JP2005535652A - １，２−プロピレングリコールを含有するヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）の高濃度液体製剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、貯蔵安定性を有し、貯蔵において結晶化が軽減されているか結晶化がなく、ヒトまたは動物の体に投与するのに適したヒト成長ホルモン（ｈＧＨ、ソマトロピン）の液体製剤に関する。より詳細には、本発明は少なくともある期間、冷蔵温度より高い温度で貯蔵した場合に安定で、結晶化が最小であるか結晶化がないヒト成長ホルモンの液体製剤に関する。

Description

本発明は、貯蔵安定性が良好で、貯蔵において結晶化が少ないか結晶化がなく、かつヒトまたは動物の体に投与するのに適したヒト成長ホルモン（ｈＧＨ、ソマトロピン）の液体製剤に関する。より詳細には、本発明は少なくともある瞬間冷蔵温度より高い温度で貯蔵したときに安定で、結晶化が最小であるか結晶化がない、ヒト成長ホルモンの液体製剤に関する。

天然のｈＧＨは、１９１個のアミノ酸からなる１本のポリペプチド鎖のタンパク質である。このタンパク質は内部が２つのジスルフィド架橋により架橋されており、分子量が約２２ｋＤａの単量体である。

ｈＧＨの主な生物学的作用は、体内の一連の器官および組織の成長を促進することである。ｈＧＨは生涯にわたって脳下垂体から拍動性に分泌される。ｈＧＨの主な生物学的効果は成長を促進することである。ｈＧＨに反応する器官または組織には肝臓、腸、腎臓、筋肉、結合組織および骨格が含まれる。ｈＧＨの欠乏はすべての年代層で起こり得る。ｈＧＨ欠乏症の結果には骨密度の低下、子供の身長不足、細身の体重および細胞外容積の減少ならびに心臓血管疾患危険因子の増大が含まれる。組換えｈＧＨ補充療法は、これらの影響の回復に安全かつ効果的であることが証明されているが、一定の間隔で注射を繰り返すことが要求される。

例えば、下垂体性小人症（ｈｙｐｏｐｉｔｕｉｔａｒｙ ｄｗａｒｆｉｓｍ）は、このような状態に苦しむ対象にｈＧＨを投与することにより容易に治療される状態である。組換え手段による大量のｈＧＨの生産に先立って、ほんの限られた量のｈＧＨが、ヒトの死体から得られた脳下垂体から面倒な抽出をすることにより調製された。この操作には、例えばクロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）の原因となる物質がｈＧＨを受ける患者に渡る場合があるという、感染性物質に関連する危険が伴う。ｈＧＨ遺伝子の単離および細胞培養において組換えｈＧＨを発現する形質転換された宿主細胞の作製が、より信頼性、安全性が高く、より費用効果のよい下垂体性小人症の治療に途を開くだけでなく、他の疾患および状態の治療に対してもｈＧＨを使用する可能性について途を開くものとなった。したがって、本発明においては、ｈＧＨとして組換えヒト成長ホルモンを示すのが好ましい。しかし、天然源から単離されたヒト成長ホルモンも原則として、同様に本発明の医薬製剤に含めることができることは容易に理解されよう。

ｈＧＨに限らず、医薬タンパク質の水性液体製剤に認められる長年の問題は、貯蔵期間中の不安定性の問題である。水溶液中のｈＧＨは種々の分解を受けることが知られている。大部分の他のタンパク質と同様に、ソマトロピン（組換えヒト成長ホルモン、ｒｈＧＨ）は３つの主な潜在的分解経路、すなわち、遊離アミド基を脱アミド化する加水分解、イオウを含むアミノ酸の酸化、２個以上のｈＧＨ分子が物理的に互いに固着し、例えば不透明な不溶物を形成する、凝集という物理変化による経路を有する。また、加水分解の結果としてペプチド主鎖を短縮する可能性がある。さらに、重要な問題にｈＧＨの結晶化がある。

上記の不安定性の問題の解決方法について、初期の提案は凍結乾燥を含むが、この方法はもちろん、投与直前または少し前に得られた凍結乾燥製品を再調製することを要する。これは、患者が自宅で日常的に自分で投与する状況においては、通常患者が凍結乾燥製剤を水溶液に再調製しなければならないことを意味する。これは患者にとって不便であり、かつ配慮の欠如、詳細および説明に対する注意の欠如、または単なる患者の思い違いにより適切に再調製されないという危険を伴う。凍結乾燥製剤はまた、製造の観点からコストが高く、時間が掛かるという不利益を有する。

このため、患者が自分でｈＧＨをより簡単に投与することができる製剤を発見することに多大な努力が費やされている。これらの努力は、そのまま使用できる形態の十分に安定な水性液体ｈＧＨ製剤を提供する方法に絞られている。このような液体投与形態は、再調製と他の器具を用いてペンカートリッジに充填することを要する凍結乾燥投与形態と比較し、利便性の増大およびそれによるより優れた適応性を提供する。

