JP2005511563A - チモシンα１ペプチドを投与する方法 - Google Patents

Abstract

チモシンα１（ＴＡ１）ペプチドが、患者において免疫刺激に有効な量の該ＴＡ１ペプチドを実質的に連続して維持するために、免疫刺激を必要としている患者に投与される。この投与方法は、連続注入によるものであってもよい。

Description

本発明は、チモシンα１ペプチドを投与する方法に関する。

チモシンα１（時にはＴＡ１として言及される）は、免疫調節特性を有する２８アミノ酸の胸腺ペプチドであり、子牛胸腺のチモシン分画５から元来単離された天然物に対して相同性を有している。その生物学的効果は、Ｔリンパ球の機能の増強を包含し、インターロイキン−２（ＩＬ−２）の調節、インターフェロン−γ産生の刺激、Ｔリンパ球およびＮＫ細胞の活性の誘導、ならびに胸腺生成の刺激を包含する。チモシンα１は、ＭＨＣクラスＩの発現をアップレギュレーションすることも示されている。

チモシンα１は、例えば週に２回の皮下注射による、ガン、ＢおよびＣ型肝炎、ＨＩＶ等の、ある種の処置における使用に関しては以前に示唆されている。チモシンα１を投与する改善された方法に関する、当業界における必要性が残っている。

［本発明の要約］
本発明によれば、免疫刺激を必要としている患者へ、チモシンα１（ＴＡ１）ペプチドを投与する方法は、少なくとも約６時間の処置期間中、該患者において、免疫刺激に有効な量のＴＡ１ペプチドを、実質的に連続して維持するために、該患者へＴＡ１ペプチドを投与することを含む。

［本発明の詳細な説明］
本発明は、処置期間中、患者の循環系中で免疫刺激に有効な量のＴＡ１ペプチドを維持することが、該ＴＡ１ペプチドの免疫刺激効果における実質的な改善を提供するという発見に基づいている。

本発明は、天然由来のＴＡ１を包含するＴＡ１ペプチドに対して適用可能であり、同様に、天然由来のＴＡ１のアミノ酸配列を持つ合成ＴＡ１および組み換えＴＡ１、これに実質的に類似したアミノ酸配列、もしくはこれから形成された短縮された配列、および置換、欠損、延伸、置き換え、もしくは他の様式で修飾された配列を持つそれらの生物学的に活性な類似体に対しても適用可能であり、これらはＴＡ１、例えば、実質的にＴＡ１と同じ活性を有し、実質的に同様に機能するように、ＴＡ１と充分なアミノ酸相同性を持つＴＡ１由来ペプチドの生物活性に実質的に類似した生物活性を保有する。

皮下に注射されたＴＡ１の血漿半減期は約２時間しかないので、１つの実施形態によれば、ＴＡ１のようなＴＡ１ペプチドは、免疫刺激を必要としている患者へ、実質的により長い処置期間中、該患者の循環系において、免疫刺激に有効な量の該ＴＡ１ペプチドを、実質的に連続して維持するために投与される。はるかにより長い処置期間が本発明によって考えられるが、本発明の実施形態は、少なくとも約６、１０、１２時間もしくはより長い処置期間中、該患者の循環系において、免疫刺激に有効な量の該ＴＡ１ペプチドを、実質的に連続して維持することを包含する。他の実施形態では、処置期間は、少なくとも約１日間、および複数日間、例えば１週間もしくはこれより長くさえある。しかしながら、前記のように定義されたような、免疫刺激に有効な量の該ＴＡ１ペプチドが該患者の循環系中で実質的に連続して維持される処置は、同様もしくは異なる期間の非処置期間により分けられてもよいことが考えられる。

１つの実施形態によれば、該ＴＡ１ペプチドは、免疫刺激に有効な量の該ＴＡ１ペプチドを患者の循環系中で実質的に連続して維持するために、該処置期間中、例えば静注により、該患者中へ連続して注入される。該注入は、小ポンプによるような、如何なる適切な手段によっても実行されてよい。

