CN1036654C - 抗菌素a40926的酰氨衍生物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种新颖的抗菌素A40926衍生物，其特征为在N-酰基氨基葡糖醛酸基团上具有羧基，(C1-C4)烷氧羰基，氨基羰基，(C1-C4)烷基氨基羰基，二(C1-C4)烷氨基羰基或羟甲基取代基，以及在分子的63位上具有羟基或聚胺取代基，本发明化合物在体外实验中显示出高的对糖肽耐药的肠球菌及葡萄球菌的活性。

Description

抗菌素A40926的酰氨衍生物及其制备方法
本发明涉及具有下列通式(I)的抗菌素A40926的衍生物及其可用作医药的加成盐。其中R1代表氢或氨基保护基；R2代表(C9-C12)烷基；M代表氢，α-D-吡喃甘露糖基或6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基；Y代表羧基，(C1-C4)烷氧羰基，氨基羰基，(C1-C4)烷氨基羰基，二(C1-C4)烷氨基羰基，其中的烷基基团可以带有选自羟基，氨基，(C1-C4)烷氨基及二(C1-C4)烷氨基或羟甲基基团的取代基；X代表羟基或具式-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)P-(NR5-烷基3)q-W的氨基基团。
其中
R3代表氢或(C1-C4)烷基；
烷基1，烷基2和烷基3分别独立地代表含2-10个碳原子的直链或支链的亚烷基；
P和q为整数，分别独立地代表零或1；
R4和R5分别独立地代表氢，(C1-C4)烷基或
R3和R4一起代表一个与两个氮原子相连的(C2-C4)亚烷基部分。附带条件是P为1；或
R4和R5一起代表一个与两个氮原子相连的(C2-C4)亚烷基部分。附带条件是P和q均为1；
W代表氢。(C1-C4)烷基，氨基。(C1-C4)烷氨基。二(C1-C4)烷氨基。被一或两个氨基-(C2-C4)烷基部分或者一或两个(C1-C4)烷氨基-(C2-C4)烷基部分或者一或两个二(C1-C4)烷氨基-(C2-C4)烷基部分取代的氨基，或者。当p和q均为零时，可与基团-NR3-烷基1一起代表哌嗪子基或4-甲基哌嗪子基。
附带条件是当X代表氢时，Y代表羟甲基。
Z代表氢或基团
Figure C9310001300161
其中AΘ代表矿物酸或有机酸阴离子。或当抗菌素的剩余部分存在羧酸功能基时它代表由上述羧酸功能基衍生出的内阴离子；
出现在上述通式(I)及之后任何通式括号中的数字，表示抗菌素A-40926及其衍生物分子结构中有关碳原子的常规计数。
抗菌素A40926是一个糖肽抗菌素复合物。已从存在于含有可同化的碳、氮和无机盐来源的培养介质中放线菌(Actinomadura)培养物(称为Actinomadura sP.ATCC 39727)中分离出来(见欧洲专利EP-177882)。根据以上所引专利描述的方法，抗菌素复合物(其主要因子已被命名为因子A，因子B，因子B0，因子B1，因子PA和因子PB)的回收包括：在过滤或初步纯化后，使发酵液体培养基在固定的D-丙氨酰-丙氨酸上进行亲合性层析。
迄今为至，经鉴定的A40926因子的结构可用下列通式(II)表示，其中R1′为氢，X′为羟基，Y′为羧基，R2′代表(C9-C12)烷基，且M′代表α-D-吡喃甘露糖基或6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基。
更特别地，抗菌素A40926因子A为具上述通式(II)的化合物，其中R1′为氢，X′为羟基，Y′为羧基，R2′代表正癸基，且M′代表α-D-吡喃甘露糖基。根根最新的研究，上述EP-177882中被鉴定为抗菌素A40926因子B的物质实质上是由两个紧密相关的成份组成。抗菌素A40926因子B。实际上是因子B的主要成份，并且符合上述通式(II)化合物，其中R1′为氢，X′为羟基，Y′为羧基，R2′代表9-甲基癸基，且M′代表α-D-吡喃甘露糖基。
因子B的次要成份被命名为因子B1。其与因子B0的不同仅在于R2′代表的是正十一烷基(E.Riva等人。ChromatographiaVol.24，295，1987)。
抗菌素A40926因子PA和PB与相应的因子A和因子B的不同，在于甘露糖单位被6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖单位所替代。
至少在某些发酵条件下，抗菌素A40926因子PA和PB是产生微生物的A40926的主要抗菌产物。
分别地，抗菌素A40926因子A和B主要是抗菌素A40926因子PA和PB的转变产物，并且通常在发酵液体培养基中已经存在。
所有的糖基均通过0-配糖键与抗菌素A40926核相连。
已经发现，在导致甘露糖单位上乙酰基的去除，而不发生氨基葡糖醛酸基单位上的酰基替代的碱性条件下，抗菌素A40926因子PA可以转化为抗菌素A40926因子A，且抗菌素A40926因子PB可以转化为抗菌素A40926因子B。
因此，当将发酵液体培养基或含有它们提取物或浓缩物的抗菌素A40926，于碱性条件下(例如亲核性碱的水溶液，PH＞9，过夜)放置一定时间后，即可以得到抗菌素A40926复合物，其富集有抗菌素A40926因子A和因子B。
利用EP-177882中所描述的层析分离方法，可以从A40926复合物中获得抗菌素A40926因子B。在上述提及的欧洲专利所述的条件下，纯因子B0约占因子B的90％，其可通过进一步纯化因子B获得，例如，通过反复的反相层析步骤。
最新的研究指出(l.Zerilli等人。RapidCommunication in Mass Spectrometry，Vol.6。109，1992)抗菌素复合物A40926中还存在其它一些少量的因子，以首字母缩略词表示，分别鉴定为A1，RS-1，RS-2及RS-3。这些少量因子已由HPLC分离，并通过对A40926复合物甲醇盐的气相色谱/质谱分析，测到了它们的结构式。除去与氨基葡糖醛酸基团相连的脂肪酸残基外，上述所有提到的少量因子的结构均符合因子A，B0和B1的基本结构。特别地，参考通式(II)，当R′1，X′和Y′具有与上述相同的含义：在因子A1中为8-甲基壬基，在因子RS-1中为7-甲基辛基，在因子RS-2中为正壬基，在因子RS-3中为正十二烷基。
尽管通常抗菌素A40926复合物制剂的获得是采用EP177882中描述的发酵条件，但其中R2′为(C10-C11)烷基的因子占大多数，有可能通过改变发酵条件而使少量组份(其中R2′为C9或C12烷基)的量增加。
在通常的抗菌素A40926复合物的纯化过程中，因子PA和PB大部分转化成为因子A和B。
此外，已发现有可能通过起始物糖基部分之一在控制条件下的酸性水解，将抗菌素A40926复合物、它的单一因子或以任何比例存在的所述因子的混合物，转化成相应的A40926N-酰基氨基葡糖醛酸基糖苷配基复合物AB，N-酰基氨基葡糖醛酸基糖苷配基因子A。N-酰基氨基葡糖醛酸基糖苷配基因子B，以及甘露糖基糖苷配基(参见EP-A-240609及EP-A-228015)。
较好的用于制备N-酰基氨基葡糖醛酸基糖苷配基的水解条件包括，在40～80℃之间，使用8∶2～9.5∶0.5的二甲亚砜/浓盐酸的混合液。
抗菌素A40926 N-酰基氨基葡糖醛酸基糖苷配基可用上述通式(II)来表示，其中R1′及M′为氢，X′为羟基，Y′为羧基，且R2′为(C9-C12)烷基。
所有抗菌素A40926糖基部分的彻底断裂，产生糖苷配基。本水解过程在EP-A-240609中有所描述。
抗菌素A40926复合物及其因子，相应的N-酰基氨基葡糖醛酸基糖苷配基，甘露糖基糖苷配基，糖苷配基以及它们以任何比例存在的混合物主要对抗革兰氏阳性细菌和奈瑟菌属有效。
在要求EP Ser. No. 91104857优先权的国际专利申请号PCT/EP92/00374中，描述了抗菌素A40926及它的N-酰化-氨基葡糖苷酸基糖苷配基的酯衍生物(在6B位上酯化，那是存在于N-酰化氨基葡糖醛酸基上的羧基)；例如具通式(II)的化合物，其中X′为OH，Y′为(C1-C4)烷氧羰基，且R1′，R2′和M′的含义同上述的R1，R2和M。通过使N15保护的(此处术语“N15”指与A40926分子上碳原子相连的氨基功能团上的氮原子，其通常被指定为序号15)或N15游离氨基A40926底物或其去甘露糖基衍生物(如N-酰基氨基匍糖醛酸基糖苷配基)与链烷醇在酸性介质中进行反应，或使N15保护的A40926衍生物或其去甘露糖基类似物与卤代烷(较好的是溴、氯或碘)，过量的经选择的链烷醇，任意地，在氢卤酸接受体存在的条件下，在0°至室温之间，于浓矿物酸中进行反应来制备这些酯衍生物。
按照上述方法制得的抗菌素A40926酯衍生物可用作起始原料、来制备具通式(I)的抗菌素A40926衍生物。
如上所述，用于制备A40926酯化衍生物和去甘露糖基A40926酯衍生物(其可作为本发明化合物的起始原料)的控制酯化步骤包括酯化反应，其中将A40926底物与过量的经选择的链烷醇一起，在浓矿物酸的存在下，于0°至室温之同反应一段时间，该反应时间由所需引入基团的空间复杂性来决定。
在某些情况下，很容易地可将A40926前体15位上的一级氨功能基保护起来，以减少不希望有的副反应发生。这可以按照本技术领域中熟知的方法进行，例如那些在参考书中所描述的方法(T.W.Greene：“有机合成中的保护基团”.John Wiley and SonsNew York. 1981以及M.Mc Omie：“有机化学中的保护基团”Plenum Press. New York.1973)。这些保护基团在反应过程的条件下必须是稳定的，必须不干扰主反应，并且在主反应终止时必须容易地解离。
这类合适的氨基保护基团的例子有叔丁氧羰基(t-BOC)。羰苄氧基(CB2)及芳烷基。在有碱存在下的用任意取代的苄基卤化物进行的苄基化反应可以平稳且定量地进行，并且只形成相应的N15苄基衍生物而没有其它羧基基团苄酯的附带生成。
在可卤化氢接受体(如叔胺)存在的条件下，选择性地优先进行15位上二氨基保护，而不发生两个羧基基团的附带酯化。
N15保护基的除去条件包括在本技术领域内熟知的氨基保护基去除条件之内，并且必须在对分子中存在的其它基团的活性进行评价后再建立。
用选择的酸水解方法可使具通式(II)的酯起始化合物(其中M′为α-D-吡喃甘露糖基或6-O-乙酰-α-D-吡喃甘露糖基。且Y′为(C1-C4)烷氧羰基)转变成相应的化合物(其中M′为氢)。正如EP-A-240609中所公开的，较好的用于生产抗菌素A40926去甘露糖基衍生物(例如：N-酰化氨基葡糖醛酸基糖苷配基)的水解条件包括在40至80℃之间，使用8∶2(V/V)～9.5∶0.5(V/V)的二甲亚砜/浓盐酸混合物。
因此，A40926酯化物的去甘露糖基衍生物可在与相应的糖苷配基的混合物中获得，并可经制备HPLC分离。
适当地修饰水解条件，可以改变生成产物之间的比例，例如，从6B位上酯化的A40926出发，增加溶剂/盐酸的比例至78∶1，保持反应温度在60°以下。将反应时间延长至约7天，所需的6B位酯化的A40926去甘露糖基衍生物与不需要的A40926糖苷配基的比例变为约1.4∶1.0。
根据本技术领域内熟知的方法，反应过程可用HPLC来监测。在这些分析结果的基础上，一个熟悉本技术领域的人即可对反应情况作出评价。并决定何时应终止反应，并开始根据常用的技术对反应产物进行处理。例如，溶剂提取，非溶剂沉淀。并结合层析方法进行进一步的分离和纯化。
用作制备式(I)化合物起始原料的酯衍生物可以是符合前体抗菌素A40926复合物几个因子之中的每个因子的单一化合物，或是符合A40926前体不同因子的。以任何比例存在于它们之中两个或多个成份的混合物。所述的酯衍生物可通过以下几种方法获得：在6B酯生产中，使用A-40926复合物或A40926复合物前体因子混合物；或在生成的酯产物的(其可以改变表示前体A40926复合物特性的因子的原始比例)分离/纯化过程中，应用特殊的条件；或将反相层析分离得到的纯酯产物按适宜比例混合；或使用纯A40926因子作为前体。
在本描述和专利要求中，如无特别指明。术语“烷基”或指单独的。或指与其它取代基结合的，包括直链或支链的碳氢基团；更尤其是，术语“(C1-C4)烷基”代表含1-4个碳原子的直链或支链脂肪烃链，如，甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基、1-甲基丙基、1，1-二甲基乙基及2-甲基丙基。
这里所用的术语“烷基1”，烷基2”，“烷基3”代表具2-10个碳原子的独立的直链或支链亚烷基，例如
-CH2-CH2-，
-CH2-CH2-CH2-，
-CH2-CH2-CH2-CH2-，
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，
Figure C9310001300241
此处所用的术语“(C2-C4)烷基基团”和“(C2-C4)亚烷基基团”代表含有2～4个碳原子的直链或支链脂肪基团。所述链的代表性实例可从上述表中看到。
“(C1-C4)烷氧羰基”的表示包括直链和支链烷氧羰基。例如甲氧羰基。乙氧羰基，丙氧羰基，异丙氧羰基。丁氧羰基。异丁氧羰基及叔丁氧羰基。
根据上述定义，给出了下列氨基基团有代表性的实例：
-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W-NH-(CH2)2-NH2                               -NH-(CH2)n-CH3-NH-(CH2)3-NH2                               n＝0，1，2，3，4或5-NH-(CH2)4-NH2
Figure C9310001300251
-NH-(CH2)2-N(C4H9)2                        n＝0，1，2，3，4或5-NH-(CH2)3-N(C2H5)2                        m＝0，1，2或3-NH-(CH2)3-N(C4H9)2
Figure C9310001300252
-N(CH3)-(CH2)3-N(CH3)2                     n＝0，1，2，或3                                                 
Figure C9310001300261
