JP2005160489A - 標的ハイブリダイゼーション検出のための、プローブおよびクランプのバイナリー組成物ならびに方法 - Google Patents
標的ハイブリダイゼーション検出のための、プローブおよびクランプのバイナリー組成物ならびに方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2005160489A JP2005160489A JP2005047966A JP2005047966A JP2005160489A JP 2005160489 A JP2005160489 A JP 2005160489A JP 2005047966 A JP2005047966 A JP 2005047966A JP 2005047966 A JP2005047966 A JP 2005047966A JP 2005160489 A JP2005160489 A JP 2005160489A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- probe
- clamp
- target
- specific portion
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 0 CC(C=CC(*1)=O)C1=N Chemical compound CC(C=CC(*1)=O)C1=N 0.000 description 2
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/6818—Hybridisation assays characterised by the detection means involving interaction of two or more labels, e.g. resonant energy transfer
Abstract
プローブおよびクランプのバイナリー組成物は、標的ハイブリダイゼーション検出のための方法を実行する。
【解決手段】
プローブがエキソヌクレアーゼ切断のための基質である場合、組成物は、リアルタイム測定および終点測定によって、PCR産物の定量化および検出を提供する。プローブが増幅プライマーである場合、組成物はPCR産物の標識および検出のための改良された方法を提供する。プローブおよびクランプは、蛍光色素、消光剤、ハイブリダイゼーション安定化部分、化学発光色素、およびアフィニティーリガンドを用いて標識され得る。クランプは、2−アミノエチルグリシンPNAのような核酸アナログであり得る。
Description
本発明は、概して核酸ハイブリダイゼーションの分野に関し、より詳細には核酸増幅の組成物および方法に関する。
核酸ハイブリダイゼーションアッセイは、遺伝疾患の診断、ヒトの同定、微生物の同定、起源試験、ウイルス学、およびDNA配列決定における多様な適用を有する、現代生物学における重要なクラスの技術を含む。プライマー伸長反応は、多くの核酸ハイブリダイゼーションアッセイおよび増幅方法の重要な成分である。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)増幅方法は、クローニング、遺伝子発現の分析、DNA配列決定、遺伝子マッピング、薬物発見などにおける進歩を可能にしてきた(Gilliland,1990;Bevan,1992;Green,1991;McPherson,1995)。
本発明は、核酸ハイブリダイゼーションアッセイにおいて有用であるプローブおよびクランプの新規なバイナリー組成物、ならびにこのような組成物を使用する方法に関する。
ここで、本発明の好ましい実施形態への参照が詳細になされ、これらの例は、添付の図面に例示される。本発明を好ましい実施形態に関して記載するが、それらは、本発明をこれらの実施形態に制限する意図ではないことが理解される。反対に、本発明は、代替物、改変物および等価物を含むことを意図し、これらは、添付の請求項によって規定されるように、本発明内に含まれ得る。
他であることが記載されていなければ、本明細書で用いられるとき、以下の用語および語句は、以下の意味を有することが意図される:
用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」または「オリゴヌクレオチド」は、2本鎖および1本鎖のデオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、それらのαアノマー形態などを含む、ヌクレオチドモノマーまたはそのアナログのポリマーを意味する。通常、これらのモノマーは、ホスホジエステル結合で連結されており、ここで用語「ホスホジエステル結合」は、結合する対イオン、例えば、H+、NH4 +、Na+を含む、ホスホジエステル結合またはそのリン酸アナログを含む結合をいう。代表的には、ポリヌクレオチドは、数モノマーユニット、例えば、5−40から、数千モノマーユニットまでのサイズの範囲にある。ポリヌクレオチドが、例えば「ATGCCTG」のような文字の配列によって表されるときは常に、これらのヌクレオチドは、左から右に5’から3’への順であること、そして他であることが記載されていなければ、「A」はデオキシアデノシン、「C」はデオキシシチジン、「G」はデオキシグアノシン、および「T」はデオキシチミジンを示すことが理解される。
(A.プローブおよびプライマー)
プローブまたはプライマーは、標的に対して配列特異的にハイブリダイズし得る任意の構造であり得る。好ましくは、プローブおよびプライマーは、オリゴヌクレオチドおよび核酸アナログである。一般に、本発明のバイナリー組成物の設計および合成は従来の教示に従う。好ましくは、オリゴヌクレオチドおよび核酸アナログは、ホスホルアミダイト化学(Beaucage、1992;Caruthers、1993)を用いる、自動化された、固相DNA合成機上で合成される。このオリゴヌクレオチド合成のホスホルアミダイト法は、その効率的かつ迅速なカップリング、および開始ヌクレオチドモノマーの安定性のために好ましい方法である。代表的には、合成は、固体支持体に結合した生長するポリヌクレオチド鎖を用いて実施され、その結果、液相中の過剰の試薬は、濾過により容易に除去され、それによってサイクル間の精製工程の必要性を排除し得る。
Biosystems Model 394 DNA/RNA合成機のUsers Manualに記載のように濃水酸化アンモニウムを室温にて1時間用いる処理により、支持体から切断され得る。塩基保護基は、85℃で1時間または65℃で3時間、この混合物を加熱することにより除去され得る。オリゴヌクレオチドは、逆相HPLC、アニオン交換HPLC、キャピラリーゲル電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、およびその他の従来技法(Andrus、1995)により分析および精製され得る。
クランプは:(i)バイナリー組成物のプローブのクランプ特異的部分に配列特異的なハイブリダイゼーションを行い、そして(ii)1つ以上の標識を保持し得る、任意の構造であり得る。好ましくは、クランプは:(i)高親和性、(ii)高特異性、(iii)高溶解性、(iv)非伸長性、(v)化学的安定性、および(vi)増幅の非妨害性を有する。好ましくは、クランプは、オリゴヌクレオチドまたは核酸アナログ、例えばPNAを含む。このプローブおよびクランプは、ワトソン/クリックおよびその他の塩基対合相互作用(Froehler、1997;Rumney、1995)により結合して、2重らせんまたは3重らせん構造のいずれかを形成し得る(図2)。このクランプは、1つ以上の共有結合された標識を有する。このバイナリー組成物のクランプとプローブとの間の親和性は、核酸ハイブリダイゼーションアッセイ条件に耐えるに十分強い。
プローブおよびクランプは、核酸塩基、糖、および/またはヌクレオチド内部分への改変を保持する種々の核酸アナログを含み得る。
