を、シラン化されたシリカゲルカラム上で、段階的勾配法で水(pH3.5；酢酸)/アセトニトリルで溶出することで行う二重カラムクロマトグラフィー精製が施された、褐色粗固形物として回収した。
濃厚な画分から、BI-K0096の固形物79.98％を単離した。HPLCプロファイルは、図39に示した。
BI-K0096のダルババンシン不純物イソB0との対応を証明するために、調製された化合物BI-K0096を、3種の異なる方法を用い、HPLCにより分析した。試験した全ての条件において、BI-K0096は、不純物イソB0とクロマトグラフィー的に同一であった。
構造解析
MS及びMS/MSスペクトルを、図40A-Cに示した。これらの質量スペクトルは、成分B0のものと同一である。この質量分析から、立体化学的変動を確認することは不可能である。
イソB0の1H及び13C NMRスペクトルは、600MHz質量分析計上でDMSO-d6で記録し、ダルババンシンのスペクトルとの多くの類似性や、重要な差異も明らかにした(各々、図41及び42参照)。イソB0及びB0の帰属は、表43に報告し、及びプロトンの対応する位置は、図43に同定した。
Figure 2007534768
Figure 2007534768
この分子の一部について、プロトン及び炭素化学シフトは、B0成分のものと同じである。大きい化学シフトの逸脱が、アミノ酸1-4に属するシグナルについて得られた。3種のスピンシステムのプロトンは、無視できる陽性又は陰性Δδ(化学シフト差)を示している。特にアミノ酸3は、より大きい数の関連のある変化を示し(x3、w3、3f、3d)；x3は、その3JHHの重要な修飾を示す唯一の共鳴であり、カップリング定数CH(x3)-NH(w3)は、ここでは6.54Hzであるのに対し、B0では約10.4であった。更にROESY実験は、x3に関する双極子相関の差異、更にはほとんどのプロトンはx3に近づくことを示す。NMR知見は報告され、及びテイコプラニンエピマーに関して公表された文献データは、x3がエピマー化中心であり、及びこのエピマー化は少なくとも分子の一部の立体配置の変化を誘導することを明らかにした。
微生物学的特徴決定
使用した化合物は以下であった：
・先に説明したイソB0
・ダルババンシン(DA) (BI-K397バッチ025/A/AS1)参照標準
・バンコマイシン(VA) (バッチ121K1140 Sigma Chemical Co.St Louis, MO, USA)
・ゲンタマイシン(GE) (バッチ57H1099 Sigma Chemical Co.St Louis, MO, USA)
・ペニシリンG(Pen.G) (バッチ43H1134 Sigma Chemical Co.St Louis, MO, USA)
・アンホテリシンB(Amph.B) (バッチ61H4039 Sigma Chemical Co.St Louis, MO, USA)。
バンコマイシン、ダルババンシン及びアンホテリシンBは、ジメチルスルホキシド(DMSO)中に10mg/mLで溶解し、蒸留水で希釈し；ゲンタマイシン及びペニシリンGは、蒸留水中に希釈した。
培地
Moller Hintonブロス(Difco Laboratories, Detroit, MI, USA)は、CaCl2及びMgCl2で、各々最終濃度20mg/L及び10mg/Lに調節した。
血清
成体ウシ血清(BS)(バッチ A05123-159 PAA Laboratories GmBH, Haidmannweg Pasching Austria)
微生物
使用した微生物は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC) (Rockville, MD)、SmithKline及びFrench Laboratories (SKF)、並びにUpjohn Company (UC) (Kalamazoo, MI)から入手した参照菌株であった。
最小阻害濃度(MIC)
MICは、標準NCCLS手法[13]に従うブロスマイクロ希釈法により、30％ウシ血清を伴う又は伴わずに、細菌接種約5x105CFU/mlを用い、決定した。試験は35℃で20〜24時間インキュベーションした後に行った。
結果
グラム陽性菌のパネルに対し、イソB0の活性は、ダルババンシンに非常に類似している(表44参照)。
Figure 2007534768
前記本発明は、理解を明確にする目的で例示及び実施例により一部詳細に説明されているが、当量者には、本発明の精神及び範囲から逸脱しない限りは、ある種の変更及び修飾を実践することができることは明らかであろう。従ってこの説明は、添付された「特許請求の範囲」によって描写される、本発明の範囲を限定するものとして構成されてはいない。
本明細書において列記された全ての出版物、特許及び特許出願は、あらゆる目的で、各々の出版物、特許及び特許出願が参照として組入れられていることが具体的かつ個別に示される場合とおなじ程度に、その全体が本明細書に参照として組入れられている。
図1Aは、25℃での、マンニトールを伴う又は伴わない、様々な医薬組成物のダルババンシン成分B0の量、対、時間を示す。 図1Bは、25℃での、マンニトールを伴う又は伴わない、様々な医薬組成物のMAGの量、対、時間を示す。 図2Aは、40℃での、マンニトールを伴う又は伴わない、様々な医薬組成物のダルババンシン成分B0の量、対、時間を示す。 図2Bは、40℃での、マンニトールを伴う又は伴わない、様々な医薬組成物のMAGの量、対、時間を示す。 図3Aは、25℃での、マンニトール及び／又は乳糖を含有する様々な医薬組成物のダルババンシン成分B0の量、対、時間を示す。 図3Bは、25℃での、マンニトール及び／又は乳糖を含有する様々な医薬組成物のMAGの量、対、時間を示す。 図4Aは、40℃での、マンニトール及び／又は乳糖を含有する様々な医薬組成物のダルババンシン成分B0の量、対、時間を示す。 図4Bは、40℃での、マンニトール及び／又は乳糖を含有する様々な医薬組成物のMAGの量、対、時間を示す。 図5は、ダルババンシンの単回1000mg静脈内注入後の、ダルババンシン血漿濃度、対、時間を示す。 図6は、ダルババンシンのヒト血清アルブミンへの結合に関する等温滴定熱量計データ(上側)、及びダルババンシン:タンパク質の2:1結合モデルから決定された曲線に合致したデータの図示(下側)を示す。 図7は、ダルババンシンのエレクトロスプレーイオン化質量分析を示す。 図8は、ダルババンシン濃度、対、ダルババンシン多量体の単量体に対する集団比のグラフであり、ダルババンシン多量体の単量体に対する集団比が、ダルババンシン濃度の増加と共に増加することを示している。 図9は、pH、対、ダルババンシン多量体の単量体に対する集団比のグラフであり、ダルババンシン多量体の単量体に対する集団比が、pHの増加と共に増加することを示している。 図10は、ギ酸アンモニウム5mM(pH5)溶液中のダルババンシンのエレクトロスプレーイオン化質量分析を示す。 図11は、ギ酸アンモニウム50mM(pH5)溶液中のダルババンシンのエレクトロスプレーイオン化質量分析を示す。 