HU207229B - Process for producing pharmaceutical compositions containing gm-csf for treating leukocyte disfunction - Google Patents

Description

A találmány tárgya eljárás valamilyen fizikai trauma elsősorban hő okozta károsodás - által kiváltott leukocita diszfunkció kezelésére alkalmas, GM-CSF hatékony mennyiségét tartalmazó, új gyógyszerkészítmények előállítására (GM-CSF = Granulocita-MonocitaColoniaképzést Stimuláló Faktor).

A GM-CSF olyan limfokin anyag (serkenti az immunrendszer működését), melynek az immunsejtekre kifejtett, stimuláló hatása igen széleskörű, amint azt Burgess és Metcalf, Blood, 56:941 (1980), valamint Metcalf, Blood, 67:251 (1986) közleménye ismerteti. A megfigyelések szerint a GM-CSF emeli a szerzett immunhiány-szindrómában szenvedő betegek [Brandt és mtsai, N. Engl. J. Med., 318: 869 (1988)], valamint a kemoterápia okozta csontvelő-depresszióban szenvedők leukocitáinak számát [Antman és mtsai. New Engl. J. Med., 319:593 (1988)], és a szerzők véleménye szerint a különböző kolónia-stimuláló faktorok önmagukban vagy eritropoetinnel kombinálva és/vagy valamilyen vírusellenes hatású szerrel és/vagy interleukin2-vel (IL-2) együtt alkalmazva hatékonyak lehetnek AIDS-típusú megbetegedésben szenvedő egyének kezelése során (PCT/US87/03 204).

Bár a GM-CSF-et először azon képessége alapján azonosították, hogy serkenti a vérképzés prekurzor sejtjeinek proliferációját, később arra is fény derült, hogy számos tekintetben stimulálni képes az érett granulociták és makrofágok működését is. Ezen hatások a következők lehetnek: egyes, biológiailag aktív molekulák - például a prosztaglandin E - szintetizálása [Hancock és mtsai., J. Immunoi., 140: 3021 (1988) és Kurland és mtsai,, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76:2326 (1979)]; fokozott fagocita-aktivitás [Weisbart és munkatársai, Natúré, 332:647 (1988)]; a különböző membrán-markerek - például az IL-2 receptor [Hancock és munkatársai, J. Immunoi., 140:3021 (1988)] és a neutforil sejtek bakteriális eredetű formilmetionil-leucil-fenilalanin receptora, melyek szuperoxid anionok termelését váltják ki [Atkinson és munkatársai, Immunology, 64:519 (1988)] valamint az enzimaktivitás szabályozása, például a guanilát-cikláz serkentése és az adenilát-cikláz gátlása [Coffey és munkatársai, J. Immunoi., 140:2695 (1988)].

Fizikai trauma, például hő okozta károsodás esetén a fehérvérsejtek (WBC = white blood cells), elsősorban a monociták és a leukociták diszfunkciója figyelhető meg. Ez azt jelenti, hogy bár a fehérvérsejtek száma elegendő volna a megfelelő működéshez, azaz a fagocitózishoz és a szuperoxid képzéshez, amennyiben azok normálisan működnének, a leukociták diszfunkciója (kóros működése) következtében azonban az immunrendszer működési zavara (maifunkciója), illetve gátlása (csökkent működése, szupressziója) figyelhető meg. Az immunrendszer működési zavara sokkal inkább a leukociták diszfunkciójának, mintsem annak következtében jön létre, hogy a leukociták száma kórosan alacsony volna.

A szakterületen jártasak számára nyilvánvaló, hogy az ilyenfajta leukocita-diszfunkció veszélyezteti a fizikai traumát szenvedett betegek gyógyulását. Például, a magas hő okozta károsodást (égést) szenvedett betegeknél az ilyen diszfunkció fokozhatja a fertőzés kialakulásának kockázatát. Mostanáig nem sikerült jelentős haladást elérni a leukocita diszfunkció kezelésében in vivő körülmények között, hő okozta sérülést (égést) szenvedett betegeknél, valamint az ilyenfajta fertőzés klinikai következményeinek kezelésében.

