KR20080048093A - 세균 감염 치료용 달바반신 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 세균 감염을 치료하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 낮은 수준의 용매의 존재하에 달바반신 인자 A₀, A₁, B₁, B₂, C₀, C₁, 아이소B₀ 및 MAG를 비롯한 달바반신 인자들의 조합일 수 있다. 본 발명의 방법은 세균 감염, 특히, 피부 및 연조직의 그램-양성 세균 감염을 치료하기 위해 달바반신 배합물을 투여함을 포함한다. 투여 방법은 종종 적어도 1주일동안 혈류에 치료 수준으로 잔류하여 세균 감염에 대해 연장된 치료 활성을 제공하는, 달바반신의 다중 용량 투여를 포함한다. 신장 환자에 대한 투여 방법도 또한 포함된다.

달바반신, 안정화제, 항생물질

Description

세균 감염 치료용 달바반신 조성물{DALBAVANCIN COMPOSITIONS FOR TREATMENT OF BACTERIAL INFECTIONS}

본 출원은 달바반신 조성물, 및 세균 감염의 치료 방법에서 상기 조성물의 사용 방법에 관한 것이다.

관련 출원에 대한 전후 참조

본 출원은 미국 가출원 번호 제 60/427,654 호(2002년 11월 18일자 출원), 제 60/485,694 호(2003년 7월 8일자 출원), 제 60/495,048 호(2003년 8월 13일자 출원) 및 제 60/496,483 호(2003년 8월 19일자 출원)의 이점을 주장하는 미국 특허출원 제 10/714,261 호(2003년 11월 14일자 출원)의 일부 계속 출원인 미국 특허출원 제 10/834,395 호(2004년 4월 27일자 출원)의 일부 계속 출원인, 2005년 4월 26일자 미국 특허출원(대리인 사건 번호 892,280-225 호)을 근거로 국제 출원중이며, 상기 모든 특허출원은 본원에 그대로 참고로 인용된다.

미국 질병 관리 예방 센터(U.S. Center for Disease Control and Prevention)에 따르면, 병원내 혈류 감염이 미국에서 주된 사망 원인이다. 미국에서 매년 삽입된 700 만개의 중심 정맥 카테터(CVC)의 약 5%가 혈류 감염의 하나 이상의 사례와 관련된다(연간 약 350,000). 카테터-관련 혈류 감염은 세균이 정맥내 카테터를 통해 혈류에 유입될 때 발생하며 생명을 위협할 수 있다.

피부 및 연조직 감염(SSTI)(복잡성 및/또는 단순 피부 및 피부 조직 감염(SSSI)으로도 알려져 있음)은 보편적인 의학적 질병이며 종종 외상 또는 수술 절차의 결과이다. 스태필로코커스 오레우스 ( Staphylococcus aureus) 및 스트렙토코커스 피오제네스(Streptococcus pyogenes)가 심부 조직 감염 환자로부터 가장 흔히 분리되는 병원균이지만, 건강한 피부에서 발견되는 것들을 포함하여 임의의 병원성 유기체도 감염을 유발할 수 있다. 많은 SSTI는 중증도에 있어 경증 내지 중등도로, 경구용 항미생물제 및 국소 청결로 성공적인 치료가 가능하다. 대조적으로, 근원적인 위험 인자(예를 들면, 혈관 혈류이상, 당뇨) 및/또는 치료하기 어렵거나 다중-내성인 세균에 의해 유발된 감염을 갖는 환자에서 흔히 발생하는 보다 심하거나 복잡한 감염은 효능있는 정맥내 항미생물제 치료 및 침입성 외과적 조직제거를 필요로 할 수 있다.

스태필로코커스는 임상적 및 치료적 문제이며, 1960년대 초 이래로 병원내 감염과 점점 더 관련되어 왔다. 응고효소-양성 종인 메티실린-내성 스태필로코커스 오레우스(MRSA)는 지역사회 감염 및 병원내 감염 둘 다에서 오랫동안 문제가 되었으며, 여러 응고효소-음성 스태필로코커스는 특히 집중적인 관리 시설의 위급하게 아픈 환자의 치료에서 인간 기회 감염균으로 인식되어 왔다. 임상적 관심에 대 한 또 다른 주 원인은 세계 많은 지역에서 페니실린-내성 스트렙토코커스 뉴모니에( Streptococcus pneumoniae) 균주의 분리가 증가하고 있는 것이다.

글라이코펩타이드 항생물질인 반코마이신 및 테이코플라닌이 다중-약물-내성 그램-양성균, 특히 MRSA, 응고효소-음성 스태필로코커스(CoNS) 및 엔테로코커스에 의해 야기된 심한 병원내 감염에 대해 사용되었다. 반코마이신 및 테이코플라닌은 MRSA에 의해 야기된 감염에 사용되며, 최근까지 모든 분리균은 한결같이 민감하였다. 그러나, 테이코플라닌 및 반코마이신에 대해 중간의 민감성 또는 내성을 갖는 스태필로코커스 오레우스의 균주의 분리가 현재 증가하는 빈도로 보고되어 왔다. 내성 메카니즘을 기준으로, "반A(VanA)", "반B" 또는 "반C"로 분류된 많은 반코마이신-내성 균주들이 보고되었다. 따라서, 대안적인 치료 옵션이 필요하다.

테이코플라닌은 대부분의 그램-양성 세균에 대해 적어도 반코마이신 정도로 활성이며 이상 반응을 보다 적게 일으키는 것으로 보인다. 두가지 치료 형태 모두 완전한 회복을 수행하기 위해서는 하루에 1회 이상의 투여가 필요하다. 현재, 상기 병원균 중 일부균에 의해 유발된 심한 감염에 대한 치료 옵션은 매우 제한된다. 반코마이신에 대한 그램-양성 병원균의 최근 생긴 내성은 증가된 효과에 대한 잠재력을 갖는 새로운 항생물질의 유효성을 매우 바람직하게 만든다.

또한, 특히 비경구, 예를 들면, 정맥내 또는 근육내 항생물질 투여의 경우, 현재 이용할 수 있는 치료보다 덜 잦은 투여 방법이 환자의 편안함을 향상시키기 위해 바람직하다. 병원 체류는 때때로 비경구적 방법으로 항생물질을 1일 다회 투여해야 하고, 덜 잦은 투여는 외래환자 기준으로 상기 치료가 수행되기에 유리할 것이다.

덜 잦은 투여는 항생물질 투여 방법의 바람직한 특징이지만, 투여된 항생물질의 "약학적 창(pharmaceutical window)", 즉, 독성 프로필은 치료되는 환자에서 심한 이상 반응을 야기하여 치료를 위태롭게 하지않고 투여될 거대 단일 용량을 가능케하기에 충분히 허용적이어야 한다. 또한, 항생물질이 적당한 약학적 창을 나타낼 때에라도, 항생물질이 바람직한 투여 간격동안 치료 효과를 유지하기에 적당한 혈청내 반감기를 나타내는 경우에만 덜 잦은 투여가 가능하다. 항생물질의 혈청내 반감기는 생체내에서 약물의 수명, 및 혈청내 농도가 여전히 살균 효과적인 최소 최저 농도(trough level)에 도달할 때 투여 후 시간의 길이 둘 다를 결정한다. 1차 용량의 항생물질 투여 후 시간경과에 따른 혈청내 최저 농도는 생체내에서 항생물질의 최소 살균 농도를 보유하기 위해 추가 용량을 투여해야 하는 때를 결정한다.

최근에, 성공적인 글라이코펩타이드 항생물질이 천연 글라이코펩타이드로부터 적절하게 합성되었다. 예를 들면, 반합성 글라이코펩타이드 달바반신은 원래 액티노마두라( Actinomadura) 배양액으로부터 분리된 천연 항생물질 A 40926으로부터 합성되었다(말라바바(Malabarba) 등의 미국 특허 제 5,750,509 호, 1998년). 달바반신은 반코마이신 또는 항생물질 리네졸리드보다 다양한 세균 균주에 대해 보다 큰 효과를 나타내었으며, 피부 및 연조직 감염에 대해 유망한 새로운 치료법을 대표한다(예를 들면, 문헌 [Jabes et al., Antimicrob . Agents Chemother., 48:1118-1123, 2004] 참조). 미국 특허 제 5,750,509 호에 따르면, 달바반신은 그 의 N¹⁵ 아미노(번호에 대해 도 1 참조)에 모노메틸 잔기를 갖는 글라이코펩타이드 항생물질이며, 상기 N¹⁵-모노메틸 아미노는 유리기(즉, -NHCH₃)이거나 또는 t-뷰톡시카보닐, 카보벤질옥시, 아릴알킬 또는 벤질과 같은 아미노 보호기로 보호될 수 있다. 미국 특허 제 5,750,509 호에 보고된 특정 달바반신 성분을 제조하는 방법은 또한 달바반신의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 유사체도 소량으로 생성하였지만, 이들 분자는 특성화하지 않았다.

상기 병원균의 견지에서, 항생물질 내성 세균을 포함하여 하나 이상의 미생물에 대한 활성을 갖는 또 다른 항생물질은 상업적 가치를 가질 것이며, 당해 분야에서 오랫동안 느껴온 요구를 충족시킬 것이다.

본 발명은 달바반신으로 세균 감염을 치료 또는 예방하기 위한 조성물, 방법 및 키트를 제공한다.

따라서, 한 태양에서, 5일 이상 동안 개인에서 치료 또는 예방 효과적인 혈장 농도의 달바반신을 제공하기에 충분한 양으로 단위 용량의 달바반신, 안정화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.

본 발명의 약학 조성물은 일반적으로 개인에게 투여하기 위한 약학적으로 허용되는 형태, 예를 들면, 약학적으로 허용되는 수성 제형으로 제형화된다. 상기 약학 조성물은 바람직하게는 비경구, 예를 들면, 정맥내 또는 근육내 경로로 투여한다. 따라서, 상기 바람직한 태양에서, 상기 약학 조성물은 전형적으로 멸균된다.

일부 태양에서, 단위 용량의 달바반신은 건조 분말(예를 들면, 동결건조) 형태로 제공되고, 개인에게 투여되기 전에 멸균 수성 제형과 같은 약학적으로 허용되는 담체중에 복원된다. 한 태양에서, 약학적으로 허용되는 담체는 물 중의 5% 덱스트로스를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물은 세균 감염의 치료 또는 예방을 필요로 하는 포유동물, 예를 들면, 인간에게 투여될 수 있다. 일부 태양에서, 약학 조성물은 달바반신이 아닌 항생물질, 예를 들면, 그램-음성 세균에 효과적인(예를 들면, 살균성) 항생물질 및/또는 달바반신이 효과가 없는 그램-양성 종, 예를 들면, 반A 반코마이신-내성 세균 균주에 대해 효과적인 항생물질을 하나 이상 포함할 수 있다.

본 발명은 실온에서 안정한 달바반신 약학 조성물로 세균 감염을 치료 또는 예방하기 위한 조성물, 제조 방법, 및 치료 또는 예방 방법을 제공한다.

일부 태양에서, 개인에게 투여하기 전에 건조 분말(예를 들면, 동결건조) 제형 및/또는 수성 제형으로 저장시에 하나 이상의 달바반신 성분의 분해를 억제하기 위해 하나 이상의 안정화 물질을 사용한다. 시간 경과에 따라, 분해는 생체내에서 잠재적으로 역효과를 야기할 수 있는 덜 활성이고/이거나 불활성인 성분의 바람직하지 않은 생성을 야기할 수 있다. 바람직한 안정화제로는 당 또는 당 알콜, 예를 들면, 모노-, 다이- 또는 폴리사카라이드, 또는 그의 유도체, 예를 들면, 만니톨, 락토스, 슈크로스, 솔비톨, 글라이세롤, 셀룰로스, 트레할로스, 말토스 또는 덱스트로스 또는 그의 혼합물과 같은 비이온성 성분을 포함한다.

한 태양에서, 본 발명은 안정한 달바반신을 포함하는 약학 조성물을 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 달바반신 및 안정화제를 포함하는 약학 조성물을 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 약 1 내지 7, 보다 바람직하게는 2 내지 6의 pH에서 달바반신 및 안정화제를 포함하는 약학 조성물을 포함한다. 또 다른 태양에서, 조성물은 약 3 내지 5의 pH이다. 안정화제는 탄수화물 또는 아미노산을 포함할 수 있다. 탄수화물은 만니톨, 락토스, 또는 만니톨과 락토스의 혼합물일 수 있다. 만니톨 및 락토스는 동량 또는 비동량으로 가할 수 있다. 한 태양에서는, 동량의 만니톨과 락토스를 가하며 pH는 약 4.5로 조정한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 또한 약 3의 pH에서 달바반신 및 만니톨을 포함하는 약학 조성물을 포함한다. 한 태양에서, 조성물의 pH는 약 3.3이다. 또 다른 태양에서, 상기 조성물은 락토스를 또한 포함할 수 있다. 락토스 및 만니톨은 동량 또는 비동량으로 가할 수 있다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 또한 달바반신 및 안정화제를 포함하며, 안정 화제가 만니톨 및 락토스를 포함하는 약학 조성물을 포함한다. 만니톨 및 락토스는 동량으로 가할 수 있다. 상기 조성물의 pH는 선택적으로 1 내지 7, 보다 바람직하게는 2 내지 6, 보다 바람직하게는 3 내지 5, 보다 바람직하게는 4 내지 5, 보다 바람직하게는 약 4.5의 범위일 수 있다.

글라이코펩타이드, 및 특히 달바반신은 글라이코사이드 결합으로 인해 매우 불안정하다. 실온에서 어느 정도 분해가 일어날 수 있으며, 40℃에서는 더 분해될 수 있다. 전술한 배합물 중 일부는 특수한 저장 조건이 필요할 수 있다. 특히, 냉장이 바람직할 수 있다(예를 들면, -40 내지 10℃, 또는 -20 내지 9℃, 보다 바람직하게는 2 내지 8℃). 배합물은 추가로 멸균될 수 있다. 이들 배합물은 투여시 안정하고 투명하며 입자가 없는 용액을 형성할 것이다. 용액은 안정해야 하며 침전물을 함유하지 않아야 한다.

전술한 약학 조성물은 바람직하게는 약 25℃에서 약 2일 후에 약 4% 이하, 보다 바람직하게는 약 3% 이하, 보다 더 바람직하게는 약 2% 이하, 보다 바람직하게는 약 1% 이하, 더욱 바람직하게는 약 0.5% 이하의 분해율을 나타낸다. 또는, 전술한 약학 조성물은 약 25℃에서 약 2일 후에 약 4% 이하의 MAG, 보다 바람직하게는 약 3% 이하의 MAG, 보다 더 바람직하게는 약 2% 이하의 MAG, 더욱 바람직하게는 약 1% 이하의 MAG, 더 바람직하게는 약 0.5% 이하의 MAG를 갖는다.

또 다른 태양에서, 전술한 약학 조성물은 바람직하게는 약 40℃에서 약 3 내지 6개월 후에 약 6% 이하, 보다 바람직하게는 약 5% 이하, 바람직하게는 약 4% 이하, 바람직하게는 약 3% 이하, 바람직하게는 약 2% 이하, 바람직하게는 약 1% 이하 의 분해율을 나타낸다. 또는, 전술한 약학 조성물은 바람직하게는 약 40℃에서 약 3 내지 6개월 후에 약 6% 이하의 MAG, 보다 바람직하게는 약 5% 이하의 MAG, 바람직하게는 약 4% 이하의 MAG, 바람직하게는 약 3% 이하의 MAG, 바람직하게는 약 2% 이하의 MAG, 훨씬 더 바람직하게는 약 1% 이하의 MAG를 갖는다. 40℃에서, 특히 냉장고에서 화합물을 보관할 수 없는 장소 또는 실온에서(예를 들면, 제 3 세계 국가 및 인디언 보호거주지) 안정한 화합물이 바람직하다.

또 다른 태양에서, 약학 조성물은 약 2 내지 8℃에서 약 2년 후에 3% 이하, 보다 바람직하게는 약 2% 이하, 보다 바람직하게는 약 1% 이하, 더 바람직하게는 약 0.5% 이하의 분해율을 나타낸다. 또는, 약학 조성물은 약 2 내지 8℃에서 약 2년 후에 3% 이하의 MAG, 보다 바람직하게는 약 2% 이하의 MAG, 더욱 바람직하게는 약 1% 이하의 MAG, 보다 바람직하게는 약 0.5% 이하의 MAG를 갖는다.

본 발명은 임의의 달바반신 인자들의 조합을 포함할 수 있는 달바반신 조성물을 포함한다. 상기 인자들로는 달바반신 인자 A₀, A₁, B₁, B₂, C₀, C₁, 아이소B₀ 및 MAG가 포함된다.

본 발명은 또한 달바반신 조성물 중의 용매의 농도를 감소시키기 위한 건조 공정을 포함한다. 방법은 달바반신, 물 및 용매를 포함하는 습윤 달바반신을 제공하고, 습윤 달바반신을 약 30℃ 이하의 온도 및 약 50 mbar 이하의 진공 압력에서 습윤 달바반신의 수분 함량이 약 20%(w/w) 미만이 될 때까지 건조하는 단계를 포함한다. 이어서, 물을 습윤 달바반신에 가하고 건조 단계를 반복한다. 상기 물을 가하고 습윤 달바반신을 건조시키는 단계는 용매 농도가 약 3.0%(w/w) 미만이 될 때까지 반복한다. 상기 단계는 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 또는 목적하는 용매 함량에 이르기 위해 필요한 만큼 반복할 수 있다. 유사하게, 본 발명은 또한 저농도의 용매를 갖는 달바반신 조성물을 포함한다. 한 태양에서, 용매의 농도는 3.0%(w/w) 미만, 또는 2.5%(w/w) 미만, 또는 2.0%(w/w) 미만, 또는 1.5%(w/w) 미만, 또는 1.0%(w/w) 미만, 또는 0.5%(w/w) 미만, 또는 0.1%(w/w) 미만일 수 있다. 용매는 아세톤일 수 있다. 또는, 용매는 에탄올, 메탄올, 프로판올, 뷰탄올, 에테르, 메틸렌 클로라이드, 테트라하이드로퓨란, 클로로폼, 1,4-다이옥세인, 트라이클로로에틸렌, 벤젠, 사염화탄소, 1,2-다이클로로에테인, 1,1-다이클로로에테인, 1,1,1-트라이클로로에테인, 아세토나이트릴, 클로로벤젠, 사이클로헥세인, 다이클로로메테인, 1,2-다이메톡시에테인, N,N-다이메틸아세트아마이드, N,N-다이메틸폼아마이드, 1,4-다이옥세인, 2-에톡시에탄올, 에틸렌글라이콜, 폼아마이드, 헥세인, 2-메톡시에탄올, 메틸뷰틸 케톤, 메틸사이클로헥세인, N-메틸피롤리돈, 나이트로메테인, 피리딘, 설폴레인, 테트랄린, 톨루엔, 1,1,2-트라이클로로에테인, 자일렌, 아세트산, 아니솔, 1-뷰탄올, 2-뷰탄올, 뷰틸 아세테이트, 3급-뷰틸메틸 에테르, 큐멘, 다이메틸 설폭사이드, 에틸 아세테이트, 에틸 에테르, 에틸 포메이트, 폼산, 헵테인, 아이소뷰틸 아세테이트, 아이소프로필 아세테이트, 3-메틸-1-뷰탄올, 메틸에틸 케톤, 메틸아이소뷰틸 케톤, 2-메틸-1-프로판올, 펜테인, 1-펜탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 프로필 아세테이트, 1,1-다이에톡시프로페인, 1,1-다이메톡시메테인, 2,2-다이메톡시프로페인, 아이소옥테인, 아이소프로필 에테르, 메틸아이소프로 필 케톤, 메틸테트라하이드로퓨란, 석유 에테르, 트라이클로로아세트산 및 트라이플루오로아세트산 중 어느 하나일 수 있다. 또한, 건조 공정은 약 28℃ 이하의 온도, 또는 약 26℃ 이하의 온도, 또는 약 24℃ 이하의 온도, 또는 약 22℃ 이하의 온도, 또는 약 20℃ 이하의 온도, 또는 약 15℃ 이하의 온도, 또는 약 10℃ 이하의 온도에서 수행할 수 있다. 건조 절차의 진공 압력은 약 50 mbar 이하, 또는 약 45 mbar 이하, 또는 약 40 mbar 이하, 또는 약 35 mbar 이하, 또는 약 30 mbar 이하, 또는 약 25 mbar 이하, 또는 약 20 mbar 이하, 또는 약 15 mbar 이하, 또는 약 10 mbar 이하, 또는 약 5 mbar 이하일 수 있다. 또는, 수분 함량은 약 25%(w/w) 미만, 또는 약 20 %(w/w) 미만, 또는 약 15%(w/w) 미만일 수 있다.

낮은 용매 함량이외에, 건조 공정은 또한 달바반신 조성물에 존재하는 MAG의 양을 감소시킬 수 있다. 존재하는 MAG의 양은 약 5% HPLC 분포 미만, 또는 약 4.5% HPLC 분포 미만, 또는 약 4.0% HPLC 분포 미만, 또는 약 3.5% HPLC 분포 미만, 또는 약 3.0% HPLC 분포 미만, 또는 약 2.5% HPLC 분포 미만, 또는 약 2.0% HPLC 분포 미만, 또는 약 1.5% HPLC 분포 미만, 또는 약 1.0% HPLC 분포 미만, 또는 약 0.8% HPLC 분포 미만, 또는 약 0.6% HPLC 분포 미만, 또는 약 0.5% HPLC 분포 미만, 또는 약 0.4% HPLC 분포 미만, 또는 약 0.3% HPLC 분포 미만, 또는 HPLC 약 0.2% HPLC 분포 미만, 또는 약 0.1% HPLC 분포 미만일 수 있다.

본 발명은 또한 달바반신 인자 B₂ 및 아이소B₀를 포함하는 약학 조성물을 포함한다. B₂ 및 아이소B_o 각각의 함량은 독립적으로 약 3.0% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 2.5% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 2.0% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 1.5% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 1.0% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 0.5% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 0.1% HPLC 분포를 초과하지 않을 수 있다.

또는, 본 발명은 또한 달바반신 인자 B₂, 아이소B₀ 및 MAG를 포함하는 약학 조성물을 포함한다. B₂, 아이소B_o 및 MAG 각각의 함량은 독립적으로 약 3.0% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 2.5% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 2.0% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 1.5% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 1.0% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 0.5% HPLC 분포를 초과하지 않거나, 또는 독립적으로 약 0.1% HPLC 분포를 초과하지 않을 수 있다.

본 발명은 또한 전술한 하나 이상의 약학 조성물을 그를 필요로 하는 환자에게 제공하고 치료 효과 용량의 멸균되고 안정하고 입자가 없고 투명한 달바반신을 환자에게 투여함을 포함하는, 세균 감염의 치료 방법을 포함한다. 상기 방법은 또한 단일 후속 치료 효과 용량을 투여함을 포함할 수 있다. 단일 후속 치료 효과 용량은 초기 용량 이후에 약 5 내지 10일, 또는 약 1주일 후에 투여할 수 있다. 단일 후속 치료 효과 용량은 또한 임의의 중간 용량의 달바반신 없이, 초기 용량 후 약 5 내지 10일 또는 약 1주일 후에 투여할 수 있다. 또 다른 태양에서, 상기 방법은 다중 후속 용량을 투여함을 포함할 수 있다. 다중 후속 용량은 약 5 내지 10일 간격 또는 1주일 간격으로 투여할 수 있다. 다중 후속 용량은 또한 임의의 중간 용량의 달바반신 없이 약 5 내지 10일 간격 또는 1주일 간격으로 투여할 수 있다. 상기 방법은 또한 1차 용량 투여 후 감염을 모니터하고, 선택적으로 후속 용량(들)을 따라서 조정하는 추가의 단계를 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 치료 효과 용량의 멸균되고 안정하고 입자가 없고 투명한 달바반신을 환자에게 투여함을 포함하는, 신장 장애 환자에서 세균 감염을 치료하는 방법을 포함한다. 상기 장애는 경증에서 중증까지 이를 수 있다. 한 태양에서, 치료 효과 용량은 환자에서 100 ㎎/ℓ 이상의 최고 농도(C_max)에 이른다. 또 다른 태양에서, 치료 효과 용량은 13,000 ㎎·h/ℓ 이상의 환자 노출율(곡선하 면적)을 달성한다. 상기 방법은 약 300 내지 1200 ㎎, 또는 약 400 ㎎, 또는 약 500 ㎎, 또는 약 600 ㎎, 또는 약 700 ㎎, 또는 약 800 ㎎, 또는 약 900 ㎎, 또는 약 1000 ㎎, 또는 약 1100 ㎎, 또는 약 1200 ㎎의 단일 용량의 달바반신을 투여함을 포함할 수 있다.

신장 장애를 갖는 환자에서 세균 감염을 치료하는 방법은 또한 다중 용량의 달바반신을 투여함을 포함할 수 있다. 한 태양에서, 2개 용량을 약 5 내지 약 10일 간격, 예를 들면, 약 1주일 간격으로, 또는 약 10 내지 약 18일 간격으로, 예를 들면, 약 2주(또는 14일) 간격으로 투여할 수 있다. 또는, 투여 횟수는, 예를 들면, 1주일에 2회 용량, 1주일에 3회 용량 또는 1주일에 다중 용량일 수 있다. 또 는, 투여 간격은, 예를 들면, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25일 이상일 수 있다. 주어진 용량 수는, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상의 용량일 수 있으며, 초기 용량 이후 각각의 용량은 선택된 투여 간격 후에 주어진다.

한 태양에서, 1차 용량은 약 750 ㎎일 수 있고, 2차(또는 후속) 용량은 약 250 ㎎일 수 있다. 또 다른 태양에서, 1차 용량은 약 750 ㎎일 수 있고, 2차(또는 후속) 용량은 약 150 ㎎일 수 있다. 또 다른 태양에서, 1차 용량은 약 750 ㎎일 수 있고, 2차(또는 후속) 용량은 약 125 ㎎일 수 있다. 또 다른 태양에서, 1차 용량은 약 1000 ㎎일 수 있고, 2차(또는 후속) 용량은 약 500 ㎎일 수 있다.

또 다른 태양에서, 1차 용량은 약 200 내지 약 1500 ㎎, 또는 약 200 내지 약 1300 ㎎, 또는 약 100 내지 약 1500 ㎎, 또는 약 200 내지 약 1400 ㎎, 또는 약 300 내지 약 1300 ㎎, 또는 약 400 내지 약 1200 ㎎, 또는 약 500 내지 약 1100 ㎎, 또는 약 600 내지 약 1000 ㎎, 또는 약 1000 ㎎, 또는 약 950 ㎎, 또는 약 900 ㎎, 또는 약 850 ㎎, 또는 약 800 ㎎, 또는 약 750 ㎎, 또는 약 700 ㎎, 또는 약 650 ㎎, 또는 약 600 ㎎, 또는 약 550 ㎎, 또는 약 500 ㎎일 수 있다. 2차 또는 후속 용량은 약 200 내지 약 1500 ㎎, 또는 약 200 내지 약 1300 ㎎, 또는 약 100 내지 약 1500 ㎎, 또는 약 200 내지 약 1400 ㎎, 또는 약 300 내지 약 1300 ㎎, 또는 약 400 내지 약 1200 ㎎, 또는 약 500 내지 약 1100 ㎎, 또는 약 600 내지 약 1000 ㎎, 또는 약 600 ㎎, 또는 약 550 ㎎, 또는 약 500 ㎎, 또는 약 450 ㎎, 또는 약 400 ㎎, 또는 약 350 ㎎, 또는 약 300 ㎎, 또는 약 250 ㎎, 또는 약 200 ㎎, 또 는 약 150 ㎎, 또는 약 100 ㎎일 수 있다. 투여 방법에서 임의의 상기 1차 용량을 임의의 상기 2차 또는 후속 용량과 병용할 수 있음을 주지해야 한다.

신장 또는 정상 환자에 대한 다중 투여 방법에서, 1차 및 2차(또는 후속) 용량간의 비는 한 인자에 의해 정의될 수 있다. 1차 용량의 양은 2차 용량의 양보다 약 1 배보다 더 클 수 있다. 또는, 1차 용량은 2차(또는 후속) 용량의 양보다 약 1.5 배, 약 2 배, 약 2.5 배, 약 3 배, 약 3.5 배, 약 4 배, 약 4.5 배, 약 5 배, 약 5.5 배 또는 약 6 배보다 더 클 수 있다.

유사하게, 2차(또는 후속) 용량의 양은 1차 용량의 양보다 약 6 배 미만일 수 있다. 또는, 2차(또는 후속) 용량의 양은 1차 용량의 양보다 약 5.5 배 미만, 또는 약 5.0 배 미만, 또는 약 4.5 배 미만, 또는 약 4.0 배 미만, 또는 약 3.5 배 미만, 또는 약 3.0 배 미만, 또는 약 2.5 배 미만, 또는 약 2.0 배 미만, 또는 약 1.5 배 미만, 또는 약 1.0 배 미만일 수 있다.

신장 장애를 갖는 환자에서 세균 감염을 치료하는 방법은 단일 용량의 달바반신을 투여함을 포함할 수 있다. 환자는 경증, 중등도, 중증 또는 말기 단계의 신장 장애를 가질 수 있다. 상기 단일 용량의 양은 약 1200 ㎎, 또는 약 1150 ㎎, 또는 약 1100 ㎎, 또는 약 1050 ㎎, 또는 약 1000 ㎎, 또는 약 950 ㎎, 또는 약 900 ㎎, 또는 약 850 ㎎, 또는 약 800 ㎎, 또는 약 750 ㎎, 또는 약 700 ㎎, 또는 약 650 ㎎, 또는 약 600 ㎎, 또는 약 550 ㎎, 또는 약 500 ㎎일 수 있다. 단일 용량의 양은 또한 약 250 내지 약 1300 ㎎, 또는 약 300 내지 약 1200 ㎎, 또는 약 350 내지 약 1100 ㎎, 또는 약 400 내지 약 1000 ㎎, 또는 약 450 내지 약 1000 ㎎, 또는 약 500 내지 약 1000 ㎎, 또는 약 550 내지 약 950 ㎎, 또는 약 600 내지 약 900 ㎎, 또는 약 650 내지 약 850 ㎎일 수 있다.

본 발명은 또한 달바반신을 제공하고 안정화제를 첨가함을 포함하는, 전술한 약학 조성물의 제조 방법을 포함한다. 한 태양에서, 안정화제는 탄수화물 또는 당이다. 또 다른 태양에서, 안정화제는 만니톨, 락토스 또는 그의 혼합물이다.

또 다른 태양에서, 상기 방법은 경우에 따라, 조성물의 pH를 조정하는 단계를 추가로 포함한다. 한 태양에서, pH는 약 1 내지 7, 보다 바람직하게는 약 2 내지 6, 더 바람직하게는 약 3 내지 5로 조정된다. pH는 pH 조절제를 사용하여 조정될 수 있다. pH 조절제로는 알칼리 및 알칼리토 금속의 무기 염기, 예를 들면, NaOH, Ca(OH)₂, KOH 및 Mg(OH)₂가 포함된다. 알칼리 및 알칼리토 금속의 무기 산화물, 탄산염, 중탄산염도 또한 pH 조절제로 사용할 수 있다. 무기 약산 및 양쪽성 산, 예를 들면, 인산, 붕산, 황산 및 다른 모든 황-함유 산의 알칼리 및 알칼리토 금속염도 또한 pH 조절제로 사용할 수 있다. 라이신, 메글루민, 아르기닌, n-메틸 글루코사민과 같은 아미노산도 또한 pH를 조절하기 위해 사용할 수 있다. 모든 아민, 페놀, 약 카복실산, 다이카복실산, 하이드록시 카복실산 및 그의 염을 포함하여 유기 염기도 또한 조성물의 pH를 조절하기 위해 사용할 수 있다.

또 다른 태양에서, 적어도 5일 동안 개인에서 달바반신의 치료 효과적인 혈장 농도를 제공하기에 충분한 양의 하나 이상의 단위 용량의 달바반신 및 약학적으로 허용되는 담체를 투여함을 포함하는, 세균 감염의 치료를 필요로 하는 개인에서 세균 감염을 치료하는 방법이 제공된다. 달바반신의 치료 효과적인 혈장 농도는 일반적으로 혈장 ℓ 당 달바반신 약 4 ㎎ 이상이다. 한 태양에서, 투여되는 달바반신의 투여량은 임상적으로 효과적이며 또한 테이코플라닌 및 반코마이신과 같은 약물에 의한 관리 기준과 비교하여 감소된 부작용을 갖는 양이다.

달바반신은 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 일부 태양에서, 약 100 내지 약 4000 ㎎, 예를 들면, 3000 ㎎의 달바반신의 단일 용량을 투여한다. 다양한 태양에서, 단일 달바반신 용량은 약 0.1, 0.25, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 또는 3 g 이상을 포함할 수 있다.

다른 태양으로, 두 개 용량을 약 5 내지 약 10일 간격으로, 예를 들면, 약 1주일 간격으로 투여한다. 1차 용량은 약 500 내지 약 5000 ㎎의 달바반신이고, 2차 용량은 약 250 내지 약 2500 ㎎의 달바반신일 수 있다. 종종, 1차 용량은 2차 용량에 함유된 달바반신 양의 약 1.5 내지 약 3 배, 종종 약 2 배 이상을 포함한다. 예를 들면, 1차 용량은 약 1000 ㎎일 수 있고 2차 용량은 약 500 ㎎의 달바반신일 수 있다. 또 다른 태양에서, 1차 용량은 약 1200 ㎎이고, 2차 용량은 약 600 ㎎일 수 있다. 두 개 용량을 투여하는 방법에서, 2차 용량을 투여하기 전 개인에서 달바반신의 혈장내 최저 농도는 일반적으로 혈장 ℓ 당 달바반신 약 4 ㎎ 이상, 종종 약 10 ㎎ 이상, 종종 약 20 ㎎ 이상, 보다 흔히 약 30 ㎎ 이상이며, 보다 더 흔히는 혈장 ℓ 당 약 40 ㎎ 이상의 달바반신이다.

종종, 본 발명의 방법은 비경구 투여, 예를 들면, 정맥내 투여를 포함한다. 일부 태양에서, 투여가 적어도 약 30분 이상에 걸쳐 일어나도록 조절된 투여 속도 하에 정맥내로 투여한다.

본 발명의 방법은 그램-양성 세균 감염, 예를 들면, 스태필로코커스 오레우스 또는 스트렙토코커스 피오제네스 피부 및 연조직 감염을 치료하기 위해 이용될 수 있다. 일부 태양에서, 감염은 페니실린-내성 및/또는 다중 약물 내성이다.

또 다른 태양으로, 적어도 약 1일, 3일, 5일, 1주일 또는 10일 이상 동안 개인에서 예방 효과적인 혈장 농도의 달바반신을 제공하기에 충분한 양의 하나 이상의 단위 용량의 달바반신 및 약학적으로 허용되는 담체를 투여함을 포함하는, 세균 감염을 예방하는 방법이 제공된다. 달바반신의 투여량은, 예를 들면, 약 100 내지 약 1000 ㎎일 수 있다. 일부 태양에서, 달바반신은 의료 절차 또는 병원 체류 전에, 중에 또는 그에 이어서 투여한다.

본 발명의 치료 또는 예방 방법은 달바반신이 아닌 항생물질, 바람직하게는 그램-음성 세균에 효과적인 항생물질 및/또는 달바반신이 효과가 없는 그램-양성 균주, 예를 들면, VanA 균주에 대해 효과적인 항생물질 하나 이상을 투여함을 포함할 수 있다.

또 다른 태양에서, 개인에서 약 5일 이상 동안 치료 효과적인 혈장 농도 또는 약 1일 이상 동안 예방 효과적인 혈장 농도의 달바반신을 제공하기에 충분한 양의 하나 이상의 단위 용량의 달바반신, 및 세균 감염의 치료 또는 예방 방법에서 사용하기 위한 설명서를 포함하는 키트가 제공된다. 키트는 2개의 단위 투여량을 함유할 수 있으며, 이때 1차 투여량은 2차 투여량에 포함된 달바반신 양의 1.5 내지 3 배, 종종 약 2 배 이상이다. 키트는 또한 바람직하게는 그램-음성 세균에 대 해 효과적인, 달바반신이 아닌 항생물질을 포함할 수 있다.

한 태양에서, 건조 분말(예를 들면, 동결건조) 달바반신 조성물을 함유하는 제 1 용기 및 예정된 양의, 달바반신 조성물과 혼합하기 위한 생리적으로 허용되는 수용액을 함유하는 제 2 용기를 포함하는 키트가 제공된다. 상기 용액은 바람직하게는 멸균 수용액이다. 한 태양에서, 키트는 달바반신 조성물을 개인에게 투여하기 위한 전달 수단, 예를 들면, 주사기 또는 정맥내 투여 수단을 포함한다.

본 발명은 또한 감염성 미생물에 대해 유용성을 갖는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 제공한다. 본 발명의 화합물은 미생물 감염, 예를 들면, SSTI 및 다른 세균 감염을 치료 및/또는 예방하는데 유용하다.

본 발명은 부분적으로 이전에 알려진 N¹⁵-모노알킬 항생물질 화합물, 예를 들어, 달바반신 화합물에 적어도 필적하거나 그보다 훨씬 큰 항미생물 활성을 갖는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질의 발견을 기초로 한다. 또한, 하기 실시예에 기술된 바와 같이, 본 발명의 특정 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 N¹⁵-모노메틸 달바반신 화합물과 같은 이전에 알려진 N¹⁵-모노알킬 항생물질 화합물과 비교할 때 보다 광범위한 스펙트럼의 미생물에 대해 활성을 나타낸다.

한 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 1에 따른 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 제공한다:

본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물(도 26에 따라 번호매긴 원자들을 가짐)은 아미노 말단 질소상에 2개의 알킬 치환체를 포함한다. 즉, 화학식 1에서 R¹ 및 R^1'는 알킬이다. 본 발명의 가장 바람직한 태양에서, R¹ 및 R^1'는 메틸이다. 화학식 1의 다른 치환체는 하기에서 상세히 기술한다. 바람직한 치환체로는 항생물질 A 40926 화합물 및/또는 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 달바반신 화합물에서 발견된 것들이 포함된다. 예를 들면, 바람직한 태양에서, G 및 M은 하기 부분에서 설명한 아미노글루쿠로닐 및 만노피라노실 잔기와 같은 글라이코실 잔기이다. 특정 태양에서, 아미노글루쿠로닐 잔기는, 예를 들면, 지방산으로 아실화되고, 특정 태양에서, 만노피라노실 잔기는 아세틸화된다.

특정 태양에서, X는 OH인 반면, 다른 태양에서, X는 아미노알킬아미노이다. 아미노알킬아미노기는 미국 특허 제 5,750,509 호에 기술된 것들을 포함하여, 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 임의의 아미노알킬아미노기일 수 있다. 바람직한 태양에서, X는 N,N-다이메틸아미노프로필아미노이다. 하기 실시예에서 상세히 기술 하는 바와 같이, X가 아미노알킬아미노인 화학식 1에 따른 화합물은 미국 특허 제 5,750,509 호에 기술된 바와 같은 상응하는 달바반신 화합물에 필적하거나 그보다 큰 항생물질 활성을 나타낸다. X가 아미노알킬아미노인 화합물이 바람직하지만, X가 OH인 화합물도, 예를 들면, X가 아미노알킬아미노인 본 발명의 화합물의 제조에 유용하며, 이들은 또한 자체로 미생물 감염을 치료 및/또는 예방하는데 유용할 수 있다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 및 제 2의 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 제 2의 화합물은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 임의의 화합물일 수 있다. 특정 태양에서, 제 2의 화합물은 항생물질 화합물, 예를 들면, 항생물질 A 40926 화합물 또는 달바반신 화합물이다. 또 다른 태양에서, 제 2의 화합물은 또한 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이다. 본 발명의 예시적인 조성물은 화학식 1에 따른 화합물을 또한 포함하는, 항생물질 A 40926 화합물 및/또는 달바반신 화합물의 혼합물을 포함한다. 특정 태양에서, 조성물은 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 증대된다. 상기 증대는 조성물의 항생물질 A 40926 화합물 및/또는 달바반신 화합물에 대한 것이거나, 또는 조성물의 다른 화합물에 대한 것이거나, 또는 둘 다일 수 있다. 특정 태양에서, 본 발명은 본 발명의 정제된 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물, 본 발명의 단리된 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물, 또는 본 발명의 정제되고 단리된 N¹⁵,N¹⁵- 다이알킬 항생물질 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 바람직한 조성물은 X가 아미노알킬아미노인 화학식 1에 따른 화합물을 포함한다. 상기 조성물은 항생물질 A 40926 화합물 및/또는 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 달바반신 화합물을 포함하여 다른 활성 성분들을 또한 포함할 수 있다. 특정 태양에서, 약학 조성물은 또한 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함한다. 특정 태양에서, 본 발명은, 예를 들면, 미생물 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 본 발명 화합물의 약학적 단위 투약 제형을 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 달바반신 인자 B₀ 및 B₂를 포함하는, 약학적으로 허용되는 비히클로 복원되기에 적합한 멸균되고 안정하며 입자가 없는 달바반신 분말을 포함하는 투약 제형을 제공한다. B₂, C₂ 및 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B₀란 명칭은 상호교환적으로 사용되었다. 한 태양에서, 인자 B₀의 함량은 약 75% HPLC 분포 이상, 또는 약 80% HPLC 분포 이상, 또는 약 85% HPLC 분포 이상, 또는 약 90% HPLC 분포 이상, 또는 약 95% HPLC 분포 이상이다. 인자 B₂의 함량은 약 4.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 5.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 6.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 7.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 8.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 9.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 10.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 15.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 20.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 25.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 30.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 40.0% HPLC 분포 이상이다. 특정 화합물의 % HPLC 분포는 각각의 단일 성분의 면적을 전체 크로마토그래피 면적에 비교하여 산출할 수 있다. 상기 투약 제형은 또한 하나 이상의 추가 인자, 예를 들면, 달바반신 인자 A₀, A₁, B₁, C₀ 또는 C₁을 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 달바반신 인자 B₀ 및 B₂를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 한 태양에서, 인자 B₀의 함량은 약 75% HPLC 분포 이상, 또는 약 80% HPLC 분포 이상, 또는 약 85% HPLC 분포 이상, 또는 약 90% HPLC 분포 이상, 또는 약 95% HPLC 분포 이상이다. B₂의 함량은 약 3.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 4.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 5.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 6.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 7.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 8.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 9.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 10.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 15.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 20.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 25.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 30.0% HPLC 분포 이상, 또는 약 40.0% HPLC 분포 이상이다. 상기 정의한 바와 같이, 특정 성분의 % HPLC 분포는 각각의 단일 성분의 면적을 전체 크로마토그래피 면적에 비교하여 산출할 수 있다. 약학 조성물은 또한 하나 이상의 추가 인자, 예를 들면, 달바반신 인자 A₀, A₁, B₁, C₀ 또는 C₁을 포함할 수 있다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 또한 B₂ 성분의 농도저하를 제공한다. 한 태 양에서, 인자 B₂의 함량은 약 5.0% HPLC 분포 이하, 또는 약 4.5% HPLC 분포 이하, 또는 약 4.0% HPLC 분포 이하, 또는 약 3.5% HPLC 분포 이하, 또는 약 3.0% HPLC 분포 이하, 또는 약 2.5% HPLC 분포 이하, 또는 약 2.0% HPLC 분포 이하, 또는 약 1.5% HPLC 분포 이하, 또는 약 1.0% HPLC 분포 이하, 또는 약 0.5% HPLC 분포 이하, 또는 약 0.1% HPLC 분포 이하이다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 미생물 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상에서 상기 치료 및/또는 예방 방법을 제공한다. 상기 방법은 대상에게 효과량의 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 투여함을 포함할 수 있다. 본 발명은 그램-양성 또는 항생물질-내성 세균 감염, 예를 들면, 바실러스(Bacillus), 코리네박테리아(Corynebacteria), 리스테리아(Listeria), 엔테로코커스(Enterococcus), 스태필로코커스, 스트렙토코커스, 네이세리아(Neisseria) 또는 클로스트리듐 속 감염, 특히, 스태필로코커스 오레우스 , 스태필로코커스 에피더미스(S. epidermis ), 스태필로코커스 헤모라이티쿠스 (S. hemolyticus ), 스트렙토코커스 피오제네스 , 스트렙토코커스 뉴모니에 (S. pneumoniae), 그룹 A 및 C 스트렙토코커스 , 엔테로코커스 페칼리스 (E. faecalis ), 바실리스 서브틸리스 (B, subtilis ), 네이세리아 고노르호에아 (N. gonorrhoeae) 또는 클로스트리듐 디피사일(C. difficile)의 감염의 예방 또는 치료를 포함한다. 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물, 조성물 및 방법을 이용하여 예방 또는 치료될 수 있는 다른 감염으로는 그램-음성 세균 감염, 예를 들면, 바르토넬라(Bartonella), 브루셀 라(Brucella), 캄필로박터(Campylobacter), 엔테로박터(Enterobacter), 에스케리키아(Escherichia)(및 다른 프로테오박테리아(Proteobacteria)), 프랜시셀라(Francisella), 헬리코박터(Helicobacter), 헤모필러스(Hemophilus), 클렙시엘라(Klebsiella), 레지오넬라(Legionella), 렙토스피라(Leptospira), 모가넬라(Morganella), 모라셀라(Moraxella), 프로테우스(Proteus), 프로비덴시아(Providencia), 슈도모나스(Pseudomonas), 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia), 쉬젤라(Shigella), 스테노트로포모나스(Stenotrophomonas), 비브리오(Vibrio) 및 예시니아(Yersinia) 속 감염, 특히, 에스케리키아 콜라이 (E. coli ), 프로테우스 불가리스(P. vulgaris ), 슈도모나스 에루기노사스 (P. aeruginosas) 및 효모, 예를 들면, 캔디다 알비칸스( Candida albicans) 감염이 포함된다.

