JP2005097308A - 免疫賦活剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分,例えばきのこ由来成分、特にシイタケ等きのこの抽出物を超微粒子化し、好ましくは水抽出物を分散化剤処理することにより粘膜からの吸収性を高めて免疫賦活作用及び/又は免疫調節作用を発揮することができる。この超微粒子化体(又はこれを含有する組成物)は免疫賦活剤及び/又は免疫調節剤として使用可能である。 更に、免疫賦活剤又は免疫調節剤への使用;或いは前記超微粒子化体の前記抗腫瘍剤、抗感染症剤、抗ウイルス剤、抗自己免疫疾患剤、抗糖尿病薬、抗アレルギー剤、抗消化器疾患剤(過敏性腸症候群(IBS)、炎症性腸疾患(IBD)、便秘、下痢等に対する治療剤等)等への使用も提供する。
【選択図】 なし
Description
(1) 好ましくは水溶液中で、上記きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分から得られ、分散化剤で処理した状態又は分散化した状態にある超微粒子化体。
(2) きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を含む水溶液に、分散化剤を混合したときに得ることができ、平均粒径が10μm以下である粒子を含有する超微粒子化体。
(3) 微粉砕化処理するときに得ることができる、平均粒径が1μm以下である粒子を含有する上記(1)又は(2)記載の超微粒子化体。
(4) 平均粒径が0.01〜1μmである上記(3)記載の超微粒子化体。
(5) きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を含む水溶液が、きのこの水又は熱水抽出液から濾紙等で濾過後に得られるきのこの抽出物含有水溶液である上記(1)〜(4)何れか記載の超微粒子化体。
(6) きのこの抽出物含有水溶液が、きのこの水又は熱水抽出液から濾紙等で濾過後、これを濃縮及び/又は冷却して得られる凝集物含有水溶液である上記(5)記載の超微粒子化体。
(7) きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を含む水溶液が、β−グルカンの水溶液又はβ−グルカンを含む水溶液である上記(1)〜(6)何れか記載の超微粒子化体。
先ず、きのこ抽出物超微粒子化体の製造を中心に説明することにより、本発明の超微粒子化体を説明する。
尚、本発明におけるきのことは、子実体を形成し得る菌類をいう。
Pleurotus ostreatus(ヒラタケ)
Pholiota nameko(ナメコ)
Flammulina velutipes(エノキタケ)
Tricholoma matsutake(マツタケ)
Lyophyllum shimeji(ホンシメジ)
Schizophyllum commune(スエヒロタケ)
Crepidotus variabilis(チャヒラタケ)
Lyophyllum ulmarium(シロタモギタケ)
Grifola umbellata(チェレイマイタケ)
G. frondosa(マイタケ)
Coriolus versicolor(カワラタケ)
Fomes fomentarius(ツリガネタケ)
Volvavella volvacea(フクロタケ)
Auricularia aurcula-judae(キクラゲ)
Ganoderma lucidum(マンネンタケ)
G. applanatum(コフキサルノコシカケ)
Fomitopsis pinicola(ツガサルノコシカケ)
Dictyophora indusiata(キヌガサタケ)
Sparassis crispa(ハナビラタケ)
Agaricus blazei(アガリクスタケ;姫マツタケ)
Peziza vesiculosa(オオチャワンタケ)
前記に若干説明したように、本発明の前記超微粒子化体は免疫賦活剤/免疫調節剤(本発明の免疫賦活剤/免疫調節剤)の有効成分として使用することができる。本発明の医薬組成物や飲食品用として使用可能な担体や増量剤(又は希釈剤)を使用することもできる。具体的には医薬組成物や飲食品(健康食品等)として使用することができる。
