MXPA05000414A

MXPA05000414A - Formulaciones liquidas con alta concentracion de hormona de crecimiento humano (hgh) comprendiendo fenol.

Info

Publication number: MXPA05000414A
Application number: MXPA05000414A
Authority: MX
Inventors: Michael Betz
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 2002-07-09
Filing date: 2003-07-08
Publication date: 2005-07-22
Also published as: AU2003249992A1; MXPA05000412A; AR040529A1; EP1521597A1; CA2491682A1; US20070014818A1; CA2491478A1; AU2003249991B2; CA2491685A1; WO2004004779A8; AU2003250915A1; AR040527A1; WO2004004781A1; JP2005538068A; CN1665541A; CN1668332A; JP2005535651A; EP1536835A1; EP1521596A1; WO2004004779A1

Abstract

La presente invencion se refiere a formulaciones liquidas de hormona de crecimiento humano (hGH, somatrofina) que son estables durante el almacenamiento, presentan una cristalizacion reducida o ninguna cristalizacion durante el almacenamiento y son adecuadas para administrarse a un ser humano o animal. Con mayor particularidad, la invencion se refiere a formulaciones liquidas de hormona de crecimiento humano que son estables y presentan una cristalizacion minima o ninguna cristalizacion cuando son almacenadas al menos durante un tiempo a temperaturas superiores a las temperaturas de refrigeracion.