しかし、ｈＧＨの水性製剤を安定化できる賦形剤が、患者への投与において危険をもたらす場合があることに注意しなければならない。安定化剤として役立つ多くの化合物が臨床的に許容されるとは思われず、したがって薬学的に許容される製剤を作製することができない。さらに、製薬上の規制要件要請は、患者の危険を低減するために不必要な添加物／添加剤、特に合成添加物／添加剤を避けなければならないことを指示している。

好都合には、ｈＧＨの水性医薬製剤は多用量型（ｍｕｌｔｉ−ｄｏｓａｇｅ）製剤として患者に提供されるべきであり、患者はかかる製剤を注射器具により投与する。このような多用量型医薬製剤は通常適当な防腐剤の存在を必要とする。

一般のｈＧＨの液体製剤は低濃度、例えば約３．３３ｍｇ／ｄｌの薬剤を含有することが知られているが、このことは投与において、患者にある種の不利益をもたらす可能性がある。

特に、患者は１回の注射で比較的大体積のｈＧＨの上記低濃度製剤を受けなければならないが、このことが不快感または苦痛の原因となる場合がある。例えば、成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を患った子供に対して、ｈＧＨを用量約０．１ＩＵ／ｋｇ体重／日で投与しなければならない場合がある。したがって、体重５０ｋｇの患者は１日当たり約５ＩＵのｈＧＨを受けなければならず、これは約３．３３ｍｇ／ｍｌのｈＧＨ（１ＩＵｈＧＨ＝０．３３ｍｇｈＧＨ）を含有する液体製剤５００μｌに含まれる。５００μｌより少量の適用が強く望まれていることは容易に理解されよう。

他には、このような用量を、上記低濃度ｈＧＨ製剤の２回以上の注射により投与し、各注射の体積を減らすことが可能である。しかし、適用安全性の見地から用量当たり複数回の注射を使用することは推奨されない。

さらに、治療スケジュールおよび投与量により、処方された量のｈＧＨを供給できるようにするため、患者に上記低濃度ｈＧＨ製剤の注射を複数回用いなければならない場合がある。この方法は、例えば体重の増加により多量のｈＧＨを必要とする、ターナー症候群に関連する成長不足の患者に適用される場合がある。多くの場合、このような患者に必要な量のｈＧＨを上記低濃度ｈＧＨ製剤の合理的な量による１回の注射で供給することはできない。

したがって、高濃度のｈＧＨを含有する液体医薬製剤が現在要望されている。

本発明の過程で、知られている水性液体成長ホルモン製剤においてｈＧＨ濃度をより高い値、例えば５ｍｇ／ｍｌｈＧＨ以上に調整すると、結晶が上記製剤において析出する傾向があることが報告されている。このことは、上記製剤が冷蔵温度で貯蔵される場合だけでなく、少なくとも一時的に冷蔵温度より高い温度で貯蔵される場合にもあてはまる。このような製剤は投与前に撹拌または混和を必要とし、結晶が小さいか目に見えない場合には、結晶をまず十分に溶解せずに製剤を投与することとなる可能性があるため、液体ｈＧＨ製剤中の結晶の存在は非常に望ましくない。また、貯蔵中に結晶が析出した場合には、ｈＧＨ製剤は外観に関しても明らかな不利益がある。

したがって、本発明の目的は、冷蔵温度である期間、例えば数カ月または１年もしくは２年の間貯蔵した場合にでも、安定な多用量型の水性液体ｈＧＨ製剤を提供することである。本発明の他の目的は、上記の一般の冷蔵温度（例えば２℃から８℃）で少なくともある期間、または冷蔵庫の外で例えば数時間、数日もしくは数週間貯蔵したときでさえ安定な液体ｈＧＨ製剤を提供することである。

本出願において、「安定」とは主に結晶析出の問題が本質的に除かれていることを意味し、好ましくはこの問題が完全に除かれていることを意味する。したがって、本発明の医薬製剤は、上記の貯蔵において結晶化が最小であるか結晶化がないことを示す。

結晶化を回避することに加え、安定な製剤は、好ましくは貯蔵においてｈＧＨの凝集がないか最小であることを示す。同様に安定な製剤は、好ましくはｈＧＨの他の分解、例えば脱アミド化、酸化および／または加水分解を当然受けないか、最小範囲で受けるにすぎない。

本発明において、高濃度のｈＧＨを含有する上記多用量型液体製剤に用いる１，２−プロピレングリコールが、安定性に関する好ましい要素として開発された。さらに、本発明において、驚くべきことに安定な製剤を従来考えられていたより少数の添加剤により構成できることが確立された。

したがって、本発明の実施形態は、本願明細書に記載の高濃度のヒト成長ホルモンを含有する多用量型水性液体医薬製剤の調製における、１，２−プロピレングリコールの安定化剤としての使用に関する。