本発明の医薬組成物(薬剤)は前記超微粒子化体、好ましくは分散化剤処理液(分散化液)、特に好ましくは乳化剤を用いてミセル化した成分を有効成分として含むもので、免疫、特に全身免疫を賦活又は調節して、免疫異常に伴う疾患の治療、改善、進展防止や他の疾患からの予防等に使用できる薬剤である。例えば、抗腫瘍剤、抗感染症剤、抗ウイルス剤、抗自己免疫疾患剤、抗糖尿病薬、抗アレルギー剤、抗消化器疾患剤(過敏性腸症候群(IBS)、炎症性腸疾患(IBD)、便秘、下痢等の治療剤等)等の疾患やこれら疾患からの予防に使用することができる。
特に、本発明の飲食品を健康食品や機能性食品として使用する場合にも上記経口投与製剤を参考に健康食品や機能性食品として必要な成分(異なるきのことの抽出物等も含まれる。)、添加剤を加えて調製することができる。当然のことながら、飲食品として使用される食用或いは栄養成分等を適宜添加して、使用することができる。通常は、前記超微粒子化体を、全糖換算で好ましくは0.01〜80重量%程度、より好ましくは0.05〜20重量%程度含有することができる。
この発明は、きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分超微粒子化体が分散化している水溶液に存するもので、前記超微粒子化体或いはその各種用途や製造方法についての説明からこの発明を容易に理解し、実施することができる。当然のことながら、この組成物を超微粒子化体の場合と同様に、前記各種用途、特に医薬組成物や飲食品に使用することができ、これらの説明をこの発明にも適用することができる。
(シイタケ抽出方法)
シイタケ(生シイタケ換算)1kg当り水を約4L加え、コロイドミル等を用いて破砕(破砕後液量:約6L)、還流等で水分が蒸発しないように加熱還流下、95℃15時間煮沸し、得られた抽出液をろ過した。濾液を60℃で減圧濃縮し約1Lの濃縮物を得た。フェノール硫酸法で糖分析し、糖含量で20mg/ml濃度の抽出エキス(「シイタケ抽出エキス」;「シイタケエキス」とも称する。)を得た。
ツルーレシチン工業(株)製のレシチン(SLP−PC70)を脱イオン水に加え、シイタケ抽出エキスの全糖濃度と同濃度のレシチン溶解液を調製した。次いで、レシチン溶解液に、前記シイタケ抽出エキスを同量添加し、特殊機化工業(株)製のアヂホモミキサー2M−2型を用いて真空下攪拌(真空度−60cmHg、アンカーミキサー回転数50rpm、ホモミキサー回転数15,000rpm)し、予備ミセル化液を調製した。得られた予備乳化液を三和機械(株)製の高圧乳化機H11型ハンドル2段式を用いて高圧乳化処理(乳化圧1,500kgf/cm2)を行い、メジアン径100nm程度のシイタケ抽出エキスミセル化液(ミセル化シイタケエキス:本発明品)を製造した。メジアン径の測定は、(株)堀場製作所製LA−910粒度分布計によりレーザー回折・錯乱式粒度分布測定法により行った。
(β−グルカン溶液の調製)
β−グルカンの精製は、生シイタケから千原らの方法(Cancer Res.,30,2776(1970))にて行った。即ち、β−グルカンは生シイタケの子実体を熱水抽出したのち、エタノール分画沈殿、セチルトリメチルアンモニウムハイドロオキサイド(cethyltrimethyl ammonium hydroxide)による分画沈殿、酢酸による分画溶出、カ性ソーダによる分画溶出、除タンパクの繰り返しなどによって白色粉末を得た。得られた白色粉末を蒸留水に懸濁、ホモジネートした後、オートクレーブにて高温高圧処理(121℃、20分)し、2mg/mlのβ−グルカン溶液を調製した。
ツルーレシチン工業(株)製のレシチン(SLP−PC70)を脱イオン水に加え、8mg/ml濃度のレシチン溶解液を調製した。次いで、レシチン溶解液に、前記β−グルカン溶液を同量添加し、三和機械(株)製の高圧乳化機H11型ハンドル2段式を用いて高圧乳化処理(乳化圧1,500kgf/cm2)を行い、メジアン径100nm程度のβ−グルカンミセル化液(ミセル化β−グルカン:本発明品)を製造した。メジアン径の測定は、(株)堀場製作所製LA−910粒度分布計によりレーザー回折・錯乱式粒度分布測定法により行った。
(S180皮下移植モデルを用いた実施例)
(試験方法)