バイナリー組成物のプローブおよびクランプ上での標識は、検出の簡易化、親和性の増大、およびハイブリダイゼーションの安定化を含む種々の機能に貢献する。オリゴヌクレオチドおよび核酸アナログに標識を連結するための方法は、周知である(Hermanson、1996)。標識は、オリゴヌクレオチドおよび核酸アナログの場合では;(i)末端、例えば、プローブの5’および3’末端、(ii)ヌクレオチド間結合、(iii)糖類、および(iv)核酸塩基基を含む種々の連結部位で連結され得る。
本発明のプローブおよびクランプのバイナリー組成物は、このプローブが相補的標的にハイブリダイズする任意のハイブリダイゼーションアッセイで使用され得る(図2)。
プライマーは、増幅時にPCR産物の部分となる保存性ホモピリミジン配列を5’末端に有し得る。標識クランプは、同様のホモピリミジン配列を有し、PCR産物の3’末端にホモプリン相補配列を有する、検出可能な二重鎖または三重鎖構造を特異的に形成する(図7)。従って、標識クランプの単一合成は、多くの標識PCR実験に十分であり得る。
本発明はさらに、以下の実施例の考慮によって、明白にされる。この実施例は、本発明の純粋な例示であると意図され、いかなる様式においてもその範囲を限定するように意図されない。
A. 5’蛍光色素−プローブ
GTT1−グルタチオンS−トランスフェラーゼ、θクラスについてのヒト遺伝子(Pemble,1994)
B. 3’消光剤−プローブ
PNAの自動合成を、ABI Model 394 DNA/RNA合成機または433Aペプチド合成機(Perkin−Elmer Co.)を用いて、合成機製造業者の使用説明書およびEdholm,1993に記載の一般的手順に従って行った。
TFA トリフルオロ酢酸
HATU 1−ヒドロキシ−7−アザベンゾトリアゾール−テトラメチルウラニウム(tetramethyluronium)ヘキサフルオロホスフェートDCM ジクロロメタン
DMA ジメチルホルムアミド
(表.Model433A合成機におけるPNA合成サイクル)
PNAの合成を、標準合成技術ならびに核酸塩基(Abz、Cbz、Gibu、T)および一級アミノ(MMT、FmocまたはBoc)保護基を用いて行った。3mlの反応容器を440μlの総反応容積を有する5μmoleスケールで使用する。合成の終りで、このPNAをTFMSA(トリフルオロメタンスルホン酸)を用いて室温で1時間切断させ、続いて、粗PNAのエーテル沈殿をする。
PNA/DNAキメラの自動合成を、Applied Biosystems
Model 394 DNA/RNA合成機または433Aペプチド合成機を用いて、使用説明書およびUhlmann、1996;Van der laan、1997;Vinayak、1997に記載される一般的手順に従って行った。
A. 消光剤−PNAクランプ
標識を、100μlのDMFまたはNMP中に溶解したTAMRAまたはNTBの5mgのNHSエステルおよび10μlのDIEAを支持体結合PNAに添加し、そして、2〜18時間(代表的に終夜)反応させることにより、行った。この支持体をDMFおよび引き続いてDCMを用いる標識の後、切断の前に洗浄した。
MGB1のカルボン酸(Gong、1997)(5mg、0.010mmole)を、100μlDMF中に溶解し(図11)、そして0.95当量のHATU(DMF中0.2m)および5μlのDIEAの添加によって活性化した。この活性化MGB1溶液を、支持体結合PNAに添加し、そして室温で1時間カップリングさせた。次いで、この樹脂をDMFおよびDCM中で洗浄し、続いて、切断した。
CDPI3(図11)を、Fmoc−CDPI(Lukhtanov、1995)の3つの継続的なカップリングによってPNAに付着させ、CDPI3標識PNAを得た。Fmoc(5mg、0.012mmole)で保護した、CDPIモノマー単位、1,2−ジヒドロ−(3H)−ピロロ[3,2−e]インドール−7−カルボキシレートを、100μlのNMP中に溶解し、そして0.95当量のHATU(DMF中0.2M)および2当量のDIEA(DMF中0.4m)によって活性化した。室温で1時間後、活性化Fmoc−CDPI溶液を、この支持体結合PNAに添加し、そして室温でもう1時間カップリングさせた。樹脂を、20mlのDMFを用いるカップリングの後洗浄した。Fmocを、室温で、ピペリジン:DMF(1:4)を用いる10分間の樹脂支持体処置によって除去した。このカップリングサイクルおよび脱保護サイクルを、合計3回の手動のカップリングのすべてについて、さらに2回繰り返した。
3つのクランプ(配列番号19,20,21)のプローブ(配列番号1)へのハイブリダイゼーションの速度を、消光の関数として測定した。ハイブリダイゼーションおよびクランプ消光剤NTBによる消光の際のプローブのFAM色素からの蛍光強度[F]の減少を、60℃でABI Model 7700上で測定した。当量の、クランプ(100nM)およびプローブ(100nM)を、95℃で1分間混合し、60℃に冷却し、そして[F]を29分間測定した(図14)。プローブの消光の有意な加速を、4倍過剰のクランプ(400nM)を用いて達成した(ここで、消光を、15秒以内に3つのクランプの各々を用いて実質的に完了させた)(図15)。
以下の試薬を混合し、そして25μlをPCRのために各々のサンプル容器に分配した:
Tris−HCl、グリセロール、10mm MgCl2、dATP、dCTP、ジアザdGTP、dUTP、0.1u/μlのAmplitaq Gold DNAポリメラーゼ、Amperase UNGおよび受動的参照物を含む12.5μl Universal PCR Master Mix (PE Biosystems, P/N 4304437)
900nM(最終濃度):GTT1順方向標的プライマー:
5’GCAAATATAAGGTCCCTGACTACTGGTA3’ (配列番号44)
900nM(最終濃度):GTT1逆方向標的プライマー:
5’GTGCTGCCATGCCAGGTACT3’ (配列番号45)
100nM プローブおよび400 nM クランプ組成物
10μl(約20ng) ゲノム標的DNA
標的サンプルを熱サイクリング条件(50℃にて2分間で開始し、95℃で10分維持し、次いで95℃で15秒の変性ならびに60℃での1分間のアニーリングならびに伸張の40サイクルによって増幅させた。熱サイクリングおよびリアルタイム蛍光検出を、ABI PRISMTM7700配列検出システム(Perkin−Elmer Co.)において行った。好ましい終点検出システムは、ABI PRISMTM7200Sequence Detection Systemである。
5’FAM−CCTGCAGGCCCGTGCCCGT−TAMRA3’ 配列番号43
の存在下で増幅した。リアルタイムのPCR検出をバックグラウンド蛍光の減算(ΔRn)(図18)を用いて、およびバックグラウンド蛍光の減算を使用せずに(Rn)(図19)、ABI Model 7700において測定した。CTにおける有意な差異は、バイナリープローブ/クランプ組成物とTaqmanプローブとを比較する場合、測定されなかった。
本発明は以下を提供する。
(1) 標的ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズするためのバイナリー組成物であって、上記バイナリー組成物は、以下:
標的特異的部分およびクランプ特異的部分を含むプローブであって、ここで、上記標的特異的部分が、標的ポリヌクレオチド配列に配列特異的に結合することが可能である、プローブ;および
プローブ特異的部分、1つ以上の標識、ならびに以下:核酸塩基アナログ、糖アナログ、およびヌクレオチド間アナログから選択される少なくとも1つの核酸アナログを含むクランプであって、ここで、上記プローブ特異的部分が、上記プローブの上記クランプ特異的部分に配列特異的に結合することが可能であり、そして上記クランプは、上記標的ポリヌクレオチドに配列特異的に結合することが不可能である、クランプ、
を含み、
ここで、上記標識の検出の間、上記プローブの上記クランプ特異的部分は、上記クランプの上記プローブ特異的部分に結合したままである、