n＝0，1，2或3-NH-(CH2)2-NH-(CH2)2-NH2                   -NH-(CH2)n-NHCH3-NH-(CH2)2-NH-(CH2)3-NH2                      n＝2，3或4-NH-(CH2)2-NH-(CH2)4-NH2                   -NH-(CH2)n-NHiC3H7-NH-(CH2)4-NH-(CH2)2-NH2                      n＝2，3或4-NH-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH2-NH-(CH2)2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)2-NH2-NH-(CH2)2-NH-(CH2)4-NH-(NH2)2-NH2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)3-NH-(CH2)3-NH2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH-(CH2)3-NH2-NH-(CH2)2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH2-NH-(CH2)4-NH-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)9-NH-(CH2)3-NH2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)10-NH-(CH2)3-NH2-NH-(CH2)2-[NH(CH2)2]2-NH2 -NH-(CH2)2-N[(CH2)3NH2]2                    n＝1，2  或3-NH-(CH2)2-N[(CH2)4NH2]2 -NH-(CH2)2-N[(CH2)2N(CH3)2]2               n＝1，2  或3-NH-(CH2)2-N[(CH2)3N(CH3)2]2           -NH(CH3)-(CH2)n-NHCH3-NH-(CH2)3-N[CH2)2N(CH3)2]2                n＝2，3或4-NH-(CH2)3-N[(CH2)3N(CH3)2]2-NH-(CH2)2-N[(CH2)2N(C2H5)2]2         -N(CH2)n-NHC2H5-N(CH3)(CH2)2-N[(CH2)2NH2]2                n＝2，3，或4等等。
当R3和R4(或R4和R5)一起代表一个与两个氮原子相连的(C2-C4)亚烷基基团时，与部分烷基1(或烷基2)以及两个相邻氮原子一起形成的饱和杂环，最好是哌嗪环。
例如，当R3和R4(或R4和R5)一起代表一个与两个氮原子相连的(C2-C4)亚烷基基团，或当P和q均为零，W与基团-NR3-烷基1一起代表哌嗪子基或4-甲基哌嗪子基时，具式
-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W的氨基基团具有下列基团：
Figure C9310001300271
本发明范围包括由前体抗菌素A40926复合物的单一因子衍生出的单元的式(I)化合物。以及由复合物A40926本身或由它的两个或多个因子以任何比例组合的混合物衍生出来的式(I)化合物的混合物。因此，符合A40926复合物因子的式(I)化合物的混合物各组份彼此之间比例的变化，可由对前体抗菌A40926复合物采用不同的发酵、回收、分离及纯化条件引起；或在它们转化为通式(I)化合物之前通过将式(II)的起始酯化物的孤立因子按所需比例相混合；或通过将式(I)的本发明化合物的纯因子按所需比例进行混合。
较好的式(I)化合物是这些化合物以及它们可用作医药的加成盐。
其中R1代表氢或氨基保护基；R2代表(C9-C12)烷基；M  代表氢，α-D-吡喃甘露糖基或6-0-乙酰基-α-D-吡
喃甘露糖基；Y  代表羧基。(C1-C4)烷氧羰基。氨基羰基，(C1-C4)
烷氨基羰基。二(C1-C4)烷氨基羰基，其中的烷基部分可以
带有选自羟基，氨基，(C1-C4)烷氨基及二(C1-C4)烷
氨基或羟甲基的取代基；X  代表羟基或具式-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-
(NR5-烷基3)q-W的氨基基团。
其中
R3、R4和R5代表氢；
烷基1，烷基2和烷基3分别独立地代表含2-4个碳原子的直链或支链的亚烷基；
P和q为整数。分别独立地代表零或1；
W代表氢。(C1-C4)烷基，氨基，(C1-C4)烷氨基。二(C1-C4)烷氨基。被一或两个氨基-(C2-C4)烷基基团，或者一或两个(C1-C4)烷氨基-(C2-C4)烷基基团，或者一或两个二(C1-C4)烷氨基-(C2-C4)烷基基团取代的氨基；或者，当p和q均为零时，可与基团-NR3-烷基1一起代表哌嗪子基或4-甲基哌嗪子基。
附带条件是当X代表羟基时，Y代表羟甲基；Z代表氢或基团
Figure C9310001300301
其中AΘ代表无机酸或有机酸阴离子，或当在抗菌素的剩余部分存在羧酸功能基时，它也可代表由上述羧酸功能基衍生出的内阴离子；
另一组较好的本发明化合物包含式(I)的那些衍生物以及它们可用作医药的加成盐。其中R2代表(C10-C11)烷基，M代表α-D-吡喃甘露糖基，且R1，X，Y和Z的含义同上所述。
本发明化合物中进一步较好的包括式(I)的这些化合物以及它们可用作医药的加成盐。其中R1代表氢或被保护的氨基，较好的是氢；R2代表7-甲基辛基，正壬基。8-甲基壬基，正癸基。9-甲基癸基。正十一烷基或正十二烷基，较好的是正癸烷基，9-甲基癸基或正十一烷基。最好的是9-甲基癸基；M  为氢或α-D-吡喃甘露糖基，较好的是α-D-吡喃甘露糖
基；Y  代表羧基，(C1-C4)烷氧羰基，氨基羰基，(C1-C4)烷
氨羰基，双(C1-C4)烷氨羰基，其中的烷基部分可以带有选
自羟基，氨基，(C1-C4)烷氨基及二(C1-C4)烷氨基或
羟甲基，较好的是羧基，甲氧羰基，氨基羰基，甲基氨基羰基，
二甲基氨基羰基，(二甲基氨基)乙基氨基羰基或羟甲基的取代
基。X  为氨基基团-NR3-烷基1-(NH-烷基2)p-(NH-烷基3)q-W其中：R3为氢；烷基1，烷基2和烷基3分别独立地代表含2-4个碳原子的直
链亚烷基；
p和q分别独立地代表零或1；
且
W  代表氨基，(C1-C4)烷氨基，二(C1-C4)烷氨基。
被一或两个氨基-(C2-C4)烷基取代的氨基，或者当p和q均为零时，与基团-NR3-烷基1一起代表哌嗪子基或4-甲基哌嗪子基；
最好地，X为选自下列式子的氨基基团：
-NH-(CH2)3-N(CH3)2，
-NH(CH2)3-[NH(CH2)3]2-NH2，
-NH-(CH2)3-N[(CH2)3NH2]2 and
Z代表氢；
通过对相应的上述式(II)衍生物(其中R1，R2′及M′的含义同R1，R2及M，X′为羟基，Y′为(C1-C4)烷氧羰基)的酰胺化可以制备得到式(I)化合物，(其中Y为(C1-C4)烷氧羰基。R1，R2M和Z的定义如前述定义，X代表氨基基团：-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W其中R3，R4，R5，烷基1，烷基2，烷基3，p，q和w的含义如前述定义)。
这些式(II)的起始原料可用前述的方法制备，其中某些特定的实例已在提及的国际专利申请PCT/EP92/00374中公开。
酰胺化过程包括在有缩合剂存在下使上述的式(II)起始原料与合适的式(III)的胺：
NHR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W(III)(其中R3，R4，R5，烷基1，烷基2，烷基3，p，q和W的含义如同本文开头所指定)进行缩合；或经由在惰性有机溶剂中上述起始的式(II)的C(63)羧酸的”活性酯”的形成来进行。
用于酰胺化的惰性有机溶剂是那些不干扰反应过程，并且至少能部分地促进起始物质加溶的质子惰性溶剂。
上述的惰性有机溶剂的实例有：有机酰胺类，二元醇和多元醇醚类，磷酰胺类及亚砜类。较好的惰性有机溶剂的例子有：
二甲基甲酰胺，二甲氧乙烷，六甲基磷酰胺，二甲亚砜及它们的混合物。
本发明方法中的缩合剂是一种适合于有机化合物。特别是肽合成中酰胺键形成的物质。具有代表性的缩合剂的实例有：二异丙基碳化二亚胺(DIC)。在羟基苯并三唑存在下(HBT)的二环庚基羰二亚胺(DCC)，苯并三唑氧基-叁-(二甲氨基)鏻六氟磷酸酯(PyBOP)，苯并三唑氧基-叁-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸酯及(C1-C4)烷基，苯基或杂环磷酸酯叠氮化物。如二苯基磷酸酯叠氮化物，二乙基磷酸酯叠氮化物。二-(4-硝基苯基)磷酸酯叠氮化物。二吗啉基磷酸酯叠氮化物及氯磷酸二苯酯。较好的缩合剂是二苯基磷酸酯叠氮化物，如二苯基磷酸酯叠氮化物(DPPA)，苯并三唑氧基-叁-(二甲氨基)鏻六氟磷酸酯(BOP)及苯并三唑氧基-叁-(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸酯(PyBOP)。
在最后提到的两个缩合剂之中，PyBOP更为可取。因生成的副产物吡咯烷基潜在毒性问题要比二甲胺小。
在此处描述的本发明酰胺化方法中，尽管在某些情况下等摩尔或稍过量的胺反应物用量也能获得较好的收率，但胺反应物的用量通常要过量一摩尔。特别是在以BOP和PyBOP作缩合剂时。
通常，当使用的胺反应物很便宜或很容易获得时，应使用2-10倍摩尔过量的胺(III)，较好的是3-4倍摩尔过量的胺。
在缩合剂存在下用胺(III)进行上述式(II)起始原料的酰胺化时，使用的胺反应物必须能和上述的起始物质的羧酸功能基(X′＝羟基)形成盐。假如在所选择的反应介质中该胺的碱性不足以形成这样的盐。则需向反应混合物中加入至少与起始物等摩尔量的成盐碱(例如，叔脂肪胺或杂环胺。如三乙胺，N-甲基吡咯烷或N-甲基哌嗪，其不与羧酸功能基形成酰胺键)。
当胺反应物十分昂贵或很难得到产品时，在加入成盐碱的情况下，使用低摩尔过量的胺反应物是合适的。
上述成盐碱的实例有：有机脂肪或杂环叔胺，如三甲胺、三乙胺、N-甲基吡咯烷或甲基吡啶等等。
所使用的缩合剂的量通常是等摩尔或稍稍摩尔过量于起始原料A40926化合物，如1.1～1.7倍，较好的为1.2～1.5倍。特别地已观察到，当较大过量地使用(例如3倍摩尔过量)作为缩合剂的PyBOP及较大过量地使用胺反应物(例如6～10倍摩尔过量)时，从式(III)(其中Y ′为(C1-C4)烷氧羰基〕的起始原料。几乎可以定量地得到式(I)的酰胺终产物(其中Z代表
其中AΘ的定义同上〕。
胺反应物可以很容易地被引入反应介质中形成酸加成盐。例如盐酸盐。在这种情况下，至少需要加入双倍摩尔比例。较好的是2～4倍摩尔过量的强碱，其能使胺从其盐中游离出来。还是在这种情况下，合适的碱通常是有机脂肪或杂环叔胺，其不能象上述举例的那些碱一样，与羧酸功能基形成酰胺键。实际上。至少在某些情况下，使用那些能被上述碱就地游离的胺盐是很可取的，尤其是当该盐比相应的游离胺更稳定时。
反应温度主要随特定的反应原料及条件而变化，一般来说，反应在0-30℃之间进行最好。
反应时间主要随缩合剂和其它反应参数变化，一般来说，反应在约1小时至约24-48小时之内完成。
在任何情况下，都要根据已知方法，用TLC或者较好的是HPLC对反应过程进行监测。
在这些分析结果的基础上，一个熟悉本技术领域的人即能对反应情况进行评价，并决定何时终止反应，并根据已如的技术对反应产物进行处理，其包括溶剂提取，加入非溶剂沉淀等，并结合进一步的常用分离和纯化操作，例如柱层析。
通常，当使用上述缩合剂时，无需对式(II)起始酯上的N(15)氨基功能基进行保护。然而，当它们是由前体抗菌素A40926制备上述酯的先前反应步骤中直接获得时，使用这种功能被保护的起始酯是很有用的。此外，还有一些特殊情况，即酰胺化反应条件使得保护式(II)起始酯上N(15)氨基功能基成为必需或至少较为可取。
在上述情况中，可用本技术领域中已知的方法对N(15)-氨基功能基加以保护，诸如上述建议的参考书中所描述的那些在制备式(II)酯〔其中Y′为(C1～C4)烷氧羰基〕过程中用于保护A40926前体的方法。
N-保护基在反应条件下必须是稳定的，并且不干扰酰胺化反应，同时在反应终止后必须很容易地解离且被从反应介质中去除，而不改变新形成的酰胺键及化合物的整个结构(例如糖基)。
有利地应用于本发明方法的N-保护基团可保护酯起始原料的N(15)伯氨基功能基；当合适时，还可保护任何其它能任意表示胺(III)特性的氨基功能基(胺III应不参与酰胺化反应)。这些N-保护基团的代表性实例是氨基甲酸酯形成剂由下列氧羰基表示其特性：1，1-二甲基丙炔基氧羰基，叔丁氧羰基，乙稀氧羰基，肉桂基氧羰基，苄氧羰基，对硝基苄氧羰基，3，4-二甲氧基-6-硝基苄氧羰基，2，4-二氯苄氧羰基，5-苯并异噁唑基甲基氧羰基，9-蒽基甲基氧羰基，二苯基甲基氧羰基，异烟酰氧羰基，二苯基甲基氧羰基，S-苄氧羰基等等。
通常，当酰胺化反应完成后，用纯的强有机酸如三氟乙酸(TFA)或用稀释的矿物酸处理后，可除去这些保护基团。
为了避免与抗菌素分子母体相连的糖基部分有被水解的危险，有可能选择不同的除去条件以除去某些保护基，例如以Pd/C作催化剂的催化氢化。另外，在控制的酸性条件下，例如低温和/或较短的反应时间，有可能去除选自上述报道中的氨基保护基。
当酰胺反应是通过式(II)起始化合物的“活性酯”中间体形成来进行时，这种活性酯通常就地生成，或以其可被分离并与式(III)胺进行反应。较好地。将式(II)起始物的N(15)氨基功能基加以保护，以避免任何来自活性酯形成剂对N(15)氨基基团的干扰。根据上述已知的方法和步骤可实现对这类基团的保护。
在Fieser及Fieser编著的《有机合成试剂》(JohnWiley and Sons Inc..pp.129-130(1967)〕中，以一般的术语对羧酸的“活性酯”形成进行了描述。
可很方便地用于本发明方法中的活性酯形成剂的那些实例，见R. Schwyzer等人在Helv. Chim. Acta，1955，38.69-70中所描述，并且包含那些式(II)酯衍生物，其中X′为CH2CN，CH2COOC2H5，CH2(COOC2H5)2，CH2COCH3，
Figure C9310001300361
其可通过式(II)起始物(其中R1′为合适的保护基，X′为羟基)在酸接受体存在下，于溶剂中分别地与ClCH2CN.