Description

FORMULACIONES LIQUIDAS CON ALTA CONCENTRACION DE HORMONA DE CRECIMIENTO HUMANO (HGH) COMPRENDIENDO FENOL La presente invención se refiere a formulaciones líquidas de hormona de crecimiento humano (hGH, somatrofina) que presenta estabilidad para su almacenamiento, muestra una cristalización reducida o no muestra cristalización alguna durante el almacenamiento y es adecuada para la administración al cuerpo humano o animal. Con mayor particularidad, la invención se refiere a formulaciones líquidas de hormona de crecimiento humano que es estable y exhibe una cristalización mínima o ninguna durante el almacenamiento al menos por un tiempo a temperaturas superiores a temperaturas de refrigeración. La hGH nativa es una proteína de cadena polipeptídica simple compuesta por 191 aminoácidos. La proteína está entrecruzada internamente por dos puentes de disulfuro y en su forma monomérica presenta un peso molecular de aproximadamente 22 kDa. El efecto biológico más importante de hGH es fomentar el crecimiento a través de una cantidad de órganos y tejidos en el cuerpo. La hGH es secretada de modo pulsátil desde la glándula pituitaria durante toda la vida. El efecto biológico más importante de la hGH es fomentar el crecimiento. Los órganos o tejidos con respuesta a la hGH incluyen el hígado, el intestino, los ríñones, músculos, tejido conectivo y el esqueleto. Puede presentarse deficiencia de hGH en grupos de cualquier edad. Las consecuencias de la deficiencia de hGH incluyen la disminución de densidad ósea, menor estatura de los niños, la disminución de peso de la masa corporal y del volumen extracelular y el aumento de factores de riesgo cardiovascular. La terapia de reemplazo con hGH recombinante resultó segura y efectiva para revertir esos efectos, pero requiere repetidas inyecciones en intervalos regulares. El enanismo hipopituitario, por ejemplo, es una condición que se trata perfectamente mediante la administración de hGH a un individuo que padece esa condición. Previo a la producción de grandes cantidades de hGH por medios recombinantes, sólo podían prepararse cantidades limitadas de hGH mediante la compleja extracción de glándulas pituitarias de cadáveres humanos. Esta práctica iba acompañada de riesgos asociados con agentes infecciosos, p. ej. el agente responsable de la enfermedad Creutzfeldt-Jakob (CJD), y que esos agentes pueden transmitirse al paciente al que se administra hGH. El aislado del gen de hGH y la construcción de células huésped transformadas que expresan hGH recombinante en cultivos celulares no sólo dio lugar a un tratamiento más confiable, seguro y económico del enanismo hipopituitario, sino también a la posibilidad de usar hGH para el tratamiento de otras enfermedades y condiciones. De modo concordante, en el contexto de la presente invención, la hGH de preferencia denomina hormona de crecimiento humana recombinante. De cualquier modo se apreciará de inmediato que también la hormona de crecimiento humano aislada de fuentes naturales puede en principio incluirse en una formulación farmacéutica de la presente invención. Una gran dificultad apreciada con formulaciones líquidas acuosas de proteínas de uso farmacéutico, no exactamente hGH, es la inestabilidad durante el almacenamiento a lo largo de un período de tiempo. Se sabe que la hGH en solución acuosa experimenta una cantidad de cambios de degradación. Como la mayoría de las otras proteínas, la hGH presenta tres principales vías potenciales de degradación, a saber, la hidrólisis que produce la desamidación de los grupos amida libres, la oxidación de sulfuro que contiene aminoácidos y el cambio físico de agregación, en donde dos o más moléculas de hGH se unen físicamente para, por ejemplo, formar sustancias insolubles opacas. También existe la posibilidad de un acortamiento de la estructura peptídica como resultado de la hidrólisis. Un problema importante es además la cristalización de la hGH. Las sugerencias de cómo solucionar las dificultades de inestabilidad antes indicadas, incluyen secado por congelamiento, pero esto naturalmente significa que el producto liofilizado resultante debe ser reconstituido inmediatamente o un corto tiempo antes de la administración. En caso de autoadministración habitual de un paciente en su casa, ello normalmente significa cumple con la tarea de reconstituir la preparación liofilizada en una solución acuosa. Esto no es conveniente para el paciente y conlleva el riesgo de una reconstitución inapropiada, debido a la falta de cuidado, la falta de atención a los detalles y las instrucciones o simplemente debido a un malentendido del paciente. El secado por congelamiento de las formulaciones también presente la desventaja de ser costoso e insumir tiempo desde el punto de vista de la fabricación. Por lo tanto se invierte mucho esfuerzo en encontrar formulaciones que permitan a los pacientes autoadministrarse hGH de manera más sencilla. Estos esfuerzos se concentran en formas de proveer formulaciones de hGH líquida acuosa suficientemente estables en una forma lista para usar. Tales formas de dosificación líquidas ofrecen mayor conveniencia y por lo tanto un mejor cumplimiento en comparación con formas de dosificación liofilizadas que deben ser reconstituidas y envasadas en un cartucho mediante un dispositivo adicional. De todos modos debe tenerse cuidado que los excipientes que son capaces de estabilizar una formulación acuosa de hGH pueden implicar algún riesgo en la administración a pacientes. Varios compuestos, que pueden ser adecuados como estabilizadores, no serían clínicamente aceptables y por lo tanto no permitirían que se preparara una formulación de uso farmacéutico. Además los requisitos reguladores de la industria farmacéutica determinan que debe evitarse cualquier aditivo/excipiente innecesario, en particular aditivos/excipientes sintéticos, a fin de reducir riesgos para los pacientes. De modo conveniente, deben ofrecerse al paciente formulaciones farmacéuticas acuosas de hGH como formulaciones multidosis, quien se administrará tal tipo de formulación por medio de un dispositivo para inyectar. Tales formulaciones farmacéuticas multidosis usualmente requieren el uso de un conservador apropiado. Se sabe que las formulaciones líquidas usuales de hGH contienen el fármaco en una baja concentración, p. ej. alrededor de 3,33 mg/ml, que de todos modos, luego de la administración puede causar ciertas desventajas al paciente. En particular, un paciente debe recibir un volumen relativamente grande de tal formulación en baja concentración de hGH en cada aplicación, lo que puede causar incomodidad o incluso dolor. Por ejemplo, a un niño que padece deficiencia de hormona de crecimiento (GHD) hGH probablemente debe administrarse una dosis de aproximadamente 0,1 Ul kg de peso corporal / día. Por lo tanto, un paciente con un peso corporal de 50 kg deberá recibir alrededor de 5 Ul de hGH por día, que está contenido en 500 gl de una formulación líquida que comprende alrededor de 3,33 mg / mi de hGH (1 Ul hGH = 0,33 mg de hGH). Se apreciará de inmediato que es altamente deseable la aplicación de un volumen menor a 500 µ?. Alternativamente tal dosificación puede administrarse en 2 o más aplicaciones de tal formulación de hGH en baja concentración, presentando cada inyección un volumen reducido. De todos modos, en lo que respecta a la seguridad de aplicación, no se recomienda el uso de más de una inyección por dosis. Además, dependiendo del plan de tratamiento y dosificación, un paciente puede verse obligado a aplicarse más de una inyección de tal formulación de hGH en baja concentración a fin de poder completar la cantidad prescripta de hGH. Esto puede aplicarse, por ejemplo, a pacientes que presenta deficiencia de crecimiento referida al síndrome Turner, los que debido a su aumentado peso corporal pueden necesitar una mayor cantidad de hGH. En muchos casos no será posible suministrar la cantidad requerida de hGH a tales pacientes en una sola aplicación con un volumen razonable de tal formulación de hGH en baja concentración. Por lo tanto existe una creciente necesidad de una formulación farmacéutica líquida que contenga hGH en una alta concentración. En el curso de la presente invención se advirtió que los cristales tienden a formarse en formulaciones de hormona de crecimiento líquidas acuosas si la concentración de hGH se ajusta a valores más altos, p. ej. a 5 mg/ml de hGH o más en tales formulaciones. Ello no sucede cuando dichas formulaciones son almacenadas a temperaturas de refrigeración, pero también si son almacenadas a temperaturas inferiores a las del refrigerador, aunque sea por un tiempo. La presencia de cristales en formulaciones de hGH líquidas es altamente indeseable, debido a que previo a la administración, tales formulaciones deben ser agitadas o rotadas y en ocasiones, los cristales son pequeños o pasan desapercibidos y la formulación se administra sin antes disolver suficientemente los cristales. También existe la obvia desventaja respecto de la apariencia visual de las formulaciones de hGH cuando se formaron cristales durante el almacenamiento. Un objeto de la invención es por lo tanto, proveer una formulación de hGH líquida acuosa, multidosis, que es estable cuando se la almacena por períodos de tiempo a temperatura de refrigeración, p. ej. por varios meses o incluso por 1 ó 2 años. Otro objeto de la invención es proveer formulaciones de hGH líquidas, que son estables cuando se almacenan por al menos un período de tiempo a temperaturas superiores a las del refrigerador común (p. ej. superior a 2°C - 8°C) o incluso fuera del refrigerador, p. ej. por períodos de varias horas, días o incluso semanas. En el contexto de la presente, "estable" significa que se evita esencialmente el problema de la formación de cristales; de preferencia este problema es eliminado por completo. De modo concordante, la formulación farmacéutica de la presente invención presenta una cristalización mínima o no presenta cristalización alguna luego del almacenamiento, como antes descrito. Además y a fin de evitar la cristalización, una formulación estable debería de preferencia mostrar ninguna o una agregación mínima de hGH al almacenarse. Del mismo modo, una formulación estable, de preferencia no debería experimentar degradación de hGH o sólo una degradación mínima de otro tipo, como por ejemplo, por desamidación, oxidación y/o hidrólisis. En el contexto de la presente invención, se desarrolló que el conservador a usarse en tal formulación líquida multidosis que contiene hGH en alta concentración es un parámetro favorable en cuanto a la estabilidad, y que el fenol es el conservador más favorablemente usado en dichas formulaciones que comprenden una alta concentración de hGH. Además y en el contexto de la presente invención, se estableció sorprendentemente que una formulación estable puede estar compuesta por un menor número de excipientes que pensado anteriormente. Por consiguiente, una modalidad de la presente invención se refiere al uso de fenol como un conservador en la preparación de una formulación farmacéutica líquida acuosa multidosis que comprende una alta concentración de hormona de crecimiento humano, en donde dicha formulación está substancialmente libre de un excipiente aminoácido, como se describe aquí. En el contexto de la presente invención, una formulación farmacéutica líquida es una formulación provista en una forma lista para usar, no proveyéndose, p. ej. en una forma que debe reconstituirse previo a la administración, como p. ej. un liofilizado. La presente invención por ello provee una formulación farmacéutica líquida acuosa multidosis de hormona de crecimiento humano que contiene esencialmente hormona de crecimiento humano en una concentración de alrededor de 5 mg/ml hasta 100 mg/ml, fenol, un regulador de pH acuoso, un agente tensioactivo no iónico y un conservante, en donde dicha formulación farmacéutica presenta una tonicidad de alrededor de 100 mosm/kg a alrededor de 500 mosm/kg, tiene un pH de alrededor de 6,1 hasta alrededor de 6,3, y estando substancialmente libre de un excipiente aminoácido.