Jelentős előrehaladást jelentene e szakterületen, ha sikerülne megfelelő kezelési eljárást és gyógyszerkészítményt találni a fizikai traumával, elsősorban a hő okozta károsodással kapcsolatos leukocita diszfunkció gyógyítására. A találmány célja ilyen kezelési eljárásra alkalmas gyógyszerkészítmények előállítása.

Meglepő és váratlan módon kiderült, hogy a fizikai jellegű traumákhoz, főként a hő okozta károsodáshoz társuló leukocita-diszfunkció hatékonyan kezelhető GM-CSF adagolásával. Azt is sikerült megfigyelni, hogy a hő okozta károsodást szenvedett betegeknek történő GM-CSF adagolás hatására fokozódott a leukociták működése, azaz a leukociták működésének hatékonyabbá válását lehetett észlelni. Az ilyenfajta kezelés hatására tehát lényegesen fokozódik a hő okozta károsodást szenvedett betegek fertőzésekre adott válaszreakciója. A leukocita-funkció GM-CSF adagolásával történő, in vivő hatékonyabbá válását meg kell különböztetni a kóros működésű leukociták számának puszta megnövekedésétől. A GM-CSF-nek a leukociták számát növelő hatása alapján nem volt várható, hogy alkalmas a leukocita diszfunkció kezelésére. Mivel a leukocita diszfunkció nemcsak hő okozta károsodásban, hanem a fizikai jellegű traumák más típusaiban is megfigyelhető, feltételezhetően az ilyen, egyéb típusú fizikai traumához társuló leukocita diszfunkció is hasonlóképpen kezelhető GM-CSF adagolásával.

A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmény segítségével biztosítható a fizikai traumához társuló leukocita diszfunkció kezelése emlősöknél - beleértve az embereket is -, hatékony mennyiségű GMCSF adagolásával, a leukociták működésének fokozása céljából.

A találmány szerint előállított gyógyszerkészítménnyel elsősorban a hő okozta károsodáshoz társuló leukocita diszfunkció kezelése biztosítható emlősöknél - beleértve az embereket is hatékony mennyiségű GM-CSF adagolásával, a leukociták működésének fokozása céljából.

A találmány tárgya tehát eljárás hatóanyagként GM-CSF-et tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására oly módon, hogy az ismert eljárással előállított GM-CSF-et a szokásos gyógyszerészeti segédanyagokkal összekeverve fizikai trauma következtében létrejövő leukocita diszfunkció kezelésére alkalmas gyógyszerkészítménnyé feldolgozzuk.

A fenti „ismert eljárás” meghatározása alatt a GMCSF előállítására ismert, a bejelentésünk elsőbbségi napja előtt a technika állását képező eljárásokat értjük.

A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmény alkalmazásának előnyeit az ábrák segítségével ismertetjük:

- az 1. ábra olyan, hő okozta károsodást szenvedett

HU 207 229 B betegek monocitáinak fokozott proliferációját szemlélteti grafikonos ábrázolás segítségével, akiknél GM-CSF kezelést alkalmaztak;

- a 2. és 3, ábra olyan, hő okozta károsodást szenvedett betegek monocitáinak fokozott oxidatív szaporodását szemlélteti, grafikonos ábrázolás segítségével, akiknél GM-CSF kezelést alkalmaztak;

- a 4. és 5. ábra grafikonjai azt mutatják, hogy nem észlelhető szignifikáns mértékű stimuláció a monociták oxidatív szaporodása esetében, az önmagában adott FMLP (formil-metionil-leucil-fenilalanin) adagolásától számított időszak folyamán, hő okozta károsodást szenvedett, GM-CSF-fel kezelt betegeknél.

A kezelt emlősök, emberek, és a felhasznált GMCSF a humán allotípusok egyike.

A GM-CSF-et tartalmazó gyógyszerkészítményt intravénásán adagoljuk - azaz injekció vagy infúzió formájában -, olyan hosszú időn keresztül, mely elegendő ahhoz, hogy létrejöjjön a GM-CSF leukocitafunkció hatékonyabbá tevő hatása anélkül, hogy jelentősen csökkenne a GM-CSF aktivitás (például a GMCSF metabolizációja következtében). A hatékony mennyiség általában körülbelül 3 és 30 mikrogramm GM-CSF között van naponta, testtömegkilogrammonként, intravénás infúzióban alkalmazva, körülbelül 30 perc és 24 óra közötti időtartam alatt. A hatékony mennyiség előnyösen körülbelül 3 és 15 mikrogramm GM-CSF testtömegkilogrammonként, intravénás infúzióban alkalmazva, körülbelül 2 és 6 óra közötti, előnyösebben körülbelül 2 és 4 óra közötti, legelőnyösebben naponta, testtömegkilogrammonként 3, 10, illetve 15 mikrogrammnak felelnek meg. Az adott esetben felhasznált dózis a beteg testtömegétől és a GM-CSF-fel szembeni toleranciájától függően változtatható.