図12は、ギ酸アンモニウム100mM(pH5)溶液中のダルババンシンのエレクトロスプレーイオン化質量分析を示す。 図13は、水中のテイコプラニン(50μg/mL)のエレクトロスプレーイオン化質量分析を示す。 図14は、水中のテイコプラニン(100μg/mL)のエレクトロスプレーイオン化質量分析を示す。 図15は、26℃(pH7.4)でのダルババンシン/トリ-ペプチド結合に関する見かけの解離定数に対するHSAの作用を示す。 図16は、同じトリ-ペプチド溶液を使用する、同一条件下での、トリ-ペプチドのバンコマイシン及びダルババンシンに対する結合の等温熱量計(ITC)データの比較を示す。 図17A及び17Bは、トリ-ペプチドリガンド及びHSAとのダルババンシン単量体及び多量体(二量体を含む)の可能性のある相互作用を示す。図17Aは、溶液中の単量体-二量体平衡のダルババンシン、単量体としてのHSA上の2つの個別の部位への結合を示す。図17Bは、溶液中のダルババンシン二量体へ結合しているリガンド及びより弱いHASへ結合したダルババンシン単量体を示す。 図18は、平均ダルババンシン血漿濃度-時間プロファイルを提供する。 図19は、平均ダルババンシン血漿濃度-時間プロファイルを示す。 図20は、追加の平均ダルババンシン血漿濃度-時間プロファイルを示す。 図21は、相対治療期間を通じたダルババンシン曝露、対、クレアチニンクリアランスのグラフを提供する。 図22は、相対治療期間を通じた曝露、対、全曝露の比較を提供する。 図23は、正常腎機能の対象と重度腎不全対象に関するダルババンシン濃度-時間プロファイルを提供する。 図24は、ダルババンシン血漿濃度時間プロファイルを提供する。 図25は、治療期間を通じたダルババンシン曝露の比較を提供する。 図26は、選択された原子に番号を付けた、抗生物質A 40926化合物及びダルババンシン化合物の構造を提供する； 図27は、ダルババンシンB0の構造を提供する； 図28は、本発明の例証的N15,N15-ジメチル抗生物質化合物の構造を提供する； 図29-31は、本発明のN15,N15-ジメチル抗生物質化合物の構造を証明する、本発明の例を例証する計画を提供する。； 図29-31は、本発明のN15,N15-ジメチル抗生物質化合物の構造を証明する、本発明の例を例証する計画を提供する。； 図29-31は、本発明のN15,N15-ジメチル抗生物質化合物の構造を証明する、本発明の例を例証する計画を提供する。； 図32は、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物の構造を証明するESI及びHPLCクロマトグラフィーを提供する。 図33は、N15,N15-ジメチル抗生物質化合物の構造を証明するESI及びHPLCクロマトグラフィーを提供する。 図34は、ダルババンシンB2の構造を提供する； 図35は、ダルババンシンB2(N15,N15-ジメチルダルババンシンB0)の赤外スペクトルを提供する； 図36は、ダルババンシンB2(N15,N15-ジメチルダルババンシンB0)のESI-MSスペクトルを提供する；及び 図37は、本発明の組成物のHPLC痕跡を図示している。 図38は、イソB0の質量分析を提供する。 図39は、イソB0のHPLC痕跡を図示する。 図40A-Cは、イソB0の質量スペクトルを提供する。 図41は、イソB0の1H-NMRスペクトルを提供する。 図42は、イソB0の13C-NMRスペクトルを提供する。 図43は、ダルババンシンのプロトン位置の同定を提供する。 図44は、大腿部(大腿部)-感染マウスにおけるダルババンシンの血漿薬物動態を提供する。 図45は、肺炎球菌のin vivo殺傷に対するダルババンシンの単回投与量の経時的作用を提供する。 図46は、黄色ブドウ球菌のin vivo殺傷に対するダルババンシンの単回投与量の経時的作用を提供する。 図47は、ダルババンシン投薬間隔と肺炎球菌に対する有効性の関係を提供する。 図48は、ダルババンシン投薬間隔と黄色ブドウ球菌に対する有効性の関係を提供する。 図49は、ダルババンシン PK/PDパラメータと肺炎球菌に対する有効性の関係を提供する。 図50は、ダルババンシン PK/PDパラメータと黄色ブドウ球菌に対する有効性の関係を提供する。 図51は、様々な菌株に対するダルババンシンの用量-反応曲線を提供する。 図52は、肺炎球菌及び黄色ブドウ球菌に対するダルババンシンの用量-反応曲線を提供する。 図53は、肺炎球菌に感染した正常及び好中球減少症の両マウスにおけるダルババンシンの用量-反応曲線を提供する。 図54は、肺及び大腿部の両感染症モデルにおけるダルババンシンの用量-反応曲線を提供する。

Claims (163)

  1. ダルババンシン因子B0並びにダルババンシン因子A0、A1、B1、B2、C0及びC1からなる群より選択される少なくとも1種の追加のダルババンシン因子を含む医薬として許容されるビヒクルとの再構成に適した、無菌の安定した粒子-非含有ダルババンシン散剤を含有する剤形であって、
    ここで、因子B0の含量は、存在する全ダルババンシン成分の約75％HPLC分配以上であり、及びイソB0の含量は、存在する全ダルババンシン成分の約3.5％HPLC分配を超えない、前記剤形。
  2. 安定化物質を更に含む、請求項1記載の剤形。
  3. 前記安定化物質がマンニトールである、請求項2記載の剤形。
  4. 前記安定化物質が、マンニトール及び乳糖の混合物である、請求項2記載の剤形。
  5. イソB0の含量が、0.1％HPLC分配を超えない、請求項1記載の剤形。
  6. ダルババンシン因子B0、A0、A1、B1、及びB2を含む、請求項1記載の剤形。
  7. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約80％HPLC分配である、請求項1記載の剤形。
  8. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約85％HPLC分配である、請求項1記載の剤形。
  9. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約90％HPLC分配である、請求項1記載の剤形。
  10. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約3.0％HPLC分配を超えない、請求項1記載の剤形。
  11. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約2.5％HPLC分配を超えない、請求項1記載の剤形。
  12. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約2％HPLC分配を超えない、請求項1記載の剤形。
  13. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約1.5％HPLC分配を超えない、請求項1記載の剤形。