En caso necesario, debe usarse adicionalmente un agente para ajustar tonicidad en esa formulación farmacéutica, de modo tal que la tonicidad sea de alrededor de 100 mosm/kg hasta alrededor de 500 mosm/kg. De preferencia la formulación farmacéutica de la presente invención es isotónica. Así, en otra modalidad de la misma, se provee una formulación farmacéutica líquida acuosa multidosis de hormona de crecimiento humano que contiene esencialmente hormona de crecimiento humano en una concentración de alrededor de 5 mg/ml hasta aproximadamente 100 mg/ml, fenol, un regulador de pH acuoso, un agente tensioactivo no iónico, en donde dicha formulación farmacéutica tiene una tonicidad de alrededor de 100 mosm/kg hasta alrededor de 500 mosm/kg y presente un pH de alrededor de 6,2 hasta alrededor de 6,3 y está sustancialmente libre de un excipiente aminoácido, en donde dicha formulación farmacéutica contiene adicionalmente un agente regulador de tonicidad, de modo tal que la tonicidad de la composición farmacéutica sea de alrededor 100 mosm/kg hasta alrededor de 500 mosm/kg. El uso de un agente adicional regulador de tonicidad será necesario, si los demás excipientes de la formulación no pueden contribuir a la tonicidad general de las formulaciones de modo tal que se logre la tonicidad deseada. En el contexto de la presente invención, el concepto "contiene esencialmente" significa que la formulación farmacéutica de la presente invención no contiene otros excipientes, además de los aquí mencionados, que sean capaces de aportar una función farmacéutica tecnológica a la formulación farmacéutica, p. ej. en lo que se refiere a la estabilidad, el pH, la tonicidad y similares. Pero esto de todos modos no excluye la posibilidad que tal formulación puede contener uno o más agentes auxiliares adicionales, que no realizan una función farmacéutica tecnológica en la formulación. Tales agentes auxiliares pueden, por ejemplo, ser tinturas de uso farmacéutico, que colorearán la formulación líquida. Esto, p. ej., ayudará a identificar la cantidad de líquido en un dispositivo de inyección multidosis o colaborará a reconocer con mayor facilidad, si se produjo cristalización o no. En el contexto de la presente invención, el concepto "sustancialmente libre de un excipiente aminoácido" significa que la formulación no contiene una cantidad de un excipiente que sea un aminoácido, que sea capaz de ejercer un efecto farmacéutico tecnológico sobre la formulación, p. ej., actuando como un agente de tonicidad, como un estabilizador o como un regulador de pH. De todos modos, se apreciará que la formulación farmacéutica de la presente invención puede presentar trazas de un aminoácido, p, ej. como un residuo de una preparación o paso de purificación anterior, siempre y cuando no afecten el comportamiento farmacéutico tecnológico de la formulación. En una modalidad preferida, las formulaciones farmacéuticas conforme a la presente invención son libres de un excipiente aminoácido.

