JP2005110687A - 核酸の回収器具および方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 シリカ含有の固相を液体に接触可能な状態で内蔵した核酸捕捉用チップであって、固相が通水部を有し、通水部における固相と固相との平均間隔が、25μm以下となるようにする。
【選択図】 なし
Description
核酸を含有するサンプルから、核酸を遊離するための第一試薬を混合し、核酸の遊離を促す第一工程と、
遊離した核酸を含む液と第二試薬を混合した後、圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、固相と混合液を接触させ吐出する第二a工程と
固相を洗浄するために第二試薬を、圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、固相と二試薬を接触させた後、吐出する第二b工程と
固相、および、核酸捕捉チップ内に残存する、第一試薬、および/または、第二試薬を除去するために、第三試薬を圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、固相と第三試薬を接触させた後、吐出する第三a工程と
核酸捕捉チップ内から第三試薬の除去を促すために、核酸捕捉チップ内に通気を行う第三b工程と
残存する第三試薬を濯ぐために、第四試薬を圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、固相と第四試薬を接触させた後、吐出する第四工程と
固相から核酸を溶離するために、第五試薬を圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、固相と第五試薬を接触させた後、吐出する第五工程
を含む事を特徴とする。なお、固相が、粒状物或いは繊維状物からなる場合は、平均孔径は平均間隔のことを意味し、25μm以下であることを特徴とする。
1[m]=5.04×10−4・h1/2−9.0×10−6
10mmol/L ビシン(pH8.5)、0.1mmol/L EDTAを用いる。
図1は核酸捕捉用チップの構成を示す図である。核酸捕捉用チップ31は、上端が圧力変化を発生させる器具、あるいは、自動装置の接続ノズルの先端に気密に勘合される内径を有しており、下端に向けて徐々に内径が細くなるように形成される。核酸捕捉用チップ31は透明もしくは半透明な合成樹脂からなる。チップ31の先端側には、固相が流出することを防止するため、および、固相の平均間隔を規定するための円板状の阻止部材101aをチップ31の上端より圧入し、固相102を挟む形で、阻止部材101bを固相102が所定の平均間隔を維持できるように設ける。これらの阻止部材101a,101b は、液体及び気体が容易に通過し得る多数の孔を有するが、その孔は固相102の流出を阻止できる大きさである。
固相として石英ウール(東芝ケミカル製、グレードB、ウールの直径 6〜12μm)5mgを用いる。
なお、ここで第三試薬には、25mmol/L酢酸カリウム(和光純薬工業(株)製、試薬特級)を含む50%エタノール(和光純薬工業(株)製、試薬特級)を使用した。
なお、ここで第四試薬には、50mmol/L酢酸カリウム(和光純薬工業(株)製、試薬特級)を使用した。
Claims (20)
- シリカ含有の固相を液体に接触可能な状態で内蔵した核酸回収器具又は該器具を備える核酸自動回収装置であって、固相が多数の通水部を有し、その通水部における固相と固相との平均間隔が25μm以下である核酸回収器具又は核酸自動回収装置。
- 圧力変化により吸引と吐出が可能な装置に接続された核酸捕捉用チップであって、該核酸捕捉チップはシリカ含有の繊維状物を液相に接触可能な状態で内蔵し、該繊維状物と繊維状物との平均間隔が25μm以下である核酸捕捉用チップを用いる核酸回収方法であって、
核酸を含有するサンプルから核酸を遊離するための第一試薬をサンプルと混合し、核酸の遊離を促し、
遊離した核酸を含む液と第二試薬を混合した後、混合液を圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、繊維状物と混合液を接触させ吐出し、
繊維状物を洗浄するために第二試薬を圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、繊維状物と第二試薬を接触させた後、吐出し、
繊維状物、および、核酸捕捉チップ内に残存する、第一試薬、および/または、第二試薬を除去するために、第三試薬を圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、繊維状物と第三試薬を接触させた後、吐出し、
核酸捕捉チップ内から第三試薬の除去を促すために、核酸捕捉チップ内に通気を行い、