バイナリー組成物。
(2) 項目1に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記プローブの上記クランプ特異的部分および上記クランプの上記プローブ特異的な塩基対部分が二重鎖を形成する、バイナリー組成物。
(3) 項目1に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記プローブの上記クランプ特異的部分および上記クランプの上記プローブ特異的な塩基対部分が三重鎖を形成する、バイナリー組成物。
(4) 上記プローブが6〜100のヌクレオチドを含む、項目1に記載のバイナリー組成物。
(5) 上記プローブの上記クランプ特異的部分がプリンヌクレオチドを含む、項目1に記載のバイナリー組成物。
(6) 上記クランプの上記プローブ特異的部分がピリミジン核酸塩基アナログを含む、項目1に記載のバイナリー組成物。
(7) 上記クランプが6〜50のヌクレオチドアナログを含む、項目1に記載のバイナリー組成物。
(8) 上記クランプ配列が(CAG)n(ここで、n=1〜10)を含む、項目1に記載のバイナリー組成物。
(9) 項目1に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記クランプ配列が、(TCC)nおよび上記プローブ配列(GGA)n(ここで、n=1〜10)に結合する核酸アナログを含む、バイナリー組成物。
(10) 項目1に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記プローブが、以下:核酸塩基アナログ、糖アナログ、およびヌクレオチド間アナログからなる群から選択される核酸アナログを含む、バイナリー組成物。
(11) 項目10に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記核酸塩基アナログが、以下:C−5−アルキルピリミジン、2,6−ジアミノプリン、2−チオピリミジン、C−5−プロピンピリミジン、7−デアザプリン、イソシチジン、プソイドイソシチジン、イソグアノシン、4(3H)−ピリミドン、ヒポキサンチン、8−オキソプリン、および万能塩基からなる群から選択される、バイナリー組成物。
(12) 項目10に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記糖アナログが、以下:2’−O−アルキル−リボヌクレオチド、2’−O−メチル−リボヌクレオチド、2’−O−アリル−リボヌクレオチド、2’−アリルリボヌクレオチド、2’−ハロ−リボヌクレオチド、2’−O−メトキシエチル−リボヌクレオチド、2’−分枝基−リボヌクレオチド、2’−O−分枝基−リボヌクレオチド、4’−α−アノマーヌクレオチド、および1’−α−アノマーヌクレオチドからなる群から選択される、バイナリー組成物。
(13) 項目10に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記ヌクレオチド間アナログが、以下:2−アミノエチルグリシン(PNA)、2’−5’−結合、逆方向3’−3’結合、逆方向5’−5’結合、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、非架橋N−置換ホスホルアミデート、アルキル化ホスホトリエステル分枝構造、および3’−N−ホスホルアミデートからなる群から選択される、バイナリー組成物。
(14) 上記クランプが、非塩基対の、非ヌクレオシドリンカーを含む、項目1に記載のバイナリー組成物。
(15) 上記クランプが、1つ以上の2−アミノエチルグリシン(PNA)モノマー単位を含む、項目1に記載のバイナリー組成物。
(16) 項目1に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記クランプが、以下:末端、核酸塩基、ヌクレオチド間結合、糖、アミノ基、スルフィド基、およびカルボキシル基からなる部位に付着される1つ以上の標識を有する、バイナリー組成物。
(17) 上記プローブが1つ以上の標識を含む、項目1に記載のバイナリー組成物。
(18) 項目17に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記標識が以下:5’末端、3’末端、核酸塩基、ヌクレオチド間結合、および糖からなる群から選択される部位に付着される、バイナリー組成物。
(19) 項目1および17に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記クランプ標識および上記プローブ標識が、以下:ハイブリダイゼーション安定化部分、蛍光色素、蛍光消光剤、化学発光色素、アミノ酸、およびアフィニティーリガンドからなる群から選択される、バイナリー組成物。
(20) 項目19に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記ハイブリダイゼーション安定化部分が、以下:マイナーグルーブ結合剤、インターカレーター、および架橋官能基からなる群から選択される、バイナリー組成物。
(21) 項目20に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記マイナーグルーブ結合剤が、以下:Hoechst 33258、CDPI1-3、MGB1、ネトロプシン、およびジスタマイシンからなる群から選択される、バイナリー組成物。
(22) 項目19に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記蛍光色素が、以下:FAM、TET、HEX、JOE、TAMRA、ROX、VIC、NED、4,7−ジクロロ−フルオレセイン、4,7−ジクロロ−ローダミン、およびシアニンからなる群から選択される、バイナリー組成物。
(23) 項目19に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記蛍光消光剤が、以下:TAMRA、NTB、ROX、DABCYL、DABSYL、マラカイトグリーン、およびシアニンからなる群から選択される、バイナリー組成物。
(24) 項目19に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記化学発光色素が、以下の構造を有する化学発光前駆体からなる群から選択され:
(25) 項目19に記載のバイナリー組成物であって、ここで、上記リガンドが、以下:ビオチン、ジニトロフェニル、ジゴキシゲニン、コレステロール、ポリエチレンオキシ、およびペプチドからなる群から選択される、バイナリー組成物。
(26) 標的ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズするためのバイナリー組成物であって、以下:
標的特異的部分およびクランプ特異的部分を含むプローブであって、ここで、上記標的特異的部分は、標的ポリヌクレオチド配列に配列特異的に結合することが可能である、プローブ;および
2つのプローブ特異的部分、1つ以上の標識、ならびに以下:核酸塩基アナログ、糖アナログ、およびヌクレオチド間アナログから選択される少なくとも1つの核酸アナログを含むクランプであって、ここで、上記2つのプローブ特異的部分は、上記プローブの上記クランプ特異的部分に配列特異的に結合し、三重鎖を形成し得る、クランプ、
を含む、バイナリー組成物。
(27) 標的ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズするためのバイナリー組成物であって、以下:
標的特異的部分およびクランプ特異的部分を含むプローブであって、ここで、上記標的特異的部分は、標的ポリヌクレオチド配列に配列特異的に結合することが可能である、プローブ;および
