JP2006038877A - 腎臓病の検出方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】この方法は、免疫学的または非免疫学的技術を用いて変質したタンパク質の存在を検出するために尿サンプルをアッセイすることを含む。疾病を阻止及び処置する方法もまた開示されている。
【選択図】図1
Description
尿中に過剰のアルブミンの如きタンパク質が出現することは、腎臓病であることを示している。糖尿病性腎症はそのような疾病である。過剰のアルブミンが検出されるまでに、病気は、恐らくは、取り返しができず、処置の効果が殆どない段階に進行している。それ故、本発明の目的は、疾病を阻止するか或いは疾病の処置を早期に開始できるようにするように、そのような疾病をできるだけ早期に検出するための、現在知られている放射免疫測定法よりも感受性のある試験法を提供することにある。
(a)尿サンプル中のタンパク質の全部を分離し、
(b)サンプル中のタンパク質の変質した形態を検知し、そして変質したタンパク質の検出が、腎臓病及び/又は疾病の腎臓合併症の初期の段階を検出することを含む。
(a)タンパク質の変質した形態に対して特異的な標識化された抗体を含む容器、
(b)抗体反応を進展するための試薬を含む容器、及び
(c)診断を行うための要素(a)及び(b)の用い方についての指示書きよりなる。
(a)疾病の処置が可能であると思われる薬剤を必要とする人にそれを投与し、
(b)その人から尿サンプルを採取し、そして
(c)サンプル中のタンパク質の変質した形態をアッセイすることよりなり、そして尿中にタンパク質の変質した形態が存在するか又は存在しないか、又は時間の経過でタンパク質の変質した形態の量が低下するかのいずれかであることが、その薬剤が腎臓病及び/又は疾病の腎臓合併症のための治療剤であることを示す。
本出願人は、アルブミンおよび免疫グロブリンの如き大部分の血漿タンパク質を含むタンパク質が腎臓によって濾過される場合、物質が排泄される前にそれらは腎臓の細胞によって引き続いて分解されることを発見した。濾過されたタンパク質は、管状細胞によって引き取られるようである。管状細胞は腎臓フィルターを越えて横たわり、そして最初の濾液と直接接触する。タンパク質が管状細胞によって内部に取り込まれると、それらはリソソームに向けられ、そこで種々のサイズのフラグメントに部分的に分解され、そして次いで細胞の外側に噴き戻される。これらの噴き戻されたフラグメントは、特定の型のタンパク質のどれかから生じた少なくとも60の異なるフラグメントであり、次いで尿中に排泄される。
「フラグメント化タンパク質又はフラグメントアルブミン」は、腎臓通過の間に生じる化学的、酵素的又は物理的分解の後のポスト糸球体分解生成物を含む。これらの成分は、小さくなったサイズをもつか、及び/又は疎水性に変化する。
溶剤A H2O、 1%トリフルオロ酢酸
溶剤B 60%アセトニトリル、0.09%TFA
溶剤A2 99.96>00.00:49.58min
圧力 9.014Mパスカル(〜1100psi)
溶剤B2 0.04>100.0:49.58min
圧力 7.154Mパスカル
HPLCにおいて用いられる波長は約214nmである。
(a)疾病の処置が可能であると思われる薬剤を必要とする人にそれを投与し、
(b)その人から尿サンプルを採取し、そして
(c)サンプル中のタンパク質の変質した形態をアッセイすることよりなり、そして尿中にタンパク質の変質した形態が存在するか又は存在しないか、又は時間の経過でタンパク質の変質した形態の量が低下するかのいずれかであることが、その薬剤が腎臓病及び/又は疾病の腎臓合併症のための治療剤であることを表す。治療剤は、リソソームに直接または間接的に作用して活性化するリソソーム活性剤であってもよく、そしてそれによって、リソソームがポスト糸球体濾過タンパク質を消化させるが、それは健康な腎臓のしるしである。