  14. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約1％HPLC分配を超えない、請求項1記載の剤形。
  15. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5％HPLC分配を超えない、請求項1記載の剤形。
  16. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約3.0％HPLC分配である、請求項1記載の剤形。
  17. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約2.0％HPLC分配である、請求項1記載の剤形。
  18. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約1.0％HPLC分配である、請求項1記載の剤形。
  19. ダルババンシン因子B0並びにダルババンシン因子A0、A1、B1、B2、C0及びC1からからなる群より選択される少なくとも1種の追加のダルババンシン因子を含有する医薬組成物であって、
    ここで因子B0の含量は、存在する全ダルババンシン成分の約75％HPLC分配以上であり、及びここでイソB0の含量は、存在する全ダルババンシン成分の約3.0％HPLC分配を超えない、前記組成物。
  20. 安定化物質を更に含む、請求項19記載の医薬組成物。
  21. 前記安定化物質がマンニトールである、請求項20記載の医薬組成物。
  22. 前記安定化物質が、マンニトール及び乳糖の混合物である、請求項20記載の医薬組成物。
  23. ダルババンシン因子B0、A0、A1、B1、及びB2を含む、請求項19記載の医薬組成物。
  24. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約80％HPLC分配である、請求項19記載の医薬組成物。
  25. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約85％HPLC分配である、請求項19記載の医薬組成物。
  26. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約90％HPLC分配である、請求項19記載の医薬組成物。
  27. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約3.0％HPLC分配を超えない、請求項19記載の医薬組成物。
  28. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約2.5％HPLC分配を超えない、請求項19記載の医薬組成物。
  29. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約2.0％HPLC分配を超えない、請求項19記載の医薬組成物。
  30. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約1.5％HPLC分配を超えない、請求項19記載の医薬組成物。
  31. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約1％HPLC分配を超えない、請求項19記載の医薬組成物。
  32. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5％HPLC分配を超えない、請求項19記載の医薬組成物。
  33. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約3.0％HPLC分配である、請求項19記載の医薬組成物。
  34. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約2.0％HPLC分配である、請求項19記載の医薬組成物。
  35. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約1.0％HPLC分配である、請求項19記載の医薬組成物。
  36. ダルババンシン因子B0及びイソB0を含有する、医薬として許容されるビヒクルによる再構成に適した無菌の安定した粒子-非含有ダルババンシン散剤を含有する剤形であって、
    ここで因子B0含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約75％以上であり、及びここでイソB0含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約3％を超えない、前記剤形。
  37. 安定化物質を更に含む、請求項36記載の剤形。
  38. 前記安定化物質がマンニトールである、請求項37記載の剤形。
  39. 前記安定化物質が、マンニトール及び乳糖の混合物である、請求項37記載の剤形。
  40. ダルババンシン因子B0、A0、A1、B1、及びB2を含む、請求項36記載の剤形。
  41. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約80％HPLC分配である、請求項36記載の剤形。
  42. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約85％HPLC分配である、請求項36記載の剤形。
  43. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約90％HPLC分配である、請求項36記載の剤形。
  44. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約3.0％HPLC分配を超えない、請求項36記載の剤形。
  45. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約2.5％HPLC分配を超えない、請求項36記載の剤形。
  46. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約2％HPLC分配を超えない、請求項36記載の剤形。
  47. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約1.5％HPLC分配を超えない、請求項36記載の剤形。
  48. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約1％HPLC分配を超えない、請求項36記載の剤形。
  49. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5％HPLC分配を超えない、請求項36記載の剤形。
  50. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約3.0％HPLC分配である、請求項36記載の剤形。