あるいは、該ＴＡ１ペプチドの注射体制は、免疫刺激に有効な量の該ＴＡ１ペプチドを該患者の循環系中で実質的に連続して維持するように、維持され得る。適切な注射体制は、免疫刺激に有効な量のチモシンα１ペプチドを、該患者の循環系中で該処置期間中、実質的に連続して維持するために、１、２、４、６時間等毎の注射を包含してもよい。

該ＴＡ１ペプチドの連続注入の間中、投与は実質的により長い期間であるであろうことが考えられるが、１つの実施形態によれば、該ＴＡ１ペプチドの連続注入は、少なくとも約１時間の処置期間の間である。より好ましくは、連続注入は、少なくとも約６、８、１０、１２時間もしくはより長い期間のような、より長い期間行われる。他の実施形態では、連続注入は、少なくとも約１日間、および１週間もしくはこれより長いような複数日間でさえある。

免疫刺激に有効な量のＴＡ１ペプチドは、約０．０００１〜０．１ｍｇ／時間／Ｋｇ患者体重の範囲内の速度にて、該患者へ該ＴＡ１ペプチドを投与することにより、該患者の循環系において、実質的に連続して維持されてもよい。好ましい投与速度は、約０．０００３〜０．０３ｍｇ／時間／Ｋｇ患者体重の範囲内である。

好ましい実施形態においては、該ＴＡ１ペプチドは、注射用水、生理学的濃度の生理食塩水、または同様のもののような、医薬的に許容可能な液体担体中に存在する。

本発明は、ガン患者、ＨＩＶ患者、ならびにＢ型肝炎およびＣ型肝炎を包含する種々の形態の肝炎を持っている患者を包含する、免疫刺激を必要としている如何なる患者の処置用にも利用されてもよい。例えば、本発明は、化学療法を伴うガン患者における骨髄の回復を促進するのに利用されてもよい。本発明は、黒色種および肝細胞ガン（ＨＣＣ）患者における生存率を増加させるために、ならびに肺ガンにおける血液学的毒性の抑制のために、化学免疫治療へＴＡ１を加えるのに特に有用であることがある。

限定するものであることを意図されるものではない以下の実施例において、ＴＡ１の連続注入は、外科的に移植された浸透圧小ポンプの使用と共に、ガン治療モデルにおいて評価され、この小ポンプは、５日間一定の流速にて液体を送達した。ラットに５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）が与えられ、免疫抑制を引き起こし、それから８日後に（５−ＦＵ後の白血球数の底打ち）、注射もしくは注入されたＴＡ１で処置された。各々８匹のラットの処置群は：コントロール（生理食塩水入りの小ポンプ）；低投与量のＴＡ１（０．２ｍｇ／Ｋｇ秒の注射；空の小ポンプ）；高投与量のＴＡ１（３．５ｍｇ／Ｋｇ秒の注射；空の小ポンプ）；および高投与量で注入されたＴＡ１（小ポンプにより３．５ｍｇ／Ｋｇで注入された）であった。免疫パラメーターは、ベースラインにて、および５−ＦＵ処置の８日後（ＴＡ１処置の１日目）に、ならびにＴＡ１処置の５、１２、２０および２７日後にも決定された。

［実施例１］
体重２５０〜３００ｇの１０週齢のラットに、免疫抑制のために、１００ｍｇ／ｋｇの５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）が与えられた。

５−ＦＵ処置の８日後に、ラットは、以下の群の１つへとランダムに帰属された（ｎ＝８）：
・コントロール（小ポンプ中には生理食塩水）
・低投与量のＴＡ１、０．２ｍｇ／Ｋｇにて（小ポンプは空であった）実質的に連続して注射された
・高投与量のＴＡ１、３．５ｍｇ／Ｋｇにて（小ポンプは空であった）実質的に連続して注射された
・ＴＡ１の連続注入、３．５ｍｇ／Ｋｇ／５日にて、小ポンプにより提供された。

