JP2007093597A - 新規ストレスバイオマーカー及びその用途 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 10時間の水浸拘束によりストレスを負荷したラットの血清を二次元電気泳動に供試する。ストレス負荷前後の二次元電気泳動の泳動像を比較し、ストレス負荷後のpH6.0〜7.0、分子量40〜55kDに現れる4種のスポットとして検出されるクレアチンキナーゼアイソザイム(CK−MM)等のタンパク質をマーカーとして使用する。採血後直ちに胃を摘出し、潰瘍部分の面積を計測し、胃全体に対する潰瘍部分の面積の占める割合を潰瘍指数(%)としたところ、水浸拘束試験によるストレス性胃潰瘍の潰瘍指数は約20%だった。
【選択図】なし
Description
オーマ法、ヒトB細胞ハイブリドーマ法(Immunology Today 4, 72, 1983)及びEBV−ハイブリドーマ法(MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, pp.77-96, Alan R.Liss, Inc., 1985)など任意の方法を用いることができる。
[水浸拘束試験]
1週間の予備飼育を行った7週齢のSD(Sprague-Dawley)雄性ラット(体重150g〜180g)を用い、1日1回7日間連続で生理食塩水を経口投与した。24時間の絶食後、ストレスケージに動物を入れ、剣状突起の高さまで水に浸し、10時間の水浸拘束を行った。
水浸拘束前後に採血を行った。得られた血液は室温で1時間静置した後、遠心分離(3000rpm、15分)し、その上清を血清として−40℃で保管した。なお、胃潰瘍が発症する前のストレス負荷前血清は、24時間の絶食をする前にエーテル麻酔し、負荷のかからない尾静脈より採取した。また、胃潰瘍発症後のストレス負荷後血清は、10時間の水浸拘束後にエーテル麻酔し、血液をなるべく全量採取できる心臓より採取し、二次元電気泳動に供試した。また、採血後直ちに胃を摘出し、潰瘍部分の面積を計測し、胃全体に対する潰瘍部分の面積の占める割合を潰瘍指数(%)とした。水浸拘束試験によるストレス性胃潰瘍の潰瘍指数は約20%だった。
[二次元電気泳動法(2−D)]
二次元電気泳動は、「プロテオーム解析のための2次元電気泳動ガイド(バイオ・ラッド株式会社)」記載の方法に準じて行った。水浸拘束試験によって得られた血清をMontage Albumin Deplete Kit(Millipore Corporation社製)で処理し、風乾したものを膨潤バッファーで約3mg/mlに調製しサンプルとした。一次元目はpH3〜10の範囲のImmobilineドライストリップ(Immobiline DryStrip)(GE Healthcare社製)7cmを膨潤バッファー[8M尿素、2%CHAPS、50mMDTT、0.2%Bio−Lyte3/10アンフォライト、0.001%BPB]で膨潤した後、ゲル1枚あたり150μgのサンプルをアプライした。Immobilineドライストリップは乾燥防止のためにミネラルオイルを重層し、プロティアンIEFセル(バイオ・ラッドラボラトリーズ株式会社製)により等電点電気泳動を行った。等電点電気泳動が完了したImmobilineドライストリップは平衡化した後、ゲル濃度12%で調製したアクリルアミドゲルにアプライし、二次元目の電気泳動を行った。電気泳動が完了したゲルは染色液(0.1%クマシーブルーR−250、40%メタノール、7.5%酢酸溶液)で約30分間染色した後、脱色液(10%メタノール、7.5%酢酸溶液)で約3時間脱色した。
ットの成分を同定したところ、pH6.0〜7.0、分子量40〜55kDに現れた4種のスポットのうち2つは(図2中の3及び4)クレアチンキナーゼアイソザイム(CK−MM)であることがわかった。なお、スポット3はクレアチンキナーゼアイソザイム(CK−MM)の修飾体と考えられる。
[水浸拘束試験]
1週間の予備飼育を行った7週齢のSD(Sprague-Dawley)雄性ラット(体重150g〜180g)を用い、1日1回7日間連続で生理食塩水を経口投与した。24時間の絶食後、ストレスケージに動物を入れ、剣状突起の高さまで水に浸した。0.5時間、1時間、5時間、および10時間の水浸拘束後、動物をエーテル致死させた。また、絶食後に水浸拘束せずケージに入れ、水浸拘束と同じ時間を経過させたものを対照とした。
生理食塩水投与前はエーテル麻酔し尾静脈より、ストレス負荷前は24時間の絶食前にエーテル麻酔し尾静脈より、また、ストレス負荷後は各時間の水浸拘束後にエーテル麻酔し心臓より、それぞれ採血を行った。得られた血液を室温で1時間静置した後、遠心分離(3000rpm、15分)し、その上清を血清として−40℃で保管した。また、対照の血清は、生理食塩水投与前、ストレス負荷前(24時間の絶食前)、および水浸拘束と同じ時間をケージ内で経過させエーテルで致死後、採血した。