ICRマウス(雌、4週齢)に腹腔内移植することにより継代しているSarcoma180腫瘍細胞を腹水の形で採取し、生理食塩水にて3×107/mlに調製した。この細胞希釈液を0.1ml/mouseでICRマウス(雌、4週齢)の右腰背部皮下に25G注射針を用いて移植した。
腫瘍重量(mg)=腫瘍短径(mm)2×腫瘍長径(mm)÷2
宿主重量(g)=体重(g)−腫瘍重量(g)
腫瘍増殖抑制率(%)=(1−投与群の腫瘍重量÷無処置群の腫瘍重量)×100
t−検定:Student′s t−検定:それぞれの群で無処置群に対してt−検定を行った。
M検定:Mannwhitney−U検定:それぞれの群で無処置群に対して順位和検定を行った。
N.S.:有意差なし;p<0.01;有意差あり
(β−グルカンの定量)
シイタケ抽出エキス中のβ−グルカンを定量するために、(実施例2)にて精製したβ−グルカンを水酸化ナトリウム溶液(1→25)に溶解し、メタノール沈殿を行い、これを2回繰り返し、メタノール及びアセトンにて洗浄した後、減圧乾燥(40℃、15時間)し、窒素:0.03%以下、強熱残分:1.5%以下の標準β−グルカンを得た。
(ミセル化β−グルカンの腫瘍増殖抑制効果)
前記で調製した、ミセル化シイタケエキス、ミセル化β−グルカン及びβ−グルカン溶液の腫瘍増殖抑制効果を前記実施例3と同様の方法にて検討した。即ち、ICRマウス(雌、4週齢)に腹腔内移植することにより継代しているSarcoma180腫瘍細胞を腹水の形で採取し、生理食塩水にて3×107/mlに調製した。この細胞希釈液を0.1ml/mouseでICRマウス(雌、4週齢)の右腰背部皮下に25G注射針を用いて移植した。
t−検定:Student′s t−検定:それぞれの群で無処置群に対してt−検定を行った。
M検定:Mannwhitney−U検定:それぞれの群で無処置群に対して順位和検定を行った。
N.S.:有意差なし;p<0.01;有意差あり
(腸管粘膜免疫活性化:病理組織学的検討)
ミセル化シイタケエキスの腸管粘膜免疫の活性化を検討するため、前記実施例3と同様の方法で検討した。即ち、ICRマウス(雌、4週齢)に腹腔内移植することにより継代しているSarcoma180腫瘍細胞を腹水の形で採取し、生理食塩水にて3×107/mlに調製した。この細胞希釈液を0.1ml/mouseでICRマウス(雌、4週齢)の右腰背部皮下に25G注射針を用いて移植した。
*1:正常マウスの腸管粘膜固有層には、単核球の集積は認められない。
*2:乳化剤(レシチン)にシイタケ抽出エキスを添加したのみで、超微粒子化([ミセル化])処理は行っていない。
t−検定:Student′s t−検定:それぞれの群で無処置群に対してt−検定を行った。
N.S.:有意差なし、p<0.1:有意傾向、p<0.01:有意差あり
(全身免疫の活性化:遅延型過敏反応)
腫瘍抗原に対する特異的な全身免疫反応の活性化を検討するため、遅延型過敏反応の評価を行った。遅延型過敏反応評価法について説明する。
t−検定:Student′s t−検定:それぞれの群で無処置群に対してt−検定を行った。
N.S.:有意差なし、p<0.05:有意差あり、p<0.01:有意差あり
(抗アレルギー効果)
ミセル化シイタケエキスの抗アレルギー効果を検討するため、アトピー性皮膚炎モデルマウスであるNCマウスを用いて検討した。即ち、8週齢オスのNCマウス20匹にエタノール及びアセトン(4:1)で調製した抗原;塩化ピクリル(5%(w/v))150μl/mouseで腹部及び足蹠に塗布し感作、感作後4日後から週に1回、6週間、オリーブオイルにて調製した誘発用抗原;塩化ピクリル(0.8%(w/v))を150μl/mouse、背部及び両耳(内外両側)に塗布した。投与開始は、抗原感作前日より1日1回46日間投与を行った。投与量は、対照群(10匹)には、溶媒コントロールとして生理食塩水0.1ml/mouseを経口投与した。ミセル化シイタケエキスは、β−グルカン換算量で0.2mg/mlに調製した投与液を0.1ml/mouseで経口投与した。この投与量は、1回の投与でβ−グルカン換算量で、1mg/kgの投与量に当たる。
(抗糖尿病効果:血糖値上昇抑制効果)