놀랍게도, 안정화된 달바반신 배합물은 약학적 창 뿐 아니라, 연장된 혈청내 반감기를 둘 다 나타내어 생체내에서 항균성을 보유하면서 5 내지 7일 이상마다 약 1회의 치료 방법을 가능케하는 것으로 밝혀졌다.

정의

본 발명의 화합물, 상기 화합물을 함유하는 약학 조성물, 및 상기 화합물 및 조성물의 사용 방법을 설명할 때, 하기의 용어들은 달리 언급하지 않는 한 하기의 의미를 갖는다.

"항생물질 A 40926 화합물"은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 글라이코펩타이드 항생물질을 말한다. 예시적인 항생물질 A 40926 화합물은 미국 특허 제 4,935,238, 4,868,171 및 4,782,042 호에 기술되어 있으며, 상기 특허들은 본원에 그대로 참고로 인용된다.

"달바반신 화합물"은 본원에 그대로 참고로 인용된 미국 특허 제 5,750,509 호 및 미국 특허출원 공개번호 2004/0142883 호에 기술된 글라이코펩타이드 항생물질을 말한다. 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 예시적인 달바반신 화합물의 분류명은 리스토마이신 A 아글리콘, 5,31-다이클로로-38-데(메톡시카보닐)-5-데메틸-19-데옥시-56-O-(2-데옥시-2-((10-메틸-1-옥소운데실)아미노)-베타-D-글루코피라누로노실)-38-(((3-(다이메틸아미노)프로필)아미노)-카보닐)-42-O-알파-D-만노피라노실-N¹⁵-메틸이다. 예로는 도 26 및 27에 도시된 것들이 포함된다. 달바반신 화합물로는 56 및 42번 위치에 선택적인 당 잔기 및 당 위에 지방산과 같은 선택적인 아실기를 갖는 화합물이 포함된다. 달바반신 화합물은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 천연 항생물질 A-40926으로부터 유도될 수 있다. 예시적인 달바반신 화합물로는 달바반신 A₀, A₁, B₀, B₁, C₀ 및 C₁과 같이, 미국 특허출원 공개 번호 제 2004/0142883 호에 기술된 것들이 포함된다.

하기 부분에서 상세히 설명하는 "N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물"은 본 발 명의 화합물, 즉, 그의 N¹⁵-질소 상에 2개의 알킬기를 갖는 항생물질 화합물을 말한다. 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 항생물질 A 40926 화합물로부터 또는 달바반신 A₀, A₁, B₀, B₁, C₀ 및 C₁과 같은 달바반신 화합물로부터 유도될 수 있다.

하기 부분에서 상세히 설명하는 "N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물"은 본 발명의 화합물, 즉, 그의 N¹⁵-질소 상에 2개의 메틸기를 갖는 항생물질 화합물을 말한다.

"아실"은 라디칼 -C(O)R을 말하며, 이때 R은 알킬이다.

"알킬"은 바람직하게는 1 내지 약 11개의 탄소원자, 보다 바람직하게는 1 내지 8개의 탄소원자, 보다 더 바람직하게는 1 내지 6개의 탄소원자를 갖는 1가 포화 지방족 하이드로카빌기를 말한다. 탄화수소 쇄는 선형이거나 분지될 수 있다. 상기 용어는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-뷰틸, 아이소-뷰틸, 3급-뷰틸, n-헥실, n-옥틸, 3급-옥틸 등과 같은 기로 예시된다. 용어 "저급 알킬"은 1 내지 6개의 탄소원자를 갖는 알킬기를 말한다.

"알킬렌"은 바람직하게는 1 내지 11개의 탄소원자, 보다 바람직하게는 1 내지 6개의 탄소원자를 갖는, 선형이거나 분지될 수 있는 2가 포화 지방족 하이드로카빌기를 말한다. 상기 용어는 메틸렌(-CH₂-), 에틸렌(-CH₂CH₂-), 프로필렌 이성 체(예를 들면, -CH₂CH₂CH₂- 및 -CH(CH₃)CH₂-) 등과 같은 기로 예시된다.

"아미노"는 라디칼 -NH₂를 말한다.

"알킬아미노"는 라디칼 -NH-알킬 또는 -N(알킬)₂를 말한다.

"아미노알킬아미노"는 형태 -NR-(알킬)-NR'R"의 라디칼을 말하며, 이때 R, R' 및 R"는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬, 치환된 사이클로헤테로알킬, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴기를 나타낸다. 바람직한 R, R' 및 R" 기는 수소 및 알킬을 포함한다. 예시적인 아미노알킬아미노기는 본원에 그대로 참고로 인용된 미국 특허 제 5,750,509 호에 기술되어 있다.

"카복시"는 라디칼 -C(O)OH를 말한다.

"다이알킬아미노"는 라디칼 -NRR'를 말하며, 이때 R 및 R'는 각각 독립적으로 본원에 정의된 바와 같은 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬, 치환된 사이클로헤테로알킬, 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴기를 나타낸다.

"할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 말한다. 바람직한 할로기는 플루오로 또는 클로로이다.

특정 성분의 "% HPLC 분포"는 특정 성분에 상응하는 피크 면적을 전체 크로마토그래피 면적과 비교함으로써 산출한다.

"약학적으로 허용되는"이란 연방 또는 주 정부의 승인(연구 또는 상업적 용 도를 위한 관리 기간에 의한), 또는 동물, 보다 특히는 인간에서의 용도에 대해 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인지된 약전에 열거됨을 의미한다.

"약학적으로 허용되는 염"은 약학적으로 허용되며 모 화합물의 바람직한 약리 활성을 갖는 본 발명 화합물의 염을 말한다. 상기 염으로는 다음이 포함된다: (1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 트라이클로로아세트산, 프로피온산, 헥사노산, 사이클로펜틸프로피온산, 글라이콜산, 글루타르산, 피루브산, 락트산, 말론산, 석신산, 솔브산, 아스콜브산, 말산, 말레산, 퓨마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-하이드록시벤조일)벤조산, 피크르산, 신남산, 만델산, 프탈산, 라우르산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 1,2-에테인-다이설폰산, 2-하이드록시에테인설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄포산, 캄포설폰산, 4-메틸바이사이클로[2.2.2]-옥트-2-엔-1-카복실산, 글루코헵타노산, 3-페닐프로피온산, 트라이메틸아세트산, 3급-뷰틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 벤조산, 글루탐산, 하이드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산 및 유사 산과 같은 유기 또는 무기 산에 의해 생성된 산부가염; 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 (a) 금속 이온, 예를 들면, 알칼리 금속 이온, 알칼리토 이온 또는 알루미늄 이온, 또는 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속 수산화물, 예를 들면, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 바륨 수산화물, 암모니아로 치환되거나, 또는 (b) 유기 염기, 예를 들면, 지방족, 지환족 도는 방향족 유기 아민, 예를 들면, 메틸아민, 다이메틸아민, 다이에틸아민, 피콜린, 에탄올아민, 다이에탄올아민, 트라이에탄올아민, N-메틸글루카민 등과 배위될 때 생성되는 염(예를 들면, 미국 특허 제 5,606,036 호 참조).

염으로는 또한, 단지 예로서, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 테트라알킬암모늄 등, 및 화합물이 염기성 작용기를 함유하는 경우, 무독성 유기 또는 무기산의 염, 예를 들면, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 타르트레이트, 메실레이트, 아세테이트, 말리에이트, 옥살레이트 등이 포함된다. 용어 "약학적으로 허용되는 양이온"은 산성 작용기의 무독성의, 약학적으로 허용되는 양이온성 상대이온을 말한다. 상기 양이온은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄 및 테트라알킬암모늄 양이온 등으로 예시된다.

"약학적으로 허용되는 비히클"은 그를 사용하여 본 발명의 화합물이 투여되는 희석제, 보조제, 부형제 또는 담체를 말한다.

"용매화물"은 비공유성 분자간 힘에 의해 결합된 화학양론 또는 비-화학양론적 양의 용매를 또한 포함하는, 본 발명의 화합물 또는 그의 염을 말한다. 용매가 물인 경우, 용매화물은 수화물이다.

"예방하는" 또는 "예방"은 질환 또는 질병을 초래하는 위험의 감소(즉, 질환에 노출되거나 걸리기 쉬울 수 있지만 아직 질환 증상을 겪지 않거나 나타내지 않는 대상에서 질환의 임상적 증상들 중 하나 이상이 발생하지 않게 하는 것)를 말한다. 바람직하게, 예방은 질환 또는 질병에 의해 아직 영향받지 않거나 또는 질환 또는 질병의 증상을 아직 나타내지 않는 대상, 예를 들면, 아직 감염되지 않거나 또는 아직 감염 증상을 나타내지 않는 대상에서 화합물 또는 조성물의 사용을 말한다.

"대상"은 인간을 포함한다. 용어 "인간", "환자" 및 "대상"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다.

"치료 효과량"은 질환을 치료하기 위해 대상에게 투여시 질환의 상기 치료를 수행하기에 충분한 화합물 또는 조성물의 양을 의미한다. "치료 효과량"은 특히, 화합물, 질환 및 그의 중증도, 및 치료되는 대상의 연령, 체중 등에 따라 달라질 수 있다.

임의 질환 또는 질병을 "치료하는" 또는 "치료"는, 한 태양에서, 대상에서 존재하는 질환 또는 질병을 개선하는(즉, 질환 또는 그의 임상적 증상의 하나 이상의 진전을 억제 또는 감소시키는) 것을 말한다. 또 다른 태양에서, "치료하는" 또는 "치료"는 대상에 의해 분간하기 어려울 수 있는 하나 이상의 물리적 파라미터를 개선하는 것을 말한다. 또 다른 태양에서, "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 질병을 물리적으로(예를 들면, 식별되는 증상의 안정화) 또는 생리학적으로(예를 들면, 물리적 파라미터의 안정화) 또는 둘 다 완화하는 것을 말한다. 또 다른 태양에서, "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 질병의 개시를 지연시키는 것을 말한다.

동일한 분자식을 갖지만 성질 또는 그 원자 결합 순서 또는 공간에서의 그 원자의 배열이 상이한 화합물을 "이성체"라 칭함을 주지해야 한다. 공간에서의 그 원자 배열이 상이한 이성체를 "입체이성체"라 칭한다.

서로의 거울상이 아닌 입체이성체를 "부분입체이성체"라 칭하며, 서로의 비-중첩 거울상인 입체이성체를 "거울상이성체"로 칭한다. 화합물이 비대칭 중심을 갖는 경우, 예를 들면, 4개의 상이한 기에 결합되는 경우, 거울상이성체의 쌍이 가능하다. 거울상이성체는 그의 비대칭 중심의 절대 구조에 의해 규정될 수 있으며, 칸 및 프레로그(Cahn and Prelog)의 규칙에 따라 (R) 또는 (S)로 표시되거나, 또는 분자가 편광면을 회전하는 방식에 의해 규정될 수 있으며, 우선성 또는 좌선성(즉, 각각 (+)- 또는 (-)-이성체)으로 표시된다. 키랄 화합물은 그의 개개 거울상이성체 또는 그의 혼합물로 존재할 수 있다. 동일한 비율의 거울상이성체를 함유하는 혼합물은 "라세미 혼합물"로 불린다.

특정 태양에서, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 가질 수 있으며; 따라서 상기 화합물은 개개의 (R)- 또는 (S)-거울상이성체로 또는 그의 혼합물로 생성될 수 있다. 달리 언급하지 않는 한, 예를 들면, 화학식의 임의 위치에서의 입체화학의 표시에 의해, 명세서 및 청구의 범위에서 특정 화합물의 설명 또는 명명은 개개의 거울상이성체, 및 그의 라세미든 다른 것이든 그의 혼합물을 포함하는 것이다. 입체화학의 측정 방법 및 입체이성체 분리는 당해 분야에 공지되어 있다. 특정 태양에서, 본 발명은 염기로 처리시 본원에 기술된 화합물의 입체이성체를 제공한다.

본 발명은 달바반신의 신규 약학 조성물, 약학 조성물의 제조 방법, 및 상기 신규 조성물을 이용하여 세균 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 특히, 본 발명은 살균 활성을 갖는 안정한 달바반신 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 활성 달바반신 성분의 심한 분해없이, 냉장되거나 또는 실온에서 연장된 시간 동안, 보다 바람직하게는 1년 이상 실온에서, 보다 바람직하게는 2년 이상 실온에서 저장될 수 있 다.

본 발명은 또한 달바반신의 개선된 투여 방법 및 신규 조성물, 및 항생물질-내성 세균 감염을 치료하는 개선된 방법을 제공한다. 특히, 본 발명은 하나 이상의 항생물질 내성 세균 균주, 예를 들면, MRSA 대해 활성을 갖는 달바반신 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 5 내지 7일 이상마다 한번씩 투여하는 방법으로 투여될 수 있다.

과학 문헌에서 BI397 또는 VER001로도 또한 지칭되는 달바반신은 반-합성 글라이코펩타이드 혼합물로서, 그 성질은 미국 특허 제 5,606,036, 5,750,509, 5,843,679 및 5,935,238 호에 보고되었다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "달바반신"은, 하기에서 설명하는 바와 같이, "A₀", "A₁", "B₀", "B₁", "C₀", "C₁", "B₂" 또는 "C₂", "D₀" 및 "D₁"으로 지칭되는 하나 이상, 바람직하게는 둘 이상, 일부 경우에 셋 이상, 일부 경우에 넷 이상, 일부 경우에 다섯개 이상의 밀접하게 관련된 동족체, 또는 그의 단량체, 다량체(즉, 이량체 또는 보다 고차 다량체), 호변이성체, 에스터, 용매화물 또는 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 조성물을 말한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "이량체" 또는 "다량체"는 단독이량체 또는 단독다량체, 즉, 동일한 달바반신 동족체의 단량체로 이루어진 이량체 또는 다량체, 또는 이종이량체 또는 이종다량체, 즉, 둘 이상의 상이한 달바반신 동족체의 단량체로 이루어진 이량체 또는 다량체를 말한다. 상기 인자들은 C₂(B₂로도 알려짐)를 제외하고 N-아실아미노글루쿠론산 잔기의 지방 산 측쇄의 구조가 상이하다. C₂ 성분의 질량 분광측정은 말단 아미노기 상의 추가의 메틸렌기의 존재를 나타내었다. 달바반신은 종종 "MAG", 곧 아실글루큐론아민 잔기가 결여된, 하기에 설명하는 비-동종 변이체를 포함한다. 개별적으로, 달바반신 동족체 및 MAG는 때때로 본원에서 "달바반신 성분"으로 지칭된다.

달바반신은 문헌 [Malabarba and Donadio, Drugs of the Future, 24(8):839-946, 1999]에 기술된 바와 같이 천연 글라이코펩타이드 착체 A-40,926의 화학 변형에 의해 제조된다. 달바반신의 우세한 성분은 인자 B₀로, 전체 착체의 75% 이상을 차지한다.

달바반신 조성물에 존재하는 성분들 각각의 양은, 예를 들면, 달바반신의 전구체인(예를 들면, 미국 특허 제 5,843,679 호) 천연 글라이코펩타이드 착체 A-40926의 제조에 사용된 발효 조건, 발효액으로부터 A-40926을 회수하기 위해 사용된 조건, A-40926의 당 잔기의 카복실기를 선택적으로 에스터화하기 위해 사용된 화학 반응, 펩타이딜 카복실기를 아마이드화하기 위해 사용된 조건, N-아실아미노글루쿠론산 작용기의 카복실기의 에스터를 비누화하기 위해 사용된 조건, 합성 혼합물로부터 달바반신을 회수하기 위해 사용된 조건 등을 포함하여, 다양한 요인들에 의해 결정된다.

바람직한 태양에서, 달바반신 조성물은 적어도 약 80 내지 약 98 중량%의 B₀ 성분을 포함한다. 특히 바람직한 태양에서, 달바반신은 하기 양의 B₀를 포함한다:

한 태양에서, 달바반신 조성물 또는 배합물은 존재한다면 최소량의 성분 C₀, C₁ 및 C₂(B₂)를 함유한다. 또 다른 태양에서, 달바반신 조성물 또는 배합물은 성분들 C₀, C₁ 및 C₂(B₂) 중 어느 것도 함유하지 않는다.

개개의 달바반신 인자들은 HPLC에 의해 미리 정제되고 NMR로 특성화하였다. 미국 특허 제 5,750,509 호에서, 말라바바 등은 N-아실아미노글루쿠로닐 잔기상에 카복시, (C₁-C₄)알콕시-카보닐, 아미노카보닐, (C₁-C₄)알킬아미노카보닐 또는 하이드록시메틸 치환체, 및 분자의 63번 위치에 하이드록실 또는 폴리아민 치환체를 갖는 것으로 특성화된 항생물질 A 40926 유도체를 기술하였다. 본 발명의 화합물은 글라이코펩타이드 내성 엔테로코커스 및 스태필로코커스에 대해 높은 시험관내 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 말라바바 등은 약학적으로 유리한 인자들의 조합을 인지하지도 않았고 아실글루큐론아민 잔기가 결여된 분해 생성물을 확인하거나 특성화하지도 않았다. 말라바바 등은 MAG 또는 생성된 멸균 형태에 대해 모니터하지 않았다. 말라바바 등은 HPLC에 의해 단지 소량을 정제하였으며 정량적 질량 분석은 행하지 않았다.

여러 달바반신 성분의 화학 구조를 하기 화학식 2에 도시한다:

상기 달바반신 성분들은 모두 많은 그램-양성 세균에 대해 살균 활성이다. 그러나, 다른 성분에 존재하는 아실글루코로나민 잔기가 결여된 "MAG"로 지칭된 하나의 비-동종 달바반신 성분은 다른 달바반신 성분들보다 생체내 또는 시험관내 모두에서 살균 효과가 덜하다(표 2 및 3 참조). MAG는 하나 이상의 다른 달바반신 성분의 분해 생성물인 것으로 생각된다. 따라서, 바람직한 태양에서, 달바반신 중의 MAG의 양은 MAG를 포함하여 존재하는 모든 달바반신 성분들의 약 4, 3.5, 3, 2.5, 2, 1.5, 1 또는 0.5 몰% 미만이다.

최종 약물 물질에서의 추가의 변형은 발효 공정, 후속 화학 단계 또는 건조로부터 비롯된다. 아이소B₀(RRT 0.76)는 달바반신 코어 구조에서 불안정한 양성자의 에피머화로부터 비롯된 달바반신 B₀의 부분입체이성체이다. 상기 화합물은 전구체 A-40926을 염기로 탈아세틸화하는 동안 생성되어 A-40926의 부분입체이성체를 형성한다. 상기 부분입체이성체는 이어서 후속의 화학 변형 단계에서 아이소B₀로 전환된다. 아이소B₀는 HPLC 분리 방법에서 잘 분해되어 API에서 검출되는 유일한 입체이성체이다. 실험실 데이터는 아이소B₀가 에스터 형태(MA-A-I)를 달바반신으로 전환시키는 염기성 가수분해 과정 도중에 생성되지 않음을 입증하였다. 아이소B₀는 NMR 및 MS에 의해 특성화되었으며, 달바반신 B₀에 필적하는 생체내 생물 활성을 입증하였다.

달바반신 조성물 중 아이소B₀의 농도는 약 3.5% 미만, 또는 약 3.0% 미만, 또는 약 2.5% 미만, 또는 약 2.0% 미만, 또는 약 1.5% 미만, 또는 약 1.0% 미만, 또는 약 0.5% 미만, 또는 약 0.4% 미만, 또는 약 0.3% 미만, 또는 약 0.2% 미만, 또는 약 0.1% 미만이다.

달바반신 조성물 중 아이소B₀의 농도는 약 0.5 내지 약 3.0%, 또는 약 0.5 내지 약 2.8%, 또는 약 0.5 내지 약 2.5%, 또는 약 0.5 내지 약 2.3%, 또는 약 0.5 내지 약 2.0%, 또는 약 0.5 내지 약 1.8%, 또는 약 0.5 내지 약 1.5%, 또는 약 0.5 내지 약 1.3%, 또는 약 0.5 내지 약 1.0%, 또는 약 0.1 내지 약 0.5%일 수 있다.

달바반신 조성물 중 아이소B₀의 수준은 또는 약 1.0% 이상, 또는 약 1.5% 이상, 또는 약 2.0% 이상, 또는 약 2.5% 이상, 또는 약 3.0% 이상, 또는 약 3.5% 이상, 또는 약 4.0% 이상, 또는 약 4.5% 이상, 또는 약 5.0% 이상이다.

달바반신은 펩타이도글라이칸의 D-알라닐-D-알라닌-말단 전구체에 결합함으로써 세균 세포벽의 생합성을 억제하는 것으로 생각된다. 달바반신의 이량체 또는 보다 고차 다량체는 친유성 측쇄와 세균의 세포질막의 상호작용에 의해 추가의 항균 활성을 가질 수 있다(예를 들면, 문헌 [Malabarba and Ciabatti, et al., Current Medicinal Chemistry, 8:1759-1773, 2001] 참조). 달바반신 다량체에 대한 추가의 연구는 2003년 11월 14일자로 출원된 미국 특허출원 제 10/714,166 호[발명의 명칭: "세균 감염을 치료하기 위한 달바반신 조성물(DALBAVANCIN COMPOSITIONS FOR TREATMENT OF BACTERIAL INFECTIONS)", 대리인 사건 번호 34231-20052.00]에서 찾아 볼 수 있으며, 상기 출원은 본원에 그대로 참고로 인용된다.

시험관내, 비임상 및 임상 데이터는 달바반신이, 반코마이신에 별로 민감하지 않거나 내성인 반B 및 반C 표현형을 포함하여, MRSA 및 CoNS, 및 모든 스트렙토코커스 및 비-반A 엔테로코커스 종에 의해 야기된 심한 그램-양성균 감염의 치료에 유리함을 나타낸다.

달바반신은 시험관내에서 테이코플라닌 및 반코마이신보다 스태필로코커스(일부 테이코플라닌-내성 균주 포함)에 대해 보다 활성이다. 달바반신은 테이코플라닌 또는 반코마이신보다 페니실린-내성균을 포함하여 스트렙토코커스에 대해 더 우수한 활성을 갖는다. 달바반신은 대부분의 약물 내성 균주를 포함하여 많은 그램-양성 세균에 대해 시험관내 및 생체내에서 활성이다.

달바반신은 전형적으로 달바반신 조성물로서 개인에게 투여된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "달바반신 조성물" 또는 "달바반신 배합물"은 상기 정의한 바와 같은 달바반신, 및 하나 이상의 다른 비-달바반신 성분, 예를 들면, 약학적으로 허용되는 담체, 안정화제, 완충제 또는 다른 유사 성분들을 포함하는 조성물, 전형적으로는 약학 조성물을 말한다.

실시예 1에서 보듯이, 달바반신은 1주일의 투여 간격에서 효과적이다. 따라서, 다른 치료 옵션에 대한 달바반신의 이점은 상기 항생물질을 매주 1회 기준으로 투여함으로써 환자의 치료순응도를 최대화하고 비경구 항생물질 투여를 위한 병원 체류의 필요성을 잠재적으로 최소화하거나 체류 기간을 감소시키는 능력이다. 덜 잦은 투여는 종종 외래환자 기준으로 치료를 허용함으로써 치료 비용을 감소시킨다. 실시예 1에서 또한 보듯이, 1차 투여량 투여 후 약 1주일 후의 2차 용량의 달바반신(이때, 2차 용량은 대략 1차 용량의 절반이다)은 예기치 않게 치료 효과에 상당한 개선을 제공한다.

사용 방법

이전에, 단일 용량 및 단일 용량 방법을 포함하여 달바반신에 대한 다양한 투여 방법이 보고되었다. 레이튼(Leighton) 등은 10:1의 최적 용량비(부하 용량(LD)/유지 용량(MD))에서의 다중-용량 투여를 보고하였다. 상기 연구에서는, 용량의 단계적 증가는 제 1일에 하루 2회 1120 ㎎의 단일 용량(SD) 및 500 ㎎까지의 다중 용량 방법으로 진행한 후 6일간 연속으로 매일 100 ㎎으로 진행되었다[Leighton et al., "Dalbavancin: Phase I Single and Multiple-Dose Placebo Controlled Intravenous Safety, Pharmacokinetic Study in Healthy Volunteers", 41st ICAAC Abstracts, Abstract No. 951, p.25, Chicago, IL, September 22-25, 2001].

레이튼 등은 또한 다른 단일 및 다중 용량 투여를 기술하였다. 단일 용량 연구에서, 보고된 용량의 단계적 증가는 140 ㎎, 220 ㎎, 350 ㎎, 500 ㎎, 630 ㎎, 840 ㎎ 및 1120 ㎎의 시리즈를 거쳐 진행하였다. 다중 용량 단계에서는, 투여는 12시간 간격으로 주어진 두 개의 동일 용량으로 투여된 부하 용량, 및 유지 용량으로 이루어졌다. 출발 방법은 150 ㎎, 하루 2회의 부하 용량에 이어, 6일간 하루 30 ㎎의 유지 용량이었다. 용량의 단계적 증가는 다음과 같이 진행되었다: 200 ㎎(하루 2회)/40 ㎎, 300 ㎎(하루 2회)/60 ㎎, 400 ㎎(하루 2회)/80 ㎎ 및 500 ㎎(하루 2회)/100 ㎎[Leighton et al., "Dalbavancin: Phase I Single and Multiple-Dose Placebo Controlled Intravenous Safety, Pharmacokinetic Study in Healthy Volunteers", 41st ICAAC Abstracts, Abstract No. 951, p.25, Chicago, IL, September 22-25, 2001].

화이트(White) 등은 70 ㎎, 140 ㎎, 220 ㎎ 또는 360 ㎎의 단일 0.5시간 간격 주입의 투여 방법을 보고하였다. 다중-용량 방법은 7일간 매일 투여된 70 ㎎으로 이루어졌다[White et al., "V-Glycopeptide: Phase I Single and Multiple-Dose Placebo Controlled Intravenous Safety, Pharmacokinetic, and Pharmacodynamic Study in Healthy Subjects", 40th ICAAC, Poster No. 2196 and Abstract No. 2196, Toronto, Canada, September 17-20, 2000]. 상기 언급한 참조문헌들은 모두 본원에 그대로 참고로 인용된다.

세균 감염의 치료를 필요로 하는 개인에서 달바반신을 투여하기 위한 새로운 방법이 제공된다. 치료에는 예방, 치료 또는 회복이 포함될 수 있다. 상기 방법은 하나 이상의 단위 용량의 달바반신을 치료 또는 예방 효과량으로 투여함을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "치료 효과량"은 목적하는 치료 결과(예를 들면, 세균 감염의 감소 또는 배제)를 제공하는 달바반신의 양을 말한다. 치료 효과량은 하나 이상의 용량으로 투여될 수 있다. "예방 효과량"은 세균 감염에 민감하고/하거나, 예를 들면, 의료 절차 또는 병원 체류로 인해 세균 감염에 걸릴 수 있거나 세균 감염을 가진 개인에게 노출될 수 있는 개인에게 투여될 때 추후의 세균 감염을 예방하거나 그 중증도를 감소시키기에 충분한 달바반신의 양을 말한다. 달바반신은 일반적으로 약학적으로 허용되는 담체중에서 투여된다.

달바반신은 종종 물에 자유롭게 용해되는 하이드로클로라이드 염으로 제공된다.

전형적으로, 달바반신은 개인에게 투여될 때, 수일 동안, 종종 적어도 약 5일, 1주일 또는 10일 동안 치료 또는 예방 효과적인 혈장 농도의 달바반신을 제공하기에 충분한 양의 달바반신을 포함하는 달바반신 배합물로 "단위 용량"으로서 투여된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "개인"은 척추동물, 전형적으로 포유동물, 종종 인간을 말한다.

전술한 달바반신의 모든 동족체들은 혈장내에서 연장된 반감기, 종종 9일 이상을 나타내지만, MAG는 다른 동족체보다 짧은 반감기를 갖는 것으로 생각된다. 긴 반감기는 반코마이신 또는 테이코플라닌보다 긴 투여간 간격을 가능케한다. 실시예 1에 기술된 바와 같이, 반코마이신에 종종 사용되는 하루 2회 투여 스케쥴 또는 테이코플라닌에 일반적으로 사용되는 하루 1회 스케쥴에 대조적으로, 달바반신의 주 1회 투여는 세균 감염의 억제에 효과적이다. 달바반신의 덜 잦은 투여는, 특히 개선된 편리성 및 치료 방법에 의한 환자 순응도와 관련하여, 반코마이신 및 테이코플라닌에 비해 상당한 치료 이점을 제공한다. 놀랍게도, 다른 유용한 치료 옵션보다 적은 횟수로 고 용량(즉, 놀라운 높고 오래 지속되는 혈청 농도를 제공하는)을 투여할 수 있다. 달바반신에 이용가능한 새로운 투여 방법은, 보다 적은 횟수의 투여를 수행하기에 필요한 농도에서 달바반신은 생체내에서 최소의 부작용을 나타내어 광범위한 약학적 창을 입증하고 또한 달바반신의 혈중 농도가 전체 치료 프로토콜에 대해 최소 살균 농도 이상으로 유지되어 달바반신에 대한 연장된 혈청내 반감기를 입증하기 때문에, 개선된 효과를 제공한다. 연장된 혈청내 반감기와 결부된 광범위한 약학적 창의 결합은 달바반신의 보다 적은 횟수의 투여를 가능케한다.

또한, 달바반신은 바람직하게는 달바반신의 하나 이상의 성분들의 분해를 억제하는 안정화제와 함께 배합된다. 한 바람직한 태양에서, 달바반신은 1:2 중량비의 만니톨:달바반신으로 배합된다. 또 다른 바람직한 태양에서, 달바반신은 1:1:4 중량비의 만니톨:락토스:달바반신으로 배합된다.

일부 태양에서, 달바반신 배합물은 수일 동안, 종종 적어도 약 5 내지 약 10일, 종종 적어도 약 1주일 동안 약물의 치료 효과적(즉, 살균적) 혈장 농도를 제공하는 투여량으로 투여된다. 일반적으로, 달바반신은 혈장에서 적어도 5일 동안 약 4 ㎎/ℓ의 최소 살균 농도 이상으로 유지된다. 종종, 달바반신은 적어도 5일 동안, 종종 적어도 약 1주일 이상 동안, 약 5 ㎎/ℓ 이상, 종종 약 10 ㎎/ℓ 이상, 종종 약 20 ㎎/ℓ 이상, 종종 약 30 ㎎/ℓ 이상, 종종 약 40 ㎎/ℓ 이상의 혈장 농도로 유지된다. 달바반신의 혈장 농도는 당해 분야에 공지되어 있는 방법, 예를 들면, 액체 크로마토그래피, 질량 분광법 또는 미생물 생물검정법에 의해 측정할 수 있다. 혈장내 달바반신을 정량화하는 방법의 예는 실시예 5에 나타내었다.

달바반신 혈장 농도 수준에 대한 상한치는 일반적으로 치료된 환자 개체군에서 허용될 수 없는 부작용을 억제하는 투여량에 의해 결정된다.

달바반신 조성물은 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 단일 용량으로 투여되는 경우, 달바반신 조성물은 바람직하게는 생체내에서 적어도 5일 동안, 바람직하게는 적어도 7일 동안, 보다 바람직하게는 적어도 10일 동안 항균성을 수행하기에 충분한 양의 달바반신을 함유하도록 배합된다.

다중 용량을 사용하는 경우, 달바반신은 주 1회씩 2주일 이상 동안 투여될 수 있다. 한 태양에서, 달바반신은 둘 이상의 용량으로, 종종 약 5 내지 약 10일 간격의 두 용량으로, 보다 종종 2주 동안 1주일에 1회 투여된다. 실시예 1에서 보듯이, 상기 투여 방법은 통상적인 항생물질 치료 프로토콜에 비해 상당한 이점을 제공한다.

달바반신 조성물은 또한 다중 용량으로 2일 이상 또는 적어도 1주일 간격으로, 또는 하나 이상의 격주 용량으로 투여될 수 있다. 일부 태양에서, 달바반신 조성물은 매주 투여된 후, 격주로 또는 매달 투여될 수 있다. 일부 태양에서, 달바반신은 2, 3, 4, 5, 6주 이상 동안 1주일 간격으로 투여된다.

가장 유리하게는, 보다 적은 횟수의 보다 고 용량을 사용하기 때문에 매일 투여는 필요하지 않다. 단일 또는 다중 용량은, 예를 들면, 약 0.1 내지 약 5 g의 범위일 수 있다. 약 0.1 내지 약 4 g, 예를 들면, 약 3 g의 단일 용량을 다양한 감염 치료를 위해 투여할 수 있다. 다중 용량을, 예를 들어, 매주 투여하는 경우, 각각의 용량은, 예를 들면, 약 0.25 내지 약 5.0 g의 범위일 수 있다.

감염 치료를 위해 단일 용량을 투여하는 태양에 있어, 투여량은, 예를 들면, 약 0.1 내지 약 5 g, 또는 약 0.5 내지 약 4 g, 또는 약 1 내지 약 3.5 g, 또는 약 2 내지 약 3 g, 예를 들면 약 3 g일 수 있다. 일부 태양에서, 약 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3 g의 단일 용량을 세균 감염의 치료를 위해 투여한다. 예방을 위해 단일 용량을 투여하는 태양의 경우, 투여량은, 예를 들면, 약 0.1 내지 약 3 g, 또는 약 0.1 내지 약 1 g, 예를 들면, 약 0.5 내지 약 0.25 g일 수 있다.

다중 투여를 포함하는 투약 계획에서, 개개의 투여량은 같거나 다를 수 있다. 일부 태양에서, 하나 이상의 후속 용량보다, 더 높은 1차 용량, 즉, 예를 들면, 약 1.5 내지 10 배 이상, 특정 경우에 9 배 이상, 다른 경우에 8 배 이상, 다른 경우에 7 배 이상, 다른 경우에 6 배 이상, 다른 경우에 5 배 이상, 다른 경우에 4 배 이상, 다른 경우에 3 배 이상, 다른 경우에 2 배 이상 더 높은 용량을 투여한다. 예를 들면, 1차 용량은 약 0.5 내지 약 5 g이고 2차 용량은 약 0.25 내지 약 2.5 g일 수 있거나, 1차 용량은 약 0.8 내지 약 2 g이고 2차 용량은 약 0.4 내지 약 1 g일 수 있거나, 또는 1차 용량은 약 0.4 내지 약 3 g이고 2차 용량은 약 0.2 내지 1.5 g일 수 있다.

일부 태양에서, 1차 투여량이 후속 투여량보다 약 2 배의 달바반신을 포함하는, 둘 이상의 투여량을 투여한다. 한 태양에서, 1차 투여량은 약 1 g의 달바반신을 포함하고, 후속 투여량은 약 0.5 g을 포함한다. 또 다른 태양에서, 1차 투여량은 약 0.5 g의 달바반신을 포함하고 후속 투여량은 약 0.25 g을 포함한다.

일부 태양에서, 달바반신 조성물은 2일 이상 또는 약 1주일 이상의 간격으로 같거나 다른 양의 2개 용량으로 투여한다. 종종, 약 0.2 내지 약 1.5 g의 달바반신의 2개 용량을 약 5 내지 약 10일 간격, 보다 종종 약 1주일 간격으로 투여한다. 한 태양에서, 약 1 g의 달바반신의 1차 투여량 및 약 0.5 g의 달바반신의 2차 투여량을 약 1주일 간격으로 투여한다.

다중 투여 방법에서, 투약간 시간은, 예를 들면, 약 5 내지 약 10일, 종종 약 1주일, 또는 약 2주일의 범위일 수 있다. 투약 횟수는, 예를 들면, 주 1회의 두 용량, 또는 주 1회의 다중 용량일 수 있다. 투약 간격 또는 투약간 시간은, 예를 들면, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25일 이상일 수 있다. 주어진 용량의 수는, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6개 이상의 용량일 수 있으며, 초기 용량 후 각각의 용량은 선택된 투여 간격 후에 주어진다.

다중 투약 계획에서, 종종 달바반신의 1차 투약 후 및 2차 용량 투여 직전에 혈장내 달바반신의 "최저 농도" 또는 농도는 약 4 ㎎/ℓ 이상이다. 바람직하게, 약 1주일과 같은 투약 간격 마지막에 최저 농도는 약 20 ㎎/ℓ 이상, 보다 바람직하게는 약 30 ㎎/ℓ 이상, 훨씬 더 바람직하게는 약 40 ㎎/ℓ 이상이다.

달바반신은 비경구로, 예를 들면, 근육내(i.m.), 정맥내(i.v.)(거환 또는 지연 주입), 피하(s.c.), 복강내(i.p.) 또는 척수강내(i.t.)로 투여할 수 있다. 투약 스케쥴 및 투여되는 실제 투여량은 감염 특성 및 중증도, 환자의 연령, 체중 및 일반 건강상태, 및 달바반신에 대한 특정 환자의 내성과 같은 요인들에 따라 달라질 수 있지만, 건강 전문가에게 확인가능할 것이다. 한 태양에서, 달바반신의 1 g 정맥내 용량에 이어, 1주일 후에 0.5 g의 정맥내 용량을 투여한다.

환자에게 약물을, 예를 들어, 정맥내로 투여 및 전달하는 것은, 혈중 농도가 너무 빨리 증가하지 않도록 또는 침전이 일어나지 않도록 조절된 속도로 수행할 수 있다. 일부 태양에서, 달바반신은 약물이 혈류중의 내인성 단백질(들)과 착체를 형성하도록 적절한 속도로 투여된다. 특정 이론에 결부되고자 하는 것이 아니라, 인간 혈청 알부민과 같은 내인성 단백질은 생체내에서 1 또는 2개 분자의 달바반신 동종 단량체와 착체를 형성할 수 있는 것으로 생각된다. 충분한 양의 달바반신이 존재하는 경우, 2개 이하의 달바반신 동족체 분자가 내인성 단백질에 결합하는 것으로 생각되며, 또한 상기 착체는 2개의 상이한 결합 부위에서 달바반신의 별도의 동족체 분자들의 결합에 의해 형성되는 것으로 생각된다. 또는, 이량체 달바반신은 내인성 단백질 상의 단일 결합 부위에 결합하는 것이 가능하다. 상기에서 논의한 달바반신-내인성 단백질에 대한 추가의 연구는 2003년 11월 14일자로 출원된 미국 특허출원 제 10/713,924 호[발명의 명칭: "닥백질-달바반신 착체로 세균 감염을 치료하기 위한 조성물 및 방법(COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING BACTERIAL INFECTIONS WITH PROTEIN-DALBAVANCIN COMPLEXES)", 대리인 사건 번호 34231-20053.00]에서 찾아볼 수 있으며, 상기 출원은 본원에 그대로 참고로 인용된다.

주입 기간은, 예를 들면, 약 1분 내지 약 2시간, 또는 약 15분 내지 약 2시간일 수 있다. 예를 들면, 용량이 약 0.5 내지 약 1 g인 경우, 약 30분의 주입 기간을 이용할 수 있다. 조절된 속도 조건하에서 정맥내 투여는 시험관내에서 생리적 pH에서 액상으로 달성될 수 있는 것보다 훨씬 과량인 체내 달바반신 농도를 제공할 수 있다. 이론에 제한받길 원하는 것은 아니지만, 이것은 달바반신과 혈청 알부민 같은 내인성 단백질(들)과의 착체 형성에 기인할 수 있으며, 상기 착체 형성은 시험관내 연구에 비교할 때 혈장내 달바반신의 용해도를 증가시킬 수 있다.

시험관내 또는 생체외에서 달바반신 착체의 형성은, 예를 들면, 약 1분 이상, 또는 약 10분 이상, 또는 약 20분 이상과 같이 보다 빠른 투여를 가능케 할 수 있다. 상기 착체는 인간 혈청 알부민 및/또는 또 다른 내인성 단백질을 달바반신과 혼합하여 시험관내 또는 생체외에서 착체를 형성함으로써 달성된 다음, 상기 착체를 치료받는 환자에게 투여할 수 있다. 또는, 인간 혈청 알부민 또는 다른 내인성 단백질은 자가조직 공급원으로부터, 또는 단백질에 대한 유전자를 함유하도록 변형된 미생물로부터의 발현에 의해 수득할 수 있다.

투여되는 달바반신의 양은 본원에 개시된 임의의 투여량일 수 있다. 달바반신 용량은 일반적으로, 약물이 연장된 시간 동안, 종종 5일 이상, 보다 종종 약 1주일 이상 동안 치료 또는 예방 효과적인(즉, 살균) 혈장 농도를 유지하도록 선택된다. 약 1주일 이상(또는 약 5 내지 약 10일) 동안 살균 농도를 제공하고 유지하는 용량의 달바반신을 투여하는 것이 바람직하다. 살균 농도는 시험관내 실험 개시때 존재하는 세균의 99% 이상을 24시간 동안 사멸시키는데 필요한 달바반신의 농도로 정의된다. 혈장내 달바반신의 최소 살균 농도는 전형적으로 약 4 ㎎/ℓ이다.

치료될 수 있는 적응증의 예로는 복잡성 및 단순 피부 및 연조직 감염(SSTI)(복잡성 및 단순 피부 및 피부 조직 감염(SSSI)으로도 알려wu 있다), 혈류 감염(BSI), 카테터-관련 혈류 감염(CRNSI), 골수염, 인공 관절 감염, 외과적 예방, 심장내막염, 병원 또는 지역사회 획득성 폐렴, 폐렴구균성 폐렴, 발열성 호중구감소증의 경험 치료법, 관절강 감염, 및 장치 감염(예를 들면, 자동심장박동기 및 내부 심장 제세동기)이 포함된다. 스태필로코커스 , 스트렙토코커스 , 네이세리아, 또는 클로스트리듐 속 감염, 특히, 스태필로코커스 오레우스 , 스태필로코커스 에피더미디스 , 스태필로코커스 헤모라이티커스 , 스트렙토코커스 피오제네스 , 그룹 A 및 C 스트렙토코커스, 네이세리아 고노르호에아 또는 클로스트리듐 디피사일과 같은 그램-양성 또는 항생물질-내성 세균 감염을 치료할 수 있다.

본 발명은 피부 및 연조직 감염(SSTI)의 치료 방법을 제공한다. 상기 처리에서 유리할 수 있는 환자는 심부 또는 표재성 감염을 가질 수 있다. SSTI는 보다 심부의 연조직을 포함할 수 있고/있거나, 예를 들면, 주 농양, 감염된 궤양, 주 화상 또는 심하고 광범위한 봉와직염과 같이 상당한 외과적 처리를 필요로 할 수 있다. 감염된 수술 상처도 또한 치료할 수 있다. 피부를 치료하는 달바반신의 효과는 달바반신이 생체내에서 단백질과 착화되기 때문에 예기치못한 놀라운 결과이다(실시예 5 참조).

피부 및 피부 조직 감염의 임상적 징후는 가벼운 모낭염으로부터 심한 괴사성 근막염까지 다를 수 있다. 획득 방식은 또한 지역사회 획득성 피부 및 피부조직 감염에 따라 달라질 수 있는, 상기 감염은 종종 직업적 노출 또는 오락 활동으로부터 비롯된 상처가 앞서며 통상적으로 매우 다양한 병원균과 관련된다. 병원-획득성 피부 및 피부조직 감염은 일반적으로 수술 절차, 욕창의 진전 및 도뇨와 관련된다. 수술 후 감염이 세 번째로 흔한 병원내 감염이며, 국립 원내 감염 감독 기구(National Nosocomial Infection Surveillance System, NNIS)에 보고된 모든 병원내 감염의 17%를 차지한다. 스태필로코커스 오레우스, 응고효소-음성 스태필로코커스 및 엔테로코코스 속이 SSTI에서 가장 흔히 분리되는 병원균이다.

SSTI 감염의 증상은 홍반, 압통 또는 통증, 발열 또는 편재화된 열감, 배농 또는 객담, 종창 또는 경화, 발적 또는 파동이 포함될 수 있다. 본 발명의 방법에 의한 치료로부터 이점을 얻을 수 있는 환자로는 심부 또는 복잡성 감염 또는 외과적 처리가 필요한 감염을 갖는 환자 또는 근원적인 당뇨병 또는 말초 혈관 장애를 갖는 환자가 포함된다. 상기 감염은 종종 스태필로코커스 또는 스트렙토코커스 종, 예를 들면, 스태필로코커스 오레우스 또는 스트렙토코커스 피오제네스와 같은 그램-양성 세균에 의해 유발된다. 피부 또는 연조직 세균 감염의 치료 방법은 치료 효과량의 달바반신을 전술한 바와 같은 투여 방법에 따른 양으로 상기 방법에 따라 치료를 필요로 하는 개인에게 투여함을 포함한다. 일부 태양에서, 달바반신 조성물은 정맥내로 두 개 용량으로, 종종 약 5 내지 약 10일 간격, 보다 종종 약 1주일 간격으로 투여된다. 일부 태양에서, 1차 투여량은 2차 투여량의 2 배 이상의 달바반신을 포함한다. 한 태양에서, 1차 투여량은 약 1000 ㎎이고, 2차 투여량은 약 500 ㎎이다. 또 다른 태양에서, 1차 용량은 약 1200 ㎎이고, 2차 용량은 약 600 ㎎일 수 있다.

본 발명은 또한 세균 감염, 예를 들면, 스태필로코커스 오레우스 또는 네이세리아 또는 클로스트리듐 속 세균에 의해 야기된 감염의 개시를 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명의 예방 방법에서는, 예방 효과량의 달바반신을, 예를 들면, 의료 절차를 통해 세균 감염에 걸리기 쉬울 수 있는 개인에게 투여한다. 종종, 달바반신은 약 1일 이상, 약 3일 이상, 약 5일 이상, 또는 약 1주일 이상 동안 예방 효과적 혈장 농도를 제공하기에 충분한 양으로 투여된다. 달바반신 조성물은 감염에 대한 예방 단계로서의 수술 이전 또는 수술에 이어, 예를 들면, 비경구적으로, 예를 들면, 근육내(i.m.), 정맥내(i.v.), 복강내(i.p.), 피하(s.c.) 또는 척수강내(i.t.) 주입에 의해 투여할 수 있다. 달바반신 조성물은, 수술과 같은 침입성 의료 절차 또는 감염을 예방하기 위해 병원과 같은 의료 관리 시설에의 체류 직전, 또는 그에 이어, 또는 1일 이상 또는 약 1주일 전에 또는 그에 이어, 또는 그 동안에 투여될 수 있다. 예방 방법은 개인이 세균 감염된 개인에게 노출되었거나 또는 노출되기 쉬운 상황을 포함하여, 개인이 세균 감염에 걸릴 수 있거나 걸리기 쉬운 임의의 상황에서 이용될 수 있다. 예방 방법에 있어, 달바반신 조성물은 단일 용량, 또는 수일 내지 약 1주일 간격으로 투여되는 같거나 다른 양의 둘 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 한 태양에서, 달바반신 조성물은 혈류 관련 감염을 예방하기 위해, 정맥내 카테터의 삽입 전 또는 삽입과 동시에 투여될 수 있다.

