JP2007008896A

JP2007008896A - 皮膚外用消炎鎮痛剤並びにその製造法

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Publication number: JP2007008896A
Application number: JP2005194541A
Authority: JP
Inventors: Hideo Hasegawa; 秀夫長谷川
Original assignee: SHOYAKU HAKKO KENKYUSHO KK
Current assignee: SHOYAKU HAKKO KENKYUSHO KK
Priority date: 2005-07-04
Filing date: 2005-07-04
Publication date: 2007-01-18

Abstract

【課題】アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、乾癬等の皮膚疾患に伴う、発熱や発赤、炎症、痛み、腫脹等の炎症反応に対して、免疫応答によるインターロイキン１β並びにシクロオキシゲナーゼ２の発現を遺伝子転写レベルで特異的に抑制し、プロスタグランジンＥ_２の産生を阻害することで予防及び治療を果たし、かつ安全に外用素材に用いることができる天然の食品成分からなることを特徴とする皮膚外用消炎鎮痛剤を提供する。
【解決手段】２０Ｓ−プロトパナキサトリオール（２０Ｓ−ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｔｒｉｏｌ）あるいは２０Ｓ−プロトパナキサジオール（２０Ｓ−ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｄｉｏｌ）を含有することを特徴とする皮膚外用消炎鎮痛剤。
【選択図】図１

Description

本発明は、２０Ｓ−プロトパナキサトリオール（２０Ｓ−ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｔｒｉｏｌ；以下、ＰＰＴと略記する）あるいは２０Ｓ−プロトパナキサジオール（２０Ｓ−ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｄｉｏｌ；以下、ＰＰＤと略記する）のうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする皮膚外用消炎鎮痛剤に関する。より詳しくは、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、乾癬等の皮膚疾患に伴う、発熱や発赤（紅班）、炎症、痛み（疼痛）、浮腫（腫脹）等（これらを以下、炎症反応と略記する）に対して、免疫応答によるインターロイキン１β（以下、ＩＬ-１βと略記する）とシクロオキシゲナーゼ２（以下、ＣＯＸ−２と略記する）の発現を遺伝子転写レベルで抑制し、その結果、炎症性のメディエーターであるプロスタグランジンＥ_２（以下、ＰＧＥ_２と略記する）の産生を阻害することによって、炎症反応を予防及び改善することを特徴とする皮膚外用消炎鎮痛剤並びにその製造法に関する。

ＩＬ-１βは、生体内で免疫応答時に発現するサイトカインのひとつである。主に単球、マクロファージ及びその類縁細胞が細菌感染等の異物やウイルス等の外界からの刺激に反応してＩＬ-１βを分泌する。分泌されたＩＬ-１βは、標的細胞のレセプターに結合して細胞内のＩＬ-１βシグナル伝達経路を活性化する。

ＩＬ-１βシグナルは、細胞内でＩｋＢ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｋａｐｐａＢ）と結合しているＮＦｋＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ：免疫グロブリンｋ鎖遺伝子発現のエンハンサーのＢ断片）を解離させる。遊離したＮＦｋＢは核内に移行してＣＯＸ−２遺伝子の転写レベルを上昇させ、核膜にＣＯＸ−２を発現させる。

ＣＯＸ−２はアラキドン酸代謝における律速酵素で、ＰＧＥ_２の生合成を触媒している。従って、核膜に発現したＣＯＸ−２は炎症性のメディエーターであるＰＧＥ_２の産生を誘導する。

細胞外に放出されたＰＧＥ_２は、局所の血流を増加させ、ブラジキニンとともに血管透過性を亢進させ、浮腫形成（腫脹）と炎症細胞の浸潤を増強させて組織を傷害する結果、炎症反応を惹起する。しかもＰＧＥ_２は、細胞内のｃＡＭＰレベルを上昇させ、その結果ポジティブフィードバックによってＣＯＸ−２の発現をさらに亢進して、炎症反応を増悪させることが知られている。

従って、ＩＬ-１βの発現を遺伝子転写レベルで阻害する物質は、ＣＯＸ−２の誘導を介して産生されるＰＧＥ_２と関連して起こる炎症反応を予防及び治療するための医薬材料として有効である可能性がある。