市販抗CK−MMモノクローナル抗体CR3014M1およびCR3014M3(Cortex Biochem Inc.)を用い、固相化抗体をCR3014M1に、ビオチン標識抗体をCR3014M3としたサンドイッチELISAにより、各血清中のCK−MMの相対量を測定した。その結果、ストレス負荷後の値からストレス負荷前の値を引いたCK−MMは、0.5時間、1時間であまり変わらず、5時間、10時間で顕著に高い値を示した(図3)。また、対照でのCK−MMの値にはほとんど変化は認められなかった。これらのことから、水浸拘束個体でCK−MM量が高い値を示したのは、試験における24時間以降の絶食、あるいは採血操作などによるものではなく、水浸拘束ストレスに起因するものと考えられた。また、抗CK−MM抗体を用いることにより、ELISA、あるいはさらに簡易なイムノクロマト法などによるストレス負荷個体の血清から容易にCK−MMを測定できることから、CK−MMのストレスマーカーとしての有効性と、測定方法を示すことができた。
Claims (8)
- 非ヒト哺乳動物に、ストレスを負荷する前後又は同時に、被験物質を投与し、該被験物質を投与した非ヒト哺乳動物の血清を二次元電気泳動に供試して、pH6.0〜7.0、分子量40〜55kDに現れる4種のスポットのうちのいずれか1種以上を検出し、被験物質を投与しない場合と比較・評価することを特徴とするストレス抑制物質又はストレス増強物質のスクリーニング方法。
- pH6.0〜7.0、分子量40〜55kDに現れる4種のスポットのうちのいずれか1種が、クレアチンキナーゼアイソザイム(CK−MM)によるスポットであることを特徴とする請求項1に記載のストレス抑制物質又はストレス増強物質のスクリーニング方法。
- 非ヒト哺乳動物に、ストレスを負荷する前後又は同時に、被験物質を投与し、該被験物質を投与した非ヒト哺乳動物の血清からクレアチンキナーゼアイソザイム(CK−MM)又はクレアチンキナーゼアイソザイム(CK−MM)に特異的に結合する抗体を検出し、被験物質を投与しない場合と比較・評価することを特徴とするストレス抑制物質又はストレス増強物質のスクリーニング方法。
- 哺乳動物から採取した血清を二次元電気泳動に供試し、pH6.0〜7.0、分子量40〜55kDに現れる4種のスポットのうちいずれか1種以上を検出することを特徴とするストレスの判定方法。
- pH6.0〜7.0、分子量40〜55kDに現れる4種のスポットのうちのいずれか1種が、クレアチンキナーゼアイソザイム(CK−MM)によるスポットであることを特徴とする請求項4に記載のストレスの判定方法。
- 哺乳動物から採取した血清中のクレアチンキナーゼアイソザイム(CK−MM)又はクレアチンキナーゼアイソザイム(CK−MM)に特異的に結合する抗体を検出することを特徴とするストレスの判定方法。
- ストレスを負荷させた哺乳動物から採取した血清を二次元電気泳動法に供試し、pH6.0〜7.0、分子量40〜55kDに現れる4種のスポットのうちいずれか1種を単離し、該単離したタンパク質、若しくは該単離したタンパク質に特異的に結合する抗体、又はそれらの標識物を備えたことを特徴とするストレス診断用キット。
- 単離したタンパク質が、クレアチンキナーゼアイソザイム(CK−MM)であることを特徴とするストレス診断用キット。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008241704A (ja) * | 2007-02-27 | 2008-10-09 | Prima Meat Packers Ltd | 新規ストレスバイオマーカー及びその用途 |
JP2016519290A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-06-30 | ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・カリフォルニアThe Regents of the University of California | 組織サンプルからのタンパク質キネティックスバイオマーカーを、生体内で同位体標識した後の、体液からのタンパク質キネティックスバイオマーカーに取りかえるための方法 |
US10386371B2 (en) | 2011-09-08 | 2019-08-20 | The Regents Of The University Of California | Metabolic flux measurement, imaging and microscopy |