本発明の開発中に、１，２−プロピレングリコールが医薬製剤に安定性を付与することができると同時に、製剤の所望する張性（ｔｏｎｉｃｉｔｙ）に寄与することが示された。

本発明において、液体医薬製剤はそのまま使用できる形態で提供される製剤であり、すなわち、例えば凍結乾燥物のように投与前に再調製すべき形態では提供されない。

したがって、本発明は、約５ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト成長ホルモン、１，２−プロピレングリコール、水性緩衝液、非イオン性界面活性剤および防腐剤から本質的になり、約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇの張性および約６．１から約６．３のｐＨを有する多用量型液体医薬製剤を提供する。

必要であれば、張性が約１００から約５００ｍｏｓｍ／ｋｇとなるように、張性調整剤がさらに上記医薬製剤中に存在していてもよい。好ましくは本発明の医薬製剤は等張である。

したがって、別の実施形態においては、約５ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト成長ホルモン、１，２−プロピレングリコール、水性緩衝液、非イオン性界面活性剤および防腐剤から本質的になり、約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇの張性および約６．２から約６．３のｐＨを有し、さらに医薬組成物の張性が約１００から約５００ｍｏｓｍ／ｋｇとなるような張性調整剤を含有するヒト成長ホルモンの多用量型液体医薬製剤を提供する。

追加される張性調整剤の存在は、製剤の他の添加剤が製剤全体の張性を所望する範囲にまでするために寄与できない場合に必要となる。特に、１，２−プロピレングリコールは濃度に依存して所望する張性のかなりの部分を付与することができる。特に好ましい本発明による医薬製剤は、他の添加剤とともに１，２−プロピレングリコールが追加の張性調整剤を必要としないで所望する張性を付与し、それにより使用する全体の添加剤数を最小限に維持することができる製剤である。

本発明において、用語「本質的になる」とは、本発明の医薬製剤が本明細書に述べたもの以外に、医薬製剤に対する技術的な医薬上の機能、例えば安定性、ｐＨ、張性等に関して貢献できる他の添加剤を含有しないことを意味する。しかし、このことは上記製剤が、技術的な医薬上の機能を製剤中で果たさない１種または複数種の他の補助剤を含有する可能性を排除するものではない。このような補助剤の例としては、液体製剤を着色する薬学的に許容される色素が挙げられる。これは、例えば多用量型注射器具中の液体量を確認するのに役立ち、結晶化が起きているかどうかを確認しやすくする場合がある。

本発明者は、本発明から生ずる患者、薬剤師および開業医の利益に気付いている。従来、結晶化を最小限にするため、成長ホルモン製剤を冷蔵温度（例えば、２℃から８℃の範囲）で注意深く貯蔵することが必要であった。患者が成長ホルモンを受け取る前は、通常製造業者および薬剤師により製剤を冷蔵温度で確実に貯蔵することができる。しかし、製剤が一旦患者により受け取られ、家庭の冷蔵庫に貯蔵されると貯蔵温度に関して信頼性が大きく低下する。患者の家庭の冷蔵庫の温度は実質的に２から８℃より高い場合が多く、例えば頻繁に開閉されるため、例えば約１５℃である。さらに、適用される液体製剤を含有する器具が冷蔵庫外で貯蔵される場合、例えば、投与後台所の作業台の上に置き忘れる場合があり、それによりしばらくの間室温（例えば約２０℃から約２７℃、しばしば約２５℃）に曝される。ｈＧＨの結晶化は８℃より高い温度、すなわち、知られているｈＧＨの医薬製剤では冷蔵温度以上でより結晶化が起きやすくなる。

本発明の製剤は、冷蔵温度より高い温度でしばらく貯蔵されても結晶化に対してより大きな抵抗性を有する。したがって、従来推奨されまたは望ましいとされた期間より長い期間にわたって日常的に投与するに足りる成長ホルモンを患者に供給することができる。以前、患者は１週間分の少ない投与量を保管したのに対し、本発明の製剤により患者は数週間分または数カ月分もの成長ホルモンを家庭の冷蔵庫で結晶化がないか最小の結晶化のみで保管することができる。したがって、本発明により患者への頻繁な処方を顕著に低減することができる。

したがって、本発明の医薬製剤は安定で、特に冷蔵温度から室温までの温度による貯蔵で実質的に結晶化がない。特に、かかる製剤は冷蔵温度から室温までの温度で少なくとも４週間または少なくとも１カ月、好ましくは少なくとも７週間、より好ましくは少なくとも１３週間安定に貯蔵される。好ましい実施形態においては、かかる製剤は安定であり、特に２℃から８℃の間の温度での貯蔵で数カ月間、例えば３カ月間、より好ましくは少なくとも１２カ月間、最も好ましくは少なくとも１８カ月間実質的に結晶化がない。さらに好ましい実施形態においては、かかる製剤は安定であり、１５℃から２５℃の間の温度で少なくとも７週間、より好ましくは少なくとも１３週間実質的に結晶化がない。

