ES2353379T3 - Método para administrar un péptido alfa 1 de timosina. - Google Patents

Abstract

Utilización de un péptido Timosina alfa 1 para la preparación de una forma farmacéutica para la administración a un paciente que necesita un estímulo inmune para el tratamiento del cáncer, VIH o hepatitis en dicho paciente de modo tal que se administra continuamente la Timosina alfa 1 al paciente a una velocidad situada en un rango de 0,0001-0,1 mg/h/kg de peso corporal del paciente, manteniendo continuamente una cantidad estimulante inmune eficaz de dicha Timosina alfa 1 en el paciente durante un período de tratamiento de 6 horas como mínimo.

Description

5 La presente invención se refiere a la utilización de un péptido alfa 1 de Timosina para la preparación de una forma farmacéutica de tratamiento del cáncer, el VIH o la hepatitis.

La alfa 1 Timosina (denominada a veces TA1) es un péptido tímico de 28 aminoácidos con propiedades inmunomoduladoras, homólogo a un producto 10 natural aislado originalmente de la fracción 5 de la timosina del timo de ternera. Sus efectos biológicos incluyen el incremento de la función de los linfocitos T e incluyen la modulación de la interleucina-2 (IL-2), la estimulación de la producción de interferón-γ, la inducción de linfocitos T y actividad de las células NK, así como el estímulo de la timopoyesis. También se ha demostrado que la

15 alfa 1 Timosina favorece la expresión de MHC de Clase I.

Se ha sugerido anteriormente la utilización de la alfa 1 Timosina en ciertos tratamientos contra el cáncer, la hepatitis B y C, el VIH, por ejemplo, mediante inyección subcutánea dos veces a la semana. En la técnica sigue existiendo la necesidad de métodos mejorados de administración de la alfa 1

20 Timosina.

La US-A-5468729 describe un método para tratar la hepatitis autoinmune que comprende la administración a un paciente necesitado en dicho tratamiento de una cantidad inmunomoduladora de Timosina α1 y de una cantidad antiinflamatoria de un corticoide. Este documento describe la utilización de Th α1

25 dos veces por semana a una dosificación en el rango de aproximadamente 0,4-4 mg (por ejemplo, aproximadamente 1,6 mg). Las inyecciones se continúan durante 5 semanas aproximadamente.

La US-A-5849696 describe un método para el tratamiento de un mamífero infectado por el virus de la hepatitis C que comprende la 30 administración a dicho mamífero de una dosis potenciadora del sistema inmune de al menos una timosina seleccionada de ente el grupo compuesto de Timosina Fracción Cinco, Th α1 y fragmentos de Th α1. Dicho documento refiere que las dosificaciones y la duración del tratamiento con Th α1 pueden ser

flexibles pero, para un paciente humano típico, es conveniente un régimen de administración, mediante inyección subcutánea dos veces por semana, de aproximadamente 1,5 a aproximadamente 1,7 mg de Th α1. Además, en este documento se describe que una unidad de dosificación farmacéutica de timosina puede ser de aproximadamente 900 a aproximadamente 1.200 mg/cm2 del área corporal en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La US-A-5888980 describe una composición que comprende timosina y naloxona, así como una composición que incluye Th α1 y un factor inhibidor de la hormona estimulante de los melanocitos (MIF) y un método para intensificar la competencia inmune que comprende la administración a dicho paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz de dichas composiciones. Dicho documento refiere que la dosificación terapéutica humana de las composiciones es de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 20 mg/m2, en base a la superficie corporal o, como alternativa, de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal al día o superior.

De acuerdo con la presente invención, se utiliza un péptido Timosina alfa 1 para la preparación de una forma farmacéutica para la administración a un paciente que necesita un estímulo inmune para el tratamiento del cáncer, VIH o hepatitis en dicho paciente, de modo tal que se administra continuamente la Timosina alfa 1 al paciente a una velocidad que oscila en el rango de 0,0001-0,1 mg/h/kg de peso corporal del paciente, para mantener sin interrupción una cantidad estimulante inmune eficaz de dicha Timosina alfa 1 en el paciente durante un período de tratamiento de como mínimo 6 horas.

La presente invención se basa en el descubrimiento de que el hecho de mantener cantidades estimulantes inmunes eficaces de un péptido TA1 en el sistema circulatorio de un paciente durante un cierto período de tratamiento proporciona una mejora sustancial del efecto estimulante inmune del péptido TA1.

