JPH03504980A - Ｇｍ―ｃｓｆを用いる白血球機能障害の治療 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＧＭ−Ｃ８Ｆを用いる白血球機能障害の治療本発明は身体損傷（ｐｈｙｓｉｃａ ｌ　　ｔｒａｕｍａＬ特に熱傷Ｃｔｈｅ１ｍａｌ　　１ｎｊｕｒｙ）に付随する 白血球機能障害を有効量のＧＭ−ＣＳＦの投与により治療することに関する。

ＧＭ−Ｃ３Ｆはバーゲス（Ｂｕｒｇｅｓｓ）およびメトカーフ（Ｍｅｔｃａｌｆ ）、Ｂｌｏｏｄ、５６：９４７　（１９８０）、ならびにメトカーフ（Ｍｅｔｅ ａｌｆ）、Ｂｌｏｏｄ、６ヱ：　２５７　（１９８６）に記載されるように広い 免疫細胞刺激スペクトルを示すリンホカイン（免疫系の刺激因子）である。ＧＭ −Ｃ８Ｆは白血球数を増加させることが、後天性の免疫欠損症候群を伴う患者［ プラント（Ｂｒａｎｄｔ）ら、Ｎ、Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、、３１旦：８６９（ １９８８）］、および化学療法誘導性を髄抑制を伴う者［アントマン（Ａｎｔｍ ａｎ）ら、Ｎｅｗ　　Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、、３１９：５９３　（１９８８） コにおいて示されており、種々のコロニー刺激因子が単独で、またはエリスロボ イエチンおよび／または抗ウィルス薬および／またはインターロイキン−２（Ｉ Ｌ−２）と組み合わせて、エイズ型疾患を伴う患者の治療に有用であることが示 唆されている（ＰＣＴ国際出願第８７１０３２０４号明細書）。

ＧＭ−ＣＳＦは造血性前駆細胞の増殖を刺激しうることにより確認されたが、そ れは成熟した顆粒球およびマクロファージの多数の機能面をも刺激しつる。これ らの作用には以下のものが含まれる：生物活性分子、たとえばプロスタグランジ ンＥの合成［ハンコック（Ｈａｎｃｏｃｋ）ら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１４０ 　：　３０２１　（１９８８）　、およびカーランド（Ｋｕｒｌａｎｄ）ら、Ｐ ｒｏｃ。

Ｎａｔ］、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、７６：２３２６　（１９７９）コ　：食 細胞活性の増大［ワイズバート（Ｗｅｉｓｂａｒｔ）ら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２ ：６４７　（１９８８）コ　、ＩＬ−２レセプター［ハンコック（Ｈａｎｃｏｃ ｋ）ら。

Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１４０：３０２１　（１９８８）］および好中球上の細 菌産生物ホルミルメチオニルロイシルフェニルアラニンレセプター（これらのレ セブターは超過酸化物アニオンの産生を誘発する）［アトキンソン（Ａ　ｔ　ｋ 　ｉ　ｎ　５ｏｎ）ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、旦４　：　５１９　（１９８８ ）］などの種々の膜マーカーの発現および／または親和：ならびに酵素活性の調 節、たとえばグアニレートサイクラーゼの刺激およびアデニレートサイクラーゼ の抑制［コツイー（Ｃｏｆｆｅｙ）　ら、Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１４０： ２６９５　　（１９８８）］。

身体損傷、特に熱傷の場合、白血球類（ｗｈｉｔｅ　　ｂ］ｏｏｄ　　ｃｅｌｌ 。

ＷＢＣ）、特に単球および白血球（］　ｅｕｃｏｃｙｔｅ）の機能障害を伴う。

従って、正常に作動するならばたとえば食作用および超過酸化物産生に関与する のには十分な数のＷＢＣがあるが、白血球機能障害であるため免疫系の機能不全 または抑制が生じる。免疫系の機能不全は白血球数が不十分であるよりむしろ白 血球機能障害に起因する。

