JP2004501979A - 経口ワクチン接種のための方法および組成物 - Google Patents
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Abstract
本発明は、動物の疾患に対する保護を提供するための、および、動物による経口投与されるワクチンの増大した摂取を誘発するための、方法および組成物を包含する。本発明の方法は、混合した抗原による感染に関連する疾患に対する保護を提供し、かつ香味剤でワクチンの増大した摂取を誘発するために、細菌またはウイルス抗原を水溶性の口当たりの良い香味剤と混合し、さらに抗原および香味剤の混合物を、動物にワクチンを経口投与するための水溶性媒体と混合することを対象とする。本発明は、かくして、疾患の予防における補助としての飲料水またはシロップによる健康な動物の経口ワクチン接種のための方法および組成物を包含する。口当たりの良い香味剤の混合は、動物の取扱者により投与された場合にワクチン製剤の自己投与を促進し、および／または製剤の拒絶を防止するために望ましい風味を有するワクチン製剤を提供する。
Description
【０００１】
（技術分野）
本発明は、疾患の予防における補助として飲料水またはシロップによる健康な動物の経口ワクチン接種のための方法および組成物を対象とする。
【０００２】
（背景技術）
動物の集団を苦しめることができる伝染病は数多く存在し、動物を衰弱させて死に至らしめる。かかる伝染病に対する成功したワクチン接種は、感染した動物における疾患の症状を改善または除去するために既に実施されている。経口投与されるワクチン接種は、注射の必要性がないので、好ましい方法である。
【０００３】
例えば、ブタ、家禽、ウシ、ヒツジ、ヤギおよびウマなどの家畜の大集団においては、注射によるワクチン接種は、多大の時間を必要とし、大きな労働力を要する。加えて、筋肉注射は肉にダメージを与え、動物にストレスを与えることになる。
【０００４】
例えば、イヌおよびネコなどの家庭で飼育されるペットにおいては、筋肉注射を受けるストレスは、一般の感染症に対して有効な経口ワクチンの使用により軽減される。
【０００５】
ブタおよび家禽の両方の単位のサイズは、世界中でかなり大きくなっている。多くのブタ用施設が現在１０，０００頭以上の乳離れしたブタを収容することができるのに対し、多くの家禽の単位は現在さらに多くの鳥を収容することができる。伝統的なワクチンによる各々のブタまたは鳥のワクチン接種は、大きな労働力を要するし、困難である。各々の動物を捕獲し、少なくとも１回、また、多くの場合は２回注射し、ワクチン接種の過程の間、捕捉しなければならない。
【０００６】
これらの難題ゆえに、ブタまたは家禽を感染から保護する、飲料水により動物群に投与（集団投与）される有効なワクチンは、人件費を節約するだけでなく、注射針により引き起こされるストレスおよび肉へのダメージを回避することにより、生産者にとって大きな利益となる。
【０００７】
加えて、一般的には納屋で飼育され、互いに分離して収容され閉じ込められていることが多いウシ、ヒツジ、ヤギおよびウマの生産者も、個別注射の費用、ストレスおよび肉のダメージを除去するので、飲料水により投与される経口ワクチンから利益を得る。
【０００８】
最後に、例えば、イヌおよびネコなどの家庭で飼育されるペットは、それらのストレスを減少させ注射を回避するので、経口ワクチンの投与から利益を得る。
【０００９】
従来は、鳥の大群への飲料水による集団投与の間に経験された主な不都合は、水消費の変動によるワクチン量の不一致と、一部の動物がワクチンを全く摂取しない可能性とである。加えて、ワクチン中における細菌またはウイルス病原体の生存可能性および安定性が水への混合により影響を受け得る。水中での安定性は、時間と共に劇的に減少し得る。かくして、免疫原性の病原体の不安定化を防止するように限られた時間量で動物に集団投与するためのワクチンを提供することは非常に望ましい。また、集団全体にわたるワクチン含有飲料水の一貫した自己投与を確実にするために動物にとって望ましいワクチンを提供することは都合がよい。
【００１０】
疾患を引き起こす伝染性の病原体に対するワクチンの経口投与に関する別の主要な欠点は、かかる病原体が不快な臭気または風味に関連することが多いことである。動物の大群に集団投与されるワクチン製剤は動物にとって望ましいものでなければならず、さもなければ、動物はそれらを自己投与、すなわちそれらを飲まない。同様に、家畜または個別に閉じ込められている動物に投与されるワクチン製剤は、動物が製剤を自己投与するように動物にとって口当たりの良いことが都合よい。最後に、家庭で飼育されるペットに関しては、これらの動物は、一般的には、口内に経口ワクチンを投与される。経口ワクチンは、獣医師または動物の健康管理者により投与されるが、動物により拒絶され吐き出されることが多い。かくして、経口投与されるワクチンを動物にとって望ましく、かつワクチンの成功した投与および摂取の見込みが増大する製剤で提供することは非常に都合よい。
【００１１】
ＷＯ９８／５１２７９は、ポリマー微粒子に封入された抗原性ペプチドをコードするＤＮＡからなる経口ワクチンの投与を記載している。風味を付ける物質を微粒子に封入してもよい。しかし、かかる微粒子は水溶性ではなく、疾患を引き起こす細菌またはウイルスの投与を行えない。
【００１２】
ベル（Ｂｅｌｌ）ら（オーストラリアン・ベテリナリー・ジャーナル（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ）６８（３），１９９１，ｐｐ．８５−８９）は、ニワトリへの集団投与によるニューカッスル病Ｖ４株ワクチンの投与を記載している。このワクチンは、以下の３つの方法を利用して投与された：１）脱脂粉乳と混合し、飲料水で投与；２）エアロゾルで投与；および３）粗いスプレーで投与。ニューカッスルウイルスに対する抗体の生成の血清学的な証拠が示されたが、ウイルス攻撃誘発（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）の研究は行われなかった。かくして、これらの鳥の疾患に対するワクチン接種の程度を決定することはできなかった。より重要なことは、鳥にとってより口当たりの良いワクチン製剤を製造する試みがなされなかった。
【００１３】
グリーブ（Ｇｒｉｅｖｅ）は、ニューカッスル病ワクチン製剤に青い色素を添加することにより、飲料水またはスプレーによるニワトリへのワクチン集団投与の評価を記載している。色素は、鳥の舌を一時的に染色することにより、ワクチンの消費をモニターするために用いられる。色素は、群れの約８０％だけがワクチンを摂取したことを示した。鳥にとってより口当たりの良いワクチン製剤を製造する試みはなされなかった。
【００１４】
かくして、動物にとって口当たりの良い有効に労働力の節約になる経口投与されるワクチンを処方し投与することは非常に望ましい。かかるワクチン製剤は、獣医師ならびに牛乳および食肉生産者に動物の群れおよび他の動物の健康を最適化するための便利で新しい戦略的な道具を提供するのに対し、動物に拒絶されないより口当たりの良い経口ワクチンは獣医学の実務において望ましい。
【００１５】
（発明の開示）
本発明は、動物の疾患に対する保護を提供する方法であって、
（ａ）水溶性の口当たりの良い香味剤を、経口投与されるワクチン投与用の水溶性媒体と混合し；
（ｂ）さらに工程（ａ）の混合物と、経口投与されるワクチンの有効成分としての細菌およびウイルスからなる群から選択される抗原を混合し；
（ｃ）工程（ｂ）の経口投与されるワクチンを動物に投与して、該抗原による感染に関連する疾患に対する保護を提供すること；
からなる方法を包含する。
【００１６】
また、本発明は、動物による経口投与されるワクチンの増大した摂取を誘発する方法であって、
（ａ）水溶性の口当たりの良い香味剤を、経口投与されるワクチン投与用の水溶性媒体と混合し；
（ｂ）さらに工程（ａ）の混合物と、経口投与されるワクチンの有効成分としての細菌およびウイルスからなる群から選択される抗原と混合し；
（ｃ）工程（ｂ）のワクチン混合物を動物に経口投与し；
（ｄ）経口投与されるワクチンの増大した摂取を香味剤で誘発すること；
からなる方法を包含する。
【００１７】
さらに、本発明は、有効成分として、細菌およびウイルスからなる群から選択される抗原と、水溶性の口当たりの良い香味剤および経口投与される動物ワクチン投与用の水溶性媒体とからなる経口投与される動物ワクチン製剤を包含する。