예방 방법의 경우, 달바반신 조성물은 전술한 임의의 투여 방법에 따라 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 종종, 달바반신 조성물은 약 0.1 내지 약 3 g, 또는 약 0.1 내지 약 1 g, 예를 들면, 약 0.25 g 또는 약 0.5 g을 포함하는 단일 용량으로 투여된다. 한 태양에서, 약 0.25 g의 단일 용량을 약 2분 내지 약 1시간 내에, 예를 들면, 약 30분에 걸쳐 정맥내 투여한다. 또 다른 태양에서, 달바반신 조성물은 또 다른 약학적(예를 들면, 항생물질) 치료제의 투여와 동시에 정맥내 투여된다.

전술한 임의의 치료 또는 예방 방법에서, 달바반신 조성물은 하나 이상의 다른 항생물질과 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 일부 태양에서, 하나 이상의 그램-음성 세균 종 및/또는 달바반신이 효과가 없는 그램-양성 세균 균주에 대해 효과적인(예를 들면, 살균성) 하나 이상의 다른 항생물질을 달바반신 이외에 투여한다. 일부 태양에서, 달바반신, 및 하나 이상의 그램-음성 세균 종에 대해 효과적인(예를 들면, 살균성) 하나 이상의 항생물질을 달바반신 조성물 중의 혼합물로서 투여한다.

약물동력학

달바반신의 동물 연구를 마우스, 래트, 토끼, 개 및 미니피그를 이용하여 수행하였다.

다양한 검증된 방법을 이용하여 달바반신을 정량화하였다. 달바반신 API는 5 개의 동족체(A₀, A₁, B₀, B₁ 및 B₂)로 이루어진다. 항균 활성을 기초로 하는 방법은 모든 생물학적으로 미생물학적으로 활성인 달바반신 성분을 측정하였다. 크로마토그래피 방법을 사용하여, 주 성분 B₀를 성분 B₁(함께 달바반신의 90 내지 95%)과 함께 측정하고 결과는 전체 달바반신에 대하여 기록하였다. 액체 섬광 계수(LSC) 및 방사화학 검출을 이용한 액체 크로마토그래피(LC/RC)로 방사성표지된 약물을 공급한 동물의 혈장, 뇨 및 분변에서의 달바반신 및 대사물을 측정하였다. 달바반신 및 약물-유도된 방사능을 모두 임상적으로 적절한 용량이 주어진 동물의 혈장내에서 정량화할 때마다, 약물 및 방사능에 대한 농도-시간 곡선은 겹칠 수 있다. 이것은 사실상 혈장내 약물-유도된 방사능이 모두 본래그대로의 약물이었음을 나타낸다.

약물은 정맥내 용량 투여 후 신체 전체를 통해 모든 시험 장기 및 조직으로 광범위하게 분포되었다. 달바반신은 래트 및 미니피그의 피부내로 침투하였다. 달바반신 역학은 종을 교차하여 예정가능한 방식으로 작용하였다. 혈장 제거율(CL)은 종의 체중에 비례하는 것으로 밝혀졌다. 또한, 달바반신은 래트 태반을 가로질러 태아 래트 혈장에서 발견되었다.

달바반신은 간의 사이토크롬 P450 아이소엔자임의 기질, 억제제 또는 유도제가 아니다. 상기 약물은 시험관내에서 래트, 개 또는 인간 간 마이크로솜; 래트, 개 또는 인간 간세포; 또는 인간 신장 마이크로솜에 의해 대사되지 않는다. 달바반신은 분리된 인간 간 마이크로솜에 의한 표지 기질의 대사에 영향을 미치지 않았다. 달바반신을 래트에 투여해도 어떤 P450 활성도 유도되지 않았다.

유사한 달바반신 대사물 프로필이 종 전체에서 관찰된다. 2가지 대사물(OH-달바반신 및 MAG)이 래트, 개 및 인간의 뇨에서 관찰되었다. 두 대사물 모두 인간 혈장에서 검출할 수 없거나 검출 한계(<0.4 ㎎/ℓ)에 가깝고, 달바반신보다 항균 활성이 낮고, 생체내 활성에 별로(있다 하더라도) 기여하지 않는다. 임상적으로 적절한 용량으로, 일반적으로 동물 혈장에서 유사한 결과들이 관찰되었다.

약물은 이중 배출 경로(신장 및 배설물)를 가지며 본래대로의 약물 및 대사물로 배출된다. 달바반신은 래트, 개 및 인간의 뇨 및 분변에서 배출된다. 용량의 대부분이 뇨에서 본래대로의 약물로 배출된다. OH-달바반신 및 MAG는 뇨에서도 또한 발견된다. 일부 본래대로의 약물이 미량의 대사물과 함께 동물 분변에서 발견된다. 인간 분변은 미생물학적으로 활성인 달바반신 성분을 함유하였다. 달바반신은 또한 래트의 젖에도 배출된다. 그러므로, 달바반신은 대사, 뇨 배출 및 분변 배출을 통해 체내에서 제거된다. 이것은 환자 통계를 기준으로 용량 조절이 (있다 하더라도) 거의 필요하지 않음을 말해준다. 놀랍게도, 중증 신부전(30 ㎖/분 미만의 크레아티닌 제거율 CL_CR)을 갖는 환자가 정상적인 신장 환자(80 ㎖/분보다 높은 크레아티닌 제거율 CL_CR)보다 높은 수준을 달성하였다. 1일에 1 g 용량을 받은 중증 환자는 1일에 100 ㎎ 및 8일에 500 ㎎을 받은 정상 환자에 대한 수준과 유사한 것으로 나타났다.

약학 조성물

본 발명은 전술한 방법에 따라 달바반신을 투여하기 위해 배합된 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 약학 조성물은, 조성물을 개인에게 투여할 때 수일 동안, 종종 약 3일 이상, 약 5일 이상, 또는 약 1주일 이상 동안 치료 또는 예방 효과적인 혈장 농도의 달바반신을 제공하기에 충분한 양의 달바반신, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 달바반신의 단위 용량의 형태일 수 있다. 일반적으로, 달바반신의 치료 또는 예방 효과적인 혈장 농도는 혈장 ℓ 당 약 4 ㎎ 이상이다. 달바반신의 혈장 농도는 전술한 방법들과 같이 당해 분야에 공지된 방법에 의해 측정할 수 있다.

달바반신은 선택적으로 약학적으로 허용되는 무독성 염으로서 개인에게 투여하기 위한 약학적으로 허용되는 형태이거나 아닐 수 있다.

달바반신의 적당한 염의 예로는 유기 및 무기 산, 예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 트라이클로로아세트산, 석신산, 시트르산, 아스콜브산, 락트산, 말레산, 글루탐산, 캄포산, 글루타르산, 글라이콜산, 프탈산, 타르타르산, 라우르산, 스테아르산, 살리실산, 메테인설폰산, 벤젠설폰산, 솔브산, 피크르산, 벤조산, 신남산 및 유사 산과 표준 반응에 의해 생성된 염이 포함된다. 달바반신과 염을 형성할 수 있는 염기의 대표적인 예로는 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속 수산화물, 예를 들면, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 바륨 수산화물, 암모니아, 및 지방족, 지환족 또는 방향족 유기 아민, 예를 들면, 메틸아민, 다이메틸아민, 다이에틸아민, 에탄올아민 및 피콜린이 포함된다(예를 들면, 미국 특허 제 5,606,036 호 참조).

일부 태양에서, 예를 들면, 정맥내 주사와 같은 비경구 투여에 적합한 달바반신의 약학적으로 허용되는 수성 배합물이 제공된다. 상기 수성 배합물을 제조하기 위해, 당해 분야에 공지된 방법을 이용할 수 있으며, 당해 분야에 통상적으로 사용되는 임의의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 다른 첨가제를 사용할 수 있다. 한 태양에서, 정맥내 주사용의 약학적으로 허용되는 수성 배합물은 5% 덱스트로스를 포함한다.

달바반신은 비경구적으로 투여될 수 있다, 즉, 투여 경로는 하나 이상의 피부층 또는 점막 아래 또는 이를 통과하는 주사에 의한 것이다. 상기 경로는 인체의 매우 효과적인 보호 장벽을 우회하므로, 미생물 및 불용성 입자가 없는 비경구 투약 제형의 이례적인 순도가 달성되어야 한다. 상기 투약 제형을 제조하는데 사용된 과정은 멸균성 및 치료 효과의 관점에서 필요한 질의 생성물을 생성하고 유지하는 우수한 제조 관행을 실행해야 한다. 또한, 상기 형태는 실온에서 저장시 실용적으로 편리한 투약 제형에 대해 안정해야 한다.

대량의 약물 물질을 비경구 투여에 적합한 투약 제형으로 전환시키기 위해 일반적으로 이용가능한 여러 편리한 방법들이 있다. 이들 방법은 일반적으로 [Remington's Pharmaceutical Sciences, eighteenth edition, 1990]("Remington")에 개략되어 있다.

증기 멸균

USP는 증기 멸균법을 가압 용기에서 최소 121℃에서 15분 이상 동안 가압하에 포화된 증기를 사용하는 것으로 정의한다. 그 고체 형태의 약물은 오토클레이브에 배치되어 증기 멸균법에 영향을 미칠 수 있다. 그 용액 형태의 약물은 오토클레이브에 직접 배치되거나 밀봉 용기에 함유되어 오토클레이브에 배치되어 동일 종류의 증기 멸균에 영향을 미칠 수 있다.

건열 멸균

건열 멸균법에서는, 대량의 약물 물질을 비교적 낮은 습도에서 승온에 적용한다. 건열은 습열 멸균보다 덜 효과적이므로, 고압증기 멸균에 사용되는 것보다 긴 노출 시간 및 고온이 필요하다. 목적은 산화 과정에 의해 미생물을 사멸시키는 것이다. 정확하고 올바른 시간-온도 사이클을 확립하는 것은 통상적이진 않지만, 이용된 전형적인 온도는 1 내지 3시간 동안 140 내지 170℃이다.

방사선에 의한 멸균

방사선에 의한 멸균은 전자기 방사선 또는 입자 방사선을 사용할 수 있다. 광자 에너지로 이루어진 전자기 방사선은 자외선, 감마선, x-선 및 우주 방사선을 포함한다. 코발트-60 또는 세슘-137과 같은 방사성 물질로부터 방출되는 감마선이 가장 흔히 사용되는 전자기 멸균 방사선원이다. 멸균에 가장 널리 사용되는 입자 방사선은 베타 입자 또는 전자선이다.

멸균 여과

멸균 여과는 유체 스트림으로부터 미생물을 제거하나 파괴하지는 않는 과정이다. 상기 여과는 다른 유형의 멸균 과정에 불안정한 용액에 대한 선택 방법이다.

멸균 냉동-건조(동결건조)

이 방법은 용액을 냉동시킨 후 용액을 승화시켜 용액으로부터 멸균된 약물을 분리하여 약물 물질을 남기는 후속 단계를 갖는 멸균 여과법을 이용한다. 상기 방법은 전형적으로 하기의 단계를 포함한다:

1) 수용액에 대량의 약물을 용해시킨다

2) 용액을 막 여과에 의해 멸균한다

3) 멸균 용액을 개방된 예비멸균된 바이알에 채우고 냉동-건조실에 넣는다

4) 바이알속의 용액을 냉동시킨다

5) 챔버를 진공화시켜 저온에서 얼음을 승화시킨다

6) 온도를 실온 이상으로 증가시켜 잔류수를 제거한다.

멸균수 (증기) 첨가하의 멸균 냉동-건조(동결건조)

이 방법은 냉동-건조(동결건조)에 의해 용액으로부터 멸균된 약물을 분리하고 증기 형태로 멸균수를 첨가하는 후속 단계를 갖는 멸균 여과를 이용한다.

멸균 침전

이 방법은 용액으로부터 멸균된 약물을 침전시키는 후속 단계를 갖는 멸균 여과법을 사용한다. 보다 특히, 대량의 약물을 먼저 승온(실온 이상)에서 물에 용해시킨 다음, 가열된 용액을 무균 조건하에서 여과시켜 임의의 미생물을 제거한 후, 용액으로부터 약물을 침전시키기 위해 여과된 용액을 냉각시킨다. 이어서, 침전된 약물을 여과 또는 원심분리에 의해 용액으로부터 분리하고, 무균 조건하에서 분말 충전에 의해 용기에 충전시킨다. 상기 분말 충전을 실행할 때, 약물은 우수한 유동성을 가져야 한다 - 분말은 일반적으로 과립이고 비-결정성이며 균일한 입자 크기를 가져야 한다.

비경구 투여용 약학 조성물은 달바반신 및 생리적으로 허용되는 희석제, 예를 들면, 주입용 멸균수 또는 탈이온수, 생리적 식염수, 5% 덱스트로스, 수혼화성 용매(예를 들면, 에틸 알콜, 폴리에틸렌 글라이콜, 프로필렌 글라이콜 등), 비-수성 비히클(예를 들면, 옥수수유, 면실유, 낙화생유 및 호마유와 같은 오일) 또는 다른 통상적으로 사용되는 희석제를 포함한다. 상기 배합물은 또한 가용화제, 예를 들면, 폴리에틸렌 글라이콜, 폴리프로필렌 글라이콜 또는 다른 공지된 가용화제, 용액을 안정화시키기 위한 완충제(예를 들면, 시트레이트, 아세테이트 및 포스페이트) 및/또는 산화방지제(예를 들면, 아스콜브산 또는 중아황산나트륨)를 포함한다(예를 들면, 미국 특허 제 6,143,739 호 참조). 다른 적당한 약학적 담체 및 그의 배합물은 마틴(E.W. Martin)의 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences]에 기술되어 있다. 당해 분야에 공지되어 있듯이, 본 발명의 약학 제제는 또한 허용되는 수준의 미립자(예를 들면, 입자가 없는)를 함유하고 비-발열성이도록(예를 들면, 미국 약전에서 주사가능한 필요조건을 충족시키도록) 제조될 수 있다.

한 태양에서, 약학 조성물은, 종종 안정화제 또는 안정화제 혼합물을 함유하는 건조된(예를 들면, 동결건조된) 달바반신 용량을 일정량의 물, 바람직하게는 냉동건조물을 용해시키기에 충분한 부피의 탈이온수에 용해시킴으로써 제공된다. 전형적으로 용해에 충분한 물의 양은 약 10 ㎖이고, 달바반신 용액의 결과적인 pH는 3.0 이상, 약 3.5 내지 4.5이다. 상기 용액은, 예를 들면, 정맥내 투여를 위해 드립 백에 함유된 양의, 종종 5% 덱스트로스롤 함유하는 2차 희석제에 더 희석하고 달바반신 용액의 pH를 약 5 내지 5.5로 상승시킨다. 또 다른 태양에서, 드립 백 중의 달바반신 용액의 pH는 약 4.5이다. 2차 희석제는 주입용 탈이온 멸균수일 수 있다. 한 태양에서, 수성 희석제는 5% 덱스트로스이다.

비경구 투여용 약학 조성물은, 달바반신의 살균 효과가 유지되는 조건하에서, 부형제를 포함하거나 포함하지 않고, 하나 이상의 단위 용량의 달바반신을 전술한 바와 같은 치료 또는 예방 효과량으로 함유하는 멸균 바이알에 채워질 수 있다. 조성물은 건조(예를 들면, 동결건조)된 분말의 형태일 수 있다. 분말은, 사용전에, 생리적으로 허용되는 희석제로 복원되고 투여용 주사기를 통해 환자에게로 제공된다. 전술한 바와 같은 약학 배합물은, 예를 들면, e-빔 또는 감마 멸균 방법, 또는 멸균 여과를 포함하는 임의의 허용되는 수단에 의해 멸균될 수 있다.

비경구 투여에 전형적인 배합물은 최종 제제 ㎖ 당 달바반신 약 0.1 내지 약 100 ㎎, 약 0.5 내지 약 50 ㎎, 약 1 내지 약 10 ㎎ 또는 약 2 내지 약 4 ㎎과 같은 농도로 달바반신을 포함할 수 있다.

일부 태양에서, 본 발명에 따른 약학 조성물은 달바반신과 하나 이상의 추가 항생물질의 혼합물을 포함한다. 바람직하게, 혼합물 중 하나 이상의 비-달바반신 항생물질은, 예를 들면, 아즈트레오남과 같이, 하나 이상의 그램-양성 세균 종에 대해, 및/또는, 예를 들면, 일네졸라이드 또는 다프토마이신과 같이, 달바반신이 효과가 없는 하나 이상의 그램-양성 세균 균주에 대해 효과적(살균성)이다. 혼합물은 또한 전술한 바와 같은 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.

일부 태양에서, 본 발명의 약학 조성물은 달바반신의 하나 이상의 성분들이 덜 활성 또는 불활성인 물질, 동족체 또는 관련 물질, 예를 들면, MAG로 분해되는 것을 억제하는 하나 이상의 안정화 물질을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "안정화 물질" 또는 "안정화제"는 조성물 중 달바반신의 하나 이상의 구성 성분, 예를 들면, B₀의 수준을 안정화시키는 물질을 말한다. "안정화 효과량"은 달바반신 조성물의 하나 이상의 성분의 장기간 안정성을 증대시키기에 충분한 안정화제의 양을 말한다. 일부 태양에서, 안정화 효과량은 둘 이상의 안정화 물질의 혼합물로 제공될 수 있으며, 상기 물질 각각은 단독으로는 안정화 효과를 제공하기에 충분한 양으로 존재하지 않는다.

안정화제의 예로는, 예를 들면, 당, 예를 들어, 모노-, 다이- 또는 폴리사카라이드 또는 그의 유도체, 당 알콜 또는 폴리올과 같은 비이온성 물질이 포함된다. 상기 안정화 물질로는, 예를 들면, 만니톨, 락토스, 슈크로스, 솔비톨, 글리세롤, 셀룰로스, 트레할로스, 말토스, 라피노스, 덱스트로스, 저분자량 및 고분자량 덱스트란 또는 그의 혼합물이 포함된다.

당 이외에, 안정화제는 또한 아미노산일 수 있다. 아미노산 안정화제로는 천연 및 합성 아미노산 및 아미노산 유도체가 포함된다. 바람직한 태양에서, 아미노산은 글라이신, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 페닐알라닌, 트립토판 및 아스파라긴이다. 안정화제는 또한 사이클로덱스트린, 사이클릭 아마이드, 예를 들면, 나이아신아마이드 및 벤즈아마이드, 살리실산 및 그의 오쏘-, 메타-, 파라-치환된 하이드록실산 및 에스터일 수 있다.

안정화제를 첨가하는 것 이외에, 화합물의 pH를 조정하는 것이 조성물의 안정성을 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 안정성을 증가시키거나 최대화하는 조성물의 특정 pH는 첨가된 안정화제의 유형 및 양에 따라 달라진다. pH는 바람직하게는 약 1 내지 7, 보다 바람직하게는 2 내지 6, 보다 바람직하게는 3 내지 5, 더 바람직하게는 4 내지 5, 보다 더 바람직하게는 약 4.5일 수 있다.

한 태양에서, 약학 조성물은 1;2 중량비의 만니톨:달바반신을 포함한다. 또 다른 태양에서, 약학 조성물은 1:1:4 중량비의 만니톨:락토스:달바반신을 포함한다. 놀랍게도, 만니톨과 락토스의 혼합물이 상기 물질 단독보다 더 큰 안정화 효과를 제공하는 것으로 밝혀졌다. 종종, 본 발명의 약학 조성물은, 예를 들면, 약 3 내지 5, 예를 들면, 약 3.5 내지 약 4.5이다.

일부 태양에서, MAG의 생성을 감소시키는 하나 이상의 절차를 이용할 수 있다. 예를 들면, 만니톨 및/또는 락토스와 같은 안정화 물질의 존재하에 달바반신의 냉동 건조를 이용하여 생성된 MAG의 양을 감소시킬 수 있다.

달바반신 조성물의 저장은 종종 안정성을 증대시키기 위해 주위 온도보다 더 낮은 온도, 예를 들면, 약 5℃이다.

건조

고분자량 천연 생성물로부터 아세톤의 제거는 그들과의 부가물을 형성할 수 있기 때문에 매우 어려울 수 있다. 아세톤의 제거는 고체 생성물 중의 아세톤을 치환시키는 물의 존재하에 수행할 수 있다. 또한, 달바반신을 건조하는 공정은 MAG 생성 가능성으로 인해 보다 민감하며, pH, 온도, 진공 및 시간에 따라 달라진다. MAG 생성을 최소화하고 건조 공정의 속도를 증대시키기 위해, 건조 공정 동안 저 내독소 물을 생성물위에 가하거나 분사시켜 아세톤을 치환시킨다. 과량의 물은 나중에 추가의 건조 시간에 의해 감소시킨다.

건조는 진공하에(25℃ 미만의 내부 온도) 수행한다. 대부분의 아세톤이 생성물로부터 제거된 경우, 약 20%(w/w)의 저 내독소 물을 고체 생성물상에 분사하고 동일 조건에서 건조를 계속한다. 건조 공정을 추적하기 위해, 아세톤 및 칼 피셔(Karl Fischer, K.F.) 분석을 수행하고, 잔류 아세톤이 1.5% 미만이 될 때까지 추가의 물을 고체 생성물 상에 분사하였다.

연구 25

50 mbar, 20 내지 30℃에서 건조

이 절차는 먼저 회전 증발기를 사용하여 실험실에서 시뮬레이션하였다. 달바반신 배치 027을 물을 가하지 않고 30℃에서 건조하여 6.4%의 MAG 및 3.2%의 아세톤을 함유하는 생성물을 수득하였다. 126 g의 상기 건조된 달바반신 배치(배치 027, HCl/달바반신 비 1.7 몰/몰)를 1 ℓ 환저 플라스크에 채우고, 수조의 온도를 20 내지 30℃로 진공을 50 mbar에서 유지하면서, 고체에 25 ㎖의 물을 2시간마다 분사하였다. 달바반신 샘플을 특정 시간에 취하고 아세톤, K.F. 및 MAG 분석을 위해 분석하였다. 수득된 데이터는 표 4a에 나타내었다. 상기 표에 기록된 MAG의 모든 %는 실제량과 출발량 사이에 차이가 있다.

상기 실험은 동일 조건에서 몇 시간의 추가 건조에 의해 완료되어 수분 함량을 15% 미만으로 감소시켰다.

10 mbar, 30℃에서 건조

125 g의 달바반신 배치 027, MAG 6.4%(HPLC 면적%)를 30℃ 및 10 mbar에서 24시간 동안 이전 실험과 동일한 장치를 사용하여 건조시켰다. 수득된 결과를 표 4b에 기록하였다.

상기 실험실 실험들로부터, 건조 공정은 고체 생성물에 물을 가함으로써 단순화될 수 있다고 결론지을 수 있다. 이들 결과는 달바반신의 MAG로의 분해가 가수분해 단계이고, 물의 증가가 분해 공정을 증가시킬 것으로 예상했기 때문에 예기치 못한 것이다. 이런 방식으로, 아세톤을 생성물로부터 신속하게 제거함으로써 건조 시간을 감소시키고 추가 MAG의 생성을 배제한다. 또한, 보다 낮은 잔류 압력이 건조 공정의 상당한 감소를 제공하였음을 볼 수 있다(표 4b). 아세톤 농도가 다량의 물의 존재하에 감소된 것도 또한 놀랍다.

텀블(Tumble) 건조기에서 달바반신의 건조

습윤 달바반신을 텀블 건조기 DR 216에 넣고 29 내지 32℃(외부 온도)에서 최대 진공하에(50 mbar 미만) 건조하였다. 초기에, 내부 온도를 30℃에서 17 내지 18℃로 감소시킨 다음, 증가하기 시작하면 생성물 샘플을 분석을 위해 취하였다(물 17.2% 및 아세톤 9.5%). 이 시점에서, 저 내독소 물(약 20%, w/w)을 교반한 생성물위에 건조기내에서 분사하고 추가의 샘플을 분석을 위해 시간대로 취하였다. 2시간 후에, 아세톤의 양이 0.5% 보다 낮아질 때까지 저 내독소 물을 다시 분사하였다(표 4c).

물의 존재 및 부재하에서의 건조 비교

이 연구는 물의 부재(배치 027) 및 존재(027/R) 하에 수행된 달바반신 배치 027 및 027/R 건조 공정 사이의 비교이다. 달바반신 배치 027(14.6 ㎏) 및 027/R(8.3 ㎏)를 텀블 건조기(DR 216)를 사용하여 25 내지 35℃(내부 온도)에서 진공하에 건조하였다. 배치 027은 물을 첨가하지 않고 건조하였다. 대조적으로, 각각 400 ㎖씩 4개 추가분량의 저 내독소 물을 배치 027/R 상에 분사하였다. 각각의 건조시에, 달바반신 샘플을 분석을 위해 특정 시간에 취하였다. 결과는 표 5에 기록하였다. 배치 027의 경우, MAG는 건조 공정 말기에만 측정하였다.

풀 스케일 생산 데이터

하기 표 6에는 2002년 및 2004년의 전면적 캠페인 사이의 공정 및 MAG 수준의 요약을 나타내었다.

2002 공정에서는, 달바반신 생성물을 30℃ 미만에서 진공하에 건조시켰다. 다양한 시간에 저 내독소 물을 생성물 위에 분사하였다. 아세톤 함량이 0.5% 미만이 될 때까지 건조를 계속하였다.

2004 공정에서는, 달바반신 API를 원심분리에 의해 회수하고 차가운 아세톤(0 내지 10℃)으로 세척하고 진공하에 건조하였다(25℃ 미만의 내부 온도). MAG는 달바반신의 1차 분해물이며 그의 생성은 온도에 따라 달라진다. 건조 공정 동안, 아세톤을 치환시키기 위해 물을 첨가하여 결국 1.5% 미만의 아세톤 함량을 달성한다(GC). 표 5에서 명백하듯이, 물의 존재하에 저온에서의 건조는 예기치않게 저농도의 아세톤 존재(Lot 027/R에서 0.27% 대 Lot 027에서의 3.14% 비교) 및 예기치않게 저농도의 MAG 분해 생성물(Lot 027/R에서 1.81% 대 Lot 027에서 6.46% 비교)을 야기하였다.

그러므로, 달바반신의 건조 방법은 아세톤을 치환하기 위해 달바반신 생성물에 물을 첨가하는 단계를 포함한다. 첨가되는 물의 바람직한 양은 추정된 최종 건조 생성물의 약 20%이다. 또는, 물의 양은 추정된 최종 건조 생성물의 약 15%, 또는 약 20%, 또는 약 30%, 또는 약 40%, 또는 약 45%, 또는 약 50%일 수 있다.

달바반신의 건조 방법은 약 100 토르 및 약 25℃ 미만의 온도에서 어떤 물도 첨가하지 않고 약 2시간 동안 달바반신 생성물을 건조하는 단계를 포함한다. 이어서, 저 내독소 물을 생성물 위에 분사한 다음, 생성물을 약 2시간 이상 동안 건조한다. 그 다음, 아세톤 농도를 샘플링하고 검사한다. 상기 농도가 약 1.5%보다 높으면, 추가의 물을 생성물 위에 분사하고 아세톤 수준이 약 1.5% 미만이 될 때까지 생성물을 다시 건조한다.

제조

모든 벌크 용액 제조 작업은 클래스 100,000 (D 등급) 영역에서 일어난다. 무균 충전은 클래스 100(등급 A) 층류 영역에서 일어난다.

적당한 제조 용기에 이론상 배치 부피의 약 80%의 주입용 물을 채운다. 용액을 혼합하고 온도를 15 내지 30℃로 유지한다. 달바반신을 가하고 용해될 때까지 혼합한다. 하나 이상의 안정화제를 용액에 가하고 용해될 때까지 혼합한다. 주입용 물을 가하여 용액을 최종 부피로 만들고, 경우에 따라, pH를 0.1N HCl 또는 1.0N NaOH로 적절한 pH로 조정한다. 벌크 용액을 2개의 0.2 ㎛ 멸균 필터를 통해 연속으로 멸균된 수용기내로 여과시켜 멸균한다. (경우에 따라, 필터 투명도를 돕기 위해 또는 멸균 필터에 대한 입자 하중을 감소시키기 위해 예비필터를 사용할 수 있다). 용액을 무균적으로 멸균/파이로겐제거된 I형 유리 바이알에 채운다. 멸균 실리콘화 냉동보존 마개를 부분적으로 냉동보존 위치에 삽입하고 바이알을 냉동보존실로 옮긴다.

냉동보존 공정은 대표적인 바이알에 대한 열전쌍 프로브를 사용하여 모니터한다. 바이알을 -45℃에서 냉동시키고 3시간 동안 유지시킨 후 진공을 걸어준다. 선반 온도는 -25℃로 조정한다. 모든 열전쌍이 -29℃ 이상인 경우, 선반 온도를 0℃로 조정한다. 모든 열전쌍이 -5℃ 이상인 경우, 선반 온도를 +30℃로 조정한다. 모든 열전쌍이 +27℃ 이상인 경우, 바이알을 14 ± 2시간 동안 유지시킨다. 0.2 ㎛ 필터를 통해 여과시킨 멸균 질소를 도입하여 챔버를 대기압으로 복귀시킨 다음 냉동보존 선반을 접어 바이알을 밀봉한다. 이어서, 바이알을 챔버에서 꺼내고 알루미늄 밀봉을 적용한다.

모든 성분 및 장치는 적절한 공정에 의해 멸균시킨다. 바이알을 세척하고 255℃ 이상의 온도에서 열기 오븐에서 3시간 이상 동안 멸균시킨다. 마개를 123 내지 125℃의 온도 및 약 33 psi의 압력에서 증기 오토클레이브한다. 멸균시 체류 시간은 전형적으로 50 내지 60분이다.

멸균 공정의 확인은 증기 및 건열 멸균 사이클 둘 다에 대해 "과잉파괴" 접근방법을 이용한다. 모든 멸균 사이클은 천연 미생물과 무관하게 적어도 10^-6의 미생물 생존 확률을 제공하기에 충분한 치사율을 제공한다. 모든 사이클은 12 대수 이상의 감소를 제공하기에 충분한 치사율하에 설계된다. 건열 사이클은 최소 3 대수의 내독소 감소를 제공한다.

안정성 연구

달바반신은 냉동 건조 공정 동안 분해되는 것으로 밝혀졌다. 안정화제의 첨가는 안정성 연구 동안에 활성 성분 B₀의 분해량을 감소시키는 것으로 밝혀졌다.

25 및 40℃에서 시간경과에 따른 달바반신의 다양한 동결건조된 배합물의 안정성을 도 1 내지 4에 나타내었다. FDA 가이드라인 하에서, 40℃에서 3 내지 6 개월간 안정한 생성물은 실온에서 2년 동안 안정한 것으로 추정한다. 도 1a, 2A, 3A 및 4A는 살균 활성 달바반신 성분의 하나인 달바반신 성분 B₀의 양의 감소를 나타낸다. 상기에서 논의한 바와 같이, 성분 B₀는 또한 대부분의 달바반신 조성물의 주 성분 중 하나이다. 도 1b, 2b, 3b 및 4b는 다른 달바반신 성분의 하나 이상의 분해 생성물인 것으로 생각되는 덜 활성인 성분인 MAG의 양의 감소를 나타낸다. 표 7은 안정성 연구에 사용된 배합물 각각에 대한 조성을 열거한 것이고, 상기 연구 결과는 도 1 내지 4에 나타내었다. 이들 조성물 중 어느 것을 사용하여도 안정하고 멸균되고 입자가 없는 투약 제형을 생성할 수 있다.

도 1b 및 2b에서 보듯이, T=0에서, 다른 비-달바반신 성분 없이 달바반신만 함유하고 pH 조정되지 않은(pH 약 3.01) 조성물 D에 있어, 25℃ 및 40℃ 각각에서 이미 상당량(4%보다 많은 양)의 MAG가 존재한다. 보다 고온에서, MAG의 생성은 훨씬 더 큰 속도로 증가하였다. 40℃에서 3 및 6 개월 후에, 조성물 D는 각각 21.0% MAG 및 23.7% MAG를 포함하였다(도 2B 참조). 이것은 순수한 달바반신이 매우 불안정하며 달바반신을 단지 냉동-건조시키는 것으로 상당한 분해가 야기됨을 시사한다. 또한, 통상적인 건조도 또한 MAG 분해 생성물의 생성을 야기한다. -20℃에서의 저장이 약간의 달바반신 생성에 필요하다.

임의의 다른 비-달바반신 성분의 첨가없이 pH가 증가하는 경우, 안정성이 증가하였다. 조성물 D는 pH 조정되지 않고 약 3.01의 pH를 가졌다. 조성물 B는 pH 3.69로 조정되었다. 조성물 F는 pH 4.5로 조정하였다. 도 1a 및 2A에서 보이듯이, pH가 증가함에 따라 B₀의 초기 분해가 적어지고 시간에 따른 전체 분해가 적어졌다. 유사하게, 도 1b 및 2b에서, 보다 높은 pH로 조정한 조성물에서는 두가지 온도 모두에서 초기 및 시간 경과 후 모두 MAG 생성이 적어졌다.

만니톨의 첨가는 또한 달바반신의 안정성을 상당히 증가시키는 것으로 나타났다. 인자 B₀의 분해 및 시간에 따른 MAG의 증가도 또한 pH 조정하지 않고 만니톨을 함유하지 않은 조성물 D에 비해 상당히 감소되었다. 조성물 E(62.5 ㎎, 약 pH 3.01)에서 보이듯이, 어떤 pH의 조정이 없이도, 초기 및 시간 경과 후 냉동-건조 공정 모두에서 안정성이 상당히 개선되었다. 시간 T=0에서, T=25℃(도 1a 참조) 및 T=40℃(도 2A 참조)에서 약 2%의 MAG가 존재하였으며, 이것은 T=0에서 조성물 D에 존재하는 MAG의 양의 절반 미만이다.

pH가 증가하고 만니톨의 양을 일정하게 유지시켰을 때, 달바반신의 안정성도 또한 증가하였다. 조성물 E, C 및 G의 비교는, pH가 약 3.01에서 3.8 내지 4.5로 증가함에 따라 달바반신의 분해량도 또한 감소됨을 예시한다. 도 1a 및 2A에서 보이듯이, pH가 증가함에 따라, B₀의 초기 분해가 적어지고 시간에 따른 전체 분해도 적어졌다. 유사하게, 도 1b 및 2b에서, 보다 높은 pH로 조정한 조성물에서는 초기 및 시간 경과 후 모두 MAG 생성이 적어졌다.

pH를 일정하게 유지하면서 만니톨의 양을 증가시키면 또한 안정성의 증가가 이루어졌다. 예를 들면, 각각 pH 4.5에서 62.5 ㎎ 및 125 ㎎의 만니톨을 함유하는 조성물 L 및 K는 T=0에서 유사한 양의 B₀를 갖지만, 12 개월 후 B₀의 퍼센트의 변화는 화합물 K에 대해 상당히 적었다. pH 5.0에서 각각 62.5 ㎎ 및 125 ㎎의 만니톨을 함유하는 조성물 J 및 I에서도 유사한 패턴을 볼 수 있다.

만니톨 만을 함유하는 조성물의 pH를 변화시키면 B₀의 분해량이 변화되었지만, 예상가능한 경향은 없었다. 조성물 L, J 및 H는 각각 pH 4.5, 5.0 및 5.3에서 62.5 ㎎의 만니톨을 함유한다. 12 개월 후 B₀의 퍼센트 변화는 25℃에서 각각 1.0, 1.2 및 0.7이었다. 조성물 O, K 및 I는 각각 pH 3.3, 4.5 및 5.0에서 125 ㎎의 만니톨을 함유한다. 12 개월 후 B₀의 퍼센트 변화는 25℃에서 각각 0.5, 0.1 및 0.3이었다. 그중에서 특히, 40℃에서 2 개월 후에, 성분 B₀의 양은 조성물 O에서 1.9% 및 조성물 M에서 1.0%만 감소하였다(도 4A 참조).

도 3A에서 보듯이, 조성물 O(125 ㎎의 만니톨, pH 3.3)에 대한 B₀의 퍼센트 변화는 125 ㎎의 만니톨을 함유하는 조성물(조성물 I 및 K 참조)에서 나타나는 다른 차이와 유사하지만, T=0에서 B₀의 초기 분해량은 조성물 )에 대해 상당히 적다(88.3% B₀). 이것은 각각 85.3% B₀ 및 85.5% B₀를 갖는 조성물 K(pH 4.5) 및 조성물 I(pH 5.0)와 비교할 때 특히 그러하다. 화합물 O에 존재하는 B₀의 양과 MAG의 양 사이의 차이(도 3A 및 3B 참조)는 주로, 앞에서 설명한 바와 같이 B₀가 분해되어 MAG를 생성하는 유일한 달바반신 성분이 아니라는 사실로 설명될 수 있을 듯 하다.

락토스도 또한 달바반신에 적당한 안정화제인 것으로 보인다. pH 4.5에서 125 ㎎의 락토스를 함유하는 조성물 N의 경우, 12 개월 동안 B₀의 퍼센트 변화는 25℃에서 단지 0.6이었다. 40℃에서 2 개월 후, B₀의 퍼센트 변화는 단지 1.4이었다. 그러나, 락토스 단독으로는 달바반신 및 만니톨을 안정화시키는 것으로는 보이지 않는다. pH 4.5에서, 조성물 K(125 ㎎의 만니톨)의 B₀ 성분은 40℃에서 2 개월 후에 단지 1.0 만큼 감소하였다.

만니톨 및 락토스의 혼합물도 또한 달바반신을 안정화시키는 것으로 보이며 특히 바람직하다. 만니톨 및 락토스는 유사한 안정화 성질을 갖는다. 그러나, 만니톨은 이뇨제이다. 그러므로, 바람직한 태양에서, 만니톨의 양은 최소화한다. 조성물 M은 각각 62.5 ㎎의 만니톨 및 락토스를 함유한다. 도 3A에서 보이듯이, 25℃에서 12 개월 동안 MAG의 퍼센트 변화는 단지 0.6이었다. 또한, 도 4A에서 보이듯이, MAG의 양은 40℃에서 3 개월 후에 단지 2.1%만 증가하였다. 이것은 40℃에서 3 개월 후에 2.9%의 MAG 양의 증가를 나타낸 조성물 N(125 ㎎ 락토스) 및 K(125 ㎎ 만니톨)에 대해 보인 것보다 분해량이 적다. 다른 배합물에 사용된 만니톨 및 락토스 각각의 양의 절반의 혼합물이 달바반신 안정성에 보다 큰 증가를 야기한 것은 예상치 못한 것이었다.

약 pH 4.5에서 만니톨 및 락토스로 안정화시킨 달바반신에 대한 추가의 안정성 데이터는 다양한 온도에 대해 하기 표 8a 내지 8D에 나타내었다.

또 다른 장기간 안정성 연구의 데이터가 표 9 내지 11에 열거되어 있다. 샘플은 이중 이동상 구배를 이용한 역상 HPLC 및 UV 검출 시스템으로 분석하여 달바반신 배합물의 안정성을 측정하였다. 달바반신 함량은 외부 참고 기준을 이용하여 측정하였다. 달바반신 성분의 분포 퍼센트는 각 단일 성분의 면적을 주 약물 성분 모두의 전체 면적과 비교하여 계산하였다. 불순물의 분포 퍼센트는 개개 불순물의 면적 각각을 전체 크로마토그래피 면적과 비교하여 계산하였다.

샘플을 HPLC 분석, 생물검정, 수분 함량, 미생물 범위, pH, HPLC 분포 또는 전체 불순물에 대해 시험하였다. 결과는 표 9 내지 11에 나타내었다. 배치 025에 대한 안정성 데이터는 표 9a, 10A 및 11A에 나타내었으며, 이들은 T=0에서 1.5% MAG를 가졌다. 배치 020005/R에 대한 안정성 데이터는 하기에 기술하는 상이한 건조 공정의 결과로서, 표 9b, 10B 및 11B에 나타내었으며, 이들은 T=0에서 0.8% MAG를 가졌다.

달바반신은 -20℃에서 저장동안(표 9a 내지 9B 참조) 생물검정, HPLC 분석, HPLC 분포 또는 전체 불순물에 별 변화없이 우수한 안정성을 나타내었다. pH는 변화없이 유지되었고 수분 함량에서 약간의 증가가 관찰되었다.

MAG 함량에서 약 2.9%의 증가 및 인자 B₀에서 약 3.6%의 상응하는 감소로 입증되듯이, 분해는 5℃에서 36 개월에 걸쳐 관찰되었다(표 10a 참조). 전체 불순물에 있어서는 어떤 경향도 관찰되지 않았고, 생물검정 및 pH는 본질적으로 변화없이 유지되었다. 유사한 결과가 배치 020005에 대해서도 나타났다(표 10b 참조).

25℃에서 12 개월 동안 저장시(표 11a 참조) MAG에서 약 10.2%의 증가 및 인자 B₀에서 약 8.5%의 감소와 함께 보다 광범위한 분해가 관찰되었다. 다른 인자들의 농도, 관련 물질 및 pH는 변화없이 유지되었다. 수분 함량은 약 1.6% 증가하였다.

멸균 생성물의 안정성 시험도 또한 수행하였다. 샘플을 케이크 및 용액의 외관, 복원 시간, pH, HPLC 분석, 생물검정, 수분 함량, 멸균도, HPLC 분포 및 관련 물질에 대해 시험하였다. 결과는 표 12 내지 14에 나타내었다.

동결건조된 생성물은 5℃에서 저장할 때 HPLC 분석 또는 HPLC 분포에서 단지 약간의 변화하에 우수한 안정성을 나타내었다(표 12a 및 12B 참조). 온도 증가에 따라(표 13 및 14 참조), MAG의 상응하는 증가와 함께 인자 B₀가 감소한다. 다른 인자들인 온도에 영향받는 것으로 보이지 않는다. 생성물의 외관 및 pH는 온도에 영향받는 것으로 보이지 않는다. 복원 시간에서도 명백한 경향을 결정할 수 없어, 가용화된 생성물의 시각 검사는 몇 초를 필요로 할 수 있음을 고려해야 한다.

광안정성

주입용 달바반신(500 ㎎ 바이알)을 또한 표지된 바이알 중에서 광안정성에 대해 평가하였다. 10개의 표지된 바이알을 알루미늄 호일로 감은 표지된 바이알로 이루어진 어두운 대조군과 함께 광안정성 챔버에 도입하였다. 시험 샘플을 1200만 L·h 이상 및 200 W·h/m² 이상의 자외선 부근 집적 에너지에 노출시켰다. 샘플을 외관, 용액 외관, pH, 수분 및 HPLC 분석에 대해 평가하였다. 상기 평가의 결과는 표 15에 나타내었다.

노출 광 및 어두운 대조군 샘플의 비교는 빛에 노출된 샘플이 효능, API 성분 농도 및 총 불순물에 약간의 변화와 함께 필적할 정도로 유지됨을 보여준다.

빛에 노출된 샘플은 RRT 0.85에서 매우 낮은 수준의 불특정 불순물의 존재를 나타냈으며, 이것은 어두운 대조군 샘플에서는 검출되지 않았다. HPLC/MS에 의한 상기 성분의 평가는 상기 성분이 달바반신 B 동족체의 일염소화 유도체임을 나타내었다.

상기 결과들을 근거로, 주입용 달바반신은 그 즉석 팩에서 광안정성인 것으로 간주된다.

개선된 효능 및 감소된 부작용

높은 투여량 수준(즉, 놀랍게 높고 오래 지속되는 혈청 농도를 제공하는)에서 달바반신을 매주 투여하면, 본원의 실시예에 의해 입증되듯이, 매일 또는 심지어 매일 2 내지 4회 투여된 낮은 용량의 통상적인 항생물질의 표준 치료에 의해 관찰된 것에 유사하거나 그보다 우수한 놀랍게 우수한 안전성 프로필을 나타낸다. 놀랍게도 높은 용량(즉, 놀라운 높고 오래 지속되는 혈청 농도를 제공하는)의 달바반신을, 다른 항생물질보다 적은 횟수로 불리한 부작용없이 투여하여 개선된 효능 및 환자 순응도를 제공할 수 있다.

실시예 1에서 논의하는 바와 같이, 달바반신에 의한 치료는 낮은 빈도의 이상 반응을 야기한다. 심각한 이상 반응으로는 사망을 야기하고 생명을 위협하며 입원 또는 기존 입원의 연장, 또는 지속적이거나 상당한 불구 또는 무력화를 야기하는, 임의 용량에서 일어나는 임의의 불리한 약물 경험이 포함된다. 실시예 1에 기술된 II 단계 시험에서, 설사, 오심, 고혈당, 사지 통증, 구토 및 변비와 같은 불리한 반응의 90%가 중증도에 있어 경증 내지 중등도였다. 실시예 1의 시험에서 달바반신의 사용은 연구 약물 치료와 관련된 심각한 이상 반응을 야기하지 않았다.