A partir de la presente invención, ios autores de la invención percibieron una ventaja para pacientes, farmacéuticos y médicos clínicos. Para ello es necesario asegurar un cuidadoso almacenamiento de formulaciones de hormona de crecimiento a temperaturas de refrigeración (p. ej. en un rango de 2o a 8°C) , a fin de minimizar la cristalización. Previo a la administración de la hormona de crecimiento a los pacientes, los fabricantes y los farmacéuticos pueden en general almacenar confiablemente las formulaciones a temperaturas de refrigeración. De todos modos, una vez recibidas y almacenadas por pacientes en refrigeradores domésticos, se reduce notablemente la confiabilidad en términos de temperatura de almacenamiento. Las temperaturas en los refrigeradores domésticos de los pacientes pueden perfectamente ser superior a 2-82C, p. ej. superior a 15° C, debido a que p. ej. se abre con frecuencia. Más aún, los dispositivos que contienen la formulación líquida a administrarse posiblemente se almacenen fuera del refrigerador, p. ej. si son olvidados en un estante de la cocina luego de la administración, estando así expuestos durante algún tiempo a temperatura ambiente (p. ej. alrededor de 20°C hasta alrededor de 27°C, con frecuencia alrededor de 25°C). Existe la tendencia de que se produzca mayor cristalización de la hGH a temperaturas superiores a 8°C, p. ej. superiores a temperaturas de refrigeración, con formulaciones farmacéuticas de hGH conocidas. Las formulaciones de la presente invención ofrecen una mayor resistencia a la cristalización si se almacenan durante un tiempo a temperaturas de refrigeración. Esto asimismo permite suplir a los pacientes con suficiente hormona de crecimiento para proveer dosis diarias durante períodos más prolongados de tiempo que lo recomendable o deseable en el pasado. Mientras que anteriormente los pacientes podían haber almacenado una pequeña cantidad de dosis para su uso durante el lapso de una semana, con las formulaciones de la presente invención, los pacientes pueden estar abastecidos de hormona de crecimiento durante varias semanas o incluso varios meses en el refrigerador doméstico sin que se produzca cristalización o ésta sólo se produzca mínimamente. La frecuencia de la prescripción a pacientes puede por ello reducirse significativamente mediante la presente invención. De modo concordante, las formulaciones farmacéuticas de la presente invención son estables, en particular sustancialmente libres de cristalización al almacenarse en un rango que alcanza desde temperaturas de refrigeración hasta temperaturas ambiente. En particular, tales formulaciones son estables al almacenarse en un rango que alcanza desde temperaturas de refrigeración hasta temperaturas ambiente por al menos 4 semanas o al menos 1 mes, de preferencia por al menos 7 semanas, de mayor preferencia por al menos 13 semanas. En una modalidad preferida de las mismas, tales formulaciones son estables, en particular sustancialmente exentas de cristalización, al almacenarse a temperaturas entre 2°C - 8°C durante varios meses, p. ej. durante 3 meses, de preferencia por al menos 12 meses, de mayor preferencia por al menos 18 meses. En otra modalidad preferida de las mismas, tales formulaciones son estables, en particular sustancialmente exentas de cristalización, a temperaturas entre 15°C y 25°C por al menos 13 semanas. En este contexto debe mencionarse que previo al almacenamiento, las formulaciones de hGH puede comprender alrededor de 4% de "proteínas relacionadas" que son materiales proteicos generados por procesos de degradación como la desamidación y la oxidación. Tales "proteínas relacionadas" son definidas en la Farmacopea Europea y medidas por HPLC de fase reversa. Los autores de la invención proponen un máximo de 20% de "proteínas relacionadas" como objetivo al final de la vida útil de las formulaciones. El índice de degradación de hGH no es exactamente lineal y el índice de degradación aumenta al elevarse la temperatura. A una temperatura de 2° - 8°C, las formulaciones usualmente presentan un incremento de "proteínas relacionadas" de alrededor de 0,8 % por mes. A 25°C ello aumenta a alrededor de 13% por mes y a 40°C hasta alrededor de 70 % por mes. El almacenamiento a 25°C durante 1 mes es aproximadamente equivalente a 17 meses de almacenamiento a 2o - 8°C. El almacenamiento a 15°C durante 1 mes es aproximadamente equivalente a 5 meses de almacenamiento a 2° -8°C. Por ello no puede efectuarse un almacenamiento continuo a una temperatura en el rango de alrededor de 25° a 40°C. Aunque las formulaciones de la presente invención ofrecen buena resistencia a la cristalización, incluso hasta los 40°C, en particular hasta los 25°C, con mayor particularidad hasta los 15°C, la rápida formación de las "proteínas relacionadas" a estas temperaturas determinará usualmente un límite más inmediato a la potencial vida útil de las formulaciones. Los índices de formación de "proteínas relacionadas" a diferentes temperaturas en un cierto período pueden ser perfectamente medidos por una persona con una capacitación normal y con esta información la optimización y el tiempo máximo de almacenamiento/ patrones de temperatura pueden calcularse sin excesiva carga. En la práctica, las formulaciones de la presente invención pueden fácilmente someterse a un aumento diario de temperatura levemente superior a 8°C debido a la apertura y el cerrado de una puerta del refrigerador o el retiro del refrigerador por períodos de una hora o similar todos los días para su administración, sin una significativa reducción de la vida útil. De modo ventajoso, las formulaciones de la presente invención no serán afectadas adversamente en lo que respecta a la degradación o la cristalización, si son dejados fuera del refrigerador a temperatura ambiente por un día o similar. De ese modo, las formulaciones farmacéuticas de la presente invención deben mantenerse todo el tiempo a temperaturas de refrigeración (p. ej. en el rango de 2° a 8°C) en condición estable. Además, las composiciones farmacéuticas muestran suficiente estabilidad, cuando al menos algún tiempo del período promedio de almacenamiento es a una temperatura superior a la temperatura de refrigeración, posiblemente hasta alrededor de una semana fuera del refrigerador, posiblemente hasta alrededor de un mes o inclusive más tiempo fuera del refrigerador. Por lo tanto, al menos una parte del tiempo del almacenamiento de la formulación debe ser a una temperatura de al menos 8°C, opcionalmente una temperatura en el rango seleccionado desde 8°C a 40°C, desde 8°C hasta 25°C ó de 8o a 15°C. En una modalidad preferida de las formulaciones farmacéuticas conforme la presente invención, la concentración de hGH en la formulación es desde alrededor de 6 mg/ml hasta alrededor de 14 mg/ml. En una modalidad particularmente preferida de las mismas, la concentración de hGH en la formulación es de alrededor de 6,67 mg/ml. En el desarrollo de la presente invención se estableció sorprendentemente que el fenol usado como conservante es capaz de proveer suficiente estabilidad a las formulaciones de la presente invención que comprende tal tipo de concentración elevada de hGH.