当業者にはこのような白血球機能障害が身体損傷を伴う患者の回復を危うくする ことが認識されるであろう。たとえば火傷患者の場合、このような機能障害（ま 感染の危険性を高める。今日まで、熱傷（火傷）患者におけるインビボ白血球機 能障害および付随する臨床結果、たとえば感染の治療について、何ら顕著な対処 はなされていない。

当技術分野にとって歓迎すべき貢献は、身体損傷、特に熱傷に付随する白血球機 能障害の治療方法であろう。このような貢献が本発明によってなされる。

本発明は下記のように要約される。驚くべきことに、身体損傷、特に熱傷に付随 する白血球機能障害がＧＭ−ＣＳＦの投与によって効果的に治療されること力（ 予想外に見出された。熱傷患者に投与されたＧＭ−ＣＳＦは白血球の機能を向上 させること、すなわち白血球機能の増強が生じることが見出された。従ってこの ような治療によって、熱傷患者における感染に対する応答が顕著に高まる。ＧＭ −Ｃ５Ｆによるインビボでの白血球機能の増強は、単に機能障害白血球の数カ（ 増加するのと区別すべきである。白血球機能障害は熱傷以外の種類の身体損傷１ こもあるので、このような他の種類の身体損傷に付随する白血球機能障害も同様 にＧＭ−Ｃ３Ｆで治療しうると考えられる。

従って一態様においては、本発明はヒトを含む哺乳動物における身体損傷１；付 随する白血球機能障害を、白血球の機能を増強するのに有効な量のＧＭ−ＣＳ　 Ｆの投与により治療する方法を提供する。

他の態様においては、本発明はヒトを含む哺乳動物における熱傷における白血球 機能障害を、白血球の機能を増強するのに有効な量のＧＭ−Ｃ５Ｆの投与により 治療する方法を提供する。

本発明は、ヒトを含む哺乳動物における身体損傷、たとえば熱傷に付随する白血 球機能障害を、白血球の機能を増強するのに有効な量のＧＭ−Ｃ３Ｆの投与によ り治療する方法に用いられる薬剤の製造にＧＭ−Ｃ３Ｆを使用することをも提供 する。

本発明は、身体損傷、たとえば熱傷に付随する白血球機能障害を伴う患者の治療 にＧＭ−Ｃ３Ｆを使用することをも提供する。

本発明はさらに、身体損傷、たとえば熱傷に付随する白血球機能障害を伴う患者 の治療に用いられる、ＧＭ−Ｃ３Ｆを含む薬剤組成物を提供する。

第１図は、ＧＭ−Ｃ３Ｆにより処賀した熱傷患者における単球の増殖の増大をグ ラフで示したものである。

第２および３図は、ＧＭ−ＣＳＦにより治療した熱傷患者における単球の酸化バ ースト（ｂｕｒｓｔ）の増大をグラフで示したものである。

第４および５図は、ＧＭ−Ｃ８Ｆにより治療した熱傷患者において、ＦＭＬ　Ｐ （ホルミルメチオニルロイシルフェニルアラニン）単独では一定期間にわたって 有意の単球酸化バースト刺激が無いことをグラフで示したものである。

好ましくは、治療される哺乳動物はヒトであり、用いられるＧＭ−Ｃ３Ｆはヒト アロタイプものものであろう。

特に好ましい態様においては、有効量のＧＭ−Ｃ３Ｆを静脈内に、たとえば注射 または注入により、ＧＭ−Ｃ３Ｆ活性の有意の損失（たとえばＧＭ−Ｃ５Ｆの代 謝による）無しにＧＭ−ＣＳＦが白血球の機能を増強するのに十分な期間にわた って投与する。一般に有効量はＧＭ−Ｃ３Ｆ約３−約３０マイクログラム／体重 ｋｇ／日であり、これが約３０分ないし約２４時間にわたって静脈内注入により 投与される。好ましくは有効量は約３−約１５マイクログラム／体重ｋｇであり 、これが約２−約６時間にわたって静脈内注入により投与されるが、約２−約４ 時間がより好ましく、約４時間が最も好ましい。使用量は、最も好ましくは３． １０または１５マイクログラム／体重ｋｇ／日である。実際の用量は患者の体重 およびＧＭ−ＣＳＦに対する許容度に応じて異なる。