ところで、人参（Ｐａｎａｘ）属植物、特にその根は、多様な効能ゆえに、古来より万能薬として珍重されてきた。

人参属植物には、高麗人参（Ｋｏｒｅａｎｇｉｎｓｅｎｇ：ＰａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇＣ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）、三七人参（Ｓａｎｃｈｉｇｉｎｓｅｎｇ：Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ．）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ）、アメリカ人参（Ａｍｅｒｉｃａｎｇｉｎｓｅｎｇ：ＰａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍＬ．）、竹節人参（Ｃｈｉｋｕｓｅｔｓｕｇｉｎｓｅｎｇ：ＰａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓＣ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）、ヒマラヤ人参（Ｈｉｍａｌａｙａｎｇｉｎｓｅｎｇ：Ｐａｎａｘｐｓｅｕｄｏ−ｇｉｎｓｅｎｇＷａｌｌ．ｓｕｂｓｐ．ｈｉｍａｌａｉｃｕｓＨａｒａ）、及びベトナム人参（Ｖｉｅｔｎａｍｅｓｅｇｉｎｓｅｎｇ：ＰａｎａｘｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓＨａｅｔＧｒｕｓｈｖ．）等が挙げられる。

ＰＰＴ並びにＰＰＤは、ともに人参属植物に含まれる人参配糖体（ｇｉｎｓｅｎｇｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）のアグリコン（ａｇｌｙｃｏｎ）である。ＰＰＴは、ジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒｅ，Ｒｇ群，Ｒｈ１，Ｆ１等のＰＰＴ系配糖体のアグリコンである。他方、ＰＰＤは、ジンセノサイドＲa群，Ｒｂ群，Ｒｃ，Ｒｇ３，Ｆ２，Ｒｈ２等のＰＰＤ系配糖体のアグリコンである。

本発明者は、人参配糖体が腸内細菌の働きでＰＰＴに加水分解されて吸収されることをはじめて解明した（例えば、非特許文献１参照）。
Hasegawa H.et al.,PlantaMed.,62,453-457,1996.

さらに本発明者は、人参配糖体とアグリコンの生理活性を比較した結果、アグリコンこそが活性本体であり、人参配糖体はその活性前駆体（プロドラッグ：ｐｒｏｄｒｕｇ）であることを解明した（例えば、非特許文献２，３参照）。
Wakabayashi C.etal.,Ocol.Res.,9,411-417,1997. Wakabayashi C.etal.,J.Trad.Med.,14,180-185,1997.

ＰＰＴ並びにＰＰＤの生理活性については、ｉｎｖｉｔｒｏ系では、腫瘍細胞に対する傷害（例えば、特許文献１参照）及び腫瘍浸潤に対する阻害（例えば、特許文献２参照）、副腎髄質細胞によるカテコールアミン分泌に対する阻害（例えば、非特許文献３参照）、樹状細胞によるインターフェロンγ産生に対する促進（例えば、非特許文献４参照）、マクロファージによる一酸化窒素（ＮＯ）及びＰＧＥ_２の産生に対する阻害（例えば、非特許文献５参照）等が報告されている。また、ｉｎｖｉｖｏ系では、腫瘍細胞に対する増殖抑制（例えば、非特許文献６参照）及び腫瘍転移に対する阻害（例えば、非特許文献３参照）等が報告されている。
特開昭58-131999号公報特開平09-176017号公報 Tachikawa E.et al.,Biochem.Pharmacol.,66,2213-2221,2003. Takei M.etal.,Biochem.Pharmacol.,68,441-452,2004. Oh GS.et al.,CancerLett.,205,23-29,2004. Hasegawa H.,et al.,Biol.Pharm.Bull.,25,861-866,2002.

しかし、ＰＰＴ並びにＰＰＤを皮膚に外用することによる、炎症反応に関わるメディエーターであるＩＬ-１β並びにＣＯＸ−２の発現、及びＰＧＥ_２の産生に対する影響についての報告は、本発明者の知り得る限り未だ存在しない。

従来、皮膚疾患に伴う炎症反応に対して、ステロイド剤や非ステロイド系抗炎症薬が用いられてきた。これらの抗炎症剤はＣＯＸの酵素活性を阻害することが、その作用機序として知られている。しかし、種類によっては、ＣＯＸ-１をも阻害してしまい、胃粘膜障害や腎障害といった副作用を併発する。