Hacsak másképpen meg nem határozzuk, a „fizikai trauma” kifejezést a találmány leírásában olyan traumák esetére alkalmazzuk, melyek a szervezet különböző szöveteit és szerveit érik, beleértve a különböző szervrendszereket, az izomzatot, a csontrendszert, az érrendszert és így tovább. A trauma oka bármely olyan hatásmechanizmus vagy hatásmód lehet, mely elég erős ahhoz, hogy valamilyen károsodást hozzon létre. Ilyenek lehetnek például a következők: hő okozta sérülés (égés), elektromos áram vagy kémiai hatás okozta sérülések (égések), az egyéb traumás hatások, például balesetekből vagy tettlegességből származó sérülések, a traumás amputáció vagy hasonló károsodások.

Hacsak másképpen meg nem határozzuk, a „hő okozta károsodás” kifejezést a találmány leírásában olyan, az egyént érő élettani károsító hatás esetére alkalmazzuk, melyet a túlságosan erős hő okoz, megkülönböztetve az elektromosság és a kémiai anyagok által létrehozott károsodásoktól (égésektől).

Hacsak másképpen meg nem határozzuk, a „leukocita diszfunkció” kifejezést a találmány leírásában olyan kóros állapot jellemzésére használjuk, melyben a leukociták - például a monociták - működőképessége jelentősen lecsökkent, illetve teljesen hiányzik az a képességük, hogy meg tudják védeni az egyént az őt fenyegető fertőzésekkel szemben. A monociták és a granulociták néhány funkciója in vitro és in vivő körülmények között vizsgálható, a fagocitózis és/vagy a szuperoxid-képzés tanulmányozása segítségével.

Hacsak másképpen meg nem határozzuk, a „leukocita funkció” kifejezést a találmány leírásában a leukociták normális működésének jellemzésére alkalmazzuk - például a monociták esetében -, éspedig a fagocitózisban és/vagy a szuperoxid-képzésben játszott szerepük figyelembevételével.

Hacsak másképpen meg nem határozzuk, a „leukocita” kifejezést a találmány leírásában az orvostudományban általánosan elfogadott olyan értelemben használjuk, melynek értelmében ide sorolhatók a fehérvérsejtek különböző sejttípusai, például a mieloid-, a limfoid- és a monocita-típusú sejtek.

A találmány eljárást ismertet emlősök diszfunkciós leukocitái működésének hatékonyabbá tételére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására, olyan esetekben, amikor a leukocita diszfunkció valamilyen fizikai trauma, például hő okozta károsodás vagy egyéb kóros hatás következtében jött létre. A találmány szerint a GM-CSF hatékony mennyiségét adagoljuk, a leukociták működésének fokozásához elegendő hoszszúságú időn keresztül. A megfigyelések alapján a találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmény szignifikánsan csökkenti, illetve megszünteti a leukociták kóros működését (diszfunkcióját).

