JP2005515777A - 軟骨細胞のための無血清培地およびその使用法 - Google Patents
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Abstract
Description
[001] 本発明は細胞および組織培養の分野に関する。より具体的には、本発明は軟骨欠損の治療または修復を意図した、軟骨組織を形成することができる細胞のex vivo増殖のための方法および組成物に関する。
[002] 関節軟骨は,軟骨細胞によって産生された複合細胞外マトリクス内に包まれた軟骨細胞からなる。このマトリクス特有の生化学的組成は、膝関節の関節表面の滑らかで、ほとんど摩擦のない動きを提供する。加齢にしたがって、ヒト関節軟骨の引っ張り特性は生化学的変化の結果として変化する。30歳以降、関節軟骨の引っ張り強度は著しく低下する。外傷または疾患、たとえばリウマチ性および変形性関節炎により生じた軟骨の損傷は、重大な身体的衰弱を引き起こす可能性がある。
[010] 関節軟骨細胞を培養するための安全で、効果的で、安価な培地組成物および方法を提供することが本発明の目的である。
[012] 単一の定義された細胞培養培地において関節軟骨細胞を培養するための簡単な方法を提供することが本発明のさらに別の目的である。
[015] 本発明はヒト関節軟骨細胞を培養するための方法および化学的に定義された培地の組成物を提供する。本発明のDMは、軟骨細胞培養のどのような段階においても血清の使用を避け、軟骨‐特異的表現型を再発現するための軟骨細胞の能力を維持しながら、無血清条件下で細胞接着および増殖を促進する。
[020] 本明細書に包含され、その一部を構成する添付の図面は、本発明のいくつかの態様を例証し、上記の説明と共に本発明の原理の説明に役立つ。
[024] 本発明は、定義された無血清培地中で軟骨細胞を培養するための方法を提供し、以下に記載のcDRFと表される基礎培地が、PDGFおよび表4に示す脂質の少なくとも1つを補足した場合、培養物中の再分化可能な軟骨細胞の接着、増殖および維持に十分であるという発見に少なくとも部分的に基づく。
[025] 本発明の定義された血清培地(DM)の作製の第一段階は基礎培地を作製することである。具体的な態様において、表3に記載の基礎培地(cDRF)は以下に記載の市販の出発成分から作製する。cDRFはAdolphe et al.(1994)およびMcPherson et al.(米国特許第6,150,163号)によって開発されたDMの改変である。
血小板‐由来成長因子(PDGF)
[030] PDGFは血清には存在するが、血漿には存在しない主要な分裂促進因子である。PDGFはAおよびBと表される2種の構造の関連した鎖からなる二量体分子である。二量体イソ型のPDGF‐AA、ABおよびBBは各種細胞型において異なって発現される。一般に、すべてのPDGFイソ型は、皮膚線維芽細胞、グリア細胞、動脈平滑筋細胞、ならびにいくつかの上皮および内皮細胞を含む、結合組織細胞に対する強力な分裂促進因子である。
[033] 脂質は生細胞において潜在的なエネルギー源であるだけでなく、構造成分としても重要である。in vitroでは、多くの細胞は培地に存在するグルコースおよびアミノ酸から脂質を合成することができる。しかし、細胞外脂質が利用可能な場合,脂質生合成は阻害され、細胞は培地中の遊離脂肪酸、脂質エステル、およびコレステロールを利用する。血清は脂質に富み、培養細胞にとっての細胞外脂質の主要な供与源となってきた。いくつかの系では、無血清培地における細胞の増殖の促進に、魚油に基づいた化学的に不明確な脂質調製物が有効であることが見出されている(Weiss et al.(1990)In Vitro 26:30A;Gorfien et al.(1990)In Vitro 26:37A;Fike et al.(1990)In Vitro 26:54A)。したがって、通常は血清により供給される各種脂質の代わりに、そのような脂質を無血清培地に補足することが好ましくてもよい。
[039] 本発明は通例軟骨性組織を産生することができる細胞のex vivoでの増殖に適している。軟骨細胞は種々の軟骨型、たとえばヒアリン軟骨、弾性軟骨、および線維軟骨に見出される細胞である。軟骨細胞は、それらが産生する細胞外マトリクスに主に基づいた特徴的な表現型を有する間葉系細胞である。前駆体細胞はI型コラーゲンを産生するが、軟骨細胞系譜にコミットされる場合、それらはI型コラーゲン産生を停止し、細胞外マトリクスの実質的な部分を構成するII型コラーゲン産生を始める。さらにコミット軟骨細胞は、高度に硫酸化されたグリコサミノグリカンを有する、アグレカンと呼ばれるプロテオグリカン凝集体を産生する。
[045] 本発明の方法は、単層、多層、固体支持体上、懸濁液中、および3D培養物中を含むがそれらに限定されない、各種条件下の培養物中で増殖する細胞に適切である。
[047] 本発明の各種側面は以下に提示された実施例においてさらに詳しく表現され、説明される。
[048] 年齢16〜51歳のドナー由来のヒト関節軟骨生検試料は、異物を取り除き、細分し、バシラス サーモプロポリピクス(Bascilus Thermopropolipycus)由来のプロテアーゼ0.25%を使用して酵素消化し、その後0.1% コラゲナーゼ/DMEM中、37℃で一晩消化した。単離した関節軟骨細胞は10% ヒト血清アルブミンを含むDMEM(DMEM/10% HSA)中で2回洗浄した。単離した初代ヒト関節軟骨細胞(HAC)は、以下の異なる培地条件を使用して、T75フラスコ中に5,000〜6,000細胞/cm2で播種した:
1)DMEM/10% FBS(10% ウシ胎仔血清および100μg/ml ゲンタマイシンを補足したDMEM);
2)cDRF(表3に記載);
3)cDRF/P(10ng/ml PDGFを補足したcDRF);
4)cDRF/L(5μl/ml CDLM(表4に記載)を補足したcDRF);および
5)cDRF/P/L(10ng/ml PDGFおよび5μl/ml CDLMを補足したcDRF)
[049] それぞれの条件毎に2つのフラスコを使用した。それぞれの継代の最後に、コンフルエントに近い細胞をトリプシン処理により採取し、計数し、DMEM/10%HSAで洗浄し、対応する培地に5,000〜6,000細胞/cm2で再播種した。細胞収率はそれぞれの条件に対して重複した試料の平均値として計算した。先に定義した培地条件下で増殖させた軟骨細胞のそれぞれの継代の最後における細胞収率の比較を表6に示す。この実験結果により、継代の回数に関わらず、cDRF/P/Lで継代した軟骨細胞の細胞収率はDMEM/10% FBSあるいはcDRFよりも高いことが示された。この効果は継代回数が多くなるほど顕著であった。
[050] 複数のドナーから集めたヒアリン軟骨生検試料を使用して、DMEM/10% FBS中または本発明に従って完全に限定された無血清培地中で培養した軟骨細胞の継代番号の関数として細胞収率を比較した。試料は実施例1に記載のように集め、処理した。単離した軟骨細胞は10% ヒト血清アルブミンを含むDMEM(DMEM/10% HSA)中で2回洗浄した。単離した初代ヒト関節軟骨細胞(HAC)は、以下の培地条件を使用して、T75フラスコ中に6,000細胞/cm2で播種した:
1)DMEM/10% FBS(10% ウシ胎仔血清および100μg/ml ゲンタマイシンを補足したDMEM);および
2)cDRF/P/L(10ng/ml PDGFおよび5μl/ml CDLMを補足したcDRF)
[051] それぞれの継代の最後に、コンフルエントに近い細胞をトリプシン処理により採取し、計数し、DMEM/10%HSAで洗浄し、それぞれの培地に6,000細胞/cm2で再播種した。DMEM/10% FBSまたはcDRF/P/Lで増殖させた軟骨細胞のそれぞれの継代の最後における細胞収率の比較を表7に示す。cDRF/P/Lにおける細胞収率は、1〜3回目の継代細胞ではDMEM/10% FBSでの収率てより高く、4回目の継代細胞では著しく(p=0.05)高かった。
[052] この実験では、年齢が16歳、22歳および55歳の3人のドナー由来のヒト関節軟骨細胞を単離し、実施例1に記載のように処理した。軟骨細胞はT75フラスコ中に6,000細胞/cm2で播種し、コンフルエント近くまでDMEM/10% FBS中で増殖させた。その後細胞をトリプシン処理により採取し、播種培地で洗浄し、10% DMSO/40% HSA/50% DMEM中で速やかに凍結した。2回目の継代のために、凍結細胞のアンプルを解凍し、DMEM/10% HSAですすぎ、以下の培地中に3,000〜4,000細胞/cm2で再播種した:1)DMEM/10% FBS;2)cDRF;3)cDRF/P;および4)cDRF/P/L(培地の説明は実施例1を参照されたい)。それぞれの培地条件のセット毎に2つのフラスコを使用した。それぞれの継代の最後に、コンフルエントに近い細胞をトリプシン処理により採取し、DMEM/10% HSAで洗浄し、対応する培地に再播種した。3回目の継代時に、細胞を採取し、計数した。7日間の最後に1日ごとの倍加数として表された増殖指数は、3人のドナー試料に対する平均値として計算し、それぞれの試料は各ドナー由来の重複物の平均として表した。DMEM/10% FBS中および完全に定義された無血清培地中で増殖させた軟骨細胞の増殖指数の比較を図1に示す。DMEM/10% FBS中で増殖させた軟骨細胞とcDRF/P/L中で増殖させた軟骨細胞の増殖指数は類似するが、cDRF/PまたはcDRF中で増殖させた細胞はわずかに低い増殖指数を示した。DMEM/10% FBSで増殖した軟骨細胞と比較した場合、本発明のDM中で単層として増殖した軟骨細胞は典型的な線維芽細胞の形態ではないが、明瞭な境界を有する非常にはっきりした細胞の形態であった。
[053] この実験では、播種密度に関する依存性を調査した。ヒトヒアリン関節軟骨細胞は同じドナーから得て、それぞれの試料を3つに分割して6,000;4,000および2,000細胞/cm2で播種すること以外は、実施例3に記載のように処理した。それぞれの継代の最後に、そのセットの初めの播種密度で細胞を再播種した。3回目の継代の終わりに細胞を採取し、計数し、DMEM/10% FBS中または本発明のDM中で増殖させた軟骨細胞の細胞収率を計算した。実験の結果は図2に示す。cDRF/P/Lで培養した軟骨細胞は、DMEM/10% FBSまたはcDRF/P中で増殖させた細胞に少なくとも匹敵するか、またはより高い収率を示すが、cDRF中で増殖させた細胞は、DMEM/10% FBSに比較してわずかに低い収率を示した。差は、播種密度6,000細胞/cm2で継代した細胞で、より顕著であった。さらに、cDRFまたはcDRF/P中で増殖させた細胞はさらに高い播種密度において、より高い収率を示した。