プローブ特異的部分、1つ以上の標識、ならびに以下:核酸塩基アナログ、糖アナログ、およびヌクレオチド間アナログから選択される少なくとも1つの核酸アナログを含むクランプであって、ここで、上記プローブ特異的部分は、上記プローブの上記クランプ特異的部分に配列特異的に結合することが可能であり、そして上記クランプは、上記標的ポリヌクレオチドに配列特異的に結合することが不可能である、クランプ、
を含み、
ここで上記標識の1つは、上記標的の上記プローブへの結合を安定化するハイブリダイゼーション安定化部分である、
バイナリー組成物。
(28) 標的ポリヌクレオチド配列を検出するための方法であって、以下の工程:
プローブおよびクランプのバイナリー組成物を提供する工程であって、上記プローブおよびクランプのバイナリー組成物が、以下:
標的特異的部分およびクランプ特異的部分を含み、ここで、上記標的特異的部分は、標的ポリヌクレオチド配列に配列特異的に結合することが可能である、プローブ;および
プローブ特異的部分、1つ以上の標識、ならびに以下:核酸塩基アナログ、糖アナログ、およびヌクレオチド間アナログから選択される少なくとも1つの核酸アナログを含み、ここで、上記プローブ特異的部分は、上記プローブの上記クランプ特異的部分に配列特異的に結合することが可能であり、そして上記クランプは、上記標的ポリヌクレオチドに配列特異的に結合することが不可能である、クランプ;
を含む、工程;
上記プローブの上記標的特異的部分を、上記標的ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズさせる工程;
上記クランプの上記プローブ特異的部分を上記プローブの上記クランプ特異的部分にハイブリダイズさせる工程;ならびに
上記バイナリープローブを検出する工程、
を包含する、方法。
(29) ポリメラーゼ連鎖反応生成物を検出するための方法であって、以下の工程:
プローブおよびクランプのバイナリー組成物を提供する工程であって、上記プローブおよびクランプのバイナリー組成物が、以下:
標的特異的部分、クランプ特異的部分および1つ以上の標識を含み、ここで上記標的特異的部分は、標的ポリヌクレオチド配列に配列特異的に結合することが可能である、プローブ;および
プローブ特異的部分、1つ以上の標識、ならびに以下:核酸塩基アナログ、糖アナログ、およびヌクレオチド間アナログから選択される少なくとも1つの核酸アナログを含み、ここで、上記プローブ特異的部分は、上記プローブの上記クランプ特異的部分に配列特異的に結合することが可能であり、そして上記クランプは、上記標的ポリヌクレオチドに配列特異的に結合することが不可能である、クランプ;
を含む、工程;
上記プローブの上記標的特異的部分を、上記標的ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズさせる工程;
上記クランプの上記プローブ特異的部分を上記プローブの上記クランプ特異的部分にハイブリダイズさせる工程;ならびに
エキソヌクレアーゼ活性、PCRプライマー、およびヌクレオシド5’トリホスフェートを有するDNAポリメラーゼを用いて、上記標的を増幅する工程、
上記ポリメラーゼのエキソヌクレアーゼ活性により、上記プローブを切断する工程、ならびに
上記標識を検出する工程、
を包含する、方法。
(30) 項目29に記載の方法であって、ここで上記標識が、リアルタイムでか、または標的増幅の終点で、発せられる蛍光をモニターすることによって検出される、方法。
(31) ポリメラーゼ連鎖反応生成物を標識するための方法であって、以下の工程:
標的特異的部分およびクランプ特異的部分を含み、ここで上記標的特異的部分は、標的ポリヌクレオチド配列に配列特異的に結合することが可能である、プライマー;および
プライマー特異的部分、1つ以上の標識、ならびに以下:核酸塩基アナログ、糖アナログ、およびヌクレオチド間アナログから選択される少なくとも1つの核酸アナログを含み、ここで、上記プライマー特異的部分は、上記プライマーの上記クランプ特異的部分に配列特異的に結合し得る、クランプ;
を提供する工程;ならびに
DNAポリメラーゼ、1つ以上のバイナリープライマーおよびクランプの組成物、1つ以上の対向鎖プライマー、およびヌクレオシド5’トリホスフェートを用いて、上記標的を増幅する工程であって、
ここで、1つ以上の標識ポリメラーゼ連鎖反応生成物が生じる、工程
を包含する、方法。
(32) 上記標識が検出可能な蛍光色素である、項目31に記載の方法。
(33) ポリメラーゼ連鎖反応生成物を検出するための方法であって、以下の工程:
3’末端に標的特異的部分および5’末端にホモピリミジン配列部分を含み、ここで上記標的特異的部分は、標的ポリヌクレオチド配列に配列特異的に結合することが可能である、1つ以上のプライマー;および上記ホモピリミジン配列、1つ以上の標識、ならびに以下:核酸塩基アナログ、糖アナログ、およびヌクレオチド間アナログから選択される少なくとも1つの核酸アナログを含むクランプ、を提供する工程;
DNAポリメラーゼ、1つ以上の対向鎖プライマー、およびヌクレオシド5’トリホスフェートを用いて、上記標的を増幅する工程;ならびに
上記標識を検出する工程であって、
ここで、上記クランプの上記ホモピリミジン配列が、上記ポリメラーゼ連鎖反応生成物の3’末端で、上記ホモピリミジン配列の相補体に結合する、工程
を包含する、方法。
(34) 上記標識が検出可能な蛍光色素である、項目33に記載の方法。
Claims (1)
- 標的ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズするためのバイナリー組成物であって、該バイナリー組成物は、以下:
標的特異的部分およびクランプ特異的部分を含むプローブであって、ここで、該標的特異的部分が、標的ポリヌクレオチド配列に配列特異的に結合することが可能である、プローブ;および
プローブ特異的部分、1つ以上の標識、ならびに以下:核酸塩基アナログ、糖アナログ、およびヌクレオチド間アナログから選択される少なくとも1つの核酸アナログを含むクランプであって、ここで、該プローブ特異的部分が、該プローブの該クランプ特異的部分に配列特異的に結合することが可能であり、そして該クランプは、該標的ポリヌクレオチドに配列特異的に結合することが不可能である、クランプ、
を含み、
ここで、該標識の検出の間、該プローブの該クランプ特異的部分は、該クランプの該プローブ特異的部分に結合したままである、
バイナリー組成物。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US09/232,000 US6432642B1 (en) | 1999-01-15 | 1999-01-15 | Binary probe and clamp composition and methods for a target hybridization detection |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000593170A Division JP4644370B2 (ja) | 1999-01-15 | 2000-01-14 | 標的ハイブリダイゼーション検出のための、プローブおよびクランプのバイナリー組成物ならびに方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008195452A Division JP2009017882A (ja) | 1999-01-15 | 2008-07-29 | 標的ハイブリダイゼーション検出のための、プローブおよびクランプのバイナリー組成物ならびに方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2005160489A true JP2005160489A (ja) | 2005-06-23 |
JP2005160489A5 JP2005160489A5 (ja) | 2006-01-19 |
Family
ID=22871476