BrCH2COOC2H5，BrCH(COOC2H5)2，ClCH2COCH3，进行反应来制备。
此类试剂中较好的试剂有氯乙腈。在这种情况下，氯乙腈本身，二甲基甲酰胺(DMF)或二甲亚砜(DMSO)可作为较好溶剂被使用。
通常，用于“活性酯”形成的惰性有机溶剂是那些有机质子惰性溶剂，其不干扰反应过程，并且具有或至少部分具有加溶羧酸起始物的能力。
上述的惰性有机溶剂是有机酰胺。二元醇和多元醇醚，磷酰胺，亚砜及芳香化合物。较好的惰性有机溶剂的例子有：二甲基甲酰胺。二甲氧基乙烷，六甲基磷酰胺，二甲亚砜，苯，甲苯及它们的混合物。
更好地，溶剂是选自乙腈，二甲亚砜，二甲基甲酰胺，活性酯的形成通常在有碱的存在下进行，该类碱不干扰反应过程，如三烷基胺(例如三乙胺)，碳酸钠或碳酸钾，或者碳酸氢钠或碳酸氢钾。通常，碱与起始物质的比例为2～6∶1(以摩尔计)，较好地。约为3倍摩尔过量。较好的碱是三乙胺。
所用的“活性酯”形成剂的量要大大超过式(II)C(63)羧酸起始物。通常上述酯形成剂的用量为5～35摩尔比例。较好地是20-30倍摩尔过量。反应温度为10至60℃之间，较好的是15至30℃之间。通常，反应时间取决于其它反应参数，一般可在3至48小时之间这个范围内变化。
可用HPLC及TLC跟踪反应，以决定何时可认为反应完全，并开始进行回收所需中间体的步骤。“活性酯”中间体可在同一反应介质中可直接用于制备，然而通常是用非溶剂将其沉淀出来，或用溶剂提取。在不经进一步纯化的情况下直接用于下一步反应。然而如有所需，可经柱层析如闪式柱层析或反相柱层析纯化。
然后，于5～60℃之间，较好的是10至30℃之间，将所得的“活性酯”中间体在有机极性溶剂存在下与1摩尔过量的式(III)胺衍生物进行反应。
在这种情况下，有机极性溶剂为极性质子溶剂或质子惰性溶剂。
较好的有机极性质子溶剂的例子有低级(C2-C4)链烷醇，如乙醇，正丙醇，异丙醇，正丁醇等，或它们的混合物，较好地是使用其干燥形式。
较好的有机极性质子惰性溶剂有N，N-二甲基甲酰胺(DMF)六甲基磷酰胺(HMPA)或它们的混合物，1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮(DMPU)，二甲亚砜(DMSO)或二甲氧基乙烷(DME)。
“活性酯”与选定的式(III)胺的反应可在5至60℃之间进行，较好的是10至30℃之间最好是20至25℃之间，同时，“活性酯”中间体与如上定义的胺(III)之间较好的摩尔比是1∶5-1∶30。更好的是1∶10-1∶20。通常反应过程可用TLC或HPLC监测。
万一反应物胺是式(III)化合物的聚胺，它的一或多个氨基(不牵涉酰胺键的形成)能很容易地被保护，在这种情况下，合适的保护基团亦即那些先前提及的用于保护N(15)的基团。
因此，在与上述报道的用于15-位去保护条件相似的情况下，使生成的N(63)-保护的酰胺衍生物去保护。
在0°至40℃之间的水溶液或含水醇介质中，具式(I)化合物(其中Y为羟甲基，R1，R2，M，X及Z的含义同前所述)可通过相应的式(I)衍生物(其中R2，M，X和Z的定义同上，Y为(C1-C4)烷氧羰基。且R1为合适的N15-氨基保护基)的还原来制备。该还原反应是用碱金属硼氢化物(较好的是选自硼氢化钠。硼氢化钾及氰基硼氢化钠)作还原剂的。根据以前所描述的条件，N(15)-氨基功能基的去保护也可达到。
本方法的使用对于制备式(I)化合物(其中Y为羟甲基，X为羟基，R1，R2和M的定义同前，Z为氢)来说是特别必要的。在所述的情况中，在上述条件下，受到还原的起始原料是(II)化合物(其中Y′为(C1-C4)烷氧羰基。X′为羟基，R2′和M′的含义分别同R2和M，R1′为合适的N(15)氨基保护基)。上述起始化合物的这种特定的制备方法在国际专利申请号PCT/EP92/00374中已作了公开，并可按照上述的制备式(II)起始酯的通用方法来进行。
通常，用于上述还原反应的含水醇介质是水及水溶性或可部分与水混溶的低级链烷醇混合物。其中水/低级链烷醇的比例为40/60至90/10(V/V)之间较好的是60/40(V/V)至68/32(V/V)之间，最好是65/35(V/V)。
尽管在某些情况下反应也能在有少量水存在的情况下发生。例如在水/低级链烷醇比率为30/70或20/80的混合物中进行。通常，当水/低级链烷醇的比率低于40/60时，反应速率是很低的。
较好的低级链烷醇是直链或支链的(C1-C4)烷基醇，其中最好的是正丁醇，乙醇和甲醇。
有时在某些特殊情况下，可加入小量极性共溶剂以使反应过程中起始物的溶解更加完全。例如，N，N-二甲基甲酰胺，1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮(DMPU)，二甲亚砜。有时，还向其中加入各种量的乙醚以防止发泡。
作为碱金属硼氢化物。硼氢化钠是最好的一种，所用的合适的碱金属硼氢化物的量随所用溶剂及反应温度而改变，但所使用的碱金属硼氢化物的量要大大超过需要的化学计量才是合适的，以保证反应混合物的PH为中性或碱性，较好地是PH7～10。通常碱金属硼氢化物与抗菌素起始物的摩尔比例为50至300之间。
反应温度随特定的起始物质和反应条件变化，通常反应在0至40℃之间进行，较好地在室温下进行。
反应时间也较大程度上随其它反应参数决定，无论如何必须小心控制。通常反应在约1～4小时内完成。如果反应延长多于4小时，就会有不希望的副反应发生，其可以诱发分子核心上某些肽键的断裂。
在任何情况下，都要根据本技术领域已知的方法用TLC或最好是HPLC对反应过程进行监测。在这些分析结果的基础上，一个熟知本技术领域的人即可对反应过程作出评价并决定何时终止反应，并根据本技术领域内已知的技术(其包括溶剂提取，加入非溶剂沉淀等，并在需要时，结合柱层析进行进一步的分离和纯)对反应产物开始进行处理。
反应结束后，通过加入合适量的酸，如(C1-C4)烷基有机酸，(C1-C6)烷基磺酸。芳基磺酸等来消除过量的碱金属硼氢化物，上述酸是溶于极性质子溶剂中的，例如(C1-C4)烷基醇。
另外，本发明中式(I)化合物(其中Y为羟甲基，R1，R2及M的含义如同本文开头所描述X为-氨基基团-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W，其中R3，R4，R5，烷基1，烷基2烷基3，p，q和W的含义如同本文开头所描述，Z为氢)可用与上述相同的酰胺化步骤来制备，即使相应的式(I)化合物(其中Y为羟甲基，X为羟基，R1，R2和M的含义同上，且Z为氢)与上述式(III)胺进行反应。
在这种情况下，酰胺化反应同样可以通过使用合适的缩合剂，或通过上述用于制备式(I)化合物〔其中Y为(C1-C4)烷氧羰基〕的“活性酯中间体形成来实现。
通常，即使当PyBOP的用量(以摩尔计)大大超过羧酸起始物。使用PyBOP作为缩合剂的式(I)衍生物(其中Y为羟甲基，X为羟基且Z为氢)的酰胺化反应也产生式(I)终产物(其中Z代表氢)。当此酰胺化反应经过式(I)化合物(其中X为羟基，Y为羟甲基，且Z为氢)的“活性脂”形成过程时，最好用上述的保护基将上述化合物的N(15)-氨基保护起来。
制备式(I)化合物〔其中Y为(C1-C4)烷氧羰基或羟甲基，R1，R2，M和Z的定义如同本文开头所描述，X代表氨基基团
-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W其中R3，R4，R5独立地代表氢或(C1-C4)烷基。烷基1，烷基2，烷基3及W的定义如同本文开头所描述，p为1且q为1或零。进一步的步骤在于使N63酰胺的N15保护的衍生物分别与式(IV)或式(IVa)的胺反应物在酸接受体存在下，于惰性溶剂中进行反应。(在本文中术语“N(63)酰胺指的是对与A40926分子中的碳原子相牵连的，羧基酰胺基团上的氮原子标上数字63以资识别)；具式(I)的N(63)酰胺中Y，R2，M及Z的定义同上，X为氨基基团
-NR3-烷基1-NHR4，其中R3，R4和烷基1同上，或-NR3-烷基-NR4-烷基2-NHR5，其中R3，R4，R5，烷基1和烷基2同上；或(IV)和或(IVa)为：
r-烷基2-(NR5-烷基3)q-W    r-烷基3-W
              (IV)                               (IVa)其中符号R5，烷基2，烷基3及W的定义同上，q为零或1，且r代表卤素。甲磺酰基或甲苯基。
根据本发明中制备具式(I)化合物的一般方法可以制备上述的N(63)酰胺的N(15)保护的衍生物。根据前述的条件可进行N(15)氨基功能基的去保护。
也在上述烷基化方法的情况下，保护除了具式(I)化合物N(63)酰胺的N(15)氨基基团和/或胺反应物(IV)或(IVa)以外的其它氨基功能基团是有用的或必需的。这些氨基应不牵涉到烷基化反应中。根据上述的条件可对生成的N(63)-保护的酰胺进行去保护。
在上述所有提及的反应中所使用的保护基团是那些先前已描述过的基团。然而必须对有关什么因素影响式(I)(其中Y为羟甲基)衍生物的去保护步骤这个问题给予特殊关注。事实上对于这些化合物来说。当15位的保护基团可在酸性条件下除去时(例如用三氟乙酸(TFA)处理时)。去保护步骤就显得十分关键了。因为各自的56-酰基葡糖胺基团的竞争性取代相对很快。但无论如何，这些不需要的副反应可以很容易地被减到最少。例如，当使用叔丁氧羰基(t-BOC)作保护基时，可以采用下列条件：室温下用干躁TFA处理1分钟或0～5℃下处理10～30分钟，然后在0～5℃下用乙醚或甲醇/乙醚混合物使反应产物迅速沉淀。相反地，现已发现对于具式(I)化合物(其中Y为羧基或甲氧羰基)，56-酰基氨基葡糖醛酸部分对TFA显示出显著高的稳定性。事实上，相应的痕量去葡糖醛酸基假糖苷配基的形成，仅在反应1小时后才观察到。然而，在这些情况下，叔-BOC去保护反应仅进行30分钟。
另一种去除t-BOC保护基而不影响分子上其它部分的合适方法，包括在0～10℃下用溶于二氯甲烷中的干燥TFA处理1-2小时后，加入非溶剂使反应产物沉淀。
式(I)化合物(其中R1，R2，M，X及Z同本文开始所述，且Y为羧基)是从相应的式(I)化合物〔其中Y为(C1-C4)烷氧羰基，甲氧羰基较可取，且所有其它符号含义同上〕与碱金属氢氧化物水溶液(如NaOH或KOH)在0～30℃温度下(高温应避免，以防止在分子的3位碳原子上发生差向异构化)，于有机惰性溶剂中，如乙二醇或四氢呋喃的二(低级烷基)醚进行反应制得。式(I)化合物(其中R1，R2，M，X及Z含义同本文开始所述，且Y为氨基羰基，(C1-C4)烷基氨基羰基，二(C1-C4)烷基氨基羰基，其中烷基部分带有选自以下的取代基：羟基，氨基，(C1-C4)烷氨基及二(C1-C4)烷氨基)可以按照下列步骤制备：i)制备衍生物，其中Y和C(63)的COX部分代表同一种基
团(C1-C4)烷氨基羰基或二(C1-C4)烷氨基羰基，
其中烷基上可带有选自以下的取代基：氨基，(C1-C4)烷
氨基及二(C1-C4)烷氨基：
(a)抗菌素A40926复合物，其去甘露糖基衍
生物或其某一种因子(式(II)，X′＝羟基。y′＝羧基，
R1′，R2′及M′与上述R1 R2及M相同)，
用大大过量的合适的式(III)胺，(其中符号R3，R4，R5，
烷基1，烷基2，烷基3，P，q及W的含义与上述定
义的羧酰胺基团Y和COX相同)进行酰胺化，本酰胺化反应
在上述同样条件下进行。ii)制备衍生物中符号Y及C(63)上COX部分表示不同的
羧酰胺基团，Y的含义选自氨基羰基，(C1-C4)烷氨基羰
基。二(C1-C4)烷氨基羰基。其中的烷基上带有选自以下
的取代基：羟基，氨基，(C1-C4)烷氨基及二(C1-C4)
烷氨基的基团，且X表示与本文开始所述定义相同的氨基基
团：
方法A：相应的式(I)化合物的酰胺化，其中R1，R2，
M和Z如同本文开始所述，X表示具下式的氨基基团
-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)P-(NR5-
烷基3)q-W，其中所有符号定义如同本文开始所述。且
Y为羧基。酰胺化反应是在同前所述相同的条件下进行，在缩
合剂(如PyBOP或DPPA)存在下，上述式I化合物与
合适的胺反应形成上述定义的羧酰胺基团Y；
方法B：(a)将与方法A相同的起始化合物N(15)胺基
保护起来(例如用t-BOC或CBz基团)；(b)在6B
位上的羧基上形成“活性酯”(如，与氯乙腈反应)；(c)：
在上述相同的条件下，将所述化合物的“活性酯”部分与合适
的胺反应，构成上述定义的羧酰胺基团Y；(d)任意地用上述方
法(例如：酸解或氢解)除去N15-保护基。
目前，式(I)化合物(其中M为氢)是根据上述步骤用
相应的式(II)(其中M′为氢)起始物  制备而成的。另外，式(I)化合物(其中M为氢)时可用另一种方法制备，即根据专利EP-A-240609中所述方法进行选择性酸性水解，将式(I)化合物(其中M为α-D-吡喃甘露糖基或6-O-乙酰-α-D-吡喃甘露糖基)转变为相应的M为氢的化合物。