残存する第三試薬を濯ぐために、第四試薬を圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、繊維状物と第四試薬を接触させた後、吐出し、及び
繊維状物から核酸を溶離するために、第五試薬を圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、繊維状物と第五試薬を接触させた後、吐出する核酸回収方法。 - 前記繊維状物が石英ウールである請求項2記載の核酸回収方法。
- 前記石英ウールの平均間隔が13μmから21μmである請求項3記載の方法。
- 前記石英ウールの直径が6μmから12μmである請求項3記載の方法。
- 請求項2記載の核酸回収方法であって、混合液の平均流速が10μL/sから50μL/sである方法。
- シリカを含有する固相への核酸の結合を促進する促進物質と、核酸を含む混合液から、核酸を回収する核酸回収方法であって、
平均間隔が25μm以下であるシリカ含有繊維状物から成る通水部に、混合液を流し、核酸の結合した繊維状物を洗浄試薬により洗浄する手順を含む方法。 - 核酸の結合を促進する促進物質が、カオトロピック試薬である請求項7記載の方法。
- 前記洗浄試薬が70%エチルアルコール、70%イソプロピルアルコール、25mmol/L酢酸カリウム含有50%エチルアルコール、又は50mmol/L酢酸カリウムである請求項7記載の方法。
- 請求項7記載の核酸回収方法であって、核酸の結合した繊維状物から核酸を溶離する方法。
- 請求項7記載の核酸回収方法であって、繊維状物が石英ウールである方法。
- 請求項11記載の核酸回収方法であって、石英ウール間の平均間隔が13μmから21μmである方法。
- 請求項11記載の核酸回収方法であって、石英ウールの直径が6μmから12μmである方法。
- 請求項7記載の核酸回収方法であって、混合液の平均流速が10μL/sから50μL/sである方法。
- シリカ含有の繊維状物を液相に接触可能な状態で内蔵され、該繊維状物が通水部を有し、その通水部における繊維状物と繊維状物との平均間隔が25μm以下である核酸回収具を用いる核酸回収方法であって、
核酸を含有するサンプルから核酸を遊離するための第一試薬をサンプルと混合し、核酸の遊離を促し、
遊離した核酸を含む液と第二試薬を混合した後、混合液を圧力変化により核酸回収具内に吸引し、繊維状物と混合液を接触させ吐出し、
繊維状物を洗浄するために第二試薬を圧力変化により核酸捕捉チップ内に吸引し、繊維状物と第二試薬を接触させた後、吐出し、
繊維状物、および、核酸捕捉チップ内に残存する、第一試薬、および/または、第二試薬を除去するために、第三試薬を圧力変化により核酸回収具内に吸引し、繊維状物と第三試薬を接触させた後、吐出し、
核酸回収具内から第三試薬の除去を促すために、核酸回収具内に通気を行い、
残存する第三試薬を濯ぐために、第四試薬を圧力変化により核酸回収具内に吸引し、繊維状物と第四試薬を接触させた後、吐出し、及び
繊維状物から核酸を溶離するために、第五試薬を圧力変化により核酸回収具内に吸引し、繊維状物と第五試薬を接触させた後、吐出する核酸回収方法。 - 請求項15記載の核酸回収方法であって、混合液の平均流速が10μL/sから50μL/sである方法。
- シリカ含有の繊維状物を液相に接触可能な状態で内蔵し、該固相が通水部を有し、その通水部における繊維状物と繊維状物との平均間隔が25μm以下である核酸回収具を用いる核酸回収方法であって、
核酸を含有するサンプルから核酸を遊離するための第一試薬をサンプルと混合し、核酸の遊離を促し、
遊離した核酸を含む液と第二試薬を混合した後、混合液を圧力変化により核酸回収具内に吸引し、固相と混合液を接触させ吐出し、
繊維状物、および、該核酸回収具内に残存する、第一試薬、および/または、第二試薬を除去するために、第三試薬を圧力変化により該核酸回収具内に吸引し、固相と第三試薬を接触させた後、吐出し、
残存する第三試薬を濯ぐために、第四試薬を圧力変化により該核酸回収具内に吸引し、繊維状物と第四試薬を接触させた後、吐出し、及び
繊維状物から核酸を溶離するために、第五試薬を圧力変化により該核酸回収具内に吸引し、繊維状物と第五試薬を接触させた後、吐出する核酸回収方法。 - 請求項17記載の核酸回収方法であって、混合液の平均流速が10μL/sから50μL/sである方法。
- 核酸を回収する核酸回収装置であって、平均間隔が25μm以下であるシリカ含有繊維状物から成る通水部に、シリカを含有する固相への核酸の結合を促進する促進物質と、核酸を含む混合液を流す手段を含む装置。
- 圧力変化により吸引と吐出が可能な装置に接続できる核酸捕捉用チップであって、該核酸捕捉チップはシリカ含有の繊維状物を液相に接触可能な状態で内蔵し、該繊維状物と繊維状物との平均間隔が25μm以下である核酸捕捉用チップ。
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