  51. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約2.0％HPLC分配である、請求項36記載の剤形。
  52. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約1.0％HPLC分配である、請求項36記載の剤形。
  53. ダルババンシン因子B0及びイソB0を含有する医薬組成物であって、
    ここで、因子B0含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約75％以上であり、及びここでイソB0含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約3％を超えない、前記組成物。
  54. 安定化物質を更に含む、請求項53記載の医薬組成物。
  55. 前記安定化物質がマンニトールである、請求項54記載の医薬組成物。
  56. 前記安定化物質が、マンニトール及び乳糖の混合物である、請求項54記載の医薬組成物。
  57. ダルババンシン因子B0、A0、A1、B1、及びB2を含む、請求項53記載の医薬組成物。
  58. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約80％HPLC分配である、請求項53記載の医薬組成物。
  59. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約85％HPLC分配である、請求項53記載の医薬組成物。
  60. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の少なくとも約90％HPLC分配である、請求項53記載の医薬組成物。
  61. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約3.0％HPLC分配を超えない、請求項53記載の医薬組成物。
  62. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約2.5％HPLC分配を超えない、請求項53記載の医薬組成物。
  63. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約2％HPLC分配を超えない、請求項53記載の医薬組成物。
  64. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約1.5％HPLC分配を超えない、請求項53記載の医薬組成物。
  65. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約1％HPLC分配を超えない、請求項53記載の医薬組成物。
  66. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5％HPLC分配を超えない、請求項53記載の医薬組成物。
  67. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約3.0％HPLC分配である、請求項53記載の医薬組成物。
  68. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約2.0％HPLC分配である、請求項53記載の医薬組成物。
  69. イソB0の含量が、存在する全ダルババンシン成分の約0.5〜約1.0％HPLC分配である、請求項53記載の医薬組成物。
  70. 下記式：
    Figure 2007534768
     (式中、R2は、C10-14アシルである。)
    で表される化合物。
  71. 前記R2が、8-メチルノナン酸、n-デカン酸、9-メチル-デカン酸、n-ウンデカン酸、10-メチル-ウンデカン酸、n-ドデカン酸、11-メチル-ドデカン酸、n-トリデカン酸、12-メチル-トリデカン酸、及びn-テトラデカン酸からなる群より選択される、請求項70記載の化合物。
  72. 前記R2が、10-メチル-ウンデカン酸である、請求項70記載の化合物。
  73. 下記式：
    Figure 2007534768
     の化合物。
  74. 式1：
    Figure 2007534768
     [式中、Mは、水素、α-D-マンノピラノシル、又は6-O-アセチル-α-D-マンノピラノシルであり；
    Gは、水素、グルクロナミン又はアシルグルクロナミンであり；及び
    Xは、アミノアルキルアミノである。]
    で表される化合物、又はそれらの医薬として許容される塩もしくは溶媒和物。
  75. 式2：
    Figure 2007534768
     を有する、請求項74記載の化合物。
  76. ダルババンシン因子B0及びB2を含有する、医薬として許容されるビヒクルによる再構成に適した無菌の安定した粒子-非含有ダルババンシン散剤を含有する剤形であって、
    ここで因子B0含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約75％以上であり、及びここでB2含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約3％以上である、前記剤形。
  77. ダルババンシン因子A0、A1、B1、C0、及びC1からなる群より選択される、少なくとも1種の追加のダルババンシン因子を更に含有する、請求項76記載の剤形。
  78. ダルババンシン因子B0及びB2を含有する、医薬として許容されるビヒクルによる再構成に適した無菌の安定した粒子-非含有ダルババンシン散剤を含有する剤形であって、
    ここで因子B0含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約75％以上であり、及びここでB2含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約3％を超えない、前記剤形。
  79. B2の含量が、約2.0％HPLC分配を超えない、請求項78記載の剤形。
  80. B2の含量が、約1.0％HPLC分配を超えない、請求項78記載の剤形。
  81. ダルババンシン因子A0、A1、B1、C0、及びC1からなる群より選択される、少なくとも1種の追加のダルババンシン因子を更に含有する、請求項78記載の剤形。
  82. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約75％以上である、ダルババンシン因子B0；及び
    B2含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約3％以上である、ダルババンシン因子B2、
    を含有する、医薬組成物。
  83. A0、A1、B1、C0、及びC1からなる群より選択される、少なくとも1種のダルババンシン因子を更に含有する、請求項82記載の医薬組成物。