키트

본 발명은 또한 세균 감염의 치료 또는 예방을 위한 방법에 사용하기 위한 키트를 제공한다. 상기 키트는, 예를 들면, 하나 이상의 단위 용량의 달바반신을 포함하는 본 발명의 약학 조성물, 및 세균 감염을 치료 또는 예방하기 위한 용도에 관하여 주치의에게 정보를 제공하는 설명서를 포함한다. 설명서는 인쇄된 형태로, 또는 플로피 디스크, CD 또는 DVD와 같은 전자 매체의 형태로, 또는 상기 설명서를 수득할 수 있는 웹사이트 주소의 형태로 제공될 수 있다. 종종, 달바반신의 단위 용량은 개인에게 투여시 개인에서 5일이상 동안 달바반신의 치료 또는 예방 효과적인 혈장 농도를 유지하는 투여량을 포함한다. 일부 태양에서, 키트는 적어도 5일 간격으로, 종종 약 1주일 간격으로 투여될 2개의 단위 투여량을 포함하며, 종종 달바반신의 1차 투여량은 2차 투여량보다 약 1.5 내지 약 3 배 더 높다. 달바반신은 종종 멸균 수성 약학 조성물 또는 건조 분말(즉, 동결건조된) 조성물로 포함된다.

적당한 포장이 제공된다. 본원에서 사용된 바와 같이, "포장"은 시스템에서 통상적으로 사용되고 개인에서 투여하기에 적당한 달바반신 조성물을 고정된 경계내에서 유지할 수 있는 고체 매트릭스 또는 물질을 말한다. 상기 물질로는 유리 및 플라스틱(예를 들면, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌 및 폴리카보네이트) 병, 바이알, 종이, 플라스틱 및 플라스틱-호일 적층 봉투 등이 포함된다. e-빔 멸균 기술을 이용하는 경우, 포장은 내용물의 멸균을 허용하기에 충분히 낮은 밀도를 가져야 한다.

키트는 또한 선택적으로 달바반신 투여 장치, 예를 들면, 주사기 또는 정맥내 투여 장치, 및/또는 투여용 건조 분말(예를 들면, 동결건조된) 조성물을 제조하기 위한 멸균 용액, 예를 들면, 5% 덱스트로스와 같은 희석제를 포함할 수 있다.

본 발명의 키트는, 달바반신 이외에, 상기 방법에서 기술한 바와 같이 달바반신과 함께 사용하기 위한 비-달바반신 항생물질 또는 비-달바반신 항생물질의 혼합물을 포함할 수 있다.

하기 실시예에서, 하기의 약어들은 하기의 의미를 갖는다. 약어가 정의되지 않은 경우, 일반적으로 허용되는 의미를 갖는다.

AcOH = 아세트산

AcONa = 아세트산 나트륨

aq. = 수성

AST = 아스파테이트 아미노 트랜스퍼라제

ALT = 알라민 아미노 트랜스퍼라제

BV = 층 부피

CV = 변이 계수

d = 직경

D = 달톤

DCC = 다이사이클로헥실카보다이아마이드

DMEPA = 3-(다이메틸아미노)-프로필아민

DMSO = 다이메틸 설폰아마이드

eq = 당량

EU = 내독소 단위

g = 그램

GC = 가스 크로마토그래피

HCl = 염산

H₂O = 물

HOBT = 1-하이드록시벤조티아졸 하이드레이트

HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피

H₂SO₄ = 황산

IPA = 아이소프로필아민

IU = 국제 단위

KF = 플루오르화 칼륨

Kg = 킬로그램

L = 리터

LC/MS/MS = 액체 크로마토그래피/질량 스펙트럼/질량 스펙트럼

LDH = 락테이트 데하이드로게나제

LSC = 액체 섬광 계수

m³ = 세제곱 미터

MeOH = 메탄올

mg = 밀리그램

mL = 밀리리터

몰 = 몰농도

MW = 분자량

N = 노말 농도

NaOH = 수산화나트륨

NMP = N-메틸-2-피롤리돈

QTD = 정량적 조직 분포

Rt = 체류 시간

sd = 표준 편차

TEA = 트라이에틸아민

하기의 실시예는 본 발명을 예시하며 제한하는 것이 아니다.

실시예 1. 심부 피부 및 연조직 감염에서 주 1회 달바반신의 효능 및 안전성

무작위배정되고, 제어된 본 연구는 달바반신의 2개 용량 방법의 안전성 및 효과를 평가하였다. 심부 피부 조직을 수반하거나 수술적 치료가 필요한 피부 및 연조직 감염(SSTI)이 있는 성인 환자를 세 군으로 무작위배정하였다: 제 1일에 정맥내 주입(IV)을 통해 1100 ㎎의 달바반신을 투여받은 연구군 1; 제 1일에 정맥내로 1 g의 달바반신 및 제 8일에 정맥내로 500 ㎎의 달바반신을 투여받은 연구군 2; "표준 관리"를 받은 연구군 3. 임상 및 미생물 반응 및 이상 반응을 평가하였다.

분석을 위한 개체군

62 명의 환자를 연구에 무작위배정하였다; 모두 하나 이상의 용량의 연구 약물을 투여받았다. 4개의 연구 개체군을 안전성 및 효과에 대해 평가하고, 다음과 같이 정의하였다: 미생물 처리의향(microbiological intent-to-treat, MITT) 개체군은 모두 베이스라인으로 배양-확인된 그램-양성 병원균을 갖는 ITT 환자들이었 다. 임상적으로 평가할 수 있는 개체군은 (1) 모든 연구 참가 기준을 충족시키고, (2) 경구적 단계적-감소 치료(표준 관리군에만 적용)를 제외하고, 4일 후에 그램-양성 감염에 대한 항미생물 치료에 변화가 없고, (3) 후속(FU) 평가 방문으로 돌아가고(치료가 실패하지 않는한), (4) 비-프로토콜 인증 동반 항미생물제를 투여받지 않은(치료가 실패하지 않는한) 개체군으로 정의되었다. 미생물학적으로 평가할 수 있는 개체군은 베이스라인으로 배양-확인된 그램-양성 병원균을 갖는 임상적으로 평가할 수 있는 환자들의 소그룹이었다.

연구 개체군은 표 16에 나타내었다.

대상들의 중간 연령은 50 내지 55 세(18 내지 86 세 범위)이었다. 치료군 전체에서 연령에 뚜렷한 차이는 없었다. 치료군 전체에서 성별에는 차이가 있었지만, 전체적으로 연구는 동일한 수의 남성과 여성을 참여시켰다. 환자 개체군은 주로 백인이었다. 이들 결과는 ITT 및 임상적으로 평가할 수 있는 개체군 둘 다에 대해 일치하였다.

연구군 1에 20 몇 및 연구군 2 및 3에 각각 21 명씩 62 명의 환자가 참여하였다. 표준 관리에 대한 가장 일반적인 비교자는 클린다마이신, 세프트리악손, 반코마이신 및 세파졸린이었다. 연구군 3에서 평균 치료 기간은 15일이었다.

베이스라인 병원균 및 감수성

62 명의 ITT 환자중에서, 66%(14 명의 단일-용량 달바반신, 13 명의 2개 용량 달바반신, 14 명의 표준 관리)가 분리된 전치료 그램-양성 병원균을 가졌다(MITT 개체군). 가장 보편적인 병원균은 스태필로코커스 오레우스이었다. 베이스라인으로서 병원균의 분포는 표 17에 나타내었다.

임상 및 미생물학적 반응

환자의 임상 반응 및 입증되거나 추정된 미생물학적 반응을 평가함으로써 세가지 치료 방법의 효과를 측정하였다. 주된 효과 종말점은 임상적으로 평가할 수 있는 개체군에 대한 후속 방문에서의 임상 반응이었다. EOT 및 FU 방문 둘 다에 대한 임상 반응은 성공(회복 또는 개선) 또는 실패(불확실한 결과 포함)로 분류하였다. 성공으로 분류된 환자는 그의 감염에 대한 추가의 전신적 항균 치료를 받지 않았어야 한다. 실패는 새로운 또는 추가의 전신적 항균제를 사용한 치료가 SSTI에 필요하도록 하는, SSTI의 하나 이상의 국소적 또는 전신적 증세 및 증상의 지속으로 정의되었다.

제 2의 효능 변수인 미생물학적 결과는 미생물학적으로 입증된 SSTI(즉, 하나 이상의 동정된 베이스라인 병원균)를 갖는 환자의 부분개체군에서 평가하였다. 미생물학적 반응은 베이스라인(즉, 박멸, 추정상 박멸, 지속, 추정상 지속)에서 동정된 각각의 그램-양성 병원균에 대해 평가하였다. 후속 배양을 수행하지 않은 환자의 경우, 베이스라인 병원균에 대한 미생물학적 반응은 임상 반응을 기준으로 추정하였다. EOT 및 FU 방문에서 환자에 의한 미생물학적 반응은 성공(즉, 모든 그램-양성 유기체가 박멸 또는 추정상 박멸) 또는 실패(즉, 하나 이상의 그램-양성 유기체가 지속 또는 지속되는 것으로 추정, 여러 병원체가 부분 박멸)로 등급을 정했다. EOT 및 FU 방문 두 경우 모두에서, 콜로니화 및 중복감염을 평가하였다. FU 방문에서, 환자의 세균학적 반응은 또한 재발을 포함할 수 있었다.

임상적 효과

임상적 성공률은 표 18에 나타내었다. 임상적으로 평가할 수 있는 개체군에서, 단일-용량 달바반신 군의 환자들의 61.5%, 2개 용량 달바반신군의 94.1% 및 표준 관리군의 76.2%가 FU 평가 시점에서 성공으로 분류되었다. 베이스라인에서 심한 또는 복잡성 SSTI로 분류된 환자들의 부분분석에서, 2개 용량 달바반신 치료법은 또한 각각 58.3% 및 73.7%의 단일-용량 달바반신 및 표준 관리 치료법과 비교하여 보다 높은 임상적 성공률(93.8%)을 제공하였다.

EOT 및 FU 평가 모두에서 유사한 성공률이 2개 용량 달바반신 치료 후 모다 유리한 반응에 대한 일관되는 경향을 갖는 지지적 ITT 및 미생물학적으로 평가가능한 개체군에서 발견되었다(표 17). MITT 개체군의 경우, 메티실린 내성 스태필로코커스 오레우스(MRSA)를 갖는 개체군에 대한 FU 평가에서의 임상적 성공률은 단일-용량 달바반신의 경우 50%(3/6), 2개 용량 달바반신의 경우 80%(4/5), 및 표준 관리 방법으로 처리한 환자의 경우 50%(1/2)이었다.

미생물학적 효과

다양한 병원균에 대한 다양한 치료 방법의 성공률을 표 19에 나타내었다. 미생물학적으로 평가가능한 개체군의 경우, 모든 유기체에 대한 FU 평가에서 박멸/추정상 박멸률은 단일-용량 달바반신의 경우 58.3%(7/12), 2개 용량 달바반신의 경우 92.3%(12/13), 및 표준 관리군 환자의 경우 70.6%(12/17)이었다. 지속적인 분리균의 경우, 달바반신 MIC에서의 변화가 없었다. FU에서, 스태필로코커스 오레우스 박멸률은 단일 용량 달바반신(50%) 및 표준관리(60%) 처리에 비해 두 개 용량 달바반신 군(90%)에서 더 높았다. MITT 개체군에서도 유사한 경우가 관찰되었다; 2개 용량 달바반신군이 MRSA 분리균의 80%를 박멸하였다(표 19).

미생물학적으로 평가가능한 개체군 및 MITT 개체군에 있어, EOT 및 FU에서의 미생물학적 성공률을 표 20에 요약하였다. 2개 용량 달바반신 및 표준 관리 방법으로 처리한 환자들에 있어 두 방문 모두에서 필적할만한 미생물학적 성공률이 보고된 반면(약 64% 내지 77%), 단일 용량의 달바반신을 투여받은 개체군은 보다 낮은 성공률(<40%)을 나타내었다. 미생물학적으로 평가가능한 개체군에서 EOT/FU에서의 미생물학적 성공률은 임상 반응의 경우에 유사하였다: 단일-용량 달바반신의 경우 38.5%/27.3%, 2개-용량 달바반신의 경우 72.7%/72.7%, 및 표준 관리 치료의 경우 71.4%/64.3%. MITT 개체군의 경우에도 유사한 결과가 관찰되었다(데이터 나타내지 않음).

약물동력학적 분석

달바반신 처리군에 무작위배정된 환자에 있어서, 달바반신 혈장 농도를 측정하기 위해 제 8일에 5 ㎖의 혈액을 수득하였다. 8일에 500 ㎎ 용량의 달바반신을 투여받은 무작위배정된 환자에 있어, 2차 용량 투여 직전에 혈액을 취하였다. 단일-용량 달바반신 군에 무작위배정된 환자의 경우 10일 및 24일에 및 2개 용량의 달바반신을 투여받은 환자의 경우 20일 및 34일에 추가로 5 ㎖의 혈액을 취하였다.

달바바신 혈장 농도는 인증된 액체 크로마토그래피 및 질량 분광계 방법을 이용하여 측정하였다. 정량의 하한치는 혈장에 대해 500 ng/㎖이었다.

단일-용량 방법에서 연구 8, 10 및 24일에 수거된 평균 달바반신 농도는 각각 31.1 ± 7.1, 25.2 ± 4.8 및 10.2 ± 3.5 ㎎/ℓ(평균 ± SD)이었다. 연구 8일(2차 투약전), 20일 및 34일에 2개 용량 방법에 따른 달바반신 농도는 각각 30.4 ± 8.2, 21.2 ± 10.0 및 9.0 ± 4.4 ㎎/ℓ이었다. 예상한 바와 같이, 모든 환자는 1차 투약 후 처음 1주일간 20 ㎎/ℓ보다 높은 달바반신 농도를 가졌으며, 8일에 500 ㎎을 정맥내로 추가 투약한 후 추가 1주간 동안 20 ㎎/ℓ보다 높은 수준을 유지하였다. 일반적으로, 최소 살균 농도는 약 4 내지 10 ㎎/ℓ이다.

안전성 평가

하나 이상의 용량의 연구 약물을 투여받은 각각의 환자(ITT 개체군)를 비정상적 임상 실험실 시험 결과 및 바이탈 사인을 포함하여 이상 반응(AE)을 모니터함으로써 약물 안전성에 대해 평가하였다. AE는 연구자에 의해 그의 중증도(경증, 중등도, 중증, 생명-위협)에 대해서 및 연구 약물과의 관계(관련 없음, 거의 관련없음, 관련 가능성 또는 거의 관련됨)에 의해 등급을 매겼다.

AE 데이터의 요약을 표 21에 나타내었다. 주된 이상 반응(90%)은 중증도에 있어 경증 내지 중등도인 것으로 간주되었다. 모든 심한 이상 반응(5 명 환자에서 8 사례)은 연구 약물 처리에 무관하였다. 하나 이상의 치료가 급한 AE를 보고한 모든 환자의 약 59%(19 명 단일-용량 달바반신, 16 명 2개 용량 달바반신, 21 명 표준 관리군)가 연구 약물에 관련가능성이 있거나 아마도 관련되는 것으로 연구자에 의해 분류된 이상 반응을 경험하였다. 특히, 단일-용량 달바반신군의 11 명(55%), 2개 용량 달바반신군의 10 명(48%) 및 표준 관리 환자의 12 명(57%)에서 약물-관련된 AE가 보고되었다. 두가지 달바반신 처리군 및 표준 관리 처리군에서 가장 흔히 보고된 약물-관련 AE는 설사 및 오심이었다. 다양한 처리군에 대해 관찰된 AE의 유형에 대한 요약은 표 22에 나타내었다.

달바반신-처리되지 않은 환자는 AE로 인해 치료를 이르게 중단하였다. 표준 관린 방법의 21 명 환자 중, 아마도 약물 관련된, 1일에 두드러기가 발생한 1 명의 환자 및 연구 약물과 무관한 AE를 나타낸 2 명의 환자(슈도모나스 에루기노사(P. aeruginosa)로 중복감염 및 증가된 반코마이신 최저 농도)를 포함하여 3 명(14%)이 AE로 인해 치료를 이르게 중단하였다.

고찰

상기 공개-임상, 무작위배정된 II 단계 시험은 달바반신이 SSTI를 갖는 성인의 치료에 효과적임을 보여준다. 참가한 환자들의 대부분은 심한 또는 복잡성 감염(>90%) 및 수술적 처리가 필요한 감염(약 70%)을 가진 한편, 약 45%는 근원적인 당뇨병을 가졌다.

주 1회씩 2개 용량의 달바반신은 단일-용량 달바반신 또는 표준 관리 방법보다 수치상 더 높은 임상 반응 등급을 나타내었다. ITT 및 임상적으로 평가가능한 개체군 둘 다로부터 얻은 데이터는 순차적인 2개의 매주 주사 용량의 달바반신(주 1 회씩 1000 ㎎, 500 ㎎) 투약법이 SSTI의 치료에 효과적임을 시사한다. 표준 관리 군은 13일의 평균 기간동안 처리하였다. 후속처리에서, 표준 관리 방법으로 처리한 환자의 76% 및 단일-용량 달바반신을 투여받은 환자의 61.5%에 대해 2개-용량 달바반신으로 치료한 임상적으로 평가가능한 환자의 94%가 임상적인 성공으로 간주되었다.

스태필로코커스 오레우스가 베이스라인에서 가장 흔히 분리되는 유기체였다. 본 시험에서, 환자들의 약 83%가 스태필로코커스 오레우스로 감염되었고, 전체 스태필로코커스 오레우스 균주의 38%가 MRSA이었다. 대부분의 감염(80%)은 단일 병원균에 의해 야기되었다. MRSA를 포함하여 그램-양성 분리균에 대한 달바반신의 MIC는 0.016 내지 0.25 ㎎/ℓ의 범위이었다.

미생물학적 성공률은 임상적으로 평가가능한 개체군에 대한 임상 반응의 성공률과 유사하였다. 혼합된 모든 유기체에 대해, 주 1회 2개 용량의 달바반신 방법에 의한 처리는 치료 후 2주때 평가에서 단일-용량 달바반신(58%) 및 표준 관리 치료(71%) 군에 비해 너 높은 박멸률(92%)를 제공하였다. 전체적으로, 스태필로코커스 오레우스의 박멸률은 각각 환자의 90%, 50% 및 60%에서 관찰되었다. MITT 개체군의 경우, MRSA에 대한 박멸률은 단일-용량 달바반신 및 표준 관리 치료군의 50%에 대해 2개 용량 달바반신 방법의 경우 80% 이었다.

단일-용량 및 2개-용량의 주 1회 처리 시기의 말기에(각각 10일 또는 20일) 수득된 달바반신의 농도는 유사하여 2차 주 1회 용량 후 약물 축적이 거의 없음을 시사하였다. 2개-용량 방법에 의해 관찰된 높은 임상적 성공률은 시간-의존성 사멸을 시사하며, 이때 1주일 간격의 두 용량의 달바반신에 의해 지속된 수준의 약물 또는 약물 노출이 제공되었다. 주 1회 투여 간격의 말기에 측정된 달바반신의 혈장 농도는 본 시험에서 발견된 것을 포함하여 대부분의 SSTI의 원인이 되는 병원균에 대해 보고된 MIC₉₀(<0.03 내지 0.5 ㎎/ℓ)보다 실질적으로 더 컸다. 상기 농도는 또한 4 내지 10 ㎎/ℓ의 최소 살균 농도 이상이었다.

이상 반응의 전체적인 비율은 두 달바반신 방법 및 표준 관리 군에 대해 유사하였다. 위장 약물-관련 이상 반응(즉, 설사 및 오심)이 세가지 처리 군 전체에서 가장 흔히 보고되었다. 상기 반응의 대부분은 가볍고 자가-제한되었다. 달바반신-처리되지 않은 환자는 이상 반응으로 인해 연구에서 이르게 제외되었으며, 보고된 글라이코펩타이드에 기인하는 어떤 심각한 이상 반응도 없었으며, 표준 관리 군의 14%가 이상 반응으로 제외되었다. 따라서, 새로운 투여 방법은 표준 관리방법에 비해 이상 부작용을 감소시켰다. 본 시험에서 얻은 데이터는 달바반신이 어느 정도의 임상적으로 중요한 간독성 또는 신장독성을 유도하는지에 대한 증거를 발견하지 못했다.

2개 용량 달바반신 방법은 복잡성 SSTI를 갖는 환자의 치료에 효과적인 것으로 보인다. 두가지 용량 모두에서 달바반신은 표준 관리군에 유사한 이상 반응 프로필하에 본 임상 시험에서 잘 허용되었다.

실시예 2. 카테터-관련 혈류 감염( CR - BSI )의 치료에서 주 1회 달바반신의 효과 및 안전성

본 연구는 표준 관리 처리, 반코마이신에 대해, 그램-양성 세균 병원균에 기인한 카테터-관련 혈류 감염(CR-BSI)을 갖는 성인의 치료에 달바반신의 주 1회 투여 방법의 안전성 및 효과(임상 및 미생물학적)를 평가하였다.

방법

포함/배제 기준을 충족시키는, 의심되거나 공지된 그램-양성 병원균(들)에 기인한 CR-BSI를 갖는 환자를 상기 공개-임상, 비교 다기관 연구에서 두 처리군 중 하나에 무작위배정하였다. 달바반신은 주 1회 달바반신 방법으로 1주일에 1회 투여하였고, 비교자(반코마이신)는 반코마이신으로 매일 투여하였다. 스태필로코커스 오레우스 감염이 있는 환자의 경우 카테터 제거가 필요하였고; 응고효소-음성 스태필로코커스(CoNS) 감염이 있는 환자의 경우 카테터 관리는 연구자의 판단에 맡겼다. 효과는 추가의 항균제가 확실히 필요없도록 하는 CR-BSI의 임상 증세 및 증상의 개선 또는 해결을 기준으로 임상적이고, 베이스라인 또는 다른 병원균의 박멸 또는 존재를 기준으로 미생물학적이다. 안전성 및 달바반신 혈장 농도도 또한 평가하였다.

분석을 위한 개체군

약 80 명의 환자를 계획하고(처리군 1 및 3에 각각 40 명); 67 명의 환자를 분석하였다(주 1회 달바반신 처리군 33 명 및 반코마이신 처리군에 34 명). 매일 달바반신 투여군의 7 명의 환자를 안전성 분석에만 포함시켰다. 75 명의 환자를 무작위배정하고 74 명을 미국의 13 장소에서 처리하였고; 64 명의 환자는 연구를 완료하였다. 인구통계적 특성은 일반적으로 연구군 전체에서 유사하였다. 주 1회 달바반신 처리군의 환자의 경우 평균 연령은 54 세(20 내지 78 세 범위)이고 반코마이신 처리군에서는 57 세(19 내지 85 세 범위)이었다. 남성 및 여성은 전체적으로 동일하게 나타났고; 주 1회 달바반신 처리군에서는 남성이 약간 더 많고 반코마이신 처리군에서는 여성이 더 많았다. 대부분의 환자는 백인(>65%)이었고, 예상되는 CR-BSI를 갖는 것으로 분류되었고 비-터널식 카테터를 가졌다. 미생물학적 ITT 개체군의 경우, 두 처리군 모두에 대해 가장 보편적인 병원균은 CoNS 및 스태필로코커스 오레우스이었다. 스태필로코커스 오레우스 분리균 중에서, 5/11(45/4%) 및 9/12(75.0%)가 각각 연구군 1 및 3에 대해 메티실린-내성(MRSA)으로 확인되었다.

진단 및 참가에 대한 주 기준

스태필로코커스 오레우스에 대해 양성인 하나 이상의 혈액 배양물 또는 다른 모든 유기체에 대한 2개 이상의 양성 혈액 배양물(경피적으로 취한 샘플로부터 얻은 하나 이상의 배양물과 함께)로 정의된 입증된 그램-양성 균혈증을 갖는 환자를 포함시켰다. 또한, 다른 모든 포함 기준을 충족시키고 또한 하기에 열거한 두가지 조건을 각각 충족시킨 환자도 또한 참여시켰다:

1. 다음의 균혈증 증세 중 적어도 2개 이상: 직장내, 경구(측정된 온도에 0.5℃ 더함), 고막, 또는 중심 카테터를 통해 측정한, >38.0℃ 또는 <36.0℃의 코어 온도; >12,000/㎜³ 또는 <4,000/㎜³의 WBC 총수 또는 >10% 밴드 형태를 나타내는 감별 수; 빈맥(>100 bpm의 맥박수); 빈호흡(>20 호흡/분의 호흡수); 일시적 저혈압(<90 ㎜Hg의 수축기 혈압).

2. 카테터(카테터 부위에 국소적 증세 및 증상이 있을 수 있다) 이외의 다른 균혈증의 임상적 표시에 대한 뚜렷한 근거가 없음.

치료

치료는 스태필로코커스 오레우스 감염 환자에서는 14일동안, 모든 다른 병원균의 경우는 7 내지 14일동안 지속하였다. 달바반신의 긴 반감기로 인해, 연구 약물 치료 기간은 주 1회 달바반신 방법으로 주어진 달바반신의 각 용량에 대해 7일로 추정되었다. 달바반신은 1일에 1000 ㎎의 부하 용량으로 및 8일에 500 ㎎ 용량으로 정맥내 투여하였다. 반코마이신은 12시간마다 1000 ㎎ 용량으로 정맥내 투여하였다(또는 약물 농도 기준으로 용량 조절).

평가 기준

효과는 임상 및 미생물 반응을 기준으로 평가하였다. 주요 성과 파라미터는 미생물학적 처리 의향(ITT) 개체군에서 치료확인 검사(test-of-cure, TOC) 방문에서 전체적인 반응이었다. 안전성은 이상 반응(AE), 임상적 실험실 검사, 신체 검사, 바이탈 사인 및 ECG에 대한 데이터를 모으고 분석하여 평가하였다. 달바반신 혈장 농도는 7가지 시기(제 1일 1차 투약 전 및 후, 제 4 ± 2일에, 제 8일에 2차 투약 전 및 후, 치료 종료시(EOT) 및 TOCEo)에 측정하였다. 연구과정 동안에 연구군 2의 배제로 인해, 상기 환자들로부터 인구통계적 데이터 및 안전성 데이터만 기술하였으며; 효과는 평가하지 않았다.

통계학적 방법

효과, 안전성 및 달바반신 농도 데이터는 설명적인 통계를 이용하여 나타내었다. 1차 효과 분석에 있어, 95% 신뢰구간을 또한 결정하였으며, 주요 효과 변수를 이용한 전조 요인 분석의 경우, 로지스틱 회귀분석을 이용하였다.

효과 결과

1차 효과 분석에 있어, TOC의 미생물학적 ITT 개체군에서 전체 반응에서, 주 1회 달바반신 처리군으로 달바반신을 투여받은 환자(87.0%, 95% CI: 73.2, 100.0)가 반코마이신을 투여받은 환자(50.0%, 95% CI: 31.5, 68.5)보다 높은 성공률을 나타내었다.

2차 효과 분석에서, 병원균, 감염 종류, 베이스라인에서 카테터 상태, 및 미생물학적 ITT 및 EOT 및 TOC의 평가가능한 개체군에 대한 카테터 유형에 의한 전체 성공, 임상적 성공, 및 전체 및 임상적 성공은 반코마이신 연구군에 비해 달바반신 연구군에서 더 높았다. 환자에 의한 미생물학적 성공은 EOT의 처리군의 경우와 유사하였지만, TOC의 달바반신 연구군의 경우 더 높았다. CoNS의 경우, 병원균에 의한 미생물학적 성공은 EOT 및 TOC 둘 다의 달바반신 연구군에서 더 컸다. EOT까지, 카테터 부위에서 대부분의 증세 및 증상은 두 연구군 모두에서 해결되었다.

안전성 결과

이상 반응이 71 명의 환자(95.9%)에서 보고되었다. AE를 보고하는 환자의 수는 연구군 전체에서 유사하였으나, 반코마이신 연구군에서보다 달바반신 연구군에서 더 많은 AE가 보고되었다. 가장 보편적인 AE는 설사, 변비, 빈혈 및 저혈압이었다. 대부분의 AE는 강도에 있어 연구자에 의해 경증 또는 중등도로 간주되었다. 연구 약물에 관련(가능 또는 예상)되는 것으로 간주되는 이상 반응은 연구군 전체에 고르게 나타났다. 달바반신 연구군 중 1 명의 환자(3%)가 무관한 비-심각성 AE를 나타내어 달바반신의 중단을 야기하였고; AE는 연구로부터 제외까지 가지 않았다. 반코마이신 연구군에서 3 명(8.8%)의 환자가 비교자의 중단을 야기하는 AE를 나타내었으며; 2개의 AE는 연구로부터 제외까지 야기하였다. SAE의 분포는 처리군 중에서 유사하였고; 달바반신 연구군에서는 연구 약물에 관련된 것으로 간주되는 SAE가 없었고; 반코마이신 연구군에서는 하나의 SAE가 연구 약물과 관련되는 것으로 간주되었다. 본 연구에서는 5 명의 사망이 있었다. 사망을 야기하는 모든 AE는 연구 약물처리에 무관하였다. 어떤 연구군에서도 임상적으로 의미있는 실험실 이상은 없었다. 실험실 등급은 거의 AE로 보고되지 않았다. 어느 것도 SAE가 없었거나 연구 약물의 중단을 야기하지 않았다.

증가된 이완기 혈압은 모든 처리군 전체에서 가장 보편적인 임상적으로 중요한 이상 변화였다. 고혈압은 3/74 명의 환자(4.1%, 달바반신 처리군에서 2 명의 환자, 반코마이신 처리군에서 1 명의 환자)에서 보고되었고; 1 명의 환자(달바반신 투여)만이 연구 약물투여와 관련된 것으로 간주되는 AE로서 증가된 혈압을 나타내었다. 달바반신은 심박동수, 방실 전도 또는 심실내 전도에 어떤 영향도 나타내지 않았다. QTc 값에 대한 평균 효과 차이는 반코마이신 군과 비교하여 달바마이신 군의 경우 7 msec 더 컸다. 약물 치료과정 동안에 노숙자의 맥박수에 대한 치료 사이에 중요한 차이는 관찰되지 않았다.

그러므로, 초기 1000 ㎎ 의 정맥내 용량에 이어 1주일 후 500 ㎎의 2차 정맥내 용량으로 제공된 달바반신은 잘 허용되는 것으로 보이며, 반코마이신에 대한 우수한 반응 등급과 함께 그램-양성 병원균에 의해 야기된 CR-BSI의 치료에 매우 효과적인 것으로 보인다.

실시예 3. 건강한 대상에서 달바반신의 약물동력학 및 신장 배출

본 연구의 주 목적은 달바반신의 약물동력학을 특성화하고 치료 용량의 약물을 투여받는 건강한 대상에서 신장 배출 정도를 계산하는 것이었다.

연구 약물 치료

18세 내지 65세 연령의 건강한 남성 또는 여성 대상자들에게 1000 ㎎의 단일 용량의 달바반신을 정맥내로 30분에 걸쳐 주입하여 투여하였다.

6 명의 대상, 1 명의 여성 및 5 명의 남성 대상이 참여하여 연구 약물치료를 받고 연구의 모든 면을 완료하였다. 3 명의 대상은 백인이었고 3 명의 대상은 아프리카계 미국인이었다. 평균 연령은 29.8 세(22 내지 63 세의 범위)이었다. 평균 신장은 68.6 인치(63 내지 75 인치의 범위)이고 평균 체중은 179.6 lb(140 내지 244 lb의 범위)이었다.

약물동력학

연구일 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21, 28 및 42일에 혈액과 뇨(24시간 수거물)를 수거하였다. 혈액 샘플은 헤파린화 튜브에 취하여 원심분리하였다. 혈장을 분리하고 분석때까지 -20℃에서 냉동 저장하였다. 혈장 및 뇨 샘플을 인증된 LC/MS/MS 방법을 이용하여 달바반신에 대해 분석하였다. 분석 정량의 하한치는 뇨 및 혈장에 대해 500 ng/㎖이었다.

달바반신의 약물동력학적 파라미터는 윈논린(WinNonlin, 등록상표) 소프트웨어(파사이트 코포레이션(Pharsight Corp.))를 이용하여 비-구획 방법으로 평가하였다. 최고 농도(C_max) 값은 관찰 데이터로부터 직접 수득하였다. 혈장 농도-시간 곡선하 면적(AUC)은 선형 사다리꼴 규칙을 이용하여 계산하였다. 제거율(CL)은 용량/AUC로 계산하였다. 제거 반감기(t_{1 /2})는 로그 농도 대 시간 곡선의 로그-직선 부분의 선형 회귀분석에 의해 평가하였다. 분포 용적(Vz)의 평가는 회귀분석 파라미터를 이용하여 계산한 한편, 정상 상태에서 분포 용적(Vss)은 용량을 곱하고 AUC로 나눈 1차 모멘트 곡선(AUMC)하 면적으로부터 계산하였다. 뇨에서 배출된 달바반신의 축적량은 뇨 배출률(AURC)의 피적분함수로서 측정되었다. CL_R 또는 신장 제거율은 비:CL_R = AURC/AUC로서 계산하였다.

달바반신의 혈장 농도 대 시간은 도 5에서 모든 대상에 대해 나타내었다. 약물동력학 파라미터는 표 23에 나타내었다. 농도는 모든 대상을 교차하여 유사하였다. 최고 혈장 농도는 약 300 ㎎/ℓ이었고 주입 종료 직후에 달성되었다. 달바반신은 10 ℓ보다 큰 겉보기 부피 용적을 나타내며 세포외액 중에 적절히 분포되는 것으로 추정된다.

달바반신은 9 내지 12일의 t_{1 /2} 하에 서서히 제거되었다. 전체 약물 제거율은 0.0431 ± 0.0074 ℓ/h이었다. 뇨중에 변화되지 않고 배출된 약물의 평가된 분획은 투여된 용량의 42%이었고, 신장 제거율은 0.018 ℓ/h로 평가되었다. 대상들 전체에서 관찰된 변이성은 모든 약물동력학 파라미터 전체에서 22% 미만의 변이 계수하에 낮았다.

안전성 평가

이상 반응을 기록하고 중증도 및 연구 약물과의 관계에 대해 평가하였다. 실험실 데이터(화학 전문단, 미분에 의한 CBC, 소변검사)를 수집하고 베이스라인으로부터의 변화 및 범위외 값에 대해 평가하였다. ECG, 신체 검사 및 바이탈 사인을 취하고 베이스라인으로부터의 변화를 평가하였다.

달바반신은 본 연구에서 잘 허용되었다. 본 연구과정 동안에 대상자의 사망 또는 심한 이상 반응은 보고되지 않았고, AE로 인해 연구에서 일찍 제외된 대상도 없었다.

모든 자원자가 하나 이상의 AE를 보고하였으나, 모두 가벼운 정도였다. 3 명의 자원자가 연구 약물치료와 관련될 가능성이 있는 AE를 보고하였다: 한 대상자에서 증가된 ALT(46 IU/ℓ의 값, 정상적으로 40 IU/ℓ의 상한치)가 나타나고; 한 대상자에서 호산구증가증(0.5 x 10³/㎕의 값, 정상적으로 0.4 x 10³/㎕의 상한치), 증가된 LDH(303 IU/ℓ의 값, 정상적으로 90 IU/ℓ의 상한치), 증가된 ALT(54 IU/ℓ의 값, 정상적으로 40 IU/ℓ의 상한치), 증가된 AST(42 IU/ℓ의 값, 정상적으로 40 IU/ℓ의 상한치)가 모두 나타나고; 한 대상에서 이명이 나타났다.

후-베이스라인 혈액학, 화학, 바이탈 사인 및 ECG 결과에 대한 경향은 보이지 않았다.

고찰

1000 ㎎의 정맥내 단일 용량의 달바반신으로 잘 허용되었다. 1000 ㎎의 단일 정맥내 주입 후, 약 45 ㎎/ℓ보다 높은 달바반신의 혈장 농도가 7일 이상 동안 유지되었다. 이것은 살균성인 것으로 알려진 농도(4 내지 32 ㎎/ℓ)보다 높다. 이것은 주 1회 요법으로 달바반신의 사용을 지지한다. 뇨 제거 프로필은, 약 40%가 뇨에서 배출되어, 신장 배출이 중요한 제거 경로임을 시사한다. 이러한 발견은 동물에서의 관찰과 일치한다. 신장이 유일한 제거 경로가 아니므로, 달바반신에 대한 투여량 조절은 신장이 손상된 환자에서 필수적이 아닐 수도 있다.

실시예 4. 신장 장애를 갖는 달바반신 대상자의 약물동력학

본 연구는 경증, 중등도 및 중증 신장 장애를 갖는 대상에게 투여시 정맥내 달바반신의 안전성 및 약물동력학을 검사하기 위해 수행된 공개 임상 연구였다.

연구 약물 치료

18 내지 80 세 사이의 남성 및 여성 대상자들이 참여하기에 적당하였다. 대상자들은 그들의 성별, 신장 및 신체에 대해 이상 체중의 -10 내지 +50% 이내에 들어야 했다.

약물동력학

투약전에 및 주입 종료 후 적어도 2주일내내 일련의 혈액 샘플을 수거하고, 인증된 LC-MS/MS 방법을 이용하여 달바반신에 대해 분석하였다.

달바반신 약물동력학 파라미터는 비-구획 방법으로 평가하였다. 최고 농도(C_max)는 관찰 데이터로부터 직접 구하였다. 혈장 농도-시간 곡선하 면적(AUC)은 선형 사다리꼴 규칙을 이용하여 계산하였다.

건강한 신장 장애를 갖는 대상 및 가장 심한 신장 장애(중증 RI)를 갖는 대상의 약물동력학 파라미터를 표 24에 나타내었다.

고찰

중증 신장 장애를 갖는 환자의 경우, 단일 용량으로 500 또는 1000 ㎎의 달바반신을 대상에게 투여하였다. 표 24에서 명백하듯이, 14일 후에, 1000 ㎎의 단일 용량을 투여받은 중증 신장 장애 환자는 약 22000의 AUC14(㎎·h/ℓ)를 나타내었는데, 이것은 예기치 않게 1000 ㎎ + 500 ㎎의 두 개 용량 요법의 정상 환자(23000의 AUC14(㎎·h/ℓ))와 매우 유사하였다.

가벼운 신장 기능부전 환자의 경우, 달바반신의 투여량 조절이 필요하지 않았다. 달바반신 농도 및 약물동력학 파라미터는 가벼운 신장 장애를 갖는 대상 및 정상적인 신장 기능을 갖는 대상에서 유사하였다. 또한, 달바반신은 정상적 또는 약간 손상된 신장 기능을 갖는 대상에서 잘 허용되었다. 본원에 그대로 참고로 인용되는 [Dowell, J. et al., "Dalbavancin Dosage Adjustments Not Required for Patients with Mild Renal Impairment" presented at the 2003 ECCMID Meeting, Glasgow(Clinical Microbiology and Infection, Volume 9(Supplement 1), page 291, 2003); and Stogniew, M. et al., "Pharmacokinetic Attributes of Dalbavancin: Well Distributed and Completely Eliminated with Dual Routes of Elimination" Presented at the 2003 ECCMID Meeting, Glasgow(Clinical Microbiology and Infection, Volume 9(Supplement 1), page 291-292, 2003)]을 참조하시오.

실시예 5. 신장 장애 및 말기 신 질환

달바반신 제거의 주 경로는 본래그대로 및 OH-달바반신 둘 다 뇨로 배출되는 것이며, 약물은 다양한 정도의 신장 장애를 갖는 환자에게 사용되기 쉽다. 이로 인해, 다양한 정도의 신장 장애를 갖는 대상에서 달바반신의 안전성 및 약물동력학을 임상 연구(Clinical Studies VER001-3, VER001-11 및 VER001-13)에서 검사하였다.

임상 연구 VER001-3은, 시험한 투여량(70 ㎎)이 임상 연구를 위해 제안된 더 높은 주 1회 투여량에 비해 너무 낮았는지를 측정했을 때 일찍 종료되었다(5 명의 대상이 참여; 3 명의 대상이 달바반신 투여받음). 임상 연구 VER001-13은 경증 및 중등도의 신장 장애를 갖는 대상을 시험하고, 임상 연구 VER001-11은 중증 신장 장애를 갖는 대상 및 말기 신 질환(ESRD)을 갖는 대상을 시험하였다. 부합되는 대조군 대상을 모든 연구에 참여시켰다. 신장 장애는 측정된 크레아티닌 제거율로 정의되었다: 경증 = 51 내지 79 ㎖/분, 중등도 = 31 내지 50 ㎖/분, 중증 = 30 ㎖/분 이하. ESRD를 갖는 대상은 연구 과정 내내 투석에 의존하였다(주 3회). 단일 용량의 1000 ㎎ 정맥내 달바반신을 경증 및 중등도 신장 장애를 갖는 대상에서 시험하고, 500 ㎎ 용량의 달바반신을 ESRD를 갖는 대상에서 연구하였고, 500 ㎎ 및 1000 ㎎의 단일 용량을 중증 신장 장애를 갖는 대상에서 연구하였다.

달바반신은 상기 신장 장애 연구 각각에서 잘 허용되었다. 이상 반응을 보고하는 대상의 유사한 비율이 각각의 연구 군에서 관찰되었다. 보고된 이상 반응의 대부분은 중증도에서 경증 또는 중등도였고 연구 약물처리와 무관하였다. 달바반신을 투여받는 동안 연구 대상 누구에게서도 임상적으로 의미있는 실험상의 혼란은 없었다.

임상 연구 VER001-13에서, 정상적인 신장 기능을 갖는 대상 및 경증 신장 장애를 갖는 대상에게 투여된 달바반신은 60일의 샘플링 간격동안 필적할만한 농도-시간 프로필을 제공하였다. 상대적 치료 기간, 투약 후 7일 동안, 농도-시간 프로필은 정상적 신장 기능을 갖는 대상과 경증 또는 중등도 신장 장애를 갖는 대상 사이에서 필적할만하였다. 농도가 비교적 낮고 40 ㎎/ℓ 미만이었을 때, 14일이 넘은 중등도 신장 장애를 갖는 대상에서 농도의 약간의 증가가 관찰되었다. 1000 ㎎ 달바반신 투여 후 상기 대상들에서 달바반신 혈장 농도-시간 프로필은 도 18에 나타내었다. 달바반신 약물동력학 파라미터는 표 25에 나타내었다. 경증 또는 중등도 신장 장애(CL_CR>30 ㎖/분)를 갖는 환자에서 투여량 조절은 필요하지 않다. 상기 연구에서의 발견은 개체군 약물동력학 분석에서 연구된 환자와 일치한다(CL_CR>50 ㎖/분).

임상 연구 VER001-11에서 달바반신을 정상 신장 기능을 갖는 대상, 중증 신장 장애를 갖는 대상 및 ESRD 대상에게 투여하였다. 이 연구에서 관찰된 달바반신 농도-시간 프로필은 도 19에 나타내었다. 농도는 처음 12시간내내 정상 신장 기능을 갖는 대상 및 중증 신장 장애 또는 ESRD를 갖는 대상중에서 유사하였으나, 중증 신장 장애를 갖는 대상에서 소폭의 점진적으로 증가하는 차이가 관찰되었다. 농도는 투약 후 첫 1주일내내 40% 이하로 증가하였으며, 차이는 나머지 프로필 내내 계속 증가하였다. ESRD를 갖는 대상을 첫 투석 기간 전 또는 후에 달바반신을 투여받은 대상들로 나누었다. 이들 두 소그룹사이에서 농도-프로필에는 차이가 주목되지 않았다. 그러나, ESRD를 갖는 대상에서의 농도는 정상 신장 기능을 갖는 대상과 유사하여, 정기적 일정의 투석(3회/주)으로 인한 신 기능부전에의 보상을 나타내었다. 상기 수준의 약물 투석에 상응하는 투석액중의 수준은 측정하기에 너무 낮았다.

중증 신장 장애를 갖는 대상 및 ESRD를 갖는 대상에서의 달바반신 약물동력학 파라미터(VER001-11)는 표 25에서 경증 또는 중등도 신장 장애를 갖는 대상(VER001-13)에 필적하였다. 500 및 1000 ㎎의 단일 용량을 중증 신장 장애를 갖는 대상에서 연구하였으며, 농도 및 노출율은 용량 비례성과 일치하였다(도 20, 표 25). 상대적 처리 기간내의 개개 약물 노출율(AUC_0-7일)은 일반적으로 개개 CL_CR 전체에서 일치하였으며, 중증 신장 장애를 갖는 대상에서 노출율의 단지 약간의 증가가 관찰되었다(도 21). 전체 농도-시간 프로필을 교차하여 시험했을 때 노출율의 차이가 훨씬 더 컸다. 무한대로 외삽된 혈장 농도-시간 곡선하 면적(AUC_{0 -무한대})은 중증 신장 장애를 갖는 대상에서 97% 증가하였다. ESRD를 갖는 대상은 AUC_{0 -무한대}에서 45%의 증가만을 나타내어, 정기적 일정의 투석에 의한 신 기능부전의 어느 정도의 보상을 반영하였다.

약물동력학 파라미터 및 데이터를 기준으로 한 시뮬레이션을 근거로, 중증 신장 장애가 있는 환자에게 투여량 조절이 권장된다. 투여량 조절 정도는 약물의 전체 노출율은 최소화하면서, 2개 용량 상대 처리 기간(14일) 동안 농도 및 노출율을 부합시키는 정도이다. 총 9가지 시뮬레이션 투여 방법을 중증 신장 장애를 갖는 대상에서 시험하였다. 이들 시뮬레이션의 결과는 도 22에 요약하였는데, 상대 처리 기간동안의 노출율 대 전체 노출율을 나타내었다. 750 ㎎의 달바반신 용량에 이어 1주일 후 250 ㎎의 달바반신이 30 ㎖/분 미만의 CL_CR을 나타내는 환자에 대해 권장되는 조절 투여량이다. 상기 투여 방법은 20 ㎎/ℓ 이상의 농도를 유지하며, 정상 신장 기능을 갖는 대상에 대해 관찰된 처리 노출율에 부합하며, 전체 노출율을 최소화한다. 도 23은 (i) 1000 ㎎(제 1일) + 500 ㎎(제 8일)을 투여받은 정상 신장 기능을 갖는 대상, (ii) 1000 ㎎(제 1일) + 500 ㎎(제 8일)을 투여받은 중증 신장 장애를 갖는 대상, 및 (iii) 750 ㎎(제 1일) + 250 ㎎(제 8일)의 권장된 조종 투여량을 투여받은 중증 신장 장애를 갖는 대상에 대해 시뮬레이션한 달바반신 농도-시간 프로필을 나타낸 것이다. 정기적인 투석 치료(1주일에 2 내지 3 회)를 받은 환자는 투석에 의해 어느 정도 보상된 제거율을 가졌으며 투여량 조절이 필요하지 않았다.