【００１８】
（発明を実施するための形態）
ここで引用されたすべての特許、特許出願、刊行物および他の資料は、出典を示すことにより、それらの全体を援用する。一致しない場合には、本願の説明は、定義を含めて、調整することを意図する。
【００１９】
ここで用いられるように、「集団投与」なる用語は、大きい施設に共に収容されている動物群に対する水溶性ワクチンの大規模投与として定義される。典型的には、かかる施設はブタおよび家禽を飼育する。
【００２０】
ここで用いられるように、「ブタ（ｓｗｉｎｅ）」および「ブタ（ｐｉｇ）」または「ブタ（ｐｉｇｓ）」なる用語は、同義語として用いられる。
【００２１】
ここで用いられるように、「家禽」なる用語は、ニワトリ、七面鳥およびアヒルを含むものとして定義される。
【００２２】
ここで用いられるように、「口当たりの良い香味剤」なる用語は、それが投与される動物または動物たちにより望まれることが示されている風味を付ける物質として定義される。かかる所望性は、口当たりの良い香味剤で風味付けられている飲料水またはシロップの自己投与の観察により、本発明の経口投与されるワクチンに処方する前に決定される。かかる香味剤の非限定的な例としては、イチゴ、サクランボ、ブドウ、スイカ、リンゴなどのフルーツの香味剤；魚の香味剤；肉の香味剤；および動物または動物たちに好まれる他の香味剤が挙げられる。フルーツの香味剤は、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコおよびイヌに投与するのに特に好ましい。肉の香味剤は、イヌおよびネコに特に好ましい。魚の香味剤は、ネコに特に好ましい。
【００２３】
ここで用いられているように、「動物の取扱者」なる用語は、農夫、獣医師、動物の健康に関する専門家、あるいは動物の世話ならびに動物への医薬品、ワクチンおよび／または餌の投与に責任のある他の人々を包含する。
【００２４】
本発明は、動物の疾患に対する保護を提供するための、および、動物による経口投与されるワクチンの増大した摂取を誘発するための、方法および組成物を包含する。本発明の方法は、混合した抗原による感染に関連する疾患に対する保護を提供し、かつ香味剤でワクチンの増大した摂取を誘発するために、細菌またはウイルス抗原を水溶性の口当たりの良い香味剤と混合し、さらに抗原および香味剤の混合物を、動物にワクチンを経口投与するための水溶性媒体と混合することを対象とする。
【００２５】
本発明は、かくして、疾患の予防における補助としての飲料水またはシロップによる健康な動物の経口ワクチン接種のための方法および組成物を包含する。口当たりの良い香味剤の混合は、動物の取扱者により投与された場合にワクチン製剤の自己投与を促進し、および／または製剤の拒絶を防止するために望ましい風味を有するワクチン製剤を提供する。
【００２６】
本発明のワクチンに処方される抗原は、細菌およびウイルスの疾患を引き起こす病原体である。生きた細菌およびウイルスが特に好ましい。生きた細菌またはウイルスをワクチン製剤の抗原として投与する場合、生きた抗原の生存可能性は特に重要である。動物または動物たちは、最大の可能な抗原性を確実にし、かつ強い免疫応答を得るように、抗原の生存可能性が大きく減少する前にワクチンを摂取しなければならない。
【００２７】
「悪性でない」または「不活化」細菌またはウイルス株は、動物の疾患を引き起こすことができないものと理解され、当業者がワクチンとして動物に投与するのが安全であると考えるいかなる株をも包含する。例えば、例えば、発熱、鼻汁または目やになどの軽症の臨床的徴候を引き起こす株は、かかる臨床的徴候は許容可能なワクチンの副作用であると考えられるので、本発明の範囲内である。
【００２８】
本発明に用いるために細菌またはウイルス抗原を不活化する１つの方法は、抗原のゲノムに、疾患を引き起こすその能力を排除する、ヌクレオチドの置換、挿入および／または欠失などの遺伝子突然変異を導入することである。組換えＤＮＡ技術の方法は、弱毒化株を製造するために細菌またはウイルス抗原のゲノムに欠失、挿入および置換を作出するのに用いることができる。これらの方法は、当該分野で公知であり、例えば、サムブロック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら（モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）、ア・ラボラトリー・マニュアル（Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）、第２版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、１９８９年）に記載されている。本発明に用いるために細菌またはウイルス抗原を弱毒化または不活化する他の方法は、当業者に公知である。
【００２９】
ここで用いられているように、「修飾された生きたウイルス」または「修飾された生きた細菌」は、典型的には、疾患を引き起こすその能力を弱毒化するために組織培養細胞内を通過させることにより変更されているが、動物に投与された場合に疾患または感染を保護するその能力を維持するウイルスまたは細菌抗原である。
【００３０】
本発明のウイルス抗原の「感染単位」は、ＴＣＩＤ５０、すなわち組織培養細胞の５０％を感染または死滅させるのに必要なウイルスの量して定義される。
【００３１】
所定の培養物中における細菌抗原の濃度は、当該分野で公知の標準的な方法、例えば、顕微鏡分析、コロニー計数または液体培養物の分光学的分析で測定することができる。
【００３２】
細菌毒素抗原の濃度は、適当な動物モデル、例えば、マウスにおける致死量（ＬＤ）およびＬＤ５０を求めることにより得ることができる。
【００３３】
ワクチンは、当該分野で標準的な方法により新しく採取したウイルス培養物から製造すればよい。ウイルスの増殖は、標準的な技術（細胞変性効果の観察、免疫蛍光または他の抗体に基づく検定法）によりモニターされ、十分に高いウイルス力価が達成されたときに採取される。ウイルス原品は、ワクチン製剤に添加する前に、従来の方法により、さらに濃縮または凍結乾燥してもよい。他の方法、例えば、トーマス（Ｔｈｏｍａｓ）ら（アグリ−プラクティス（Ａｇｒｉ−Ｐｒａｃｔｉｃｅ）、Ｖ．７ Ｎｏ．５，ｐｐ．２６−３０）に記載されているものを採用することができる。
【００３４】
細菌は、当該分野で公知の方法に従って増殖させる。本発明の製剤に用いるべき細菌抗原は、液状であってもよいし、口当たりの良い香味剤および水溶性媒体と共に用いる前に、再構成される凍結乾燥形態であってもよい。
【００３５】
一般的には、単一の動物に対して、１つの投与量のワクチンで投与すべき細菌抗原の好ましい量は、約１０５〜約１０１１コロニー形成単位（「ＣＦＵ」）、好ましくは約１０６〜約１０１０ＣＦＵ、最も好ましくは約１０７〜約１０９ＣＦＵである。別の好ましい具体例では、有効量は投与量あたり約１０５〜約１０８ＣＦＵである。
【００３６】
一般的には、単一の動物に対して、１つの投与量のワクチンで投与すべきウイルス抗原の好ましい量は、約１０３ ． ０〜約１０６ ． ０ＴＣＩＤ５０／ｍｌ、好ましくは１０４〜１０５ＴＣＩＤ５０／ｍｌに対応する量を含有する。
【００３７】
本発明のワクチンに処方すべき各々の細菌またはウイルス抗原の用量または有効量は、一般的には、ワクチン接種される動物または動物たちの年齢、健康および免疫状態（例えば、以前の曝露、母親の抗体）、ならびに用いられる特定の抗原に依存する。適当な有効量は、最低抗原レベルおよび投与すべき水またはシロップの用量計算を含めて、当業者がごく普通に求めることができる。
【００３８】
上記したように、いかなる感染性の弱毒化または不活化された生きたまたは死んだ細菌またはウイルス病原体であっても、本発明のワクチンに処方し、本発明の方法に従って投与すればよい。特に好ましい抗原の非限定的な例としては、以下の動物に感染するものが挙げられる：