  84. 因子B0の含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約75％以上である、ダルババンシン因子B0；及び
    B2含量が、存在する全ダルババンシン成分のHPLC分配の約3.0％を超えない、ダルババンシン因子B2、
    を含有する、医薬組成物。
  85. B2含量が、約2.0％HPLC分配を超えない、請求項84記載の医薬組成物。
  86. B2含量が、約1.0％HPLC分配を超えない、請求項84記載の医薬組成物。
  87. ダルババンシン因子A0、A1、B1、C0、及びC1からなる群より選択される、少なくとも1種の追加のダルババンシン因子を更に含有する、請求項84記載の医薬組成物。
  88. それらが必要な腎不全患者において細菌感染症を治療する方法であって、以下のステップ：
    腎不全患者を選択し；及び
    腎不全患者へ医薬として許容される担体中のダルババンシンの初回量及び継続量を投与すること、ここで各投与量は、5〜10日間に分けられ、ここで初回量は約750mgであり、継続量の各量は約250mgである、を含む、前記方法。
  89. 各投与量が、約1週間に分けられる、請求項88記載の方法。
  90. 単回の継続量を投与するステップを含む、請求項88記載の方法。
  91. 前記継続量が、ダルババンシンのいかなる介入量も伴わずに、初回量後に約1週間投与される、請求項90記載の方法。
  92. 反復継続量を投与するステップを含む、請求項88記載の方法。
  93. 前記継続量が、ダルババンシンのいかなる介入量も伴わずに、約1週間間隔で投与される、請求項90記載の方法。
  94. 前記細菌感染症が、皮膚軟組織感染症である、請求項88記載の方法。
  95. 前記細菌感染症が、皮膚・皮膚構造組織感染症である、請求項88記載の方法。
  96. それが必要な腎不全患者の細菌感染症を治療する方法であって、以下のステップ：
    腎不全患者を選択し；及び
    腎不全患者へ医薬として許容される担体中のダルババンシンの初回量及び継続量を投与すること、ここで各投与量は、5〜10日間に分けられ、ここで初回量は約750mgであり、継続量の各量は約150mgである、を含む、前記方法。
  97. 各投与量が、約1週間に分けられる、請求項96記載の方法。
  98. 単回の継続量を投与するステップを含む、請求項96記載の方法。
  99. 前記継続量が、ダルババンシンのいかなる介入量も伴わずに、初回量後に約1週間投与される、請求項98記載の方法。
  100. 反復継続量を投与するステップを含む、請求項96記載の方法。
  101. 前記継続量が、ダルババンシンのいかなる介入量も伴わずに、約1週間間隔で投与される、請求項100記載の方法。
  102. 前記細菌感染症が、皮膚軟組織感染症である、請求項96記載の方法。
  103. 前記細菌感染症が、皮膚・皮膚構造組織感染症である、請求項96記載の方法。
  104. それが必要なヒトの細菌感染症を治療する方法であって、以下のステップ：
    細菌感染症を有する患者を選択し；
    患者へ医薬として許容される担体中のダルババンシンの初回量及び継続量を投与すること、ここで各投与量は、5〜10日間に分けられ、ここで初回量は約1200mgであり、継続量の各量は約600mgである、を含む、前記方法。
  105. 各投与量が、約1週間に分けられる、請求項104記載の方法。
  106. 単回の継続量を投与するステップを含む、請求項104記載の方法。
  107. 前記継続量が、ダルババンシンのいかなる介入量も伴わずに、初回量後に約1週間投与される、請求項106記載の方法。
  108. 反復継続量を投与するステップを含む、請求項104記載の方法。
  109. 前記継続量が、ダルババンシンのいかなる介入量も伴わずに、約1週間間隔で投与される、請求項108記載の方法。
  110. 前記細菌感染症が、皮膚軟組織感染症である、請求項104記載の方法。
  111. 前記細菌感染症が、皮膚・皮膚構造組織感染症である、請求項104記載の方法。
  112. 重度腎機能不全患者の細菌感染症を治療する方法であって、以下のステップ：
    クレアチニンクリアランスが30mL/分未満である腎不全患者を選択し；
    ダルババンシンを含有する医薬組成物の治療的有効量を提供し；及び
    それが必要な患者へこの治療的有効量を投与することを含む、前記方法。
  113. 前記治療的有効量が、約300mg〜約1200mgである、請求項112記載の方法。
  114. 前記治療的有効量が、約500mgである、請求項112記載の方法。
  115. 前記治療的有効量が、約1000mgである、請求項112記載の方法。
  116. それが必要な重度腎機能不全の患者の細菌感染症を治療する方法であって、以下のステップ：
    クレアチニンクリアランスが30mL/分未満である腎不全患者を選択し；
    ダルババンシン約1000mgを含有する医薬組成物の治療的有効量を提供し；及び
    それが必要な患者へこの治療的有効量を投与することを含む、前記方法。
  117. 前記細菌感染症が、合併した及び／又は合併していない皮膚・皮膚構造感染症である、請求項116記載の方法。
  118. 前記治療的有効量が、単回投与量である、請求項116記載の方法。
  119. 前記治療的有効量が、少なくとも約30分間にわたり投与される単回投与量である、請求項116記載の方法。
  120. 治療的有効量1000mgの後に、治療的有効継続量約500mgを約10〜約18日間提供するステップを更に含む、請求項116記載の方法。
  121. 治療的有効量1000mgの後に、治療的有効継続量約500mgが約14日間投与される、請求項120記載の方法。
  122. それが必要な重度腎機能不全患者の細菌感染症を治療する方法であって、以下のステップ：
    クレアチニンクリアランスが30mL/分未満である腎不全患者を選択し；
    ダルババンシン約750mgを含有する医薬組成物の治療的有効量を提供し；及び
    それが必要な患者へこの治療的有効量を投与することを含む、前記方法。
  123. 前記細菌感染症が、合併した及び／又は合併していない皮膚・皮膚構造感染症である、請求項122記載の方法。
  124. 治療的有効量が、単回投与量である、請求項122記載の方法。
  125. 前記治療的有効量が、少なくとも約30分間にわたり投与される単回投与量である、請求項122記載の方法。
  126. 治療的有効量750mgの後に、治療的有効継続量約250mgを約10〜約18日間提供するステップを更に含む、請求項122記載の方法。
  127. 治療的有効量750mgの後に、治療的有効継続量約250mgが約14日間投与される、請求項126記載の方法。
  128. それが必要な重度腎機能不全患者の細菌感染症を治療する方法であって、以下のステップ：