この局面において、貯蔵に先立って、ｈＧＨ製剤は、脱アミド化および酸化の分解過程により生成するタンパク質性物質である「関連タンパク質類（ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」を約４％含有してもよい。かかる「関連タンパク質類」は欧州薬局方に定義されており、逆相ＨＰＬＣによって測定される。本発明者は最大２０％の「関連タンパク質類」を製剤の貯蔵期限の目標値として提案する。

ｈＧＨの分解速度は正確な一次ではなく、分解速度は温度の上昇とともに上昇する。２℃から８℃において、製剤は通常１カ月当たり０．８％の「関連タンパク質類」の増加を示す。２５℃においてこれは１カ月当たり約１３％に上昇し、４０℃においては１カ月当たり約７０％に上昇する。２５℃で１カ月の貯蔵は２℃から８℃で１７カ月の貯蔵にほぼ相当する。１５℃で１カ月の貯蔵は２℃から８℃で５カ月の貯蔵にほぼ相当する。したがって、約２５℃から４０℃の範囲の温度で連続して貯蔵するのは非実用的である。

本発明の製剤は、４０℃まで、特に２５℃まで、さらに特に１５℃まで結晶化に対して良好な抵抗性を有するが、通常これらの温度における「関連タンパク質類」の急速化成により、製剤のより直接的な貯蔵期限を設定する。

異なる温度における「関連タンパク質類」の経時的な形成速度は平均的な技術により容易に測定され、この情報により最適および最大貯蔵期間／温度のパターンを過度の負担をかけることなく計算できる。実際には、本発明の製剤は冷蔵庫の扉の開閉または投与の目的で毎日１時間程度冷蔵庫から出されることにより、約８℃よりわずかに高い温度への上昇を日々容易に受け得るが、貯蔵期間を大きく損なうことはない。好都合にも、本発明の製剤は１日程度冷蔵庫の外の室温に出されても分解または結晶化に関して不利になることはない。

したがって、本発明の医薬製剤は冷蔵温度（例えば、２℃から８℃の範囲）で全期間安定な状態を保つことが可能である。さらにこの医薬製剤は、全貯蔵期間のうちの少なくともいくらかの期間が冷蔵温度より高い温度である場合、おそらく冷蔵庫外で約１週間まで、おそらく冷蔵庫外で約１カ月までまたはさらにそれより長い間十分な安定性を示す。

したがって、製剤が貯蔵される期間の少なくとも一部は少なくとも８℃の貯蔵温度であり、場合によっては８℃から４０℃、８℃から２５℃または８℃から１５℃から選択される範囲の温度であってもよい。

本発明による医薬製剤の好ましい実施形態においては、製剤中のｈＧＨの濃度が約６ｍｇ／ｍｌから約１４ｍｇ／ｍｌである。特に好ましい実施形態においては製剤中のｈＧＨの濃度が約６．６７ｍｇ／ｍｌである。

本発明の過程で、驚くべきことに１，２−プロピレングリコールにより高濃度ｈＧＨを含有する本発明の製剤を十分に安定化できることが確立された。本発明の医薬製剤は、好ましくは約０．５ｍｇ／ｍｌから約２０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約５ｍｇ／ｍｌから約１５ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約６ｍｇ／ｍｌから約１３ｍｇ／ｍｌの濃度で１，２−プロピレングリコールを含有する。好ましい実施形態は、約９ｍｇ／ｍｌおよび１２．４ｍｇ／ｍｌの１，２−プロピレングリコールを含有する本発明による医薬製剤に関する。

本発明の医薬製剤中の水性緩衝液は、薬学的に許容されるいかなる緩衝液であってもよい。好ましい実施形態においては、水性緩衝液はリン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液およびギ酸緩衝液からなる群から選ばれ、好ましくはリン酸緩衝液、より好ましくはリン酸ナトリウム緩衝液である。通常、水性緩衝液の濃度は約５ｍＭから約１００ｍＭである。好ましい実施形態においては、水性緩衝液の濃度は約１０ｍＭである。特に好ましい実施形態においては、水性緩衝液は濃度約１０ｍＭのリン酸緩衝液（１０ｍＭという数はリン酸イオンの濃度に関する）である。最も好ましい水性緩衝液は、濃度約１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液である。同様に好ましくは１０ｍＭのリン酸緩衝液であり、特に好ましくは１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液である。