실시예 6. 간 장애

달바반신은 신장 및 비-신장 경로 둘 다에 의해 제거되며, 달바반신은 다양한 정도의 간 장애가 있는 환자에서 사용하기 쉽다. 다양한 정도의 간 장애를 갖는 대상에서 달바반신의 안전성 및 약물동력학은 임상 연구 VER001-12에서 시험하였다. 연구에는 경증, 중등도 또는 중증 간 장애를 갖는 다른 건강한 대상들(각각, 차일드-푸(Child-Pugh) 등급 5 내지 6, 7 내지 9 및 10 내지 15)을 참여시켰으며 정상 간 기능을 갖는 대조군 대상에 필적하였다. 대상들에게 제 1일에 단일 1000 ㎎ 용량의 정맥내 달바반신 투여에 이어, 제 8일에 500 ㎎ 정맥내 용량의 달바반신을 제공하였다.

달바반신의 농도 및 노출율은 간 장애 정도의 증가에 따라 증가하지 않았다(도 24). 정상 간기능을 갖는 대상 및 경증 간 장애를 갖는 대상에게 달바반신 투여는 60일의 샘플링 간격동안 필적할 만한 농도-시간 프로필을 제공하였다. 중등도 간 장애를 갖는 대상 및 중증 간 장애를 갖는 대상에게 달바반신 투여한 결과 정상 간기능을 갖는 대상에 비해 관찰된 장애가 약간 감소되었다. 약물은 모든 군에 걸쳐 잘 허용되었다.

정상 간기능을 갖는 대상 및 경증 간 장애를 갖는 대상에 대한 달바반신에 노출율은 필적할 정도였다(표 26). 달바반신 노출율의 감소 및 CL의 증가에 대한 경향은 중등도 간 장애를 갖는 대상 및 중증 간 장애를 갖는 대상에서 뚜렷하였다. 전체적으로, 약물동력학 파라미터의 대상간 가변성은 낮았으며 일반적으로 30% 미만이었고, 달바반신 약물동력학 파라미터는 보다 높거나 낮은 간 장애군 사이에 통계적으로 차이가 있었지만, 노출 파라미터의 범위는 상당히 겹쳤다(도 25).

달바반신 약물동력한 파라미터의 변화는 약물의 분포 용적에 의해 영향받는 것으로 보였다. 분포 용적은 CL 및 AUC와 동일한 비례 방식 또는 반비례 방식으로 증가하였다. 약물 말기 제거 반감기는 군 전체에서 사실상 변화가 없었다. 훨씬 더 많은 복수 및 부종을 갖는 중등도 및 중증 간 장애를 갖는 대상은 보다 큰 약물 분포 용적 및 이어서 약간 더 낮은 약물 노출율을 갖는다.

연구군들을 교차하여 프로필 전체에 걸쳐 농도에 겹침이 있었는데, 이때 평균 농도는 의도한 14일의 치료 기간 내내 모든 군에서 20 ㎎/ℓ 이상으로 유지되었다. 연구군 전체에서 약물 노출율에도 또한 겹침이 있었다(도 25). 평균 노출율의 감소하에서조차, 중증 간 장애를 갖는 대상은 여전히 치료에 필요한 파라미터를 초과한 상대 처리 기간(14일) 동안 약물 노출율을 가졌다. 어떤 중증도의 간 장애를 갖는 환자에서도 달바반신의 투여량 조절은 필요하지 않다.

실시예 7. 등온 적정 미세열량측정법을 이용한 달바반신의 단백질 결합

단백질에 대한 달바반신의 결합은 마이크로칼(Microcal) VP-ITC 기기를 사용하여 25 매치 37℃에서 20mM 포스페이트, 150mM NaCl, pH 7.4에서 등온 적정 미세열량측정법(ITC)으로 측정하였다. 전형적인 실험으로, 25 x 10 ㎕의 단백질(약 150μM)을 달바반신 용액(약 5μM)을 함유하는 열량계 셀에 주입하였다. 실제 단백질 및 달바반신 농도는 280 ㎚에서의 흡광도를 측정함으로써 측정하였다. 대조 실험은 단백질을 완충액(달바반신의 부재하에)에 주입하여 동일한 조건하에서 단백질의 희석열을 해결함을 포함하였다. 비교를 위해, 일부 필수적인 변형하에 유사한 실험을 테이코플라닌을 사용하여 수행하였다.

달바반신을 이용한 실험을 하기의 단백질 각각을 가지고 수행하였다: 인간 알부민; 개 알부민; 래트 알부민; 소 알부민 및 인간 α-당단백질. 테이코플라닌을 인간 알부민 및 α-당단백질을 가지고 연구하였다. 2가지 상이한 온도에서 결합 친화도의 비교를 표 27에 나타내었다.

희석열에 대한 보정 후에, 적분된 열 효과를 표준 마이크로칼 오리진(ORIGIN) 소프트웨어 패키지를 사용한 단순 단일-부위 결합 모델을 이용하여 비-선형 회귀법으로 분석하였다. 각각의 주입에 대한 원래의 데이터(μcal/초)를 적분하여 첨가당 전체 열 효과를 제공한 다음 주입물의 양으로 나누어 주입물의 kcal/몰을 수득하였다. 이로써 결합 정도가 유리된(또는 흡수된) 전체 열에 비례하는 결합 곡선의 미분이 얻어졌다. 이어서, 이것을 다양한 표준 결합 모델의 관점에서 비-선형 회귀법으로 분석하였다. 가장 단순한 모델은 단순한 비-경쟁 결합 평형을 추정하며, 다음 3가지 파라미터를 제공한다:

K_a(=1/K_diss)는 결합이다(해리 상수)

ΔH는 결합 엔탈피이다(결합에 관련된 신호 크기)

N은 결합 부위수(결합 모델이 정확함을 가정)

비-경쟁 결합을 가정할 때, N은 샘플에서 모든 이용가능한 결합 부위를 포화시키기 위해 필요한 주입물의 (상대) 몰수이다. 달바반신 실험의 경우, 달바반신은 "샘플"이고 단백질(HSA 등)은 "주입물"이다. 상기 예비 결과는 결합이 상대적으로 약하며 달바반신의 불량한 용해도로 인해 결합 화학량론(N)을 명확하게 측정하는 것이 어려움을 시사한다. 그러나, 도 6에서 보듯이, 모든 경우, 데이터는 N<1(즉, 1 미만 대 1의 단백질 대 달바반신) 하에서 잘 맞는다. 결론적으로, N=0.5의 값은 예상되는 모든 달바반신에 결합하는 단백질의 몰수의 절반만을 취한다는 것을 의미한다. 즉, 각각의 단백질은 명백하게 2개의 달바반신 분자에 결합한다. 달바반신은 단백질과 1:1로 결합하는 이량체를 형성하는 것이 가능하다. 결합 화학량론 모델링의 결과는 2개의 달바반신 분자가, 1:1 결합을 나타내는 테이코플라닌과는 달리, 1 분자의 단백질에 결합함을 시사한다.

표 28은 인간 혈청 알부민(6 x 10^-4 M) 및 α-당단백질(1.5 x 10^-5 M)의 생리학적 농도를 추정하는, 1 내지 500μM 범위의 항생물질 농도에 결합하는 퍼센트를 계산한 것을 나타낸 것이다. 이것을 임상적 상황에 연관시키기 위해, 인간에서 달바반신의 최고 농도는 약 300 ㎎/ℓ 또는 165μM이다.

상기 실험에서, 인간 혈청 알부민에 대한 달바반신의 결합은 98%를 초과한다. 결합한 분획은 선택된 달바반신 농도 범위, 즉, 1 내지 500 μM 전체에서 실제로 일정하다. 상기 범위는 인간에서의 치료 농도를 포함한다. α-당단백질에 대한 달바반신의 결합은 테이코플라닌보다 훨씬 더 크다. 달바반신은 시험한 모든 종으로부터의 단백질 전체에서 유사한 K_a 값과 함께, 상이한 기원의 혈장 단백질에 대해 높은 용량 및 낮은 친화도를 나타낸다. 이러한 결과는 달바반신의 독특한 약물동력학 특성의 설명을 돕는다. 2:1 달바반신:단백질 착체의 결합 및 형성은 또한 연장된 반감기, 및 세포외액 부피에 근사한 겉보기 분포 용적을 설명한다. 낮은 친화도는 1%에 근접한 유리 분획을 갖는 화합물에 예상되는 것을 매우 초과하는 관찰된 생체내 활성을 설명해준다. 혈장 단백질에 대한 높은 용량은 생리학적 pH에서 화합물의 불량한 용해도에도 불구하고 달성된 비교적 높은 혈장 농도의 설명을 돕는다.

실시예 8. 래트에서 달바반신의 약물동력학적 특성 및 조직 분포

20 ㎎/㎏ [³H]-달바반신을 단일 용량으로 정맥내 주입 투여한 래트에서 두가지 연구를 수행하였다. 배설물 및 40 개 이상의 상이한 조직들을 투여 후 70일동안 수거하고, 약물-유도된 방사능의 조직 분포 및 약물동력학을 측정하였다.

HPLC-정제된 [³H]-달바반신을 이들 연구에 사용하였다. 삼중수소 교환을 통해 방사성표지된 약물을 생성하고 HPLC로 정제하였다.

래트 질량 균형 연구

질량 균형 연구는 수컷 래트에서 달바반신의 정맥내(IV) 단일 주입 후 달바반신의 배출 패턴을 측정하기 위해 수행하였다.

15 마리의 수컷 스프래그-돌리(Sprague-Dawley) 래트에게 단일 용량의 ³H-달바반신(20 ㎎/㎏, 100 μCi/래트)을 정맥내 투여하였다. 용량 투여 후, 투약 후 14, 36 및 70일까지 24시간 간격으로 뇨 및 분변을 수거하였다(3 마리 래트/최종 수거시). 물 및 메탄올 우리 세척물도 또한 수거하였다. 사체를 수거 기간 말기에 분석하였다. 모든 샘플은 액체 섬광 계수(LSC)에 의해 총 방사능 함량에 대해 분석하였다.

래트에서 ³H-달바반신의 정맥내 투여 후, 약물-유도된 방사능은 뇨(배출된 방사능의 약 2/3) 및 분변(배출된 방사능의 약 1/3) 모두에서 제거되었다. 투여된 방사능의 대략 절반이 첫 주이내에 뇨와 분변에서 제거되었으며, 이것은 약 1주일의 혈장 t_{1 /2}와 일치한다. 투약 후 70일에, 용량의 4.5%만이 사체에 잔류하였다. 무시할만한 방사능이 우리 세척물에서 회수되었다. 실제로 투여된 방사능의 전부가 연구과정 동안에 확인되었다(뇨, 분변, 사체, 우리 세척물 및 삼중수소 교환).

래트 정량적 조직 분포( QTD ) 연구

수컷 래트에게 달바반신을 정맥내 단일용량 주입한 후 달바반신의 조직 분포를 평가하기 위해 정량적 조직 분포 연구를 수행하였다.

41 마리의 수컷 스프래그-돌리 래트에게 단일 용량의 ³H-달바반신(20 ㎎/㎏, 50 μCi/래트)을 정맥내 주입하였다. 혈액, 혈장 및 조직을 수거하기 위해(사체 포함) 투여 후 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 336, 840, 1176 및 1680시간에 래트(시점 당 3 마리)를 안락사시켰다. 모든 샘플은 LSC로 분석하였다.

신장, 간, 비장, 혈액, 혈장, 폐 및 피부를 포함하여 40 개 이상의 조직에 대해 농도-시간 프로필을 측정하였다. 피부를 포함한 조직에서 약물-유도된 방사능의 농도 및 t_{1 /2} 값은 혈장에서 관찰된 값에 필적하였다. 달바반신은 주입 후 12시간내에 약물-유도된 방사능의 정량가능한 농도를 갖는 모든 조직에 신속하고 광범위하게 분포되는 것으로 밝혀졌다. 대부분의 조직은 투약 후 24시간이내에 최대 농도(C_max)에 이르렀다. 5일 후에 회수된 방사능은 어떤 단일 조직에서도 용량의 5% 미만이었다. 투약 후 70일까지, 사체만이 투여된 방사능의 1% 넘게 보유하였다(2.34%). 따라서, 달바반신은 어떤 단일 조직, 장기 또는 혈액 세포 성분에 축적되지 않았다. CNS에서 방사능의 농도는 낮았지만, 본 건강한 동물 모델에서는 검출가능하였다. 달바반신은 혈장에서만큼 높거나 또는 그보다 더 높은 약물-유도된 방사능 농도로 피부를 침투하는 것으로 밝혀졌다. 약물-유도된 방사능의 혈액 대 혈장 비는 시간 경과에 따라 비교적 일정하게 유지되었으며 1 미만이었다.

QTD 연구의 일부분으로, 담즙 샘플을 담관 삽관된 래트(4 마리 동물)로부터 투약 후 384시간(16일) 동안 수거하였다. 투약 후 384시간에 걸쳐 용량의 거의 11%가 담즙에서 회수되었다. 이것은 약물-유도된 방사능의 대부분이 분변에서 발견됨을 나타낸다.

실시예 9. 달바반신의 약력학적 활성

항미생물 치료의 목표는 적절한 시간 동안 감염 부위에 활성 농도를 제공하여 침범 병원균을 박멸하는 것이다. 시험관내에서 항미생물 활성을 평가하는 주된 방법은 최소 억제 및 살균 농도(MIC 및 MBC)를 측정하는 것이다. 그러나, 이들 파라미터는 단지 처방된 배양 기간동안 최종적인 영향을 측정하는 것 뿐이며, 항미생물 활성의 시간에 따른 경과는 특성화하지는 않는다. MBC는 살균 활성의 등급 및 정도가 약물 농도를 증가시킴으로써 향상될 수 있는 지는 측정하지 못한다. 또한, MIC 측정은 약물 제거 후 지속되는 세균에 대한 억제 효과가 있는지 여부는 측정하지 못한다.

증가하는 수의 연구들이 살균 활성의 등급, 그의 농도 또는 노출 시간에 대한 의존성, 및 후항생제 효과의 존재 또는 부재가 항미생물 활성의 시간에 따른 경과를 명백히 설명해주며 최적 투여 방법을 결정하는데 중요한 약력학적 파라미터임을 시사한다. 예를 들면, 베타-락탐 항생물질에 의한 세균 사멸은 농도 의존성을 거의 나타내지 않으며, 사멸 정도는 주로 노출 기간에 따른다. 또한, 베타-락탐은 그램-음성 바실러스에 의해 후항생제 효과(PAE)를 짧게 야기하거나 또는 전혀 야기하지 않는다. 따라서, 약물 농도를 충분한 시간 동안 MIC 이상으로 유지하는 투여 방법이 가장 우수한 효능을 나타낼 것임을 예상할 것이다. 이것은 여러 동물 모델에서 확인되었다. 한편으로, 플루오로퀴놀론은 농도-의존성 사멸을 나타내며, 연장된 생체내 후항생제 효과를 제공한다. 투여 횟수보다는 오히려 약물의 양이 이들 약물에 있어 효능의 중요한 결정요소임을 예상할 것이다. 이도 또한 여러 동물 모델에서 확인되었다. 보다 중요하게는, 베타-락탐 및 프롤로퀴놀론 둘 다에 대한 효능에 필요한 약물동력학/약력학적 파라미터의 크기는 동물 감염 모델 및 인간 감염에서 유사하였다.

달바반신의 생체내 약력학적 특성을 규정하기 위해 하기의 연구를 설계하였다. 호중구감소증 마우스에서 실험적 대퇴부 감염 모델에서의 달바반신의 생체내 효능에 대한 투여 방법의 영향을 측정하였다. (1) 어느 약물동력학적 파라미터(최고 혈청 농도, 농도-대-시간 곡선하 면적(AUC), 혈청 농도가 MIC를 초과하는 시간 기간)가 달바반신의 효능을 가장 잘 예상하는지, 및 (2) 효능에 필요한 PK/PD 파라미터의 크기가 페니실린-내성 뉴모코커스 및 메티실린-내성 스태필로코커스 오레우스를 포함하여 통상적인 그램-양성 세균중에서 유사한지 여부를 조사하기 위해 연구를 또한 수행하였다. 마지막으로, 대퇴부 및 폐렴 감염 둘 다에서 스트렙토코커스 뉴모니에 및 스태필로코커스 오레우스 둘 다에 대한 달바반신 활성에 대한 감염 부위의 영향을 측정하였다.

연구 유기체 및 달바반신에 대한 MIC

연구 유기체 및 그의 달바반신에 대한 MIC를 표 29에 나열하였다. MIC는 표준 NCCLS 마이크로희석 기술에 의해 MHB에서 측정하였다. MHB는 스트렙토코커스 뉴모니에에 의한, MIC 측정을 위한 3% 용균된 말 혈액으로 보충되었다. 모든 MIC는 적어도 2중으로 수행하였다.

5 개의 뉴모코커스와 6 개의 스태필로코커스 유기체를 사용하였다. 뉴모코커스에 대한 달바반신 MIC는 0.004 내지 0.03 ㎎/ℓ의 범위였다. 스태필로코커스 오레우스 분리균에 대한 MIC의 범위는 뉴모코커스에 대한 상기 범위보다 더 좁고 더 높았으며, 0.06 내지 0.12 ㎎/ℓ 범위이었다.

약물동력학

대퇴부-감염 호중구감소 스위스 ICR 마우스에서 달바반신의 혈장 약물동력학을 도 44에 나타내었다. 본 연구 및 다른 모든 연구에서 호중구감소증은 사이클로포스포아마이드를 연구 4일전에 150 ㎎/㎏, 연구 1일전에 100 ㎎/㎏ 및 감염 개시 후 연구 종료까지 48시간마다 100 ㎎/㎏으로 주입함으로써 유발하였다. 호중구 수는 연구 기간동안 100/㎜³ 미만으로 유지되었다. 2.5, 5, 10, 20, 40 및 80 ㎎/㎏의 용량을 연구하였다. 약물은 0.2 ㎖의 부피를 복강내 주입하여 투여하였다. 투여 후 0.5, 1, 2, 4, 6, 24, 48, 72 및 96시간 후에 3 마리 마우스 군으로부터 안와후방 흡인에 의해 헤파린화 모세관 튜브내로 혈액을 제거하였다. 혈장을 분리하고, 시험 유기체로서 바실러스 서브틸리스를 사용하여 미생물학적 분석법을 이용해 달바반신의 혈장 농도를 측정하였다. 최고 농도는 4 내지 6시간까지 관찰되었다. 달바반신의 반감기는 선형 최소제곱 회귀법으로 측정하였다. AUC는 평균 농도로부터 사다리꼴 규칙에 의해 계산하였다. AUC는 24, 36, 48, 72, 96시간에 평가하고 무한대로 외삽하였다. 24시간 AUC는 6으로 나눈 6일의 AUC로 계산하였다. 달바반신은 선형 약물동력학을 나타내었다. 반감기는 연장되고 7.6 내지 13.1시간으로 변하였다.

단백질 결합

배양액, 감염된 마우스 혈청, 인간 혈청 및 알부민 중 스태필로코커스 오레우스의 두 균주에 대한 달바반신의 MIC를 비교함으로써 혈청 및 혈청 단백질에 대한 약물 결합의 영향을 조사하였다(표 30). 배양액 중 두 균주에 대한 MIC는 0.12 ㎎/ℓ이었다. 95% 마우스 혈청중의 MIC(산술값)는 32 ㎎/ℓ로 증가하였다. 마우스 혈청 한외여과액 중 MIC는 단지 0.5 ㎎/ℓ로 상승하여, MIC의 차이의 대부분은 단백질 결합에 기인하였음을 시사하였다. 인간 혈청 및 알부민을 이용한 유사한 연구도 단지 8 ㎎/ℓ으로의 증가를 나타내었다. 배양액 및 마우스 혈청 사이의 MIC 차이를 기준으로, 단백질 결합 정도는 99.6%인 것으로 평가되었다. 상기 결합 정도는 후속 약력학 분석에서 고려하였다. 인간 혈청에서의 결합 정도는 96%인 것으로 평가되었다.

감염 모델

다양한 연구 전체에 걸쳐 모든 유기체에 대해 뮤린 대퇴부-감염 모델을 사용하였다. 상기 잘-확립된 모델에서, 약 10⁶ cfu의 연구 유기체를 치료 개시 2시간전에 한쪽 또는 양쪽 대퇴부(0.1 ㎖로)에 주입하였다. 이어지는 연구에서 치료 개시때 대퇴부 중 유기체의 수는 10^7.15-7.59 cfu/대퇴부로 변하였다. 뮤린 폐-감염 모델은 스트렙토코커스 뉴모니에 또는 스태필로코커스 오레우스의 단일 분리균에만 이용하였다. 상기 모델에서, 마우스는 마취된 마우스의 콧구멍을 통해 50 ㎕의 비강내 접종에 의해 감염시켰다. 치료는 접종 2시간 후에 시작하였는데, 이때 마우스는 10^7.4-7.6 cfu/폐를 가졌다.

생체내 사멸 시간

시간 경과에 따라 스트렙토코커스 뉴모니에 및 스태필로코커스 오레우스 균주의 생체내 사멸에 대한 단일 용량의 달바반신의 영향을 도 45 및 46에 나타내었다. 각각의 점은 4개의 대퇴부의 평균을 나타낸다. 16-배 범위의 5개 용량 수준을 사용하였다. 스태필로코커스 오레우스에 대한 연구에 사용된 용량 수준은 5 내지 80 ㎎/㎏의 범위이었다. 스트렙토코커스 뉴모니에에 대한 연구에 사용된 용량 수준은 0.625 내지 10 ㎎/㎏의 범위이었다. 두 가지 종 모두에 대한 사멸 정도는 광범위하였다(연구된 최고 용량에 >2 로그). 그러나, 뉴모노코커스 분리균의 사멸 정도 및 비율은 스태필로코커스 균주보다 컸다. 2개의 최고 용량의 달바반신을 이용한 연구는 스태필로코커스 오레우스의 사멸을 야기하였다. 스트렙토코커스 뉴모니에에 대한 연구에 사용된 5개 용량 수준 중 3개는 감염된 마우스의 대퇴부에서 거의 4 로그의 유기체의 존재량을 감소시켰다.

투여 방법 연구

상기 연구들에서, 용량 및 투여 간격이 달라지는 다중 투여 방법을 144시간(6일) 동안 마우스 군에 0.2 ㎖의 부피로 복강내 투여하였다. 선택된 투여 간격은 12, 24, 36 및 72시간이었다. 5개의 상이한 용량(2배 증가)을 사용하였다. 스태필로코커스 오레우스에 대한 연구는 30 내지 480 ㎎/㎏/6일 범위의 전체 용량(㎎/㎏/6일)을 사용하였다. 도 47 및 48은 호중구감소 마우스의 대퇴부에서 스트렙토코커스 뉴모니에 및 스태필로코커스 오레우스의 균주에 대한 상이한 투여 간격에서 달바반신에 대한 용량-반응 곡선을 예시한다. 일반적으로, 용량 간격의 증가는 용량 반응 곡선이 약간 왼쪽으로 이동하여 드물게 거대 용량이 투여되는 방법보다 높은 효과를 말해준다.

용량-반응 곡선 각각은 또한 최대 효과 모델을 이용하여 수학적으로 규정하였다. 상기 방법은 비-선형 회귀법에 의해 최대 효과(Emax), Emax의 50%를 수득하는데 필요한 용량(P50), 및 용량-반응 관계의 기울기를 평가하기 위해 힐(Hill) 방정식을 이용한다. 상기 파라미터들로부터, 144시간의 치료 기간에 걸친 순 정균 효과를 제공하는데 필요한 용량, 및 유기체 존재량의 1 및 2 로그 감소를 야기하는데 필요한 용량을 계산할 수 있다. 약물 유기체 조합 각각 및 다양한 투여 방법에 대한 정적 용량 및 1 및 2 로그 사멸과 관련된 용량을 표 31에 나타내었다.

스트렙토코커스 뉴모니에에 대한 연구에서 투여 방법을 12시간에서 36시간으로 증가시키는 것은 3개의 미생물 종료점과 관련된 용량에 감지할만한 변화를 야기하지 않았다. 그러나, 72시간의 투여 간격하에서의 효과는 약물이 덜 필요하였다. 유사한 관계가 스태필로코커스 오레우스에 대한 연구에서도 관찰되었다. 스태필로코커스 오레우스에 대한 1 및 2 로그 사멸을 야기하는 유일한 투여 방법은 36 및 72시간 간격이었다.

효과와 상관되는 약력학적 파라미터

144시간의 치료 말기에 대퇴부에 세균 수를 (1) 최대농도/MIC 비, (1) AUC/MIC 비, 및 (3) 연구된 투여 방법 각각에 대해 혈청 수준이 MIC를 초과하는 투여 간격의 비율과 관련시킴으로써, 어떤 PK/PD 파라미터가 효과와 가장 잘 상관되었는지를 측정하였다. 특별히 연구하지 않은 용량에 대한 PK/PD 파라미터 값은 가장 최근에 연구된 용량의 값들로부터 외삽하였다. 대퇴부 당 로그 cfu 및 최대농도/MIC 비, 24시간 AUC/MIC 비 및 혈청 수준이 MIC를 초과한 시간 비율 사이의 관계는 스트렙토코커스 뉴모니에에 대한 것이 고 49에 및 스태필로코커스 오레우스에 대한 것이 도 50에 예시되어 있다. 각 점은 4개 대퇴부의 평균을 나타낸다. 두 유기체 모두에 대해 24시간 AUC/MIC 및 최대농도/MIC 비에서 강한 상관성이 관찰되었다. 그러나, 24시간 AUC/MIC 비의 데이터의 회귀법에 의해 가장 강한 상관성이 야기되었다. 상기 도면들에 예시된 데이터는 또한 용량 대신에 상이한 PK/PD 파라미터를 사용한 것을 제외하고 동일한 전술한 최대 용량-반응 모델로 분석하였다. R²는 효과와 각각의 PK/PD 파라미터 간의 관계에 대해 관찰된 측정 계수를 나타낸다. 측정 계수(또는 R²)는 각각의 PK/PD 파라미터에 기인할 수 있는 세균수의 변화 비율을 나타내며, AUC/MIC 및 Cmax/MIC 둘 다에 대해 높았다.

PK / PD 파라미터 크기 또는 표적

정적 효과에 필요한 AUC/MIC가 다중 병원균에 대해 유사한 지를 측정하기 위해, 치료 6일 후에 스트렙토코커스 뉴모니에의 5개 균주 및 스태필로코커스 오레우스의 6개 균주에 대한 달바반신의 24시간 및 72시간 투여 방법의 생체내 활성을 연구하였다. 이들 다양한 균주에 대한 달바반신의 용량-반응 곡선은 도 51 및 52에 나타내었다. 도 51 및 52에서, 용량은 6일의 연구 기간에 걸쳐 유리 약물 평균 24 h AUC/MIC 비로 나타낸다. 일반적으로, 용량-반응 곡선의 형태는 모둔 균주에 대해 유사하였다. 용량-반응 곡선의 위치는 유기체의 MIC와 관련되었다. 그러나, 뉴모노코커스 유기체에 대한 용량 반응 곡선은 약간 왼쪽으로 이동하였다. 상기 곡선 이동은 스태필로코커스보다 뉴모코커스에 대한 효과에 약물이 덜 필요함을 시사한다. 정적 용량, 1 로그 및 2 로그 사멸 및 관련된 유리 약물 24h AUC/MIC 및 Cmax/MIC를 표 32에 나타내었다. 세균 사멸 정도는 대부분의 균주에 대해 비교적 유사하였다. 모든 균주는 6일의 연구과정 동안에 4 log₁₀ 방울보다 많은 cfu를 나타내었다.

매 24시간 투여를 이용하는 달바반신 요법에 있어, 스트렙토코커스 뉴모니에 및 스태필로코커스 오레우스에 대한 정적 효과와 관련된 유리 약물 24h AUC/MIC 값은 각각 17.6 ± 6.9 및 265 ± 143이었다. 용량 반응 곡선은 경사졌으며, 1 및 2 로그 사멸과 관련된 24h AUC/MIC 값은 감지할 정도로 더 높지 않았다. 24h AUC/MIC를 기준으로, 뉴모노코커스에 대한 치료는 용량 반응 곡선에 의해 시사되듯이, 12 내지 23 배 미만의 약물을 필요로 하였다. 스태필로코커스 오레우스에 있어서, MBC는 MIC보다 2 내지 4배 더 높았다. 스태필로코커스 오레우스에 대해 AUC/MBC를 고려하는 경우, 그 값은 스트렙토코커스 뉴모니에에 대한 것보다 4 내지 8 배만 더 높을 것이다.

보다 적은 횟수의 투여(매 72시간)를 이용하는 방법의 경우, 스트렙토코커스 뉴모니에 및 스태필로코커스 오레우스에 대한 정적 효과와 관련된 유리 약물 24 h AUC/MIC 값은 각각 7.2 ± 4.5 및 160 ±67이었다. 생체내 미생물학적 종료점에서 3가지(정적 용량, 1 및 2 로그 사멸)를 달성하기 위해 필요한 PK/PD 크기는 보다 간격이 넓은 투여 방법에 대해 더 낮았다. 달바반신을 72시간마다 투여하는 경우, 다양한 종료점과 관련된 24h AUC/MIC 값은 약물을 24시간마다 투여한 경우보다 1.3 내지 2.4 배 더 낮았다.

스트렙토코커스 뉴모니에에서의 페니실린-내성 및 스태필로코커스 오레우스에서의 메티실린-내성은 달바반신 효능에 필요한 24h AUC/MIC에 영향을 주지 않았다.

달바반신 활성에 대한 호중구의 영향

달바반신 활성에 대한 호중구의 영향을 측정하기 위해, 정상 마우스 및 스트렙토코커스 뉴모니에로 감염된 호중구감소 마우스 둘 다에서 약물의 24-시간 투여와 용량-반응 곡선을 비교하였다. 후속 용량 반응 곡선은 도 53에 나타내었다. 각 점은 4개 대퇴부로부터의 평균값을 나타낸다. 정적 용량 및 1 및 2 로그 사멸과 관련된 용량은 힐 방정식을 이용하여 비-선형 회귀법에 의해 평가받은 파라미터로부터 계산하였다. 정상 마우스 및 호중구감소 마우스 둘 다에서 상기 종료점을 달성하기 위해 필요한 용량(㎎/㎏/6일)을 표 33에 나타내었다. 호중구의 존재는 효능에 필요한 용량에 1.7 내지 2.1 배 감소를 야기하였다. 그러나, 이러한 차이는 통계적으로 의미가 없다.

달바반신 활성에 대한 감염 부위의 영향

달바반신 활성에 대한 감염 부위의 영향을 측정하기 위해, 대퇴부 및 폐 감염 모델 둘 다에서 약물의 24시간 투여에 따른 용량-반응 곡선을 비교하였다(도 54). 스트렙토코커스 뉴모니에 및 스태필로코커스 오레우스 둘 다를 상기 모델에 사용하였다. 스트렙토코커스 뉴모니에를 사용하는 두 모델에서 용량-반응 곡선은 거의 동일하였다. 스태필로코커스 오레우스에 대한 유사한 연구에서, 폐 모델에서의 용량 반응 곡선이 왼쪽으로 이동하여 상기 감염 부위에서 효과를 위해 약물이 덜 필요하였음을 제시한다. 그러나, 스태필로코커스 연구에서 신뢰 구간은 넓었으며 상기 차이는 의미가 없었다.

결론

상기 연구들은 다양한 병원균에 대한 달바반신의 생체내 약력학적 활성을 특성화하였다. 이들은 다음과 같이 요약할 수 있다.

·달바반신은 대퇴부 및 폐 감염 방식 모두에서 스트렙토코커스 뉴모니에 및 스태필로코커스 오레우스에 대해 생체내 살균 활성을 나타내었다.

·달바반신의 효과는 용량-의존성이었다.

·용량-의존성 PK/PD 파라미터, 24h AUC/MIC 및 Cmax/MIC는 달바반신의 생체내 활성과 강하게 상관되었다. 24h AUC/MIC 파라미터에 의한 용량-반응 데이터의 회귀법으로 최고의 측정 계수가 야기되었다. 가장 넓게 벌어진 투여 간격을 이용한 치료가 상기 모델들에서 가장 효과적이었다.

·미생물 효과와 관련된 24h AUC/MIC 값은 연구된 종 내의 균주들 중에서 유사하였다. 스트렙토코커스 뉴모니에 및 스태필로코커스 오레우스에서의 베타-락탐 내성은 달바반신의 생체내 활성에 영향을 미치지 않았다.

·스트렙토코커스 뉴모니에에 대한 효과는 스태필로코커스 오레우스에 대한 것보다 낮은 24h AUC/MIC 값을 요하였다. 이것은 부분적으로 MIC와 MBC에서 종 차이에 의해 설명될 수 있다.

·스트렙토코커스 뉴모니에에 대한 효과는 순 정적 효과, 1 또는 2 로그 사멸 어느 것을 기준으로 하든, 상기 감염 모델에서 6일의 치료과정 동안에 거의 100의 유리 약물 AUC/MIC를 필요로 하였다. 유사한 기준으로, 스태필로코커스 오레우스에 대한 효과는 6일동안 거의 1000의 유리 약물 AUC/MIC를 필요로 하였다.

·호중구감소증은 생체내 달바반신 활성에 최소의 영향을 미쳤다.

실시예 10. HPLC - MS / MS 에 의한 혈장내 달바반신의 정량적 측정

하기에 기술하는 바와 같이, 혈장내 달바반신의 정량적 측정을 위해 HPLC-MS/MS 방법을 진행시켰다.

달바반신 보정 및 품질 관리 기준용액의 제조

달바반신을 탈이온수에 용해시켜 1000 ㎍/㎖ 용액을 제조한 다음 탈이온수에 순차적으로 희석하여 500, 50 및 10 ㎍/㎖ 용액을 제조함으로써 달바반신의 저장 용액을 제조하였다.

인간 혈장에 적절한 부피의 1000 ㎍/㎖의, 상기와 같이 제조한 달바반신 저장 용액을 가하여 100, 60 및 40 ㎍/㎖ 달바반신 농도의 보정 기준용액을 제조하였다. 인간 혈장에 적절한 부피의 500 ㎍/㎖ 달바반신 저장 용액을 가하여 20 및 10 ㎍/㎖ 농도의 보정 기준용액을 제조하고, 인간 혈장에 적절한 부피의 10 ㎍/㎖ 저장 용액을 가하여 0.5 ㎍/㎖의 보정 기준용액을 제조하였다.

인간 혈장에 적절한 부피의 1000 ㎍/㎖의, 전술한 바와 같이 제조한 달바반신 저장 용액을 가하여 90 및 30 ㎍/㎖ 달바반신의 품질 관리 기준용액을 제조하였다. 인간 혈장에 적절한 부피의 50 ㎍/㎖ 용액을 가하여 1.5 ㎍/㎖의 품질 관리 기준용액을 제조하였다.

내부 표준 작업 용액의 제조

A-40926의 다이에틸-아미노-프로필-아미노 유도체인, 내부 기준 BI-K0098의 30 ㎍/㎖ 작업 용액을 다음과 같이 제조하였다. 약 10 ㎎의 NI-K0098을 약 10 ㎖의 이동상 A(80%의 10mM 암모늄 포미에이트/폼산, pH 3(v/v), 10%의 아세토나이트릴(v/v) 및 10%의 2-프로판올(v/v))에 용해시켜 1000 ㎍/㎖ 내부 표준 저장 용액을 제조하였다. 이어서, 저장 용액(300 ㎕)을 이동상 A로 10 ㎖의 부피로 희석하여 30 ㎍/㎖ 내부 표준 용액을 제조하였다.

분석용 샘플의 제조

혈장내 달바반신 농도의 정량적 측정을 위한 샘플을 다음과 같이 제조하였다. 전술한 바와 같이 제조한 50 ㎕의 보정 또는 품질 관리 기준용액에, 100 ㎕의 내부 표준 작업 용액을 가하고 혼합하였다. 혼합물을 실온에서 5분간 평형화시킨 다음 250 ㎕의 아세토나이트릴을 가하였다. 이어서, 혼합물을 10 초간 볼텍싱한 후, ALC 미세원심분리기 4214에서 약 10,000 rpm으로 1분간 원심분리하였다. 상등액을 깨끗한 튜브로 옮기고 약 40℃에서 사반트 스피드-백 시스템(Savant Speed-Vac System)에서 증발 건고시켰다. 이어서, 샘플을 150 ㎕의 이동상 A에 재현탁하였다.

분석 방법

전술한 바와 같이 분석을 위해 제조된 50 ㎕ 샘플을 페노메넥스 쥬피터(Phenomenex Jupiter) C₁₈ 컬럼(50 x 2 ㎜, C₁₈ 5 ㎛ 300 A)에 주입하고 0.3 ㎖/분의 유량에서 구배 HPLC 조건하에서 분석하였다. 구배 조건은 다음과 같았다: 초기, 80% 이동상 A/20% 이동상 B(20% 10mM 암모늄 포미에이트/폼산, pH 3(v/v), 40% 아세토나이트릴(v/v), 40% 2-프로판올(v/v)); 1분, 20% 이동상 A/80% 이동상 B; 2분, 20% 이동상 A/80% 이동상 B; 2.5분, 다시 초기 조건으로.

HPLC 시스템은 양성 이온화 방식으로 작동하는 터보 이온 스프레이가 있는 PE SCIEX API-2000 삼중 4중극 질량 분광계와 커플링시켰다. 공기를 이용하여 이온 공급원에 스프레이를 생성하였다. 프로브 온도는 커튼 가스로서 질소하에 500℃로 맞추었다. 충돌 가스로서 질소를 사용하여 다중 반응 모니터링(MRM)을 이용하였다. 분석시료는 다음의 이온 전이를 모니터하여 검출하였다: 달바반신에 대해 909.3 Da → 1492.3 Da, 및 내부 표준(BI-K0098)에 대해 923.3 Da → 1457.3 Da. 질량 분광계 오염을 막기 위해, 크로마토그래피 실행 시작하고 처음 1분 및 2.5분 후에 후-칼럼 흐름 전환을 수행하였다.

데이터 분석 입수를 위해 소프트웨어 샘플 컨트롤(Software Sample Contol) 1.4를 이용하고, 크로마토그래피 피크 적분 및 통계학적 데이터 평가를 위해 맥콴(MacQuan) 1.6을 이용하였다.

보정 곡선

분석 방법의 직선성은 보정 기준용액을 분석하여 보정 곡선을 산출함으로써 평가하였다. 혈장 샘플내 달바반신의 농도는 달바반신과 내부 표준 사이의 피크 면적비를 계산함으로써 측정하였다.

0.5 내지 100 ㎍ 달바반신/인간 혈장 ㎖의 분석 범위에 걸친 달바반신 농도에 대한 보정 곡선은 방정식 y = A + Bx(가중 1/x)을 이용하여 작성하였으며, 이때, A는 곡선의 절편을 나타내고, B는 곡선의 기울기를 나타내며, x는 보정 기준용액의 달바반신 농도(㎍/㎖)를 나타내고, y는 달바반신 대 내부 표준의 피크 면적비를 나타낸다. 3개의 별도의 보정 곡선을 작성하였다. 결과는 달바반신/내부 표준 면적비 및 달바반신 농도가 분석 범위에 걸쳐 선형으로 변화됨을 나타내었다. 정량의 하한치(LLQQ)는 인간 혈장 ㎖ 당 0.5 ㎍ 달바반신이었다. 보정 곡선에 대한 기울기는 재현할 수 있었으며 그의 상관 계수는 0.9995보다 컸다.

혈장내 달바반신의 안정성

혈장 샘플내 달바반신의 안정성은 전술한 바와 같이 제조된 인간 혈장 샘플의 품질 관리 기준용액의 3가지 복제물을 2가지 상이한 농도, 1.5 및 90 ㎍/㎖에서 분석하여 시험하였다. 검출가능한 달바반신 농도는 3 주기의 냉동-해동 처리 후에 안정하였다. 처리된 샘플내 달바반신 농도는 실온에서 24시간 후에 안정하였다. 제로(0) 시간 샘플에 대한 달바반신 농도의 감소는 관찰되지 않았다.

실시예 11. 달바반신 질량 분광법 분석

용액 중 달바반신 다량체의 성질을 조사하고 달바반신 다량체 대 달바반신 단량체의 개체수 비에 영향을 미치는 조건을 전기분무 이온 질량 분광법(ESI-MS)에 의해 측정하였다.

실험을 양이온 방식으로 작동하는, 터보이온스프레이(TruboIonSpray) 공급원, 3중 4중극 분석기(Triple Quandrupole analyzer)가 장착된 어플라이드 바이오시스템 API III + 질량 분광계를 사용하여 수행하였다. 최적화 조건을 하기 표 34에 나타내었다.

용액중 달바반신

8:2 물:아이소프로판올 용액에 용해시킨 달바반신 0.1 ㎎/㎖를 함유하는 달바반신 용액에 대해 기기 파라미터를 적합화하였다. 용액중 달바반신의 스펙트럼은 용액의 직접 주입 후 500 내지 2000 amu의 범위에서 수득하였다. 도 7에 나타낸 바와 같이, 수득된 스펙트럼은 달바반신 다량체의 존재를 나타낸다. 비-제한 예로서, 스펙트럼의 하나의 결과는 (2nM + y(^＋3)) 이온 종으로 존재하는 B₀의 단독다량체에 기인하는데, 이때 n은 단독다량체의 다중도를 나타내는 양의 정수, 예를 들면, 다량체가 단독이량체인 경우 n은 1이고 다량체가 단독사량체인 경우 n은 2이며, M은 단량체의 질량을 나타내고, y는 n이고, ^＋3은 플러스 3 이온 전하를 나타낸다. 예를 들면, n이 1이고 y가 1이고 M이 B₀의 질량인 경우 B₀의 단독이량체가 제공된다. 상기 단독이량체 종은 질량 스펙트럼에서 (2M^＋3) 이온 자취에 해당된다.

달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비에 대한 달바반신 농도의 영향

다량체 대 단량체의 개체수 비에 대한 달바반신 농도의 영향은 전술한 조건을 이용하여 질량 분광법으로 평가하였다. 스펙트럼은 20, 40, 60 및 80 ㎍/㎖의 농도에서 달바반신 용액의 직접 주입에 의해 수득하였다. 도 8에 나타낸 바와 같이, 주 피크의 강도를 달바반신 농도 함수로 기록하고, 달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비를 측정하였다.

데이터는 달바반신 다량체 대 달바반신 단량체의 개체수 비가 농도 증가에 따라 증가함을 말해준다. 이것은 개인에게 투여될 수 있는 높은 약물 부하 용량에 대한 설명을 도울 수 있다. 단량체의 저장소로서 다량체의 역할은 보다 고농도의 샘플이 침전물을 형성하는 경향을 감소시키고 개인에게 투여될 수 있는 농도를 증대시킬 수 있다. 다량체의 존재는 또한 개인에게 달바반신 용량의 신속한 투여를 가능케 할 수 있다.

예를 들면, 도 7에 나타낸 바와 같이 이온 A 및 B의 피크 강도간의 비를 측정함으로써, 달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비를 측정하는 방법의 비-제한 예가 제공된다. 피크 A의 강도를 피크 B의 강도로 나누면 달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비의 한 척도가 제공된다.

달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비에 대한 pH 의 영향

달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비에 대한 용액 pH의 영향은 전술한 기기 조건에서 및 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0 및 5.5의 용액 pH 값에서 평가하였다. 달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비는 도 9에 나타낸 바와 같이 각각의 pH 값에서 측정하고 pH에 대해 플롯팅하였다. 달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비는 pH 증가에 따라 증가하는 것으로 측정되었다.

이론에 결부되고자 하는 것은 아니지만, 첫 번째 달바반신 단량체상의 카복실레이트기와 같은 이온 기들이 두 번째 달바반신 단량체 상의 반대로 하전된 이온, 예를 들면, 3급 질소기와의 이온성 상호작용을 형성하여 달바반신 다량체의 안정화를 돕는 것으로 생각된다. 상기 이온성 상호작용은 pH에 의해 영향받을 수 있다. 달바반신이 보다 높은 pH에서 다량체로 존재하는 경향의 증가는 이온성 상호작용이 다량체 안정화에 중요함을 나타내는 것으로 생각된다. 특히, 달바반신 다량체는 아마도 카복실레이트기와 같은 특정 작용기가 보다 낮은 pH 값에서 양자화될 수 있기 때문에, 다량체 안정성에 기여하는 이온성 상호작용의 붕괴로 인해 보다 낮은 pH에서 탈안정화되는 것으로 생각된다.

달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비에 대한 용액 이온 강도의 영향

달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비에 대한 용액 이온 강도의 영향은 질량 분광법으로 측정하였다. 미리 조정한 피니간(Finnigan) LCQ(데카) 이온 포착 기기 상에서 전자분무 양성 방식으로 질량 스펙트럼을 수득하고, 울트라마크(Ultramark) 1621, 카페인 및 MRFA(L-메티오닐-아르기닐-페닐알라닐-아르기닌)를 이용하여 전자분무 방식으로 보정하였다. 모든 질량 스펙트럼은 표 35에 열거된 조건을 이용하여 기록하였다. 조사한 샘플 파라미터를 표 36에 열거하였다.

샘플 수용액을 하워드(Harward) 주사기 펌프를 통해 10 ㎕/분으로 주입하고 도 10 내지 12에 나타낸 바와 같이 질량 스펙트럼을 수득하였다.

수득된 스펙트럼은 달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비가 이온 강도에 영향받음을 나타낸다. 완충액 농도의 증가는 다량체 질량 자취의 감소 및 따라서 달바반신 다량체 대 단량체 개체수 비의 감소에 상응하는 것으로 밝혀졌다.