ミセル化シイタケエキスの糖尿病に対する効果を検討するため、II型糖尿病モデルマウスであるdb/dbマウスを用いて血糖値上昇に対する効果を検討した。即ち、db/dbマウス5週齢雄を各群9匹ずつ2群に分け、一方には12週齢になるまで水を自由飲水させた対照群とし、他方には12週齢になるまでミセル化シイタケエキスを自由飲水させた。ミセル化シイタケエキスの濃度は、β−グルカン換算量で0.01mg/ml(レシチン濃度は0.1mg/ml)とした。各週毎に飲水量を測定して、β−グルカンの経口摂取量を算出した。
Claims (50)
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を超微粒子化したことを特徴とする超微粒子化体。
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分がきのこ由来成分である請求項1記載の超微粒子化体。
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分がβ−グルカンである請求項1記載の超微粒子化体。
- きのこ由来成分がきのこの抽出物である請求項1又は2記載の超微粒子化体。
- きのこの抽出物がきのこの水抽出物である請求項4記載の超微粒子化体。
- きのこ由来成分が、β−グルカンであり又はβ−グルカンを含む請求項1又は2記載の超微粒子化体。
- β−グルカンがきのこ由来成分ではない請求項1又は3記載の超微粒子化体。
- β−グルカンが、酵母由来成分、真菌由来成分、バクテリア由来成分及び植物由来成分から選択される請求項7記載の超微粒子化体。
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分が、水溶液中凝集体を形成する請求項1記載の超微粒子化体。
- 当該凝集体が少なくとも50μmの粒径を有する請求項9記載の超微粒子化体。
- 当該超微粒子化体粒子を水に分散させ測定したとき、当該粒子の平均粒径が10μm以下である請求項1〜10何れか記載の超微粒子化体。
- 平均粒径が1μm以下である請求項11記載の超微粒子化体。
- 平均粒径が0.01〜1μmである請求項11又は12記載の超微粒子化体。
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を含む水溶液に、分散化剤を混合したときに得ることができ、平均粒径が10μm以下である粒子を含有する請求項1〜11何れか記載の超微粒子化体。
- 微粉砕化処理するときに得ることができ、平均粒径が1μm以下である粒子を含有する請求項1〜14何れか記載の超微粒子化体。
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を含む水溶液が、きのこの水又は熱水抽出液を濾過した後、得られるきのこの抽出物含有水溶液である請求項14又は15記載の超微粒子化体。
- きのこの抽出物含有水溶液が、きのこの水又は熱水抽出液を濾過した後、これを濃縮及び/又は冷却して得られる凝集物含有水溶液である請求項16記載の超微粒子化体。
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を含む水溶液が、β−グルカンの水溶液又はβ−グルカンを含む水溶液である請求項14〜17何れか記載の超微粒子化体。
- 分散化剤で処理した状態又は分散化した状態にある請求項1〜18何れか記載の超微粒子化体。
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を含む水溶液中に含まれる全糖1に対し、重量比で当該分散化剤を多くとも100混合する請求項14〜19何れか記載の超微粒子化体。
- 分散化剤が乳化剤である請求項14〜20何れか記載の超微粒子化体。
- 乳化剤がレシチンである請求項21記載の超微粒子化体。
- ミセル化の状態にある請求項1〜22何れか記載の超微粒子化体。
- 請求項1〜23何れか記載の超微粒子化体を含有することを特徴とする免疫賦活剤又は免疫調節剤。
- 請求項1〜23何れか記載の超微粒子化体を含有することを特徴とする抗腫瘍剤、抗感染症剤、抗ウイルス剤、抗自己免疫疾患剤、抗糖尿病薬、抗アレルギー剤、又は抗消化器疾患剤(過敏性腸症候群(IBS)、炎症性腸疾患(IBD)、便秘、下痢等に対する治療剤)。
- 請求項1〜23何れか記載の超微粒子化体を含有することを特徴とする医薬組成物。
製剤学上許容される担体又は増量剤を含んでいてもよい。 - 請求項1〜23何れか記載の超微粒子化体を含有することを特徴とする飲食品。