A találmány szerinti eljárásban bármilyen típusú, megfelelő GM-CSF felhasználható. Újabban számos laboratóriumban sikerült a GM-CSF-hez komplementer DNS-ek (cDNS-ek) klónozása és a megfelelő (aminosav)-szekvencia előállítása [(például Gough és munkatársai, Natúré, 309:163 (1984) (egér)]; [Lee és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:4360 (1985) (ember)]; [Wong és munkatársai, Science, 228:810 (1985) (ember és gibbon)]; [Cantrell és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:6250 (1985) (ember)]. Továbbá a nem-rekombináns GM-CSF-et különböző tenyészetek (kultúrák) felülúszójából is sikerült tisztítással kinyerni [például Burgers és munkatársai, Exp. Hematol., 9:893 (1981) (egér)]; [Sparrow és munkatársai, Exp. Hematol., 12:267 (1984) (patkány)]; [Gasson és munkatársai, Science, 230:1111 (1985) (ember)]; [Burgess és munkatársai, Blood, 69:43 (1987) (ember)]. Az emberi GM-CSF-ek esetében a nukleotidszekvencia és az aminosav-szekvencia heterogenitása figyelhető meg. Például, mind a treonin, mind pedig az izoleucin a 100-as helyen (helyzetben) található az N-terminális alaninhoz képest az emberi GM-CSF-ben, ami arra utal, hogy az emberi populációk körében a GM-CSF allél-formái, illetve polimorf alakjai fordulhatnak elő. Ezen kívül különböző „vezető” szekvenciák is lehetségesek az aminosav-szekvencia N-terminális helyzetében. Ezen vezető szekvenciák különböző hosszúságúak és különböző aminosav-összetételűek lehetnek, továbbá előfordulhat, hogy biológiailag aktívak, más esetben azonban biológiai aktivitás nélküliek lehetnek. A találmány szerinti eljárás során emberek

HU 207 229 Β kezelésére felhasznált GM-CSF előnyösen emberi GM-CSF (hGM-CSF), előnyösebben rekombináns emberi GM-CSF (rhGM-CSF), amint azt Lee és munkatársai ismertetik [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 4360 (1985)]; a tisztítás (finomítás) a 111886 bejelentési számú amerikai szabadalmi leírás szerint történik (bejelentve: 1987. október 23-án). Valamennyi fent említett irodalmi hivatkozást referenciaként tüntettük fel a találmányi leírásban, részben azért, mert a találmány szerinti eljárás során alkalmazható, előnyös GM-CSFtípusokat ismertetik - beleértve DNS- és aminosavszekvenciájukatmásrészt pedig amiatt, hogy a GMCSF előállítására és tisztítására (finomítására) vonatkozó eljárásokat is tárgyalják.

A találmány szerinti eljárásnak megfelelően az emlősöknek hatékony mennyiségű GM-CSF-et adagolunk. Hatékonynak azt a mennyiséget nevezzük, mely a kórosan működő (diszfunkciós) leukociták működésének fokozásához szükséges. Amint azt korábban már megállapítottuk, az emlős előnyösen ember, az előnyös GM-CSF pedig a rekombináns emberi GM-CSF (rhGM-CSF), Általában körülbelül napi 3 és 30 mikrogramm testsúlykilogrammonkénti mennyiség elegendő a legtöbb beteg esetében ahhoz, hogy a kórosan működő leukociták esetében elérjük a kívánt hatékonyság-fokozó hatást. Előnyösen körülbelül naponta 3 és 25 mikrogramm/testsúlykilogramm/nap adagolandó, még előnyösebben körülbelül 3-15 mikrogramm/testsúlykilogramm/nap, a legelőnyösebbek azonban a 3, 10, illetve a 15 mikrogramm/testsúlykilogramm/nap dózisok. Ezek közül is a legelőnyösebb a 10 míkrogramm/kg-os adag.

A GM-CSF hatékonyabb abban az esetben, ha oly módon adagoljuk, hogy a GM-CSF megfelelő vérkoncentrációja egy bizonyos időtartamon keresztül fenntartható, ellentétben a gyors adagolással, amikor a GMCSF vérszintje először hirtelen megemelkedik, majd ezt követően gyorsan lecsökken, a GM-CSF métábólizálódása következtében. Általában elegendő intravénás bólusz és/vagy infúzió beadása, körülbelül 30 perc és 24 óra közötti időtartam alatt. Előnyösen az ilyenfajta adagolás körülbelül 2 óra és 6 óra közötti időtartam alatt történik, előnyösebben körülbelül 2 és 4 óra közötti, legelőnyösebben azonban körülbelül 4 óra időtartam alatt. A GM-CSF adagolása történhet intramuszkulárisan (izomba adva), szubkután (bőr alá), helyileg alkalmazva, közvetlenül a nyílt sérülés területére, transzdermálisan (bőrön keresztül), nazálisán (orrspray formájában), perorálisan (száj-spray formájában), inszufflációval (behívással) vagy valamilyen hasonló módon. Ily módon tehát bármely olyan módszer alkalmazható, melynek segítségével hatékony dózisok adagolhatok, és elérhető a megfelelő vérkoncentráció fennmaradása bizonyos időtartamon át.