Preferentemente, las formulaciones farmacéuticas de la presente invención comprenden fenol a una concentración desde alrededor desde 2 mg/ml hasta alrededor de 5 mg/ml, de mayor preferencia desde 2 mg/ml hasta alrededor de 3 mg/ml, de máxima preferencia de alrededor de 2,5 mg/ml, en particular 2,5 mg/ml. El regulador de pH acuoso empleado en la formulación farmacéutica de la presente invención puede ser cualquier regulador de pH de uso farmacéutico. En una modalidad preferida de la misma, el regulador de pH acuoso se selecciona de un grupo que consiste de un regulador de pH de fosfato, de mayor preferencia un regulador de pH de fosfato sódico. Usualmente, el regulador de pH acuoso tiene una concentración desde alrededor de 5 m a alrededor de 100 mM. En una modalidad preferida de la misma, el regulador de pH acuoso tiene una concentración de alrededor de 10 mM. En una modalidad particularmente preferida de la misma, el regulador de pH acuoso es un regulador de pH de fosfato con una concentración de alrededor de 10 mM (la cifra 10 mM se refiere a la concentración de los iones de fosfato). De mayor preferencia el regulador de pH acuoso es un regulador de pH de fosfato sódico con una concentración de alrededor de 10 mM. Del mismo modo se prefiere un regulador de pH de fosfato de 10mM, en particular un regulador de pH de fosfato sódico 10 mM. El agente tensioactivo no iónico usado en la formulación farmacéutica de la presente invención puede ser cualquier agente tensioactivo no iónico de uso farmacéutico. De preferencia, el agente tensioactivo no iónico se selecciona del grupo que comprende poloxámeros, tal como poloxámero 184 ó 188, y polisorbatos, tal como polisorbato 20 ó 80, por ejemplo, y otros polímeros en bloque de etileno/polipropileno. De preferencia, el agente tensioactivo no iónico es un poloxámero, en particular un poloxámero 188. Las cantidades del agente tensioactivo no iónico usadas pueden ubicarse entre alrededor de 0,001 % (v/p) hasta alrededor de 10 % (v/p), de mayor preferencia desde alrededor de 0,005 (v/p) hasta alrededor de 5 % (v/p), y de mayor preferencia aún desde alrededor de 0,01 % (v/p) hasta alrededor del 1 % (v/p). En una modalidad preferida de la misma, el agente tensioactivo no iónico se emplea en una concentración desde alrededor de 0,05 mg/ml hasta alrededor de 4 mg/ml, de preferencia en una concentración de alrededor de 2 mg/ml. Una modalidad preferida de la presente invención se refiere a una formulación farmacéutica, en donde el agente tensioactivo no iónico es poloxámero 188 presente en una concentración desde alrededor de 0,05 mg/ml hasta alrededor de 4 mg/ml, de preferencia alrededor de 2 mg/ml. Si en la formulación farmacéutica conforme la presente invención se emplea un agente adicional regulador de tonicidad de la formulación a un valor deseado desde alrededor de 100 mosm/kg hasta alrededor de 500 mosm/kg, en donde tal agente regulador de tonicidad puede ser cualquier agente regulador de tonicidad de uso farmacéutico, con la excepción de un aminoácido. De preferencia, tal agente regulador de tonicidad se selecciona del grupo compuesto por azúcar, un alcohol de azúcar, un poliol y una sal neutral. Un azúcar puede, por ejemplo, ser un monosacárido o un disacárido, como por ejemplo, lactosa o sacarosa. Un poliol puede por ejemplo ser un diol, como por ejemplo 1 ,2-propilenglicol. Una sal neutral puede por ejemplo ser una sal inorgánica que exhibe un pH aproximadamente neutral al disolverse en agua, como por ejemplo, cloruro de sodio o acetato de amonio. En una modalidad preferida de la misma, el agente regulador de tonicidad es un alcohol de azúcar, de preferencia manitol. El agente regulador de tonicidad se emplea en una concentración de hasta 70 mg/ml, de mayor preferencia de hasta 50 mg/ml, de mayor preferencia aún de hasta 30 mg/ml. En una modalidad particularmente preferida de la misma, el agente adicional regulador de tonicidad es manitol a una concentración de alrededor de 30 mg/ml. Las formulaciones farmacéuticas conforme la presente invención de preferencia pueden presentar una tonicidad desde alrededor de 100 mosnUkg hasta alrededor de 500 mosm/kg, por ejemplo, la tonicidad de tales formulaciones puede ubicarse entre hipotónico hasta hipertónico. En una modalidad preferida de la misma, las formulaciones farmacéuticas de la presente presentan una tonicidad que alcanza desde levemente hipotónico hasta levemente hipertónico. De preferencia y conforme a los conocimientos usuales (véase p. ej., Pharmaceutical Dosage Forms, Parenteral Medícations, Volumen 2; editado por: Kenneth E. Avis; Herbert A. Liebermann; Leoin Lachman; Marcel Dekker Inc., publicado en Nueva York y Basilea, 04/01/1993, págs. 58-60), ello equivale a una tonicidad desde alrededor de 250 mosm/kg hasta alrededor de 350 mosm/kg. En una modalidad particularmente preferida de la misma, las formulaciones farmacéuticas de la presente invención son isotónicas. La isotonicidad de preferencia corresponde a una tonicidad desde alrededor de 270 mosm/kg hasta alrededor de 328 mosm/kg. De mayor preferencia, la isotonicidad corresponde a una tonicidad de alrededor de 286 mosm/kg.