ブタ−ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、大腸菌Ｋ８８、Ｋ９９、Ｆ４１および９８７Ｐ（Ｅ． ｃｏｌｉ Ｋ８８， Ｋ９９， Ｆ４１ ａｎｄ ９８７Ｐ）、Ｃ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ ｃ）、サルモネラ・コレラスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、気管支敗血症菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、レプトスピラ・ブラティスラヴァ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｂｒａｔｉｓｌａｖａ）、イヌ型レプトスピラ症（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトスピラ・グリッポチフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・ハルジョ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・プロモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｐｒｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・イクテロ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏ）、ブタ・インフルエンザウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、サーコウイルス（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ）、ＰＲＲＳウイルス（ＰＲＲＳ ｖｉｒｕｓ）、ブタ痘（Ｓｗｉｎｅ ｐｏｘ）、ロタウイルス（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、ブタ呼吸器コロナウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、パルボウイルス（Ｐａｒｖｏ ｖｉｒｕｓ）、オーエスキー病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ）、伝染性胃腸炎の病原体（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ａｇｅｎｔ）。
ウマ−腺疫菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、ウマ・インフルエンザウイルスＡ１およびＡ２株（Ｅｑｕｉｎｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓ Ａ１ ａｎｄ Ａ２ ｓｔｒａｉｎｓ）、ウマ・リノニューモニド１型、１ｂ型および４型（Ｅｑｕｉｎｅ Ｒｈｉｎｏｐｎｅｕｍｏｎｉｄｓ ｔｙｐｅ １， １ｂ ａｎｄ ４）、東部ウマ脳髄炎（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、西部ウマ脳脊髄炎（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、ベネズエラウマ脳脊髄炎（Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、ウマ・ロタウイルス（Ｅｑｕｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、
ウシ−大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Ｅ． ｃｏｌｉ ０１５７ ： Ｈ７）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、パスツレラ・ヘモリティカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、イヌ型レプトスピラ症（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトスピラ・グリッポチフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・ハルジョ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・プロモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｐｒｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・イクテロ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏ）、Ｃ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ Ｃ）、Ｄ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ Ｄ）、クロストリジウム・チャウヴォエル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｈａｕｖｏｅｌ）、クロストリジウム・ノーヴィ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）、悪性水腺菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、クロストリジウム・ヘモリティクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・ソデリイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｄｅｌｌｉｉ）、サルモネラ・ダブリンおよびネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｄｕｂｌｉｎ ａｎｄ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、ウシ・ロタウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、ウシ・コロナウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、ウシ伝染性鼻気管炎（Ｂｏｖｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、ウシ下痢症ウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザ−３（Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ−３）、呼吸器合胞体ウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）。
家禽−ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セプリナ・ピロシコリ（Ｓｅｐｕｌｌｉｎａ ｐｉｌｏｓｉｃｏｌｉ）、マレック病ウイルス（Ｍａｒｅｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、伝染性ファブリーキウス嚢病（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｕｒｓａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、伝染性気管支炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ニューカッスル病ウイルス（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、レオウイルス（Ｒｅｏ ｖｉｒｕｓ）、七面鳥鼻気管炎（Ｔｕｒｋｅｙ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、コウイディオシス（Ｃｏｕｉｄｉｏｓｉｓ）。
