JP2004525354A5 - - Google Patents

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】 細胞の可逆的染色のための方法において：
（ａ）レセプター分子を有する細胞を含む試料を提供し、
（ｂ）この細胞と、
（ｉ）前記レセプターと特異的に結合する少なくとも１個の成分、その際、前記少なくとも１個の成分は、結合複合体の少なくとも１個の第１パートナーと結合し、その際、成分とレセプターとは低いアフィニティー相互作用を示すものであり、
（ｉｉ）前記第１パートナーに対する少なくとも２個の結合部位を有する前記結合複合体の少なくとも１個の他のパートナー；および
（ｉｉｉ）（ｉ）および／または（ｉｉ）と結合しているかまたは結合する能力を有する検出可能な標識
とを接触させる工程を含み、その際、結合複合体の１個または複数個の第１パートナーおよび１個または複数個の他のパートナーは可逆的結合を形成し、かつ、その際、少なくとも２個の成分（ｉ）、少なくとも１個の他のパートナー（ｉｉ）および少なくとも１個の標識（ｉｉｉ）を含む結合体は、レセプター分子を介して前記細胞に結合し、その際、前記細胞は染色され、その際、前記可逆的結合が１０^−５ 〜１０^−１３ＭのＫ_ｄを有することを特徴とする、細胞の可逆的染色のための方法。
【請求項２】 可逆的結合が１０ ^−５ 〜１０ ^−１０ Ｍ、有利に１０ ^−５ 〜 ^−８ ＭのＫ _ｄ を有する、請求項１記載の方法。
【請求項３】 さらに（ｃ）前記試料の他の成分と前記染色細胞とを分離する工程を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】 さらに（ｄ）可逆的結合を分断することによって、前記細胞から前記染色を除去する工程を含む、請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】 前記細胞がＴ細胞であり、レセプター分子がＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）であり、かつ成分（ｉ）がＴＣＲ結合ペプチドおよびＭＨＣ分子を含有するＴＣＲ結合リガンドである、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】 工程（ｂ）、工程（ｃ）および工程（ｄ）を、１５℃以下、好ましくは１０℃以下の温度で実施する、請求項１から５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】 工程（ｄ）中で、染色された細胞と化合物とを接触させることによって、可逆的結合を分断する、請求項４から６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】 前記化合物がビオチン及びビオチン類似体から成る群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】 結合複合体が、
（ａ）（ｉ）ビオチンおよび（ｉｉ）ビオチンと可逆的結合が可能なストレプトアビジン類似体またはアビジン類似体、
（ｂ）（ｉ）ストレプトアビジンまたはアビジンと可逆的結合が可能なビオチン類似体、および（ｉｉ）ストレプトアビジンまたはアビジン、または前記ビオチン類似体と可逆的結合が可能なストレプトアビジン類似体またはアビジン類似体、および
（ｃ）（ｉ）ストレプトアビジン結合ペプチドまたはアビジン結合ペプチド、および（ｉｉ）ストレプトアビジンまたはアビジン、または前記ストレプトアビジン結合ペプチドまたはアビジン結合ペプチドと可逆的結合可能なストレプトアビジン類似体またはアビジン類似体
から選択される、請求項１から８までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】 可逆的結合の分断により、細胞からのレセプター結合成分の解離が生じる、請求項４から９までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】 レセプター特異的細胞群を単離するための、請求項１から１０までのいずれか１項に記載の方法の使用。
【請求項１２】 レセプター特異的細胞群の機能的性質を測定またはレセプター特異的細胞群のｉｎ ｖｉｔｒｏエキスパンションをさらに含む、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】 前記レセプター特異的細胞群が抗原特異的Ｔ細胞群であり、かつ、レセプター特異的結合成分が、ＴＣＲ結合ペプチドおよびＭＨＣ−分子を含有するＴＣＲ結合リガンドである、請求項１１または１２に記載の使用。
【請求項１４】 養子免疫伝達または免疫療法のための、あるいは、Ｔ細胞診断のための、請求項１３に記載の使用により得られる抗原特異的Ｔ細胞群の使用。
【請求項１５】 ＴＣＲ−ＭＨＣアフィニティー測定、特にＭＨＣ解離速度の測定のための、請求項１３に記載の使用により得られる抗原特異的Ｔ細胞群の使用。
【請求項１６】 Ｔ細胞群がＴ細胞系であるかまたはＴ細胞クローンである、請求項１３から１５までのいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】 細胞の可逆的染色のための試薬キットにおいて、
（ｉ）細胞上でレセプター分子と特異的に結合する少なくとも１個の成分、その際、前記少なくとも１個の成分は、結合複合体の少なくとも１個の第１パートナーと結合し、その際、成分とレセプターとは低いアフィニティー相互作用を示すものであり、
（ｉｉ）前記第１パートナーに対して少なくとも２個の結合部位を有する前記複合体の少なくとも１個の他のパートナー、および
（ｉｉｉ）（ｉ）および／または（ｉｉ）と結合しているかまたは結合する能力を有する検出可能な標識
を含み、その際、結合複合体の１個または複数個の第１パートナーおよび１個または複数個の他のパートナーは、１０^−５ 〜１０^−１３Ｍ、有利に１０ ^−５ 〜１０ ^−１０ Ｍ、さらに有利に１０ ^−５ 〜１０ ^−８ ＭのＫ_ｄを有する可逆的結合を形成する能力を有することを特徴とする、細胞の可逆的染色のための試薬キット。
【請求項１８】 細胞がＴ細胞であり、レセプター分子がＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）であり、かつ成分（ｉ）がＴＣＲ結合ペプチドおよびＭＨＣ分子を含有するＴＣＲ結合リガントである、請求項１７に記載の試薬キット。
【請求項１９】 （ａ）結合複合体の第１パートナーである、少なくとも１個のペプチドドメイン、この場合、これは、結合複合体の少なくとも１個の他のパートナーとの可逆的な結合を形成する能力を有しており、その際、可逆的結合が、１０^−５ 〜１０^−１３Ｍ、有利に１０ ^−５ 〜１０ ^−１０ Ｍ、さらに有利に１０ ^−５ 〜１０ ^−８ ＭのＫ_ｄを有し、および
（ｂ）リガンドドメイン、この場合、これは、細胞表面上でレセプターと低いアフィニティーではあるが特異的に結合する、を含有する融合ポリペプチド。
【請求項２０】 （ａ）少なくとも１個のストレプトアビジン−結合ペプチドおよび（ｂ）ＭＨＣ分子を含有する、請求項１９に記載の融合ポリペプチド。

ストレプ−タグＩＩ（Ｓｔｒｅｐ−ｔａｇＩＩ）／ストレプタクチン（ＳｔｒｅｐＴａｃｔｉｎ）系を、ＭＨＣ多量体の生成およびＴ細胞表面に結合する多量体のビオチンの添加による標的化された分断の双方について試験した。また、この試みに対して、可逆的Ｔ細胞染色は、Ｓｔｒｅｐ−ｔａｇｓを、ビオチン類似体、たとえばビオチンと比較して、ストレプトアビジンまたはアビジンに対して低いアフィニティーを有するアミノビオチン、イミノビオチンまたデスチオビオチンで置換することによって達成されてもよい。さらに好ましい実施態様は、ビオチン化ＭＨＣ分子の結合に対する遊離ビオチンと、ストレプ−タクチン（Ｓｔｒｅｐ−Ｔａｃｔｉｎ）またはビオチンに対してより低いアフィニティーを有する他のストレプトアビジン類似体との競合に関する。