La invención es aplicable a los péptidos TA1, incluidos los TA1 de origen natural así como los TA1 sintéticos y los TA1 recombinantes que tienen la secuencia de aminoácidos de TA1 de origen natural, secuencias de aminoácidos sustancialmente similares a los mismos, o una forma abreviada de secuencias de los mismos, y sus análogos biológicamente activos que tienen secuencias sustituidas, suprimidas, alargadas, reemplazadas o modificadas que poseen una bioactividad sustancialmente similar a la de TA1, por ejemplo un péptido derivado de TA1 que tiene una homología suficiente de aminoácidos con TA1 de tal forma que funciona sustancialmente de la misma manera con esencialmente la misma actividad que TA1.

Debido a que la vida media del plasma de TA1 inyectado subcutáneamente es sólo de aproximadamente dos horas, de acuerdo con una realización se administra un péptido TA1, tal como la TA1, a un paciente que necesita un estímulo inmune de forma que se mantiene sin interrupción una cantidad estimulante inmune eficaz del péptido TA1 en el sistema circulatorio del paciente durante un período de tratamiento sustancialmente más largo. Aunque se contemplan períodos de tratamiento mucho más largos de acuerdo con la presente invención, las realizaciones de la invención incluyen el mantenimiento continuo de una cantidad estimulante inmune eficaz del péptido TA1 en el sistema circulatorio del paciente durante períodos de tratamiento de al menos 6, 10, 12 horas o más. En otras realizaciones, los períodos de tratamiento son al menos de un día, e incluso de varios días, por ejemplo una semana o más. Sin embargo, se contempla que los tratamientos tal como se han definido más arriba, en los que se mantienen sin interrupción cantidades estimulantes inmunes eficaces del péptido TA1 en el sistema circulatorio del paciente, puedan ser separados por períodos de no tratamiento con duraciones similares o diferentes.

De acuerdo con una realización, el péptido TA1 es infundido continuamente en un paciente, por ejemplo por infusión intravenosa, durante el período de tratamiento, para mantener sin interrupción una cantidad estimulante inmune eficaz del péptido TA1 en el sistema circulatorio del paciente. La infusión se puede llevar a cabo mediante cualquier medio adecuado, tal como mediante una mini bomba.

Como alternativa, se puede mantener un régimen de inyecciones del péptido TA1 para mantener sin interrupción una cantidad estimulante inmune eficaz del péptido TA1 en el sistema circulatorio del paciente. Los regímenes de inyecciones adecuados pueden incluir una inyección cada 1, 2, 4, 6 horas, para mantener sin interrupción la cantidad estimulante inmune eficaz del péptido Timosina alfa 1 en el sistema circulatorio del paciente durante el período de tratamiento.

Aunque se prevé que durante la infusión continua del péptido TA1 la administración tendrá una duración sustancialmente más larga, de acuerdo con una realización, la infusión continua del péptido TA1 está prevista para un período de tratamiento de como mínimo 1 hora. Preferentemente, la infusión sin interrupción se lleva a cabo durante períodos más largos, tal como períodos de al menos 6, 8, 10, 12 horas, o más. En otras realizaciones, la infusión continua dura al menos un día e inclusive varios días, tal como una semana o más.

Las cantidades estimulantes inmunes eficaces de un péptido TA1 se pueden mantener sin interrupción en el sistema circulatorio de un paciente mediante la administración del péptido TA1 al paciente a una velocidad situada en el rango de 0,0001-0,1 mg/h/kg de peso corporal del paciente. Las velocidades de administración preferentes se encuentran entre 0,0003 y 0,03 mg/h/kg de peso corporal del paciente.

En las realizaciones preferentes, el péptido TA1 está presente en un vehículo líquido farmacéuticamente aceptable, tal como agua para inyección, solución salina en concentraciones fisiológicas, o similar.

La invención se puede utilizar para el tratamiento de cualquier paciente que necesite un estímulo inmune, incluidos los pacientes con cáncer, pacientes con VIH y pacientes con varias formas de hepatitis, incluyendo la Hepatitis B y la Hepatitis C. Por ejemplo, la invención se puede utilizar para favorecer la recuperación de la médula ósea en pacientes con cáncer después de la quimioterapia. La invención puede ser particularmente útil para la adición de TA1 a la quimioinmunoterapia para aumentar la supervivencia de aquellos pacientes con melanoma y carcinoma hepatocelular (HCC), y para la reducción de la toxicidad hematológica en caso de cáncer de pulmón.