[054] 本発明のDMでの単層培養で増幅した後の軟骨細胞の再分化能を評価するために、軟骨組織を形成する軟骨細胞の能力を調べた。軟骨細胞は実施例2に記載のように単離し、処理した。2回目の継代の最後に、軟骨細胞はトリプシン処理し、DMEM/10% FBSですすぎ、Millicell−CM(登録商標)フィルター挿入物(直径12mm、ポアサイズ0.4μm、Millipore Corp.,Bedford,MA)上に以下に記載のように播種した。フィルターはII型コラーゲン(0.5mg/ml 0.012N HCl)[Sigma St.Louis,MO]でプレコートした。軟骨細胞はDMEM/20% FBS中、またはDMEMを基礎にした分化培地(2mg/ml HSA、5μg/ml リノール酸、2% ITSを補足したDMEM)中で、フィルター上に2x106細胞/cm2で播種した。培養物は5% CO2を補足した加湿空気中、37℃で維持した。培養3日目に、100μg/ml アスコルビン酸、5ng/ml TGF‐β2および10ng/ml PDGF‐BBを培地に添加した。培地は、2日ごとに交換した。1週間後、フィルター挿入物上の軟骨細胞培養物を選択した間隔で採取し、10% ホルマリンで固定し、パラフィンに包埋し、5μmの切片に切断し、その後トルイジンブルーまたはサフラニン‐Oで染色した。これらの試薬はプロテオグリカンを染色する。硫酸化グリコサミノグリカンは、Farndale et al.により記載された手順に従って改変したジメチルメチレンブルーアッセイを使用して定量した(Biochimica et Biophyca Acta 883:173−177,1986)。
[057] 正常な成人関節軟骨細胞はin vitroにおいて単層における増幅の結果として脱分化する。本発明のDM中で培養された軟骨細胞が再分化する能力を保持していることを確かめるために、軟骨‐特異的マーカーの遺伝子発現のTaqMan分析を行った。遺伝子発現の解析は、ex vivoで形成された軟骨様組織および正常関節軟骨由来の充実した全RNAの単離から始める。
Claims (50)
- 基礎培地、PDGF、ならびにステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ‐トコフェロール酢酸からなる群から選択される1以上の脂質を含む培地により軟骨細胞をインキュベートする工程を含む、軟骨細胞のex vivo増殖の方法。
- 軟骨細胞が20,000細胞/cm2未満で播かれる、請求項1に記載の方法。
- 培地がステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ‐トコフェロール酢酸からなる群から選択される、いずれか2種の脂質を含む請求項1に記載の方法。
- 培地が表4に記載された化学的に定義された脂質混合物(CDLM)を含む、請求項1に記載の方法。
- 培地が表2に記載されたDRFを含む、請求項1に記載の方法。
- 基礎培地が表3に記載されたcDRFを含む、請求項1に記載の方法。
- PDGFの濃度が0.1〜1ng/ml、1〜5ng/ml、5〜10ng/ml、10ng/ml、10〜15ng/ml、15〜50ng/ml、および50〜100ng/mlから選択される、請求項1に記載の方法。
- PDGFがPDGF‐BB、PDGF‐AB、およびPDGF‐AAから選択される、請求項4に記載の方法。
- 培地中の脂質濃度が0.05〜0.1%、0.1〜0.5%、0.5%、0.5〜1%、1〜2%、および2〜5%から選択される、請求項1に記載の方法。
- 培地がさらにBMP、TGF‐β、IGF、およびインスリンからなる群から選択される1以上の補足物を含む、請求項1に記載の方法。
- BMPがBMP‐4またはBMP‐6である、請求項10に記載の方法。
- 培地がステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ‐トコフェロール酢酸からなる群から選択される少なくとも4種の脂質を含む、請求項1に記載の方法。
- PDGFの濃度が10ng/mlである、請求項1に記載の方法。
- 培地がITS、ハイドロコーチゾン、フィブロネクチン、bFGF、およびアルブミンをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 培地が表3に記載されたcDRFを含む、請求項1に記載の方法。
- 培地がステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ‐トコフェロール酢酸からなる群から選択される少なくとも6種の脂質を含む、請求項1に記載の方法。
- cDRF、PDGF、ステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ‐トコフェロール酢酸を含む培地により軟骨細胞をインキュベートする工程を含む、かかる軟骨細胞をex vivoで増殖させる方法。
- 基礎培地、PDGF、ステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ‐トコフェロール酢酸を含む、無血清培地。
- PDGFの濃度が0.1〜1ng/ml、1〜5ng/ml、5〜10ng/ml、10ng/ml、10〜15ng/ml、15〜50ng/ml、および50〜100ng/mlから選択される、請求項18に記載の方法。
- PDGFがPDGF‐BB、PDGF‐AB、およびPDGF‐AAから選択される、請求項19に記載の方法。
- 表4に記載の化学的に定義された脂質混合物(CDLM)をさらに含む、請求項18に記載の培地。
- 培地中のCDLM濃度が0.05〜0.1%、0.1〜0.5%、0.5%、0.5〜1%、1〜2%、および2〜5%から選択される、請求項18に記載の培地。