    クレアチニンクリアランスが30mL/分未満である腎不全患者を選択し；
    ダルババンシン約300mg〜約1200mgを含有する医薬組成物の治療的有効量を提供し；及び
    それが必要な患者へこの治療的有効量を投与することを含む、前記方法。
  129. 因子B2の含量が、HPLC分配の約3.0％を超えない、ダルババンシン因子B2；
    因子イソB0含量が、HPLC分配の約3.0％を超えない、ダルババンシン因子イソB0；及び
    MAG含量が、HPLC分配の約3.0％を超えない、MAG；
    を含有する、医薬組成物。
  130. ダルババンシン因子B2、イソB0、及びMAGの含量が、HPLC分配の約2.0％を超えない、請求項129記載の医薬組成物。
  131. ダルババンシン因子B2、イソB0、及びMAGの含量の少なくとも1種が、HPLC分配の約2.0％を超えない、請求項129記載の医薬組成物。
  132. ダルババンシン因子B2、イソB0、及びMAGの含量が、HPLC分配の約1.0％を超えない、請求項129記載の医薬組成物。
  133. ダルババンシン因子B2、イソB0、及びMAGの含量の少なくとも1種が、HPLC分配の約1.0％を超えない、請求項129記載の医薬組成物。
  134. 因子B2の含量が、HPLC分配の約3.0％を超えない、ダルババンシン因子B2；及び
    因子イソB0含量が、HPLC分配の約3.0％を超えない、ダルババンシン因子イソB0；
    を含有する、医薬組成物。
  135. ダルババンシン因子B2、イソB0、及びMAGの含量が、HPLC分配の約2.0％を超えない、請求項134記載の医薬組成物。
  136. ダルババンシン因子B2、イソB0、及びMAGの含量の少なくとも1種が、HPLC分配の約2.0％を超えない、請求項134記載の医薬組成物。
  137. ダルババンシン因子B2、イソB0、及びMAGの含量が、HPLC分配の約1.0％を超えない、請求項134記載の医薬組成物。
  138. ダルババンシン因子B2、イソB0、及びMAGの含量の少なくとも1種が、HPLC分配の約1.0％を超えない、請求項134記載の医薬組成物。
  139. ダルババンシンを乾燥する方法であって、以下のステップ：
    ダルババンシン、水、及び溶媒を含有する湿潤ダルババンシンを提供し；
    湿潤ダルババンシンを温度約30℃以下、約50mbar以下の真空圧で、湿潤ダルババンシンの水レベルが、約20％(w/w)未満になるまで乾燥し；
    水をダルババンシンへ添加し；及び
    湿潤ダルババンシンを更に少なくとも1回、温度約30℃以下、約50mbar以下の真空圧で、ダルババンシンの溶媒レベルが約3.0％(w/w)未満となるまで乾燥することを含む、前記方法。
  140. 水を添加するステップ、及び、
    湿潤ダルババンシンを温度約30℃以下、約50mbar以下の真空圧で乾燥するステップを、溶媒レベルが、約3.0％(w/w)未満になるまで繰り返すステップを含む、請求項139記載の方法。
  141. 水を添加するステップ；及び
    湿潤ダルババンシンを温度約30℃以下、約50mbar以下の真空圧で乾燥するステップを、溶媒レベルが、約2.5％(w/w)未満になるまで繰り返すステップを含む、請求項139記載の方法。
  142. 水を添加するステップ；及び
    湿潤ダルババンシンを温度約30℃以下、約50mbar以下の真空圧で乾燥するステップを、溶媒レベルが、約2.0％(w/w)未満になるまで繰り返すステップを含む、請求項139記載の方法。
  143. 水を添加するステップ；及び
    湿潤ダルババンシンを温度約30℃以下、約50mbar以下の真空圧で乾燥するステップを、溶媒レベルが、約1.5％(w/w)未満になるまで繰り返すステップ；を含む、請求項139記載の方法。
  144. 水を添加するステップ；及び
    湿潤ダルババンシンを温度約30℃以下、約50mbar以下の真空圧で乾燥するステップを、溶媒レベルが、約1.0％(w/w)未満になるまで繰り返すステップ；を含む、請求項139記載の方法。
  145. 水を添加するステップ；及び
    湿潤ダルババンシンを温度約30℃以下、約50mbar以下の真空圧で乾燥するステップを、溶媒レベルが、約0.5％(w/w)未満になるまで繰り返すステップ；を含む、請求項139記載の方法。
  146. 前記溶媒がアセトンである、請求項139記載の方法。
  147. 前記溶媒が、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノール、エーテル、塩化メチレンル、テトラヒドロフラン、クロロホルム、1,4-ジオキサン、及びトリクロロエチレンからなる群より選択される、請求項139記載の方法。
  148. 前記湿潤ダルババンシンが、温度約28℃以下で乾燥される、請求項139記載の方法。
  149. 前記湿潤ダルババンシンが、温度約26℃以下で乾燥される、請求項139記載の方法。
  150. 前記湿潤ダルババンシンが、温度約24℃以下で乾燥される、請求項139記載の方法。
  151. 前記湿潤ダルババンシンが、約40mbar以下の真空圧で乾燥される、請求項139記載の方法。
  152. 前記湿潤ダルババンシンが、約30mbar以下の真空圧で乾燥される、請求項139記載の方法。
  153. 前記湿潤ダルババンシンが、約20mbar以下の真空圧で乾燥される、請求項139記載の方法。
  154. 前記湿潤ダルババンシンが、約10mbar以下の真空圧で乾燥される、請求項139記載の方法。
  155. 前記湿潤ダルババンシンが、MAGを更に含有し、ここで乾燥後に、MAGがHPLC分配の約3.0％未満で存在する、請求項139記載の方法。
  156. 前記湿潤ダルババンシンが、MAGを更に含有し、ここで乾燥後に、MAGがHPLC分配の約2.5％未満で存在する、請求項139記載の方法。
  157. 前記湿潤ダルババンシンが、MAGを更に含有し、ここで乾燥後に、MAGがHPLC分配の約2.0％未満で存在する、請求項139記載の方法。
  158. 前記湿潤ダルババンシンが、MAGを更に含有し、ここで乾燥後に、MAGがHPLC分配の約1.5％未満で存在する、請求項139記載の方法。
  159. 前記湿潤ダルババンシンが、MAGを更に含有し、ここで乾燥後に、MAGがHPLC分配の約1.0％未満で存在する、請求項139記載の方法。
  160. 前記湿潤ダルババンシンが、MAGを更に含有し、ここで乾燥後に、MAGがHPLC分配の約0.5％未満で存在する、請求項139記載の方法。
  161. 前記水レベルが、カールフィッシャー分析を用いて測定される、請求項140記載の方法。
  162. ダルババンシン因子B0、並びにダルババンシン因子A0、A1、B1、B2、C0、C1、イソB0、及びMAGからなる群より選択される少なくとも1種の追加のダルババンシン因子を含有する医薬組成物であって、