本発明の医薬製剤中の非イオン性界面活性剤は、薬学的に許容されるいかなる非イオン性界面活性剤であってもよい。非イオン性界面活性剤は好ましくは、例えばポロクサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）１８４、ポロクサマー１８８等のポロクサマー、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０等のポリソルベートおよび他のエチレン／ポリプロピレンブロックポリマーからなる群から選ばれる。非イオン性界面活性剤は好ましくはポロクサマー、特に好ましくはポロクサマー１８８である。使用する非イオン性界面活性剤の量は、約０．００１％（ｗ／ｖ）から約１０％（ｗ／ｖ）の範囲であってよく、より好ましくは約０．００５％（ｗ／ｖ）から約５％（ｗ／ｖ）、さらに好ましくは約０．０１％（ｗ／ｖ）から約１％（ｗ／ｖ）である。好ましい実施形態においては、非イオン性界面活性剤の濃度は約０．０５ｍｇ／ｍｌから約４ｍｇ／ｍｌであり、好ましくは約２ｍｇ／ｍｌの濃度である。本発明の好ましい実施形態は、非イオン性界面活性剤が約０．０５ｍｇ／ｍｌから約４ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約２ｍｇ／ｍｌの濃度のポロクサマー１８８である医薬製剤に関する。

本発明の医薬製剤中の防腐剤は、薬学的に許容されるいかなる防腐剤であってもよい。防腐剤は、好ましくはベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェノール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、２−フェノキシエタノール、フェニル硝酸水銀およびチメロサールからなる群から選ばれる。防腐剤の濃度は、多用量型製剤の安定性の観点から保健機関 （ｈｅａｌｔｈ ａｕｔｈｏｒｉｔｙ）の要件に合致し、当業者が容易に求めることができる。したがって、防腐剤の濃度は実際に使用する防腐剤に依存し、例えば約１ｍｇ／ｍｌから約３０ｍｇ／ｍｌとすることができる。より好ましくは防腐剤はベンジルアルコールである。好ましい実施形態においては、本発明による医薬製剤は、濃度が約７ｍｇ／ｍｌから約１２ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約９ｍｇ／ｍｌの濃度のベンジルアルコールを防腐剤として含有する。

本発明による医薬製剤において、製剤の張性を約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇの所望する値に調整するための張性調整剤がさらに存在する場合、かかる張性調整剤は薬学的に許容されるいかなる張性調整剤であってもよい。好ましくは上記張性調整剤は、糖、糖アルコール、他のポリオール、中性塩およびアミノ酸からなる群から選ばれる。例えば、糖はラクトースまたはスクロースのような単糖または二糖類であってよい。例えば、中性塩は無機塩、有機塩または混合塩であってよく、例えば塩化ナトリウムまたは酢酸アンモニウムのように水に溶解したときにほぼ中性のｐＨを示す。例えば、アミノ酸はグリシン、アルギニンまたはヒスチジンであってよい。好ましい実施形態においては、張性調整剤は糖アルコールであり、好ましくはマンニトールである。張性調整剤は、好ましくは７０ｍｇ／ｍｌまで、より好ましくは５０ｍｇ／ｍｌまで、さらに好ましくは３０ｍｇ／ｍｌまでの濃度である。特に好ましい実施形態においては、追加される張性調整剤は約３０ｍｇ／ｍｌの濃度のマンニトールである。

本発明による医薬製剤は、好ましくは約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇの張性を有してもよい、すなわち、かかる製剤の張性は低張（ｈｙｐｏｔｏｎｉｃ）から高張（ｈｙｐｅｒｔｏｎｉｃ）まで可能である。好ましい実施形態においては、本発明の医薬製剤は、わずかな低浸透圧からわずかな高浸透圧までの張性を有する。好ましくは、そして知られている事実（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅ ２；編集：Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｅ．Ａｖｉｓ；Ｈｅｒｂｅｒｔ Ａ．Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ；Ｌｅｏｎ Ｌａｃｈｍａｎ；Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｎｄ Ｂａｓｅｌ，発行：０４／０１／１９９３，５８〜６０頁参照）によれば、これは約２５０ｍｏｓｍ／ｋｇから約３５０ｍｏｓｍ／ｋｇの張性に相当する。特に好ましい実施形態においては、本発明の医薬製剤は等張である。等張は、好ましくは約２７０ｍｏｓｍ／ｋｇから約３２８ｍｏｓｍ／ｋｇの張性に相当し、より好ましくは約２８６ｍｏｓｍ／ｋｇの張性に相当する。

ある好ましい実施形態においては、本発明による医薬製剤のｐＨ値は約６．２である。当業者であればｐＨ値約６．２がｐＨ６．１５からｐＨ６．２５であることを理解するであろう。好ましくはｐＨが６．２である。

特に好ましい本発明の医薬製剤は、６．６７ｍｇ／ｍｌのヒト成長ホルモン、
６ｍｇ／ｍｌから１５ｍｇ／ｍｌの１，２−プロピレングリコール、
１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
２ｍｇ／ｍｌのポロクサマー１８８、
製剤が実質的に等張となるのに必要な十分な濃度のマンニトール、
から本質的になり、６．２のｐＨを有する。

別の態様において、６．６７ｍｇ／ｍｌのヒト成長ホルモン、
６ｍｇ／ｍｌの１，２−プロピレングリコール、
１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
２２．５ｍｇ／ｍｌのマンニトール、
２ｍｇ／ｍｌのポロクサマー１８８、
から本質的になり、６．２のｐＨを有する医薬組成物が提供される。