En una modalidad preferida, el valor de pH de la formulación farmacéutica conforme a la presente invención es de alrededor de 6,2. Un experto entenderá que un pH de alrededor de 6,2 debe ubicarse entre un pH de 6,15 hasta un pH de 6,25. De preferencia, el pH es de 6,2. Una formulación farmacéutica particularmente preferida de la invención comprende esencialmente: 6,67 mg/ml de hormona de crecimiento humano, 2,5 mg/ml de fenol, 10 mM de regulador de pH de fosfato sódico, 30 mg/ml de manitol, 2 mg/ml de poloxámero 188, y tiene un valor de pH de 6,2. La cristalización que minimizada o evitada en formulaciones mediante la presente invención aparenta ser aquella de la hormona de crecimiento. De preferencia, cualquier cristalización en la formulación líquida se detecta directamente a simple vista, de mayor preferencia bajo la luz de microscopio con un aumento de 5 veces, de mayor preferencia aún bajo la luz de microscopio con un aumento de 10 veces. Previo a la observación bajo la luz de microscopio, las formulaciones pueden filtrarse y así determinarse la presencia o ausencia de cristales en el filtro. Visto debajo de la luz de microscopio, el filtro puede presentar un tamaño de poros de alrededor de 5 µ?t?. Una prueba de cristalización particularmente preferida es almacenar la formulación en un envase sellado sin espacio de aire por un período de tiempo de 15°C o a 25°C en ausencia de luz y luego observar la presencia o ausencia de cristales a simple vista. Además, las formulaciones acuosas de hormona de crecimiento de la presente invención son de preferencia almacenadas estables, en el sentido que no se produzca agregación alguna o sólo una agregación mínima de la hormona de crecimiento durante el período de almacenamiento. Asimismo, de preferencia no se produce degradación química o sólo en mínima medida, por ejemplo, mediante desamidación o similar, como aquí descrito. Las pruebas adecuadas para medir la estabilidad de la hormona de crecimiento en una solución acuosa son bien conocidas en el arte, como se describe p. ej. en WO 94/03198, incorporada aquí a título de referencia. En formulaciones preferidas de la presente invención, la hormona de crecimiento presenta menos de 10 % de agregación, de preferencia menos de 1%, de mayor preferencia menor a 0,1 %, incluso de mayor preferencia menos de 0,01 % de agregación. En las formulaciones farmacéuticas conforme la presente invención, la hormona de crecimiento humano de preferencia es hGH producida en forma recombinante. De modo concordante, la hormona de crecimiento humano de preferencia particular se produce por medios recombinantes, por ejemplo, como revelado en la EP-A-0 217 822, incorporada aquí a título de referencia. Las variantes de la hormona de crecimiento humano que pueden usarse conforme la invención, solas o en combinación con otra y la hormona nativa, incluyen los 191 tipos de aminoácidos conocidos como somatrofina y los 192 tipos de aminoácido metionina N-terminal (met) conocidos como somatrem. También existe la variante conocida como hGH-V de existencia natural en la placenta durante el embarazo y para la cual se conoce la secuencia génica y se preparó una proteína recombinante. La formulación farmacéutica multidosis de la presente invención de preferencia comprende al menos dos, de mayor preferencia una multiplicidad de dosis de hormona de crecimiento. La cantidad de hGH en la formulación líquida de la invención depende del volumen de la formulación y la cantidad de dosis de hGH que el volumen intenta proveer. Un volumen de dosis preferido es menor a 0,5 mi, como por ejemplo 0,4 mi, pero en principio han de emplearse volúmenes en el rango de 0,01 mi a 1,0 mi por cada administración. Otros volúmenes de dosificación preferida pueden ubicarse en el rango de 0,1 mi a 0,6 mi, de preferencia de 0,1 mi a 0,4 mi. En una unidad de dosificación preferida para la administración diaria, la cantidad de hGH administrada es de 1,3 mg, aunque el monto preciso de la dosis puede variar dependiendo del individuo en particular. Pueden emplearse dosis en el rango de 0,033 mg a 3,33 mg de hGH, de preferencia dosis en el rango de 0,33 mg a 2,0 mg de hGH. Es apropiado aumentar la dosis al reducirse la frecuencia de administración. Las cantidades de volúmenes y/o dosis pueden variar de un individuo a otro de acuerdo a la indicación específica del médico clínico a cargo. El producto farmacéutico de preferencia se presenta en forma de un envase para usarse con un dispositivo de inyección, p. ej. un cartucho para usarse en una lapicera inyectora. El producto farmacéutico puede estar contenido dentro de un dispositivo para inyectar, de preferencia una lapicera inyectora. En forma concordante, la invención también incluye equipos que comprenden un dispositivo para inyectar y un envase separado que contiene una formulación líquida de hormona de crecimiento como antes descrito aquí. Cuando el dispositivo para inyectar simplemente es una jeringa hipodérmica, el equipo puede incluir la jeringa, una aguja y un vial o ampolla que contiene la formulación de hGH para su uso con la jeringa. En modalidades de mayor preferencia el dispositivo para inyectar es diferente a una simple jeringa hipodérmica, y así el envase separado se adapta para encastrar con el dispositivo para inyectar de modo tal, que durante la formulación líquida en el envase se encuentra en conexión líquida con la salida del dispositivo para inyectar. Los ejemplos de dispositivos para inyectar incluyen, pero sin limitarse ello, jeringas hipodérmicas y dispositivos de lapiceras inyectoras. Los dispositivos para inyectar de particular preferencia son las lapiceras inyectoras, en cuyo caso el envase es un cartucho, de preferencia un cartucho desechable. Así, la invención también provee un cartucho que contiene cualquiera de las formulaciones líquidas antes descriptas para usar con una lapicera inyectora, en donde el cartucho contiene una multiplicidad de dosis de a hormona de crecimiento. El contenido completo de los textos aquí mencionados se incorporan aquí a título de referencia. La presente invención es ilustrada en detalle por los siguientes ejemplos, pero sin restringirse a ellos. En particular, los ejemplos se refieren a modalidades preferidas de la presente invención.