(a)上記化合物をリソソームにさらし、そしてリソソームを活性化する能力に関して上記化合物をアッセイし、ここで活性化された時に該リソソームは変化した活性を持つものであり、
(b)腎臓組織において細胞プロセスを実質的に正常なレベルに回復させる能力についてアッセイし、ここで上記腎臓組織は低いリソソーム活性を持つものであり、及び/又は
(c)組織を回復して実質的に正常なレベルの腎臓組織に転換する能力についてアッセイすることよりなり、ここで上記腎臓組織は低いリソソーム活性を持つものである。
リソソーム活性化化合物は、リソソームに直接又は間接的に作用する化合物であってもよい。間接的に作用することによって、化合物はリソソームの活性に影響する成分に作用する。それにも拘らず、結果はリソソームの活性化をもたらし、それによってタンパク質の分解が増進される。
(a)尿サンプルの全アルブミン含有量を測定し、
(b)慣用のRIA法によって検出できないように変質した、尿中の損なわれていないアルブミンの量の変化を測定し、ここでその変化は腎臓病になる傾向を示すものであり、そして
変化が測定された時に腎臓病の動物を処置することよりなる。
図2は、尿及び血漿中のアルブミンの分配を説明する。
溶剤A H2O、 1%トリフルオロ酢酸
溶剤B 60%アセトニトリル、0.09%TFA
溶剤A2 99.96>00.00:49.58min
圧力 9.014Mパスカル(〜1100psi)
溶剤B2 0.04>100.0:49.58min
圧力 7.154Mパスカル
214nmの波長を用いた。
図5は、アルブミン単独のHPLCプロフィールを示す。ほぼ39〜44分の保持時間において溶離した本質的に単一のピークが得られた。
ここで引用された文献の全ては、その全体が参照される。
Claims (16)
- (a)尿サンプルの全てのタンパク質を分離し、そして
(b)サンプル中のタンパク質の変質した形態を検出し、そして変質したタンパク質の検出が、腎臓病及び/又は疾病の腎臓合併症の初期の段階を表示することよりなる、
腎臓病及び/又は疾病の腎臓合併症の初期の段階を検出する方法。 - 疾病が、腎症、尿崩症、I型糖尿病、II型糖尿病、腎臓の疾病(腎糸体炎、バクテリア及びウイルス性腎糸体炎、IgA腎症、及びヘノッホ−シェーンライン紫斑病、膜状増殖性糸体腎炎、膜性腎症、ジェーグレン徴候群、糖尿病、ネフローゼ症候群(極少病変、巣状腎糸球体硬化症及び関連する機能不全)、急性腎不全、急性管状間質性腎炎、腎盂腎臓炎、GU路炎症性疾病、プレクランプシア、腎移植拒絶、乾癬、逆流性腎症、腎石症)、遺伝性腎臓病(髄質嚢胞、髄質スポンジ、多嚢胞腎臓病(オートゾーム優性多嚢胞腎臓病、オートゾーム劣性多嚢胞腎臓病、管状硬化症)、フォン・ヒッペル−リンドウ病、家族性薄糸球体基部膜病、コラーゲンIII 腎糸球体病、フィブロネクチン腎糸球体病、アルポート症候群、ファブリー病、爪・膝蓋骨症候群、先天性泌尿器異常)、モノクロナール高ガンマグロブリン血症(多発性骨髄細胞腫、アミロイド症及び関連する機能異常)、熱病(家族性地中海熱、HIV感染エイズ)、炎症性疾病(全身的脈管炎(結節性多発性動脈炎、ウエゲナー多発性肉芽腫症、多発性動脈炎、壊死性及び半月状腎糸球体炎)、多発性筋炎、皮膚筋炎、膵臓炎、ロイマチス様関節炎、全身的紅斑性狼瘡、通風)、血液機能異常(鎌状赤血球病、血栓性血小板減少紫斑病、溶血尿毒症症候群、急性皮質壊死、腎臓の血栓性栓塞)、外傷及び手術(広い範囲の損傷、火傷、腹部及び脈管の手術、麻酔薬の注入)、薬物(ペニシラミン、ステロイド類)及び薬物乱用、悪性の疾病(上皮細胞の(肺、乳房)、悪性腺腫(腎臓の)、黒色腫、リンパ性網内症、多発性骨髄細胞腫)、循環器の疾病(心筋梗塞、心不全、末梢血管病、高血圧、冠状心臓血管病、非アテローム硬化性心臓血管病、アテローム硬化性心臓血管病)、皮膚病(乾癬、全身的硬化症)、呼吸器の疾病(COPD、閉塞性睡眠無呼吸、高標高におけるヒポイア)、及び内分泌の疾病(アクロメガリー、真性糖尿病、尿崩症)を含む請求項1記載の方法。