なお、ＣＯＸにはＣＯＸ-１とＣＯＸ-２との２種類のアイソザイムが存在する。ＣＯＸ-１は恒常的に各種組織に存在し、胃粘膜保護等において重要な役割を担うのに対し、ＣＯＸ-２はサイトカインや病原性物質等の刺激を生体が受けた時にはじめて産生が誘導される誘導型のＣＯＸである。ＣＯＸ−１は、生理学的役割を果たしており、胃腸および腎臓の保護に関与していると考えられる。他方、ＣＯＸ−２は、病理的役割を果たしており、炎症状態において存在する主たるアイソザイムであると考えられている。

恒常型のＣＯＸ−１は正常な組織にも広く存在し、正常な生理機能において重要な役割を果たしているので、ＣＯＸ−１を阻害することは望ましくない。したがって、新しい抗炎症剤の開発分野においては、ＣＯＸ−２のみを選択的に阻害する、しかも安全性が高い選択的ＣＯＸ−２阻害剤の提供が望まれている。

本発明は、皮膚疾患に伴う炎症反応に対して、免疫応答によるＩＬ-１βとＣＯＸ−２の発現を遺伝子転写レベルで特異的に抑制し、その結果、炎症性のメディエーターであるＰＧＥ_２の産生を阻害することによって炎症反応を予防及び改善し、かつ安全に外用素材に用いることができる天然の食品成分からなることを特徴とする皮膚外用消炎鎮痛剤の提供を目的する。

ところで、本発明者は、ＰＰＴはそれ自身非常に高い生理活性を有しているが、腸管から吸収されるとただちに脂肪酸と結合して脂肪酸エステルになる特徴があることを解明した（例えば、非特許文献６参照）。すなわち、エステル化に伴ってその生理活性が変化してしまうのである。たとえば、ＰＰＴの細胞傷害活性はエステル化されると４分の１に減弱してしまう。その一方で、エステル化されたＰＰＴには、免疫賦活活性に代表されるように、ＰＰＴにはなかった新たな生理活性が発現することも解明した（例えば、非特許文献６参照）。

ＰＰＴの体内動態に関するこれらの知見は、ｉｎｖｉｔｒｏ系で得られたＰＰＴの生理活性がそのまま生体内でも起こるとは期待できないことを示唆している。そして、この課題はＰＰＤに関しても同様であることは容易に推察できる。

本発明者は、上記課題を解決すべく、安全に外用素材に用いることができる天然の食品成分を鋭意検索した。その過程で、ＰＰＴあるいはＰＰＤを皮膚外用剤として用いると、炎症反応部位におけるＩＬ-１β並びにＣＯＸ−２の発現が遺伝子転写レベルで抑制され、その結果、ＰＧＥ_２の産生が阻害されて炎症反応が予防及び治療されることを見出した。しかもＣＯＸに対する阻害様式がＣＯＸ−２に対する選択的なものであることも見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、ＰＰＴあるいはＰＰＤのうち少なくともその１つを有効成分として含有し、免疫応答によるＩＬ-１β並びにＣＯＸ−２の発現を遺伝子転写レベルで特異的に抑制し、その結果、ＰＧＥ_２の産生を阻害することによって、皮膚疾患に伴う炎症反応を予防及び治療することを特徴とする皮膚外用消炎鎮痛剤並びにその製造法を提供するものである。

以下、本発明について詳細に説明する。先ず、本発明の皮膚外用消炎鎮痛剤は、ＰＰＴあるいはＰＰＤのうち少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする。

本発明おける「ＰＰＴ」並びに「ＰＰＤ」とは、分子式がＣ_３０Ｈ_５２Ｏ_４並びにＣ_３０Ｈ_５２Ｏ_３、化学構造式が式１並びに式２で表される化合物のことを指す。

本発明の「特異的に抑制し」とは、ＣＯＸ−１の発現には影響を与えないで、ＣＯＸ−２の発現のみを選択的に抑制する（実施例２参照）ことを指す。

本発明の皮膚外用消炎鎮痛剤へのＰＰＴあるいはＰＰＤの配合量は、外用剤全量中、０．０００１〜２０．０質量％、好ましくは０．００１〜１０．０質量％である。

本発明の皮膚外用消炎鎮痛剤の使用量は、投与対象、症状等によって異なるが、約０．０１ｍｇ〜１００ｍｇ程度、好ましくは０．１ｍｇ〜１０ｍｇ程度であり、これを１日１〜数回に分けて、または１回／１日〜７日の割合で皮膚に塗布する。