EJEMPLOS Los materiales aquí mencionados, tales como reactivos, son familiares a la persona especializada, pueden adquirirse comercialmente y pueden usarse según las instrucciones del fabricante.

Ejemplo 1 - Preparación y purificación de hGH recombinante a granel La hGH recombinante es producida en cultivos de células CHO transformadas con el gen de hGH para expresar la proteína de hGH en condiciones de cultivo. Los detalles de la obtención y el crecimiento de las células se describen en EP-A-0 217 822 (Scios Nova), incorporada aquí a título de referencia. La modificación de las condiciones de cultivo para el crecimiento de cultivos a escala industrial o comercial puede perfectamente llevarse a cabo por un experto en el arte. Una vez producida la hGH por las células en cultivo, la hormona de crecimiento humano necesita ser extraída y purificada en una forma adecuada para uso farmacéutico. Esto se lleva a cabo conforme los procedimientos descritos en AU 629177 (University of New South Wales & Garvan Institute of Medical Research), incorporada aquí a título de referencia. La preparación de hGH resultante se presenta en forma de una solución a granel y se emplea para preparar las formulaciones descritas a continuación. La concentración de hGH en una solución a granel (sustancia del fármaco) usualmente es de aproximadamente 8 mg/mi hasta alrededor de 15 mg/ml, por ejemplo aproximadamente 10 mg/ml. De modo conveniente, la sustancia de el fármaco está presente en un regulador de pH de fosfato sódico de 10 mM.