如上所述，式(I)化合物可由相应于前体抗菌素A40926的单个因子的单一化合物或它们的混合物以任何比例所组成。因为，在多数情况下，混合物的生物活性与其单一因子的十分相似，故当获得混合物时没必要分离出单一组份。然而，当需要纯的式(I)因子时，可按EP177882所述方法用逆相柱层析法逐一将其从混合物中分离出。另外，也可从单一的式(II)起始物(相应于抗菌素A40926复合物的单一因子)制备得。
在一般方法和所述条件下，可以采用前体A40926复合物其中某一种单一因子(如因子B0)，相对于所剩的混合物而言占优势比例(如经HPLC测定为60％)。因而，采用本发明的方法从该前体制得式(I)化合物。当它们不专门经过上述分离步骤时，通常由混合物组成，其中的占优势的成份相应于所述A40926复合物前体中占优势的同样因子。
制备富集于其因子A和/或B0，或PA和/或PB的A40926复合物的方法见EP-A-259781所描述。
本发明化合物具有碱性基团，可按常规方法与有机和无机酸形成盐。
本发明化合物的有代表性的和合适的酸加成盐包括那些与下列有机和无机酸按常规方法生成的盐：例如，盐酸，氢溴酸，硫酸，磷酸，乙酸，三氟乙酸，三氯乙酸，琥珀酸，柠檬酸，抗坏血酸，乳酸，马来酸，富马酸，棕榈酸，胆酸，双羟萘酸，粘酸，谷氨酸，樟脑酸，戊二酸，乙醇酸，邻苯二甲酸，酒石酸，月桂酸，硬脂酸，水杨酸，甲磺酸，苯磺酸，山梨酸，苦味酸，苯甲酸，内桂酸及同类的酸。
式(I)化合物(其中X为羟基，且Y为羟甲基)以及Y为羧基的化合物也具有酸的功能基团而能与有机和无机碱成盐。
可与本发明中有酸性基团的化合物成盐的碱的代表性实例包括：碱金属和碱土金属氢氧化物，如氢氧化钠，钾，钙，镁，钡等，氨，以及脂肪，脂环或芳香有机胺如，甲胺，二甲胺，三乙胺，乙醇胺及甲基吡啶。
将本发明的“非盐”化合物转变为相应的加成盐，及反过来，将本发明化合物的加成盐转化为非盐形式，是在通常工艺技术范围内，并且包含在本发明中。
例如，式(I)化合物能用酸或碱通过溶解，或者将非盐形式悬浮于含水溶剂中，并加入摩尔数稍微过量的经选择的酸或碱，就能使之转化为相应的盐。然后，将所生成的溶液或悬浮液经冷冻干燥以回收所需的盐。
假如最终的盐不溶于非盐形式所能溶的溶剂中，在向该非盐形式的溶液中加入化学计量或摩尔数稍过量的经选择的酸或碱之后，经过滤即可回收得到该盐。
非盐形式可从相应的盐经溶于含水溶剂之后，中和而游离出非盐形式的方法制得。而后，例如用有机溶剂提取而回收得到，或通过加入选择的酸或碱，并按上述方法处理，将其转化为另一种加成盐。
当接着进行中和时，脱盐十分必要，可采用常规的脱盐方法，例如，可以十分方便地采用在控制孔径的多聚葡聚糖树脂(例如Sephadex LH20)或硅烷化硅胶上进行的柱层析，在用水溶液洗脱不需要的盐之后，用水和极性或非极性有机溶剂的混合液，如乙腈/水50∶50至约100％的乙腈，按线性梯度或阶梯梯度变化的浓度将所要的盐洗脱。
正如本技术领域内所知，与可用作医药的酸和碱或不可用作医药的酸和碱成盐是一种可被采用的方便的纯制技术，经过形成和分离后，式(I)化合物形成的盐可转化为相应的非盐形式，或转化为可用作医药的盐。
然而，鉴于式I化合物和它们的盐的性质相似性，在本发明中当提到式(I)化合物的生物活性时，也就涉及到它们可用作医药的盐的生物活性。
下列表I列举了用以说明本发明的一系列代表性化合物。
                                                                       表 I
  化合物编  号   识别代号    R1      R2       M     Y      X      Z
     1 RA     H   (C9-C12)     α-DMP   GH2OH     OH      H
     2 MA-A-1/B0     H     iC10     α-DMP   COOCH3     NH(CH2)3N(CH3)2      H
     3 RA-A-1/B0     H     iC10     α-DMP   CH2OH     NH(CH2)3N(CH3)2      H
     4 MA-A-2/B0     H     iC10     α-DMP   COOCH3  NH-(CH2)3-[NH(CH2)3]2-NH2      H
     5 MA-A-3/B0     H     iC10     α-DM]P   COOCH3   NH(CH2)3-N[(CH2)3NH2]2      H
     6 MA-A-1     H   (C9-C12)     α-DMP   COOCH3     NH(CH2)3N(CH3)2      H
     7 PyMA-A-1     H   (C9-C12)     α-DMP   COOCH3     NH(CH2)3N(CH3)2  P(NC4H8)3CH3COOΘ
     8 RA-A-1     H   (C9-C12)     α-DMP   CH2OH     NH(CH2)3N(CH3)2      H
     9 PA-A-2     H   (C9-C12)     α-DMP   CH2OH   NH(CH2)3-[NH(CH2)3]2NH2      H
    10 RA-A-3     H   (C9-C12)     α-DMP   CH2OH     NH-(CH2)3-N[CH2)3NH2]2      H
    11 A-A-1     H   (C9--C12)     α-DMP   COOH     NH(CH2)3N(CH3)2      H
    12 PyA-A-1     H   (C9-C12)     α-DMP   COOΘ     NH(CH2)3N(CH3)2   P(NC4H8)3
    13 A-A-3/B0     H     iC10     α-DMP   COOH     NH(CH2)3-N[(CH2)3NH2]2      H
    14 ABA-A-1     H   (C9-C12)     α-DMP   CONHCH3     NH(CH2)3N(CH3)2      H
                                                    表I(续)
化合物编  号 识别代码 R1 R2 M Y X Z
   15 ADA-A-1    H   (C9-C12)     α-DMP    CONH(CH2)3N(CH3)2     NH(CH2)3N(CH3)2       H
   16 PyRA-A-1    H   (C9-C12)     α-DMP     CH2OH     NH(CH2)3N(CH3)2 P(NC4H8)3CH3COOΘ
   17 A-A-2    H   (C9-C12)     α-DMP     COOH   NH-(CH2)3-[NH(CH2)3]2-NH2       H
   18 AA-A-1    H   (C9-C12)     α-DMP     CONH2     NH(CH2)3N(CH3)2       H
   19 ACA-A-1    H   (C9-C12)     α-DMP   CON(CH3)2     NH(CH2)3N(CH3)2       H
   20 AA-A-2/B0    H     iC10     α-DMP     CONH2   NH-(CH2)3-[NH(CH2)3]2-NH2       H
   21 AA-A-3    H   (C9-C12)     α-DMP     CONH2     NH(CH2)3-N[(CH2)3NH2]2       H
   22 PyA-A-3    H   (C9-C12)     α-DMP     COOH     NH(CH2)3-N[(CH2)3NH2]2  P(NC4H8)3CΘ
   23 PyAA-A-1    H  ( C9-C12)     α-DMP     CONH2     NH(CH2)3N(CH3)2  P(NC4H8)3CΘ
   24 RA-A-4    H   (C9-C12)     α-DMP     CH2OH N     N-CH3       H
   25 MA-A-4    H   (C9-C12)     α-DMP     COOCH3 N     N-CH3       H
   26 DM-RA-A-1    H   (C9-C12)        H     CH2OH     NH(CH2)3N(CH3)2       H
                                                        表I(续)
 化合物编 号    识别代码    R1       R2     M     Y            X    Z
   27 DM-RA-A-1/B0    H      iC10     H     CH2OH     NH(CH2)3N(CH3)2    H
   28 DM-MA-A-1    H    (C9-C12)     H    COOCH3     NH(CH2)3N(CH3)2    H
   29 RA-A-1/B    H  iC10/nC11   α-DMP    CH2OH     NH(CH2)3N(CH3)2    H
   30 MA-A-A-1/B    H  iC10/nC11   α-DMp    COOCH3     NH(CH2)3N(CH3)2    H
   31 RA-A-1/A    H     nC10   α-DMP    CH2OH     NH(CH2)3N(CH3)2    H
   32 MA-A-1/A    H     nC10   α-DMP    COOCH3     NH(CH2)3N(CH3)2    H
   33 RA-A-1/B1    H     nC11   α-DMP    CH2OH     NH(CH2)3N(CH3)2    H
   34 MA-A-1/B1    H     nC11   α-DMP    COOCH3     NH(CH2)3N(CH3)2    H
(NC4H8)3＝(吡咯烷子基)3α-DMP＝α-D-吡喃甘露糖基iC10＝9-甲基癸基(相应于A40926的因子B0)nC10＝正癸基(相应于A40926的因子A)nC11＝正十一烷基(相应于A40926的因子B1)iC10/nC11＝9-甲基癸基和正十一烷基(相应于A40926的因子B)(C9-C12)＝C9-C12烷基(相应于A40926复合物的所有因子)(NC4H8)3＝(吡咯烷子基)3α-DMP＝α-D-吡喃甘露糖基ic10＝9-甲基癸基(相应于A40926的因子B0)nc10＝正癸基(相应于A40926的因子A)nc11＝正十一烷基(相应于A40926的因子B1)ic10/nc11＝9-甲基癸基及正十一烷基(相应于A40926
         的因子B)(C9-C11)＝C9-C12烷基(相应于A40926复合物的所有
        因子)
本发明的抗菌素A40926的衍生物主要对革兰氏阳性菌有活性。
特别是，本发明化合物对抗糖肽耐药性的肠球菌和葡萄球菌有出人意外的活性。
测定了式(I)抗菌素A40926衍生物对抗某些选定的革兰氏阳性菌株的抗菌活性，该活性以最小抑制浓度(MIC)表示，并与替考拉宁及抗菌素A40926复合物的活性进行了比较。采用微肉汤培养基稀释法，在存在有0.01％(W/V)牛血清白蛋白(组份VSigma)的Müller-Hinton介质肉汤培养基中进行。最终接种约为105cfu/ml，且以在37℃培养18-24小时后未见可视性生长的最低浓度(mcg/ml)为最小抑制浓度(MLC)。
下列表II中列出了代表本发明的一系列化合物的抗菌谱。
                                            表 II
                                           Mlc(mcg/ml)
      菌株L№(1)     替考拉宁PLANIN*  复合物*A/40926*   化合物1RA     化合物2MA-A-1/B0    化合物3RA-A-1/B0   化合物4MA-A-2/B0
  165 金黄色葡萄球菌       0.25    0.13    0.13       0.13     0.13     0.25
