JP2006094862A - T細胞調節のための製品と方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明のペプチド−L−MHC分子は、ペプチド結合グルーブを形成するMHCセグメントと、前記ペプチド結合グルーブに結合する抗原ペプチドと、少なくとも8のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むリンカーとからなり、該ペプチドは該リンカーによってMHCクラスIIのα鎖及びβ鎖のうちの一方のN−末端と共有結合的に結合され、前記リンカーは、該ペプチドと該ペプチド結合グルーブとの結合を促進する。更に、該MHCクラスIIのα鎖及びβ鎖のうちの少なくとも一つと、該抗原ペプチドと、該リンカーとは、単一の核酸分子によってコード化され、該核酸分子は該抗原ペプチドのN−末端に付着されるシグナルセグメントをコード化する核酸配列を含む。
【選択図】図2
Description
請求項7に記載の発明は、a)MHCクラスIα鎖の少なくとも一部とMHCクラスIβ2m鎖の少なくとも一部とを含み、かつペプチド結合グルーブを形成するMHCセグメントと、b)該ペプチド結合グルーブに結合するとともに8から20の間のアミノ酸残基からなる抗原ペプチドと、c)少なくとも8のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むリンカーと、からなるペプチド−L−MHC分子をコード化する核酸配列からなる核酸分子であって、該ペプチドは該リンカーによって該MHCクラスIα鎖及び該MHCクラスIβ2m鎖のうちの一方のN−末端と共有結合的に結合されることと、該リンカーは、該ペプチド及び該MHCセグメントがペプチド−L−MHCヘテロダイマーとT細胞レセプターとの間の相互作用を妨げることなく該T細胞レセプターによって認識されるコンフォメーションを形成するように、該ペプチドと該ペプチド結合グルーブとの結合を促進することと、該核酸分子は該抗原ペプチドのN−末端に共有結合的に付着されるシグナルセグメントをコード化する核酸配列を含むことと、を備える核酸分子を提供する。
この発明は新規なリンカーにより主組織適合複合体(MHC)に対して共有結合された抗原ペプチドに関する。そのような抗原ペプチドであるため、T細胞受容体(TCR)によって認識されうる、単体あるいは付加的MHCタンパク鎖との結合した安定MHC複合体の組成が可能となる。そのような安定した複合体は治療目的、或いは実験目的として有益である。
この例は、リンカーによってMHCクラスIIタンパクに共有結合されるペプチドの遺伝子暗号が、T細胞によって認識され得る安定な可溶性タンパクとして発現されることを示している。
MCCペプチド及びリンカーを含むIEkdαβ二量体をコード化するpIEkd−MCC組換え分子を形成するために、IEαdタンパクをコード化する遺伝子は、P10プロモーターに従ってXhoI及びKpnI部位に結合され、IEβk−MCC核酸分子は、ポリヘドリンプロモーターに従ってEcoRI及びNcoI部位に結合される。同様の操作が、IEkdαβ二量体をコード化する組換え分子pIEkdを形成するためにIEβkタンパクをpBACp10PHにコード化する遺伝子を結合するために行われる。
本例は、リンカーによりMHCクラスIIタンパクに共有結合したペプチドをコードする遺伝子は、T細胞により認識され得る可溶性タンパクとして発現し得ることを実証するものである。
本例は、リンカーによってMHCクラスIIタンパクに共有結合したペプチドをコードする遺伝子は、マウスにおいてトランスジーンとして発現し得ることを証明する。
A.IEβk−MCCトランスジェニック・マウス
ガのシトクロームcにおける残基91−103(MCCペプチド(91−103)、リンカー、及び例1に詳述した遺伝子をコードするIEβkによって核酸分子を生成し、ヘモグロビンβ鎖プロモーターによりサブクローン化した。その結果得られた組換え分子を、以下pIEβk−MCC−Tgとする。多数のコピーのpIEβk−MCC−Tgを、(Bl/6xSJL)F2マウスから取り出した授精卵の核に注入し、その卵を母体に戻した。IEβk−MCCトランスジーンを発現した2匹のマウスを同定した。これらのマウスを創立者(founders)とする。これら創立者から発生したトランスジェニック子孫は、創立者らと識別不能であった。次にトランスジェニック子孫をH−2kと交雑した。
第1の例において、トランスジーン陽性H−2kマウスの骨髄、脾臓及びリンパ節から細胞を分離した。次に分離細胞について、MCC91−103ペプチドと結合したIEkに特異なT細胞ハイブリドーマを刺激する能力に関するアッセイを(例1に記載の方法に従い)行った。同細胞において、抗原(MCC88−103)を加えた場合と加えない場合のいずれについても試験を行った。
本例では、マウスにおいて、MCC91−103に共有結合したIEkタンパクにより、結合したMCC91−103を有するIEkに特異なT細胞数が減少することを証明する。
本例では、マウスにおいて、MCC91−103に共有結合したIEkタンパクにより、結合したMCC91−103ペプチドを有するIEkに対する耐性が誘導されることを証明する。
Claims (9)
- 1.a)MHCクラスIIβ鎖の少なくとも一部とMHCクラスIIα鎖の少なくとも一部とを含み、かつペプチド結合グルーブを形成するMHCセグメントと、
b)前記ペプチド結合グルーブに結合するとともに5から40の間のアミノ酸残基からなる抗原ペプチドと、
