JP2005097280A - 抗腫瘍活性剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 ラクトバチルス(Lactobacillus)、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)、ストレプトコッカス(Streptococcus)、エントロコッカス(Enterococcus)およびラクトコッカス(Lactococcus)のいずれかに属する複数の乳酸菌を、1種または2種以上のグループに分け、それらグループ毎に共棲培養する一方、共棲培養されたグループ単位の乳酸菌同士をさらに混合培養して得た乳酸菌培養液を、加熱滅菌した後にろ過して得たろ液と、このろ液をろ過したときの残渣を粉末化した粉末とを混合してなる。
【選択図】 図1
Description
なお、乳酸菌を用いた増殖抑制作用に関しては、乳酸菌研究集談会編「乳酸菌の科学と技術」327ページ表8.4に明らかにされているが、これは、L.カゼイをマウスに経口投与したものである。しかしながら、乳酸菌を直接投与しても、それが生菌として機能をすることはほとんどないことが、明らかにされている。したがって、この従来の投与方法の場合には、L.カゼイを生菌として機能させるために、その投与方法等を工夫しなければならないという問題があるが、その投与方法に関しては何ら言及されていない。
第9の発明は、ろ液10mlに対して粉末2000mgの割合で混合した点に特徴を有する。
先ず、複数の乳酸菌を、24のグループに分け、それらをグループ毎に継代培養したが、そのグループ分けは次の通りである。すなわち、図1に示すように、第1グループはE.フェシウムおよびL.ヘルベティカスで構成し、第2グループは、E.フェシウムおよびL.アシドフィラスで構成している。第3グループはE.フェシウムおよびL.ガセリーで構成し、第4グループは、E.フェシウム、L.アシドフィラスおよびL.ブレビスで構成している。
そして、上記のようにして得た3次培養液を、加熱して乳酸菌を滅菌し、それをろ過してろ液を得るとともに、そのろ液をろ過したときの残渣を粉末化して目的の粉末を得た。
sarcomaを移植するとともに、その移植後一定量の上記ろ液および粉末を、移植14日前から1日1回28日間連日経口投与した。その結果、腫瘍の増殖率が47.2%という抗腫瘍活性が認められた。
なお、第24グループのB.ロンガムは、森永乳業株式会社製の菌株である森永BB536を用いた。
2.Holt,J.G., Krieg,N.R., Sneath,P.H.A., Staley,J.T. and Williams,S.T. : “Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology”Ninth Edition(1994)Williams & Wilkins.
3.光岡知足:“腸内菌の世界”,(1984)叢文社.
4.辨野義巳:微生物6,3-14(1990).
5.厚生省生活衛生局監修:“食品衛生検査指針-微生物編-”(1990)日本食品衛生協会.
6.Schleifer,K.H. and Kilpper-Balz,R. : Int.J.Syst.Bacteriol.,34,31-34(1984).
上記同定の結果、図1に示すように、34の菌株が特定されるとともに、それらが共生状態を維持していることが確認された。
そして、これら培地において、37℃でpH4.6になるまで約6〜12時間培養した。
なお、上記ろ液は、その生成プロセスで、上記したように滅菌のために加熱されるが、このように加熱処理をすることによって、乳酸菌中に含まれている成分を熱抽出させることができる。
そして、ろ液10mlに対して粉末2000mgの割合で混合して抗腫瘍活性剤を生成した。
すなわち、上記表2に示したように、当該ろ液には、微生物の栄養因子が多く含まれていることが分かる。したがって、上記ろ液を目的乳酸菌の培養培地にさらに添加することによって、この目的乳酸菌の増殖が促進されることが考えられる。
いずれにしても、上記の成果は、16種類もの乳酸菌を共棲培養した結果と考えられる。言い換えると、4種類程度の乳酸菌を共棲培養した程度では、このような成果は得られないであろうことが推測できる。
そして、上記ろ液および粉末を混合した抗腫瘍活性剤を、マウスに経口投与したが、このマウスは、BALB/c系雄性マウス(8週齢:日本エスエルシー(株))を用い、バリアーシステムの環境下で、6日間訓化飼育した後に、Meth-A sarcoma細胞を、鼠蹊部皮下に移植して実験に供したもので、その実験の経緯は次の通りである。
投与15日目(day0)にBALB/c系雄性マウスの腹腔内で継代中のマウスMeth-A sarcoma細胞を注射器にて無菌的に採取し、生理食塩液を用いて1.0×107個/mlの細胞浮遊液に調製した。この細胞浮遊液0.2ml(2.0×106個/マウス)をBALB/c系雄性マウスの鼠蹊部皮下に移植した。
T/C(%)=(各投与群の平均腫瘍重量/非投与群の平均腫瘍重量)×100
上記の計算式の基で、増殖率を求めたところ、表4に示したように実施例の抗腫瘍活性剤であるろ液10ml/kgおよび粉末2000mg/kgの混合投与群では、その増殖率が47.2%という増殖抑制効果が認められた。
上記の結果からも明らかなように、実施例の抗腫瘍活性剤であるろ液10ml/kgおよび粉末2000mg/kgの混合投与群に大きな有意差が認められた。
Claims (9)
- ラクトバチルス(Lactobacillus)菌属に属する乳酸菌、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)菌属に属する乳酸菌、ストレプトコッカス(Streptococcus)菌属に属する3属の乳酸菌を用いるとともに、それら3属の乳酸菌から選択した1種または2種以上の乳酸菌を用いて複数のグループを形成し、それらグループ毎に継代培養して共生状態を維持し、この継代培養されたグループ単位の乳酸菌同士をさらに共棲培養して得た乳酸菌培養液を、加熱滅菌した後にろ過して得たろ液と、このろ液をろ過したときの残渣を粉末化した粉末とを混合してなる抗腫瘍活性剤。