  561        ″       8    8    4       1     0.13     0.5
  147 表皮葡萄球菌       4    4    4       0.25     0.13     0.13
  533        ″       8    8    4       0.13     0.06     0.25
  602 出血性葡萄球菌       32    16    8       0.5     0.13     0.25
  49 酿脓链球菌       0.13    0.13    0.13       0.13     0.06     0.13
  44 肺炎链球菌       0.06    0.06    0.03       0.03     0.01     0.13
  149 粪便肠球菌       0.13    0.13    0.13       0.13     0.06     0.25
  562      ″       ＞128    64    16       8     8     16
  997 淋病奈瑟氏菌       32    0.13    2       8     16     32
  47 大肠杆菌       ＞128    ＞128    128       ＞128     ＞128     ＞128
  4   绿脓杆菌       ＞128    128    ＞128       128     128     64
  79 普通变形杆菌       ＞128     64    ＞128       32     128     64
(1)内部收集菌株的代码。
*比较化合物。
                             表 II(续)
          菌株L  №  (1)   化合物11A-A-1    化合物12PyA-A-1   化合物13A-A-3/B0   化合物14ABA-A-1   化合物15ADA-A-1
  165  金黄色葡萄球菌     0.13     0.25     0.06     0.13     0.13
  561        ″     0.5     4     0.13     16     1
  147  表皮葡萄球菌     0.25     2     0.13     8     0.13
  533    ″     0.13     1     0.06     32     0.13
  602  出血性葡萄球菌     0.13     2     0.06     16     0.25
  49  酿脓链球菌     0.03     0.06     0.03     0.06     0.06
  44  肺炎链球菌     0.06     0.06     0.03     0.01     0.06
  149  粪便肠球菌     0.13     0.5     0.13     0.13     0.06
  562      ″     16     4     16     8     8
  997  淋病奈瑟氏菌     1     128     8     ＞128     16
  47  大肠杆菌     ＞128     ＞128     ＞128     ＞128     ＞128
  4    绿脓杆菌     ＞128     ＞128     ＞128     ＞128     ＞128
  79  普通变形杆菌     ＞128     ＞1 28     ＞128     ＞128     ＞128
(1)内部收集菌株的代码
表 II(续)最小抑菌浓度(mcg/ml)
       菌  株LNo.1)   化合物16PyRA-A-1   化合物24RA-A-4   化合物25MA-A-4
   165 金黄色葡萄球菌      1     0.06     0.13
   561        ″      16     2     4
   147  表皮葡萄球菌      4     0.25     1
   533      ″      4     0.13     2
   602 出血性葡萄球菌      8     0.5     2
   49  酿脓链球菌      0.06     0.03     0.06
   44  肺炎链球菌      0.06     0.03     0.06
   149 粪便肠球菌      1     0.06     0.13
   562    ″      8     8     8
   997  淋病奈瑟氏菌      ＞128     16     16
   47  大肠杆菌      ＞128     ＞128     ＞128
   4    绿脓杆菌      ＞128     ＞128     ＞128
   79  普通变形杆菌      ＞128     ＞128     ＞128
(1)内部收集菌株的代码
表  II(续)最小抑菌浓度(mcg/ml)
          菌株L  №(1)     化合物5MA-A-3/B0    化合物6MA-A-1       化合物7PyMA-A-1     化合物8RA-A-1     化合物9RA-A-2   化合物10RA-A-3
   165  金黄色葡萄球菌     0.06     0.13          1      0.13     0.06     0.06
   561       ″     0.5     1         16      0.13     0.25     0.13
   147  表反匍萄球菌     0.13     0.25          8      0.13     0.13     0.06
   533    ″     0.13     0.13          4      0.06     0.25     0.06
   602  出血性葡萄球菌     0.06     0.5          8      0.13     0.13     0.13
   49 酿脓链球菌     0.03     0.13          0.13      0.06     0.06     0.03
   44  肺炎链球菌     0.03     0.03          0.06      0.01     0.06     0.01
   149  粪便肠球菌     0.13     0.13          0.5      0.13     0.13     0.13
   562     ″     8     8          8      8     8     8
   997  淋病奈瑟氏菌     32     8        ＞128       16     64     32
   47 大肠杆菌    ＞128    ＞128        ＞128     ＞128    ＞128    ＞128
   4  绿脓杆菌     64     128        ＞128       128     64     16
   79  普通变形杆菌     64     32        ＞128     ＞128    ＞128    ＞128
(1)内部收集菌株的代码
下列表III中列出本发明的某些有代表性的化合物的体外活性。并与替考拉宁和万古霉素的体外活性进行比较。在一般治疗中，所指活性为在体外对抗糖肽高度耐药性的肠球菌菌株的活性。
                                 表 III
                               MIC(μg/ml)
菌株(1)     化合物6MA-A-1     化合物8RA-A-1 替考拉宁 万古霉素
  粪便肠球菌L 560L 562L 563 32816 32816 ＞128＞128＞128 ＞128＞128＞128
  粪便肠球菌L 564L 565L 569L 1650L 1652L 1666L 1680L 1681L 1683L 1686 8816648328844 8816328328884 ＞128＞128＞128＞128＞128＞128＞128＞128＞128＞128 ＞128＞128＞128＞128＞128＞128＞128＞128＞128＞128
(1)：内部代码
下列表IV列出本发明某些代表性化合物在小鼠体内进行败血病链球菌实验的结果。
本实验按V，Arioli等人在Journal of Antibiotics29，511(1976)中所描述的方法进行。
                表  IV
化合物编号 感染酿脓链球菌C203，给药途径为皮下给药(ED50)(mg/kg)
    替考拉宁        0.16
A 40926 复合物        0.35
化合物  1 RA 0.08
″      2 MA-A-l/B0        0.03
″      3 RA-A-1/B0        0.03
″      4 MA-A-2/B0        0.13
″      5 MA-A-3/B0        0.04
″      6 MA-A-1 0.03
″      7 PyMA-A-1        0.11
″      8 RA-A-1 0.03
″      11 A-A-1 0.03
″      12 PyA-A-1        0.04
″      13 A-A-3/B0        0.05
″      15 ADA-A-1 0.05
″      16 PyRA-A-1        0.06
尽管上述数据中显示抗淋病奈瑟氏菌的活性普遍低于前体A40926，但是，如果与对照化合物相比，本发明化合物具有良好的抗葡萄球菌和肠球菌的临床分离菌的活性。特别地，它们：a)在体外对糖肽-中间体或糖肽耐药性的葡萄球菌，特别是凝
固酶阴性和甲氧苯清霉素耐药性的葡萄球菌的活性明显地高于
替考拉宁和A40926；b)在体外对糖肽高度耐药性的肠球菌有活性，而该球菌对替考
拉宁和万古霉素是高度耐药的，且对A-40926(MIC
≥64mcg/ml)也或多或少有耐药性；c)在体内实验中，对小鼠体内败血病链球菌比替考拉宁和A
40926更有效疗。
由上述所报导的抗微生物活性看来，本发明化合物可被有效地用做抗菌制剂的活性成份，该类制剂可用在人身上和兽医用药，以预防和治疗由对上述活性成份敏感的病源性细菌所导致的疾病，特别是治疗由肠球菌，链球菌及葡萄球菌株所引起的感染，该类菌株对糖肽类抗菌素敏感性较低。
本发明化合物可经口服，局部和非肠道等途经给药，尤以非肠道途经可取。
根据不同的给药途经，可将这些化合物制成不同的剂型。用于口服的剂型可以是胶囊，片剂，液体溶液剂，或悬浮剂。已知胶囊和片剂中除活性成份外，可含有常规的赋形剂，如稀释剂，像乳糖，磷酸钙，山梨醇等等；润滑剂，如硬脂酸镁，滑石粉，聚乙二醇；结合剂，如聚乙烯吡咯烷酮，明胶，山梨醇，黄蓍胶，阿拉伯胶；调味剂，以及可按受的分散剂和湿润剂。通常以水性或油性溶液或悬浮液形式存在的液体制剂中，可含有常规的添加剂，如悬浮剂。
局部应用时，本发明化合物可制成适合于经鼻粘膜，咽粘膜或支气管组织吸收的剂型，并且通常采用液体喷雾剂或吸入剂，锭剂或咽喉涂剂等剂型。
治疗眼和耳疾病时，本发明化合物常呈液体或半液体状形式，常规应用的为与亲水性或亲脂性基质配成的油膏，乳膏，洗剂，涂剂或粉剂。
直肠给药时，本发明化合物可制成栓剂给药，该栓剂中混有常规赋形剂，例如，可可脂，蜡，鲸蜡或聚乙二醇及其衍生物。
用于注射的组合物可制成为与油或水性赋形剂一起形成的悬浮液，溶液或乳浊液。并可含有调配剂，如悬浮剂，稳定剂和/或分散剂。
另外，该活性成分可呈粉状，在使用时加进合适的赋形剂，如无菌水，以便重组成。
活性成分的服用量随各种因素而定，如病人的年龄和病情，给药途径和频率，以及涉及到的引起疾病的动因。
本发明化合物在1-40mg/每公斤体重活性成分的剂量范围内通常是有疗效的。根据特定化合物的个性，感染情况和病人，该有效剂是可在一天内一次服用，或一天内分2-4次服用。特别合适的组合物为每单位含有约30-500mg的剂型单位。实例1 制备起始物(MA)
(式(II)化合物，其中Y′为-COOCH3。X′为
-OH，R′1为-H，R′2为相应于A40926复合物诸
因子的(C9-C12)烷基，M′为α-D-吡喃甘露糖基，
且Z为-H)