US10466253B2 (en) | 2004-02-20 | 2019-11-05 | The Regents Of The University Of California | Molecular flux rates through critical pathways measured by stable isotope labeling in vivo, as biomarkers of drug action and disease activity |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH10504097A (ja) * | 1993-12-23 | 1998-04-14 | ユニヴァーサイト キャソリーキュ デ ロウヴェイン | 臓器拒絶反応のマーカー |
JP2002504999A (ja) * | 1997-06-10 | 2002-02-12 | メドライト・ダイアグノスティックス・インコーポレーテッド | 心疾患の早期発見のための方法 |
JP2004166686A (ja) * | 2002-11-19 | 2004-06-17 | Coletica | ストレスにさらされている生細胞とさらされていない生細胞とを用いた少なくとも1つの生物学的パラメーターに結果的に生じた変化の同定法 |
JP2005121664A (ja) * | 2001-05-04 | 2005-05-12 | Biosite Inc | 急性冠状動脈症候群の診断マーカーおよびその使用方法 |
-
2006
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH10504097A (ja) * | 1993-12-23 | 1998-04-14 | ユニヴァーサイト キャソリーキュ デ ロウヴェイン | 臓器拒絶反応のマーカー |
JP2002504999A (ja) * | 1997-06-10 | 2002-02-12 | メドライト・ダイアグノスティックス・インコーポレーテッド | 心疾患の早期発見のための方法 |
JP2005121664A (ja) * | 2001-05-04 | 2005-05-12 | Biosite Inc | 急性冠状動脈症候群の診断マーカーおよびその使用方法 |
JP2004166686A (ja) * | 2002-11-19 | 2004-06-17 | Coletica | ストレスにさらされている生細胞とさらされていない生細胞とを用いた少なくとも1つの生物学的パラメーターに結果的に生じた変化の同定法 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10466253B2 (en) | 2004-02-20 | 2019-11-05 | The Regents Of The University Of California | Molecular flux rates through critical pathways measured by stable isotope labeling in vivo, as biomarkers of drug action and disease activity |
JP2008241704A (ja) * | 2007-02-27 | 2008-10-09 | Prima Meat Packers Ltd | 新規ストレスバイオマーカー及びその用途 |
US10386371B2 (en) | 2011-09-08 | 2019-08-20 | The Regents Of The University Of California | Metabolic flux measurement, imaging and microscopy |
JP2016519290A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-06-30 | ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・カリフォルニアThe Regents of the University of California | 組織サンプルからのタンパク質キネティックスバイオマーカーを、生体内で同位体標識した後の、体液からのタンパク質キネティックスバイオマーカーに取りかえるための方法 |
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