- ラクトバチルス(Lactobacillus)菌属に属する乳酸菌として、L.アシドフィラス(Lactobacillus acidophilus)、L.ブレビス(Lactobacillus brevis)、L.ジェンセニイ(Lactobacillus jensenii)、L.パラカゼイ(Lactobacillus paracasei subsp. paracasei)、L.ガセリー(Lactobacillus gasseri)、L.ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)、L.ヘルベティカス(Lactobacillus helveticus)、L.カゼイ(Lactobacillus casei subsp. casei)、L.ラモナウサス(Lactobacillus rhamnosus)、L.デルブリッキィ(Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii)の1種または2種以上を用いた請求項1記載の抗腫瘍活性剤。
- ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)菌属に属する乳酸菌として、B.ロンガム(Bifidobacterium longum)、B.ビフィダム(Bifidobacterium bifidum)、B.アドレセンティス(Bifidobacterium adolescentis)の1種または2種以上を用いた請求項1記載の抗腫瘍活性剤。
- ストレプトコッカス(Streptococcus)菌属に属する乳酸菌として、S.サーモフィラス(Streptococcus thermophilus)、E.フェシウム(Enterococcus faecium)、L.ラクチス(Lactococcus lactis)の1種または2種以上を用いた請求項1記載の抗腫瘍活性剤。
- B.ロンガム(Bifidobacterium longum)、B.ビフィダム(Bifidobacterium bifidum)、B.アドレセンティス(Bifidobacterium adolescentis)、L.アシドフィラス(Lactobacillus acidophilus)、L.ブレビス(Lactobacillus brevis)、L.ジェンセニイ(Lactobacillus jensenii)、L.パラカゼイ(Lactobacillus paracasei subsp. paracasei)、L.ガセリー(Lactobacillus gasseri)、L.ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)、L.ヘルベティカス(Lactobacillus helveticus)、L.カゼイ(Lactobacillus casei subsp. casei)、L.ラモナウサス(Lactobacillus rhamnosus)、L.デルブリッキィ(Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii)、L.ラクチス(Lactococcus lactis)、E.フェシウム(Enterococcus faecium)、S.サーモフィラス(Streptococcus thermophilus)からなる16種の乳酸菌を用いた請求項1記載の抗腫瘍活性剤。
- E.フェシウムおよびL.ヘルベティカスを第1グループ、E.フェシウムおよびL.アシドフィラスを第2グループ、E.フェシウムおよびL.ガセリーを第3グループ、E.フェシウム、L.アシドフィラスおよびL.ブレビスを第4グループ、E.フェシウム、L.アシドフィラスおよびL.ブレビスを第5グループ、E.フェシウム、L.アシドフィラス、L.ブレビス、L.パラカゼイを第6グループ、B.アドレセンティス単体を第7グループ、L.デルブリッキィおよびL.ガセリーを第8グループ、L.デルブリッキィ単体を第9グループ、E.フェシウム、L.ジェンセニイ、L.パラカゼイおよびL.ブレビスを第10グループ、L.アシドフィラス単体を第11グループ、E.フェシウムおよびL.ガセリーを第12グループ、L.パラカゼイ単体を第13グループ、L.ガセリー、E.フェシウムおよびB.ビフィダムを第14グループ、B.ロンガム、S.サーモフィラスおよびE.フェシウムを第15グループ、L.ガセリーを単体で第16グループ、L.ブルガリクスおよびS.サーモフィラスを第17グループ、L.ガセリー、L.ラクチス、L.ガセリーおよびE.フェシウムを第18グループ、L.ガセリー、S.サーモフィラスおよびL.ブルガリクスを第19グループ、L.ラクチスを単体で第20グループ、L.ガセリーおよびE.フェシウムを第21グループ、L.ラモナウサスを単体で第22グループ、L.カゼイを単体で第23グループ、B.ロンガムを単体で第24グループとし、それぞれのグループ毎に継代培養して共生状態を維持するとともに、それら培養液のうち、第1,2グループ同士、第3,4グループ同士、第5,6グループ同士、第7,8グループ同士、第9,10グループ同士、第11,12グループ同士、第13,14グループ同士、第15,16グループ同士、第17,18グループ同士、第19,20グループ同士、第21,22グループ同士、第23,24グループ同士で1次培養し、さらに、第1,2グループと第3,4グループ、第5,6グループと第7,8グループ、第9,10グループと第11,12グループ、第13,14グループと第15,16グループ、第17,18グループと第19,20グループ、第21,22グループと第23,24グループ同士とで2次培養し、さらに、これら各2次培養液を混合して3次培養した請求項5記載の抗腫瘍活性剤。
- 3次培養液を、加熱して乳酸菌を滅菌し、それを自然ろ過してろ液を得た請求項6記載の抗腫瘍活性剤。
- 3次培養液をろ過した後に、その残渣を圧搾する一方、この圧搾した残渣を乾燥して粉末を得た請求項6記載の抗腫瘍活性剤。
- ろ液10mlに対して粉末2000mgの割合で混合してなる請求項1〜8のいずれかに記載の抗腫瘍活性剤。
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