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000593170A Expired - Lifetime JP4644370B2 (ja) | 1999-01-15 | 2000-01-14 | 標的ハイブリダイゼーション検出のための、プローブおよびクランプのバイナリー組成物ならびに方法 |
JP2005047966A Withdrawn JP2005160489A (ja) | 1999-01-15 | 2005-02-23 | 標的ハイブリダイゼーション検出のための、プローブおよびクランプのバイナリー組成物ならびに方法 |
JP2008195452A Pending JP2009017882A (ja) | 1999-01-15 | 2008-07-29 | 標的ハイブリダイゼーション検出のための、プローブおよびクランプのバイナリー組成物ならびに方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000593170A Expired - Lifetime JP4644370B2 (ja) | 1999-01-15 | 2000-01-14 | 標的ハイブリダイゼーション検出のための、プローブおよびクランプのバイナリー組成物ならびに方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008195452A Pending JP2009017882A (ja) | 1999-01-15 | 2008-07-29 | 標的ハイブリダイゼーション検出のための、プローブおよびクランプのバイナリー組成物ならびに方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US6432642B1 (ja) |
EP (1) | EP1141387B1 (ja) |
JP (3) | JP4644370B2 (ja) |
AT (1) | ATE329056T1 (ja) |
AU (1) | AU771650B2 (ja) |
CA (1) | CA2360543C (ja) |
DE (1) | DE60028534T2 (ja) |
WO (1) | WO2000041549A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009506759A (ja) * | 2005-09-01 | 2009-02-19 | コーベット ライフ サイエンス ピーティーワイ リミテッド | 核酸の増幅、定量化、及び同定の方法。 |
Families Citing this family (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6432642B1 (en) * | 1999-01-15 | 2002-08-13 | Pe Corporation (Ny) | Binary probe and clamp composition and methods for a target hybridization detection |
EP1161563A2 (en) * | 1999-03-15 | 2001-12-12 | PE Corporation (NY) | Probe/mobility modifier complexes for multiplex nucleic acid detection |
US7118860B2 (en) * | 1999-10-29 | 2006-10-10 | Stratagene California | Methods for detection of a target nucleic acid by capture |
US7422850B2 (en) * | 2000-05-19 | 2008-09-09 | Eragen Biosciences, Inc. | Materials and methods for detection of nucleic acids |
US20030082549A1 (en) * | 2000-08-30 | 2003-05-01 | Xiangjun Liu | Method for determining alleles |
DE60137649D1 (de) | 2000-10-14 | 2009-03-26 | Eragen Biosciences Inc | Nachweissysteme auf festen trägern und methoden zur verwendung von nicht-standardbasen |
US6818420B2 (en) | 2002-02-27 | 2004-11-16 | Biosource International, Inc. | Methods of using FET labeled oligonucleotides that include a 3′-5′ exonuclease resistant quencher domain and compositions for practicing the same |
JPWO2003100095A1 (ja) * | 2002-05-08 | 2005-09-22 | アークレイ株式会社 | 標的核酸の検出法 |
WO2005001129A2 (en) * | 2003-06-06 | 2005-01-06 | Applera Corporation | Mobility cassettes |
GB0320235D0 (en) * | 2003-08-29 | 2003-10-01 | Molecular Light Tech Res Ltd | Estimation of activity or inhibition of processes involved in nucleic acid modification using chemiluminescence quenching |
US7575863B2 (en) | 2004-05-28 | 2009-08-18 | Applied Biosystems, Llc | Methods, compositions, and kits comprising linker probes for quantifying polynucleotides |
WO2006020947A2 (en) | 2004-08-13 | 2006-02-23 | Epoch Biosciences, Inc. | Phosphonate fluorescent dyes and conjugates |
US7767834B2 (en) * | 2004-08-13 | 2010-08-03 | Elitech Holding B.V. | Phosphonylated fluorescent dyes and conjugates |
JP2008513028A (ja) * | 2004-09-21 | 2008-05-01 | アプレラ コーポレイション | マイクロRNA(miRNA)の二色リアルタイム/エンドポイント定量化 |
US7588921B1 (en) * | 2004-09-22 | 2009-09-15 | University Of Central Florida Research Foundation, Inc. | Messenger RNA profiling: body fluid identification using multiplex real time-polymerase chain reaction (q-PCR) |
WO2006081426A2 (en) | 2005-01-28 | 2006-08-03 | Applera Corporation | Compositions and methods for terminating a sequencing reaction at a specific location in a target dna template |