また、本発明の皮膚外用消炎鎮痛剤には、上記必須成分以外に、下記に示されるような化粧品、医薬部外品、医薬品において通常用いられる各種成分や添加剤を必要に応じて適宜配合することができる。

即ち、グリセリン、ワセリン、尿素、ヒアルロン酸、ヘパリン等の保湿剤；ＰＡＢＡ誘導体（パラアミノ安息香酸、エスカロール５０７等）、桂皮酸誘導体（ネオヘリオパン、パルソールＭＣＸ、サンガードＢ等）、サリチル酸誘導体（オクチルサリチレート等）、ベンゾフェノン誘導体（ＡＳＬ−２４、ＡＳＬ−２４Ｓ等）、ジベンゾイルメタン誘導体（パルソールＡ、パルソールＤＡＭ等）、複素環誘導体（チヌビン系等）、酸化チタン等の紫外線吸収剤・散乱剤；エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酒石酸、酒石酸ナトリウム、乳酸、リンゴ酸、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤；サリチル酸、イオウ、カフェイン、タンニン等の皮脂抑制剤；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン等の殺菌・消毒剤；塩酸ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸、グアイアズレン、アズレン、アラントイン、ヒノキチオール、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸等の抗炎症剤；ビタミンＡ、ビタミンＢ群（Ｂ1，Ｂ2，Ｂ6，Ｂ12，Ｂ15）、葉酸、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン、ビタミンＣ、ビタミンＤ群（Ｄ2，Ｄ3）、ビタミンＥ、ユビキノン類、ビタミンＫ（Ｋ1，Ｋ2，Ｋ3，Ｋ4）等のビタミン類；アスパラギン酸、グルタミン酸、アラニン、リジン、グリシン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、アルギニン、ピロリドンカルボン酸等のアミノ酸及びその誘導体；レチノール、酢酸トコフェロール、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸、エラグ酸、胎盤抽出液等の美白剤；ブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル等の抗酸化剤；塩化亜鉛、硫酸亜鉛、石炭酸亜鉛、酸化亜鉛、硫酸アルミニウムカリウム等の収斂剤；グルコース、フルクトース、マルトース、ショ糖、トレハロース、エリスリトール、マンニトール、キシリトール、ラクチトール等の糖類；甘草、カミツレ、マロニエ、ユキノシタ、芍薬、カリン、オウゴン、オウバク、オウレン、ジュウヤク、イチョウ葉等の各種植物エキス等の他、油性成分、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色素等を適宜配合することができる。

本発明の皮膚外用消炎鎮痛剤とは、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来皮膚外用剤に用いるものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。

次に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に何ら制約されるものではない。

また、以下の実施例で使用したＰＰＴは、ＰＰＤを２０質量％程度含有するものであるが、便宜上ＰＰＴと表記した。その抗炎症効果を評価するために、ステロイド剤であるベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）を陽性対照として使用した。なお、データの統計解析はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定によって行った。

［実験１：抗炎症効果の確認］
ＰＰＴの抗炎症効果をオギザゾロン（ｏｘａｚｏｌｏｎｅ）誘発マウス皮膚炎モデルを用いて評価した。このモデルは慢性乾癬皮膚炎モデルとして確立されたものである（例えば、非特許文献７参照）。雌性ＩＣＲマウス（６週齢）の腹部に、１．５％の濃度に溶かしたオギザゾロン（表中、ＯＸＡと略記した）のエタノール溶液１００μＬを塗布して感作した。感作１週間後から３日置きにマウスの両耳介に、アセトンとオリーブ油の混合（４：１）溶液に１％の濃度に溶かしたオギザゾロン溶液２０μＬを塗布した。被検薬は、アセトンとオリーブ油の混合（４：１）溶液に０．０２％あるいは０．０５％の濃度に調節し、その被検薬溶液２０μＬを、オギザゾロン処置（２００μg/耳）３０分及び３時間後に両耳介に塗布した。耳介の厚さはオギザゾロンの初回処置16日後にデジタル表示式マイクロメータ（株式会社ミツトヨ製）で測定した。データは、耳介の厚さをｍｍ単位で表記した。結果を表１に示す。
Fujii Y.,et al.,Eur.J.Pharmacol.,456,115-121,2002.