特に指示しない限りここで用いる′身体損傷′という語は、器官系、筋組織、骨 格系、脈管系などを含めた身体の種々の組織に対する損傷を意味する。損傷は傷 害、たとえば熱傷（火傷）、電気火傷、化学的火傷、鈍傷（ｂｌｕｎｔ　　ｔｒ ａｕｍａ）、たとえば事故または暴行により生じたもの、外傷性切断などを生じ るのに十分な何れかの機構または様式の作用により生じる。

特に指示しない限りここで用いる′熱傷′という語は、個体に対する過度の熱に より生じた生理的傷害を意味し、電気火傷および化学的火傷と区別される。

特に指示しない限り、ここで用いる″白血球機能障害′という語は、白血球、た とえば単球の機能性が有意に低下し、または抗し難い感染からヒトを防御するそ れらの効力が完全に失われることを意味する。単球および顆粒球の機能の一部に は、食作用および／または超過酸化物産生のインビトロまたはインビボ発現が含 まれる。

特に指示しない限りここで用いる″白血球の機能′という語は、食作用および／ または超過酸化物産生における白血球、たとえば単球、の正常な機能を意味する 。

特に指示しない限りここで用いる′白血球′という語は、その技術分野で一般に 認められている意味を表し、従ってたとえば骨髄系、リンパ系および単球系の細 胞を含めた白血球類として分類される種々の細胞タイプのものを含む。

本発明は哺乳動物における機能障害白血球の白血球機能を増強する方法を提供し 、ここでこの機能障害は熱傷その他の身体損傷に付随するものである。この方法 においては、白血球機能を高めるのに十分な期間にわたって有効量のＧＭ−Ｃ５ Ｆを投与する。実際に本発明方法は白血球の機能障害を著しく低下させ、または 逆転させる。

本発明には適切なＧＭ−Ｃ８Ｆをいずれも使用しつる。ＧＭ−Ｃ３Ｆに対する相 補的ＤＮＡ　（ｃＤＮＡ）が最近多数の研究室によりクローン化および配列決定 された：たとえばガフ（Ｇｏｕｇｈ）ら、Ｎａｔｕｒｅ、３０９ニア６３　（１ ９８４）（７ウス）；リ−（Ｌｅｅ）ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ ｉ。

；カントレル（Ｃａｎ　ｔ　ｒｅ　ｌ　ｌ）　ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａ ｄ、Ｓｃｉ。

ＵＳＡ、８２：６２５０　（１９８５）（ヒト）。さらに非組み換えＧＭ−ＣＳ 　Ｆが種々の培養上清から精製された：バーガース（Ｂｕｒｇｅｒｓ）ら、Ｅｘ ｐ。

ト）。ヒトＧＭ−ＣＳＦ間にはヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の異質性が 見られる。たとえばヒトＧＭ−ＣＳＦのＮ−末端アラニンに対して１００位にト レオニンおよびイソロイシンの両者が見られ、これはヒト集団内にＧＭ−ＣＳ　 Ｆの対立遺伝子、すなわち多形性があることを示唆する。また種々のリーダー配 列がアミノ酸配列のＮ−末端位に生じる可能性がある。これらのリーダー配列は 種々の長さおよびアミノ酸組成のものであり、これは生物活性に影響を与える場 合または与えなし・場合がある。好ましくは本発明においてヒトの治療に用いら れるＧＭ−Ｃ６ＦはヒトＧＭ−ＣＳＦ　（ｈＧＭ−Ｃ８Ｆ）であり、最も好まし くはり−（Ｌｅｅ）ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８２ ：４３６０　（１９８５）に記載され、米国特許出願第１１１．８８６号明細Ｉ Ｆ（１９８７年１０月２３日出願）において精製されたとして記載された、組み 換えヒトＧＭ−Ｃ３Ｆ　（ｒｈＧＭ−Ｃ５Ｆ）である。上記参考文献すべてを本 発明に用いるのに適した代表的ＧＭ−Ｃ３Ｆ　（それらのＤＮＡおよびアミノ酸 配列を含む）の記載に関して、ならびにＧＭ−Ｃ５Ｆの調製法および精製法の記 載に関して、ここに参考として引用する。