- タンパク質が、アルブミン、グロブリン(α−グロブリン(α1−グロブリン、α2−グロブリン)、β−グロブリン、γ−グロブリン)、ユウグロブリン、プソイドグロブリンI及びII、フィブリノーゲン、α1酸性糖タンパク質(オロソムコイド)、α1糖タンパク質、α1リポタンパク質、セルロプラスミン、α219S糖タンパク質、β1トランスフェリン、β1リポプロテイン、免疫グロブリンA、E、GおよびM、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ、ラクテート・デヒドロゲナーゼ、グルコース・オキシダーゼ、ミオグロビン、リゾチーム、タンパク質ホルモン、成長ホルモン、インスリン、又は上皮小体ホルモンを含む、請求項1記載の方法。
- タンパク質がアルブミンである請求項3記載の方法。
- 変質したタンパク質を非抗体的手段によって検出する請求項1記載の方法。
- 上記非抗体的手段がクロマトグラフィー、電気泳動又は沈殿法を含む請求項5記載の方法。
- 上記非抗体的手段が、分配クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、濾紙クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、気−液クロマトグラフィー、ゲルクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、親和クロマトグラフィー、又は疎水性相互反応クロマトグラフィー、移動界面電気泳動法、ゾーン電気泳動法、又は等電集束法を含む請求項6記載の方法。
- 上記非抗体的手段が疎水性相互反応クロマトグラフィーよりなる請求項7記載の方法。
- 疎水性相互反応クロマトグラフィーが高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)装置において実施される請求項8記載の方法。
- 変質したタンパク質がタンパク質の未変質及び変質した形態の両者に対して特異的な抗体によって検出される請求項1記載の方法。
- 抗体が変質したタンパク質に対して特有である請求項10記載の方法。
- 抗体を、酵素性、放射性、蛍光性又は化学発光性の標識に添着させることよりなり、検出手段が、ラジオイムノアッセイ、免疫性ラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、酵素結合イムノアッセイ、又はプロテインAイムノアッセイよりなる請求項11記載の方法。
- 変質したタンパク質が尿中に存在して時間の経過により量が増加する場合、疾病の初期の段階と診断される請求項1記載の方法。
- 慣用のラジオイムノアッセイが変質したタンパク質を検出しない請求項1記載の方法。
- (a)タンパク質の変質した形態に対して特異的な標識化された抗体を含む容器、
(b)抗体反応を進展するための試薬を含む容器、及び
(c)診断を行うための要素(a)及び(b)の用い方についての指示書き
よりなり、尿中に発見される損なわれていないタンパク質が疾病のインディケーターとなることよりなる、腎臓病及び/又は疾病の腎臓合併症の初期の段階を検出するための物品。 - (a)疾病の処置が可能であると思われる薬剤を必要とする人にそれを投与し、
(b)その人から尿サンプルを採取し、そして
(c)サンプル中のタンパク質の変質した形態をアッセイすることよりなり、そして尿中にタンパク質の変質した形態が存在するか又は存在しないか、又は時間の経過でタンパク質の変質した形態の量が低下するかのいずれかであることが、その薬剤が腎臓病及び/又は疾病の腎臓合併症のための治療剤であることを示すことよりなる、
腎臓病及び/又は疾病の腎臓合併症のための治療剤を決定する方法。
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