イヌ−イヌ型レプトスピラ症（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトスピラ・グリッポチフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・ハルジョ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・プロモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｐｒｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・イクテロ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏ）、イヌ・ライム病ボレリア（Ｃａｎｉｎｅ Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、イヌ・エールリヒア・カニス（Ｃａｎｉｎｅ Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃａｎｉｓ）、イヌ気管支敗血症菌（Ｃａｎｉｎｅ Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、イヌのランブル鞭毛虫（Ｃａｎｉｎｅ Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ）、イヌ・ジステンパー（Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ）、イヌ・アデノウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、イヌ・コロナウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、イヌ・パラインフルエンザ（Ｃａｎｉｎｅ Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、イヌ・パルボウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、イヌ狂犬病（Ｃａｎｉｎｅ Ｒａｂｉｅｓ）。
ネコ−ネコのオウム病クラミジア（Ｆｅｌｉｎｅ Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、ネコ免疫不全ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）、ネコ白血病ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）、ネコ鼻気管炎（Ｆｅｌｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｌｉｔｉｓ）、ネコ汎白血球減少症（Ｆｅｌｉｎｅ Ｐａｎｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ）、ネコ狂犬病（Ｆｅｌｉｎｅ ｒａｂｉｅｓ）。
【００３９】
多くの場合、本発明の経口投与されるワクチンに処方するための細菌およびウイルス抗原の調製および製造は、動物たちが好まない口当たりの悪い風味を有する抗原をもたらす。かくして、飲料水またはシロップでワクチンを経口投与する場合、動物たちはワクチン製剤をそれほど飲まないか、あるいは不快な風味ゆえにシロップを拒絶して吐き出す。本発明のワクチン製剤に口当たりの良い香味剤を混合することは、経口投与されるワクチンの摂取を促進し増大させる。かかる口当たりの良い香味剤は、利用される香味剤により規定される濃度で混合される。好ましい濃度としては、少なくとも約０．０１％〜１．０％またはそれ以上が挙げられる。
【００４０】
液状の香味剤は、滴下器または他の手段によりワクチン製剤に加えればよい。香味剤が粉末状であれば、それらは再水和してワクチン製剤に混合すればよい。
【００４１】
本発明の経口ワクチンをブタまたは家禽に投与する場合、投与の好ましい方法は、共に飼育されている動物の大群への集団投与によるものである。ワクチンは、連続的な供給または滴下により動物たちに提供される飲料水中に処方される。次いで、動物たちは飲料水の所へ行き、水中に含有されるワクチンを飲むことにより、ワクチンを自己投与する。連続的な供給または滴下装置の一例は、ドサトロン（ＤｏｓａｔｒｏｎＴＭ）（ドサトロン・インターナショナル・インク（Ｄｏｓａｔｒｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）、フロリダ州クリアウォーター）と呼ばれる自動水配分装置である。ある好ましい具体例では、水配分装置は水溶性ワクチン／香味剤を水滴下供給器に少量ずつ連続的に供給する。次いで、水滴下供給器は水を動物たちに飼育設備内での集団投与により、例えば、乳頭突起により滴下することにより、供給する。
【００４２】
本発明の経口ワクチンを納屋、畜舎または囲いの中で恒久的に飼育され個別に維持されているウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギまたは他の家畜に投与する場合、投与の好ましい方法は飲料水の入ったバケツまたはかいば桶での投与によるものである。
【００４３】
本発明の経口ワクチンを動物またはネコもしくはイヌなどの家庭で飼育されているペットに単独で投与する場合、ワクチンは飲料水またはより好ましくはシロップで投与すればよい。かかるシロップは、好ましくはシリンジなどの装置により口に投与される。かかる投与は、最も好ましくは咽喉の背側におけるものである。経口ワクチンは、当該分野で公知の方法に従ってシロップに製剤化すればよい。シロップを製剤化する方法の非限定的な例は、以下の参考文献に見出すことができる：
【００４４】
”Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｓｙｒｕｐｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ ａｍｙｌａｓｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂｅｓ”， Ｓａｈａ， Ｂ． Ｃ．； Ｚｅｉｋｕｓ， Ｊ． Ｇ．， Ｅｎｚｙｍｅ Ａｎｄ ＭｉｃｒｏｂｉａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． １２， Ｎｏ． ３， ｐ． ２２９−２３１ （１９９０）；
”Ｐｒｏｂｌｅｍ ｏｆ Ｔｈｅ Ｍａｓｓ−Ｖｏｌｕｍｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ａｎｄ Ｔａｂｌｅ Ｓｙｒｕｐｓ”， Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ， Ａ． Ｉ．， Ｆａｒｍａｔｓｉｙａ （Ｍｏｓｃｏｗ）， Ｖｏｌ． ３３， Ｎｏ． ６， ｐ． ７０−７１ （１９８４）；
”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｓｙｒｕｐ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｖｅｒｓｕｓ ｃｏｕｇｈ： Ｆｒｏｍ ｔｅｓｔ−ｓｉｚｅ ｂａｔｃｈ ｔｏ ｐｉｌｏｔ−ｓｉｚｅ ｂａｔｃｈ．”， Ｒｅｎａｕｄｅａｕ， Ｐ．； Ｃｌａｉｒ， Ｐ．．； Ｃａｉｒｅ−Ｍａｕｒｉｓｉｅｒ， Ｆ．， Ｔｒａｖａｕｘ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｑｕｅｓ ｄｅｓ Ｃｈｅｒｃｈｅｕｒｓ ｄｕ Ｓｅｒｖｉｃｅ ｄｅ Ｓａｎｔｅ ｄｅｓ Ａｒｍｅｅｓ， Ｖｏｌ． ０．， Ｎｏ． ２０． （１９９９）， ｐｐ． １１３−１１４；
”Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ ｄｅｘｔｒｏｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ ｒｅｓｉｎａｔｅ ｓｙｒｕｐ”， ＥＩ−Ｓａｍａｌｉｇｙ， Ｍ． Ｓ．； Ｍａｈｍｏｕｄ， Ｈ． Ａ．； Ｏｍａｒ， Ｉ． Ｍ．， Ｅｇｙｐｔｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｖｏｌ． ３７， Ｎｏ． １−６ （１９９６）， ｐｐ． ５０９−５１９；
”Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ， ｅｆｆｉｃａｃｙ， ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｑｕｉｎｉｎｅ （ｓｙｒｕｐ） ｉｎ ｕｎｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ｍａｌａｒｉａ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ．”， Ｒｅｙ， Ｅ．； Ｐａｒｉｅｎｔｅ−Ｋｈａｙａｔ， Ａ．； Ｄ’Ａｔｈｉｓ， Ｐ．； Ｔｅｔａｎｙｅ， Ｅ．； Ｖａｒｌａｎ， Ｍ．； Ｏｌｉｖｅ， Ｇ．； Ｐｏｎｓ， Ｇ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． １８， Ｎｏ． Ｓｕｐｐｌ． Ｂ （１９９６）， ｐｐ． １２５；
”Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｒｏｐ ａｎｄ ｓｙｒｕｐ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａ （ｄｅｘｔｒｏｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ−ｇｕａｉｆｅｎｅｓｉｎ−ｍｅｎｇｌｉｔｈａｔｅ）−ｂａｓｅｄ ｃｏｕｇｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ．”， Ｆｒａｎｃｈｉ， Ｆ．， Ｒｉｖｉｓｔａ ｄｉ Ｐａｔｏｌｏｇｉａ ｅ Ｃｌｉｎｉｃａ， Ｖｏｌ． ４８， Ｎｏ． ３ （１９９３）， ｐｐ． １４９−１６６；
”Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｒｕｃｔｏｓｅ ｓｙｒｕｐｓ ｆｒｏｍ Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ ａｒｔｉｃｈｏｋｅ ｔｕｂｅｒ ｕｓｉｎｇ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｎｕｌｉｎａｓｅ ｆｒｏｍ Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ｙ−８５”， Ｗｅｉ， Ｗｅｎｌｉｎｇ； Ｌｅ Ｈｕｉｙｉｎｇ， Ｗａｎ Ｗｕｇｕａｎｇ； Ｗａｎｇ， Ｓｈｉｙｕａｎ， Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ． （Ｏｘｆｏｒｄ）， Ｖｏｌ． ３４， Ｎｏ． ６，７ （１９９９）， ｐｐ． ６４３−６４６；
”Ｓｙｒｕｐｓ ｆｏｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｐａｃｔ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｗｉｔｈ ｌａｒｇｅ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ”， Ｄｏｙｌｅ， Ｔｈｏｍａｓ Ｒ．， １９９９年１０月２６日， 米国特許第５，９７３，０７９号；
”Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｓｙｒｕｐ ｆｒｏｍ ｓｔａｒｃｈ”， Ｎｏｒｍａｎ， Ｂａｒｒｉｅ Ｅｄｍｕｎｄ； Ｈｅｎｄｒｉｋｓｅｎ， Ｈａｎｎｅ Ｖａｎｇ， １９９９年９月１６日， 国際公開第ＷＯ ９９／４６３９９号； ”Ａｃｒｙｌａｔｅ ｓｙｒｕｐ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｗｅａｔｈｅｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ”， Ｍａｋｉｎｏ， Ｔａｋａｙｕｋｉ； Ｔａｋｅｍｏｔｏ， Ｔｏｓｈｉｏ； Ｙａｎａｇａｓｅ， Ａｋｉｒａ， １９９９年８月３日， 日本国特許第９９２０９４３１号（日本国特許出願第１９９８−２４０４１−Ａ２号）；
”Ｍｉｃｒｏｅｌｅｍｅｎｔ ｓｙｒｕｐ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｉｔｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ”， Ｓｖｉａｔｋｏ， Ｐｅｔｅｒ； Ｂｏｄａ， Ｋｏｌｏｍａｎ， １９９８年７月８日， スロバキア特許第２７９，１２８号；
”Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｂｅｅｔ ｓｕｇａｒ ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ ｓｙｒｕｐ ｉｎｖｅｒｔ ａｎｄ ｓｕｃｒｏｓｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｂｙ ｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ”， Ｖｅｒｃｅｌｌｏｔｔｉ， Ｊｏｈｎ Ｒ．； Ｄｅｓｉｍｏｎｅ， Ｆｒａｎｋ； Ｃｌａｒｋｅ， Ｍａｒｇａｒｅｔ Ａ．， Ｐｒｏｃ． Ｓｕｇａｒ Ｐｒｏｃｅｓｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｎｆ． （１９９８）， ｐｐ． ４４２−４４８；
”Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｗｄｅｒｓ ｆｒｏｍ ｔｒｅｈａｌｏｓｅ ｓｙｒｕｐｓ”， Ｔｏｔｓｕｋａ， Ａｔｓｕｓｈｉ； Ｙａｍａｍｏｔｏ， Ｔａｋｅｓｈｉ； Ｕｍｉｎｏ， Ｔａｋｅｈｉｒｏ， １９９９年５月２５日， 日本国特許第９９１４００９４号（日本国特許出願第１９９７−３１５９９３／Ａ２号、１９９７年１０月３１日出願）；
”Ｈｕｍａｎ ＩＧＦ−Ｉ ｓｙｒｕｐ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｕｓｅ”， Ｓｈｉｒｌｅｙ， Ｂｒｅｔ Ａ．； Ｈｏｒａ， Ｍａｎｉｎｄｅｒ Ｓ．， １９９９年５月２０日， 国際公開第ＷＯ ９９／２４０６２号；
”Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｒｃｈ ｓｙｒｕｐｓ ｏｎ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｆｏａｍ ｐｒｏｄｕｃｔｓ”， Ｎｅｂｅｓｎｙ， Ｅｗａ； Ｐｉｅｒｚｇａｌｓｋｉ， Ｔａｄｅｕｓｚ； Ｒｏｓｉｃｋａ， Ｊｕｓｔｙｎａ， Ｚｅｓｚ． Ｎａｕｋ．−Ｐｏｌｉｔｅｃｈ． Ｌｏｄｚ．， Ｃｈｅｍ． Ｓｐｏｚｙｗ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， Ｖｏｌ． ５８ （１９９８）， ｐｐ． ６９−９４；
”Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｌｏｒａｌ ｈｙｄｒａｔｅ ｓｙｒｕｐ”， Ｉｓｈｉｄａ， Ａｔｓｕｙｏ； Ｍｉｙａｍａ， Ｓｈｕｈｏ； Ｍｉｋａｙａｍａ， Ｈｉｒｏｋｉ； Ｔｅｒｕｙａｍａ， Ｓｈｉｇｅｏ； Ｔａｋｅｙａｓｕ， Ａｋｉｋｏ； Ｏｈａｓｉ， Ａｔｓｕｓｈｉ； Ｏｋａｍｏｔｏ， Ｋａｚｕａｋｉ； Ｏｎｉｓｈｉ， Ｔｏｓｈｉｏ； Ｙａｓｕｈａｒａ， Ａｋｉｈｉｒｏ， Ｉｇａｋｕ ｔｏ Ｙａｋｕｇａｋｕ， Ｖｏｌ． ４０， Ｎｏ． ２ （１９９８）， ｐｐ． ３２９−３３３；
”Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ ａｎｄ ｓｙｒｕｐ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓａｃｃｈａｒｉｆｉｅｄ ｃｏｒｎ ｓｔａｒｃｈ ｈｙｄｒｏｌｙｚａｔｅ”， Ｓｉｎｇｈ， Ｎ．； Ｃｈｅｒｙａｎ， Ｍ．， Ｊ． Ｃｅｒｅａｌ Ｓｃｉ．， Ｖｏｌ． ２７， Ｎｏ． ３ （１９９８）， ｐｐ． ３１５−３２０；
”Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｌａｃｔｕｌｏｓｅ ｆｒｏｍ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｓｙｒｕｐｓ”， Ｂｉｍｂｉ， Ｇｉｕｓｅｐｐｅ， Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ． ６２２， ３７４−Ｂ１；
