JP2007218903A - 試料摩砕容器並びにそれを用いる用具及び方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 一端に開口部21を有し、かつ他端に底部23を有する筒体22を備えてなり、筒体22の内側に、摩砕棒40に形成される凹凸部44へ臨み得るように、凹凸部25を設けた。試料摩砕容器自体が試料にせん断効果を及ぼすことができる。筒体22は、可撓性材料より形成され、筒体22の外部から外力が加えられると、筒体22が変形し筒体22内の試料を潰しうるようになっている。
【選択図】 図2
Description
乳鉢に緩衝液に浸した試料を入れ、乳棒をすりこぎ棒のように使用するものである。上記技術分野で、広く実施されているが、次のような問題点がある。
ペッスル(棒体と、その棒体の先端部に取り付けられた円錐状の頭部とからなる)と、遠心分離に使用される容器とを、用いるものである。比較例1よりも小さいから、少量の試料の摩砕に関しては、比較例1よりも試料のロスが少なく優れている。しかしながら、これでは、ペッスルの頭部及び容器の内面は、いずれも鏡面であり、比較的硬い試料(例えば、植物の葉等)について、摩砕効率が低い。
文献1(特開昭63−112974号公報)が開示するものである。即ち、ペッスルの頭部に溝を形成し、比較的硬い試料についても、摩砕効率を向上させるように意図したものである。しかしながら、後に詳述するように、本発明者らの実験によれば、これによっても、比較的硬い試料に関する摩砕効率は十分とは言えないという結果が出ている。
文献2(特開平5−187977号公報)あるいは文献3(特開平9−15123号公報)が開示するように、合成樹脂製の薄い袋を用意し、その内面に網目を設けたものである。しかしながら、本発明者らの検証によれば、摩砕作業中に、力の入れ具合により、袋が破損することがあった。
以下図面を参照しながら、本発明の実施の形態を説明する。図1は、本発明の実施の形態1における試料摩砕用具の断面図である。
図2は、本発明の実施の形態2における試料摩砕容器の断面図であり、図3は、同摩砕棒の正面図である。
抗SDVモノクローナル抗体を、Kohler−Milstein(Nature,256,495−497,1975)の方法に準じて調製した。SDVを免疫したマウスの脾臓から抗体を産出する細胞を取り出し、別に用意したマウスの骨髄腫細胞(ミエローマ)と融合させ、抗SDVモノクローナル抗体4E6産生ハイブリドーマ細胞並びに抗SDVモノクローナル抗体2G2産生ハイブリドーマ細胞を得た。それぞれのハイブリドーマ細胞を培養し、マウス腹腔内に注射し、腹水を得た。得られた腹水から、硫酸アンモニウム分画し、プロテインGカラム精製により、抗SDVモノクローナル抗体4E6並びに抗SDVモノクローナル抗体2G2を得た。
G.Frens(Nature,241,20−22,1973)の方法に従い、金コロイドを作製した。金コロイド10mlに対し、抗SDVモノクローナル抗体2G2を40μg、室温にて混合し、抗SDVモノクローナル抗体結合金コロイド(標識成分)を調製した。
抗SDVモノクローナル抗体結合金コロイドをOD520=0.303に調製した。調製液をガラス繊維パッドに、テスト当たり36μl塗布し乾燥させ、抗SDVモノクローナル抗体結合金コロイド塗布パッドを調製した。
抗SDVモノクローナル抗体4E6を、ニトロセルロースメンブレン(ミリポア社:SCHF(商標))に、テスト当たり0.48μlでライン状に塗布し検出区域を形成した。カゼイン溶液によるブロッキング処理を経て、抗SDVモノクローナル抗体固相化メンブレンを調製した。
濾紙(滴下部)、抗SDVモノクローナル抗体結合金コロイド塗布パッド、抗SDVモノクローナル抗体固相化メンブレン、濾紙とを、それぞれの端部が3mmづつ重なるように、粘着剤付きの合成樹脂に貼り付け、試験片61を作製した。この試験片61を保持具60上に固定し、検出装置を作製した。
(実施例1):実施の形態2による試料摩砕容器20を、摩砕棒40は使用せず、手で揉んで摩砕した場合(0.1Mクエン酸緩衝液0.6mlを試料摩砕容器20に入れ、つづいて試料葉0.06グラムを入れ摩砕した。その後、フィルタ36により濾過された液を摩砕液とした。);