本発明のさらに別の態様は、６．６７ｍｇ／ｍｌのヒト成長ホルモン、
９ｍｇ／ｍｌの１，２−プロピレングリコール、
１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
８．１ｍｇ／ｍｌのマンニトール、
２ｍｇ／ｍｌのポロクサマー１８８、
から本質的になり、６．２のｐＨを有する医薬組成物に関する。

さらに別の態様において、本発明は６．６７ｍｇ／ｍｌのヒト成長ホルモン、
１２．４ｍｇ／ｍｌの１，２−プロピレングリコール、
１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
２ｍｇ／ｍｌのポロクサマー１８８、
から本質的になり、６．２のｐＨを有する医薬組成物に関する。

本発明による製剤において最小限に抑制され、または回避される結晶化は、成長ホルモンの結晶体であることが明らかである。好ましくは液体製剤中の結晶体は目視により直接検出され、より好ましくは光学顕微鏡により５×の倍率で、さらに好ましくは光学顕微鏡により１０×の倍率で検出される。光学顕微鏡で観察する前に製剤をろ過してフィルタ上の結晶の有無を調べてもよい。光学顕微鏡で調べる場合、フィルタの細孔径は約５μｍがよい。

結晶化についての特に好ましい試験は、空間をなくした状態で製剤を密閉容器に入れ、遮光して１５℃から２５℃でしばらく貯蔵し、その後結晶の有無を目視で観察することにより行う。

さらに、本発明の水性成長ホルモン製剤は、貯蔵期間中に成長ホルモンの凝集がないか最小であるという意味で、好ましくは貯蔵において安定である。また、好ましくは成長ホルモンの化学的分解、例えば脱アミド化など本明細書に記載するように分解がないか最小である。水性溶液中の成長ホルモンの安定性を測定するための好ましい試験は、例えば国際公開第９４／０３１９８号に記載されているように当該技術分野においてよく知られており、参照により本明細書に組み込まれる。本発明の好ましい製剤においては、成長ホルモンは１０％より少ない凝集を示し、好ましくは１％より少なく、より好ましくは０．１％より少なく、さらに好ましくは０．０１％より少ない凝集を示す。

本発明による医薬製剤において、ヒト成長ホルモンは好ましくは組換えにより作製されたｈＧＨである。したがって、特に好ましいヒト成長ホルモンは組換え手段、例えば欧州特許出願公開第０２１７８２２号の記載により作製され、参照により本明細書に組み込まれる。本発明に従って、単独または他のおよび天然のホルモンと組み合わせて用いられるヒト成長ホルモンの変異体には、ソマトロピンとして知られている１９１個のアミノ酸からなる種およびソマトレムとして知られている１９２個のアミノ酸でＮ末端がメチオニン（ｍｅｔ）である種が含まれる。また、妊娠中の胎盤中に自然に見られるｈＧＨ−Ｖとして知られている変異体も存在し、その遺伝子配列が明らかにされ、組換えタンパク質が調製されている。

本発明の多用量型医薬製剤は、好ましくは少なくとも２回、より好ましくは多重投与の成長ホルモンを含む。

本発明の液体製剤中のｈＧＨ量は、製剤の体積およびそれを与えようとするｈＧＨの投与回数に依存する。好ましい投与体積は例えば０．４ｍｌのように０．５ｍｌより少ないが、原則として１回の投与当たり０．０１ｍｌから１．０ｍｌの体積範囲で使用することができる。他の好ましい投与体積は０．１ｍｌから０．６ｍｌの範囲であり、好ましくは０．１ｍｌから０．４ｍｌである。

正確な投与量は個人により大きく異なる場合があるが、毎日の投与のための好ましい投与量単位において、ｈＧＨの投与量は１．３ｍｇである。ｈＧＨの投与量は、０．０３３ｍｇから３．３３ｍｇの範囲で使用することができ、好ましくは０．３３ｍｇから２．０ｍｇｈＧＨの範囲である。投与量の増大は投与回数を減らす場合に適している。

体積および／または投与量は、担当医からの具体的なアドバイスに従って個々の患者間で変えてもよい。

医薬製品は、好ましくは注射器具に用いるための容器、例えばペン型注射器のカートリッジの形態である。医薬製品は注射器具、好ましくはペン型注射器に含まれる場合がある。

したがって、本発明には注射器具および上記の液体成長ホルモン製剤を含有する別の容器を含むキットが含まれる。投与器具が簡単な皮下注射用のシリンジである場合、キットはシリンジ、針およびシリンジとともに用いるｈＧＨ製剤を含有するバイアルまたはアンプルを含んでもよい。より好ましい実施形態においては、注射器具は簡単な皮下注射用のシリンジではなく、別の容器が、容器中の液体製剤を注射器具の出口と液体接続して使用するように、注射器具に係合するように構成されている。