JP2008535518A (ja) * | 2005-04-14 | 2008-09-04 | アプレラ コーポレイション | プソイドイソシトシン核酸塩基誘導体を含む3’改変オリゴヌクレオチド、およびプライマーまたはプローブとしてのその適用 |
GB0510979D0 (en) | 2005-05-28 | 2005-07-06 | Kbiosciences Ltd | Detection system for PCR assay |
FR2900158A1 (fr) * | 2006-04-25 | 2007-10-26 | Biomerieux Sa | Nouvelle sonde de detection agissant par reconnaissance moleculaire |
US7833716B2 (en) * | 2006-06-06 | 2010-11-16 | Gen-Probe Incorporated | Tagged oligonucleotides and their use in nucleic acid amplification methods |
JP2009545316A (ja) * | 2006-07-31 | 2009-12-24 | ワンリ ビ | 可逆的に修飾されたオリゴヌクレオチドを使用する核酸増幅 |
US9045522B2 (en) | 2006-07-31 | 2015-06-02 | Wanli Bi | Nucleic acid amplification using a reversibly modified oligonucleotide |
WO2008021446A2 (en) * | 2006-08-15 | 2008-02-21 | Genetag Technology, Inc. | Probe-antiprobe compositions and methods for dna or rna detection |
FR2906532B1 (fr) * | 2006-09-28 | 2008-12-12 | Biomerieux Sa | Nouvel oligonucleotide marque |
US9938641B2 (en) * | 2006-12-18 | 2018-04-10 | Fluidigm Corporation | Selection of aptamers based on geometry |
EP1995327A1 (en) * | 2007-05-21 | 2008-11-26 | Humboldt Universität zu Berlin | Probe for detecting a particular nucleic acid sequence |
US20110189665A1 (en) * | 2007-08-13 | 2011-08-04 | Miller Jesse D | Methods for detecting drug-resistant microbes |
HUE034561T2 (en) * | 2008-06-11 | 2018-02-28 | Orion Pharma Uk Ltd | Isothermal nucleic acid amplification |
FR2933410B1 (fr) * | 2008-07-04 | 2010-08-20 | Biomerieux Sa | Nouvelle sonde de detection |
US8346485B2 (en) | 2008-11-25 | 2013-01-01 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Methods and apparatuses for estimating initial target nucleic acid concentration in a sample by modeling background signal and cycle-dependent amplification efficiency of a polymerase chain reaction |
EP2483425B1 (en) * | 2009-09-28 | 2016-08-24 | Igor Kutyavin | Methods and compositions for detection of nucleic acids based on stabilized oligonucleotide probe complexes |
WO2012106668A2 (en) * | 2011-02-03 | 2012-08-09 | Fluidigm Corporation | Multifunctional probe-primers |
KR102012690B1 (ko) * | 2011-07-12 | 2019-08-21 | 주식회사 파나진 | 평행 결합 구조의 이중 혼성화 pna 프로브 시스템 |
US9133509B2 (en) | 2012-03-22 | 2015-09-15 | Lgc Genomics Limited | Polymerase chain reaction detection system |
KR20160036528A (ko) | 2013-04-25 | 2016-04-04 | 오리온 디아그노스티카 오와이 | 가닥―침입 기반된 dna 증폭 방법 |
CN110283888B (zh) | 2013-08-19 | 2021-06-22 | 卓异生物公司 | 用于单分子检测的测定及其应用 |
GB201410022D0 (en) | 2014-06-05 | 2014-07-16 | Orion Diagnostica Oy | Method |
CN106715768B (zh) | 2014-07-30 | 2020-06-16 | 哈佛学院院长及董事 | 用于测定核酸的系统和方法 |
CN113528623A (zh) | 2015-02-18 | 2021-10-22 | 卓异生物公司 | 用于单分子检测的测定及其应用 |
WO2018218150A1 (en) | 2017-05-26 | 2018-11-29 | President And Fellows Of Harvard College | Systems and methods for high-throughput image-based screening |
KR101899371B1 (ko) | 2017-07-25 | 2018-10-29 | (주)엔바이오텍 | 핵산 복합체 페어, 핵산 복합체 페어를 포함하는 pcr용 키트, 및 핵산 복합체 페어를 이용한 타겟 검출 방법 |
KR102262260B1 (ko) * | 2018-02-08 | 2021-06-09 | 주식회사 시선테라퓨틱스 | 엔도좀 탈출능을 갖는 펩티드 핵산 복합체 및 이의 용도 |
CN110542674B (zh) * | 2019-09-19 | 2021-10-22 | 济南大学 | 一种检测谷胱甘肽的生物传感器及其制备方法 |
WO2022261030A1 (en) * | 2021-06-07 | 2022-12-15 | Neubase Therapeutics, Inc. | Oligonucleotide analogue modulators of oncogenes |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4415732A (en) | 1981-03-27 | 1983-11-15 | University Patents, Inc. | Phosphoramidite compounds and processes |
GB8405437D0 (en) | 1984-03-01 | 1984-04-04 | Amersham Int Plc | Detecting polynucleotide sequences |