- ITS、ハイドロコーチゾン、フィブロネクチン、bFGF、およびアルブミンをさらに含む、請求項18に記載の培地。
- 基礎培地が表2に記載のDRFを含む、請求項18に記載の培地。
- 基礎培地が表3に記載のcDRFを含む、請求項18に記載の培地。
- BMP、TGF‐β、IGF、およびインスリンからなる群から選択される1以上の補足物をさらに含む、請求項18に記載の培地。
- BMPがBMP‐4またはBMP‐6である、請求項18に記載の培地。
- 表3に記載のcDRF、表4に記載の0.5% CDLM、および10ng/ml PDGFを含む、請求項18に記載の培地。
- PDGFがPDGF‐BBである、請求項28に記載の培地。
- 軟骨細胞および培地を含む組成物であって,かかる培地が基礎培地、PDGF、ならびにステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ‐トコフェロール酢酸からなる群から選択される1以上の脂質を含む,前記組成物。
- 基礎培地がDRFを含む、請求項30に記載の組成物。
- 基礎培地がcDRFを含む、請求項30に記載の組成物。
- ステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ‐トコフェロール酢酸からなる群から選択されるいずれか2種の脂質を含む、請求項30に記載の組成物。
- 表4に記載のCDLMのいずれか4種の脂質を含む、請求項30に記載の組成物。
- 表4に記載の化学的に定義された脂質混合物(CDLM)を含む、請求項30に記載の組成物。
- PDGFの濃度が0.1〜1ng/ml、1〜5ng/ml、5〜10ng/ml、10ng/ml、10〜15ng/ml、15〜50ng/ml、および50〜100ng/mlから選択される、請求項30に記載の組成物。
- PDGFの濃度が10ng/mlである、請求項30に記載の組成物。
- PDGFがPDGF‐BB、PDGF‐AB、およびPDGF‐AAから選択される、請求項30に記載の組成物。
- PDGFがPDGF‐BBである、請求項30に記載の組成物。
- 培地中の脂質の濃度が0.05〜0.1%、0.1〜0.5%、0.5%、0.5〜1%、1〜2%、および2〜5%から選択される、請求項30に記載の組成物。
- CDLMの濃度が0.5%である、請求項30に記載の組成物。
- ITS、ハイドロコーチゾン、フィブロネクチン、bFGF、およびアルブミンをさらに含む、請求項30に記載の組成物。
- BMP、TGF‐β、IGF、およびインスリンからなる群から選択される1以上の補足物をさらに含む、請求項30に記載の組成物。
- 軟骨細胞がヒトに由来する、請求項30に記載の組成物。
- 軟骨細胞がヒト関節軟骨細胞である、請求項30に記載の組成物。
- 軟骨細胞が初代である、請求項30に記載の組成物。
- 軟骨細胞が継代される、請求項30に記載の組成物。
- 軟骨細胞が間葉系幹細胞である、請求項30に記載の組成物。
- ヒト軟骨細胞、表3に記載のcDRF、表4に記載の0.5% CDLM、および10ng/ml PDGFを含む、請求項30に記載の組成物。
- 培地が基礎培地、PDGF、ならびにステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ‐トコフェロール酢酸からなる群から選択される1以上の脂質を含む、軟骨細胞のex vivo増殖のための培地の使用。
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Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007023875A1 (ja) * | 2005-08-23 | 2007-03-01 | Oriental Yeast Co., Ltd. | ラミニン5を利用した間葉系幹細胞の培養技術 |
WO2007080919A1 (ja) | 2006-01-13 | 2007-07-19 | Japan Science And Technology Agency | 動物細胞を無血清培養するための培地用添加剤、キット及びこれらの利用 |
JP2009540826A (ja) * | 2006-06-20 | 2009-11-26 | ジェンザイム・コーポレーション | 軟骨細胞増幅のための無血清培地およびその使用 |
US9394521B2 (en) | 2010-03-10 | 2016-07-19 | Two Cells Co., Ltd. | Cell preparation containing mesenchymal stem cells, and method for producing same |
US10131877B2 (en) | 2008-11-11 | 2018-11-20 | Two Cells Co., Ltd. | Differentiation-inducing culture medium additive and use thereof |
JP2022031684A (ja) * | 2013-06-11 | 2022-02-22 | エンカルディア・ベー・フェー | 多能性哺乳動物幹細胞に由来する心筋細胞を成熟させるための培地組成物 |
Families Citing this family (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005063968A1 (ja) * | 2003-12-26 | 2005-07-14 | Gs Platz Co Ltd | Es細胞培養用基礎培地 |