投与器具の例としては、皮下注射用のシリンジおよびペン型注射器具を含むが、これらに限られない。特に好ましい注射器具は、容器がカートリッジ、好ましくはディスポーザブルカートリッジであるペン型注射器である。したがって、本発明は上記のペン型注射器具に使用する液体製剤を含有するカートリッジ、多重投与量の成長ホルモンを含有するカートリッジをも提供する。

上記の本文のすべての内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

本発明を以下の実施例によって詳細に例示するが、本発明はそれらに限定されるものではない。特に実施例は本発明の好ましい実施形態に関する。

本明細書に記載した試薬等の材料は、当業者にはなじみのある商業的に入手可能であり、製造業者の指示に従って用いることができる。

（実施例１ 組換えｈＧＨバルクの調製および精製）
組換えｈＧＨは、培養条件でｈＧＨタンパク質を発現するｈＧＨ遺伝子により形質転換されたＣＨＯ細胞の細胞培養によって生産される。細胞の作製方法および増殖方法の詳細は欧州特許出願公開第０２１７８２２号（Ｓｃｉｏｓ Ｎｏｖａ）に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。工業的または商業的規模において培養物を増殖するための培養条件の変更は当業者の能力の範囲内である。

培養中の細胞により産生されたｈＧＨは、抽出し、医薬用途に適した形態に精製することを要する。これは、ＡＵ ６２９１７７（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｅｗ Ｓｏｕｔｈ Ｗａｌｅｓ ＆ Ｇａｒｖａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載された手順に従って行い、参照により本明細書に組み込まれる。得られたｈＧＨ調製物はバルク溶液の形態であり、以下に記載の製剤を調製するのに用いられる。バルク溶液（原薬）中のｈＧＨの濃度は、通常約８ｍｇ／ｍｌから約１５ｍｇ／ｍｌであり、例えば約１０ｍｇ／ｍｌである。原薬は１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中に存在するのが好都合である。

（実施例２ ヒト成長ホルモン製剤の調製）
医薬製剤は、３倍濃縮した添加剤溶液を希釈してｈＧＨのバルク溶液にすることにより調製する。ここで、以下に概要を示すようにｐＨの調整（例えば、ＨＣｌまたはＮａＯＨによる）、次いで水による最終重量の調整が必要となる。

１０ｍＭのリン酸塩を含むｈＧＨのバルク溶液を、濃度を約１５０ｍｇｈＧＨ／ｍｌまでの値に、または直接ある濃度、例えば１０ｍｇｈＧＨ／ｍｌとした後、用いることができる。以下の調製は１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中に１０ｍｇ／ｍｌのｈＧＨを含有するｈＧＨのバルク溶液を出発物質として行うのが便利である。異なる精製段階により、異なる量のｈＧＨおよび／または異なる緩衝液を有するｈＧＨのバルク溶液が生じると、それによって以下の実施手順を調整しなければならない。このような調整は当業者の日常の仕事に含まれるものと理解される。

１００ｍＭのＮａ_２ＨＰＯ_４×７Ｈ_２Ｏ溶液および１００ｍＭのＮａＨ_２ＰＯ_４×２Ｈ_２Ｏ溶液をそれぞれ調製し、互いに混合して最終ｐＨを６．２とする。

この１００ｍＭリン酸塩溶液の６．６７ｍｌをビーカーに移し、６６．６７ｇの３倍に濃縮された添加剤溶液を調製する。以下の量の添加剤を加える：

同様の方法により、別の添加剤溶液を調製し、最終製剤を以下のとおりとする。

最終の医薬製剤を十分なバルクｈＧＨにより調製し、ｈＧＨの最終濃度を６．６７ｍｇ／ｍｌとする。特に３２．６６ｇの原薬（ｈＧＨ濃度＝１０ｍｇｈＧＨ／ｍｌ）をビーカー中で調製することを含む。１６．６７ｇの３倍濃縮添加剤を撹拌しながら加え、ここでＨＣｌまたはＮａＯＨによりｐＨを６．２の値に調整することが必要であり、水により溶液を５０ｇとする。

溶液を０．２２ミクロンのフィルタでろ過し、プランジャーストッパが備えられたカートリッジ中に充填する。シールをそこで圧着させる。

以下の表に安定化剤として１，２−プロピレングリコールを含有する最終医薬製剤を示す。

（３．製剤の貯蔵および結晶化の評価）
１から８の各製剤について、カートリッジを２℃から８℃、１５℃および２５℃にそれぞれ貯蔵する。カートリッジは、結晶の有無を目視により頻繁に検査する。

２℃から８℃で貯蔵した製剤は試験期間中、例えば製剤１および３について３カ月間、製剤４、５および６について１２カ月間、ならびに製剤２について１８カ月間結晶化を示さない。１５℃または２５℃で貯蔵した製剤１から４は、少なくとも４週間結晶化を示さない。１５℃または２５℃で貯蔵した製剤５から８は、少なくとも７週間結晶化を示さない。