”Ｍａｌｔｉｔｏｌ ｂａｓｅｄ ｓｗｅｅｔｅｎｉｎｇ ｓｙｒｕｐ， ｃｏｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｉｓ ｓｙｒｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ａ ｃｒｙｓｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ａｇｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ”， Ｒｉｂａｄｅａｕ−Ｄｕｍａｓ， Ｇｕｉｌｌａｕｍｅ； Ｆｏｕａｃｈｅ， Ｃａｔｈｅｒｉｎｅ； Ｓｅｒｐｅｌｌｏｎｉ， Ｍｉｃｈｅｌ， 欧州特許第６１１，５２７−Ｂ１号；
”Ｓｙｒｕｐ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ”， Ｋａｗａｓａｋｉ， Ｙｏｓｈｉｈｉｋｏ； Ｓｕｚｕｋｉ， Ｙｕｋｉｏ， 欧州特許第４４１，３０７−Ｂ１号；
”Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｓｙｒｕｐｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ”， ＰＡＴＥＬ， Ｍａｎｓｕｋｈ， Ｍ．； ＲＥＥＤ， Ｍｉｃｈａｅｌ， Ａ．； ＷＯＫＡＳ， Ｗｉｌｌｉａｍ， Ｊ．； ＫＵＲＥＳ， Ｖａｓｅｋ， Ｊ．； 欧州特許第２４１，５４３ Ｂ１号；
”Ｍｅｔｈａｄｏｎｅ ｓｙｒｕｐ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｈｅｒｏｉｎ ｄｒｕｇ ａｄｄｉｃｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ”， Ｇａｇｎａｉｒｅ， Ｌ．； Ｆｅｌｌｏｕｓ， Ｊ．； Ｄａｕｐｈｉｎ， Ａ．； Ｂｏｎａｎ， Ｂ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｄｅ Ｐｈａｒｍａｃｉｅ Ｃｌｉｎｉｑｕｅ （Ｆｒａｎｃｅ）， Ｖｏｌ． １７， Ｎｏ． ４ （１９９８）， ｐｐ． ２６４−２６７；
”Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｂｌｅ ｓｙｒｕｐｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｅｘｔｒａｃｔｕｍ ｐｌａｎｔａｇｉｎｉｓ ｆｌｕｉｄｕｍ”， Ｔｉｃｈｙ， Ｅ．， Ｐｈａｒｍａｚｉｅ （Ｇｅｒｍａｎｙ）， Ｖｏｌ． ５２， Ｆｅｂ． １９９７， ｐｐ． １６７−１６８；
”Ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ， ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ， ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ａｎｄ−ｄｙｎａｍｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ２ ｎｅｗ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｉｒａｃｅｔａｍ （ｉｎｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｒｕｐ） ｕｎｄｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎ ｍａｎ”， Ｓａｌｅｔｕ， Ｂ．； Ｈｉｔｚｅｎｂｅｒｇｅｒ， Ｇ．； Ｇｒｕｎｂｅｒｇｅｒ， Ｊ．； Ａｎｄｅｒｅｒ， Ｐ．； Ｒａｍｅｉｓ， Ｈ． ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｖｏｌ． ３３， Ｍａｙ １９９５， ｐｐ． ２４９−２６２；
”Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｓｙｒｕｐ ａｎｄ ｔａｂｌｅｔ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｅｆｅｔａｍｅｔ ｐｉｖｏｘｉｌ”， Ｄｕｃｈａｒｍｅ， Ｍ． Ｐ．； Ｅｄｗａｒｄｓ， Ｄ． Ｊ．； ＭｃＮａｍａｒａ， Ｐ． Ｊ．； Ｓｔｏｅｃｋｅｌ， Ｋ．， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ， Ｖｏｌ． ３７， Ｄｅｃ． １９９３， ｐｐ． ２７０６−２７０９；
”Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｐｒｉｎｋｌｅ ｖｅｒｓｕｓ ｓｙｒｕｐ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｖａｌｐｒｏａｔｅ ｆｏｒ ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ， ｔｏｌｅｒａｎｃｅ， ａｎｄ ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”， Ｃｌｏｙｄ， Ｊ． Ｃ．； Ｋｒｉｅｌ， Ｒ． Ｌ．； Ｊｏｎｅｓ−Ｓａｅｔｅ， Ｃ． Ｍ．； Ｏｎｇ， Ｂ． Ｙ．； Ｒｅｍｍｅｌ， Ｒ． Ｐ． ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ， Ｖｏｌ． １２０， Ａｐｒ． １９９２， ｐｐ． ６３４−６３８；
”Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｙｒｕｐｓ ｒｉｃｈ ｉｎ ｆｒｕｃｔｏｓｅ ｆｒｏｍ ｔｕｐｉｎａｍｂｏ”， Ｍａｇｒｏ， Ｊ． Ｒｅｇａｌｏ Ｄａ； Ｆｏｎｓｅｃａ， Ｍ． Ｍ．， Ｒｅｖｉｓｔａ Ｐｏｒｔｕｇｕｅｓａ ｄｅ Ｆａｒｍａｃｉａ （Ｐｏｒｔｕｇａｌ）， Ｖｏｌ． ３８， Ａｐｒ．−Ｊｕｎ． １９８８， ｐｐ． ２７−３２；
”Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ ｐｒｏｘｅｔｉｌ ｄｒｙ ｓｙｒｕｐ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｆｉｅｌｄ”， Ｋａｓａｇｉ， Ｔ．； Ｔａｎｉｍｏｔｏ， Ｋ．； Ｏｇｉｈａｒａ， Ｙ．； Ｈａｙａｓｈｉｂａｒａ， Ｈ．； Ｏｋｕｄａ， Ｈ．； Ｓｈｉｒａｋｉ， Ｋ．， Ｊｐｎ Ｊ Ａｎｔｉｂｉｏｔ， Ｖｏｌ． ４７， Ｎｏ． ９， Ｓｅｐｔ． １９９４， ｐｐ． １２０２−９；および
”Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ ｏｒ ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ ｓｙｒｕｐ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ”， Ｋａｗａｓａｋｉ， Ｙｏｓｈｉｈｉｋｏ； Ｓｕｚｕｋｉ， Ｙｕｋｉｏ， 米国特許第５，１５４，９２６号。
【００４５】
調製されるワクチン原液の量は、各々の動物がワクチン接種の期間に飲む水の量に基づいている。好ましいワクチン接種期間は、抗原に依存して、飲料水で投与するための０．５〜１０時間である。各々の動物が飲む水の量は、ワクチン接種されるべき動物の平均体重に従って推定される。自動水配分装置を用いる場合、好ましい方法は以下のとおりである。ワクチン原液を接続ホースにより自動水配分装置に加える。自動水配分装置は水源に接続する。水配分装置は、パイプライン中の流水と共にワクチンを吸い上げ、飲料水が滴下する乳頭突起に送り出す。
【００４６】
本発明の経口投与されるワクチンを処方するためには、動物に投与すべき（体重に基づく）水の量をまず求める。ワクチン接種すべき動物の全体重は、ワクチン接種すべき動物の全数に動物の平均体重を掛けることにより計算する。動物の体重に必要とされる水の量を求めて、ワクチン製剤を必要な水およびワクチン製剤を投与すべき時間の長さに基づいて計算する。ブタに対する本発明のワクチンの処方および投与に用いるべき計算方法のタイプの１つの非限定的な例は、実施例１および表２に見出すことができる。
【００４７】
本発明の動物たちに投与すべき水の平均量は当業者が求めることができる。投与される水の平均量の非限定的な例は、１）家禽では、１０００羽あたり約２．５〜５ガロン；２）放牧牛は、冬には最低２．５ガロン（９．５Ｌ）の水／頭／日、夏には１２ガロン（４５Ｌ）／頭／日までを消費する；３）種牛、当歳牛および二歳齢の子牛は、一日に約１０ガロン（３８Ｌ）の水を消費する；４）仕上げの子牛は毎日６〜８ガロン（２３〜３０Ｌ）の水を飲む；ならびに５）イヌおよびネコなどの小動物は１日あたり約２５０〜１５００ｍＬの水を必要とする。