将按照EP-A-177882制得的抗菌素A40926复合物(150mg；0.0866mmole)溶于甲醇(30ml)，并用浓硫酸将PH调至2。将该混合物于室温下搅拌26小时。当用三乙胺(TEA)0.15ml将PH调至6时出现沉淀。加入乙醚后收集该沉淀，用乙醚彻底洗涤并干燥。产率：150mg(99％)实例2 制备化合物1(RA)
(式(I)化合物，其中Y为-CH2OH，X为-OH，
R1为-H，R2为相应于A40926复合物诸因子的
(C9-C12)烷基，M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z
为-H)
步骤a：制备N(15)-(t-BOC)-MA
向搅拌着的1.8g MA(根据实例1制备的化合物)和1g碳酸氢钠溶于50ml二噁烷/水(1∶1)溶液的溶液中，于5℃下在15分钟内滴加0.25g二-叔-丁基-二碳酸酯溶于5ml二噁烷的溶液。在室温下1小时后，用1N盐酸将反应混合液调至PH4，之后，加入150ml水并用正-丁醇(2×100ml)提取生成的混合液。分出有机相，用100ml水洗涤，然后于40℃下减压浓缩至小量体积(约25ml)。收集加入乙醚(100ml)时沉淀出的固体，在室温下真空干燥过夜，得到1.6g标题化合物N(15)-(t-BOC)-MA，其纯度足以进行下步反应。
步骤bg制备N(15)-(t-BOC)-RA
按上述步骤a所制备的0.9g化合物与50ml水加30ml正丁醇/乙醚(1∶1)混合液所组成的搅拌着的悬浮液中，加入0.9g硼氢化钠，该还原剂是于室温下30分钟内分次加入的，随后将反应混合液于室温下搅拌1小时。之后，冷却至5℃，加入1.5ml冰醋酸，再加50ml水，所得混合物用正丁醇提取(100ml)，并且按上述步骤处理有机相，生成0.8g标题化合物，纯度足以进行最终步骤c。
步骤c：
将溶有0.5g N(15)-(t-BOC)-RA化合物(按上述步骤b制备)的5ml干燥三氟乙酸(TFA)溶液，在室温下搅拌1分钟(或改变为在0-5℃下20-30分钟)，然后将其在0°-5℃下倒入10ml甲醇/乙醚(1/4)中，经过滤，乙醚洗涤及室温下真空干燥过夜，得到标题化合物RA 0.35g。按下述方法，通过在硅烷化的硅胶上进行逆相柱层析，合并所有只含单一因子的部分，制得纯的化合物RA样品0.15g。实例3：制备化合物2(MA-A-1/B0)及6(MA-A-1)
(式(I)化合物，其中Y为-COOCH3，X为-NH
-(CH2)3-N(CH3)2，R1为-H，R2为
9-甲基癸基(MA-A-1/B0)，或相应于A-
40926复合物的(C9-C12烷基诸因子
(MA-A-1)，M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z为-H)方法A
步骤a：制备N(15)-(t-BOC)-MA-A-1
向搅拌着的1。3gN(15)-(t-BOC)-MA溶于30mlDMSO(按上述实例2中步骤a制备)的溶液中，加入0.2ml的3.3-二甲基氨基-1-丙胺和0.3ml二苯基磷酸酯叠氮化物(DPPA)。室温下搅拌4小时，而后再加入0.15ml的DPPA，继续在室温下搅拌20小时。收集加入170ml乙醚后沉淀出的固体，生成1.3g标题化合物N(15)-(t-BOC)-MA-A-1。
步骤b：
将上述产物溶于10mlTFA中。所得溶液在室温下搅拌20分钟，而后加入90ml乙醚。收集沉淀出的固体，用50ml乙醚洗涤2次，而后在室温下真空干燥过夜，得到0.9g标题化合物(MA-A-1)粗制品，经在硅烷化硅胶柱进行逆相柱层析(仅合并所需的含单一因子的部分)，生成0.15g纯MA-A-1/B0。方法B
在室温下，向搅拌着的1.8g(约1mmol)实例1化合物(MA)溶于30mlDMF的溶液中，加入0.14ml(约1.15mmol)3，3-二甲氨基-1-丙胺及600mg(约1.2mmol)PyBOP。在20°-25℃下搅拌3小时之后，加入150ml乙醚。收集沉淀出的沉淀，而后用逆相柱层析纯制(合并所有含纯单一因子的部分)，得到1.15gMA-A-1化合物。实例4：制备化合物7(PyMA-A-1)
(式(I)化合物其中Y为-COOCH3，X为
-NH-(CH2)3-N(CH3)2，R1为-H，
R2为相应于A40926复合物诸因子的(C9-C12)
烷基，M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z为
P(NC4H8)3CH3COOΘ)
向搅拌着的1.8g(约2mmol)MA化合物(如实例1所制备)溶于40mlDMF的溶液中，在室温下，加入2ml(约16mmol)3，3-二甲氨基-1-丙胺及3.12g(约6mmol)PyBOP。30分钟后，按实例3方法B所述处理反应混合液，得到1.5g标题化合物PyMA-A-1。实例5：制备化合物3(RA-A-1/B0)及8(RA-A-
1)(式(I)化合物，其中Y为-CH2OH，X为
-NH-(CH2)3-N(CH3)2，R1为-H，
R2为9-甲基癸基(RA-A-1/B0)或相应于A
40926复合物的(C9-C12)-烷基诸因子。
(RA-A-1)，M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z为
-H)方法A
步骤a：制备N(15)-(t-BOC)-RA-A-1
实质上通过用与实例3，方法A，步骤a同样的步骤，从2gN(15)-(t-BOC)-RA(实例2，步骤b)获得1.7g标题化合物N(15)-(t-BOC)-RA-A-1。
步骤b：
实质上通过用与实例2，步骤c同样的步骤，从1.7g上述化合物N(15)-(t-BOC)-RA-1，得到0.22g纯化合物RA-A-1。
因子RA-A-1/B0是按与上述相同的方法制得的，仅在逆相层析纯制中有一点不同，即，仅收集合并含有纯的所需单一因子的那些部分。方法B
向搅拌着的50g(约27mmol)实例2化合物(RA)溶于200mlDMF的溶液中，于室温下，加入11ml(约90mmol)3，3-(N，N-二甲氨基)-1-丙胺及18g(约35mmol)PyBOP。搅拌15分钟后，加入1升乙酸乙酯，收集沉淀出的固体(约63g)，经逆相柱层析(合并所有含有纯的单一因子的部分)，得到25g化合物RA-A-1。实例6：制备化合物4(MA-A-2/B0)
(式(I)化合物，其中Y为-COOCH3，X为
-NH-(CH2)3-〔NH-(CH2)3-〕2-NH2，
R1为-H，R2为9-甲基癸基，M为α-D-吡喃甘露
糖基，且Z为-H)
步骤a ：制备N(15)-(t-BOC)-MA，氰甲酯
将溶有2.5g实例2，步骤a化合物(N(15)-(t-BOC)-MA)，0.25mlTEA，及2.5ml氯乙腈，10ml二甲基亚砜(DMSO)的溶液，在室温下搅拌4小时。之后，加入90ml乙酸乙酯，收集沉淀出的固体，得到2.8g标题化合物N15-(t-BOC)-MA氰甲酯粗制品。
步骤b：制备N(15)-(t-BOC)-MA-A-2
将上述粗品氰甲酯化合物溶于30mlDMSO中，向其中加入2.8mlN，N ′-双-(3-氨基丙基)-1，3-丙二胺，且在室温下将反应混合液搅拌4小时。之后，加入200ml乙酸乙酯，收集沉淀出的固体，得到3g标题化合物N(15)-(t-BOC)-MA-A-2粗制品。
步骤c：
将上述粗品化合物按实例3，方法A，步骤b的方法用TFA处理，经逆相柱层析(合并仅含有所需纯单一因子的部分)，生成0.45g纯的化合物MA-A-2/B0。实例7：制备化合物5(MA-A-3/B0)
(式(I)化合物，其中Y为-COOCH3，X为
-NH-(CH2)3-N-〔-(CH2)3-NH2〕2，R1
为-H，R2为9-甲基癸烷，M为α-D-吡喃甘露糖
基，且Z为-H)
步骤a：制备N′，N″-二(t-BOC)-三(3-氨丙
基)胺
N′，N″保护的多聚胺按InternationalApplication Publ. №. WO 90/11300中所述方法进行制备。
步骤b：MA与N′N″-二(t-BOC)-三(3-氨基
丙基)胺的缩合
将18g(约10mmol)实例1化合物(MA)，14g(约36mmol)保护的胺，3ml(约22mmol)TEA，及6ml(约28mmol)DPPA与150mlDMSO组成的溶液于室温下搅拌2小时，然后加入500ml乙酸乙酯。收集沉淀出的固体(约22g)，无需纯制即可用于下步反应。
步骤c：除去t-BOC保护基：
将步骤b的粗产物溶于150ml干燥的，预先冷却至0℃的TFA中，将所得溶液于0-5℃下搅拌20分钟。然后，加入150ml甲醇和300ml乙醚。收集沉淀出之固体，用乙醚洗数次，经逆相柱层析(仅合并含有纯的所需单一因子的部分)得到9g化合物MA-A-3/B0。实例8：制备化合物9(RA-A-2)
(式(I)化合物，其中Y为-CH2OH，X为
-NH-(CH2)3-〔NH(CH2)3〕2-NH2，R1为
-H，R2为相应于A40926复合物的(C9-C12)
烷基诸因子。M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z为-H)
步骤a：制备N(15)-(t-BOC)-RA氰甲基酯
将8g(约4mmol)实例2，步骤b化合物(N(15)-(t-BOC)-RA)，0.75ml(约5.5mmol)TEA及8ml氯乙腈和40mlDMSO组成之溶液在室温下搅拌5小时。然后，加入200ml乙酸乙酯，收集沉淀出的固体，得到8.2g标题化合物氰甲基酯粗品。
步骤b及c：与N ′，N″-双(3-氨基丙基)-1，3-
丙二胺缩合及酸解t-BOC-保护基
将步骤a氰甲基酯粗品溶于80mlDMSO中，加入99N，N′-双(3-氨基丙基)-1，3-丙二胺，在室温下搅拌20小时后，加入320ml乙酸乙酯，收集沉淀出的固体，并将其再溶于70ml冰冷干燥的TFA中，所得溶液于0℃下搅拌10分钟，然后加入230ml冷却的乙醚。收集沉淀出的固体，并迅速将其再溶解于200ml水中，用1N NaOH将溶液PH调至5.5，用逆相柱层析(合并含所有纯的单一因子的部分)，纯化得到1.3g标题化合物RA-A-2精制品。实例9：制备化合物10(RA-A-3)
(式(I)化合物，其中Y为-CH2OH，X为
-NH-(CH2)3-N-〔(CH2)3NH2〕2，R1为
H，R2为相应于A40926复合物的(C9-C12)
烷基诸因子，M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z为-H)
在10℃下，向搅拌着的溶有9g(约5mmol)实例2化合物(RA)的100ml DMSO溶液中，加入7g(约18mmol)N′，N″-二(t-BOC)-三-(3-氨基丙胺)(实例7，步骤a)，1.5ml TEA及3ml DPPA。在10℃下搅拌1小时并在室温下搅拌4小时之后，加入400ml乙酸乙酯。将沉淀出的固体(约12g)再溶解于80ml冰冷的TFA中，所得溶液在0-5℃下搅拌10分钟，而后，加入预先冷至-10℃的甲醇/乙醚(1/1)(约300ml)混合液，收集沉淀出的固体，并迅速再溶解于200ml水中，用1N NaOH将所得溶液的PH调至4，并用逆相层析纯制(合并所有含有单一因子的部分)，得到1.8g标题化合物RA-A-3精制品。实例10：制备化合物11(A-A-1)
(式(I)化合物，其中Y为-COOH，X为-NH-(CH2)3-N(CH3)2
，R1为-H，R2为相
应于A40926复合物的(C9-C12)烷基诸因子，
M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z为-H)
在室温下，向搅拌着的溶有5g(约2.5mmol)化合物6(MA-A-1，按实例3，方法B所述方法制备)的60ml四氢呋喃(THF)悬浮液中，加入10ml水和20ml1N的NaOH。30分钟后，用1N HCl调所得溶液的PH至7，加入150ml正丁烷，在40℃减压下，将该混合液浓缩至少量体积(约20ml)。收集加入乙醚(约200ml)后沉淀出的固体(5.2g)，经逆相层析纯制(合并所有含有纯的单一因子的部分)，得到2.1g标题化合物A-A-1。实例11：制备化合物12(PyA-A-1)
(式(I)化合物，其中Y为-COOΘ，X为
-NH-(CH2)3-N(CH3)2，R1为-H，R2为相
应于A40926复合物的(C9-C12)烷基诸因子。
M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z为P(NC4H8)3)
按照与实例10所述相同的条件(即从化合物6(MA-A-1)制备化合物11(A-A-1)的条件)，从实例4的化合物7(PyMA-A-1)制得化合物12(PyA-A-1)，产率为35％。实例12：制备化合物13(A-A-3/B0)
(式(I)化合物，其中Y为-COOH，X为
-NH-(CH2)3-N〔(CH2)3NH2〕2，R1为H，