    ここで、因子B0の含量は、存在する全てのダルババンシン成分HPLC分配の約75％以上であり、及びここで、アセトン含量が、約2.5％を超えない、前記組成物。
  163. ダルババンシン因子B0及びMAGを含有し、及びここでMAG含量が約3.0％未満である、請求項162記載の医薬組成物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011157381A (ja) * 2002-11-18 2011-08-18 Vicuron Pharmaceuticals Inc 細菌感染の治療のためのダルババンシンの投与方法

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060074014A1 (en) * 2002-11-18 2006-04-06 Vicuron Pharmaceuticals Inc. Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections
US7119061B2 (en) 2002-11-18 2006-10-10 Vicuron Pharmaceuticals, Inc. Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections
US11116738B2 (en) 2012-06-07 2021-09-14 Children's Hospital Los Angeles Methods for treating neutropenia using retinoid agonists
CN103087918B (zh) * 2013-02-20 2015-04-22 广州市微生物研究所 一种好氧反硝化菌剂及其制备与应用
US10286039B2 (en) 2014-02-18 2019-05-14 Children's Hospital Los Angeles Compositions and methods for treating neutropenia
MX2017000676A (es) * 2014-07-17 2018-01-11 The Medicines Co Oritavancina de alta pureza y metodo para producir la misma.
WO2017179003A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Lupin Limited Topical compositions for ophthalmic and otic use
WO2017194385A1 (en) * 2016-05-09 2017-11-16 Xellia Pharmaceuticals Aps Stabilized glycopeptide antibiotic formulations
EP3544616A4 (en) * 2016-11-23 2020-12-09 Gufic Biosciences Limited LYOPHILIZED PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS OF DALBAVANCIN
CN109946398B (zh) * 2019-03-28 2022-05-24 丽珠集团新北江制药股份有限公司 一种检测达巴万星及其杂质的方法
US20230218644A1 (en) 2020-04-16 2023-07-13 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus
CN111686240B (zh) * 2020-06-14 2021-04-09 中国科学院昆明动物研究所 达巴万星在制备抑制SARS-CoV-2与ACE2结合的药物中的应用
CN115219626A (zh) * 2022-07-18 2022-10-21 丽珠集团福州福兴医药有限公司 达巴万星合成反应的分析方法
WO2024079224A1 (en) * 2022-10-12 2024-04-18 Xellia Pharmaceuticals Aps Liquid dalbavancin composition

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03193735A (ja) * 1989-12-22 1991-08-23 Shionogi & Co Ltd グリコペプチド系抗生物質の安定化組成物
JPH06509347A (ja) * 1991-07-29 1994-10-20 バイオサーチ・イタリア・ソチエタ・ペル・アチオニ 抗生物質ａ４０９２６のアミド誘導体類
WO2002038170A2 (en) * 2000-11-07 2002-05-16 Chiron Corporation Stabilized inteferon compositions
JP2002179589A (ja) * 2000-10-02 2002-06-26 Jcr Pharmaceuticals Co Ltd 生理活性ペプチド含有粉末
JP2003503462A (ja) * 1999-07-01 2003-01-28 藤沢薬品工業株式会社 安定化された凍結乾燥型医薬組成物

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1496386A (en) 1975-03-05 1977-12-30 Lepetit Spa Antibiotics
US4195079A (en) 1979-01-31 1980-03-25 Pfizer Inc. New polycyclic ether antibiotic
CA1183789A (en) 1981-08-04 1985-03-12 Kiyoshi Isono Antibiotic 76-11, process for the production thereof, anticoccidiosis agent and domestic animals growth accelerator comprising the same as an effective ingredient
US4578271A (en) 1982-05-24 1986-03-25 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Biologically active WS 6049 substances, a process for the production thereof and their pharmaceutical compositions
FI73697C (fi) 1982-06-08 1987-11-09 Lepetit Spa Foerfarande foer framstaellning av individuella faktorer 1, 2, 3, 4 och 5 av teikomysin a2.