免疫パラメーターが、ベースラインにて、および５−ＦＵ処置の８日後（ＴＡ１処置の１日目）に、ならびにＴＡ１処置の５、１２、２０および２７日後にも決定された。

評価は、ＮＫ活性（ＰＢＭＣに対しての４時間の被曝の後に、ＹＡＣ−１細胞から放出されたＬＤＨ）、全白血球数（モノクローナル抗体によってその特異性を証明した後に、物理的な細胞蛍光測定パラメーターにより判定された）、全リンパ球数（細胞流測定によるＣＤ３＋）、および活性化されたリンパ球（細胞流測定によるＣＤ２５＋ＣＤ３＋）を包含した。

ＮＫ活性は、ベースラインにて４２±５％であり、５−ＦＵ後には９±２％へと抑制された。低投与量のＴＡ１による処置は、１２日後にＮＫ活性の有意な回復に至り、一方、高投与量のＴＡ１は、わずか５日の内に有意な回復を達成した。ＴＡ１の連続注入は、しかしながら、５日間にその応答を２倍、３２±４％にすることが出来た（これに対して、高投与量の注射に関しては１６±２、低投与量の注射に関しては１２±３、およびコントロールに関しては１１±１）。連続注入によるＴＡ１で処置された動物のみが、ベースラインのレベルに対して、ＮＫ活性が完全に回復した。

全白血球数は、形態学により決定された場合に、５−ＦＵでの処置後、１４，５９０±２，０７１細胞／ｍｍ^３から２，５９７±５８２へと抑えられた。注射による低もしくは高投与量のＴＡ１による処置は、非処置動物に比較して、回復においてより早い上昇傾向があった。ＴＡ１の連続注入は、しかしながら、わずか５日後に、ベースラインのレベルへの統計的に有意で完全な回復を提供した。

活性化されたリンパ球（ＣＤ３＋ＣＤ２５＋）は、５−ＦＵ処置によって有意には減少しなかったが（６５±２１細胞／ｍｍ^３から３７±１０へ）、そのレベルは、高投与量のＴＡ１による処置の１２および２０日後に、劇的に上昇した（それぞれ、２９７±１３６および３２１±７５細胞／ｍｍ^３に対して、１６６±７０および２１２±７７細胞／ｍｍ^３）。連続注入により提供されたＴＡ１は、４２２±１０５および４４６±７３細胞／ｍｍ^３へと遙かにより大きな上昇へと導いた。

［実施例２］
体重２５０〜３００ｇの１０週齢のラットに、免疫抑制のために、１００μｇ／ｋｇの５−ＦＵが与えられた。

５−ＦＵ処置の８日後に、ラットは、以下の群の内の１つへとランダムに帰属された（ｎ＝１５）：
・コントロール（小ポンプ中には生理食塩水）
・高投与量のＴＡ１、３．５ｍｇ／Ｋｇにて（小ポンプは空であった）実質的に連続して注射された
・ＴＡ１の連続注入、３．５ｍｇ／Ｋｇ／５日にて、小ポンプにより提供された。

免疫パラメーターが、ベースラインにて、および５−ＦＵ処置の８日後（ＴＡ１処置の１日目）に、ならびにＴＡ１処置の５および１４日後にも決定された。

評価は、全白血球数（モノクローナル抗体によってその特異性を証明した後に、物理的な細胞蛍光測定パラメーターにより判定された）、顆粒球（抗ラット顆粒球ＦＩＴＣであるＨＩＳ−４８を使用した細胞流測定）、全リンパ球数（細胞流測定によるＣＤ３＋）、Ｔヘルパーリンパ球（細胞流測定によるＣＤ４＋）、活性化されたリンパ球（細胞流測定によるＣＤ２５＋ＣＤ３＋）、および血漿中のサイトカイン発現（ＥＬＩＳＡによるＩＬ−２およびＩＦＮ−γ）を包含した。