A GM-CSF, előnyösen az rhGM-CSF bármilyen hagyományos adagolási formában előállítható, például parenterális steril oldatok és szuszpenziók, valamint helyi adagolási formákban, amilyenek például a krémek, kenőcsök, oldatok, transzdermális (bőrön keresztül történő) adagolást biztosító szerek (például hagyományos rezervoár vagy matrix-tapasz típusúak) és hasonló adagolási formákban.

A fenti adagolási formákban előállított gyógyszerkészítmények bármilyen hagyományos, gyógyszerészetileg elfogadható kötőanyag és adalékanyag felhasználásával, hagyományos eljárások segítségével készíthetők.

Jelenleg a GM-CSF-et - előnyösen a rekombináns emberi GM-CSF-et (rhGM-CSF) - intravénásán adagoljuk. A beadandó oldatok liofilizált porokból rekonstruálhatók, és tartalmazhatnak még tartósítószereket, puffereket, diszpergáló szereket stb. is. Előnyösen az rhGM-CSF rekonstruálása történhet bármilyen, intravénás injekciók esetében általában felhasznált izotóniás folyadékkal, például tartósítószer-mentes, steril vízzel. Az rhGM-CSF maximális koncentrációja előnyösen nem haladja meg az 1500 mikrogramm milliliterenkénti értéket. Az adagolás történhet folyamatos intravénás infúzió vagy intravénás injekció formájában. A folyamatos infúzió esetében a napi dózist normál (fiziológiás) sóoldathoz adhatjuk, majd az oldat infundálása történhet mechanikus pumpa vagy a nehézségi erő segítségével.

Az alábbi példák csak szemléltető jellegűek, és semmiképpen sem szabad úgy tekinteni Őket, mintha bármilyen módon korlátoznák a találmány oltalmi körét. A szakterületen jártas egyének számára ugyanis nyilvánvaló, hogy az igénypontok szellemével és céljaival összhangban lévő változatok is lehetségesek.

A GM-CSF-nek a testfelületük 20-70%-án hő okozta károsodást szenvedett egyének (betegek) kórosan működő (diszfunkciós) leukocitáira kifejtett, hatékonyság-növelő hatását az alábbi vizsgálati jegyzőkönyv szerint határoztuk meg: olyan 18 éves, vagy annál idősebb betegek vettek részt a vizsgálatban, akiknél a testfelület 20-40%-át érintette a hő okozta károsodás, továbbá akiknek esetében a szív- és érrendszer működése már stabilizálódott vagy stabilizálódik, és légzőrendszeriik nem szenvedett inhalációs károsodást. E betegeket a károsodást követő 48 órán belül rekombináns humán GM-CSF-fel (rhGM-CSF) kezeltük. Ezt követően olyan betegeknek adagoltunk a károsodást követő 48 órán belül rekombináns humán GM-CSF-et (rhGM-CSF), akik 18 évesek, vagy annál idősebbek voltak, testfelületük 40-70%-a szenvedett hő okozta károsodást, szív- és érrendszerük működése már stabilizálódott, vagy a stabilizáció folyamatában volt, és nem szenvedtek inhalációs károsodást. Ezután pedig olyan, 18 éves vagy annál idősebb betegeknek adagoltunk rhGM-CSF-et a károsodást követő 48 órán belül, akiknél a testfelület 40-70%-a szenvedett hő okozta károsodást, érrendszerük működése már stabilizálódott, vagy a stabilizálás folyamata még tartott, és akiknél enyhe vagy mérsékelt inhalációs károsodás történt (xenon-izotópos fizikai vizsgálattal diagnosztizálva), az inhalációs károsodásnak azonban nem volt bronchoszkópiás jele. Az rhGM-CSF előállítása a Lee és munkatársai által leírtak szerint történt [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:4360 (1985)], Az rhGM-CSF-et liofilizált por formájában állítottuk elő; a kezelést vég1

HU 207 229 Β ző orvos, illetve gyógyszerész oly módon teheti ezt intravénás adagolásra alkalmassá, hogy először steril víz 1 ml-nyi mennyiségében feloldja, majd az így keletkező oldathoz 50 ml normál (fiziológiás) sóoldatot ad hozzá. A betegeknek előnyösen 3, 10, illetve 15 mikrogramm rhGM-CSF-et adagolunk testsúlykilogrammonként intravénásán (bólusz vagy infúzió formájában), 2-4 óra közötti időtartam - előnyösen 4 órás időszak - folyamán, napi egy alkalommal. Valamennyi GM-CSF dózist 3-5 egyénből álló betegcsoportnak adagoltuk.