언급한 바와 같이, 이온성 상호작용은 달바반신 다량체 안정성에 중요한 것으로 생각된다. 이온 강도의 증가가 다량체 질량 자취의 강도의 감소와 상관되었다는 사실은 다량체 안정성에서 이온성 상호작용의 역할을 입증한다. 그러나, 다량체 질량 자취는 보다 높은 이온 강도에서도 존재하기 때문에, 또 다른 제 2의 상호작용이 다량체 안정화에 수반될 수 있다.

이론에 결부되고자 하는 것은 아니지만, 소수성 상호작용이 달바반신의 다량체 종을 안정화시키는데 중요한 것으로 생각된다. 이들 비-공유 달바반신 다량체의 안정화가 단지 이온성 상호작용에 기인하는 경우, 이온 강도의 증가가 다량체 질량 종의 전체 손실을 야기할 것임이 예상된다. 즉, 용액의 이온 강도가 증가함에 따라 다량체를 안정화시키는 이온성 상호작용이 용액중 이온의 증가된 개체수로 인해 파괴되고, 이로써 단량체가 보다 쉽게 결합될 것으로 예상된다. 결과적으로, 용액 이온 강도는 다량체를 단량체 성분으로 해리시키고 수득된 질량 스펙트럼은 어떤 다량체 질량 자취도 갖지 않을 것이다. 그러나, 높은 용액 이온 강도(예를 들면, 100mM 암모늄 포메이트)에서도, 달바반신 다량체의 존재가 질량 스펙트럼에서 검출된다. 따라서, 달바반신의 다량체는 소수성 상호작용에 의해, 적어도 부분적으로 안정화되는 것으로 생각된다.

구조적으로 유사한 화합물

달바반신의 개선된 효능은 적어도 부분적으로 다량체를 형성하는 그의 능력에 기인하는 것으로 생각된다. 이러한 독특한 특징은 구조적으로 매우 유사한 화합물에서도 나타나지 않는 것으로 생각된다. 달바반신에 대한 화학 구조적 유사성을 갖는 화합물을 다량체를 생성하는 그의 능력에 대해 질량 분광법 분석으로 조사하였다. 미리 조정한 피니간 LCQ(데카) 이온 포착 기기 상에서 전자분무 양성 방식으로 질량 스펙트럼을 수득하고, 울트라마크 1621, 카페인 및 MRFA(L-메티오닐-아르기닐-페닐알라닐-아르기닌)를 이용하여 전자분무 방식으로 보정하였다. 모든 질량 스펙트럼은 표 37에 열거된 조건을 이용하여 기록하였다. 조사한 샘플 파라미터를 표 38에 열거하였다. 샘플 수용액을 하워드 주사기 펌프를 통해 10 ㎕/분으로 주입하고 도 13 및 14에 나타낸 바와 같이 질량 스펙트럼을 수득하였다.

유사한 당단백질 항생물질(테이코플라닌)은 다양한 농도에서 용액중에 다량체 착체를 나타내지 않는다. 이것은 구조적으로 유사한 화합물이 용액중에 다량체 종을 형성하지 못하며 이러한 현상은 달바반신의 활성에 중요한 역할을 할 수 있다는 지적을 지지한다.

실시예 12. 단백질- 달바반신 착체의 매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행시간형(MALDI-TOF) 질량 분광법

10 ㎕의 0.150mM HSA를 10 ㎕의 달바반신 용액(0.075mM, 0.15mM, 0.3mM 및 1.5mM로부터)과 혼합하고 37℃에서 60분간 배양하였다. 건조 소적 기술을 사용하여 분석을 위한 샘플을 제조하였다. 스펙트럼은 미리 조정한 질량 분광계의 브루커 플렉스(BRUKER FLEX) III 상에서 수득하였으며 표준 소 혈청 알부민을 사용하여 보정하여, 200회 레이저 저격에 의해 생성된 스펙트럼을 수득하고 평균화하였다. 매트릭스: 아세토나이트릴/H₂O(50:5)에 포화된 9 부의 DHB-9-(2,5-다이하이드록시-벤조산), 아세토나이트릴/H₂O(50:5)에 포화된 1 부의 시나핀산. 0.5 ㎕의 샘플 용액 및 0.5 ㎕의 매트릭스 용액을 혼합하고 레이저 표적위에 놓았다.

달바반신은 단량체로서 단백질에 결합한다(1 HSA + 1 달바반신). 매우 높은 달바반신 대 단백질 비(1:2, 1:10)에서, 단백질 분자당 2 분자의 달바반신을 함유하는 착체의 존재를 관찰할 수 있다.

실시예 13. 인간 혈청 알부민의 존재하에 N, N' - 다이아세틸 - Lys -D- Ala -D- Ala 에 대한 달바반신 결합의 등온 적정 열량측정법

37℃에서의 일부 추가 측정과 함께, 25℃에서 일련의 농도(600 μM 이하)에 걸쳐 HSA의 존재하에 등온 적정 열량측정법(ITC)에 의해 달바반신의 세포벽 표적의 펩타이드 유사체인 N,N'-다이아세틸-Lys-D-Ala-D-Ala에 대한 달바반신의 결합을 조사하였다. HSA는 달바반신의 용해도를 증가시키고 트라이-펩타이드 리간드에 대한 그의 결합 친화도를 감소시켰다. 결과를 반코마이신에 대한 것과 비교하였다. 관찰된 효과는, 용액 중에서 자유로운 두 달바반신 및 (보다 약하게) 달바반신-HSA 착체에 대한 리간드의 결합을 허용하는 비-경쟁적 결합 모델과 일치하게, 비교적 낮은 HSA 농도에서 안정상태에 이르렀다.

예비 실험은, 혈청 단백질의 부재하에서 달바반신 및 반코마이신이 유사한 결합 프로필을 나타냄을 입증하였다: 둘 다 N,N'-다이아세틸-Lys-D-Ala-D-Ala에 대해 발열성 결합을 나타내지만 다이펩타이드(D-Ala-D-Ala_ 또는 Lys-D-Ala-D-락테이트에 대한 결합의 증거는 없다. 달바반신/트라이펩타이드 상호작용의 경우, 데이터는 동일한 조건하에서의 반코마이신과 유사하게, 온도에 따라, K_diss = 1 내지 10 μM 하의 결합과 일치하였다. 본 실시예에 기술된 실험은 (a) 상이한 온도(25 및 37℃) 및 상이한 HSA 농도에서 달바반신/트라이펩타이드 측정치를 비교하고, (b) 이들 데이터를 이용하여 결합 모델을 구축하여 관찰된 수를 비교하기 위해 설계되었다.

달바반신은 바이오서치 이탈리아(Biosearch Italia)에서 공급되었다. 다른 시약은 시그마(Sigma)에서 입수하였다: 반코마이신 하이드로클로라이드(시그마 V-2002, fw 1485.7), N,N'-다이아세틸-Lys-D-Ala-D-Ala(시그마 D-9904, fw 372.4), 인간 알부민(HSA; 시그마 A-3782; mw 69,366).

항생물질 및 펩타이드를 각 실험 직전에 약하게 교반하면서 HSA를 함유하는 수성 완충액(20mM Na 포스페이트, 150mM NaCl, pH 7.4)에 용해시켰다. 달바반신 농도는 중량에 의해, 또는 몰 흡광 계수 ε = 12430(달바반신, A₂₈₀ ^1%=68.42), ε₂₈₀ = 6690(반코마이신)을 이용하여 UV 흡광도에 의해 측정하였다. 스펙트럼은 시마쥬(Shimadzu) UV-160A 또는 UV-1601 분광계를 사용하여 1 ㎝ 통로길이 석영 큐벳에서 실온에서 기록하였으며, 샘플은 경우에 따라 완충액으로 정량적으로 희석하여 0.1 내지 1 A 범위의 흡광도를 제공하였다.

등온 적정 열량측정법은 표준 작업 절차를 이용하여 25℃ 및 37℃에서 마이크로칼 VP-ITC 기기를 사용하여 수행하였다(예를 들면, 문헌 [Wiseman et al., Anal. Biochem., 179, 131-137, 1989; Cooper et al., Philos . Trans . R. Soc . Lond. Ser . A- Math . Phys . Eng . Sci., 345, 23-35, 1993; Cooper A., Isothermal Titration Microcalorimetry in C. Jones, B. Mulloy and A.H. Thomas(Eds.), Microscopy, Optical Spectroscopy, and Macroscopic Techniques. Humana Press, Totowa, NJ, p. 137-150, 1994; Cooper A., Microcalorimetry of Protein - protein Interactions in J.E. Ladbury and B.Z. Chowdhry(Eds.); Biocalorimetry: The Applications of Calorimetry in the Biological Scences, Wiley, p.103-111, 1998; and Cooper, A., Curr . Opin . Chem . Biol., 3, 557-563, 1999] 참조). 샘플을 부하하기 전에 약하게 탈기시켜 열량측정계 셀에서 기포 생성을 방지하였다. 각 실험은 전형적으로 항생물질 용액(약 20 내지 100 μM)을 함유하는 열량측정계 셀(부피 약 1.4 ㎖)에 펩타이드 용액(약 1mM)의 25 x 10 ㎕ 주입을 포함하였다. 대조 실험은 동일한 조건하에서 리간드를 완충액에 주입하여 헵타이드 희석열을 측정하는 것을 포함하였으며, 사익 값을 이용하여 분석 전에 원래의 결합 데이터의 보정에 사용하였다. 달바반신/트라이-펩타이드 결합 실험을 각 온도에서 수회 반복하였다. ITC 결합 데이터는 표준 마이크로칼 오리진(ORIGIN, 등록상표) 소프트웨어를 이용하여 분석하여 결합 부위의 겉보기 수(N), 결합 친화도(K_ass = 1/K_diss) 및 결합 엔탈피(ΔH)를 측정하였다.

HSA의 부재하에 달바반신에 대한 트라이펩타이드의 결합에 대한 ITC 실험은 10, 25 및 37℃에서 각각 1.4, 3.1 및 8.4 μM의 영역에서의 평균 K_diss와 함께, 결합 친화도에 대한 일관된 데이터를 제공한다(표 39). 결합은 발열성이다. 여기서 농도 계산은 N이 이들 조건하에서 0.5에 가까움을 보여준다. 이것은 이들 조건하에서 달바반신 이량체 당 하나의 트라이펩타이드 분자의 결합과 일치한다. 상기 결합 친화도 및 결합 엔탈피는 동일 조건하에서 반코마이신에서 관찰된 바에 필적한다(표 39 및 [D. McPhail, A. Cooper, J. Chem . Soc . Faraday Trans., 93, 2283-2289, 1997]). 반코마이신은 보다 고농도에서 리간드-유도성 이량체화됨을 또한 주목하시오.

달바반신 혼합물에 HSA의 첨가는 결합이 외관상으로 더 발열성이지만 트라이펩타이드와 달바반신 사이의 겉보기 결합 친화도를 감소시킨다(표 39). 25℃에서 상기에 대한 HSA 농도 의존성은 도 15에 나타내었다. 겉보기 K_diss를 35 μM 이하의 HSA에서 초기 상승(약화)후, 생리 수준(600 μM)에 접근하는 보다 높은 HSA 농도에 대해 비교적 일정하게 유지된다. 고농도의 HSA(K_diss 약 35 μM)에서의 안정 수준은 HSA의 부재하에서보다 약 10 내지 12 배 더 약한 결합 친화도에 상응한다.

HSA 효과는 트라이펩타이드와의 상호작용에 기인하지 않았다. HSA의 존재하에 트라이펩타이드에 대한 반코마이신의 결합에 대한 대조군 ITC 실험은 HSA의 부재하에 나타난 결과와 필적하는 결과를 제공하였다(표 39 참조). 이것은 펩타이드가 항생물질 반코마이신에 밀접하게 관련되지도 않고 용액중에서 HSA와 상호작용하지도 않음을 시사한다. 이는 달바반신/트라이펩타이드 상호작용에 대한 HSA의 영향이 HSA와 달바반신 사이의 상호작용에 기인해야 하는 것으로 결론된다.

이론에 결부되길 바라는 것은 아니지만, 상기 데이터는 비-경쟁적 결합 모델과 일치한다. 상기 모델은 트라이펩타이드 리간드(L)가 유리 상태 및 (가능하면 상이한 친화도하에) 달바반신-HSA 착체 둘 다에서 달바반신에 결합할 수 있음을 추정한다.

D + L ⇔ DL ; K_L = [D][L][DL]

D + HSA ⇔ D.HSA ; K_HSA = [D][HSA]/[D.HSA]

D.HSA + L ⇔ LD.HSA ; K_LDHSA = [D.HSA][L]/[LD.HSA]

겉보기(관찰된) 리간드 결합 해리 상수(비-경쟁적):

K_{app .L} = [총 D][L]/[총 DL 착체]

= ([D] + [D.HSA])[L]/([DL] + [LD.HSA])

= K_L(1 + [HSA]/K_HSA)/(1 + [HSA].K_L/K_HSA.K_LDHSA)

이것은 관찰된 데이터에 잘 일치하는, 유리 HSA 농도에 대한 K_{app .L}의 과도한 의존성을 나타낸다(도 15). 고 [HSA]에서 상기 값은 점근적(안정) 값에 이른다:

K_{app .L} = K_LDHSA(거대 [HSA]에 대해)

이것은 트라이펩타이드에 대한 결합 친화도가 달바반신이 HSA에 결합될 때 약 35 μM로 유리 달바반신에 대한 3 μM에 비교된다(25℃ 도면).

또 다른 메카니즘은 달바반신이 펩타이드 또는 단백질과의 상호작용에서 단량체 또는 이량체로 작용하는지의 관점에서 제시될 수 있다. 달바반신과 반코마이신(상기 저농도에서 명백한 1:1 결합을 나타냄)의 직접 비교는 결합이 달바반신의 경우 보다 낮은 몰비(낮은 N)에서 완료됨을 보여준다(도 16). 이것은 2:1 달바반신:펩타이드 착체와 일치한다.

그러나, HSA의 존재하에, 겉보기 N 값은 증가하며(표 39), 1:1 착화와 더 일치할 수 있다. 이론에 결부되길 바라는 것은 아니지만, 도 17에 나타낸, 달바반신 단량체 및 이량체와 트라이펩타이드 리간드 및 HSA와의 가능한 상호작용을 나타내는 모델은 상기 관찰들과 일치한다. 도 17A는 단량체로서 HSA 상의 2개의 별개 부위에 결합하는 것을 제외하고, 용액 중에서 단량체-이량체 평형에서와 같이(주로 이량체로서) 달바반신을 기술하고 있다. 이것은 달바반신에 대한 혈청 단백질의 결합에 대해 ITC에 의해 관찰된 N = 0.5 값과 일치한다(실시예 3). 도 17B는 용액중 달바반신 이량체, 및 (보다 약하게) HSA에 결합된 달바반신 단량체에 대한 리간드 결합을 나타낸 것이다. 이것은 가변성 겉보기 화학양론 하에 트라이펩타이드 및 HSA 둘 다에 대한 달바반신의 비-경쟁적 결합과 일치한다.

요컨대, 본 실시예는 HSA가 비-경쟁적 메카니즘에 일치하는 방식으로 트라이펩타이드 리간드에 대한 달바반신의 결합 친화도를 감소시키며, HSA에 결합된 달바반신이 비록 친화도는 감소되지만 트라이펩타이드 리간드에 결합하는 그의 능력을 유지함을 보여준다. 이러한 결과는 또한 달바반신이 펩타이드 리간드에 대한 다량체의 강한 친화도하에, 단량체-다량체 평형을 이루는, 주로 용액중 다량체인 모델과 일치한다. 달바반신 단량체는 유리 상태 및 혈청 알부민에 결합된 상태 모두 또한 감소된 친화도하에 펩타이드에 결합할 수 있다.

실시예 13. A-40926 및 달바반신 제조

A-40926의 제조

발효에 의해 생성된 천연 당단백질인 A-40926이 달바반신을 생성하기 위한 출발 물질이었다. 상기 물질은 A-40926과 그의 아세틸 유도체의 혼합물로서 노모뮤리아( Nomomuria) 속 ATCC 39737에 의해 생성되었다(미국 특허 제 4,935,238 호 및 문헌 [B. Golstain et al., Antimicorbial Agent and Chemotherapy, p. 1961-1966, Dec. 1987] 참조). 아세틸 유도체를 먼저 A-40926으로 탈아세틸화하였다. 탈아세틸화 후에, A-40926을 하기에 기술하는 바와 같이 폴리아마이드 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 하기 설명은 현행 제조 방법을 대표하는 것이다. 여기에 기록된 양은 산업 제조에서 통상적으로 처리되는 양의 약 1/4이다.

A-40926의 탈아세틸화

총 약 1 g/ℓ의 A-40926 및 그의 아세틸 유도체를 함유하는 발효액(23℃) 10 m³을 NaOH 30%를 사용하여 pH 11.4에서, 교반하면서 조정하였다. 교반을 6시간 동안 지속한 다음, 온도를 15℃로 감소시키고 발효액을 미세여과시켰다(0.12 m²의 세라믹 막 0.1 ㎛를 갖는 코치 프로토셉 IV 마이크로필터(Koch Protosep IV Microfilter)). 미세여과시에, 공정 말기에 20 내지 25 m³의 투과액 및 4.5 내지 5 m³의 농축물(출발 값의 절반)을 수득하기 위해 물을 농축물에 계속 가하였다.

A-40926을 함유한 투과액을 HPLC로 분석하였다. 탈아세틸화가 완료되면, 투과액의 pH를 30% 황산(20℃에서 저장)으로 pH 7에서 조정하였다. 본 실시예에서, 6.62 ㎏의 A-40926(268 ㎎/ℓ)을 함유하는 여과된 발효액 25 m³을 수득하였다. 탈아세틸화 수율은 66.2%이었다. 미세여과 공정이 상기 공정에서 사용된 것보다 긴 시간 동안 더 높은 추출 부피로 수행되는 경우, 수율은 90%까지 증가할 수 있다.

폴리아마이드 컬럼상에서 A-40926의 정제

추출 후에, 여과된 발효액에 함유된 A-40926은 하기에 기술하는 바와 같이 폴리아마이드 컬럼상에서 정제하였다. 상기 설명에 기록된 양은 산업적 제조시 통상적으로 처리되는 양의 약 1/10이며 현행 제조 방법을 대표하는 것이다.

500 ℓ의 폴리아마이드 수지 SC6(매커레이 나겔(Macherey Nagel))을 탈염수에 현탁시키고 컬럼에 부하하였다. 이어서, 컬럼을 적어도 2 BV(층 부피)의 완충액(800 ℓ의 물에 4 ㎏의 탄산나트륨을 용해시키고 생성된 용액의 pH를 아세트산으로 조정하여 제조)으로 용출시켜 수지를 pH 6 내지 6.5에서 조정하였다.

S-40926 여과된 발효액(9000 ℓ; 분석 0.275 ㎎/ℓ; A-40926 2475 g; pH 6 ± 0.2; 온도 10 ± 3℃)을 수지 ℓ 당 약 5 g의 활성물질로 컬럼내에 부하하였다(5 내지 8 g/ℓ의 활성물질/수지 비를 통상적으로 사용하였다). 컬럼을 하기 용액으로 세척하였다: 7.5 ㎏의 탄산나트륨을 1500 ℓ의 탈염수에 용해시키고 pH를 아세트산으로 조정하여 제조된 pH 6의 용액 3 BV(1500 ℓ); 10 ㎏의 탄산나트륨을 2000 ℓ의 탈염수에 용해시키고 pH를 아세트산으로 조정하여 제조된 pH 8의 용액 4 BV(2000 ℓ); 4 ㎏의 탄산나트륨을 750 ℓ의 탈염수에 용해시키고 pH를 아세트산으로 조정하여 제조된 pH 9의 용액 1.5 BV(750 ℓ).

10 ㎏의 탄산나트륨을 2000 ℓ의 탈염수에 용해시키고 pH를 아세트산으로 조정하여 제조된 pH 10의 완충액 4 BV(2000 ℓ)로 용출시켜 컬럼으로부터 A-40926을 회수하였다. 정제된 A-40926을 함유하는 분획(0.5 g/ℓ보다 큰 A-40926의 농도 및 80%보다 큰 주 성분(B₀+B₁)의 HPLC 면적%)을 수거하고, 1N HCl로 중화시키고 HPLC로 분석하였다. 약 2000 ℓ의 최종 투명 용액을 수득하였다.

정제에 사용된 수지는 1.5 BV의 아이소프로판올/5% NaOH의 1:1 혼합물로 재생시킨 다음 5 BV의 탈염수로 세척하였다.

A-40926 농도

컬럼에서 유출된 용액을 여러번의 희석/농도 단계에 적용하여 용액중의 무기염의 대부분을 제거하였다. 250 D의 컷-오프를 갖는 막을 사용하여 나노여과에 의해 용액 80 ℓ로 농축하고 80 ℓ 탈염수로 희석하고, 나노여과에 의해 출발 부피(80 ℓ)에서 재-농축하였다. 상기 공정을 5 회 이상 반복하였다. 최종 용액(80 ℓ, pH 7.5)의 pH를 23% HCl로 pH 6.3으로 조정하였다. 이어서, 용액을 80 ℓ의 아세톤으로 희석하고 그의 pH를 23% HCl로 pH 2.6에서 다시 조정하였다.

탈색

680 g의 목탄 PA 200C(약 0.3 g/A-40926 g)를 교반하면서 상기 단계에서 수득된 용액(160 ℓ)에 가하였다. 실온에서 교반을 30분이상 지속한 다음, 약 0.5 내지 0.6 ㎏의 필터 보조제(DIF-BO)를 가하였다. 혼합물을 필터 카트리지를 통해 여과시켰다. 아세톤을 10% 미만으로 감소시키기 위해, 수득된 투명 용액을 진공하에(45℃) 농축시켰다. 최종 부피는 약 100 ℓ이었다. 이어서, pH를 수성 NaOH로 6.7로 조정하고, A-40926 농도가 약 100 g/ℓ가 될 때까지 통상적인 나노필터를 사용하여 농축 단계를 계속하였다. 20 ℓ의 농축 용액을 수득하였다(A-40926 1884 g, 94.2 g/ℓ).

침전 및 건조

이전의 용액을 교반하면서 20 ℓ의 아세톤으로 희석하고, 그의 pH를 10% HCl로 5.1로 조정하였다. 상기 용액에 추가 5 부피의 아세톤(100 ℓ)을 가하여 A-40926 침전을 완료하였다. 이 시점에서 수분 함량이 15% 이상인 경우, 추가의 아세톤을 가하였다. 2시간 후에 현탁액을 원심분리하고 고체를 3 x 10 ℓ의 신선한 아세톤으로 세척하였다. 모액을 분석하고 생성물의 부재를 확인한 다음 방출하였다.

고체 A-40926을 30 내지 35℃에서 정적 건조기에서 잔류 아세톤이 약 2% 미만이고 물이 10% 미만일 때까지 감압하에 건조하였다. 이어서, 생성물을 50 메쉬 체를 통해 체질하여 2.08 ㎏의 정제된 A-40926을 수득하였다(HPLC 분석 81.4%; 물 6.2%; 황산화 재 4.8%). 컬럼상에 부하된 활성물질로부터 출발하여 수율은 68.4%이었다.

달바반신의 합성

달바반신(BI-397)을 문헌 [Malabarba and Donaldio, Drugs of the Future, 24(8); 839-846, 1999]에 기술된 바와 같은 3-단계 합성법을 통해 천연 당단백질 A-40926으로부터 제조하였다. 특히, A-40926을 먼저 에스터화 단계에 적용하여 MA를 제조하고, 그 다음 이것을 아마이드화 단계에 적용하여 MA-A-1을 제조하였다. 이어서, 최종 가수분해 단계에 의해 MA-A-1을 달바반신으로 전환시켰다.

에스터화 단계(단계 1)

하기의 설명은 현재 사용중인 방법을 대표하는 것이다.

H ₂ SO ₄ 96%/ MeOH (용액 A)의 제조

기계적 교반기 및 온도계가 장착된 15 ℓ 환저 플라스크에 2.28 ℓ의 H₂SO₄ 96%(A-40926 분말 ㎏ 당 H₂SO₄ 96% 약 300 ㎖)를 7.9 ℓ의 MeOH에 적가하였다. 외부 얼음 욕조를 사용하여 온도를 0 내지 5℃로 유지하였다.

반응 절차

출발 물질 A-40926(7.6 ㎏; 배치 019, 분석 85.09%; 활성물질 6.46 ㎏; 3.73 몰)을 140 ℓ 유리-속입힌 반응기에서 MeOH(46 ℓ)에 현탁하고, 생성된 현탁액을 0 ± 2℃에서 냉각하였다. 상기 온도에서, 현탁액을 앞에서 제조한 용액 A(H₂SO₄/MeOH)로 처리하였다. 반응(1:1 아세토나이트릴/물 혼합물로 100배 희석된 반응 분취량)을 2시간마다 HPLC 분석으로 모니터하면서, 생성된 용액을 0℃에서 22 내지 26시간 동안 교반하였다. 잔류 A-40926이 5% 미만이고 다이에스터가 HPLC 면적%로서 10% 이하인 경우, 에스터화가 완료된 것으로 간주하였다.

에스터( MA ) 단리

반응이 완료되면, 혼합물을 -5℃(+/- 2℃)에서 냉각하고 동일 부피의 냉수(54 ℓ)로 희석하여 온도를 5℃ 미만으로 유지하였다. 10.2 ℓ의 트라이에틸아민(TEA)을 서서히 가하여 용액의 pH를 5.5(+/- 0.2)로 조정하여 생성물(MA)을 침전시켰다. 0 내지 2℃에서 한시간 더 교반을 계속한 다음, 수득된 고체를 원심분리하고 물(A-40926 ㎏ 당 10 ℓ) 및 최종적으로 MeOH(출발 A-40926 ㎏ 당 MeOH 3 ℓ)로 세척한 후 10 내지 15℃로 냉각하였다. 물로 세척하는 것은 주로 MA에서 설페이트를 제거하기 위해 수행하였다.

모액 및 세척액을 별도로 분석하고 1 내지 2% 미만의 활성물질을 함유하는 경우 방출하였다. 잔류하는 물이 10% 미만이 될 때까지 생성물을 35 내지 40℃(외부 온도)에서 진공하에(50 mmHg) 건조하였다. 7.6 ㎏의 MA(5.63 ㎏ 활성물질, 3.23 몰)를 갈색 분말로 수득하였다.

분석 결과 다음의 HPLC 면적% 값을 나타내었다: MA 89.8.

A-40926 3.2, 다이에스터 유도체 5.9. HPLC 분석은 74.2%, 활성물질 5.637 ㎏; 3.23 몰; 수율 = 86.5%. 상기 물질을 더 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.

아마이드화 단계(단계 2)

하기 설명은 현행 제조 방법을 대표하는 것이다.

DMSO / HCl 혼합물(용액 B)의 제조

DMSO(1.6 ℓ)를 기계적 교반기 및 온도계가 장착된 10 ℓ의 환저 플라스크에 넣고 10℃ 미만의 얼음 욕조로 냉각하였다. 이어서, HCl 37%(1 ℓ)를 교반하에 서서히 가하여 혼합물을 온도를 25℃ 미만으로 유지하였다.

아마이드화 절차( MA -A-1의 생성)

출발 물질 MA 5.95 ㎏(분석 76.3%, KF 8.9%, 2.68 몰)을 실온에서 교반하에 19.2 ℓ의 1:1 DMSO/MeOH 혼합물(MA 분말 ㎏ 당 약 1.6 ℓ DMSO 및 1.6 ℓ MeOH)에 서서히 용해시켰다. 1시간 동안 교반한 후, 709 ㎖의 3-(다이메틸아미노)-프로필아민(DMEPA, MW 102.1; 밀도 = 0.812 g/㎖; 5.63 몰; 출발 MA 몰 당 1.96 몰) 및 325 g의 1-하이드록시벤조트라이아졸 하이드레이트(HOBT·H₂O; MW 153.1; 2.04 몰; 출발 MA 몰 당 0.71 몰)를 반응 혼합물에 가하였다. 완전한 용액이 수득될 때까지 교반을 계속한 다음, 약 2.0 ℓ의 용액 B(DMSO/HCl)를 서서히 가하여 혼합물을 pH 3 내지 3.1(물과 10분간 반응시킨 분취량을 희석한 후 측정)로 조정하였다.

1.03 ㎏의 DCC(4.99 몰; MW 206.3; MA 몰 당 1.74 몰)를 4.1 ℓ의 1:1 DMSO/MeOH 혼합물에 용해시켜 제조한 다이사이클로헥실카보다이아마이드(DCC) 용액을 교반시킨 반응 혼합물에 10분내에 가하였다. 교반을 5시간 동안 지속한 다음, 잔류 MA를 5% 아래로 저하시키기 위해 추가로 51.5 g의 고체 DCC(0.25 몰)를 반응 혼합물에 가하여, 아이소유레아의 수준을 4 내지 5%보다 낮게 유지하였다. 아이소유레아는 달바반신을 과량의 DCC와 더 반응시켜 생성된 일단의 부산물이다.

전형적으로, 추가로 2시간 후(총 7시간)에 반응이 완료되었다. 완료시, 혼합물을 물(60 ℓ)로 희석하여 DMSO 농도를 15%(v/v)로 낮추고 1N HCl(0.85 ℓ)로 pH 2.3으로 조정하여 임의의 잔류 DCC를 파괴하였다.

MA -A-1의 달바반신으로의 가수분해(단계 3)

30분 후에, 혼합물을 15% NaOH(8 ℓ)로 pH 12.0 내지 12.1로 조정하였다. 15% NaOH를 소량 첨가하여 혼합물을 상기 pH에서 유지하면서 4시간 동안 교반을 계속하였다. 이 시간 후에, 잔류 MA-A-1은 HPLC 면적%로서 0.2% 미만이었다.

이어서, 혼합물을 1N HCl(19 ℓ)로 pH 3.0으로 산성화하고, 현탁액을 여과시켜 생성된 다이사이클로헥실유레아를 제거하였다. 고체 케이크를 필터상에서 탈염수(2 x 20 ℓ)로 세척하였다. 세척액 및 여액을 함께 모아 투명 용액을 수득하고, 이것을 HPLC로 분석하였다. 21.74 g/ℓ의 달바반신을 함유하는 152.8 ℓ의 용액(총 활성물질 3322 g; 1.828 몰, 수율 = 68.2%)을 수득하였다.

달바반신의 정제

하기 설명은 현행 제조 방법을 대표하는 것이다.

가수분해 단계로부터 수득되고 3322 g의 달바반신 활성물질을 함유하는 용액 152.8 ℓ를 두 분획으로 나누고 각각을 400 ℓ의 폴리아마이드를 함유하는 동일 크로마토그래피 상에서 별도로 정제하였다. 상기 두 정제 공정에서, 활성물질/수지 비는 각각 4.3 및 4.0 g/ℓ이었다.

폴리아마이드 컬럼 제조

400 ℓ의 폴리아마이드 수지를 함유하는 유리속을 입힌 컬럼(내경 = 40 ㎝, h = 320 ㎝)을 수지 재생 절차(하기 참조)에 따라 정화시키고 4 ℓ의 AcOH(pH = 3.2)로 산성화시킨 2 BV(800 ℓ)의 탈염수로 조절하였다.

첫 번째 분획의 정제

DMSO 함량을 5%(v/v) 이하로 낮추기 위해 76.4 ℓ의 출발 용액의 첫 번째 분획을 H₂O로 희석하고 1N HCl(3.4 ℓ)로 pH 2.78로 산성화하였다. 이어서, 상기 용액을 150 ℓ/h의 유량으로 컬럼상에 부하하였다. 부하후에, 수지를 하기 용액으로 세척하였다: AcOH(8 ℓ)로 산성화시킨 H₂O 4 BV(1600 ℓ), pH = 3.2; 0.1M AcONa 5BV(2000 ℓ), pH = 8.2; AcOH(1 ℓ)로 산성화시킨 H₂0 1 BV(400 ℓ), pH = 3.2. 달바반신을 AcOH(6 ℓ)로 산성화시킨 H₂O/MeOH(8:2) 4 BV(2400 ℓ)(pH 3.4)로 용출시켰다.

용출 단계동안, 각각 50 내지 60 ℓ의 22개 분획을 수거하고 HPLC로 분석하였다. 9 내지 25의 분획(0.5 g/ℓ보다 높은 달바반신 농도 및 (B₀+B₁)≥80%의 HPLC 면적%)을 함께 모으고 1.56 ㎏의 달바반신을 갖는 용액 969 ℓ(수율 = 93.9%)를 수득하였다. 그 다음, 상기 용액을 나노여과에 의해 농축하고 1.38 ㎏의 달바반신을 갖는 용액 125.7 ℓ를 수득하였다. 145 g의 불순 달바반신(8.7%)을 함유하는 투과액 850 ℓ를 중화시키고 방출시켰다.

수지 재생

재사용 전에 수지를 다음 용액으로 세척하였다: 아세트산(2.5 ㎖/ℓ)으로 산성화시킨 1:1 MeOH/물 2.5 BV(1000 ℓ); 1:1 0.5% NaOH/아이소프로판올 2.5 BV(1000 ℓ); 탈염수 10 BV(4000 ℓ). 이어서, 수지를 아세트산(2.5 ㎖/ℓ)으로 산성화시킨 물 BV(800 ℓ)로 재-평형화시켰다.

두 번째 분획의 정제

가수분해 단계로부터 얻은 출발 용액의 두 번째 분획(76.5 ℓ)을 H₂O(56 ℓ)로 희석하여 DMSO 함량을 5%(v/v) 이하로 낮추고 3.0 ℓ의 1N HCl로 pH 2.78로 산성화시켰다. 그 다음, 상기 분획을 첫 번째 부분의 정제에서 전술한 바와 같이 정제하였다. 분획들을 모아(부피 = 972 ℓ, 달바반신 1.54 ㎏, 수율 = 92.7%) 나노여과에 의해 농축하여 1.46 ㎏의 활성물질을 갖는 용액 133 ℓ를 수득하였다. 73 g의 달바반신(4.3%)을 함유하는 투과액 850 ℓ를 방출하였다.

두 정제 단계로부터 나온 농축 용액을 재-분석하고 함께 모아 2840 g의 정제된 달바반신을 함유하는 용액 258 ℓ를 수득하였다. 정제 수율은 86%이었다. MA로부터 출발하여 총 수율은 58.3%이었다.

최종 폴리아마이드 재생

두 번째 정제 공정후 폴리아마이드를 2.5 BV의 1:1 MeOH-물로 재생시키고 pH 3.4의 AcOH(2.5 ℓ); 2.5 BV의 1:1 0.5% NaOH-아이소프로판올; 10 BV의 탈염수로 산성화하였다.

달바반신의 탈색 및 침전

달바반신 몰 당 1.5 몰의 1N HCl 및 달바반신 g 당 0.3 g의 목탄 CG1(0.85 ㎏, 노리트(NORIT))을 상기 수득한 258 ℓ의 용액에 가하였다. 혼합물을 실온에서 45분간 교반하였다. pH는 3.1이었다. 이어서, 현탁액을 세이츠-셴크(SEITZ-SCHENK)의 서프라 디스크(SUPRA DISC) 카트리지 모델 SDP-EK1 상에서 여과하고, 케이크를 50 ℓ의 H₂O/MeOH(8:2)로 세척하였다. 여액을 분석하고 250D의 컷오프를 갖는 MPS 44 막을 사용하여 나노여과시켜 다시 농축하였다. 119 g/ℓ의 달바반신을 함유하는 농축된 용액(pH 4.1, 1.9% MeOH, GC) 21.3 ℓ를 수득하였다. 909 ㎖의 1N HCl을 최종적으로 가하여 pH를 2.63으로 조정하였으며, 이것은 1.65 몰_HCl/몰_달바반신의 염화 비에 상응한다.

용액(22.2 ℓ)을 교반하면서 200 ℓ의 아세톤에 부었다. 경사분리후 수득된 고체를 원심분리하고 14 ℓ의 신선한 아세톤으로 세척하였다. 이어서, 17시간 동안 30℃ 아래로 내부 온도를 유지하면서, 생성물을 35℃에서 감압하에(50 mmHg) 건조하였다. 건조 공정시에, 1 ℓ의 저 내독소 물(<250 EU/㎖)를 각각 0.5 ℓ의 두 분획으로 나누어, 달리 제거하기 어려운 잔류 아세톤을 제거하기 위해 3 및 5시간 후에 고체상에 분무하였다. 이어서, 생성물을 체질(50 메쉬)하여 2592 g의 달바반신을 수득하였다(HPLC 분석 82.4%; 물(KF) 14%; Cl^- 3.0%).

실시예 14. A-40926 및 달바반신 제조에 대한 대체 방법

하기에 기술하는 방법은 A-40926 및 달바반신 제조 방법에 사용할 수 있는 대체 방법이다.

XAD -7 HP 상에서의 A-40926 제조

탈아세틸화 및 균사체 미세여과

A-40926을 함유하는 150 ℓ의 발효액(pH 7)을 실온(24℃)에서 적당한 반응기에서 교반하고, 2.5N NaOH 용액(2.5 ℓ)으로 pH 11.5로 조정하였다. 4시간 동안 교반한 후, 발효액을 15% HCl로 pH 10.6으로 조정하고 0.2 ㎛ 막을 통해 미세여과하였다. 439 ℓ의 투명 투과액을 수거한 다음, 250D의 컷오프를 갖는 MPS 44 막을 사용하여 나노여과에 의해 농축하였다. 수득된 A-40926 농축 용액을 pH 6.4로 조정하고 사용할 때까지 4℃에서 저장하였다.

컬럼 제조 및 정제

XAD-7 HP 수지(8 ℓ)를 1:1 물/메탄올 용액에 현탁하고, 여과하고, 연동식 펌프를 사용하여 적절한 유리-컬럼(내경 12 ㎝)내로 부하하였다.

이어서, 수지를 물로 세척하고, 물 ℓ 당 5 g의 탄산나트륨을 용해시키고 아세트산으로 pH를 조정하여 제조한 pH 6으로 완충된 탄산나트륨 수용액 6 BV로 평형화시켰다.

194 g의 A-40926을 함유하는 농축된 발효액 일부를 XAD-7 HP 컬럼상에 부하시켰다. 이어서, 존재하는 친수성 및 착색된 물질 부분을 제거하기 위해, 1/2 BV/시간의 유량으로 다음의 두 완충액을 사용하여 수지를 세척하였다: 30% 수산화나트륨으로 pH 5로 조정한 0.5% 아세트산 수용액 3 BV(24 ℓ); 5 ㎖의 아세트산/물 ℓ를 갖는 물/아세톤의 8:2 혼합물 5 BV(40 ℓ).

A-40926을 5 ㎖의 아세트산/물 ℓ로 산성화시킨 1:1 물/아세톤 혼합물 8 BV(64 ℓ)로 최종적으로 용출시켰다. 각각 4 ℓ씩 16개 분획을 수거하였다. A-40926 농도가 0.5 g/ℓ보다 큰 농축 분획(5 내지 15개)을 함께 모아 16 3.4 g의 A-40926을 함유하는 용액(43 ℓ, 3.8 g/ℓ)을 수득하였다. 컬럼 수율은 81.3%이었다. 0.23 g/ℓ(45.3 g, 22.2%)의 덜 순수한 A-40926을 함유하는 다른 분획(200 ℓ)을 방출하였다.

용출후, 수지를 1 BV(55 ℓ)의 0.5% NaOH/아이소프로판올(1:1) 혼합물로 재생시키고, 최종적으로 10 BV의 물로 중성이 될 때까지 세척하였다.

목탄 처리

수거한 분획을 37% HCl(70 ㎖)로 pH 2.5로 조정한 다음 50 g 목탄 유형 PA 200(0.3 g/A-40926 g)으로 탈색시켰다. 수득된 현탁액을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 KS 50 필터(d = 25 ㎝, 시간 = 2.5시간)를 통해 여과시켜 45.6 ℓ의 약간 황색 A-40926 용액(3.5 g/ℓ, 수율 = 96.4%)을 수득하였다.

농도

탈색된 용액을 30% NaOH(230 ㎖)로 pH 7로 조정하고 나노여과 및 한외여과로 농축하였다. 상기 기술들의 이용은 Rt = 2 내지 4분에서 HPLC 크로마토그램 상에서 검출된 친수성 물질의 제거에 중요하였다. 농축물이 출발 부피(4 ℓ)의 1/10으로 농축되면, 동일 부피의 물을 가하고 수득된 용액을 다시 농축하였다. 잔류 아세톤을 0.25%로 감소시키기 위해 상기 농축/희석 단계를 3회 반복하였다. 최종 용액(2.2 ℓ, 146.3 g의 A-40926, 66.5 g/ℓ, 수율 = 91.5%)을 HPLC로 분석하였다. 정제 수율은 75.4%이었다.

A-40926 결정화

300 ㎖ 분량의 A-40926 용액(19.9 g의 A-40926)을 실험실 등급 한외필터를 사용하여 100 ㎖로 더 농축한 다음 60 내지 65℃에서 가열하였다. 상기 용액의 pH를 7로 조정하고(30% NaOH), 농축 용액 ㎖ 당 1.2 ㎖의 5:1 아세톤/아이소프로판올 혼합물을 상기 온도에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 20℃로 냉각하였다. 1.5시간 후에, 수득된 고체를 여과시키고 필터상에서 아세톤으로 세척하고 40℃에서 15시간 동안 건조시켰다. 20.6 g의 생성물(HPLC 분석 82.0%; A-40926 16.9 g)을 수득하였다. 침전 수율은 84.9%이었다. 여과된 발효액으로부터 출발하여 전체 수율은 약 64%이었다.

CG -71 상에서의 A-40926 제조

컬럼 제조

CG-71 수지(350 ㎖)를 유리 컬럼(내경 = 4 ㎝)에 붓고 물로 세척하였다. 아세트산으로 pH 6에서 5 g의 탄산나트륨을 물에 용해시켜 제조된 탄산나트륨 용액 3 BV로 수지를 평형화시켰다. 14.7 g의 A-40926을 함유하는 250 ㎖의 발효액(pH 7)을 컬럼내에 부하시켰다(42 g/ℓ 수지). 수지를 다음의 세 용액으로 세척하였다: 아세트산으로 pH 6으로 조정한 탄산나트륨(5 g/ℓ) 수용액 1050 ㎖(3 BV); 아세트산으로 pH 8로 조정한 탄산나트륨(5 g/ℓ) 수용액 1750 ㎖(5 BV); 아세트산으로 pH 9로 조정한 탄산나트륨(5 g/ℓ) 수용액 3150 ㎖(9 BV).

이어서, 활성물질을 10 BV의 탈염수로 용출시켰다. 각각 500 ㎖씩 20개 분획을 수거하였다. 12 내지 15개 분획을 함께 모아 11.7 g의 A-40926을 함유하는 2.2 ℓ의 정제된 용액을 수득하였다(수율 = 79.6%). 이어서, 상기 용액을 한외여과에 의해 농축하고 농축 용액을 탈염수로 더 희석하고 다시 한외여과시켰다. 수득된 용액을 감압하에 50 ㎖로 더 농축하였다.

A-40926 결정화

농축된 용액을 60℃에서 가열하고, 교반하면서 5:1 아세톤/IPA 혼합물(60 ㎖)로 처리하였다. 이어서, 혼합물을 서서히 실온으로 냉각시켰다. 수득된 고체를 여과하고, 필터상에서 아세톤으로 세척하고, 35℃에서 진공하에 80시간 동안 건조하였다. 8.9 g의 정제된 A-40926(HPLC 분석 84.2%)을 수득하였다. 전체 수율은 51%이었다.

용매로서 N- 메틸 -2- 피롤리딘(NMP)을 사용하는 달바반신 합성법에서의 대체 아미드화

MA 혼합물을 교반하면서 1:1 NMP/MeOH 혼합물(64 ㎖)에 조금씩 가하였다. 완전 용액이 될 때까지 20 내지 25℃에서 교반을 계속한 다음, DMEPA(2.42 ㎖, 1.96 몰/eq_MA) 및 HOBT(1.06 g, 0.71 몰/eq_MA)를 가하였다. 반응 혼합물의 pH(물로 1:10으로 희석된 샘플상에서 검사)를 NMP 중 15% HCl(57.7 ㎖ NMP에 34.0 ㎖의 37% HCl을 용해시켜 미리 제조) 9.37 ㎖로 3.0으로 조정하였다. 이어서, NMP/MeOH(1:1)(2.7 ㎖) 중의 DCC(3.17 g, 1.57 몰/eq_MA)의 용액을 교반하면서 가하였다. 반응을 HPLC로 모니터하였다. 반응은 약 6시간 후에 완료되었다(MA-A-1 88.9%, MA 7.3%, ISO 3.7%). 상기 실험은 NMP가 아마이드화 반응에 DMSO에 대한 편리한 대안이 될 수 있음을 시사한다. 전체 공정은 상기 용매 변화에 영향을 받지 않았으며, 수득된 최종 달바반신은 다른 배치와 화학적으로 동등하였다.

달바반신 제조의 대체 방법: 원-포트 절차

10 g의 A-40926 착체(HPLC 적정 80.66%, 4.6 밀리몰)를 실온에서 100 ㎖ 유리 반응기에서 교반하면서 24 ㎖의 MeOH에 현탁하였다. 혼합물을 0℃에서 냉각하고, 16.4 ㎖ MeOH 중의 4 g HCl(가스)의 용액을 가하여 생성물 가용화를 완료하였다. 이어서, 교반을 24시간 동안 더 지속하면서 온도를 20℃로 상승시켰다.

이 시간 후에, 40 ㎖의 DMSO 및 0.4 g의 HOBT를 반응 혼합물에 가하였다.

이어서, 1,1-다이메틸아민 프로필아민을 가하여 생성된 반응 혼합물의 pH를 3 내지 3.1로 조정하였다(샘플을 물로 9:1로 희석한 후 측정). 그 다음, 1.8 g의 고체 DCC를 가하고 교반을 15시간 동안 더 계속하였다. 상기 시간 후에, 반응 혼합물을 1 ℓ의 유리 반응기로 옮기고 80 ㎖의 물로 희석하였다. 이어서, 240 ㎖의 15% NaOH를 가하여 pH를 12로 조정하였다. 교반을 60분간 더 지속하고 혼합물을 260 ㎖의 15% 수성 HCl로 pH 2.8로 산성화하였다. 6.4 g의 달바반신을 함유하는 약 800 ㎖의 최종 투명 용액을 수득하였다(수율 = 76%).