R2为9-甲基癸基，M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z
为H)
按照与实例10所述相同的条件(即从化合物6(MA-A-1)制备化合物11(A-A-1)的条件)，从实例7化合物5(MA-A-3/B0)制得化合物13(A-A-3/B0)，产率为41％。实例13：制备化合物14(ABA-A-1)
(化合物式(I)，其中Y为-CONHCH3，X为
-NH-(CH2)3-N(CH3)2，R1为-H，
R2为(C9-C12)烷基(相应于A40926复合物
诸因子)，M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z为-H)
步骤a：制备N(15)-(t-BOC)-A-A-1，6B-氰
       甲基酯
在室温下，向搅拌着的溶有22g(约11mmol)化合物11(A-A-1)(实例10)及3g NaHCO3的220ml水/二噁烷(1∶1)溶液中，在10分钟内滴加溶于20ml干燥二噁烷的5g二-叔丁基-二碳酸酯溶液，在室温下搅拌2小时后，加入200ml水，用1N HCl将所得溶液调至PH3，并且用300ml正丁醇提取，分出有机相，在35℃下减压浓缩至小量体积(约45ml)。收集加入乙醚(约250ml)时沉淀出的固体(约20g，N15-(t-BOC)-A-A-1粗品)，并将其再溶解于150mlDMSO中，加入3mlTEA及20ml氯乙腈后，将所得溶液在室温下搅拌5小时，而后加入500ml乙酸乙酯。沉淀出的固体(约18g氰甲基酯)纯度足够用于进行下步反应。
步骤b：上述6B-氰甲基酯与甲胺的反应及除去t-BOC保
       护基
将5g上述产物溶于75ml、25％(w/v)甲胺的乙醇溶液中，并在室温下搅拌3小时，而后加入300ml乙醚，收集沉淀出的固体(约5.1g)并再将其于0℃下溶于35ml TFA中，所得溶液在0℃搅拌15分钟，而后加入50ml甲醇/乙醚(1∶1)混合液，沉淀出4.5g粗品，经逆相柱层析(收集所有含有纯的单一因子的部分)，得到1.7g标题化合物14(ABA-A-1)。实例14：制备化合物15(ADA-A-1)
(式(I)化合物，其中Y为-CONH-(CH2)3-N(CH3)2
，X为-NH-(CH2)3-N(CH3)2，
R1为-H，R2为相应于A40926复
合物诸因子的(C9-C12)烷基，M为α-D-吡喃甘
露糖基，且Z为-H)
将溶有7g(约4mmol)抗菌素A40926复合物，2.5ml(约20mmol)3，3-二甲氨基-1-丙胺，及5.2g(约10mmol)PyBOP的DMF(70ml)溶液在室温下搅拌1小时，而后加入400ml乙酸乙酯，收集沉淀出的固体，用逆相层析法纯制(合并所有含纯的单一因子的部分)，得到2.1g标题化合物15(ADA-A-1)实例15：制备化合物16(PyRA-A-1)
(式(I)化合物，其中Y为-CH2OH，X为-NH
-(CH2)3-N(CH3)2，R1为-H，R2为
相应于A40926复合物诸因子的(C9-C12)烷
基，M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z为
P(NC4H8)3CH3COOΘ)
向搅拌着的溶有400mg(约0.2mmol)化合物7(PyMA-A-1，制备方法见实例4所述)的20ml水溶液中。在室温下，加入4ml正丁醇和200mgNaBH4。在室温搅拌过夜后，用冰醋酸将反应混合液PH调至4.5，并用50ml正丁醇提取。分出有机相，在45℃下减压蒸除溶剂，固体残余物经逆相层析纯制(合并所有含纯的单一因子的部分)，得到175mg标题化合物16(PyRA-A-1)精制品。实例16：制备化合物25(MA-A-4)
(式(I)化合物，其中Y为-COOCH3，X为
Figure C9310001300751
R1为-H，R2为相应于A40926复合物诸因子的
(C9-C12)烷基，M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z
为-H)
向搅拌着的溶有5g实例1化合物(MA)的DMF/DMSO(60ml，5∶1)溶液中，于室温下，加入0.3ml N-甲基-哌嗪及1.7gPyBOP。反应1小时后，加入140ml乙酸乙酯，收集沉淀出的固体，用逆相柱层析纯制(合并所有含纯的单一因子的部分)，得到1.9g标题化合物MA-A-4。实例17：制备化合物24(RA-A-4)
(式(I)化合物，其中Y为-CH2OH，X为
Figure C9310001300752
R1为-H，R2为相应于A40926复合物诸因子的
(C9-C12)烷基，M为α-D-吡喃甘露糖基，且Z
为-H)
确切地遵照实例16中所述方法，并在同样反应条件下，从5gRA原料，制得2.7g标题化合物RA-A-4精制品。逆相柱层析法
用逆相柱层析在硅烷化硅胶上(0.063-0.2mm；Merck)制得上述化合物的纯品。将粗品(例如，0.5g)溶于最少量的乙腈/水(1∶1)混合液中，而后用1N NaOH调溶液PH至7，用水稀释至混浊溶液形成，之后，在剧烈搅拌下加入数滴乙腈，直至澄清液刚形成，就将其载到含水的硅烷化硅胶柱上，在10小时内，按10％-60％乙腈溶于0.1N乙酸的线性梯度进行洗脱，流速为250ml/小时左右，每20ml收集为一馏份，用HPLC检测，将含有纯的式(I)化合物的馏份选出，当复合化合物(其中R2为相应于A40926复合物因子的(C9-C12)烷基)是所需要的时，将所有含纯的因子的部分合并，在40℃下减压蒸除溶剂，并需有正丁醇存在，以防止发泡。
当在制备式(I)化合物的方法中，以抗菌素A40926复合物用作为前体，且式(I)酰胺化合物中单一因子是所需要的时(其中R2相应于表示A40926复合物中单一因子(例如，R2：9-甲基癸基)特征的含意之一)，只有经HPLC检定的，含有所要的纯因子的部分被合并，并按上述方法处理。
本发明化合物的每一个单一因子显著个性和结构是通过HPLC分析每个反应产物而测定的。从而，所需因子的初步鉴定是用某个40926复合物的HPLC指纹区与反应产物粗制品的HPLC指纹区进行比较而获得的(见，L.F.Zerilli等人在“RapidCommunications in Mass Spectrometry Vol. 6，109，1992”中有关HPLC模式的报导)(在该文中用A40926复合物因子B0作为因子B的参照)。
HPLC分析按下列条件进行：将层析柱Hibar(125×4mmMerck)用Li-Chrospher Rp-8(5μm)预先装填，用Varian Model 5500液相色谱仪(配以可变UV检测器)，在254nm记录色谱；按20-60％乙腈/0.2％甲酸铵水溶液进行线性梯度洗脱，洗脱时间30分钟，流速1.5ml/分钟。
通常，由于本发明所有的复合物均有与相应的A40926复合物前体所特有的HPLC指纹区相似的典型HPLC指纹区，因而通过2个HPLC图谱的相关性比较，可十分容易地分别出相应于A40926复合物前体的本发明化合物的单一因子。含有上述纯因子的逆相层析洗脱部分可按上述方法分离和加工。为进一步确认(C9-C12)烷基链的鉴定，可按上述方法将每个部分的测试样品蒸干，给出一可进行气相色谱/质谱(GC/MS)检测的样品，GC/MS测定方法见上述由L.F.Zerilli等人论文中提供的方法。
表V报导了每个本发明的式(I)化合物纯因子的保留时间(tR)，其中R2为9-甲基癸基(即相应于A40926复合物中B0因子，A40926复合物为逆相纯制方法的对照物)。
该表还报导了A40926复合物前体因子B0及相应的酯起始物(MA)在上述同样条件下的保留时间tR。
                         表  V
                       HPLC 分析
     化 合 物     tR(分钟)
      前 体       9.7
   起始物(MA)       11.3
     化合物1       10.2
     化合物2       13.7
     化合物3       15.3
     化合物4       15.5
     化合物5       15.3
     化合物6       13.7
     化合物7       20.5
     化合物8       15.3
     化合物9       12.9
    化合物10       14.8
    化合物11       12.1
    化合物12       17.4
    化合物13       12.2
    化合物14       14.7
    化合物15       16.4
    化合物16       19.2
    化合物24       13.4
    化合物25       14.8
1H-及31P-NMR谱
在500MHz的1H-NMR在下列条件下测得：温度范围20℃-30℃，仪器Bruker AM 500 Spectrometra，溶剂DMSO-D6，内标TMS(δ＝0.00PPm)表VI报导了部分代表性化合物最有意义的化学位移。
                               表 VI化合物1(RA)：0.85，1.13，1.42，1.98(酰基链)；3.72
  (CH2OH)，4.05-6.22(肽CH′s)；6.43-
  8.52(芳基质子及肽NH)化合物2(MA-A-1/B0)：0.83，1.14，1.38，1.99(酰基链)，1.83，
          2.83(CH2-侧链)，2.73(N(CH3)2)；
          4.11-6.10(肽CH′s)；6.48-9.50
          (芳基质子及NH)；化合物3(RA-A-1/B3)：0.84，3.14，1.38，1.92(酰基链)；1.72，
          2.75(CH2-侧链)；2.53(N(CH3)2)；
          3.69(CH2-OH)；4.09-6.11(肽CH′s)；
          6.41-9.18(aromatic protons and peptidic
          (芳基质子及肽NH)；化合物4(MA-A-2/B0)：0.94，1.15，1.39，1.98(酰基链)；1.96，
          2.36(CH2-侧链)；4.08-6.15(肽
          CH′s )；6.42-9.61(芳基质子及肽NH)；化合物5(MA-A-3/B0) 0.85，1.13，1，42，2.02(酰基链)；1.73，
         2.82(烷基氨基链)；2.42(-N-CH3)；
         L63(COOCH3)；3.10-3.80(糖)；4.10-
         6.10(肽CH′s)；6.41-8.52
         (芳基质子及肽NH)；
                          表VI(续)化合物7(PyMA-A-1)：0.84，1.13，1.42，2.01((酰基链)；
        1.83，2.16(二甲基丙基-酰胺)；     2.32
        (NH-CH3)；1.70，3.23(吡咯烷)；3.10
        3.80((糖)；4.10-6.20(pe(肽CH)；
        6.38-8.40(芳基质子及肽NH)；化合物9(RA-A-2)0.84，1.13，1.39，1.98 (酰基链)；
    1.88，2.91(烷基氨基链)；2.41
    (NH-CE3)；3.10-3.80(糖)；4.10-6.10
    (肽CH)；6.38-8.49
    (芳基质子及肽NH)；化合物10(RA-A-3)：0.84，1.13，1，39，1.98(酰基链)；
      1.73，2.82(烷基氨基链)；  2.47
      (NH-CH3)；3.10-3.80(糖)；4.10-6.10
      (肽-CH)；6.37-8.70
      (芳基质子及肽NH)；9.2-10.4
      (酚OH)；化合物11(A-A-1)：0.84，1.13，1.39，2.00(酰基链)；
     1.74-2.79(烷基氨基链)2.37
     (NH-CH3)；3.10-3.80(糖)；4.10-6.10
     (肽CH)；6，39-8.50
     (芳基质子及肽NH)；
                   表 VI (续)化合物12(PyA-A-1)：0.34，1.13，1.42，2.02(酰基链)：
         1.87，2.73，3.00 (二甲基丙基酰胺)；
         2.48(NH-CH3)；1.71，3.30(吡咯烷)；
         3.10-3.80(糖)；4.10-5.25(肽CH).