En los siguientes ejemplos, se evaluó la infusión sin interrupción de TA1 en un modelo de terapia contra el cáncer utilizando mini bombas osmóticas implantadas quirúrgicamente, las cuales suministran fluidos a un caudal constante durante 5 días. Se aplicó a ratas 5-fluorouracilo (5-FU) para provocar la supresión inmune y luego se trataron 8 días más tarde con TA1 inyectada o infundida (valor mínimo del recuento de glóbulos blancos después de 5-FU). Los grupos de tratamiento de 8 ratas cada uno fueron: control (mini bombas con solución salina); baja dosis de TA1 (0,2 mg/kg inyección s.c.; mini bombas vacías); alta dosis de TA1 (3,5 mg/kg inyección s.c.; mini bombas vacías); y alta dosis infundida de TA1 (3,5 mg/kg infundidos por mini bombas). Los parámetros inmunes se determinaron en la línea base y 8 días después del tratamiento con 5-FU (día 1 del tratamiento con TA1), y también 5, 12, 20 y 27 días después del tratamiento con TA1.

Ejemplo 1

Ratas de 10 semanas de edad que pesaban 250-300 g recibieron 100 mg/kg de 5-fluorouracilo (5-FU) para la supresión inmune.

Se distribuyeron al azar las ratas 8 días después del tratamiento con 5FU, en uno de los siguientes grupos (n=8):

 Control (solución salina en mini bomba)

 Baja dosis de TA1, inyectada s.c. a 0,2 mg/kg (mini bombas vacías)

 Alta dosis de TA1, inyectada s.c. a 3,5 mg/kg (mini bombas vacías)

 Infusión continua de TA1, proporcionada por mini bomba a 3,5 mg/kg/5 días

Se determinaron los parámetros inmunes en la línea base y 8 días después del tratamiento con 5-FU (día 1 del tratamiento con TA1), y también a los 5, 12, 20 y 27 días después del tratamiento con TA1.

Las evaluaciones incluían la actividad de NK (LDH liberada por células YAC-1 después de 4 horas de exposición a PBMC), número total de leucocitos (estimado por los parámetros citofluorimétricos físicos después de comprobar la especificidad por el anticuerpo monoclonal), número total de linfocitos (CD3+ por citometría de flujo) y linfocitos activados (CD25+CD3+ por citometría de flujo).

La actividad de NK fue de 42 ± 5% en la línea base y se redujo a 9 ± 2% después de 5-FU. El tratamiento con baja dosis de TA1 condujo a una recuperación significativa de la actividad de NK después de 12 días, mientras que la alta dosis de TA1 consiguió una recuperación significativa en sólo 5 días. La infusión continua de TA1, sin embargo, fue capaz de duplicar la respuesta a los 5 días, a 32 ± 4% (contra 16 ± 2 para la alta dosis inyectada, 12 ± 3 para la baja dosis inyectada y 11 ± 1 para el control). Sólo los animales tratados con TA1 por infusión continua tuvieron una recuperación completa de la actividad de NK a los niveles de línea base.

El recuento de glóbulos blancos total, tal como se determina por la morfología, se redujo de 14.950 ± 2.071 células/mm3 a 2.597 ± 582 después del tratamiento con 5-FU. El tratamiento con una dosis baja o alta de TA1 por inyección tendía a un incremento más temprano de la recuperación en comparación con los animales no tratados. La infusión continua de TA1, sin embargo, proporcionó una recuperación estadísticamente significativa y completa con respecto a los niveles de la línea base tan sólo después de 5 días.

Los linfocitos activados (CD3+CD25+) no disminuyeron significativamente con el tratamiento con 5-FU (de 65 ± 21 células/mm3 a 37 ± 10); sin embargo, los niveles aumentaron dramáticamente 12 y 20 días después de una dosis alta de tratamiento con TA1 (297 ± 136 y 321 ± 75 células/mm3 contra 166 ± 70 y 212 ± 77 células/mm3, respectivamente). La TA1 proporcionada por la infusión continua condujo a un incremento todavía mayor, hasta 422 ± 105 y 446 ± 73 células/mm3.