(実施例2):実施の形態2による試料摩砕容器20と摩砕棒40とを使用して摩砕した場合(0.1Mクエン酸緩衝液0.6mlを試料摩砕容器20に入れ、つづいて試料葉0.06グラムを入れ摩砕した。その後、フィルタ36により濾過された液を摩砕液とした。);
(比較例1):乳鉢と乳棒とで摩砕した場合(0.1Mクエン酸緩衝液0.6mlを準備し、その一部を乳鉢に入れ、つづいて試料葉0.06グラムを入れ摩砕した。その後、残りの0.1Mクエン酸緩衝液を乳鉢に入れた。遠心分離後の上清を摩砕液とした。);
(比較例2):平坦なペッスルと遠心分離器用の容器とで摩砕した場合(0.1Mクエン酸緩衝液0.6mlを遠心分離器用の容器に入れ、つづいて試料葉0.06グラムを入れ摩砕した。遠心分離後の上清を摩砕液とした。);
(比較例3):溝付きのペッスルと遠心分離器用の容器とで摩砕した場合(0.1Mクエン酸緩衝液0.6mlを遠心分離器用の容器に入れ、つづいて試料葉0.06グラムを入れ摩砕した。遠心分離後の上清を摩砕液とした。);
(比較例4):網目付きの袋で摩砕した場合(0.1Mクエン酸緩衝液0.6mlを網目付きの袋に入れ、つづいて試料葉0.06グラムを入れ摩砕した。遠心分離後の上清を摩砕液とした。)
のそれぞれにより調製した摩砕液について、0.1Mクエン酸緩衝液により、希釈系列(×1、×2、×4、×8、×16、×32、×64)を調製した。これを100μlだけ、滴下口62へ滴下し、15分経過後、金コロイド粒子由来のライン(ここでは、赤紫色)の出現状況を目視により観察した。なお、(比較例1)〜(比較例4)は、「背景技術」の項で述べたとおりである。
果樹名 摩 砕 摩砕液希釈倍率
×1 ×2 ×4 ×8 ×16 ×32 ×64
感染樹1 実施例1 + + + −
実施例2 + + + −
比較例1 + + + −
比較例2 + − − −
比較例3 + + + −
比較例4 − − − −
感染樹2 実施例1 + + + + + − −
実施例2 + + + + − − −
比較例1 + + + + − − −
比較例2 + + − − − − −
比較例3 + + − − − − −
比較例4 + + + + − − −
健全樹1 実施例1 −
実施例2 −
比較例1 −
比較例2 −
比較例3 −
比較例4 −
健全樹2 実施例1 −
実施例2 −
比較例1 −
比較例2 −
比較例3 −
比較例4 −
この結果は、次の事実を示す。
(1)実施例1、2は、比較例1と同等以上の検出感度をもたらす。加えて、実施例1、2の使い勝手は、比較例1よりも遙かに優れている。
(2)比較例2は、実施例1,2及び比較例1に比べ、検出感度が劣る。
(3)比較例3は、実施例1,2及び比較例1に比べ、試料によっては検出感度が劣る。
(4)比較例4は、実施例1,2及び比較例1に比べ、試料によっては検出感度が劣る。
インフルエンザ感染の検査では、鼻腔又は咽頭等内の粘液が使用されるが、このような粘液はかなりの粘性を有する。したがって、モデル実験では、粘性が高いものモデルとして、青色の水性絵の具を使用した。即ち、綿球に青色絵の具を取り、重量を測定し、1mlの抽出溶液により上記抽出処置を行う。その後、610nmの吸光度を測る。1mlの抽出溶液に青色絵の具をそのまま添加し完全に溶解させたときの吸光度を理論吸光度(100%)とし、測定された吸光度を理論吸光度で除した値を、抽出率(%)とする。
1 11.6 65.5
2 7.7 81.7
3 15.6 82.0
4 9.9 75.3
5 9.0 81.4
6 11.5 79.9
7 6.6 73.0
8 6.2 74.6
9 7.9 92.2
10 6.9 77.3
11 13.1 72.3
12 8.7 77.0
13 5.6 68.1
14 8.3 87.1
15 6.9 59.6
16 5.9 73.2
17 4.5 83.3
18 4.4 88.3
19 4.7 92.6
20 9.2 87.1
最小値 4.4 59.6