【００４８】
飲料水で本発明のワクチンを投与する前に、飲料水の摂取を促進するように、ワクチン接種すべき動物からすべての飲料水を除去することが好ましい。飲料水でワクチンを投与する前に、飲料水を一晩除去することが好ましい。
【００４９】
本発明の経口ワクチンは、動物に投与して一回量または二回量で免疫化すればよい。本発明の好ましい方法は二回量のワクチンの投与である。
【００５０】
以下の実施例は、本発明の非限定的な例示として意図される。
実施例１
風味付けした飲料水によるブタへの経口ワクチンの集団投与
合計３０頭の６週齢のブタを用いて、免疫原性に関する研究を行った。３０頭のブタのうち、２０頭はワクチン接種動物であり、１０頭はワクチン接種をしない対照とした。２０頭のワクチン接種するブタすべてに、自動水分配装置（ドサトロン（Ｄｏｓａｔｒｏｎ））を用いて、飲料水により、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ワクチン（無毒性の生きた培養物）を集団ワクチン接種した。第２回目のワクチン接種は、最初のものと同じ適用方法を用いることにより、第１回目のワクチン接種の２週間後に与えた。ワクチン接種したブタすべてを各々のワクチン接種の８日後に丹毒に関連する臨床的徴候について観察して、ワクチンの安全性を裏付けた。第２回目のワクチン接種の２１日後に、２０頭のワクチン接種動物および１０頭の非ワクチン接種対照すべてに、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の毒性株を筋肉内に攻撃誘発した。攻撃誘発したブタすべてを攻撃誘発の７日間にわたって、９ＣＦＲ１１３．６７に従って、体温および丹毒に関連する臨床的徴候について観察した。ワクチン接種したブタは、各々のワクチン接種後に、丹毒の臨床的徴候を示さなかった。攻撃誘発後、ワクチン接種していない対照ブタの１００パーセント（１００％）は、丹毒の重篤な臨床的徴候、例えば、高い体温、関節炎、食欲不振、うつ、嗜眠、全身の発赤斑（菱形皮膚病変）および観察期間内の突然死を示した。対照ブタの７０パーセント（７０％）は、攻撃誘発の４〜６日後までに死亡した。攻撃誘発後の対照ブタからまたは検死において採取した試料のすべてからブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）が単離された。対照的に、ワクチン接種したブタの１００％は丹毒の臨床的徴候を示さなかった。この研究の結果は、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ワクチンに関する９ＣＦＲ１１３．６７に述べられている要件を十分に満足している。この研究から採取されたデータは、飲料水により投与された集団ワクチン接種用のブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ワクチン（無毒性の生きた培養物）が安全であり、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）により引き起こされる疾患からブタを投与量あたり約６．０６×１０７ＣＦＵの最低レベルで保護するのに有効であることを示した。
【００５１】
試験動物
種： ブタ
頭数： ３０
年齢： ６週齢
性別： 雌雄
品種： 雑種
識別： 耳標
起源： ＦＤＡＨ ＳＰＦ群由来
【００５２】
動物の飼育および世話
すべてのブタは、施設の標準である２１日齢で離乳されるまで雌ブタに養わせた。離乳したブタには、水および餌を自由に与えた。ブタは、現場監督により適当であると思われる、抗生物質を含まないアーリー・スタート・フィード（Ｅａｒｌｙ Ｓｔａｒｔ Ｆｅｅｄ）（スーパースィートブランド（Ｓｕｐｅｒｓｗｅｅｔ Ｂｒａｎｄ））から始めて、スタート・アミノ（Ｓｔａｒｔ Ａｍｉｎｏ）に変更した。ワクチン接種動物および対照は、ワクチン接種後、攻撃誘発まで、２つの別々の部屋で飼育した。ワクチンの投与については、２０頭のワクチン接種したブタを囲いあたり１０頭ずつ２つの囲いに入れた。各々の囲いには、水のホースに接続した水の出る乳頭突起を設けた。両方の乳頭突起への水は、同じ自動水配分装置（ドサトロン（Ｄｏｓａｔｒｏｎ））で送った。攻撃誘発の２日前に、ワクチン接種したブタおよびワクチン接種していない対照を１つの部屋に混合し、すべてのブタをブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の毒性株で攻撃誘発した。攻撃誘発したブタは、すべて観察期間の最後まで、この部屋で維持した。
【００５３】
ワクチンの組成
この研究に用いた凍結乾燥したブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）は最高の継代レベル（すなわち、原種＋５）で製造した。抗原の原種は５回培養物である。各々の継代は、連続的に、ＭＳ＋１、ＭＳ＋２、ＭＳ＋３、ＭＳ＋４およびＭＳ＋５と呼ぶ。
【００５４】
実験計画
マイクロソフト・エクセル（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ）の乱数発生プログラムを用いて、ブタを無作為にワクチン接種動物群および対照群に指定した。第１回目のワクチン接種のとき、６週齢のワクチン接種動物が２０頭、非ワクチン接種対照が１０頭であった（付録２）。すべてのワクチン接種動物には、投与を２週間あけて２回のワクチン接種を行った。ワクチン接種動物および非ワクチン接種対照の両方には、第２回目のワクチン接種の２１日後（２１ＤＰＶ２）に攻撃誘発を行った。両方のワクチン接種については、ワクチンは、自動水分配装置（ドサトロン（Ｄｏｓａｔｒｏｎ））を用いて、飲料水により送達した。将来の可能な血清学的分析のために、ワクチン接種の日および攻撃誘発の日にワクチン接種動物および対照の両方からの血清試料を採取した。攻撃誘発の７日後（７ＤＰＣ）に、生存しているブタすべてを安楽死させた。ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）を単離するために、攻撃誘発後の対照ブタからまたは検死において血液試料および臓器を採取した。また、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）を単離するために、安楽死させたワクチン接種動物から血液試料を採取した。
【００５５】
【表１】
【００５６】
【表２】
【００５７】
ワクチンの調製
調製したワクチン原液の量は、各々のブタが６時間のワクチン接種期間の間に飲む水の量に基づいていた。各々のブタが飲む水およびワクチン有機体の量は、ワクチン接種すべき２０頭のブタの平均体重に従って推定した（付録３）。簡単には、凍結乾燥したワクチンを風味付けした（０．５％ギバウダン・ラウアー（Ｇｉｖａｕｄａｎ Ｒｏｕｒｅ）、連続番号Ｃ−３２１１１０）希釈剤に再懸濁した。再水和したワクチンは、無脂肪粉乳を含有する５リットルのミルク溶液に加え、よく混合した。さらに、ワクチン原液は、水を用いて、７リットルに希釈した後、さらに混合するために、容器を回転プレート上に置いた。次いで、この原液を接続ホースにより自動水配分装置に接続した。接続ホースは水源に接続した。
【００５８】
付録３：ワクチン接種期間の間に消費されるワクチンの推定量の計算
第１回目のワクチン接種
１．ワクチン接種動物の平均体重は１８．３ポンドであった。
２．１８．３ポンド／１００ポンド×９４６ｍＬ＝１７３ｍＬ。この計算は、１００ポンドのブタが２４時間で１ガロン（３７８５．４ｍＬ）の水を飲み、それゆえ、１００ポンドのブタは６時間のワクチン接種期間の間に９４６ｍＬの水を飲むという仮定に基づいていた。
３．各々のワクチンボトルには、４．１２×１０１０ＣＦＵ（２．０６×１０９ＣＦＵ／ｍＬ×２０ｍＬ）が含まれていた。
４．乳頭突起からの投与量あたりの目標ＣＦＵは、原液容器から乳頭突起に失われる分を除いて、１×１０８ＣＦＵであった。
５．各々のブタが１７３ｍＬ中の１×１０８ＣＦＵを得るために、乳頭突起からのワクチン有機体の濃度は、５．８×１０５ＣＦＵ／ｍＬ（１×１０８ＣＦＵ／１７３ｍＬ）でなければならなかった。