本発明によれば哺乳動物に有効量のＧＭ−Ｃ８Ｆを投与する。有効量とは、機能 障害白血球の機能を増強するのに必要な量である。好ましくは、前記のように哺 乳動物はヒトであり、好ましいＧＭ−Ｃ３Ｆは組み換えヒトＧＭ−Ｃ５Ｆ（ｒｈ ＧＭ−Ｃ３Ｆ）である。一般にＧＭ−Ｃ３Ｆ約３−約３０マイクログラム／体重 ｋｇ／日の量が大部分の患者において機能障害白血球の機能を増強するのに十分 である。好ましくは１日当たり約３−約２５マイクログラム／体重ｋｇが投与さ れ、約３−約１５マイクログラム／体重ｋｇがより好ましく、３．１０または１ ５マイクログラム／体重ｋｇの用量が最も好ましい。よりいっそう好ましい用量 は１０マイクログラム／体重ｋｇである。

ＧＭ−Ｃ３ＦはＧＭ−ＣＳＦの血中濃度が急激に上昇したのちＧＭ−Ｃ５Ｆの代 謝によってＧＭ−Ｃ３Ｆの血中濃度が急激に低下する急速投与に対比して、血中 のＧＭ−Ｃ３Ｆの有効１度が一定期間にわたって維持されるように投与するのが 極めて有効である。一般に静脈内ポルスおよび／または約３０分ないし約２４時 間にわたる注入による投与で十分である。この投与は好ましくは約２−約６時間 、より好ましくは約２−約４時間、最も好ましくは約４時間にわたって行われる 。ＧＭ−Ｃ３Ｆは筋肉内に、皮下に、開口創傷部位への直接投与により局所的に 、経皮的に、鼻内に（鼻内スプレー）、経口的に（経口スプレー）、吸入により 、その他により投与することもできる。従って有効血中濃度を一定期間にわたっ て与える有効量を投与する方法はいずれも考慮される。

ＧＭ−ＣＳＦ、好ましくはｒｈＧＭ−Ｃ５Ｆは通常の多数の剤形のうちいずれか に調製しうる：たとえば非経口用（無菌液剤または懸濁剤が含まれる）：局所用 剤形、たとえばクリーム、軟膏、ローンヨン、経皮デバイス（たとえば通常のレ ザバー（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）またはマトリ・ソクス、（・ソチ型）などである 。

上記剤形により考慮される製剤および薬剤組成物は、通常の薬剤学的に受容しう る賦形剤および添加物を用いて、常法により調製することができる。

現在ＧＭ−Ｃ３Ｆ、好ましくは組み換えヒトｒｈＧＭ−Ｃ３Ｆは、静脈内経路で 投与される。投与される液剤は凍結乾燥粉末から再構成されてもよく、それらは さらに防腐剤、緩衝剤、分散剤などを含有しうる。好ましくはｒｈＧＭ−Ｃ８Ｆ は、静脈注射に普通に用いられるいずれかの等張媒質、たとえば防腐剤不含の無 菌水を用いて再構成される。ｒｈＧＭ−Ｃ８Ｆの最高濃度は、好ましくは１５０ ０マイクログラム／ｍｌを越えるべきでない。投与は連続静脈内注入により、ま たは静脈注射により行われる。連続注入のためには、１日量を生理食塩液に添加 し、この溶液をメカニカルポンプにより、または比重（ｇｒａｖｉｔｙ）により 注入することができる。