ATE65092T1 (de) | 1985-05-31 | 1991-07-15 | Amoco Corp | Verstaerkung von hybridisierungssignalen durch verwendung von komplementarischen dns-straengen. |
US4868105A (en) | 1985-12-11 | 1989-09-19 | Chiron Corporation | Solution phase nucleic acid sandwich assay |
US4931223A (en) | 1986-07-24 | 1990-06-05 | Tropix, Inc. | Methods of using chemiluminescent 1,2-dioxetanes |
AU622104B2 (en) | 1987-03-11 | 1992-04-02 | Sangtec Molecular Diagnostics Ab | Method of assaying of nucleic acids, a reagent combination and kit therefore |
US5656731A (en) | 1987-10-15 | 1997-08-12 | Chiron Corporation | Nucleic acid-amplified immunoassay probes |
US5231191A (en) | 1987-12-24 | 1993-07-27 | Applied Biosystems, Inc. | Rhodamine phosphoramidite compounds |
US5175273A (en) * | 1988-07-01 | 1992-12-29 | Genentech, Inc. | Nucleic acid intercalating agents |
US5366860A (en) | 1989-09-29 | 1994-11-22 | Applied Biosystems, Inc. | Spectrally resolvable rhodamine dyes for nucleic acid sequence determination |
US5188934A (en) | 1989-11-14 | 1993-02-23 | Applied Biosystems, Inc. | 4,7-dichlorofluorescein dyes as molecular probes |
CA2039517C (en) * | 1990-04-03 | 2006-11-07 | David Segev | Dna probe signal amplification |
US5210015A (en) | 1990-08-06 | 1993-05-11 | Hoffman-La Roche Inc. | Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase |
US5627032A (en) * | 1990-12-24 | 1997-05-06 | Ulanovsky; Levy | Composite primers for nucleic acids |
US5539082A (en) * | 1993-04-26 | 1996-07-23 | Nielsen; Peter E. | Peptide nucleic acids |
US5594121A (en) | 1991-11-07 | 1997-01-14 | Gilead Sciences, Inc. | Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines |
EP1256589A3 (en) | 1991-11-26 | 2003-09-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomers containing modified pyrimidines |
US5424413A (en) * | 1992-01-22 | 1995-06-13 | Gen-Probe Incorporated | Branched nucleic acid probes |
FR2710075B1 (fr) * | 1993-09-15 | 1995-10-27 | Bio Merieux | Réactif et procédé pour la détection d'une séquence nucléotidique avec amplification de signal. |
US5538848A (en) | 1994-11-16 | 1996-07-23 | Applied Biosystems Division, Perkin-Elmer Corp. | Method for detecting nucleic acid amplification using self-quenching fluorescence probe |
US5681697A (en) | 1993-12-08 | 1997-10-28 | Chiron Corporation | Solution phase nucleic acid sandwich assays having reduced background noise and kits therefor |
US5602004A (en) * | 1994-07-20 | 1997-02-11 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Thermophilic fungal expression system |
US5552471A (en) | 1994-08-17 | 1996-09-03 | The Perkin-Elmer Corporation | Solid support reagents for the synthesis of 3'-Nitrogen containing polynucleotides |
US5801155A (en) | 1995-04-03 | 1998-09-01 | Epoch Pharmaceuticals, Inc. | Covalently linked oligonucleotide minor grove binder conjugates |
AU714486B2 (en) * | 1995-11-21 | 2000-01-06 | Yale University | Unimolecular segment amplification and detection |
US5736626A (en) | 1996-01-29 | 1998-04-07 | The Perkin-Elmer Corporation | Solid support reagents for the direct synthesis of 3'-labeled polynucleotides |
SE506700C2 (sv) | 1996-05-31 | 1998-02-02 | Mikael Kubista | Sond och förfaranden för analys av nukleinsyra |
EP0857791B1 (en) | 1996-12-21 | 2004-03-31 | PNA Diagnostics A/S | Method of analysis using signal amplification |
CA2218440A1 (en) * | 1996-12-21 | 1998-06-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method of analysis using signal amplification |