オギザゾロン（表中、ＯＸＡ処置群と略記した）で感作した耳介は、皮膚の紅班、腫脹、硬化、あるいは剥離を惹起した。その程度は、オギザゾロンの塗布回数が増すにしたがって増悪した。初回感作から１６日後に皮膚炎症反応の指標として耳介の厚さを測定した結果、オギザゾロン処置群の耳介は対照群に比べて４倍以上肥厚していた。オギザゾロン感作の前後で被検物を塗布した場合、ＰＰＴ（表中、ＯＸＡ＋ＰＰＴと略記した）は、投与量に依存して、炎症反応による耳介の肥厚を抑制し、１０μｇ／耳塗布した場合には、陽性対照として用いたベタメタゾン（表中、ＯＸＡ＋ＢＥＴと略記した）と同程度の８４％の抑制率を示した。

初回感作から１６日後の耳介を切除し、それぞれの群の組織標本を作成した。その病理組織像を図１に示す。オギザゾロン処置群（図中、Ｂ）では、皮膚表皮の腫脹と剥離が認められた一方、ベタメタゾン（図中、Ｃ）あるいはＰＰＴ（図中、Ｄ）処置群では、オギザゾロン刺激による皮膚表皮の腫脹と剥離が対照群とほとんど変わらない程度にまで顕著に抑制されていた。

これらの結果より、ＰＰＴは動物実験において炎症反応による腫脹と剥離を予防及び治療する効果が確認できた。

［実験２：ＩＬ−１β，ＣＯＸ−１，ＣＯＸ−２の遺伝子転写量（ｍＲＮＡ発現量）に対する影響の確認］
初回感作から１６日後の耳介を切除し、その組織を液体窒素下で凍結破砕した。常法に従ってトータルＲＮＡを回収した。トータルＲＮＡ１μｇよりＲＴ-ＰＣＲ法を用いてＩＬ−１β、ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２のｍＲＮＡを増幅した。コントロールとしてグリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）の発現を確認した。反応にはRNA
PCR Kit（ＡＭＴ）Ver.2.1（TaKaRa Biochemicals社製）を使用した。逆転写反応を４２℃、１時間行った後、逆転写酵素失活のため９９℃、５分間インキュベートした。ＰＣＲ反応におけるプライマーと反応条件は以下に示した。

ＩＬ−１β Sense: 5'-ATG GCA ACT GTC CCT GAA CT-3'
Antisense: 5'-GTC
GTT GCT TGT CTC TCC TT-3'
95℃,5min-(94℃ 1min,55℃ 1min,72℃ 1min)x32cycles-72℃ 7min
PCR product:508bp
ＣＯＸ−１ Sense: 5'-TGC CCA GCT CCT GGC CCG CCG
CTT-3'
Antisense: 5'-GTG
CAT CAA CAC AGG CGC CTC TTC-3'
95℃,5min-(94℃ 1min,55℃ 1min,72℃ 1min)x32cycles-72℃ 7min
PCR product:303bp
ＣＯＸ−２ Sense: 5'-GGA ACA CAA CAG AGT ATG CG-3'
Antisense: 5'-GAC
AGC CCT TCA CGT TAT TG-3'
95℃,5min-(94℃ 30sec,55℃ 30sec,72℃ 1min)x30cycles-72℃ 7min
PCR product:806bp
ＧＡＰＤＨ Sense: 5'-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3'
Antisense: 5'-CCA
CCA CCC TGT TGC TGT AG-3'
95℃,5min-(94℃ 30sec,55℃ 30sec,72℃ 1min)x20cycles-72℃ 7min
PCR product:457bp

反応終了後、２％アガロースゲルをＴＡＥバッファーで電気泳動し、ethidium bromideで染色してＵＶ照射下で該当するバンドを検出した。また、ｍＲＮＡ発現量は画像解析ソフト：ＮＩＨＩｍａｇｅ１．６２により定量し、ハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨの発現量との比（ＣＯＸ−１ｏｒＣＯＸ−２／ＧＡＰＤＨ）の値を平均値±標準誤差にてグラフにプロットした。結果を図２並びに図３に示す。

図２に示す通り、オギザゾロン処置群（図中、ＯＸＡ）では、ＩＬ−１βのｍＲＮＡ発現量が対照群（図中、ＣＯＮ）に比べて約３８倍に増加していた。一方、ＰＰＴ（図中、ＯＸＡ＋ＰＰＴ）処置群では、オギザゾロン刺激によるＩＬ−１βのｍＲＮＡ発現の亢進が約１／４に統計的な有意差をもって抑制された。その抑制は、陽性対照として用いたベタメタゾン（図中、ＯＸＡ＋ＢＥＴ）と同程度であった。