Ejemplo 2

Ratas de 10 semanas de edad que pesaban 250-300 g recibieron 100 μ/kg de 5-FU para la supresión inmune.

Se distribuyeron al azar las ratas 8 días después del tratamiento con 5FU, en uno de los siguientes grupos (n=15):

 Control (solución salina en mini bomba)

 Alta dosis de TA1, inyectada s.c. a 3,5 mg/kg (mini bombas vacías)

 Infusión continua de TA1 proporcionada por mini bomba a 3,5 mg/kg/5 días

Se determinaron los parámetros inmunes en la línea base y 8 días después del tratamiento con 5-FU (día 1 del tratamiento con TA1) y también a los 5 y 14 días después del tratamiento con TA1.

Las evaluaciones incluían el número total de leucocitos (estimado por los parámetros citofluorimétricos físicos, después de comprobar la especificidad por el anticuerpo monoclonal), granulocitos (citometría de flujo por medio de HIS-48 de granulocito anti-rata en FITC), número total de linfocitos (CD3+ por citometría de flujo), linfocitos T ayudantes (CD4+ por citometría de flujo), linfocitos activados (CD25+CD3+ por citometría de flujo) y expresión de las citoquinas en plasma (IL-2 e IFN-γ por ELISA).

Tras determinar en el Ejemplo 1 que TA1 proporcionada por infusión continua en comparación con la inyección s.c. tenía un efecto dramático sobre el número total de leucocitos, era interesante determinar qué tipo de glóbulos blancos era responsable del aumento. Parece que los granulocitos son el subconjunto de glóbulos blancos más afectados por la TA1 proporcionada por infusión continua. El número de granulocitos disminuyó después del tratamiento con 5-FU de 4.485 ± 1.116 a 1.249 ± 432. El tratamiento con TA1 resultó en un aumento de hasta 14.652 ± 2.463 en 5 días (en comparación con 9.924 ± 3.218 con TA1 por inyección o 6.954 ± 1.519 sin TA1), y este nivel seguía siendo el más alto después de 14 días.

Curiosamente, había un animal en este estudio al que se proporcionó TA1 tanto por inyección (de 3,5 mg/kg) como por infusión continua (de otros 3,5 mg/kg). No sólo este animal era sano y fuerte, sin eventos adversos obvios, sino que los efectos de la TA1 en los parámetros inmunes medidos eran incluso más importantes que los de los demás animales. En cuanto a los granulocitos, este animal del estudio tenía un nivel muy incrementado de 19.376 células/mm3 después de 5 días, en comparación con la media de 14.652 ± 2.463 en los demás animales infundidos.

El número total de linfocitos (CD3+) se había reducido dramáticamente con el tratamiento con 5-FU (de 10.904 ± 1.973 células/mm3 a 1.740 ± 560). El tratamiento con TA1 permitió una recuperación hasta los niveles de la línea base, lo que ocurrió después de sólo 5 días cuando se proporcionaba la TA1 por infusión continua, pero no se observó hasta 14 días después con la TA1 inyectada.

El animal al que se había proporcionado la TA1 tanto por inyección como por infusión tenía niveles de linfocitos que no eran muy diferentes de los demás animales (9.765 células/mm3 en comparación con la media de 9.644 ± 961), pero el porcentaje de estos linfocitos que estaban activados había aumentado mucho (de 428 ± 89 o el 4% de linfocitos para los animales con TA1 por infusión, a 976 o el 10% de linfocitos para el animal que tenía la TA1 en una alta dosis de inyección seguida de infusión).

Los linfocitos T ayudantes (CD3+CD4+) habían disminuido también con el tratamiento con 5-FU, de 5.411 ± 1.084 células/mm3 a 1.710 ± 449. Estos niveles reducidos de células T no aumentaron sin el tratamiento con TA1 durante los 14 días del experimento. Contrastando con los resultados observados para los granulocitos, en los que la TA1 proporcionada por infusión continua era superior a la TA1 proporcionada por inyección para la recuperación de los números celulares, la TA1 proporcionada por cualquiera de los métodos de suministro fue suficiente para volver a los niveles de células T ayudantes con respecto a la línea base.