WO2006007560A2 (en) | 2004-07-01 | 2006-01-19 | University Of Pennsylvania | Targeted protein replacement for the treatment of lysosomal storage disorders |
WO2006022263A1 (ja) * | 2004-08-24 | 2006-03-02 | Fujisoft Incorporated | 脱分化型軟骨細胞の軟骨細胞への再分化用培地 |
US8697139B2 (en) | 2004-09-21 | 2014-04-15 | Frank M. Phillips | Method of intervertebral disc treatment using articular chondrocyte cells |
US20090169523A1 (en) | 2005-06-13 | 2009-07-02 | Catherine Verfaillie | Hsc self-renewal |
US20090136918A1 (en) * | 2005-08-16 | 2009-05-28 | Heather Newkirk | Quantification of microsphere suspension hybridization and uses thereof |
AU2006292224B2 (en) | 2005-09-19 | 2013-08-01 | Histogenics Corporation | Cell-support matrix and a method for preparation thereof |
EP1764117A1 (en) | 2005-09-20 | 2007-03-21 | Zimmer GmbH | Implant for the repair of a cartilage defect and method for manufacturing the implant |
CA2682948C (en) | 2007-04-06 | 2016-05-31 | Genzyme Corporation | Methods of evaluating cells and cell cultures |
EP2233565B1 (en) * | 2007-12-28 | 2015-05-13 | Fujirebio Inc. | Medium for mammalian somatic cells and additive therefor |
AU2009205886B2 (en) | 2008-01-18 | 2015-08-27 | Katholieke Universiteit Leuven | Stem cell aggregates and methods for making and using |
CN102292092B (zh) * | 2008-11-25 | 2014-05-07 | 组织基因公司 | 致敏细胞疗法 |
AU2010276201B2 (en) | 2009-07-21 | 2013-10-17 | Abt Holding Company | Use of stem cells to reduce leukocyte extravasation |
DK2456860T3 (en) | 2009-07-21 | 2019-01-07 | Abt Holding Co | USE OF STEM CELLS FOR REDUCING LEUKOCYTE EXTRAVASATION |
SG10201501353YA (en) | 2010-02-25 | 2015-04-29 | Abt Holding Co | Modulation of angiogenesis |
AU2011220721B2 (en) | 2010-02-25 | 2015-02-05 | Abt Holding Company | Modulation of macrophage activation |
EP2568991B3 (en) | 2010-05-12 | 2018-11-28 | ABT Holding Company | Modulation of splenocytes in cell therapy |
WO2011158125A2 (en) | 2010-06-17 | 2011-12-22 | Katholieke Universiteit Leuven | Methods for differentiating cells into hepatic stellate cells and hepatic sinusoidal endothelial cells, cells produced by the methods, and methods for using the cells |
EP2609191B1 (en) | 2010-08-24 | 2017-11-22 | Regents Of The University Of Minnesota | Non-static suspension culture of cell aggregates |