Claims (29)

1. 約５ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト成長ホルモン、１，２−プロピレングリコール、水性緩衝液、非イオン性界面活性剤、および防腐剤から本質的になり、約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇの張性および約６．１から約６．３のｐＨを有するヒト成長ホルモンの多用量型液体医薬製剤。
2. 医薬組成物の張性が約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇとなるように張性調整剤をさらに含有する請求項１に記載の医薬組成物。
3. ヒト成長ホルモンの濃度が約６ｍｇ／ｍｌから１４ｍｇ／ｍｌである請求項１または２に記載の医薬製剤。
4. ヒト成長ホルモンの濃度が約６．６７ｍｇ／ｍｌである請求項１または２に記載の医薬製剤。
5. １，２−プロピレングリコールの濃度が約０．５ｍｇ／ｍｌから約２０ｍｇ／ｍｌである請求項１または２に記載の医薬製剤。
6. １，２−プロピレングリコールの濃度が約５ｍｇ／ｍｌから約１５ｍｇ／ｍｌである請求項１または２に記載の医薬製剤。
7. 前記水性緩衝液がリン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液およびギ酸緩衝液からなる群から選ばれる請求項１または２に記載の医薬製剤。
8. 前記水性緩衝液がリン酸緩衝液である請求項１または２に記載の医薬製剤。
9. 前記水性緩衝液の濃度が約５ｍＭから１００ｍＭである請求項１または２に記載の医薬製剤。
10. 前記緩衝液の濃度が約１０ｍＭである請求項１または２に記載の医薬製剤。
11. 前記緩衝液が約１０ｍＭの濃度を有するリン酸緩衝液である請求項１または２に記載の医薬製剤。
12. 前記非イオン性界面活性剤がポロクサマー、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）ポリオールおよびポリソルベートからなる群から選ばれる請求項１または２に記載の医薬製剤。
13. 前記非イオン性界面活性剤がポロクサマーである請求項１または２に記載の医薬製剤。
14. 前記ポロクサマーがポロクサマー１８８である請求項１または２に記載の医薬製剤。
15. 前記非イオン性界面活性剤が約０．０５から約４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項１または２に記載の医薬製剤。
16. 前記非イオン性界面活性剤が約２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項１または２に記載の医薬組成物。
17. 前記非イオン性界面活性剤が、約２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するポロクサマー１８８である請求項１または２に記載の医薬組成物。
18. 前記防腐剤が、ベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェノール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、２−フェノキシエタノール、フェニル硝酸水銀およびチメロサールからなる群から選ばれる請求項１または２に記載の医薬製剤。
19. 前記防腐剤がベンジルアルコールである請求項１または２に記載の医薬製剤。
20. 前記防腐剤が、約７ｍｇ／ｍｌから約１２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するベンジルアルコールである請求項１または２に記載の医薬製剤。
21. 含有してもよい張性調整剤が、糖、糖アルコール、他のポリオール、中性塩およびアミノ酸からなる群から選ばれる請求項１または２に記載の医薬製剤。
22. 前記張性調整剤がマンニトールである請求項１９に記載の医薬製剤。
23. 前記医薬組成物が実質的に等張である請求項１または２に記載の医薬製剤。
24. 前記医薬組成物のｐＨが約６．２である請求項１に記載の医薬製剤。
25. ６．６７ｍｇ／ｍｌのヒト成長ホルモン、
    約６ｍｇ／ｍｌから１５ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、
    １０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
    ２ｍｇ／ｍｌのポロクサマー１８８、
    必要であれば、製剤が実質的に等張となるのに十分な濃度のマンニトール、
    から本質的になり、６．２のｐＨを有する請求項１または２に記載の医薬製剤。
26. ６．６７ｍｇ／ｍｌのヒト成長ホルモン、
    ６ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、
    １０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
    ２２．５ｍｇ／ｍｌのマンニトール、
    ２ｍｇ／ｍｌのポロクサマー１８８
    から本質的になり、６．２のｐＨを有する請求項１または２に記載の医薬組成物。
27. ６．６７ｍｇ／ｍｌのヒト成長ホルモン、
    ９ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、
    １０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
    ８．１ｍｇ／ｍｌのマンニトール、
    ２ｍｇ／ｍｌのポロクサマー１８８
    から本質的になり、６．２のｐＨを有する請求項１または２に記載の医薬組成物。
28. ６．６７ｍｇ／ｍｌのヒト成長ホルモン、
    １２．４ｍｇ／ｍｌのプロピレングリコール、
    １０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
    ２ｍｇ／ｍｌのポロクサマー１８８、
    から本質的になり、６．２のｐＨを有する請求項１に記載の医薬組成物。
29. 注射器具および請求項１または２に記載のヒト成長ホルモンの多用量型液体製剤を含有する別の容器を含むキット。