以下の実施例は説明のためのものにすぎず、何らかの形で本発明を限定するもの と解すべきでない。請求の範囲に記載の精神および範囲内において変更しうろこ とは当業者に認識されるであろう。

体表面積の２０−７０％にわたる熱傷を伴う患者において機能障害白血球の機能 増強にＧＭ−Ｃ３Ｆが与える効果は、下記の試験プロトコールにより判定しうる ：まず年齢１８歳以上、体表面積の２０−４０％にわたる熱傷を伴い、心臓血管 安定化処置がなされた、または継続中であり、肺への吸入傷害は無い患者を傷害 の４８時間以内に組み換えヒトｒｈＧＭ−Ｃ３Ｆで治療した。次いで年齢１８歳 以上、体表面積の４０−７０％にわたる熱傷を伴い、心臓血管安定化処置がなさ れた、または継続中であり、肺への吸入傷害は無い患者を傷害の４８時間以内Ｅ ｒｈＧＭ−Ｃ３Ｆで治療する。次いで年齢１８歳以上、体表面積の４０−７０％ にわたる熱傷を伴い、心臓血管安定化処置がなされた、または継続中であり、緩 和ないし中程度の吸入傷害を伴う（身体検査またはキセノンスキャンにより診断 ）が、気管支鏡検査による吸入の兆候は無い患者を傷害の４８時間以内にｒｈＧ Ｍ−Ｃ３Ｆで治療する。ｒｈＧＭ−ＣＳＦはり−（Ｌｅｅ）ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａ ｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃｊ、ＵＳＡ、８２：４３６０　（１９８５）および米国 特許出願第１１１．８８６号明細書（１９８７年１０月２３日出願）の記載に従 って得られた。ｒｈＧＭ−Ｃ３Ｆは凍結乾燥粉末の形であり、担当の医師または 薬剤師により、無菌水で１ｍｌに希釈し、次いでこの得られた溶液に５Ｑｍｌの 生理食塩液を添加することによって、静脈内投与用に調製された。患者は、より 好ましくはｒｈＧＭ−Ｃ８Ｆを３．１０または１５マイクログラム／体重ｋｇの 用量で静脈内に（ポルスまたは注入）２−４時間、最も好ましくは４時間にわた って、１日１回投与された。各用量レベルのＧＭ−ＣＳＦが３−５人の患者グル ープに投与された。

白血球の機能を判定するためにインビトロ分析用血液試料を採取した。これらの 血液試料を当技術分野で既知の方法により分析した。ベースラインから５０％以 上高い白血球類の計数の増加は、治療効果および臨床的に有意の結果を指示する 。

すべての用量についての結果を合わせて第１−５図に示す。第１−５図におＬｌ て“正常”または“対照′は正常な患者集団（すなわち熱傷を伴わなシ１）につ Ｌ）ての結果を意味し、“火傷対照”は熱傷を伴い、ＧＭ−ＣＳＦ処置を行わな ０患者集団を意味する。第２−５図において″前′は処置前（すなわちＧＭ−Ｃ Ｓ　Ｆ投与無いを意味し、Ｘ軸上の数字“１”、“８”および“１５”はｒｈＧ Ｍ−Ｃ８Ｆによる治療の日数を意味する。

第１図は、ヒストリカル（ｈｉｔｏｒｉｃａｌ）対照群と比較した患者群におけ るトリチウム化チミジンの取り込みの比較を示す。第１図に示すように、火傷後 １０日以上の患者４人の試験（Ｎ＝４）においてトリチウム化チミジン取り込み の有意の増加により明らかなように、有意の単球増殖増加が認められた。第１図 には２種類の対照があり、最も左側の棒（Ｎ＝５）は熱傷などのイントラセデン トな疾患（ｉｎｔｒａｃｅｄｅｎｔ　　ｉｌ］ｎｅｓｓ）を伴わなしλ正常対照 を示し、中央の棒（Ｎ＝７、火傷後１５日以上）は実際に熱傷を伴う患者群を表 す。