FR2548021B1 (fr) 1983-06-29 1986-02-28 Dick P R Compositions pharmaceutiques dermiques a action prolongee et continue a base d'acides gras essentiels
GB8415092D0 (en) 1984-06-13 1984-07-18 Lepetit Spa Ester derivatives
GB8425685D0 (en) 1984-10-11 1984-11-14 Lepetit Spa Antibiotic a 40926 complex
US4914187A (en) 1984-11-13 1990-04-03 Gruppo Lepetit S.P.A Ester derivatives of antibiotic L 17046
GB8428619D0 (en) 1984-11-13 1984-12-19 Lepetit Spa Derivatives of antibiotic l 17046
GB8512795D0 (en) 1985-05-21 1985-06-26 Lepetit Spa Increasing ratio of components of teicoplanin a2 complex
GB8531846D0 (en) 1985-12-30 1986-02-05 Lepetit Spa Antibiotic a 40926 mannosyl aglycon
GB8608809D0 (en) 1986-04-11 1986-05-14 Lepetit Spa Antibiotic
GB8621912D0 (en) 1986-09-11 1986-10-15 Lepetit Spa Increasing ratio of components of anti-biotic complex
GB8621911D0 (en) 1986-09-11 1986-10-15 Lepetit Spa Increasing ratio of components of anti-biotic complex
GR871488B (en) 1986-10-10 1987-11-12 Lepetit Spa New antibiotics
GB8715735D0 (en) 1987-07-03 1987-08-12 Lepetit Spa De-mannosyl teicoplanin derivatives
US4882313A (en) 1987-07-31 1989-11-21 Smithkline Beckman Corporation Carboxamide derivatives of glycopeptides
GB8726859D0 (en) 1987-11-17 1987-12-23 Lepetit Spa 22-dechlorotei-coplanins
ATE134646T1 (de) 1988-12-27 1996-03-15 Lepetit Spa C63-amidderivate von 34-de(acetylglucosaminyl)-34-deoxy-teicoplanine
IE64155B1 (en) 1989-03-29 1995-07-12 Lepetit Spa New substituted alkylamide derivatives of teicoplanin
US5030619A (en) 1990-04-16 1991-07-09 Miles Inc. Synergistic fungicidal composition
US5606036A (en) 1991-03-27 1997-02-25 Gruppo Lepetit Spa Antibiotic A 40926 ester derivatives
US5750509A (en) 1991-07-29 1998-05-12 Gruppo Lepetit S.P.A. Amide derivatives of antibiotic A 40926
US6384013B1 (en) 1992-03-19 2002-05-07 Eli Lilly And Company Cyclic peptide antifungal agents and process for preparation thereof
US5882900A (en) 1992-09-10 1999-03-16 Gruppo Lepetit S.P.A. Process for the selective increase of production of antibiotic GE 2270 factor a by adding vitamin B12 to nutrient medium
CN1036654C (zh) * 1993-01-01 1997-12-10 格鲁波莱佩蒂特公司 抗菌素a40926的酰氨衍生物及其制备方法
DK0801655T3 (da) 1995-02-07 1999-02-08 Biosearch Italia Spa Basiske prolinamidderivater af GE 2270 og GE 2270-lignende antibiotika
DK0808326T3 (da) 1995-02-07 2001-10-01 Biosearch Italia Spa Basiske oxazolinamidderivater af GE2270 og GE2270-lignende antibiotika
JP2000505438A (ja) 1996-02-14 2000-05-09 バイオサーチ・イタリア・ソチエタ・ペル・アチオニ 抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ▲下２ａ▼、Ｄ▲下２▼およびＥの誘導体
AU2441697A (en) 1996-04-12 1997-11-07 Eli Lilly And Company Covalently-linked glycopeptide dimers
JP2000508671A (ja) 1996-04-23 2000-07-11 バイオサーチ・イタリア・ソチエタ・ペル・アチオニ 抗生物質ａ４０９２６のアミド誘導体の改善された化学的製造法
US5935238A (en) 1997-06-19 1999-08-10 Sun Microsystems, Inc. Selection from multiple fetch addresses generated concurrently including predicted and actual target by control-flow instructions in current and previous instruction bundles
CA2255140A1 (en) 1997-12-23 1999-06-23 Eli Lilly And Company Echinocandin binding domain of 1,3-.beta.-glucan synthase
US6417180B1 (en) * 1998-10-07 2002-07-09 University Of Massachusetts Zinc finger-reactive antimicrobial compounds
US7119061B2 (en) 2002-11-18 2006-10-10 Vicuron Pharmaceuticals, Inc. Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections
AU2003294262B2 (en) * 2002-11-18 2007-08-23 Vicuron Pharmaceuticals Inc. Methods of administering dalbavancin for treatment of bacterial infections

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03193735A (ja) * 1989-12-22 1991-08-23 Shionogi & Co Ltd グリコペプチド系抗生物質の安定化組成物
JPH06509347A (ja) * 1991-07-29 1994-10-20 バイオサーチ・イタリア・ソチエタ・ペル・アチオニ 抗生物質ａ４０９２６のアミド誘導体類
JP2003503462A (ja) * 1999-07-01 2003-01-28 藤沢薬品工業株式会社 安定化された凍結乾燥型医薬組成物
JP2002179589A (ja) * 2000-10-02 2002-06-26 Jcr Pharmaceuticals Co Ltd 生理活性ペプチド含有粉末
WO2002038170A2 (en) * 2000-11-07 2002-05-16 Chiron Corporation Stabilized inteferon compositions

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011157381A (ja) * 2002-11-18 2011-08-18 Vicuron Pharmaceuticals Inc 細菌感染の治療のためのダルババンシンの投与方法

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