- 当該超微粒子化体を全糖換算で0.01〜80重量%含有する請求項27記載の飲食品。
- 請求項1〜23何れか記載の超微粒子化体が分散化している水溶液を含有することを特徴とする超微粒子化体含有組成物。
- 請求項29記載の組成物を含有することを特徴とする医薬組成物。
製剤学上許容される担体又は増量剤を含んでいてもよい。 - 請求項29記載の組成物を含有することを特徴とする飲食品。
- 当該組成物を全糖換算で0.05〜5重量%含有する請求項31記載の飲食品。
- 癌疾患、細菌感染疾患、ウイルス感染疾患、自己免疫疾患、糖尿病、アレルギー性疾患、及び消化器疾患(過敏性腸症候群(IBS)、炎症性腸疾患(IBD)、便秘、下痢等)等の何れかの疾患患者用である請求項27、28、31、又は32記載の飲食品。
- 100g当たり、糖を1〜20000mg及び分散化剤を1〜20000mg含有する請求項29記載の組成物。
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を超微粒子化工程に付することを特徴とする超微粒子化体の製造方法。
- 超微粒子化工程が、きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を含む水溶液に分散化剤を混合して平均粒径が10μm以下の粒子を調製する工程を含む請求項35記載の方法。
- 超微粒子化工程が、平均粒径が1μm以下である粒子を調製する工程を含む請求項35又は36記載の方法。
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を超微粒子化工程に付することを特徴とする超微粒子化体含有組成物の製造方法。
- 超微粒子化工程が、きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を含む水溶液に分散化剤を混合して平均粒径が10μm以下の粒子を調製する工程を含む請求項38記載の方法。
- 超微粒子化工程が、平均粒径が1μm以下である粒子を調製する工程を含む請求項38又は39記載の方法。
- 平均粒径が1μm以下である粒子を調製する工程が高圧乳化機処理工程である請求項37又は40記載の方法。
- きのこ由来成分が、きのこを水による抽出工程で得られる水抽出物である請求項35又は38記載の方法。
- きのこ由来成分及びβ−グルカンから選択される成分を含む水溶液が、きのこの水又は熱水抽出液を濾過した後得られるきのこの抽出物含有水溶液である請求項36,37、39、及び40の何れか記載の方法。
- 請求項1〜23何れか記載の超微粒子化体を生体内に摂取又は投与することを特徴とする免疫賦活方法又は免疫調節方法。
- 当該摂取又は投与する形態が、
請求項24記載の免疫賦活剤又は免疫調節剤の形態;及び
請求項25記載の抗腫瘍剤、抗感染症剤、抗ウイルス剤、抗自己免疫疾患剤、抗糖尿病薬、抗アレルギー剤、又は抗消化器疾患剤(過敏性腸症候群(IBS)、炎症性腸疾患(IBD)、便秘、下痢等に対する治療剤)の形態の何れかの形態にある請求項44記載の方法。 - 当該摂取又は投与する形態が、
請求項26〜28、及び30〜33何れか記載の医薬組成物又は飲食品の形態にある請求項44又は45記載の方法。 - 請求項1〜23何れか記載の超微粒子化体の請求項24記載の免疫賦活剤又は免疫調節剤への使用。
- 請求項1〜23何れか記載の超微粒子化体の請求項25記載の抗腫瘍剤、抗感染症剤、抗ウイルス剤、抗自己免疫疾患剤、抗糖尿病薬、抗アレルギー剤、又は抗消化器疾患剤(過敏性腸症候群(IBS)、炎症性腸疾患(IBD)、便秘、下痢等に対する治療剤)への使用。
- 免疫賦活剤又は免疫調節剤、或いは抗腫瘍剤、抗感染症剤、抗ウイルス剤、抗自己免疫疾患剤、抗糖尿病薬又は抗アレルギー剤、又は抗消化器疾患剤(過敏性腸症候群(IBS)、炎症性腸疾患(IBD)、便秘、下痢等に対する治療剤)が、請求項26又は30記載の医薬組成物、若しくは請求項27、28、及び31〜33何れか記載の飲食品の形態にある請求項47又は48記載の使用。
- 請求項1〜23何れか記載の超微粒子化体の医薬品製造への使用。
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