Ejemplo 2 - Preparación de formulaciones de hormona de crecimiento humano Las formulaciones farmacéuticas se preparan por dilución de una solución excipiente de triple concentración para obtener una solución de hGH a granel, en donde necesariamente se ajusta el pH (p. ej. con HCI ó NaOH), seguido por el ajuste del peso final con agua, como se indica a continuación. La solución de hGH a granel en 10 mM fosfato puede usarse luego de su concentración a valores de hasta aproximadamente 150 mg de hGH/ml o directamente en una concentración de, por ejemplo, 10 mg de hGH/ml. Debido a la conveniencia, las siguientes preparaciones se realizan comenzando con una solución de hGH a granel que comprende 10 mg/ml de hGH en un regulador de pH de fosfato sódico 10mM. Si luego de diferentes pasos de purificación resulta una solución de hGH a granel con un diferente contenido de hGH y/o con un regulador de pH diferente, deberán ajustarse de modo acorde los protocolos enunciados a continuación. Se apreciará que tal adaptación se incluye perfectamente en las tareas de rutina de un experto en el arte. Por separado se preparan soluciones de 100 mM de Na2HP0 x 7 H20 y NaH2P04 x 2 H20 y se mezclan entre sí para obtener un pH final de 6,2. Se coloca 6,67 mi de esta solución de fosfato de 100 mM en una probeta para la preparación de 66,67 g de solución excipiente de triple concentración. Se agregan las siguientes cantidades de excipientes: Tabla 1: composición de la solución excipiente de triple concentración Composición Fenol 0,49 g Poloxámero 188 0,39 g Manitol 5,91 g Agua para inyectables hasta 66,67 g PH 6,2 Se prepara la formulación farmacéutica final 1 tomando suficiente hGH a granel para obtener una concentración final de hGH de 6,67 mg/ml. En particular, la preparación comprende la colocación de 32,66 g de sustancia de fármaco (concentración de hGH = 10 mg de hGH/ml) en una probeta. Se agrega 16,67 g de la solución excipiente de triple concentración mientras se agita, en caso necesario se ajusta el pH a un valor de 6,2 con HCI o NaOH y se completa la solución a 50 g con agua. La solución se filtra a través de un filtro de 0,22 micrones y se envasa en cartuchos con el tope del émbolo en su sitio. En el lugar se coloca el sello. La siguiente tabla muestra la formulación farmacéutica final que comprende fenol para prevenir la cristalización: Tabla 2: Composición de la formulación farmacéutica: } incluyendo el fosfato de la solución de hGH de la cristalización 3. Almacenamiento de formulaciones y determinación de la cristalización Los cartuchos que contienen la formulación farmacéutica 1 son almacenados a 2 - 8°C, a 15° C y a 25°C respectivamente. Los cartuchos son examinados a simple vista respecto de la presencia o ausencia de cristales en intervalos frecuentes. Las formulaciones almacenadas a 2o - 8°C no muestran cristalización durante el período de prueba de 18 meses. Las formulaciones almacenadas a 15°C y a 25°C no evidenciaron cristalización por al menos 13 semanas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una formulación farmacéutica líquida multidosis que contiene esencialmente hormona de crecimiento humano en una concentración de alrededor de 5 mg/ml hasta alrededor de 100 mg/ml, fenol, un regulador de pH acuoso, un agente tensioactivo no iónico, en donde dicha formulación farmacéutica presenta una tonicidad de alrededor de 100 mosm/kg a alrededor de 500 mosm/kg, tiene un pH de alrededor de 6,1 hasta alrededor de 6,3 y está esencialmente libre de un excipiente aminoácido.

2. La composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1, que comprende adicionalmente un agente para ajusfar tonicidad en esa formulación farmacéutica, de modo tal que la tonicidad sea de alrededor de 100 mosm/kg hasta alrededor de 500 mosm/kg.

3. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde la concentración de la hormona de crecimiento humano es desde aproximadamente 6 mg/ml hasta alrededor de 14 mg/ml.

4. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde la concentración de la hormona de crecimiento humano es de aproximadamente 6,67 mg/ml.

5. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde la concentración de fenol es desde aproximadamente 2 mg/ml hasta alrededor de 5 mg/ml.

6. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde la concentración de fenol es alrededor de 2,5 mg/ml.

7. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el regulador de pH se selecciona del grupo que comprende un regulador de pH de fosfato, un regulador de pH de citrato, un regulador de pH de acetato y un regulador de pH de formiato.

8. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el regulador de pH acuoso es un regulador de pH de fosfato.

9. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el regulador de pH tiene una concentración desde aproximadamente 5 mM hasta aproximadamente 100 mM.

10. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el regulador de pH tiene una concentración de aproximadamente 100 mM.

11. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el regulador de pH es un regulador de pH de fosfato con una concentración de alrededor de 10 mM.

12. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el agente tensioactivo no iónico se selecciona del grupo que comprende un poloxamero y un polisorbato.

13. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el agente tensioactivo no iónico es un poloxamero.

14. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el agente tensioactivo no iónico es el poloxámero 188.

15. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el agente tensioactivo no iónico empleado tiene una concentración de alrededor de 0,05 hasta alrededor de 4 mg/ml.

16. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el agente tensioactivo no iónico empleado tiene una concentración de alrededor de 2 mg/ml.

17. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde el agente tensioactivo no iónico es poloxámero 188 y tiene una concentración de alrededor de 2 mg/ml.

18. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 2, en donde el agente regulador de la tonicidad se selecciona de un grupo que comprende azúcar, alcohol de azúcar, un poliol y una sal neutral.

19. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 17, en donde el agente regulador de tonicidad es manitol.

20. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 17, en donde el agente regulador de tonicidad empleado tiene una concentración de hasta 70 mg/ml.

21. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 17, en donde el agente regulador de tonicidad empleado es manitol y tiene una concentración de alrededor de 30 mg/ml.

22. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde dicha composición farmacéutica es sustancialmente isotónica.

23. La formulación farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2, en donde dicha composición farmacéutica presenta un pH de alrededor de 6,2.

24. La composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación 2, que esencialmente comprende: 6,67 mg/ml de hormona de crecimiento humano, 2,5 mg/ml de fenol, 10 m de regulador de pH de fosfato sódico, 30 mg/ml de manitol, 2 mg/ml de poloxámero 188, y tiene un valor de pH de 6,2.

25. Un equipo que comprende un dispositivo para inyectar y un envase separado que contiene una formulación líquida multidosis de hormona de crecimiento humano conforme a la reivindicación 1 o a la reivindicación 2.