US9677042B2 (en) | 2010-10-08 | 2017-06-13 | Terumo Bct, Inc. | Customizable methods and systems of growing and harvesting cells in a hollow fiber bioreactor system |
EP2670842A2 (en) | 2011-01-31 | 2013-12-11 | Katholieke Universiteit Leuven KU Leuven Research & Development | Methods for making cells with an extra-embryonic endodermal precursor phenotype |
US20120308531A1 (en) | 2011-06-06 | 2012-12-06 | ReGenesys BVBA | Expansion of Stem Cells in Hollow Fiber Bioreactors |
EP2739735A2 (en) | 2011-08-01 | 2014-06-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Method for improving the success rate of hematopoietic stem cell transplants |
WO2013036875A1 (en) | 2011-09-07 | 2013-03-14 | Mount Sinai School Of Medicine | Ceramidase and cell differentiation |
GB201119335D0 (en) | 2011-11-09 | 2011-12-21 | Univ Leuven Kath | Hepatitis virus infectable stem cells |
CA2854780A1 (en) | 2011-11-11 | 2013-05-16 | Essential Pharmaceuticals, Llc | Kit comprising serum replacement and labile factors |
PT2854910T (pt) | 2012-06-01 | 2020-05-06 | Yeda Res & Dev | Níveis de ceramida no tratamento e prevenção de infeções |
WO2014015109A1 (en) | 2012-07-20 | 2014-01-23 | The Regents Of The University Of California | Methods for producing cartilage and bone |
HUE046113T2 (hu) | 2013-03-14 | 2020-02-28 | Icahn School Med Mount Sinai | Terápiás sav ceramidáz készítmények és azok elõállítási és felhasználási eljárásai |
CN105338989B (zh) | 2013-04-12 | 2022-04-08 | 赛维里奥·拉弗朗切西卡 | 改进用于移植的器官 |
DK2992088T3 (da) | 2013-04-30 | 2019-11-11 | Univ Leuven Kath | Celleterapi for myelodysplastiske syndromer |
US20160122714A1 (en) * | 2013-06-12 | 2016-05-05 | Shiseido Company, Ltd. | Serum-free medium containing pdgf for ds cells |
US9617506B2 (en) | 2013-11-16 | 2017-04-11 | Terumo Bct, Inc. | Expanding cells in a bioreactor |
TW201527534A (zh) | 2013-12-20 | 2015-07-16 | Essential Pharmaceticals Llc | 細胞培養基 |
US10077420B2 (en) | 2014-12-02 | 2018-09-18 | Histogenics Corporation | Cell and tissue culture container |
CA2981277A1 (en) * | 2015-03-30 | 2016-10-06 | Ajinomoto Co., Inc. | Human serum albumin-containing culture medium for growth of neural stem cells |
NZ745530A (en) | 2016-01-21 | 2023-03-31 | Abt Holding Co | Stem cells for wound healing |
WO2019040790A1 (en) * | 2017-08-23 | 2019-02-28 | Merakris Therapeutics, Llc | COMPOSITIONS CONTAINING AMNIOTIC COMPONENTS AND METHODS FOR THEIR PREPARATION AND USE |