US6287772B1 (en) * | 1998-04-29 | 2001-09-11 | Boston Probes, Inc. | Methods, kits and compositions for detecting and quantitating target sequences |
US6435642B1 (en) * | 1998-11-17 | 2002-08-20 | Pitney Bowes Inc. | Apparatus and method for real-time measurement of digital print quality |
US6432642B1 (en) * | 1999-01-15 | 2002-08-13 | Pe Corporation (Ny) | Binary probe and clamp composition and methods for a target hybridization detection |
-
1999
- 1999-01-15 US US09/232,000 patent/US6432642B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-01-14 AU AU28504/00A patent/AU771650B2/en not_active Ceased
- 2000-01-14 JP JP2000593170A patent/JP4644370B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-14 CA CA002360543A patent/CA2360543C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-14 DE DE60028534T patent/DE60028534T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-14 AT AT00906924T patent/ATE329056T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-01-14 WO PCT/US2000/000972 patent/WO2000041549A2/en active IP Right Grant
- 2000-01-14 EP EP00906924A patent/EP1141387B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-03-28 US US10/112,677 patent/US7057025B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-02-23 JP JP2005047966A patent/JP2005160489A/ja not_active Withdrawn
-
2006
- 2006-06-05 US US11/422,211 patent/US20070026429A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-07-29 JP JP2008195452A patent/JP2009017882A/ja active Pending
-
2009
- 2009-08-10 US US12/538,823 patent/US8067165B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009506759A (ja) * | 2005-09-01 | 2009-02-19 | コーベット ライフ サイエンス ピーティーワイ リミテッド | 核酸の増幅、定量化、及び同定の方法。 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1141387B1 (en) | 2006-06-07 |
AU2850400A (en) | 2000-08-01 |
WO2000041549A3 (en) | 2000-11-30 |
JP2009017882A (ja) | 2009-01-29 |
JP4644370B2 (ja) | 2011-03-02 |
US7057025B2 (en) | 2006-06-06 |
DE60028534T2 (de) | 2007-06-06 |
US6432642B1 (en) | 2002-08-13 |
CA2360543C (en) | 2009-03-31 |
DE60028534D1 (de) | 2006-07-20 |
EP1141387A2 (en) | 2001-10-10 |
WO2000041549A2 (en) | 2000-07-20 |
JP2002534100A (ja) | 2002-10-15 |
US20060035217A1 (en) | 2006-02-16 |
US20100291557A1 (en) | 2010-11-18 |
US8067165B2 (en) | 2011-11-29 |
ATE329056T1 (de) | 2006-06-15 |
US20070026429A1 (en) | 2007-02-01 |
AU771650B2 (en) | 2004-04-01 |
CA2360543A1 (en) | 2000-07-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4644370B2 (ja) | 標的ハイブリダイゼーション検出のための、プローブおよびクランプのバイナリー組成物ならびに方法 | |
CA2201756C (en) | Self-quenching fluorescence probe and method | |
AU763948B2 (en) | Hybridization and mismatch discrimination using oligonucleotides conjugated to minor groove binders | |
US6743905B2 (en) | Mobility-modified nucleobase polymers and methods of using same | |
US8465921B2 (en) | Hybridization and mismatch discrimination using oligonucleotides conjugated to minor groove binders | |
EP1220953B1 (en) | Template-dependent ligation with pna-dna chimeric probes | |
JP2004509613A (ja) | 非同調的刺激pcr | |
JP3942079B2 (ja) | 核酸増幅時の外因性コントロール、内部コントロールのための方法 | |
AU695561C (en) | Self-quenching fluorescence probe and method |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070109 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070809 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20071029 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20071101 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20080402 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20090520 |
|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20100915 |