これらの結果より、ＰＰＴが免疫応答初期に発現するサイトカインであるＩＬ-１βの発現をｍＲＮＡレベルで抑制することが確認できた。

図３に示す通り、オギザゾロン処置群（図中、ＯＸＡ）では、ＣＯＸ−２のｍＲＮＡ発現量が対照群（図中、ＣＯＮ）に比べて約２倍に増加していた。しかし、オギザゾロンは生体内で恒常的に発現しているＣＯＸ−１のｍＲＮＡ発現量には影響を与えなかった。ＰＰＴ（図中、ＯＸＡ＋ＰＰＴ）並びにベタメタゾン（図中、ＯＸＡ＋ＢＥＴ）処置群では、オギザゾロン刺激によるＣＯＸ−２のｍＲＮＡ発現の亢進が有意に、しかも対照群と同レベルにまで抑制された。その抑制は両群とも同程度であった。しかし、ＰＰＴ処置群では、ＣＯＸ−１のｍＲＮＡ発現量は影響を受けなかったが、ベタメタゾン処置群では、ＣＯＸ−１のｍＲＮＡ発現量に統計的に有意な減少が認められた。

これらの結果より、ＰＰＴがＩＬ−１βの刺激で誘導されるＣＯＸ−２の発現を特異的に抑制することが確認できた。しかも、ＰＰＴは、生体内で恒常的に発現しているＣＯＸ−１には影響を与えず、炎症時に誘導されるＣＯＸ−２のみを遺伝子転写レベルで特異的に抑制することが確認できた。

[実験３：ＰＧＥ_２タンパク産生量に対する影響の確認]
初回感作から１６日後の耳介を切除し、その組織を液体窒素下で凍結破砕した。常法に従ってＰＧＥ_２タンパク液を調製し、ＥＬＩＳＡ法にてＰＧＥ_２タンパク産生量を定量した。得られた測定結果を平均値±標準誤差にてグラフにプロットした。結果を図４に示す。

図４に示す通り、オギザゾロン処置群（図中、ＯＸＡ）では、ＰＧＥ_２タンパク産生量が対照群（図中、ＣＯＮ）に比べて約２倍に増加していた。ＰＰＴ処置群（図中、ＯＸＡ＋ＰＰＴ）では、オギザゾロン刺激によるＰＧＥ_２タンパク産生の亢進が有意に、しかも対照群と同レベルにまで抑制された。その抑制は、陽性対照として用いたベタメタゾン（図中、ＯＸＡ＋ＢＥＴ）と同程度であった。

これらの結果より、ＰＰＴがＣＯＸ−２の誘導で産生されるＰＧＥ_２をタンパクレベルで抑制することが確認できた。

以上の実験１〜３の結果から、ＰＰＴが免疫応答初期に発現するＩＬ-１β並びに、続いてＩＬ−１βの刺激で誘導されるＣＯＸ−２の発現を遺伝子転写レベルで特異的に抑制し、さらにＣＯＸ−２を触媒として生合成されるＰＧＥ_２の産生をタンパクレベルで抑制することで、炎症反応を予防及び治療することが確認できた。

次に本発明の皮膚外用消炎鎮痛剤の製造法に関する実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明する。

［クリーム］
（処方）ステアリン酸，５．０質量％；ステアリルアルコール，４．０；イソプロピルミリステート，１８．０；グリセリンモノステアリン酸エステル，３．０；プロピレングリコール，１０．０；ＰＰＴ，０．０１；苛性カリ，０．２；亜硫酸水素ナトリウム，０．０１；防腐剤，適量；香料，適量；イオン交換水，残余．
（製法）イオン交換水にプロピレングリコールと苛性カリを加え溶解し、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を徐々に加え、全部加え終わってからしばらくその温度に保ち反応を起こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。

［クリーム］
（処方）ステアリン酸，２．０質量％；ステアリルアルコール，７．０；水添ラノリン，２．０；スクワラン，５．０；２−オクチルドデシルアルコール，６．０；ポリオキシエチレン（２５モル）；セチルアルコールエーテル，３．０；グリセリンモノステアリン酸エステル，２．０；プロピレングリコール，５．０；ＰＰＴ，０．０５；亜硫酸水素ナトリウム，０．０３；エチルパラベン，０．３；香料，適量；イオン交換水，残余．
（製法）イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。