実施例１において、実質的に連続した注射に比較して、連続注入により提供されたＴＡ１が、白血球の総数に劇的な効果を持つことが決定された後に、どのタイプの白血球がその増加に関して応答性であるのかを決定することに、興味が持たれた。顆粒球は、連続注入により提供されたＴＡ１により最も影響を被る白血球のサブセットであるようである。顆粒球の数は、５−ＦＵ後に４，４８５±１，１１６から１，２４９±４３２へと減少した。ＴＡ１での処置は結果的に、５日以内に１４，６５２±２，４６３への上昇となり（注射によるＴＡ１での９，９２４±３，２１８、またはＴＡ１なしでの６，９５４±１，５１９に比較して）、このレベルは、１４日後にもまだ最高であった。

興味深いことに、この研究において、（３．５ｍｇ／Ｋｇの）注射および（もう１つ別の３．５ｍｇ／Ｋｇの）連続注入の両方によりＴＡ１を提供された１匹の動物がいた。この動物は健康で元気であり、明らかな不健康な事象を有していなかっただけでなく、測定された免疫パラメーターへのＴＡ１の効果が、その他の動物におけるそれらよりも遙かにより大きかった。顆粒球に関しては、この研究の動物は、その他の注入された動物における１４，６５２±２，４６３の平均に比較して、５日後には、１９，３７６細胞／ｍｍ^３の大きく上昇したレベルを持っていた。

全リンパ球（ＣＤ３＋）の数は、５−ＦＵ処置により劇的に減少した（１０，９０４±１，９７３細胞／ｍｍ^３から１，７４０±５６０へ）。ＴＡ１での処置は、ベースラインのレベルへの回復を見越したものであり、これは、ＴＡ１が連続注入により提供された僅か５日後に起きたが、注射されたＴＡ１に関しては、１４日までは見られなかった。

注射および注入両方により提供されたＴＡ１を持つ動物は、その他の動物とはあまり異ならないリンパ球のレベルを持っていたが（９，６４４±９６１の平均に比較して、９，７６５細胞／ｍｍ^３）、活性化されたこれらのリンパ球のパーセンテージは大きく上昇した（注入によるＴＡ１を有する動物に関しての、４２８±８９または４％のリンパ球から、注入を伴った高投与量注射でのＴＡ１を持っている動物に関しての、９７６または１０％のリンパ球まで）。

Ｔヘルパーリンパ球（ＣＤ３＋ＣＤ４＋）は、５−ＦＵでの処置によっても、５，４１１±１，０８４細胞／ｍｍ^３から１，７１０±４４９へと抑制された。これらの抑制されたレベルのＴ細胞は、本実験の１４日間、ＴＡ１での処置なしには上昇しなかった。連続注入により提供されたＴＡ１が、注射により提供されたＴＡ１よりも、細胞数の回復に関して優れていた、顆粒球に関して見られた結果とは対照的に、いずれかの送達方法により提供されたＴＡ１は、Ｔヘルパー細胞のレベルをベースラインに戻すに充分であった。

注射により、または連続注入により提供されたＴＡ１は、ＣＤ４＋Ｔヘルパーリンパ球における増加に至ったので、この増加が、Ｔヘルパー細胞のＴｈ１か、Ｔｈ２サブセットにおける効果によるものかどうかを決定することに興味が持たれるようになった。以前の in vitro および in vivo のデーターは、ＴＡ１がＴ細胞のＴｈ１サブセットを増加させることを実証しており、この研究において同じ効果が見られた。連続注入によりＴＡ１を提供することは、実質的に連続した注射後に見られたものよりも、Ｔｈ１サイトカインＩＬ−２の血漿レベルにおいて、遙かにより大きな上昇に至った（注射されたＴＡ１に関しての２１±１６、およびコントロール動物に関しての１０±１６に比較して、連続注入によるＴＡ１の１４日後には４２±７ｐｇ／ｍｌ）。