最大値 15.6 92.6
平均値 8.2 78.6
本発明例では、抽出率が59.6〜92.6%、平均値78.6%であり、比較例5では、抽出率が4.4〜15.6%、平均値8.2%である。即ち、比較例5に比べると、本発明例では、極めて高い抽出率が得られる。言うまでもなく、高い抽出率が得られるほど、検出精度が向上する。
本発明者らは、上記モデル実験に加え、上記比較例5及び本発明例のそれぞれについて、検体そのものを用いた実験を行った。ここでは、インフルエンザの陽性患者から、3本の同じ綿棒のそれぞれを用いて鼻腔吸引液を良くホモジナイズして採取した。
検体 例 原液 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024
1 比較例5 + + + + + +W − − − − −
1 本発明例 + + + + + + + + + +W −
2 比較例5 + + +W − − − − − − − −
2 本発明例 + + + + +W − − − − − −
3 比較例5 + + + +W − − − − − − −
3 本発明例 + + + + + +W − − − − −
4 比較例5 + − − − − − − − − − −
4 本発明例 + + + +W − − − − − − −
以上により、いずれの条件でも、本発明例では、比較例5に比べ、高い抽出率が得られるから(モデル実験参照)、インフルエンザ検出感度が大幅に向上することが明らかである。なお、検体1から検体4のうちでも、検体1は非常に粘性が高く、検体3はそれについで粘性がかなり高いが、検体の粘性が高いほど、本発明例の容器は、高い効果を奏すると言える。
2、41 棒体
3、43 頭部
4 凹凸部
5、20 試料摩砕容器
6、21 開口部
7、22 筒体
8、23 底部
9 凹凸部
10 試料
25、44 第1凹凸部
26、45 第2凹凸部
27 フランジ
28 リブ
29 雄ねじ部
30 キャップ
31 雌ねじ部
32 ノッチ
33 切り込み溝
34 ノズル
35、62 滴下口
36 フィルタ
37 溶解液
38 ノズル蓋
42 把持部
50、51 指
60 保持具
61 試験片
62 試料滴下口
Claims (12)
- ホモジナイズ用の試料摩砕容器であって、
一端に開口部を有し、かつ他端に底部を有する筒体を備えてなり、
前記筒体の内側に凹凸部を設けたことを特徴とする試料摩砕容器。 - 前記凹凸部は、摩砕棒に形成される凹凸部へ臨み得るように、凹凸部を設けてられていることを特徴とする請求項1記載の試料摩砕容器。
- 前記筒体は、可撓性材料より形成され、前記筒体の外部から外力が加えられると、前記筒体が変形し前記筒体内の試料を潰しうるようになっている請求項1記載の試料摩砕容器。
- 前記凹凸部は、複数の突起から形成される請求項1から3のいずれかに記載の試料摩砕容器。
- 前記凹凸部は、階段状をなし粗面を構成する請求項1から3のいずれかに記載の試料摩砕容器。
- 前記凹凸部は、前記底部の内側に形成される請求項1から5のいずれかに記載の試料摩砕容器。
- 前記筒体の前記底部付近には、円錐状をなす先細部が設けられる請求項1から6のいずれかに記載の試料摩砕容器。
- 前記凹凸部は、前記先細部の内側に形成される請求項7記載の試料摩砕容器。
- 前記筒体は、透明又は半透明の材料からなる請求項1から8のいずれかに記載の試料摩砕容器。
- 請求項1から9のいずれかに記載の試料摩砕容器と、前記試料摩砕容器に挿入され、前記試料摩砕容器内の試料を摩砕する摩砕棒とを備える試料摩砕用具であって、
前記摩砕棒は、棒体と、前記棒体の先端部に設けられる頭部とを備え、
前記頭部には、前記試料摩砕容器の凹凸部へ臨む凹凸部が設けられている試料摩砕用具。 - 請求項10記載の試料摩砕容器に試料を入れ、前記摩砕棒と前記試料摩砕容器とにより、試料を摩砕する試料摩砕方法。
- 請求項1記載の試料摩砕容器に試料を入れ、前記筒体を手もみすることにより、試料を摩砕する試料摩砕方法。
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