［クリーム］
（処方）固形パラフィン，５．０質量％；ミツロウ，１０．０；ワセリン，１５．０；流動パラフィン，４１．０；グリセリンモノステアリン酸エステル，２．０；ポリオキシエチレン（２０モル）；ソルビタンモノラウリン酸エステル，２．０；石けん粉末，０．１；硼砂，０．２；ＰＰＤ，０．０１；亜硫酸水素ナトリウム，０．０３；エチルパラベン，０．３；香料，適量；イオン交換水，残余．
（製法）イオン交換水に石けん粉末と硼砂を加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相をかきまぜながら徐々に加え反応を行う。反応終了後、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。

［乳液］
（処方）ステアリン酸，２．５質量％；ワセリン，５．０；流動パラフィン，１０．０；ポリオキシエチレン（１０モル）；モノオレイン酸エステル，２．０；ポリエチレングリコール１５００，３．０；トリエタノールアミン，１．０；カルボキシビニルポリマー，０．０５（商品名：カーボポール941，B.F.Goodrich Chemical company）；ＰＰＴ，０．０１；亜硫酸水素ナトリウム，０．０１；エチルパラベン，０．３；香料，適量；イオン交換水，残余．
（製法）少量のイオン交換水にカルボキシビニルポリマーを溶解する（Ａ相）。残りのイオン交換水にポリエチレングリコール１５００とトリエタノールアミンを加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、Ａ相を加えホモミキサーで均一乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。

［乳液］
（処方）マイクロクリスタリンワックス，１．０質量％；密ロウ，２．０；ラノリン，２０．０；流動パラフィン，１０．０；スクワラン，５．０；ソルビタンセスキオレイン酸エステル，４．０；ポリオキシエチレン（２０モル）；ソルビタンモノオレイン酸エステル，１．０；プロピレングリコール，７．０；ＰＰＴ，０．０１；亜硫酸水素ナトリウム，０．０１；エチルパラベン，０．３；香料，適量；イオン交換水，残余．
（製法）イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し、加熱融解して７０℃に保つ（油相）。油相をかきまぜながらこれに水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化する。乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。

［ゼリー］
（処方）９５％エチルアルコール，１０．０質量％；ジプロピレングリコール，１５．０；ポリオキシエチレン（５０モル）；オレイルアルコールエーテル，２．０；カルボキシビニルポリマー，１．０（商品名：カーボポール940，B.F.Goodrich Chemical company）；苛性ソーダ，０．１５；Ｌ−アルギニン，０．１；ＰＰＤ，０．０５；2−ヒドロキシ−4−メトキシ
ベンゾフェノンスルホン酸ナトリウム，０．０５；エチレンジアミンテトラアセテート・３ナトリウム・２水和物，０．０５；メチルパラベン，０．２；香料，適量；イオン交換水，残余．
（製法）イオン交換水にカーボポール９４０を均一に溶解し、一方、９５％エタノールにＰＰＤ、ポリオキシエチレン、オレイルアルコールエーテルを溶解し、水相に添加する。次いで、その他の成分を加えたのち苛性ソーダ、Ｌ−アルギニンで中和させ増粘する。

［美容液］
（処方）（Ａ相）９５％エチルアルコール，１０．０質量％；ポリオキシエチレン（２０モル）；オクチルドデカノール，１．０；パントテニールエチルエーテル，０．１：ＰＰＴ，０．００５；メチルパラベン，０．１５；（Ｂ相）水酸化カリウム，０．１；（Ｃ相）グリセリン，５．０；ジプロピレングリコール，１０．０；亜硫酸水素ナトリウム，０．０３；カルボキシビニルポリマー，０．２（商品名：カーボポール940，B.F.Goodrich Chemical company）；精製水，残余．
（製法）Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化する。次いでＢ相を加えたのち充填を行う。

［パック］
（処方）（Ａ相）ジプロピレングリコール，５．０質量％；ポリオキシエチレン（60モル）；硬化ヒマシ油，５．０；（Ｂ相）ＰＰＤ，０．０１；オリーブ油，５．０；酢酸トコフェロール，０．２；エチルパラベン，０．２；香料，０．２；（Ｃ相）亜硫酸水素ナトリウム，０．０３；ポリビニルアルコール，１３．０（ケン化度９０，重合度２０００）；エタノール，７．０；精製水，残余．
（製法）Ａ相、Ｂ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化する。次いでこれをＣ相に加えたのち充填を行う。