Como la TA1 proporcionada por inyección o por infusión continua conduce a un aumento en los linfocitos T ayudantes CD4+, era interesante determinar si este incremento se debía a un efecto en el subconjunto Th1 o Th2 de las células T ayudantes. Los datos anteriores in vitro e in vivo han demostrado que la TA1 incrementa el subconjunto Th1 de células T y en este estudio se observó el mismo efecto. El suministrar la TA1 mediante infusión continua conduce a un aumento aun más importante a nivel plasmático de la citoquina Th1 IL-2 que el observado después de la inyección s.c. (42 ± 7 pg/ml 14 días después de la infusión continua de TA1, en comparación con 21 ± 16 para la TA1 inyectada y 10 ± 16 para los animales de control).

El tratamiento con TA1 conduce a un aumento en la citoquina Th1 IL-2 y la TA1 permite un incremento en otra citoquina Th1 IFN-γ. Aunque los niveles sean bajos, a los 5 días después del tratamiento la TA1 inyectada s.c. conduce a niveles de plasma más altos de IFN-γ. A los 14 días después del tratamiento, los animales con TA1 proporcionada por infusión continua tenían los niveles más altos (14 ± 5 pg/ml en comparación con 10 ± 1 por inyección u 8 ± 8 para el control).

El animal que recibió TA1 tanto por inyección como por infusión continua tenía niveles aun más importantes de ambas citoquinas Th1 medidas, especialmente IFN-γ, que era de 45 pg/ml después de 14 días, en comparación con 14 ± 5 pg/ml para los demás animales.

CONCLUSIONES

 El mantenimiento de un nivel constante de TA1 durante varios días en la circulación aumenta los efectos inmunológicos medidos.

 Este régimen de dosificación conduce a efectos positivos inesperados en los granulocitos, así como a efectos positivos en los monocitos observados después de la inyección de TA1.

 No se observaron eventos adversos, incluso con dosis de TA1 15 veces más altas que lo habitual (y en un animal, con dosis 30 veces más altas que lo habitual).

Claims (17)

1.

Utilización de un péptido Timosina alfa 1 para la preparación de una forma farmacéutica para la administración a un paciente que necesita un estímulo inmune para el tratamiento del cáncer, VIH o hepatitis en dicho paciente de modo tal que se administra continuamente la Timosina alfa 1 al paciente a una velocidad situada en un rango de 0,0001-0,1 mg/h/kg de peso corporal del paciente, manteniendo continuamente una cantidad estimulante inmune eficaz de dicha Timosina alfa 1 en el paciente durante un período de tratamiento de 6 horas como mínimo.

2.

Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho período de tratamiento es de al menos 8 horas.

3.

Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho período de tratamiento es de 10 horas como mínimo.

4.

Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho período de tratamiento es de 12 horas como mínimo.

5.

Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho período de tratamiento es de al menos un día.

6.

Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho período de tratamiento es de una semana o más.

7.

Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicha Timosina alfa 1 está presente en un vehículo líquido farmacéuticamente aceptable.

8.

Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicha Timosina alfa 1 se administra a dicho paciente a una velocidad de 0,0003-0,03 mg/h/kg de peso corporal del paciente.

9.

Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicha administración continua comprende la infusión continua de dicha Timosina alfa 1.

10.

Utilización según la reivindicación 9, caracterizada porque dicha infusión continua comprende la infusión intravenosa continua.

11.

Utilización según la reivindicación 9, caracterizada porque dicha infusión se lleva a cabo mediante una mini bomba.

12.

Utilización según la reivindicación 10, caracterizada porque dicha infusión intravenosa se lleva a cabo mediante una mini bomba.

5 13. Utilización según la reivindicación 11, caracterizada porque dicha mini bomba es una mini bomba osmótica.

14. Utilización según la reivindicación 11, caracterizada porque dicha mini bomba se implanta en dicho paciente.

15. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicho paciente 10 es un paciente de cáncer.

16.

Utilización según la reivindicación 1 para el tratamiento del cáncer en dicho paciente.

17.

Utilización según la reivindicación 1 para el tratamiento del VIH en dicho paciente.

15 18. Utilización según la reivindicación 1 para el tratamiento de la hepatitis B en dicho paciente.

19. Utilización según la reivindicación 1 para el tratamiento de la hepatitis C en dicho paciente.