第２および３図は単球のＰＭＡ刺激によるヒト酸化生成物ノく−ストを表す。こ れらの図は１５日間以上にわたってｒｈＧＭ−ＣＳＦを連続投与すると単球の酸 化的バーストが増大することを立証するためのものである。

第４および５図はヒトの酸化呼吸のＦＭＬＰ刺激を立証する。これらの図は一定 期間にわたってＦＭＬＰ単独では単球の酸化的ノ１−ストに有意の刺激が無し） ことを立証する。

以上、本発明につき述べたが、これを多様に変更しうろことは明らかであろう。

これらの変更は本発明の精神および範囲から逸脱するものではないと考えられ、 これらの変更はすべて請求の範囲の記載に包含されるものとする。

％　　　掠すヱ（ミ灼−する措殖 χ　　　対照０圧ｌ陀ばお云え ７＝　　　　　　≠ヤ顕陽咀りＶｉａ♀レリーＦ寸ンネｌし哨云え％　　　虹照 （二汀丁ミあＦ（芭聾克 手続補正書 特許庁長官　　　深　沢　　　亘　　殿１、事件の表示 ＰＣＴ／ＵＳ９０１００３７９ ２、発明の名称 ＧＭ”−Ｃ５Ｆを用いる白血球機能障害の治療３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住所 名　称　　シエリング・コーポレーション４、代理人 住　所　　東京都千代田区大手町二丁目２番１号５、補正の対象 請求の範囲 特表平３−５０４９８０　（５） （別紙） （１）請求の範囲を以下の通り補正する。

ｒｌ、０ｉｆｉ乳動物における身体的損傷に付随する白血球機能障害の治療方法 であって、哺乳動物に白血球の機能を増強するのに有効な量のＧＭ−Ｃ８Ｆを投 与することよりなる、前記治療方法。」以上 国際調査報告 国際調査報告

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．哺乳動物における身体損傷に付随する白血球機能障害の治療方法であって、 哺乳動物に白血球の機能を増強するのに有効な量のＧＭ−ＣＳＦを投与すること よりなる、前記治療方法。
2. ２．ＧＭ−ＣＳＦを１回当たり約３−約３０マイクログラム／体重ｋｇの量で投 与することよりなる、請求の範囲第１項に記載の治療方法。
3. ３．ＧＭ−ＣＳＦが組み換えヒトｒｈＧＭ−ＣＳＦである、請求の範囲第１項ま たは第２項に記載の治療方法。
4. ４．投与が静脈内注入または注射により行われる、請求の範囲第１項ないし第３ 項のいずれかに記載の治療方法。
5. ５．投与が約４時間にわたって行われる、請求の範囲第１項ないし第４項のいず れかに記載の治療方法。
6. ６．用量が約３−約１５マイクログラム／体重ｋｇである、請求の範囲第１項な いし第５項のいずれかに記載の治療方法。
7. ７．身体損傷が熱傷である、請求の範囲第１項ないし第６項のいずれかに記載の 治療方法。
8. ８．哺乳動物における身体損傷に付随する白血球機能障害を哺乳動物に白血球の 機能を増強するのに有効な量のＧＭ−ＣＳＦを投与することにより治療する方法 に用いられる薬剤の製造のための、ＧＭ−ＣＳＦの使用。
9. ９．身体損傷に付随する白血球機能障害を伴う患者の治療のための、ＧＭ−ＣＳ Ｆの使用。
10. １０．身体損傷に付随する白血球機能障害を伴う患者の治療に用いられる、ＧＭ −ＣＳＦを含む薬剤組成物。