c)少なくとも8のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むリンカーと、
からなる分離されたペプチド−L−MHC分子において、
前記ペプチドは前記リンカーによって前記MHCクラスIIα鎖及び前記MHCクラスIIβ鎖のうちの一方のN−末端と共有結合的に結合されることと、前記リンカーは、前記ペプチド及び前記MHCセグメントがペプチド−L−MHCヘテロダイマーとT細胞レセプターとの間の相互作用を妨げることなく該T細胞レセプターによって認識されるコンフォメーションを形成するように、該ペプチドと前記ペプチド結合グルーブとの結合を促進することと、
前記MHCクラスIIα鎖及び前記MHCクラスIIβ鎖のうちの少なくとも一つと、前記抗原ペプチドと、前記リンカーとは、単一の核酸分子によってコード化されることと、前記核酸分子は前記抗原ペプチドのN−末端に付着されるシグナルセグメントをコード化する核酸配列を含むことと、
を備える分離されたペプチド−L−MHC分子。 - 前記リンカーは少なくとも15のアミノ酸残基のアミノ酸配列からなる請求項1に記載の分離されたペプチド−L−MHC分子。
- a)MHCクラスIα鎖の少なくとも一部とMHCクラスIβ2m鎖の少なくとも一部とを含み、かつペプチド結合グルーブを形成するMHCセグメントと、
b)前記ペプチド結合グルーブに結合するとともに8から20の間のアミノ酸残基からなる抗原ペプチドと、
c)少なくとも8のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むリンカーと、
からなる分離されたペプチド−L−MHC分子において、
前記ペプチドは前記リンカーによって前記MHCクラスIα鎖及び前記MHCクラスIβ2m鎖のうちの一方のN−末端と共有結合的に結合されることと、前記リンカーは、前記ペプチド及び前記MHCセグメントがペプチド−L−MHCヘテロダイマーとT細胞レセプターとの間の相互作用を妨げることなく該T細胞レセプターによって認識されるコンフォメーションを形成するように該ペプチドと前記ペプチド結合グルーブとの結合を促進することと、
前記MHCクラスIα鎖及び前記MHCクラスIβ2m鎖のうちの少なくとも一つと、前記抗原ペプチドと、前記リンカーとは、単一の核酸分子によってコード化されることと、前記核酸分子は前記抗原ペプチドのN−末端に付着されるシグナルセグメントをコード化する核酸配列を含むことと、
を備える分離されたペプチド−L−MHC分子。 - 請求項1乃至3のいずれか一項に記載のペプチド−L−MHC分子からなるT細胞活性を抑制するための製剤であって、前記ペプチド−L−MHC分子は、T細胞活性を媒介する二次蛋白質を備えていない細胞の原形質膜に固定される製剤。
- a)MHCクラスIIβ鎖の少なくとも一部とMHCクラスIIα鎖の少なくとも一部とを含み、かつペプチド結合グルーブを形成するMHCセグメントと、
b)前記ペプチド結合グルーブに結合するとともに5から40の間のアミノ酸残基からなる抗原ペプチドと、
c)少なくとも8のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むリンカーと、からなるペプチド−L−MHC分子をコード化する核酸配列からなる核酸分子であって、
前記ペプチドは前記リンカーによって前記MHCクラスIIα鎖及び前記MHCクラスIIβ鎖のうちの一方のN−末端と共有結合的に結合されることと、前記リンカーは、前記ペプチド及び前記MHCセグメントがペプチド−L−MHCヘテロダイマーとT細胞レセプターとの間の相互作用を妨げることなく該T細胞レセプターによって認識されるコンフォメーションを形成するように、該ペプチドと前記ペプチド結合グルーブとの結合を促進することと、
前記核酸分子は前記抗原ペプチドのN−末端に共有結合的に付着されるシグナルセグメントをコード化する核酸配列を含むことと、
を備える核酸分子。 - 前記リンカーは少なくとも15のアミノ酸残基のアミノ酸配列からなる請求項5に記載の核酸分子。
- a)MHCクラスIα鎖の少なくとも一部とMHCクラスIβ2m鎖の少なくとも一部とを含み、かつペプチド結合グルーブを形成するMHCセグメントと、
b)前記ペプチド結合グルーブに結合するとともに8から20の間のアミノ酸残基からなる抗原ペプチドと、
c)少なくとも8のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むリンカーと、からなるペプチド−L−MHC分子をコード化する核酸配列からなる核酸分子であって、
前記ペプチドは前記リンカーによって前記MHCクラスIα鎖及び前記MHCクラスIβ2m鎖のうちの一方のN−末端と共有結合的に結合されることと、前記リンカーは、前記ペプチド及び前記MHCセグメントがペプチド−L−MHCヘテロダイマーとT細胞レセプターとの間の相互作用を妨げることなく該T細胞レセプターによって認識されるコンフォメーションを形成するように、該ペプチドと前記ペプチド結合グルーブとの結合を促進することと、
前記核酸分子は前記抗原ペプチドのN−末端に共有結合的に付着されるシグナルセグメントをコード化する核酸配列を含むことと、
を備える核酸分子。 - 発現ベクターに作動的に連結された核酸分子からなる組み換え体分子を有する組み換え体細胞であって、前記核酸分子は請求項5又は請求項7に記載のペプチド−L−MHC分子をコード化する核酸配列からなる組み換え体細胞。
- 請求項1乃至3のいずれか一項に記載のペプチド−L−MHC分子を含むT細胞活性を調整するための薬剤。
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