A leukociták működésének meghatározása érdekében vérmintákat vettünk, in vitro körülmények között végzett analízis céljából. A vérmintákat a szakterület ismert módszerei segítségével vizsgáltuk. A fehérvérsejtek számának 50%-os, vagy annál nagyobb mértékű emelkedése az alapértékhez képest jól jelzi a terápiás hatékonyságot és klinikai szempontból jelentős eredményekre utal.

Valamennyi dózisszintre vonatkozó, összesített eredmények láthatók az 1-5. ábrákon. Az 1-5. ábrákon feltüntetett, „normál”, illetve „kontroll” kifejezések a normál, azaz hőkárosodást nem szenvedett betegcsoporttal nyert eredményekre vonatkoznak: az „égéskontroli” kifejezés a hő okozta károsodást szenvedett, de GM-CSF-fel nem kezelt betegek csoportját jelöli. A 2-5. ábrákon látható „pre” jelzés az előkezelésre („pretreatment”) utal, azaz ilyenkor nem történt GMCSF adagolás, az „1”, „8” és a „15” számok az x-tengelyen pedig azt mutatják, hány napig tartott az rhGMCSF-fel végzett kezelés.

Az 1. ábra a triciummal jelzett (triciált) timidin inkorporációjának összehasonlítását szemlélteti egy betegcsoport, valamint egy irodalomból vett kontrollcsoport között. Amint azt az 1. ábra mutatja, a 4 betegen végzett vizsgálatban (N = 4), több mint 10 nappal a hő okozta károsodást követően szignifikáns fokozódást figyeltek meg a monociták proliferációjában. Az 1. ábra két kontrollcsoportot mutat be: a bal szélen látható oszlop (N = 5) a normál kontrollcsoportot ábrázolja. Ezen egyéneknél nem fordult elő megbetegedés, például hő okozta károsodás. A középső oszlop viszont (N = 7) az égést követően több mint 15 nappal, olyan betegcsoport adatait tartalmazza, akiknél hő okozta károsodás történt.

A 2. és 3. ábra az emberi monociták oxidatív szaporodását ábrázolja, PMA stimuláció hatására. Ezen ábrák azt mutatják, hogy az rhGM-CSF adagolás 15 napon keresztül történő folytatásának hatására fokozódott a monociták oxidatív szaporodási mértéke.

A 4. és 5. ábra az emberi monociták oxidatív légzésének serkentését szemlélteti. Ezen ábrák azt mutatják, hogy a vizsgált időszak folyamán nem tapasztalható szignifikáns stimulációs (serkentő) hatás a monociták oxidatív szaporodására, önmagában adott FMLP következtében.

A találmány szerinti gyógyszerkészítmény előállítását mutatja be a következő példa.

Példa

250 pg Iiofilizált GM-CSF-et aszeptikus körülmények között 1,0 ml steril, injekciós vízben oldunk, majd az oldatot steril vízzel 50 ml-re hígítjuk. A kapott oldat infúziós beadásra alkalmas.

Claims (6)

1. Eljárás hatóanyagként GM-CSF-et tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy ismert eljárással előállított GM-CSF-et szokásos gyógyszerészeti segédanyagokkal együtt összekeverve fizikai trauma következtében kialakuló leukocita diszfunkció kezelésére alkalmas gyógyszerkészítménnyé feldolgozunk.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 3-30 pg/kg testtömeg GM-CSF adagot tartalmazó gyógyszerkészítményt állítunk elő.

3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 3-15 pg/kg testtömeg GM-CSF adagot tartalmazó gyógyszerkészítményt állítunk elő.

4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy GM-CSF-ként rekombináns emberi GM-CSF-et alkalmazunk.

5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy intravénás infúziós vagy injekciós oldatot állítunk elő.

6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzaljellemezve, hogy hő okozta károsodás kezelésére alkalmas gyógyszerkészítményt állítunk elő.