                6.38-8.55(芳基质子及肽NH)；化合物13(A-A-3/B0)：0.34，1.13，1.42，2.02(酰基链)；2.33
         (NH-CH3)；1.71，2.80(烷基氨基链)；
         3.10-3.80(糖)；4.10-6.10 (肽CH)；
                6.37-8.50(芳基质子及肽NH)；化合物14(ABA-A-1)：0.84，1.13，1.42，1.96(酰基链)；2.35
       [(CH-NH)-CH3)]；1.78，2.70(烷基氨基链)
                3.10-3.80(糖)；4.10-6.10
               (肽CH)；6.37-8.50
       (芳基质子及肽NH)；化合物15(ADA-A-1)：0.82，1.13，1.40，1.98(酰基链)；2.50
      (NH-CH3)；1.72，1.85，2.73，3.00
      (烷氨基链)；3.10-3.80(糖)；
      4.10-6.10(肽CH)；6.40-8.55
      (芳基质子及肽NH)；
                    表 VI (续)化合物16(PyRA-A-1)：0.84，1.13，1.41，2.00(酰基链)；2.33
       (NH-CH3)；3，82，2，16
         (二甲基丙基酰胺)；1.71，3.23
       (吡咯啉)；3.10-3.80(糖)；4.10-
       6，20(肽CH).6.33-8.40
       (芳基质子及肽NH)：化合物24(RA-A-4)：0.84，1.13，1.40，1.97(酰基链)；2.10
            (哌嗪CH3)；2.38(NH-CH3)；3.10-3.80
      (糖)；4.05-6.07(肽CH)；6.38-
      8.49(芳基质子及肽NH)；化合物25(MA-A-4)：0.84，1.13，1.40，2.00(酰基链)；s)；2.13
            (哌嗪CH3)；2.43(NH-CH3)；3.10-3.80
      (糖)；3.63(COOCH3)；4.05-6.09
            (肽CH)；6.38-8.49
      (芳基质子及肽NH)。
31P-NMR谱在161.98MHz(化合物12)或在202.46MHz(化合物7和16)处记录，以DMSO-D6为溶剂，85％H3PO4为内标。化合物7(PyMA-A-1)(31P)：一个信号在8＝24.12ppm化合物12(PyA-A-1)(31P)：一个信号在δ＝23.50ppm化合物16(PyRA-A-1)(31P)：一个信号在δ＝24.11ppm

Claims (20)

1.式I抗菌素A40926及其可用作医药的加成盐，
Figure C9310001300021
其中R1代表氢或氨基保护基；R2代表(C9-C12)烷基；M代表氢，α-D-吡喃甘露糖基或6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基；Y代表羧基，(C1-C4)烷氧羰基，氨羰基，(C1-C4)烷氨羰基，二(C1-C4)烷氨羰基，其中烷基部分可带有选自羟基，氨基，(C1-C4)烷氨基及二(C1-C4)烷氨基或羟甲基的取代基；X代表羟基或具式-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W的氨基基团；其中R3，R4和R5代表氢；烷基1，烷基2及烷基3分别独立地代表具有2-4个碳原子的直链或支链的亚烷基；p和q分别独立地代表零或1；W代表氢，(C1-C4)烷基，氨基，(C1-C4)烷氨基，二(C1-C4)
烷氨基，被一或两个氨基-(C2-C4)烷基基团或者一或两个(C1
-C4)烷氨基-(C2-C4)烷基基团，或者一或两个二(C1-C4)
烷氨基-(C2-C4)烷基基团取代的氨基，或者当p和q均为零
时，可与基团-NR3-烷基1一起代表哌嗪子基或4-甲基哌嗪
子基，附带条件是当X为羟基时，Y代表羟甲基；Z代表氢或基团
Figure C9310001300041
其中AΘ代表无机酸或有机酸中的阴离子，或当在抗菌素的剩余部分有羧酸功能基存在时，它也可代表由所述的羧酸功能团衍生出来的内阴离子。
2.权利要求1中的抗菌素A40926衍生物及其它们可用作医药的加成盐，其中R2代表(C10-C11)烷基，M代表α-D-吡喃甘露糖基，且R1，X，Y和Z的含义同权利要求1。
3.权利要求1中的抗菌素A40926衍生物及其可用作医药的加成盐，其中：R1代表氢或氨基功能保护基；R2代表7-甲基辛基，正壬基，8-甲基壬基，正癸基，9-甲基癸基，正十一烷基，正十二烷基；M代表氢或α-D-吡喃甘露糖基；Y代表羧基，(C1-C4)烷氧羰基，氨羰基，(C1-C4)烷基氨羰基，
二(C1-C4)烷氨羰基，其中烷基部分可带有选自羟基，氨基，
(C1-C4)烷氨基及二(C1-C4)烷氨基或羟甲基的取代基；X代表氨基基团，-NR3-烷基1-(NH-烷基2)p-(NH-烷基3)q-W其中：R3为氢；烷基1，烷基2及烷基3，分别独立地代表具2-4个碳原子的直链亚烷基；p和q分别独立地代表零和1；且W代表氨基，(C1-C4)烷氨基，二(C1-C4)烷氨基，被一或两个氨基-(C2-C4)烷基基团取代的氨基，或当p和q均为零时，与基团-NR3-烷基1一起代表哌嗪子基或4-甲基哌嗪子基；Z代表氢。
4.权利要求1中所要求的抗菌素A40926衍生物及其可用作医药的加成盐，其中：R1代表氢；R2代表7-甲基辛基，正壬基，8-甲基壬基，正癸基，9-甲基癸基，正十一烷基或正十二烷基；M为α-D-吡喃甘露糖基；Y代表羧基，甲氧羰基，氨羰基，甲基氨羰基，二甲基氨羰基，(二甲氨基)乙基氨羰基或羟甲基；X代表氨基基团且选自
-NH-(CH2)3-N(CH3)2，
-NH-(CH2)3-〔NH(CH2)3〕2-NH2，
NH-(CH2)3-N〔(CH2)3NH2〕2及Z代表氢。
5.权利要求4中所要求的抗菌素A40926衍生物及其可用作医药的加成盐，其中，R2代表正癸基，8-甲基壬基，9-甲基癸基或正十一烷基，R1，M，Y，X和Z的含义同权利要求4。
6.如权利要求4中的抗菌素A40926衍生物及其可用作医药的加成盐，其中R2代表9-甲基癸基，R1，M，Y，X和Z的含义同权利要求4；
7.如权利要求4中的抗菌素A40926衍生物及其可用作医药的加成盐，其中Y为甲氧羰基或羟甲基X为-NH-(CH2)3-N(CH3)2，R1，R2，M和Z的含义同权利要求4。
8.制备具式(I)的抗菌素A40926衍生物及其可用作医药的加成盐的方法，
Figure C9310001300061
其中R1代表氢或氨基功能保护基；R2代表(C9-C12)烷基；M代表氢，α-D-吡喃甘露糖基或6-O-乙酰基-α-D吡喃甘露糖基；Y代表羧基，(C1-C4)烷氧羰基，氨基羰基，(C1-C4)烷氨羰基，二(C1-C4)烷氨羰基，其中烷基可带有选自羟基、氨基，(C1-C4)烷氨基及二(C1-C4)烷氨基或羟甲基的取代基；X代表羟基或具下式的氨基基团
-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W
其中：
R3代表氢或(C1-C4)烷基；
烷基1，烷基2和烷基3分别独立地代表具2～10个碳原子的直
链或支链亚烷基；
p和q独立地代表零或1；
R4和R5分别独立地代表氢，(C1-C4)烷基或
R3和R4一起代表连接两个氮原子的(C2-C4)亚烷基，附带条件
是p为1，或者
R4和R5一起代表连接两个氮原子的(C2-C4)亚烷基部分，附带
条件是p和q均为1；
W代表氢，(C1-C4)烷基，氨基，(C1-C4)烷氨基，二(C1-
C4)烷氨基，被一或两个氨基-(C2-C4)烷基部分，或被一或两
个(C1-C4)烷氨基-(C2-C4)烷基部分，或被一或两个二(C1
-C4)烷氨基-(C2-C4)烷基部分取代的氨基，或者，当p和q
均为零时，与基团-NR3-烷基1一起代表哌嗪子基或4-甲基
哌嗪子基，附带条件是当X代表羟基时，Y代表羟甲基；Z代表氢或基团
其中AΘ代表无机酸或有机酸中的阴离子，或当抗菌素的剩余部分有羧酸功能基存在时，它也可以代表由上述羧酸功能基衍生出来的内阴离子；其特征在于：(a)当需要式(I)化合物，其中R1，R2，M，Y及Z如上所述，且X为氨基基团
-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W
其中R3，R4，R5，烷基1，烷基2，烷基3，p，q，及W见
Figure C9310001300082
其中R′1，R′2及M′与R1，R2和M相同，Y′为(C1-C4)烷氧羰基，且X′为羟基，与式III胺反应物进行酰胺化反应，
-NHR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W
                                 (III)
其中R3，R4，R5，烷基1，烷基2，烷基3，p，q，及W同上，该反应在缩合剂存在下进行，或经C(63)羧酸“活化酯”的形成而进行，且i)任意地，将所得到的式(I)衍生物，其中Y为(C1-C4)烷氧羰基，
R1为N(15)-氨基的适宜保护基，且所有其它符号同上，与碱金
属硼氢化物进行还原反应，任意地将N(15)-保护基除去，得到
相应的化合物，其中Y为羟甲基，且R1为氢；ii)任意地，将所得到的式(I)衍生物，其中Y为(C1-C4)烷氧羰基或
羟甲基，R1为N(15)-氨基功能基的适宜保护基，R2，M及Z同
上，且X为氨基基团-NR3-烷基1-NHR4，其中R3，R4
各自独立地表示氢或(C1-C4)烷基，且烷基1同上，或-NR3
-烷基1-NR4-烷基2-NHR5
其中R3，R4，R5各自独立地表示氢或(C1-C4)烷基，烷基1
及烷基2同上，
分别与式(IV)或(IVa)的胺反应物进行烷基化，
r-烷基2-(NR5-烷基3)q-W    r-烷基3-W
   (IV)                               (IVa)
其中符号R5，烷基2，烷基3及W同上，q为0或1，且r代表卤素，甲磺酰基或甲苯磺酰基，该反应在酸接受体存在下，于有机惰性溶剂中进行，任意地，除去N(15)-保护基；
iii)任意地，将所得式(I)衍生物，其中Y为(C1-C4)烷氧羰基，且所有其它符号同上，用碱金属氢氧化物水溶液进行处理，得到相应的Y为羧基的化合物；
iiii)任意地，将所得的式(I)衍生物，其中M为α-D-吡喃甘糖基或6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基，且所有其它符号同上，进行酸水解，生成相应的M为氢的化合物；
(b)当需要式(I)化合物，其中R1，R2，X及M见本权利要求中所述，Y为羟甲基及Z为氢时，将式(II)化合物，其中R1′为N15-氨基功能的适宜保护基，R2′同R2，Y′为(C1-C4)烷氧羰基，且X′为羟基，用碱金属硼氢化物进行还原反应，并任意地，除去N15保护基，得到相应的R1为氢的化合物，且
i)任意地，将所得的式(I)化合物，其中Y为羟甲基，X为羟基且所有的其它符号同上，与式(III)胺反应物进行酰胺化反应，
-NHR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W    (III)
其中R3，R4，R5，烷基1，烷基2，p，q及W定义同上，该反应在缩合剂中进行，或经C63羧酸的活化酯形成，并在有机惰性溶剂中进行；
(c)当需要式(I)衍生物，其中R1，R2，M及Z见本权利要求中序言，Y及COX部分表示同样的基团(C1-C4)烷基氨羰基，二(C1-C4)烷基氨羰基，其中烷基部分可带有选自氨基，(C1-C4)烷氨基及二(C1-C4)烷氨基的取代基时，将式(II)化合物，其中R1′，R2′及M′与R1和R2，M相同，Y′为羧基，且X′为羟基，按上述(a)步骤进行酰胺化反应，该反应是与过量的选自式(III)的胺而进行的，式中符号R3，R4，R5，烷基1，烷基2，p，q及W的含义同上述定义的羧酰胺基团Y及COX；
(d)当需要式(I)衍生物，其中R1，R2，M及Z如上所述，Y及基团COX表示不同的羧酰胺基团，Y的含义为选自氨羰基，(C1-C4)烷氨羰基，二(C1-C4)烷氨基羰基的取代基，其中烷基部分可带有选自羟基，氨基，(C1-C4)烷氨基及二(C1-C4)烷氨基的取代基，且X的含义为具有下式的氨基基团
-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W
其中R3，R4，R5，烷基1，烷基2，烷基3，
p，q及W与本权利要求前述的相同；
i)将式(2)衍生物，其中R1，R2，M及Z同上，X表示氨基基团
-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W
其中R3，R4，R5，烷基1，烷基2，烷基3，p，q及W定义同上，且Y为羧基，在有缩合剂存在下，与合适的胺进行酰胺化反应，形成上述定义的羧酰胺基团Y，或
ii)将式(I)衍生物，其中R1表示N15-氨基功能的保护基，R2，M及Z定义同上，且X代表氨基基团
-NR3-烷基1-(NR4-烷基2)p-(NR5-烷基3)q-W
其中R3，R4，R5，烷基1，烷基2，烷基3，p，q及W定义同上，且Y为羧基，在位置6B处转化为相应的活性酯，且将该活性酯与合适的胺形成上述定义的羧酰胺基团Y，并且任意地，除去N15-保护基，得到相应的R1为氢的化合物。
9.权利要求8的方法，其进一步特征在于，步骤(a)，(b)i)，(c)和(d)i)中的酰胺化反应是在惰性有机溶剂中，在缩合剂存在下，于0℃-20℃进行的，缩合剂选自(C1-C4)烷基、苯基、杂环磷酸酯叠氮化物和苯并三唑氧基-三-(吡咯烷子基)六氟磷酸酯。
10.权利要求8的方法，进一步的特征在于步骤(a)，(b)i)，(c)及(d)ii)的酰胺化方法，通过将式(II)起始物的羧基转化为相应的活性酯，而后将该活性酯在有机极性溶剂中，于5°-60℃之间，与摩尔过量的式(III)胺进行反应而完成酰胺化反应。
11.权利要求10的方法，进一步的特征在于该活性酯为氰甲酯，且它与胺的摩尔比为1∶5至1∶30的范围内。
12.权利要求11中的方法，进一步的特征在于该氰甲酯是按下列条件制备的：将式(II)起始物的羧酸，与大约摩尔过量20-30倍的氯乙腈，在惰性有机溶液中及不会干扰反应的碱的存在下，于5℃-60℃之间进行酯化反应。
13.权利要求8中的方法，进一步的特征在于步骤(a)i)及(b)中，碱金属硼氢化物与式(II)化合物的摩尔比在50至300之间，且该反应在0℃-40℃之间进行。
14.权利要求9中所述的方法，其中进一步的特征在于所用的惰性有机溶剂选自二甲基甲酰胺，二甲氧基乙烷，六甲基磷酰胺，二甲亚砜及其混合物。
15.权利要求9中所述的方法，其中进一步的特征在于所用的有机极性溶剂选自低级链烷醇，二甲基甲酰胺，六甲基磷酰胺，1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮，二甲亚砜及二甲氧基乙烷。
16.权利要求13中所述的方法，其中的碱金属硼氢化物选自硼氢化钠，硼氢化钾及氰基硼氢化钠，并且反应溶剂为水与水溶性或部分水溶的低级链烷醇的混合物，可任意加入作为抗发泡剂的乙醚。
17.权利要求8中的方法，其进一步的特征在于N15-保护基为叔丁氧羰基或羰苄氧基，上述的保护基在酰胺化反应结束后可任意除去。
18.权利要求8中的方法，其进一步的特征在于式(III)胺的一个或多个氨基基团，其中它们不应被牵连到酰胺键的形成中在上述胺参与酰胺化反应之前被加以保护，并在上述反应完成后被去保护。
19.权利要求2-7任一项中所述的物质用于生产对抗细菌感染的药物的用途。
20.一种用于抗菌的药物组合物，其包括权利要求2-7任一项中所述的化合物作为活性成分和可药用载体。
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