ＴＡ１による処置は、Ｔｈ１サイトカインＩＬ−２における増加に至り、ＴＡ１は、もう１つ別のＴｈ１サイトカインであるＩＦＮ−γにおける増加を見越したものである。そのレベルは低いが、処置後５日までに、実質的に連続して注射されたＴＡ１は、より高い血漿レベルのＩＦＮ−γに至った。処置後１４日までに、連続注入により提供されたＴＡ１を有する動物が、最高のレベルを持っていた（注射による１０±１、またはコントロールに関しての８±８に比較して、１４±５ｐｇ／ｍｌ）。

注射および連続注入の両方によるＴＡ１を受けた動物は、遙かにより高いレベルの両方の測定されたＴｈ１サイトカイン、特にＩＦＮ−γを持っており、これは、その他の動物に関しての１４±５ｐｇ／ｍｌに比較して、１４日後に４５ｐｇ／ｍｌであった。

結論：
・循環中での複数日間に亘っての一定のレベルのＴＡ１の維持は、その測定される免疫学的効果を増強させる。
・この投与量体制は、ＴＡ１の注射後に見られる単球におけるプラスの効果と同様、顆粒球における予想以上のプラスの効果に至る。
・通常よりも１５倍高いＴＡ１の投与量においてさえ、不健康な事象は観察されなかった（そして１匹の動物においては、通常より３０倍高い投与量において）。

Claims (20)

1. チモシン（Thymosin）α１（ＴＡ１）ペプチドを、免疫刺激を必要としている患者へ投与する方法であって、少なくとも約６時間の処置期間中、該患者において、免疫刺激に有効な量の該ＴＡ１ペプチドを実質的に連続して維持するために、該患者へ該ＴＡ１ペプチドを投与することを含む方法。
2. 前記処置期間が少なくとも約８時間である、請求項１に記載の方法。
3. 前記処置期間が少なくとも約１０時間である、請求項１に記載の方法。
4. 前記処置期間が少なくとも約１２時間である、請求項１に記載の方法。
5. 前記処置期間が少なくとも約１日である、請求項１に記載の方法。
6. 前記処置期間が複数日を含む、請求項１に記載の方法。
7. 前記ＴＡ１ペプチドがＴＡ１である、請求項１に記載の方法。
8. 前記ＴＡ１ペプチドが医薬的に許容可能な液体担体中に存在し、前記処置期間中、前記患者中へ実質的に連続して注入される、請求項１に記載の方法。
9. 前記処置期間が少なくとも約８時間である、請求項８に記載の方法。
10. 前記処置期間が少なくとも約１０時間である、請求項８に記載の方法。
11. 前記処置期間が少なくとも約１２時間である、請求項８に記載の方法。
12. 前記処置期間が少なくとも約１日である、請求項８に記載の方法。
13. 前記処置期間が複数日を含む、請求項８に記載の方法。
14. 前記ＴＡ１ペプチドがＴＡ１である、請求項８に記載の方法。
15. 前記ＴＡ１が前記患者へ、約０．０００１〜０．１ｍｇ／時間／Ｋｇ患者体重の範囲内の速度にて投与される、請求項１４に記載の方法。
16. 前記範囲が、約０．０００３〜０．０３ｍｇ／時間／Ｋｇ患者体重である、請求項１４に記載の方法。
17. チモシンα１（ＴＡ１）ペプチドを、免疫刺激を必要としている患者へ投与する方法であって、少なくとも約１時間の期間、該患者中へ、免疫刺激に有効な量の該ＴＡ１ペプチドを実質的に連続して注入することを含む方法。
18. 前記ＴＡ１ペプチドがＴＡ１であり、前記ＴＡ１が少なくとも約６時間の期間、前記患者中へ連続して注入される、請求項１７に記載の方法。
19. 前記ＴＡ１が少なくとも約１日間、前記患者中へ連続して注入される、請求項１７に記載の方法。
20. 前記ＴＡ１が複数日間、前記患者中へ連続して注入される、請求項１７に記載の方法。