HPLC 분석 결과 수득된 생성물의 프로필은 다른 제조 방법에 의해 수득된 것에 필적하는 것으로 나타났다.

N ¹⁵ , N ¹⁵ - 다이알킬 항생물질 화합물

본 발명은, 예를 들면, 포유동물에서 미생물 감염을 예방하고/하거나 치료하는데 유용한 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 제공한다. 편의상, 본원의 설명에서, 달바반신 화합물은 미국 특허 제 5,750,509 호에 따라 도 26에 도시된 바와 같이 번호를 매긴다.

특정 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 3에 따른 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다:

특정 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 4에 따른 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다:

화학식 3 및 4는 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물의 펩타이드 코어를 제공한다. 펩타이드는 화학식 3 및 4에 도시된 바와 같이 우측에 아미노 말단 및 좌측에 카복시 말단을 가지면서 7개의 아미노산을 포함한다. 본 발명의 상기 태양에 따르면, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 아미노 말단 질소 또는 N¹⁵ 상에 2개의 알킬 치환체를 포함한다. 즉, 화학식 3 및 4에서 R¹ 및 R^1'는 알킬이다.

바람직한 태양에서, R¹ 및 R^1'는 C_{1 -4} 알킬이다. 특정 태양에서, R¹ 및 R^1'는 각각 독립적으로 프로필, 에틸 및 메틸로부터 선택된다. 또 다른 태양에서, R¹ 및 R^1'는 각각 독립적으로 에틸 및 메틸로부터 선택된다. 보다 바람직한 태양에서, R¹ 및 R^1'중 적어도 하나는 메틸이다. 가장 바람직한 태양에서, R¹ 및 R^1'는 메틸이다.

분자의 나머지 부분은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 달바반신 화합물과 동일한 방식으로 변형될 수 있다. 따라서, X는 상기 구획에서 정의한 바와 같은 아미노알킬기이다. 예시적인 아미노알킬아미노기는 미국 특허 제 5,750,509 호에 기술되어 있다. 특정 태양에서, X는 N,N-다이메틸아미노프로필아미노이다.

따라서, 특정 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 5에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다:

본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 바와 같이 하나 이상의 위치에서 글라이코실화될 수 있다. 바람직한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 화학식 3 또는 4의 위치 G 및 M에서 글라이코실화된다. 특정 태양에서, M은 수소 또는 당 잔기이다. 예를 들면, M은 수소, α-D-만노피라노실 또는 6-O-아세틸-α-D-만노피라노실일 수 있다. 특정 태양에서, G는 수소 또는 당 잔기이다. 예를 들면, G는 수소 또는 글루쿠로나민일 수 있다.

특정 태양에서, 당 잔기의 하나 또는 둘 다는 아실화 또는 아세틸화되거나 또는 둘 다일 수 있다. 예를 들면, G가 글루쿠로나민인 경우, 글루쿠로나민 잔기는 지방산으로 아실화될 수 있다. 지방산은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 임의의 지방산일 수 있다. 특정 태양에서, 지방산은 8-메틸 노나노산, n-데카노산, 9-메틸-데카노산, n-운데카노산, 10-메틸-운데카노산, n-도데카노산, 11-메틸-도데카노산, n-트라이데카노산, 12-메틸-트라이데카노산 및 n-테트라데카노산으로 이루어진 군에서 선택된다. 바람직한 태양에서, 지방산은 C₁₂ 지방산이다. 특정 태양에서, 지방산은 10-메틸-운데카노산이다.

특정 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 6에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다:

화학식 6에서, R²는 C_{10 -14} 아실이다. 특정 태양에서, R²는 8-메틸 노나노산, n-데카노산, 9-메틸-데카노산, n-운데카노산, 10-메틸-운데카노산, n-도데카노산, 11-메틸-도데카노산, n-트라이데카노산, 12-메틸-트라이데카노산 및 n-테트라데카노산으로 이루어진 군에서 선택된다. 바람직한 태양에서, R²는 C₁₂ 지방산이다. 특정 태양에서, R²는 10-메틸-운데카노산이다.

하기 합성 부분에서 기술하는 바와 같이, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물은 달바반신 화합물로부터 합성될 수 있다. 따라서, 본 발명의 특정 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물은 달바반신 A₀, A₁, B₀, B₁, C₀ 및 C₁의 당 잔기 및 지방산을 갖는다.

특정 태양에서, 본 발명은 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물을 제공한다. N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물은 N¹⁵에 2개의 메틸기를 갖는 화학식 1 또는 2를 포함한다. N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물은 전술한 바와 같이 하나 이상의 당 잔기로 글라이코실화될 수 있다. 특정 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물은 하나 이상의 상기 당 잔기 상에서 아실화된다. 바람직한 태양에서, 아실기는 10-메틸-운데카노산이다.

바람직한 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 7에 따른 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다:

특정 태양에서, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 정제된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 정제된다란 용어는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 조성물중에서 다른 달바반신 화합물에 비해 많음을 의미한다. 예를 들면, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 생성되는 혼합물, 예를 들면, 하기 실시예에서 기술하는 바와 같은 발효액으로부터 유도된 혼합물에 비해 다량일 수 있다. 특정 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 2, 3, 5, 10, 100, 1000 또는 10,000 배 더 많을 수 있다.

또 다른 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 단리된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 단리된다란 용어는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 조성물중 에서 비-달바반신 화합물보다 많은 것을 의미한다. 예를 들면, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 생성된 혼합물, 예를 들면, 하기 실시예에서 기술하는 바와 같은 발효액으로부터 유도된 혼합물에 비해 다량일 수 있다. 특정 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 2, 3, 5, 10, 100, 1000 또는 10,000 배 더 많을 수 있다.

또 다른 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 정제되고 단리된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 정제되고 단리된다란 용어는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 조성물중에서 비-달바반신 화합물 및 다른 달바반신 화합물보다 많은 것을 의미한다. 예를 들면, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 생성된 혼합물, 예를 들면, 하기 실시예에서 기술하는 바와 같은 발효액으로부터 유도된 혼합물에 비해 다량일 수 있다. 특정 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 2, 3, 5, 10, 100, 1000 또는 10,000 배 더 많을 수 있다.

N ¹⁵ , N ¹⁵ - 다이알킬 항생물질 화합물

본 발명은 카보닐 63에 카복실산기를 갖는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 제공한다. 이들 화합물은, 예를 들면, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화 합물을 제조하는데 유용하다. 특정 태양에서, 이들 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 또한 포유동물에서 미생물 감염을 예방하고/하거나 치료하는데 유용하다.

특정 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 8에 따른 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다:

특정 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 9에 따른 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다:

화학식 8 및 9는 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물의 펩타이드 코 어를 제공한다. 펩타이드는 화학식 3 및 4에 도시된 바와 같이 우측에 아미노 말단 및 좌측에 카복시 말단을 가지면서 7개의 아미노산을 포함한다. 본 발명의 상기 태양에 따르면, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 아미노 말단 질소 또는 N¹⁵ 상에 2개의 알킬 치환체를 포함한다. 즉, 화학식 1 및 2에서 R¹ 및 R^1'는 알킬이다. 또한, 화학식 8 및 9에서, X는 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 항생물질 A-40926 화합물에서와 같이 OH이다.

바람직한 태양에서, R¹ 및 R^1'는 C_{1 -4} 알킬이다. 특정 태양에서, R¹ 및 R^1'는 각각 독립적으로 프로필, 에틸 및 메틸로부터 선택된다. 또 다른 태양에서, R¹ 및 R^1'는 각각 독립적으로 에틸 및 메틸로부터 선택된다. 보다 바람직한 태양에서, R¹ 및 R^1'중 적어도 하나는 메틸이다. 가장 바람직한 태양에서, R¹ 및 R^1'는 메틸이다.

본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 바와 같이 하나 이상의 위치에서 글라이코실화될 수 있다. 바람직한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 화학식 8 또는 9의 위치 G 및 M에서 글라이코실화된다. 특정 태양에서, M은 수소 또는 당 잔기이다. 예를 들면, M은 수소, α-D-만노피라노실 또는 6-O-아세틸-α-D-만노피라노실일 수 있다. 특정 태양에서, G는 수소 또는 당 잔기이다. 예를 들면, G는 수소 또는 글루쿠로나민일 수 있다.

특정 태양에서, 당 잔기의 하나 또는 둘 다는 아실화 또는 아세틸화되거나 또는 둘 다일 수 있다. 예를 들면, G가 글루쿠로나민인 경우, 글루쿠로나민 잔기는 지방산으로 아실화될 수 있다. 지방산은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 임의의 지방산일 수 있다. 특정 태양에서, 지방산은 8-메틸 노나노산, n-데카노산, 9-메틸-데카노산, n-운데카노산, 10-메틸-운데카노산, n-도데카노산, 11-메틸-도데카노산, n-트라이데카노산, 12-메틸-트라이데카노산 및 n-테트라데카노산으로 이루어진 군에서 선택된다. 바람직한 태양에서, 지방산은 C₁₂ 지방산이다. 특정 태양에서, 지방산은 10-메틸-운데카노산이다.

특정 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 10에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다:

화학식 10에서, R²는 C_{10 -14} 아실이다. 특정 태양에서, R²는 8-메틸 노나노산, n-데카노산, 9-메틸-데카노산, n-운데카노산, 10-메틸-운데카노산, n-도데카노산, 11-메틸-도데카노산, n-트라이데카노산, 12-메틸-트라이데카노산 및 n-테트라데카노산으로 이루어진 군에서 선택된다. 바람직한 태양에서, R²는 C₁₂ 지방산이다. 특정 태양에서, R²는 10-메틸-운데카노산이다.

하기 합성 부분에서 기술하는 바와 같이, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물은 항생물질 A 40926 화합물로부터 합성될 수 있다. 따라서, 본 발명의 특정 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물은 항생물질 A 40926 인자 A₀, A₁, B₀, B₁, C₀ 및 C₁의 당 잔기 및 지방산을 갖는다.

특정 태양에서, 본 발명은 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물을 제공한다. N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물은 N¹⁵에 2개의 메틸기를 갖는 화학식 8 또는 9를 포함한다. N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물은 전술한 바와 같이 하나 이상의 당 잔기로 글라이코실화될 수 있다. 특정 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물은 하나 이상의 상기 당 잔기 상에서 아실화된다. 바람직한 태양에서, 아실기는 10-메틸-운데카노산이다.

바람직한 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 11에 따른 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다:

특정 태양에서, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 정제된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 정제된다란 용어는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 조성물중에서 다른 항생물질 화합물에 비해 많음을 의미한다. 예를 들면, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 생성되는 혼합물, 예를 들면, 하기 실시예에서 기술하는 바와 같은 발효액으로부터 유도된 혼합물에 비해 다량일 수 있다. 특정 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 2, 3, 5, 10, 100, 1000 또는 10,000 배 더 많다.

또 다른 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 단리된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 단리된다란 용어는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 조성물중에서 비-항생물질 화합물보다 많은 것을 의미한다. 예를 들면, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 생성된 혼합물, 예를 들면, 하기 실시예에서 기술하는 바와 같은 발효액으로부터 유도된 혼합물에 비해 다량일 수 있다. 특정 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 2, 3, 5, 10, 100, 1000 또는 10,000 배 더 많다.

또 다른 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 정제되고 단리된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 정제되고 단리된다란 용어는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 조성물중에서 비-항생물질 화합물 및 다른 달바반신 화합물보다 많은 것을 의미한다. 예를 들면, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 생성된 혼합물, 예를 들면, 하기 실시예에서 기술하는 바와 같은 발효액으로부터 유도된 혼합물에 비해 다량일 수 있다. 특정 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 2, 3, 5, 10, 100, 1000 또는 10,000 배 더 많다.

본 발명 화합물의 제조 방법

본 발명의 화합물은 상기 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 제조하기 위한, 당해 분야에 숙련된 자에게 명백한 임의의 방법에 따라 제조할 수 있다.

예를 들면, 특정 태양에서, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 당해 분야에 숙련된 자에게 명백한 임의의 기술에 의해 상응하는 N¹⁵-모노메틸 화합물 또는 조성물을 알킬화시켜 제조할 수 있다. 예를 들면, N¹⁵-모노메틸 화합물 또는 조성물은, 반응식 1에 예시된 바와 같이 실온에서 상기 화합물 또는 조성물을 HCHO, NaBH₃CN, DMF, H₂O 및 NaHCO₃의 혼합물과 접촉시킴으로써 메틸화할 수 있다. 특정 태양에서, N¹⁵-모노메틸 달바반신 화합물 또는 조성물을 물 및 DMF에 용해시키고, 여기에 폼알데하이드 및 중탄산나트륨을 가한후 NaBH₃CN을 가하여 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물 또는 조성물을 수득한다.

상응하는 N¹⁵-모노메틸 화합물 또는 조성물은, 본원에 그대로 참고로 인용된 미국 특허 제 5,750,509 호 및 미국 특허출원 공개번호 US 2004/1042883 호에 광범위하게 기술된 바와 같은 발표된 기술에 따라 제조할 수 있다. 화합물 또는 조성물이 그 N¹⁵ 질소 상에 보호기를 갖는 정도로, 이들은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 임의의 기술에 의해 제거될 수 있다.

적당한 출발 물질로는 달바반신 A₀, A₁, B₀, B₁, C₀ 및 C₁, 및 항생물질 A 40926 인자 A₀, A₁, B₀, B₁, C₀ 및 C₁이 포함된다. 하기 실시예에 나타낸 바와 같이, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B₀는 상기 방법에 따라 달바반신 B₀로부터 제조하였다. 이들 달바반신 화합물의 제조는 미국 특허출원 공개 번호 US 2004/0142883 호에 광범위하게 기술되어 있다. 이들 달바반신 화합물은 하기의 구조를 갖는다:

상기에서, R은 다음과 같다:

또 다른 태양에서, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 항생물질 A 40926 발효액으로부터 제조할 수 있다. 항생물질 A 40926 및 관련 화합물을 포함하는 발효액은, 예를 들면, 미국 특허 제 5,750,509 호 및 미국 특허출원 공개 번호 US 2004/0142883 호에 기술된 기술에 따라 제조할 수 있다. 발효액을 정제하 여 목적하는 항생물질 A 40926 화합물을 수득할 수 있고, 이것은 미국 특허 제 5,750,509 호 및 미국 특허출원 공개 번호 US 2004/0142883 호에 따라 에스터화, 아마이드화 및 가수분해시켜 달바반신 화합물의 혼합물을 수득할 수 있다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 당해 분야에 숙련된 자에게 명백한 임의의 기술에 따라 혼합물로부터 정제 및/또는 단리할 수 있다. 하기 실시예에서는, HPLC 기술을 이용하여 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 정제한다.

조성물

또 다른 태양에서, 본 발명은 하나 이상의 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 일반적으로, 본 발명의 조성물은 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 다른 화합물을 포함한다. 다른 화합물은 본 발명의 화합물, 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 화합물, 이제 발견되거나 발표될 화합물 또는 다른 화합물일 수 있다.

특정 태양에서, 조성물은 하기 부분에서 보다 상세히 기술된, 약학 조성물이다.

특정 태양에서, 조성물은 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 및 달바반신 또는 항생물질 A 40926 화합물을 포함한다. 달바반신 또는 항생물질 A 40926 화합물은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 임의의 달바반신 또는 항생물질 A 40926 화합물일 수 있다. 예시적인 달바반신 화합물로는 본원에 그대로 참고로 인용된 미국 특허 제 5,750,509 호 및 미국 특허출원 공개 번호 US 2004/0142883 호에 기술된 것들이 포함된다. 예시적인 항생물질 A 40926 화합물은 본원에 그대로 참고로 인용된 미국 특허 제 4,935,238, 4,868,171 및 4,782,042 호에 기술되어 있다.

예시적인 달바반신 화합물로는 달바반신 A₀, A₁, B₀, B₁, C₀ 및 C₁이 포함된다. 이들 달바반신 화합물의 제조는 미국 특허출원 공개 번호 US 2004/0142883 호에 광범위하게 기술되어 있다. 이들 달바반신 화합물은 상기 부분에 더 기술되어 있다. 물론, 본 발명의 조성물은 상기에서 예시적인 달바반신 화합물 중에 열거되지 않은 또 다른 달바반신 화합물을 포함할 수 있다.

특정 태양에서, 조성물은 본 발명의 화합물의 다량체를 포함한다. 다량체는 이량체, 삼량체 또는 그 이상일 수 있다. 다량체는 단독다량체, 이종다량체 또는 단독다량체와 이종다량체의 혼합물일 수 있다. 예를 들면, 다량체는 임의의 달바반신 인자 A₀, A₁, B₀, B₁, B₂, C₀, C₁, D₀, D₁, MAG 또는 아이소B₀를 포함하여, 달바반신 조성물에 존재하는 임의의 인자들의 혼합물을 포함할 수 있다. 예를 들면, 다량체는 N¹⁵-알킬 달바반신 화합물 및 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 달바반신 화합물을 포함할 수 있다. 특정 태양에서, 본 발명은 또한 본 발명 화합물의 단독이량체를 제공한다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명의 화합물과 달바반신 화합물의 단독이량체를 제공한다. 달바반신 화합물은 본 발명의 달바반신 또는 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 달바반신일 수 있다.

특정 태양에서, 본 발명의 조성물은 달바반신 또는 항생물질 A 40926 화합물 에 비해 상당량의 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 포함한다. 특정 태양에서, 달바반신 또는 항생물질 A 40926 화합물에 대해, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 조성물의 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.6, 1.7, 1.75, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다. 바람직한 태양에서, 화합물은 화학식 5에 따른다.

특정 태양에서, 본 발명의 조성물은 달바반신 화합물에 비해 상당량의 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 포함한다. 특정 태양에서, 달바반신 화합물에 대해, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 조성물의 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.6, 1.7, 1.75, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다. 바람직한 태양에서, 화합물은 화학식 5에 따른다.

특정 태양에서, 본 발명의 조성물은 항생물질 A 40926 화합물에 비해 상당량의 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 포함한다. 특정 태양에서, 항생물질 A 40926 화합물에 대해, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 조성물의 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.6, 1.7, 1.75, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다. 바람직한 태양에서, 화합물은 화학식 5에 따른다.

특정 태양에서, 본 발명의 조성물은 다른 화합물에 비해 상당량의 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 포함한다. 특정 태양에서, 다른 화합물에 대해, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 조성물의 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.6, 1.7, 1.75, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다. 바람직한 태양에서, 화합물은 화학식 5에 따른다.

또 다른 태양에서, 본 발명은, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물과 함께 달바반신 A₀, A₁, B₀, B₁, C₀ 및 C₁을 포함하며, 본 발명 화합물의 양이 달바반신 A₀, A₁, B₀, B₁, C₀ 및 C₁중 하나 이상 또는 전부에 비해 많은 조성물을 제공한다. 상기 조성물은, 예를 들면, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이, 달바반신 A₀, A₁, B₀, B₁, C₀ 및 C₁의 하나 이상 또는 전부에 비해 조성물의 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.6, 1.7, 1.75, 1.8, 1.9, 2.0, 2.5, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이도록 증대될 수 있다. 바람직한 태양에서, 화합물은 화학식 5에 따른다.

특정 태양에서, 본 발명은 달바반신 B₀ 및 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물 질 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 달바반신 B₁ 및 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 또 다른 태양으로, 본 발명은 달바반신 B₀, 달바반신 B₁ 및 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 바람직한 태양에서, 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 화학식 5에 따른다. 특히 바람직한 태양에서, 본 발명은 화학식 5의 화합물, 달바반신 B₀ 및 달바반신 B₁을 포함하는 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 정제되거나, 단리되거나, 또는 정제되고 단리될 수 있다. 특정 태양에서, 조성물은 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 98.5, 99 또는 99.5% 순수하다. "순수한"이란 조성물이 조성물의 화합물의 그 양을 포함함을 의미한다. 예를 들면, 화학식 5의 화합물, 달바반신 B₀ 및 달바반신 B₁을 포함하는 조성물은, 조성물 중 다른 화합물에 비해 상기 3개 화합물을 적어도 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 98.5, 99 또는 99.5% 포함한다. 순도는 HPLC와 같이 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들면, 곡선하 면적%에 의해 평가할 수 있다.

사용 방법

세균 감염의 치료를 필요로 하는 개인에게 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 투여하는 방법이 제공된다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이 알킬 항생물질 화합물은 화학식 5에 따른다. 처리에는 예방, 치료 또는 회복이 포함될 수 있다. 방법은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 치료 또는 예방 효과량으로 투여함을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "치료 효과량"은 질환을 치료하기 위해 대상에게 투여될 때, 목적하는 치료 결과(예를 들면, 세균 감염의 감소 또는 배제)를 제공하는 화합물 또는 조성물의 양을 말한다. "치료 효과량"은 특히, 화합물, 질환 및 그의 중증도, 치료되는 대상의 연령, 체중 등에 따라 달라질 수 있으며, 하나 이상의 용량으로 투여될 수 있다. "예방 효과량"은 세균 감염에 민감하고/하거나, 예를 들면, 의료 절차 또는 병원 체류로 인해 세균 감염에 걸릴 수 있거나 세균 감염을 가진 개인에게 노출될 수 있는 개인에게 투여될 때 추후의 세균 감염을 예방하거나 그 중증도를 감소시키기에 충분한 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 양을 말한다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 약학적으로 허용되는 담체중에 투여될 수 있다.

N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은, 개인에게 투여시, 수일동안, 적어도 약 5일, 1주일 또는 10일동안 화합물의 치료 또는 예방 효과적 혈장 농도를 제공하기에 충분한 화합물의 양을 포함하는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 배합물에 "단위 용량"으로 투여될 수 있다. 일부 태양에서, 화합물은 화학식 5에 따른다. 일부 태양에서, 화합물은 적어도 약 5일, 1주일 또는 10일동안 화합물의 치료 또는 예방 효과적 농도를 제공하기에 충분한 화합물의 양을 포함하는 배합물의 한 성분이다. 투여 간격 또는 투약간 시간은, 예를 들면, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25일 이상일 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "개인" 또는 "대상" 또는 "환자"는 상호교환적으로 사용되며, 척추동물, 전형적으로 포유동물, 종종 인간을 말한다.

또한, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 화합물, 조성물, 및/또는 조성물에 존재하는 하나 이상의 다른 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 또는 다른 항생물질 성분의 분해를 억제하는 안정화제와 함께 배합될 수 있다. 일부 태양에서, 안정화제는 만니톨, 락토스, 슈크로스, 솔비톨, 글라이세롤, 셀룰로스, 트레할로스, 말토스, 라피노스 및 그의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된다. 한 태양에서, 배합물은 만니톨을 포함한다. 또 다른 태양에서, 배합물은 또한 락토스를 포함한다. 한 태양에서, 조성물은 1:2 중량비의 만니톨:N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물로 배합될 수 있다. 또 다른 태양에서, 조성물은 1:1:4 중량비의 만니톨:락토스:N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물로 배합될 수 있다.

일부 태양에서, 조성물 또는 다른 배합물은 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물, 달바반신 화합물 또는 그의 혼합물을 포함한다. 조성물 또는 다른 배합물은 수일동안, 종종 적어도 약 5 내지 약 10일, 종종 적어도 약 1주일동안 약물의 치료 효과적(즉, 살균성) 혈장 농도를 제공하는 투여량으로 투여될 수 있다. 예를 들면, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 혈장내에 적어도 5일동안 약 4 ㎎/ℓ의 최소 살균 농도 이상으로 유지될 수 있다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 적어도 5일동안, 적어도 약 1주일 이상 동안 약 5 ㎎/ℓ 이상, 약 10 ㎎/ℓ 이상, 약 20 ㎎/ℓ 이상, 약 30 ㎎/ℓ 이상, 약 40 ㎎/ℓ 이상의 혈장 농도로 유지될 수 있다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 혈장 농도는 당해 분야에 공지된 방법, 예를 들면, 액체 크로마토그래피, 질량 분광법 또는 미생물학적 생물검정법에 의해 측정될 수 있다.

N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물 혈장 농도 수준에 대한 상한치는 치료된 환자 개체군에서 허용될 수 없는 이상 반응을 억제하는 투여량에 의해 결정될 수 있다.

N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 단일 용량으로 투여되는 경우, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 생체내에서 적어도 5일동안, 또는 적어도 6일동안, 또는 적어도 7일동안, 또는 적어도 8일동안, 또는 적어도 9일동안, 또는 적어도 10일동안, 또는 적어도 11일동안, 또는 적어도 12일동안, 또는 적어도 13일동안, 또는 적어도 14일동안, 또는 적어도 15일동안 항균성을 나타내기에 충분한 양의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물(들)을 함유하도록 배합된다.

다중 용량을 사용하는 경우, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 2주일 이상 동안 매주 투여될 수 있다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 둘 이상의 용량으로, 종종 약 5 내지 약 10일 간격의 두 용량으로, 보다 종종 2주 동안 1주일에 1회 투여된다. 특정 태양에서, 상기 방법은 통상적인 항생물질 치료 프로토콜에 비해 상당한 이점을 제공한다.

N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 또한 다중 용량으로 2일 이상 또는 적어도 1주일 간격으로, 또는 하나 이상의 격주 용량으로 투여될 수 있다. 일부 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 매주 투여된 후, 격주로 또는 매달 투여될 수 있다. 일부 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 2, 3, 4, 5, 6 주 이상 동안 1주일 간격으로 투여될 수 있다.

가장 유리하게는, 보다 적은 횟수의 보다 고 용량을 사용하기 때문에 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 매일 투여는 필요하지 않다. 단일 또는 다중 용량은, 예를 들면, 약 0.1 내지 약 5 g의 범위일 수 있다. 약 0.1 내지 약 4 g, 예를 들면, 약 3 g의 단일 용량을 다양한 감염 치료를 위해 투여할 수 있다. 다중 용량을, 예를 들어, 매주 투여하는 경우, 각각의 용량은, 예를 들면, 약 0.25 내지 약 5 g의 범위일 수 있다.

감염 치료를 위해 단일 용량을 투여하는 태양에 있어, 투여량은, 예를 들면, 약 0.1 내지 약 5 g, 또는 약 0.5 내지 약 4 g, 또는 약 1 내지 약 3.5 g, 또는 약 2 내지 약 3 g, 예를 들면 약 3 g일 수 있다. 일부 태양에서, 약 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3 g의 단일 용량을 세균 감염의 치료를 위해 투여할 수 있다. 예방을 위해 단일 용량을 투여하는 태양의 경우, 투여량은, 예를 들면, 약 0.1 내지 약 3 g, 또는 약 0.1 내지 약 1 g, 예를 들면, 약 0.5 내지 약 0.25 g일 수 있다.

다중 투여를 포함하는 투약 계획에서, 개개의 투여량은 같거나 다를 수 있다. 일부 태양에서, 하나 이상의 후속 용량보다, 더 높은 1차 용량, 즉, 예를 들면, 약 1.5 내지 3 배 이상 더 높은 용량을 투여할 수 있다. 예를 들면, 1차 용량은 약 0.5 내지 약 5 g이고 2차 용량은 약 0.25 내지 약 2.5 g일 수 있거나, 1차 용량은 약 0.8 내지 약 2 g이고 2차 용량은 약 0.4 내지 약 1 g일 수 있거나, 또는 1차 용량은 약 0.4 내지 약 3 g이고 2차 용량은 약 0.2 내지 1.5 g일 수 있다.

일부 태양에서, 1차 투여량이 후속 투여량보다 약 2 배의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 포함하는, 둘 이상의 투여량을 투여한다. 한 태양에서, 1차 투여량은 약 1 g의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 포함하고, 후속 투여량은 약 0.5 g을 포함한다. 또 다른 태양에서, 1차 투여량은 약 0.5 g 및 약 0.25 g의 후속 투여량을 포함한다.

일부 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 2일 이상 또는 약 1주일 이상의 간격으로 같거나 다른 양의 두 용량으로 투여할 수 있다. 예를 들면, 약 0.2 내지 약 1.5 g의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 두 용량을 약 5 내지 약 10일 간격, 또는 약 1주일 간격으로 투여할 수 있다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 약 1 g의 1차 투여량 및 약 0.5 g의 2차 투여량을 약 1주일 간격으로 투여할 수 있다.

다중 투여 방법에서, 투약간 시간은, 예를 들면, 약 5 내지 약 10일, 종종 약 1주일의 범위일 수 있다. 투약 횟수는, 예를 들면, 주 1회의 두 용량, 또는 주 1회의 다중 용량일 수 있다. 투약 간격 또는 투약간 시간은, 예를 들면, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25일 이상일 수 있다. 주어진 용량의 수는, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6개 이상의 용량일 수 있으며, 초기 용량 후 각각의 용량은 선택된 투여 간격 후에 주어진다.

특정 태양의 다중 투약 계획에서, 1차 투약 후 및 2차 용량 투여 직전에 혈장내 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 "최저 농도" 또는 농도는 약 4 ㎎/ℓ 이상일 수 있다. 약 1주일과 같은 투약 간격 마지막에 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 최저 농도는 약 20 ㎎/ℓ 이상, 약 30 ㎎/ℓ 이상, 또는 약 40 ㎎/ℓ 이상일 수 있다.

N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 비경구로, 예를 들면, 근육내(i.m.), 정맥내(i.v.), 피하(s.c.), 복강내(i.p.) 또는 척수강내(i.t.)로 투여할 수 있다. 투약 스케쥴 및 투여되는 실제 투여량은 감염 특성 및 중증도, 환자의 연령, 체중 및 일반 건강상태, 및 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물에 대한 특정 환자의 내성과 같은 요인들에 따라 달라질 수 있지만, 건강 전문가에게 확인가능할 것이다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 1 g 정맥내 용량에 이어, 1주일 후에 0.5 g의 정맥내 용량을 투여할 수 있다.

환자에게 약물을, 예를 들어, 정맥내로 투여 및 전달하는 것은, 혈중 농도가 너무 빨리 증가하지 않도록 또는 침전이 일어나지 않도록 조절된 속도로 수행할 수 있다. 일부 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 약물이 혈류중의 내인성 단백질(들)과 착체를 형성하도록 적절한 속도로 투여될 수 있다. 특정 이론에 결부되고자 하는 것이 아니라, 인간 혈청 알부민과 같은 내인성 단백질은 생체내에서 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 1 또는 2개 분자와 착체를 형성할 수 있는 것으로 생각될 수 있다. 충분한 양의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 조성물이 존재하는 경우, 2개 이하의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 내인성 단백질에 결합할 수 있는 것으로 생각되며, 상기 착체는 2개의 상이한 결합 부위에서 별도의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물의 결합에 의해 형성될 수 있는 것으로 생각된다. 또는, 이량체 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질은 내인성 단백질 상의 단일 결합 부위에 결합할 수 있다.

N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 주입 기간은, 예를 들면, 약 1분 내지 약 2시간일 수 있다. 예를 들면, 용량이 약 0.5 내지 약 1 g인 경우, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물에 약 30분의 주입 기간을 이용할 수 있다. 조절된 속도 조건하에서 정맥내 투여는 시험관내에서 생리적 pH에서 액상으로 달성될 수 있는 것보다 훨씬 과량인 체내 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 농도를 제공할 수 있다. 이론에 제한받길 원하는 것은 아니지만, 이것은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질과 혈청 알부민 같은 내인성 단백질(들)과의 착체 형성에 기인할 수 있으며, 상기 착체 형성은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 흡수하는 혈장의 용량을 증가시킬 수 있다.

특정 태양에서, 시험관내 또는 생체외에서 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 착체의 형성은, 예를 들면, 약 1분 이상, 또는 약 10분 이상, 또는 약 20분 이상과 같이 보다 빠른 투여를 가능케 할 수 있다. 상기 착체는 인간 혈청 알부민 및/또는 또 다른 내인성 단백질을 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물과 혼합하여 시험관내 또는 생체외에서 착체를 형성함으로써 달성한 다음, 상기 착체를 치료받는 환자에게 투여할 수 있다. 또는, 인간 혈청 알부민 또는 다른 내인성 단백질은 자가조직 공급원으로부터, 또는 단백질에 대한 유전자를 함유하도록 변형된 미생물로부터의 발현에 의해 수득할 수 있다.

투여되는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 양은 본원에 개시된 임의의 투여량일 수 있다. 용량은 일반적으로, 하나 이상의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 연장된 시간 동안, 예를 들면 5일 이상, 또는 약 1주일 이상 동안 치료 또는 예방 효과적인(즉, 살균) 혈장 농도를 유지하도록 선택될 수 있다. 약 1주일 이상(또는 약 5 내지 약 10일) 동안 살균 농도를 제공하고 유지하는 용량의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 투여하는 것이 바람직하다. 살균 농도는 시험관내 실험 개시때 존재하는 세균의 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 또는 약 95%, 96%, 97 %, 98% 또는 99% 이상을 24시간 동안 사멸시키는데 필요한 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 농도로 정의될 수 있다. 혈장내 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 최소 살균 농도는 전형적으로 약 4 ㎎/ℓ일 수 있다.

N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물, 조성물 및 본 발명의 방법을 이용하여 예방 또는 치료될 수 있는 적응증의 예로는 복잡성 및 단순 SSTI, 혈류 감염(BSI), 카테터-관련 혈류 감염(CRNSI), 골수염, 인공 관절 감염, 외과적 예방, 심장내막염, 병원 또는 지역사회 획득성 폐렴, 폐렴구균성 폐렴, 발열성 호중구감소증의 경험 치료법, 관절강 감염, 및 장치 감염(예를 들면, 자동심장박동기 및 내부 심장 제세동기)이 포함된다. 바실러스, 코리네박테리아, 리스테리아, 엔테로코커스, 스 태필로코커스, 스트렙토코커스, 네이세리아, 또는 클로스트리듐 속 감염, 특히, 스태필로코커스 오레우스 , 스태필로코커스 에피더미디스 , 스태필로코커스 헤몰라이티커스 , 스트렙토코커스 피오제네스 , 스트렙토코커스 뉴모니에 , 그룹 A 및 C 스트렙토코커스 , 엔테로코커스 페칼리스 , 바실러스 서브틸리스 , 네이세리아 고노르호에아 또는 클로스트리듐 디피사일과 같은 그램-양성 또는 항생물질-내성 세균 감염을 예방 또는 치료할 수 있다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물, 조성물 및 본 발명의 방법을 이용하여 예방 또는 치료될 수 있는 다른 감염증으로는, 바르토넬라, 브루셀라, 캄필로박터, 엔테로박터, 에스케리키아(및 다른 프로테오박테리아), 프랜시셀라, 헬리코박터, 헤모필러스, 클렙시엘라, 레지오넬라, 렙토스피라, 모가넬라, 모라셀라, 프로테우스, 프로비덴시아, 슈도모나스, 살모넬라, 세라티아, 쉬젤라, 스테노트로포모나스, 비브리오 및 예시니아 속 감염, 특히, 에스케리키아 콜라이 , 프로테우스 불가리스 , 슈도모나스 에루기노사스 및 효모, 예를 들면, 캔디다 알비칸스 감염과 같은 그램 음성 세균 감염이 포함된다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법을 이용하여, 다른 감염성 세균, 예를 들면, 헬리코박터 필로리스( Helicobacter pyloris ), 보렐리아 버그도페리( Borelia burgdorferi ), 레지오넬라 뉴모필리아 ( Legionella pneumophilia ), 마이코박테리아 스포로조이테스(속)(예를 들면, 마이코박테리아 튜베르큘로시스(M. tuberculosis), 마이코박테리아 아비움 (M. avium ), 마이코박테리아 인트라셀룰라레(M. intracellulare ), 마이코박테리아 칸사이 (M. kansaii ), 마이코박테리아 고도 네(M. gordonae )), 네이세리아 메닌지티디스 ( Neisseria meningitidis ), 리스테리아 모노사이토제네스( Listeria monocytogenes ), 스트렙토코커스 피오제네스(그룹 A 스트렙토코커스 ), 스트렙토코커스 아갈락티에(S. agalactiae)(그룹 B 스트렙토코커스 ), 스트렙토코커스 ( 비리단스 군), 스트렙토코커스 보비스 , 스트렙토코커스(혐기성속), 병원성 캠필로박터 속, 엔테로코커스 속, 헤모필러스 인플루엔자, 바실러스 안트라시스( Bacillus antracis ), 코리네박테리움 디프테리아( Corynebacterium diphtheriae), 코리네박테리움 속 , 에리시펠로트릭스 러시오파티에( Erysipelothrix rhusiopathiae), 클로스트리듐 퍼프린젠스 ( Clostridium perfringens ), 클로스트리듐 테타니(C. tetani ), 엔테로박터 에로제네스 ( Enterobacter aerogenes ), 클렙시엘라 뉴모니에 , 파스튜렐라 멀토시다 , 박테로이데스 속, 퓨소박테리움 뉴클레아텀( Fusobacterium nucleatum ), 스트렙토바실러스 모닐리포미스( Sterptobacillus moniliformis), 트레포네마 팔리듐 ( Treponema pallidium ), 트레포네마 퍼테뉴( Treponema pertenue ), 렙토스피라( Leptospira ) 및 액티노마이세스 이스라엘리( Actinomyces israelli) 감염의 예방 또는 치료를 포함한다.

본원에 기술된 감염 및 질환의 예방 및 치료는 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법을 이용하여 수행될 수 있다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 화학식 5에 따른다. 일부 태양에서, 대상은 반코마이신 또는 테이코플라닌과 같은 하나 이상의 항생물질로 이전에 처리받은 적이 없다. 다른 태양으로, 대상은 이전에 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물로 치료받은 적이 없다. 일부 태양에서, 환자는 항생물질에 대한 세균 내성에 대해 이전에 시험받은 적이 있다. 다른 태양에서, 환자는 이전에 항생물질에 대한 세균 내성에 대해 시험받은 적이 없다.

본 발명은 또한 SSTI의 예방 또는 치료 방법을 포함한다. 상기 예방 또는 치료로부터 이점을 얻을 수 있는 환자는 심부 또는 표재성 감염을 가질 수 있다. SSTI는 보다 심부의 연조직을 포함할 수 있고/있거나, 예를 들면, 주 농양, 감염된 궤양, 주 화상 또는 심하고 광범위한 봉와직염과 같이 상당한 외과적 처리를 필요로 할 수 있다. 감염된 수술 상처도 또한 예방 또는 치료할 수 있다.

피부 및 피부 조직 감염의 임상적 징후는 가벼운 모낭염으로부터 심한 괴사성 근막염까지 다를 수 있다. 획득 방식은 또한 지역사회 획득성 피부 및 피부조직 감염에 따라 달라질 수 있으며, 상기 감염은 종종 직업적 노출 또는 오락 활동으로부터 비롯된 상처가 앞서며 통상적으로 매우 다양한 병원균과 관련된다. 병원-획득성 피부 및 피부조직 감염은 일반적으로 수술 절차, 욕창의 진전 및 도뇨와 관련된다. 수술후 감염이 세 번째로 흔한 병원성 감염이며, 국립 원내 감염 감독 기구(National Nosocomial Infection Surveillance System, NNIS)에 보고된 모든 병원성 감염의 17%를 차지한다. 가장 흔한 감염원은 환자의 내인성 세균일 수 있다. 스태필로코커스 오레우스, 응고효소-음성 스태필로코커스 및 엔테로코코스 속이 SSTI에서 가장 흔히 분리되는 병원균이다.

SSTI 감염의 증상은 홍반, 압통 또는 통증, 발열 또는 편재화된 열감, 배농 또는 객담, 종창 또는 경화, 발적 또는 파동이 포함될 수 있다. 본 발명의 방법에 의한 치료로부터 이점을 얻을 수 있는 환자로는 심부 또는 복잡성 감염 또는 외과적 처리가 필요한 감염을 갖는 환자 또는 근원적인 당뇨병 또는 말초 혈관 장애를 갖는 환자가 포함된다. 상기 감염은 종종 스태필로코커스 또는 스트렙토코커스 종, 예를 들면, 스태필로코커스 오레우스 또는 스트렙토코커스 피오제네스와 같은 그램-양성 세균에 의해 유발된다. 피부 또는 연조직 세균 감염의 치료 방법은 치료 효과량의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 상기 논의한 바와 같은 투여 방법에 따른 양으로 상기 방법에 따라 치료를 필요로 하는 개인에게 투여함을 포함한다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 화학식 5에 따른다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 정맥내로 두 개 용량으로, 약 5 내지 약 10일 간격, 또는 약 1주일 간격으로 투여된다. 일부 태양에서, 1차 투여량은 2차 투여량의 2 배 이상의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 포함한다. 한 태양에서, 1차 투여량은 약 1000 ㎎이고, 2차 투여량은 약 500 ㎎이다.

당해 분야에 숙련된 자에게 주지되듯이, 본원에 기술된 투여 방법은 특히 화합물, 질환 및 그 중증도, 및 치료될 대상의 연령, 체중 등에 따라 달라질 수 있으나, 과도한 실험없이 의사에 의해 확인될 수 있다.

본 발명은 또한 세균 감염, 예를 들면, 스태필로코커스 오레우스 또는 네이세리아 또는 클로스트리듐 속 세균에 의해 야기된 감염의 개시를 예방하는 방법을 포함한다. 본 발명의 예방 방법에서는, 예방 효과량의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을, 예를 들면, 의료 절차를 통해 세균 감염에 걸리기 쉬울 수 있는 개인에게 투여한다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 약 1일 이상, 약 3일 이상, 약 5일 이상, 또는 약 1주일 이상 동안 예방 효과적 혈장 농도를 제공하기에 충분한 양으로 투여될 수 있다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 감염에 대한 예방 단계로서의 수술 이전 또는 수술에 이어 또는 수술과 동시에, 예를 들면, 비경구적으로, 예를 들면, 근육내(i.m.), 정맥내(i.v.), 복강내(i.p.), 피하(s.c.) 또는 척수강내(i.t.) 주입에 의해 투여할 수 있다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은, 수술과 같은 침입성 의료 절차 또는 감염을 예방하기 위해 병원과 같은 의료 관리 시설에 체류 직전, 또는 그에 이어, 또는 1일 이상 또는 약 1주일 전이나 그에 이어, 또는 그 동안에 투여될 수 있다. 예방 방법은 개인이 세균 감염된 개인에게 노출되었거나 또는 노출되기 쉬운 상황을 포함하여, 개인이 세균 감염에 걸릴 수 있거나 걸리기 쉬운 임의의 상황에서 이용될 수 있다. 예방 방법에 있어, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 단일 용량, 또는 수일 내지 약 1주일 간격으로 투여되는 같거나 다른 양의 둘 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 혈류 관련 감염을 예방하기 위해, 정맥내 카테터의 삽입 전 또는 삽입과 동시에 투여될 수 있다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 화학식 5에 따른다.

예방 방법의 경우, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 전술한 임의의 투여 방법에 따라 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 약 0.1 내지 약 3 g, 또는 약 0.1 내지 약 1 g, 예를 들면, 약 0.25 g 또는 약 0.5 g을 포함하는 단일 용량으로 투여될 수 있다. 한 태양에서, 약 0.25 g의 단일 용량을 약 2분 내지 약 1시간의 시간 내에, 예를 들면, 약 30분에 걸쳐 정맥내 투여할 수 있다. 또 다른 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 또 다른 약학적(예를 들면, 항생물질) 치료제의 투여와 동시에 정맥내 투여될 수 있다.

전술한 임의의 치료 또는 예방 방법에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 하나 이상의 다른 항생물질과 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 일부 태양에서, 하나 이상의 그램-음성 세균 종 및/또는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 효과가 없는 그램-양성 세균 균주에 대해 효과적(예를 들면, 살균성)일 수 있는 하나 이상의 다른 항생물질을 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 이외에 투여할 수 있다. 일부 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물, 및 하나 이상의 그램-음성 세균 종에 대해 효과적(예를 들면, 살균성)일 수 있는 하나 이상의 항생물 질을 달바반신 조성물 중의 혼합물로서 투여할 수 있다.

약학 조성물

본 발명은 전술한 방법에 따라 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 투여하기 위해 배합된 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 약학 조성물은, 화합물 또는 조성물을 개인에게 투여할 때 수일동안, 약 3일 이상, 약 5일 이상, 또는 약 1주일 이상 동안 치료 또는 예방 효과적인 혈장 농도의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 제공하기에 충분한 양의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 단위 용량의 형태일 수 있다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 치료 또는 예방 효과적인 혈장 농도는 혈장 ℓ 당 약 4 ㎎ 이상일 수 있다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 혈장 농도는 액체 크로마토그래피, 질량 분광법 또는 미생물학적 생물검정법과 같은 당해 분야에 공지된 방법에 의해 측정할 수 있다. 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 바와 같이, 혈청내 다른 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 농도는 유사한 방법을 이용하여 혈청내에서 정량화할 수 있다.

N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 선택적으로, 예를 들면, 약학적으로 허용되는 무독성 염으로서 개인에게 투여하기 위한 약학적으로 허용되는 형태일 수 있다.

N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물의 적당한 염의 예로는 유기 및 무기 산, 예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산, 트라이클로로아세트산, 석신산, 시트르산, 아스콜브산, 락트산, 말레산, 글루탐산, 캄포산, 글루타르산, 글라이콜산, 프탈산, 타르타르산, 라우르산, 스테아르산, 살리실산, 메테인설폰산, 벤젠설폰산, 솔브산, 피크르산, 벤조산, 신남산 및 유사 산과 표준 반응에 의해 생성된 염이 포함된다. 달바반신과 염을 형성할 수 있는 염기의 대표적인 예로는 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속 수산화물, 예를 들면, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 바륨 수산화물, 암모니아, 및 지방족, 지환족 또는 방향족 유기 아민, 예를 들면, 메틸아민, 다이메틸아민, 다이에틸아민, 에탄올아민 및 피콜린이 포함된다(예를 들면, 미국 특허 제 5,606,036 호 참조).