KR20200064131A (ko) | 2017-10-13 | 2020-06-05 | 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 | 관류 배지 |
WO2019113558A1 (en) * | 2017-12-07 | 2019-06-13 | Vericel Corporation | Compositions and methods for repairing cartilage defects |
CN109136170B (zh) * | 2018-08-20 | 2022-02-18 | 东北农业大学 | 一种适用于鲤鱼三倍体细胞生长的无血清培养基及其应用 |
CN113061578B (zh) * | 2021-04-23 | 2023-04-21 | 苏州依科赛生物科技股份有限公司 | 一种用于细胞培养基的脂质混合物及其配制方法与应用 |
US20220401496A1 (en) * | 2021-06-18 | 2022-12-22 | Hilltop BioSciences, Inc. | System and method for therapeutic compositions from a plurality of different birth tissues and exosomes |
WO2023168080A1 (en) | 2022-03-04 | 2023-09-07 | Vericel Corporation | Methods and devices for repairing cartilage defects |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11506610A (ja) * | 1995-06-05 | 1999-06-15 | オシリス セラピューティクス,インコーポレイテッド | ヒト間葉幹細胞用合成培地 |
JP2000515023A (ja) * | 1996-07-25 | 2000-11-14 | ジェンザイム・コーポレーション | 軟骨細胞培地組成および培養方法 |
JP2001103965A (ja) * | 1999-08-19 | 2001-04-17 | Zen Bio Inc | 軟骨細胞分化と軟骨修復のための脂肪組織由来の間質細胞の使用 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5904717A (en) * | 1986-01-28 | 1999-05-18 | Thm Biomedical, Inc. | Method and device for reconstruction of articular cartilage |
US5405772A (en) * | 1993-06-18 | 1995-04-11 | Amgen Inc. | Medium for long-term proliferation and development of cells |
US5871779A (en) * | 1994-01-18 | 1999-02-16 | Mount Sinai Hospital Corporation | Treatment of arthropathies with vanadate compounds or analogues thereof |
US5723331A (en) * | 1994-05-05 | 1998-03-03 | Genzyme Corporation | Methods and compositions for the repair of articular cartilage defects in mammals |
WO1997033978A1 (en) * | 1996-03-12 | 1997-09-18 | Life Technologies, Inc. | Hematopoietic cell culture nutrient supplement |
US6001352A (en) * | 1997-03-31 | 1999-12-14 | Osteobiologics, Inc. | Resurfacing cartilage defects with chondrocytes proliferated without differentiation using platelet-derived growth factor |
AU7984498A (en) * | 1997-06-25 | 1999-01-04 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Serum-free cell growth medium |
US6153582A (en) * | 1998-11-05 | 2000-11-28 | Bausch & Lomb Surgical, Inc. | Defined serumfree medical solution for ophthalmology |
RU2272839C2 (ru) | 1998-11-09 | 2006-03-27 | Консорцио Пер Ла Джестионе Дель Чентро Ди Биотекнолоджие Аванцате | Бессывороточная среда для культуры клеток, используемых для реконструкции костных и хрящевых сегментов (варианты) |