［固形ファンデーション］
（処方）タルク，４３．１質量％；カオリン，１５．０；セリサイト，１０．０；亜鉛華，７．０；二酸化チタン，３．８；黄色酸化鉄，２．９；黒色酸化鉄，０．２；スクワラン，８．０；イソステアリン酸，４．０；モノオレイン酸ＰＯＥソルビタン，３．０；オクタン酸イソセチル，２．０；ＰＰＴ，０．１；防腐剤，適量；香料，適量．
（製法）タルク〜黒色酸化鉄の粉末成分をブレンダーで十分混合し、これにスクワラン〜オクタン酸イソセチルの油性成分、ＰＰＴ、防腐剤、香料を加え良く混練した後、容器に充填、成型する。

［乳化型ファンデーション（クリームタイプ）］
（処方）（粉体部）二酸化チタン，１０．３質量％；セリサイト，５．４；カオリン，３．０；黄色酸化鉄，０．８；ベンガラ，０．３；黒色酸化鉄，０．２（油相）デカメチルシクロペンタシロキサン，１１．５；流動パラフィン，４．５；ポリオキシエチレン変性ジメチルポリシロキサン，４．０（水相）精製水，５０．０；１，３−ブチレングルコール，４．５：ＰＰＴ，０．１；ソルビタンセスキオレイン酸エステル，３．０；防腐剤，適量；香料，適量．
（製法）水相を加熱撹拌後、十分に混合粉砕した粉体部を添加してホモミキサー処理する。更に加熱混合した油相を加えてホモミキサー処理した後、撹拌しながら香料を添加して室温まで冷却する。

本発明によれば、ＰＰＴあるいはＰＰＤを皮膚に外用することによって、免疫応答初期に発現するサイトカインであるＩＬ-１βをｍＲＮＡレベルで抑制し、続いてＩＬ−１βの刺激で誘導されるＣＯＸ−２を特異的に抑制し（実施例２参照）、さらにＣＯＸ−２を触媒として生合成されるＰＧＥ_２の産生をタンパクレベルで抑制する（実施例３参照）ことで、炎症反応を予防及び治療する（実施例１参照）ことが確認された。このように、本発明の皮膚外用消炎鎮痛剤は、毎日安全に塗布することが可能で、皮膚疾患に伴う炎症反応を予防及び治療するうえで極めて有用といえる。

オギザゾロン初回感作から１６日後の耳介の病理組織像を示す（実施例１）。Ａ：対照群、Ｂ：オギザゾロン（２００μｇ／耳）処置群、Ｃ：オギザゾロン（２００μｇ／耳）＋ベタメタゾン（１０μｇ／耳）処置群、Ｄ：オギザゾロン（２００μｇ／耳）＋ＰＰＴ（１０μｇ／耳）処置群。オギザゾロン初回感作から１６日後の耳介組織におけるＩＬ−１βのｍＲＮＡ発現量をＧＡＰＤＨ比で示す（実施例２）。オギザゾロン初回感作から１６日後の耳介組織におけるＣＯＸ−１及び−２のｍＲＮＡ発現量をＧＡＰＤＨ比で示す（実施例２）。オギザゾロン初回感作から１６日後の耳介組織におけるＰＧＥ_２タンパク産生量を示す（実施例３）。

符号の説明

図２〜４において、ＣＯＮ：対照群、ＯＸＡ：オギザゾロン（２００μｇ／耳）処置群、ＯＸＡ＋ＰＰＴ：オギザゾロン（２００μｇ／耳）＋ＰＰＴ（１０μｇ／耳）処置群、ＯＸＡ＋ＢＥＴ：オギザゾロン（２００μｇ／耳）＋ベタメタゾン（１０μｇ／耳）処置群。

Claims

２０Ｓ−プロトパナキサトリオールあるいは２０Ｓ−プロトパナキサジオールのうち少なくとも１つを有効成分として含有し、免疫応答によるインターロイキン１β並びにシクロオキシゲナーゼ２の発現を遺伝子転写レベルで特異的に抑制し、その結果、プロスタグランジンＥ_２の産生を阻害することによって、皮膚疾患に伴う炎症反応を予防及び治療することを特徴とする皮膚外用消炎鎮痛剤。
請求項１記載の皮膚外用消炎鎮痛剤の製造法。