일부 태양에서, 예를 들면, 정맥내 주사와 같은 비경구 투여에 적합한 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 약학적으로 허용되는 수성 배합물이 제공될 수 있다. 상기 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 수성 배합물을 제조하기 위해, 당해 분야에 공지된 방법을 이용할 수 있으며, 당해 분야에 통상적으로 사용되는 임의의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 다른 첨가제를 사용할 수 있다. 한 태양에서, 정맥내 주사용의 약학적으로 허용되는 수성 배합물은 5% 덱스트로스를 포함한다.

비경구 투여용 약학 조성물은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물 및 생리적으로 허용되는 희석제, 예를 들면, 탈이온수, 생리적 식염수, 5% 덱스트로스, 수혼화성 용매(예를 들면, 에틸 알콜, 폴리에틸렌 글라이콜, 프로필렌 글라이콜 등), 비-수성 비히클(예를 들면, 옥수수유, 면실유, 낙화생유 및 호마유와 같은 오일) 또는 다른 통상적으로 사용되는 희석제를 포함한다. 상기 배합물은 또한 가용화제, 예를 들면, 폴리에틸렌 글라이콜, 폴리프로필렌 글라이콜 또는 다른 공지된 가용화제, 용액을 안정화시키기 위한 완충제(예를 들면, 시트레이트, 아세테이트 및 포스페이트) 및/또는 산화방지제(예를 들면, 아스콜브산 또는 중아황산나트륨)를 포함한다(예를 들면, 미국 특허 제 6,143,739 호 참조). 다른 적당한 약학적 담체 및 그의 배합물은 마틴(E.W. Martin)의 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences]에 기술되어 있다. 당해 분야에 공지되어 있듯이, 본 발명의 약학 제제는 또한 허용되는 수준의 미립자(예를 들면, 입자가 없는)를 함유하고 비-발열성이도록(예를 들면, 미국 약전에서 주사가능한 필요조건을 충족시키도록) 제조될 수 있다.

한 태양에서, 약학 조성물은, 종종 안정화제 또는 안정화제 혼합물을 포함하는 건조된(예를 들면, 동결건조된) N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 용량을 일정량의 물, 바람직하게는 가용화에 충분한 부피의 탈이온수에 용해시킴으로써 제공된다. 예를 들면, 가용화에 충분한 물의 양은 약 10 ㎖일 수 있고, 결과적인 pH는 3.0 이상, 약 3.5 내지 4.5일 수 있다. 예를 들면, 정맥내 투여를 위해 드립 백에 함유된 양의, 5% 덱스트로스를 함유하는 제 2의 양의 수성 희석제에 상기 용액을 가하여 희석하여 용액의 pH를 약 5 내지 5.5로 상승시킬 수 있다. 또 다른 태양에서, 드립 백 중의 용액의 pH는 약 4.5일 수 있다. 제 2의 양의 수용액은 탈이온되거나 멸균될 수 있거나, 또는 탈이온되고 멸균될 수 있다. 한 태양에서, 수성 희석제는 5% 덱스트로스이다. 다른 가용화 방법, 및 그의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 배합물은 용이하게 당해 분야에 숙련된 자에게 명백할 것이다.

비경구 투여용 약학 조성물은, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 살균 효과가 유지될 수 있는 조건하에서, 부형제를 포함하거나 포함하지 않고, 하나 이상의 단위 용량의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 전술한 바와 같은 치료 또는 예방 효과량으로 함유하는 멸균 바이알에 채워질 수 있다. 상기 화합물 또는 조성물은 건조(예를 들면, 동결건조)된 분말의 형태이거나 아닐 수 있다. 사용전에, 생리적으로 허용되는 희석제를 가하고 용액을 환자에게 투여하기 위해 주사기로 회수할 수 있다. 전술한 바와 같은 약학 배합물은, 예를 들면, e-빔 또는 감마 멸균 방법, 또는 멸균 여과를 포함하는 임의의 허용되는 수단에 의해 멸균될 수 있다.

비경구 투여용 배합물은 최종 제제 ㎖ 당 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물 약 0.1 내지 약 100 ㎎, 약 0.5 내지 약 50 ㎎, 약 1 내지 약 10 ㎎ 약 1 내지 약 5 ㎎, 또는 약 2 내지 약 4 ㎎과 같은 농도로 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물 질 화합물 또는 조성물을 포함할 수 있다.

일부 태양에서, 본 발명에 따른 약학 조성물은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물과 하나 이상의 추가 항생물질의 혼합물을 포함한다. 바람직하게, 혼합물 중 하나 이상의 비-달바반신 항생물질은, 예를 들면, 아즈트레오남과 같이, 하나 이상의 그램-양성 세균 종에 대해, 및/또는, 예를 들면, 일네졸라이드 또는 다프토마이신과 같이, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물이 효과가 없는 하나 이상의 그램-양성 세균 균주에 대해 효과적(살균성)이다. 혼합물은 또한 전술한 바와 같은 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 일부 태양에서, 약학 조성물은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물 및 하나 이상의 추가 항생물질을 포함한다. 일부 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 조성물은 화학식 5에 따르는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물을 포함한다.

일부 태양에서, 본 발명의 약학 조성물은 하나 이상의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물이 덜 활성 또는 불활성인 물질로 분해되는 것을 억제하는 하나 이상의 안정화 물질을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "안정화 물질" 또는 "안정화제"는 조성물에 존재하는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물의 수준을 안정화시키는 물질을 말한다. "안정화 효과량"은 조성물에 존재할 수 있는 하나 이상의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물의 장기간 안정성을 증대시키기에 충분한 안정화제 의 양을 말한다. 일부 태양에서, 안정화 효과량은 둘 이상의 안정화 물질의 혼합물로 제공될 수 있으며, 상기 물질 각각은 단독으로는 안정화 효과를 제공하기에 충분한 양으로 존재하지 않는다.

안정화제의 예로는, 예를 들면, 당, 예를 들어, 모노-, 다이- 또는 폴리사카라이드 또는 그의 유도체, 당 알콜 또는 폴리올과 같은 비이온성 물질이 포함된다. 상기 안정화 물질로는, 예를 들면, 만니톨, 락토스, 슈크로스, 솔비톨, 글리세롤, 셀룰로스, 트레할로스, 말토스, 라피노스 또는 그의 혼합물이 포함된다.

한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 배합물은 만니톨을 포함한다. 또 다른 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 배합물은 또한 락토스를 포함한다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 조성물은 1:2 중량비의 만니톨:N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물로 배합될 수 있다. 또 다른 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 조성물은 1:1:4 중량비의 만니톨:락토스:N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물로 배합될 수 있다. 만니톨 및 락토스의 혼합물은 각각의 물질 단독보다 더 큰 안정화 효과를 제공할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 pH는, 예를 들면, 약 2 내지 약 9, 또는 약 3 내지 약 8, 또는 약 4 내지 약 7, 또는 약 5 내지 약 6, 또는 약 3.5 내지 약 4.5일 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 pH는 또한, 예를 들면, 약 9 미만, 또는 약 8 미만, 또는 약 7 미만, 또는 약 6 미만, 또는 약 5 미만, 또는 약 4 미만일 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 pH는 또한, 예를 들면, 약 2보다 높거 나, 약 3보다 높거나, 또는 약 3.5보다 높거나, 또는 약 4보다 높거나, 또는 약 4.5보다 높거나, 또는 약 5.0보다 높거나, 또는 약 5.5보다 높거나, 또는 약 6.0보다 높거나, 또는 약 6.5보다 높거나, 도는 약 7.0보다 높을 수 있다.

일부 태양에서, 하나 이상의 절차를 이용하여 MAG(본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 아실글루코로나민 잔기가 결여된 달바반신 화합물의 유도체) 및/또는 다른 분해물의 생성을 감소시킬 수 있다. 예를 들면, 만니톨과 같은 안정화 물질의 존재하에 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 냉동 건조를 이용하여 생성된 MAG의 양을 감소시킬 수 있다.

N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 저장은 안정성을 증대시키기 위해 주위 온도 미만, 예를 들면, 약 5℃에서 이루어질 수 잇다.

높은 투여량 수준(즉, 놀랍게 높고 오래 지속되는 혈청 농도를 제공하는)에서 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 매주 투여하면, 본원의 실시예에 의해 입증되듯이, 매일 또는 심지어 매일 2 내지 4회 투여된 낮은 용량의 통상적인 항생물질의 표준 치료에 의해 관찰된 것에 유사하거나 그보다 우수한 놀랍게 우수한 안전성 프로필을 나타낼 수 있다. 높은 용량(즉, 높고 오래 지속되는 혈청 농도를 제공하는, 예를 들면, 200 내지 5000 ㎎)의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을, 다른 항생물질보다 적은 횟수로 불리한 부작용없이 투여하여 개선된 효능 및 환자 순응도를 제공할 수 있다.

특정 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 조성물에 의한 치료는 낮은 빈도의 이상 반응을 야기한다. 심각한 이상 반응으로는 사망을 야기하고 생명을 위협하며 입원 또는 기존 입원의 연장, 또는 지속적이거나 상당한 불구 또는 무력화를 야기하는, 임의 용량에서 일어나는 임의의 불리한 약물 경험이 포함된다.

키트

본 발명은 또한 세균 감염의 치료 또는 예방을 위한 방법에 사용하기 위한 키트를 포함한다. 상기 키트는, 예를 들면, 하나 이상의 단위 용량의 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 포함하는 본 발명의 약학 화합물 또는 조성물, 및 세균 감염을 치료 또는 예방하기 위한 용도에 관하여 주치의에게 정보를 제공하는 설명서를 포함할 수 있다. 설명서는 인쇄된 형태로, 또는 플로피 디스크, CD 또는 DVD와 같은 전자 매체의 형태로, 또는 상기 설명서를 수득할 수 있는 웹사이트 주소의 형태로 제공될 수 있다. N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 단위 용량은, 개인에게 투여시, 개인에서 5일이상 동안 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 치료 또는 예방 효과적인 혈장 농도를 유지할 수 있는 투여량을 포함할 수 있다. 일부 태양에서, 키트는, 2차 투여량보다 약 1.5 내지 약 3 배 더 높을 수 있는 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 1차 투여량을 포함하여, 적어도 5일 간격으로, 또는 약 1주일 간격으로 투여될 2개의 단위 투여량을 포함한다. 일부 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물은 멸균 수성 약학 조성물 또는 건조 분말(즉, 동결건조된) 조성물로 포함될 수 있다. 한 태양에서, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물은 화학식 5에 따른다.

일부 태양으로, 적당한 포장이 제공된다. 본원에서 사용된 바와 같이, "포장"은 시스템에서 통상적으로 사용되고 개인에서 투여하기에 적당한 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물을 고정된 경계내에서 유지할 수 있는 고체 매트릭스 또는 물질을 말한다. 상기 물질로는 유리 및 플라스틱(예를 들면, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌 및 폴리카보네이트) 병, 바이알, 종이, 플라스틱 및 플라스틱-호일 적층 봉투 등이 포함된다. e-빔 멸균 기술을 이용하는 경우, 포장은 내용물의 멸균을 허용하기에 충분히 낮은 밀도를 가져야 한다.

키트는 또한 선택적으로 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물의 투여 장치, 예를 들면, 주사기 또는 정맥내 투여 장치, 및/또는 투여용 건조 분말(예를 들면, 동결건조된) 조성물을 제조하기 위한 멸균 용액, 예를 들면, 5% 덱스트로스와 같은 희석제를 포함할 수 있다.

본 발명의 키트는, N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물 이외에, 상기 방법에서 기술한 바와 같이 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물과 함께 사용하기 위한 비-달바반신 항생물질 또는 비-달바반신 항생물질의 혼합물을 포함할 수 있다.

하기의 합성 및 생물학적 실시예는 본 발명을 예시하기 위해 나타내며, 어떤 식으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석해서는 안된다.

실시예 15. N ¹⁵ , N ¹⁵ - 다이메틸 달바반신 B ₀ 의 정제

A-40926의 제조 및 후속 달바반신의 합성을 전술하였다. 본 실시예는 화학식 5에 따른 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물 또는 조성물, 즉, 본 발명에 따라 제조된 달바반신 화합물의 혼합물로부터 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B₀의 정제를 기술한다. 당해 분야에 숙련된 자에게 명백한 바와 같이, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B₀는 N¹⁵ 상에서 2개의 메틸기로 변형된 달바반신 B₀이다. 본 실시예 및 하기 실시예에 있어서, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B₀는 화합물이 완전히 특성화되지 않았던 부분에서 "화합물 A"로 지칭된 것이다. 또한, 뒷 부분에서 편의상, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B₀는 달바반신 B₂로 지칭된다. N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B₀, 달바반신 B₂ 및 화합물 A가 동일한 분자이다.

샘플 제조

본원의 방법에 따라 제조한 달바반신의 정제로부터 얻은 약 2 ℓ의 유기 수 용액을 진공하에서 아세토나이트릴 및 물 증발에 의해 농축하였다. 다이에틸 에테르를 잔사에 첨가하여 6 g의 조 고체를 수득하였다. 물/아세토나이트릴(90/10, v/v)의 혼합물에 용해시킨 후, 고체를 물(pH 3 아세트산)/아세토나이트릴 단계적-구배 용출을 이용하여 실란화 실리카겔(층 부피 1 ℓ; 컬럼 내경 = 5 ㎝) 상에서 정제하였다. 화합물 A 함유 분획을 모아서 소 부피(수 ㎖)로 농축하고 예비 HPLC 정제에 적용하였다.

농축 분획을 수거하였다. 진공하에서의 아세토나이트릴 증발 및 동결건조 후에, 수 ㎍의 화합물 A를 회수하였다.

실시예 16. 화합물 A의 N ¹⁵ 아민 치환체의 확인

화합물 A는 1828 Da의 분자량을 가지며, 달바반신 성분 B₀ 및 B₁(MW 1814)보다 14 개 단위가 더 많다. HPLC-ESI-MS 분석결과 착체의 다른 성분들과 달리, 변화가 N¹⁵에서 말단 아미노기 상에서 이루어짐이 입증되었다.

메틸아민기(R-NHCH₃)를 갖는 다른 달바반신 화합물은 그의 분열 질량 스펙트럼(ESI-MS/MS)에서 31개 단위의 중성적 손실(-NH₂CH₃)을 나타낸다. 화합물 A의 분열 스펙트럼은 31개 단위 대신 45개 단위의 손실을 나타낸다. 상기 유형의 중성적 손실은 2가지 구조적 가설에 의해 설명될 수 있다: N¹⁵는 N,N-다이메틸아민기(R-N(CH₃)₂, 3급 아민) 또는 N-에틸아민기(R-NHCH₂CH₃, 2급 아민)일 수 있다.

가수분해되고 유도체화된 화합물 A의 HPLC-ESI-MS 분석은 상기 두 가설을 판 별할 수 있다. 도 29는 산 가수분해후 B₀로부터 유래된 3개의 펩타이드 단편을 나타낸다. 아미노기 N¹⁵ 및 염소원자를 갖는 2개의 다이-펩타이드, "AA1+AA3", "AA5+AA7", 및 염소원자를 갖는 트라이-펩타이드 "AA2+AA4+AA6"가 생성된다. 다른 가수분해 산물은 지방신 및 DMEPA4(다이메틸아미노-프로필아미노) 쇄이다.

화합물 A의 경우, 다이펩타이드 "AA1+AA3"는 도 30에 기록된 바와 같이 상이해야 한다. 정확한 가설은 가수분해물을 1급 및 2급 아민과만 반응하는 유도체화 물질과 반응시켜 확인할 수 있다(도 31 참조).

성분 B₀의 다이-펩타이드 "AA1+AA3"는 유도체화 물질의 두 기와 반응해야 한다(도 31a 참조). 화합물 A의 경우, 2개의 상이한 유도체화 펩타이드 "AA1+AA3"는 아미노기 N¹⁵에 따라 수득될 수 있다(도 31b). 제시된 가설에 따라 이론적으로 예상되는 2개의 분자는 질량 분광 분석법으로 쉽게 구별가능한 분자량을 가질 것이다.

물질

화합물 A

달바반신

염산 37%, 시약 등급, 루디 폰트(Rudi Pont) cod. 750-11

메탄올 HPLC 등급, 제이.티. 백커(J.T. Backer) cod. 8402

AccQ TagTM 화학 패키지, 워터스(Waters) cod. WAT052880

가수분해

샘플 및 표준 둘 다의 가수분해를 피코-태크 워크 스테이션(PICO-TAG Work Station)(워터스(Waters), 미국 매사추세츠 밀도포드)에서 수행하였다.

360 ㎍의 화합물 A 및 약 1 ㎎의 달바반신 표준물을 모두 105℃에서 1%(w/v) 페놀을 함유하는 6N HCl의 존재하에 24시간 동안 가수분해시켰다. 반응 혼합물을 냉각하고 증발 건고시키고 메탄올로 500 ℓ의 최종 부피로 만들었다.

유도체화

워터스 AccQ-플루오르TM 시약 키트를 펩타이드 유도체화를 위해 선택하였다. AccQ-플로오르 시약은 N-하이드록시석신이미드-활성화 헤테로사이클릭 카바메이트 아민유도체화 화합물의 하나이다. 유도체화 물질의 구조 및 반응식은 반응식 2에 기록되어 있다.

1 ㎖의 "시약용 희석제"를 "시약용 분말"을 함유하는 바이알에 가하였다. 바이알을 10 초간 볼텍싱하고, 용해 완료때까지 55℃에서 가온시켰다. 복원된 AccQ-플루오르 시약은 아세토나이트릴 중에 약 10mM이었다. 20 ㎕의 가수분해된 샘플 또는 표준물을 원추형 삽입물이 있는 바이알에 넣고 20 ㎕의 "AccQ-플루오르 보레이트 완충액"을 가하고 간단히 볼텍싱하였다. 이 시점에서, 40 ㎕의 복원된 AccQ-플루오르 시약을 가하고 샘플을 30 초간 볼텍싱하였다. 바이알을 55℃에서 10분간 가열하였다. 이 조건에서, 아미노기가 반응해야 하며 그 결과의 부산물은 최소화되어야 한다. 상기 반응후에, 샘플을 HPLC 분석을 위해 준비한다.

HPLC - UV - MS 분석

터모 피니간 서베이어(Thermo Finnagan Surveyor) MS 펌프, 다이오드 배열 검출기 및 자동샘플러.

ESI 계면이 있는 터모퀘스터 피니간(ThermoQuest Finnigan) LCQ 데카 질량 검출기.

크로마토그래피: 컬럼: AccQ-TagTM(워터스, C18 노보팩 4 m 3.9 x 150 ㎜); 컬럼 온도: 37℃; 유량: 1 ㎖/분; 상 A: 140mM 암모늄 아세테이트(pH 5)(아세트산); 상 B: 물/아세토나이트릴(60/40, v/v); UV 검출: 254 ㎚; 주입 부피: 20 ㎕. 컬럼으로부터의 용출액을 나누어 동시에 UV 및 질량 검출을 하였다.

질량 분광법

샘플 유입 조건: 모세관 온도: 200℃.

외장층 가스: N₂, 40(임의 단위).

보조 가스: N₂, 20(임의 단위).

샘플 유입 전압 설정: 극성: 양성

소스 전압: 4.7 kV

모세관 전압: 10 V

튜브 렌즈 오프셋: 40 V

스캔 조건: 스캔 모드: 완전 ms

스캔 범위: 100 내지 700 amu

마이크로스캔 수 3

최대 이온 시간 50 ms

결과

달바반신의 유도체화되고 가수분해된 단편을 HPLC로 분리하고 ESI-MS로 평가하였다(데이터 나타내지 않음). 단편 AA1+AA3는 737(m/z)의 크기를 가지고, 단편 AA5+AA7은 689(m/z)의 크기를 가지며, 단편 AA2+AA4+AA6은 1086(m/z)의 크기를 가졌다.

화합물 A의 유도체화되고 가수분해된 단편을 HPLC로 분리하고 ESI-MS로 평가하였다(데이터 나타내지 않음). 단편 AA1+AA3는 737(m/z)의 크기를 가지고, 단편 AA5+AA7은 581(m/z)의 크기를 가지며, 단편 AA2+AA4+AA6은 1086(m/z)의 크기를 가졌다.

AA5+AA7의 크기는 화합물 A가 N15,N15-다이메틸 화합물임을 확인하였다.

실시예 17. 달바반신 B ₀ 의 메틸화

달바반신 B₀는 일반적으로 상기에서 개략한 방법에 따라 제조하고 미국 특허출원 공개 번호 제 2004/0142883 호에 기술된 방법에 따라 HPLC로 정제하였다. 달 바반신 B₀의 샘플을 선택적인 2급 아민 N-메틸화시켜 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 B₀를 수득하였다. 이어서, 반응 혼합물을 하기 실시예에서 HPLC-UV 및 HPLC-UV-MS로 분석하였다.

물질

달바반신 B₀

물, MmiliQ 등급

NaBH₃CN, 나트륨 사이아노보로하이드라이드, 플루카(Fluka) cod. 71435

DMF, N,N-다이메틸폼아마이드, 칼로 에바(Carlo Erba) cod. 444926

HCHO, 폼알데하이드 용액, 36.5% 수용액, 라이델 데 하엔(Reidel de Haen) cod. 33220

NaHCO₃, 중탄산나트륨, 시약 등급

방법

49.5 ㎎의 달바반신을 환저 플라스크에서 12.5 ㎖의 물 및 1.5 ㎖의 DMF에 용해시켰다(pH 3.5). 200 ㎕의 3개 분취량을 회수하여 800 ㎕의 물로 희석하였다(t0). 76 ㎕의 36%(v/v) 폼알데하이드 수용액 및 2.5 ㎎의 중탄산나트륨(pH 5.8)을 가하였다. 중탄산나트륨의 완전 용해후에 8 ㎎의 NaCNBH₃를 교반하면서 가하였다. 상기 반응 혼합물 200 ㎕의 3개 분취량을 즉시 회수하여 800 ㎕의 물 및 300 ㎕의 CH₃CN으로 희석하여 투명 용액(t0')을 수득하였다. 반응 혼합물을 실온에 서 30분간 방치하였다. 10분 및 30분 후에 200 ㎕의 3개 분취량을 추출하고 각각을 800 ㎕의 물 및 300 ㎕의 CH₃CN으로 희석하여 샘플을 반응 매질로부터 취하였다(t10 및 t30).

30분 후에, 플라스크를 -20℃로 냉각시켜 반응을 중단하였다. 반응은 HPLC-UV 및 HPLC/UV/MS 분석으로 모니터하였다.

실시예 18. N,N- 다이메틸 항생물질 B ₀ 의 구조 확인

본 실시예는 이전 실시예로부터의 화합물 A와 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 B₀가 동일함을 입증한다.

반응 샘플 t0, t0', t10 및 t30을 HPLC-UV로 분석하고 참고 기준과 비교하였다. t0', t10 및 t30의 크로마토그램은 매우 유사하여 메틸화가 즉시 일어남을 입증하였다.

도 33에, t0' 대 t0 크로마토그램이 도시되어 있다. 메틸화된 B₀는 상기 실시예 15에서의 화합물 A와 동일한 체류 시간을 나타내었다. 화합물 A가 메틸화된 유도체 B₀이며 결과적으로 화합물 A의 지방산 쇄가 10-메틸 운데카노산이라는 가설은 따라서 입증되었다.

HPLC-UV-MS 결과는 전 단락에서 기록된 HPLC-UV의 구조적 결론을 확인하였다. N,N'-다이메틸 B₀ 피크는 화합물 A의 피크와 완전히 중복되었다.

따라서, 화합물 A의 N¹⁵의 기가 다이메틸아민기이고 에틸아민이 아님이 입증되었다. 성분 화합물 A의 밝혀진 구조는 도 28에 나타내었다.

화합물 A의 구조는 NMR, ESI-MS 및 IR에 의해 더 확인되었다. NMR 스펙트럼은 313K에서 브루커(Bruker) AMX 600 상에서 기록하였다. 샘플을 DMSO-d6에 용해시키고 양성자 및 탄소 NMR 할당은 COSY-DFTP, ROESY 및 HMQC 스펙트럼으로 측정하였다. 350 ms의 혼합 시간을 ROESY 실험을 위해 선택하였다. 질량 스펙트럼은 250℃에서 터모퀘스트 피니간 LCQ데카 상에서 양성 방식으로 전자분무 이온화에 의해 측정하였다. 적외선 스펙트럼은 케이비론(KBron) 브루커 IFS 48 기기에서 기록하였다.

NMR 피크 할당은 도 34에 나타내었다. 표 40은 B₀와 비교하여 B₂의 1H 할당을 나타낸다. B₂의 NMR 스펙트럼은 달바반신 B₀와 많은 유사성을 드러낸다. 지방산쇄는 아이소프로필 말단기를 함유한다. 대부분의 양성자 및 탄소 화학적 이동은 대략 B₀ 성분에 대해 밝혀진 바와 동일하다. 주 화학적 이동의 편차는 아미노산 1에 속하는 신호에서 주목할 만하다. 특히, 2.31 ppm에서의 단일선(¹³Cδ 40.06 ppm)은 6 개의 양성자 및 양성자 x 1, 1f 및 1e와 NOE 상관관계에 상응하는 적분을 제공한다. 그 화학적 이동 및 이극성 상관관계는 상기 신호가 첫 번째 아미노산 회전 시스템에 속하는 다이메틸아미노기에 기인함을 시사한다.

적외선 스펙트럼은 도 35에 나타내었다. ESI-MS는 도 36에 나타내었다. 데이터는 달바반신 B₂(N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B₀)로서 화합물 A의 구조를 확인하였다.

실시예 19. 달바반신 B ₂ ( N ¹⁵ , N ¹⁵ - 다이메틸 달바반신 B ₀ )의 활성

N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B₀, 여러 개의 N¹⁵-모노메틸 달바반신 화합물 및 여러 개의 공지된 항생물질을 단리하고 그들의 항균 활성에 대해 시험관내에서 시험하였다. 화합물은 상기 실시예 및 미국 특허출원 공개 번호 2004/0142883 호에 기술된 방법에 따라 제조하였다. 개개의 달바반신 화합물은 HPLC로 정제하였다.

샘플 제조

단리된 N¹⁵-모노메틸 달바반신 화합물 및 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물을 0.01N HCl:DMSO(95:5, v/v)에 용해시켰다. 용해하기 전에, 각각의 샘플을 HPLC로 분석하고 정량화하였다. 용액을 N¹⁵-모노메틸 달바반신 화합물(A₀, A₁, B₀ 및 B₁ 달바반신)에 대해 256 ㎍/㎖에서 및 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 B₀(하기 표에서 "B₂ 달바반신"으로 지칭)에 대해 128 ㎍/㎖에서 제조하였다.

주 피크의 크로마토그램 순도를 표 41에 나타낸 바와 같이 면적 % 대 전체 크로마토그램 면적으로 평가하였다.

미생물학적 특성화

시험한 화합물은 전술한 단리된 N¹⁵-모노메틸 달바반신 화합물 및 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물, 및 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물, 반코마이신(VA)(시그마 케미칼 캄파니, 미저리주 세인트 루이스), 젠타마이신(GE)(시그마 케미칼 캄파니, 미저리주 세인트 루이스), 페니실린 G(Pen.G)(시그마 케미칼 캄파니, 미저리주 세인트 루이스) 및 암포테리신 B(Amph.B)(시그마 케미칼 캄파니, 미저리주 세인트 루이스)를 포함하는 달바반신 조성물("DA025/A")을 포함하였다.

미생물

사용된 미생물은 미국 종균협회(American Type Culture Collection, ATCC)(메릴랜드주 로크빌), 스미스클라인 앤드 프렌치 래버러토리즈(SmithKline and French Laboratories, SKF), 및 디 업존 캄파니(the Upjohn Co., UC)(미시간주 칼라마주)로부터 수득한 표준 균주였다.

최소 억제 농도( MIC ) 측정

MIC는, 약 5 x 10⁵ CFU/㎖의 세균 접종물을 사용하여 30% 성인 소 혈청(BS)(PAA Laboratories GmBH, 오스트리아 하이드만베그 파슁)의 존재 또는 부재하에, 표준 NCCLS 절차(본원에 그대로 참고로 인용될 수 있는 [NCCLS Document M7-A6, Vol.23, No. 2, "Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically". Approved Guideline. January 2003])에 따른 발효액 미세희석 방법에 의해 측정하였다. 사용된 배지는 CaCl₂ 및 MgCl₂를 사용하여 각각 20 ㎎/ℓ 및 10 ㎎/ℓ의 최종 농도로 조정된 양이온-조절된 뮐러 힌톤(Muller Hinton) 발효액(딥코 래버러토리즈, 미시간주 디트로이트)을 포함하였다. 시험은 35℃에서 20 내지 24시간 동안 배양한 후 판독하였다.

결과

MIC 결과는 하기 표 42에 요약하였다. 그램 양성균의 패널에 대해, 다양한 단리된 N¹⁵-모노메틸 달바반신 화합물 및 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물("B₂")의 활성은 N¹⁵,N¹⁵-다이알킬 항생물질 화합물의 혼합물을 포함하는 DAN 조성물에 필적하거나 그보다 약간 높았다. 시험 화합물을 용해시키기 위해 사용된 블랭크 용액(0.01N HCl/DMSO, 95:5)은 불활성이었다.

의미심장하게, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물("B₂")은 N¹⁵-모노메틸 달바반신 화합물에 필적하거나 그 보다 높은, 그램-양성균에 대한 활성을 나타내었다. 예를 들면, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물("B₂")의 활성은 그램-양성균의 범위 전체에서 B₀의 활성에 필적하거나 그보다 컸다.

매우 의미심장하게, N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물("B₂")은 또한 시험한 일련의 그램-음성균에 대해 활성을 나타내었다. 사실상, 상기 분석에서 그램-음성균의 대표 패널에 대해 활성이었던 유일한 화합물은 단리된 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물("B₂")이었고, 이것은 16 내지 32 ㎎/ℓ의 MIC 범위의 활성을 나타내었다.

ATCC 표준 균주에 대한 VA 및 GE 표준 화합물의 MIC 값은 NCCLS 값의 범위에 속하였다.

실시예 20. 달바반신 B ₂ 를 포함하는 달바반신 조성물의 제조

정제된 달바반신 B₀, 달바반신 B₁, 및 달바반신 B₂를 포함하는 조성물을 예비 HPLC로 생성하였다.

상기 방법에 따라 제조된 달바반신 혼합물은 HPLC로 정제하였다. 정제는 크로마실(Kromasil) C18(16 ㎛, 100 Å 기공 크기) 상에서 수행하였다. 완충 시스템은 5.5로 pH 조정된 50mM NH₄H₂PO₄ 수용액이었다. 용출시 이동상은 66/34 완충액/아세토나이트릴 혼합물이었다. 공정은 HPLC 분석 결과 97% 달바반신 B₀, 달바반신 B₁ 및 달바반신 B₂를 포함하는 달바반신 조성물을 제공하였다. 전형적인 분석용 HPLC 크로마토그램은 도 37에 나타내었는데, 이때 달바반신 B₀는 약 29.901에서, 달바반신 B₁은 약 30.79에서(비표지) 및 달바반신 B₂는 약 33.282에서 나타났다.

아이소 B ₀ 의 특성화

아이소B₀의 질량 스펙트럼(도 38)은 모노-양자화 분자 및 양이온성 부가물 또는 부분 소스 단편화로 인한 다른 이온들에 상응하는 m/z 1817을 나타낸다. 1816 Da의 분자량 및 단편화 패턴은 B 성분에 대해 관찰되는 바와 동일하여, B₀의 부분입체이성체(역 키랄성을 갖는 하나 이상의 입체중심을 갖는 동일한 분자)로서 아이소B₀의 확인을 지지한다.

아이소B₀의 수준은 다양한 제조 단계에서 pH가 너무 많이 증가한 때 증가하는 것으로 밝혀졌다. 그러므로, 아이소B₀는 달바반신의 염기성 처리에 의해 제조하였다.

샘플 제조( BI - K0096 )

실온에서 물 중의 NaOH(pH 12.7)로 장기(약 165시간) 처리하에 10 g의 달바반신 배치 027로부터 약 300 ㎎의 아이소B₀를 수득하였다. 중화시킨 후, 반응 생성물을 갈색의 조 고체로 회수하고, 이것을 단계-구배 방식으로 물(pH 3.5; 아세트산)로 용출시켜 수행한 실란화 실리카겔 컬럼 상에서 이중 크로마토그래피 정제에 적용하였다.

농축 분획으로부터, 고체 79.98% 면적의 BI-K0096을 단리하였다. HPLC 프로필은 도 39에 나타내었다.

달바반신 불순물 아이소B₀와 BI-K0096의 일치를 확인하기 위해, 제조된 화합물 BI-K0096을 3가지 상이한 방법을 이용하여 HPLC로 분석하였다. 시험한 모든 조건에서, BI-K0096은 아이소B₀ 불순물에 크로마토그래피상 동일하였다.

구조 분석

MS 및 MS/MS 스펙트럼을 도 40A 내지 40C에 나타내었다. 이들 질량 스펙트럼은 성분 B₀의 상기 스펙트럼과 동일하였다. 상기 질량 분석으로부터, 입체화학적 변화를 확인하는 것은 가능하지 않다.

600 MHz 분광계 상에서 DMSO-d⁶에 기록된 아이소B₀의 ¹H 및 ¹³C NMR 스펙트럼은 달바반신의 스펙트럼과 많은 유사성을 나타냈지만 또한 중요한 차이를 드러냈다(각각 도 41 및 42 참조). 아이소B₀ 및 B₀에 대한 할당은 표 43에 나타내었고 양성자의 상응하는 위치는 도 43에서 확인하였다.

분자의 일부 부분에 대해, 양성자 및 탄소의 화학적 이동은 B₀ 성분과 대략 동일하였다. 주 화학적 이동의 편차는 아미노산 서열 1 내지 4에 속하는 신호에 대해 주목할 만하다. 이들 회전 시스템의 양성자는 무시할만한 양성 또는 음성 Δδ(화학적 이동차)를 나타내었다. 아미노산 3은 특히 더 큰 수의 관련된 변화(x3, w3, 3f, 3d)를 나타내며; x3은 또한 그의 ³J_HH의 중요한 변형을 나타내는 유일한 공명이며, 커플링 상수 CH(x3)-NH(w3)은 B₀에서의 약 10.4에 비해 6.54 Hz이었다. 또한, ROESY 실험은 x3에 대해서 뿐 아니라 x3에 근접한 대부분의 양성자에 대해 이극성 상관관계에서의 차이를 나타내었다. 기록된 NMR 결과 및 테이코플라닌 에피머에 대해 발표된 문헌의 데이터는 x3이 에피머화 중심이며 에피머화는 분자의 적어도 일부분에서의 구조에 변화를 유도함을 명백히 보여준다.

미생물학적 특성화

사용된 화합물은 다음과 같았다: 앞에서 전술한 바와 같은 아이소B₀; 달바반신(DA)(BI-K397 배치 025/A/ASI) 참고 표준; 반코마이신(VA)(배치 121K1140 시그마 케미칼 캄파니, 미국 미저리주 세인트 루이스); 젠타마이신(GE)(배치 57H1099 시그마 케미칼 캄파니, 미국 미저리주 세인트 루이스); 페니실린 G(Pen.G)(배치 43H1134 시그마 케미칼 캄파니, 미국 미저리주 세인트 루이스); 암포테리신 B(Amph.B)(배이 61H4039 시그마 케미칼 캄파니, 미국 미저리주 세인트 루이스).

반코마이신, 달바반신 및 암포테리신 B를 다이메틸 설폭사이드(DMSO)에 10 ㎎/㎖로 용해시키고 증류수에 희석하였으며; 젠타마이신 및 페니실린 G를 증류수에 용해시켰다.

매질

각각 20 ㎎/ℓ 및 10 ㎎/ℓ의 최종 농도로, CaCl₂ 및 MgCl₂로 조정된 뮐러 힌톤 발효액(딥코 래버러토리즈, 미국 미시간주 디트로이트).

혈청

성인 소 혈청(BS)(배치 A05123-159 PAA 래버러토리즈 GmBH, 오스트리아 하이드만베그 파슁).

미생물

사용된 미생물은 미국 종균협회(ATCC, 미국 로크빌), 스미스클라인 앤드 프렌치 래버러토리즈(SKF), 및 디 업존 캄파니(UC, 미국 미시간주 칼라마주)로부터 수득한 표준 균주였다.

최소 억제 농도(MIC) 측정

MIC는, 약 5 x 10⁵ CFU/㎖의 세균 접종물을 사용하여 30% 성인 소 혈청의 존재 또는 부재하에, 표준 NCCLS 절차[13]에 따른 발효액 미세희석 방법에 의해 측정하였다. 시험은 35℃에서 20 내지 24시간 동안 배양한 후 판독하였다.

결과

그램-양성균 패널에 대해, 아이소B₀의 활성은 달바반신에 매우 유사하였다(표 44 참조).

전술한 본 발명은 이해를 명확히 하기 위해 예시 및 실시예로써 다소 상세히 기술하였지만, 당해 분야에 숙련된 자에게 본 발명의 진의 및 범위로부터 벗어나지 않고 특정 변화 및 변형이 실행될 수 있음은 명백할 것이다. 그러므로, 설명은 첨부된 청구의 범위로 윤곽이 잡히는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석해서는 안된다.

본원에 인용된 모든 출판물, 특허 및 특허출원은 각 개개의 출판물, 특허 또는 특허출원이 구체적으로 및 개별적으로 참고로 인용되는 것으로 지적되는 경우, 모든 목적에 대해 동일한 정도로 그대로 참고로 본원에 인용된다.

도 1a는 25℃에서, 만니톨을 함유하거나 함유하지 않는 다양한 약학 조성물에서 달바반신 성분 B₀의 양 대 시간을 나타낸 것이다.

도 1b는 25℃에서, 만니톨을 함유하거나 함유하지 않는 다양한 약학 조성물에서 MAG의 양 대 시간을 나타낸 것이다.

도 2a는 40℃에서, 만니톨을 함유하거나 함유하지 않는 다양한 약학 조성물에서 달바반신 성분 B₀의 양 대 시간을 나타낸 것이다.

도 2b는 40℃에서, 만니톨을 함유하거나 함유하지 않는 다양한 약학 조성물에서 MAG의 양 대 시간을 나타낸 것이다.

도 3a는 25℃에서 만니톨 및/또는 락토스를 함유하는 다양한 약학 조성물에서 달바반신 성분 B_o의 양 대 시간을 나타낸 것이다.

도 3b는 25℃에서 만니톨 및/또는 락토스를 함유하는 다양한 약학 조성물에서 MAG의 양 대 시간을 나타낸 것이다.

도 4a는 40℃에서 만니톨 및/또는 락토스를 함유하는 다양한 약학 조성물에서 달바반신 성분 B_o의 양 대 시간을 나타낸 것이다.

도 4b는 40℃에서 만니톨 및/또는 락토스를 함유하는 다양한 약학 조성물에서 MAG의 양 대 시간을 나타낸 것이다.

도 5는 달바반신의 단일 1000 ㎎ 정맥내 주입 후 달바반신의 혈장 농도 대 시간을 나타낸 것이다.

도 6은 인간 혈청 알부민에 결합한 달바반신에 대한 등온 적정 열량측정 데이터(상부) 및 달바반신:단백질의 2:1 결합 모델로부터 측정된 곡선에 적합화된 데이터를 그래프로 나타낸 것(하부)이다.

도 7은 달바반신의 전기분무 이온화 질량 스펙트럼을 나타낸 것이다.

도 8은 달바반신 농도 대 달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비의 그래프이며, 달바반신 농도 증가에 따라 달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비의 증가를 나타낸다.

도 9는 pH 대 달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비의 그래프이며, pH 증가에 따라 달바반신 다량체 대 단량체의 개체수 비의 증가를 나타낸다.

도 10은 5mM 암모늄 포메이트(pH 5) 용액에서 달바반신의 전기분무 이온화 질량 스펙트럼을 나타낸다.

도 11은 50mM 암모늄 포메이트(pH 5) 용액에서 달바반신의 전기분무 이온화 질량 스펙트럼을 나타낸다.

도 12는 100mM 암모늄 포메이트(pH 5) 용액에서 달바반신의 전기분무 이온화 질량 스펙트럼을 나타낸다.

도 13은 물 중 테이코플라닌(50 ㎍/㎖)의 전기분무 이온화 질량 스펙트럼을 나타낸다.

도 14는 물 중 테이코플라닌(100 ㎍/㎖)의 전기분무 이온화 질량 스펙트럼을 나타낸다.

도 15는 26℃(pH 7.4)에서 달바반신/트라이펩타이드 결합에 대한 겉보기 해 리 상수에 대한 HSA의 영향을 나타낸다.

도 16은 동일한 트라이펩타이드 용액을 사용하여, 동일한 조건하에서 반코마이신 및 달바반신에 대한 트라이펩타이드의 결합에 대한 등온 열량측정(ITC) 데이터의 비교를 나타낸다.

도 17A 및 17B는 달바반신 단량체 및 다량체(이량체 포함)와 트라이펩타이드 리간드 및 HSA의 가능한 상호작용을 나타낸다. 도 17A는 HSA 상의 2개의 별도 부위에 단량체로 결합하는, 용액중 단량체-이량체 평형에서의 달바반신을 나타낸다. 도 17B는 용액중 달바반신 이량체에 결합하고 HAS에 결합된 달바반신 단량체에 보다 약하게 결합하는 리간드를 나타낸다.

도 18은 평균 달바반신 혈장 농도-시간 프로필을 나타낸다.

도 19는 평균 달바반신 혈장 농도-시간 프로필을 나타낸다.

도 20은 추가의 평균 달바반신 혈장 농도-시간 프로필을 나타낸다.

도 21은 상대적 처리 기간동안 달바반신 노출율 대 크레아티닌 제거율의 그래프를 나타낸다.

도 22는 상대적 처리 기간동안의 노출율 대 전체 노출율의 비교를 나타낸다.

도 23은 정상적인 신장 기능을 갖는 대상 및 중증 신장 장애를 갖는 대상에 대한 달바반신 농도-시간 프로필을 나타낸다.

도 24는 달바반신 혈장 농도-시간 프로필을 나타낸다.

도 25는 처리 기간동안 달바반신 노출율의 비교를 나타낸다.

도 26은 선택된 원자들의 번호를 포함하여, 항생물질 A 40926 화합물 및 달 바반신 화합물의 구조를 나타낸다.

도 27은 달바반신 B_o의 구조를 나타낸다.

도 28은 본 발명의 대표적인 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물의 구조를 나타낸다.

도 29 내지 31은 본 발명의 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물의 구조를 확인하는 본 발명의 실시예를 예시하는 도식을 나타낸다.

도 32 및 33은 N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 항생물질 화합물의 구조를 입증하는 ESI 및 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.

도 34는 달바반신 B₂의 구조를 나타낸다.

도 35는 달바반신 B₂(N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B_O)의 적외선 스펙트럼을 나타낸다.

도 36은 달바반신 B₂(N¹⁵,N¹⁵-다이메틸 달바반신 B_O)의 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다.

도 37은 본 발명 조성물의 HPLC 결과를 예시한다.

도 38은 아이소B_o의 질량 스펙트럼을 나타낸다.

도 39는 아이소B_o의 HPLC 결과를 예시한다.

도 40a 내지 40c는 아이소B_o의 질량 스펙트럼을 나타낸다.

도 41은 아이소B_o의 ¹H-NMR 스펙트럼을 나타낸다.

도 42는 아이소B_o의 ¹³C-NMR 스펙트럼을 나타낸다.

도 43은 달바반신에 대한 양성자 위치 확인을 나타낸다.

도 44는 대퇴부-감염 마우스에서 달바반신의 혈장내 약물동력학을 나타낸다.

도 45는 시간경과에 따라 스트렙토코커스 뉴모니에의 생체내 사멸에 대한 단일 용량 달바반신의 영향을 나타낸다.

도 46은 시간경과에 따라 스태필로코커스 오레우스의 생체내 사멸에 대한 단일 용량 달바반신의 영향을 나타낸다.

도 47은 스트렙토코커스 뉴모니에에 대한 달바반신 투여 간격과 효능간의 관계를 나타낸다.

도 48은 스태필로코커스 오레우스에 대한 달바반신 투여 간격과 효능간의 관계를 나타낸다.

도 49는 스트렙토코커스 뉴모니에에 대한 달바반신 PK/PD 파라미터와 효능 간의 관계를 나타낸다.

도 50은 스태필로코커스 오레우스에 대한 달바반신 PK/PD 파라미터와 효능 간의 관계를 나타낸다.

도 51은 다양한 균주에 대한 달바반신에 대한 용량-반응 곡선을 나타낸다.

도 52는 스트렙토코커스 뉴모니에 및 스태필로코커스 오레우스에 대한 달바반신에 대한 용량-반응 곡선을 나타낸다.

도 53은 정상 마우스 및 스트렙토코커스 뉴모니에로 감염된 호중구감소성 마우스 둘 다에서 달바반신에 대한 용량-반응 곡선을 나타낸다.

도 54는 폐 및 대퇴부 감염 모델 둘 다에서 달바반신에 대한 용량-반응 곡선을 나타낸다.

Claims (11)

1. 유효량의 달바반신 및 안정화제를 포함하는 약학 조성물로서, pH가 3 내지 5인 약학 조성물.
2. 제1항에 있어서,

   안정화제가 탄수화물 또는 아미노산을 포함하는 약학 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,

   안정화제가 만니톨, 락토스 또는 이들의 조합물인 약학 조성물.
4. 제3항에 있어서,

   안정화제가 만니톨 및 락토스를 포함하는 약학 조성물.
5. 제4항에 있어서,

   pH가 4.5인 약학 조성물.
6. 제3항에 있어서,

   안정화제가 만니톨을 포함하고 조성물의 pH가 3인 약학 조성물.
7. 제3항에 있어서,

   안정화제가 만니톨을 포함하고 만니톨:달바반신의 비가 1:2 중량비인 약학 조성물.
8. 제4항에 있어서,

   만니톨:락토스:달바반신의 비가 1:1:4 중량비인 약학 조성물.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,

   건조 분말 형태의 약학 조성물.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,

    40℃에서 3 내지 6개월 후 조성물의 6% 이하가 분해되는 약학 조성물.
11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,

    40℃에서 3 내지 6개월 후 6% 이하의 MAG를 함유하는 약학 조성물.

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