FR2798671A1 (fr) | 1999-09-16 | 2001-03-23 | Univ Paris Curie | Compositions de chondrocytes, preparation et utilisations |
WO2001057083A1 (en) | 2000-02-04 | 2001-08-09 | Zymogenetics, Inc. | Methods for promoting growth of bone, ligament, and cartilage using zvegf4 |
AU2001256143A1 (en) | 2000-05-01 | 2001-11-12 | Medico-Kemisk Laboratorium | Chondrocyte cultures and fractions therefrom |
-
2003
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11506610A (ja) * | 1995-06-05 | 1999-06-15 | オシリス セラピューティクス,インコーポレイテッド | ヒト間葉幹細胞用合成培地 |
JP2000515023A (ja) * | 1996-07-25 | 2000-11-14 | ジェンザイム・コーポレーション | 軟骨細胞培地組成および培養方法 |
JP2001103965A (ja) * | 1999-08-19 | 2001-04-17 | Zen Bio Inc | 軟骨細胞分化と軟骨修復のための脂肪組織由来の間質細胞の使用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6008052092, Chemically defined lipid concentrate, 200106, p.1, Invitrogen Corporation * |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007023875A1 (ja) * | 2005-08-23 | 2007-03-01 | Oriental Yeast Co., Ltd. | ラミニン5を利用した間葉系幹細胞の培養技術 |
JP5001155B2 (ja) * | 2005-08-23 | 2012-08-15 | 公立大学法人横浜市立大学 | ラミニン5を利用した間葉系幹細胞の培養技術 |
WO2007080919A1 (ja) | 2006-01-13 | 2007-07-19 | Japan Science And Technology Agency | 動物細胞を無血清培養するための培地用添加剤、キット及びこれらの利用 |
US9074176B2 (en) | 2006-01-13 | 2015-07-07 | Two Cells Co., Ltd. | Culture medium additive for use in serum-free culturing of animal cell, kit and use thereof |
US10184112B2 (en) | 2006-01-13 | 2019-01-22 | Two Cells Co., Ltd. | Culture medium additive for use in serum-free culturing of animal cell, kit and use thereof |
JP2009540826A (ja) * | 2006-06-20 | 2009-11-26 | ジェンザイム・コーポレーション | 軟骨細胞増幅のための無血清培地およびその使用 |
US10131877B2 (en) | 2008-11-11 | 2018-11-20 | Two Cells Co., Ltd. | Differentiation-inducing culture medium additive and use thereof |
US9394521B2 (en) | 2010-03-10 | 2016-07-19 | Two Cells Co., Ltd. | Cell preparation containing mesenchymal stem cells, and method for producing same |
JP2022031684A (ja) * | 2013-06-11 | 2022-02-22 | エンカルディア・ベー・フェー | 多能性哺乳動物幹細胞に由来する心筋細胞を成熟させるための培地組成物 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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Hendriksa et al. | and Jens Riesleb | |
I Malinin et al. | Cartilage allograft materials for cartilage defect repair and tissue engineering | |
Watson et al. | Advancing the art of rhinoplasty with tissue engineering | |
Wang et al. | www. babonline. org |
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