６．乳頭突起から５．８×１０５ＣＦＵ／ｍＬを得るためには、ワクチン原液の濃度は、７．４２×１０７ＣＦＵ／ｍＬ（５．８×１０５ＣＦＵ／ｍＬ×１２８＊＝７．４２×１０７ＣＦＵ／ｍＬ）でなければならなかった。
７．６時間のワクチン接種期間の間に乳頭突起からワクチンが連続して流れ出るようにするためには、７リットルの原液が必要であった。原液中の全ＣＦＵは、７．４２×１０７ＣＦＵ／ｍＬ×７０００ｍＬ＝５．１９×１０１１ＣＦＵであった。
８．ボトル１３本の凍結乾燥したワクチンを希釈剤で再水和した。ボトル１２．６本（５．１９×１０１１ＣＦＵ／４．１２×１０１０ＣＦＵ／ボトル＝ボトル１２．６本）に相当する量の再水和したワクチンを無脂肪乳および水と混合して、原液を製造した。
【００５９】
第２回目のワクチン接種
１．ワクチン接種動物の平均体重は３５．５ポンドであった。
２．３５．５ポンド／１００ポンド×９４６ｍＬ＝３３６ｍＬ。この計算は、１００ポンドのブタが２４時間で１ガロン（３７８５．４ｍＬ）の水を飲み、それゆえ、１００ポンドのブタは６時間のワクチン接種期間の間に９４６ｍＬの水を飲むという仮定に基づいていた。
３．各々のワクチンボトルには、４．１２×１０１０ＣＦＵ（２．０６×１０９ＣＦＵ／ｍＬ×２０ｍＬ）が含まれていた。
４．乳頭突起からの投与量あたりの目標ＣＦＵは、原液容器から乳頭突起に失われる分を除いて、１×１０８ＣＦＵであった。
５．各々のブタが３３６ｍＬ中の１×１０８ＣＦＵを得るために、乳頭突起からのワクチン有機体の濃度は、２．９８×１０５ＣＦＵ／ｍＬ（１×１０８ＣＦＵ／３３６ｍＬ）でなければならなかった。
６．乳頭突起から２．９８×１０５ＣＦＵ／ｍＬを得るためには、ワクチン原液の濃度は、３．８１×１０７ＣＦＵ／ｍＬ（２．９８×１０５ＣＦＵ／ｍＬ×１２８＊＝３．８１×１０７ＣＦＵ／ｍＬ）でなければならなかった。
７．６時間のワクチン接種期間の間に乳頭突起からワクチンが連続して流れ出るようにするためには、７リットルの原液が必要であった。原液中の全ＣＦＵは、３．８１×１０７ＣＦＵ／ｍＬ×７０００ｍＬ＝２．６７×１０１１ＣＦＵであった。
８．ボトル７本の凍結乾燥したワクチンを希釈剤で再水和した。ボトル６．４７本（２．６７×１０１１ＣＦＵ／４．１２×１０１０ＣＦＵ／ボトル＝ボトル６．４７本）に相当する量の再水和したワクチンを無脂肪乳および水と混合して、原液を製造した。
＊配分装置は送達比１：１２８に調節した。
【００６０】
水システムの調製、経口投与されるワクチンおよびワクチン接種法
各々のワクチン接種されるブタの体重をワクチン接種の前日に測定し（付録２）、ワクチン接種期間の間に用いるべきワクチン原液の量を計算するのに用いた。飲料水は、ワクチン接種の前に一晩（少なくとも８〜１０時間）ブタから取り上げ、ワクチン接種を開始した後、ブタに再び与えた。ワクチン接種期間は、ブタが推定量のワクチンを消費するように、少なくとも６時間続けた。第１回目のワクチン接種のとき、十分なワクチンが６時間の間に乳頭突起から連続して流れ出るように、７リットルの原液ワクチンを上記のように調製した。ドサトロン（Ｄｏｓａｔｒｏｎ）を原液容器に接続し、そして、水１ガロンあたり１オンスがワクチン接種されるブタに送達されるように、水配分装置を調節した。自動水配分装置は、２つの水の出る乳頭突起（囲いあたり１つの乳頭突起）を並列に駆動し、ワクチンを２つの乳頭突起に同時に送達した。ワクチン原液は、ワクチン期間の間、混合するために攪拌プレート上に置いた。送達を開始した後、２つの乳頭突起からの試料を１時間毎に採取した。生存細菌数の計数は、５％ヒツジ血液を含むＴＳＡＩＩ寒天プレート上で行った。各々の試料につき、５枚のプレートを用いた。第２回目のワクチン接種のとき、ワクチン再水和法、水配分装置のセットアップおよび試料採取は、第１回目のワクチン接種と同じであった。
【００６１】
ワクチン接種投与量の計算
飲料水中におけるワクチンの濃度および投与量の決定を付録４に示す。第１回目のワクチン接種における２つの乳頭突起の平均生存数は３．５０×１０５ＣＦＵ／ｍＬであり、各々のブタが消費する水の推定量は、群の体重および公表されている水消費率に基づいて、約１７３ｍＬであった。それゆえ、各々のブタに実際に投与される投与量あたりのＣＦＵは、３．５０×１０５ＣＦＵ／ｍＬ×１７３ｍＬ＝６．０６×１０７ＣＦＵであると計算された。
【００６２】
同様に、第２回目のワクチン接種における２つの乳頭突起の平均生存数は１．４２×１０５ＣＦＵ／ｍＬであり、各々のブタが消費する水の量は約３３６ｍＬであった。それゆえ、第２回目のワクチン接種の間に各々のブタに実際に投与される投与量あたりのＣＦＵは１．４２×１０５ＣＦＵ／ｍＬ×３３６ｍＬ＝４．７７×１０７ＣＦＵであると計算された。
【００６３】
【表３】
【００６４】
原液と乳頭突起試料との間のワクチン有機体の生存数の比較
原液と乳頭突起試料との間のワクチン有機体の生存数を比較した。第１回目および第２回目のワクチン接種における結果をそれぞれ表１および表２に示す。第１回目のワクチン接種では、原液の平均生存数は１．３６×１０８ＣＦＵ／ｍＬであった。２つの乳頭突起の平均ＣＦＵ／ｍＬは３．４９×１０５ＣＦＵ／ｍＬであり、平均の理論的ＣＦＵ／ｍＬ（原液の平均ＣＦＵ／ｍＬ／１２８）は１．０６×１０６ＣＦＵ／ｍＬであった。乳頭突起の平均と理論的濃度との差は対数値０．４８であった。同様に、第２回目のワクチン接種では、原液の平均生存数は３．５１×１０７ＣＦＵ／ｍＬであった。２つの乳頭突起の平均ＣＦＵ／ｍＬは１．４２×１０５ＣＦＵ／ｍＬであり、平均の理論的ＣＦＵ／ｍＬ（原液の平均ＣＦＵ／ｍＬ／１２８）は２．７４×１０５ＣＦＵ／ｍＬであった。乳頭突起の平均と理論的濃度との差は対数値０．２９であった。この研究から採取したデータは、乳頭突起の試料と原液との平均送達濃度は予想から大きく離れておらず（すなわち、対数０．５未満）、ＣＦＵ決定に対して期待される正常な範囲内に属する。
【００６５】
【表４】
【００６６】
【表５】
【００６７】
各々のワクチン接種後の観察
ワクチン接種したブタは、ワクチンの安全性を裏付けるために、各々のワクチン接種後の８日間にわたり丹毒に関連する臨床的徴候について観察した。また、観察期間の間、毎日の直腸温を計った。
【００６８】
観察および攻撃誘発の方法
第２回目のワクチン接種の３週間後、ワクチン接種動物群および対照群の両方からのすべてのブタにブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の毒性株で攻撃誘発した。攻撃誘発用株（Ｅ１−６Ｐ、ＩＲＰ ＥＰＣシリアル４、ＵＳＤＡ、ＡＰＨＩＳ、ＣＶＢ−Ｌ、９−９７攻撃誘発）は、ＳＯＰ＃ａ１１−０１５−０２に記載されているように調製した（ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）血清型１、ＳＰＦブタに対する攻撃誘発）。簡単には、培養物をＣＶＢ−Ｌ（アイオワ州エームズ）から入手し、修正ファイスト（Ｆｅｉｓｔ）培地で増殖させた。ＣＦＵ／ｍＬを求めた後、培養物を凍結保存する。攻撃誘発では、凍結した原液を急速解凍し、各々のブタに１ｍＬの攻撃誘発用培養物を首の領域に筋肉内投与した。攻撃誘発の投与量（５．７×１０４ＣＦＵ／ｍＬ）は、攻撃誘発の前後にＴＳＡＩＩ血液寒天プレート上における攻撃誘発用材料のＣＦＵ数により確認した。９ＣＦＲ１１３．６７に従って、攻撃誘発前の２日間および攻撃誘発後の７日間にすべてのブタを丹毒に関連する臨床的徴候について観察し、直腸温を測定した。
【００６９】
攻撃誘発を実施する詳細なプロトコルを以下に示す：
Ａ．材料
１．保護用具（手袋、コートおよび安全メガネ）
２．バイアル１本、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）株Ｅ１−６Ｐ ＩＲＰ ＥＲＣシリアル４−９／９７、ＮＶＳＬ攻撃誘発用培養物からの第１継代。
３．無菌のトリプティック（Ｔｒｙｐｔｉｃ）大豆ブロス。
４．ＳＰＦ群からの感染可能なブタ。
５．シリンジ。
６．針。
７．直腸体温計。
８．滅菌したピペット。
９．滅菌した希釈チューブ。
１０．血液寒天プレート。
１１．滅菌した接種用白金耳。
１２．２００μｌピペッター。
１３．滅菌したピペットチップ。
【００７０】
Ｂ．方法
１．管理人を起こりうる危険から保護するために保護衣類および付属品（手袋、コートおよび安全メガネ）を着用する。ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）は、敗血症、皮膚病変、関節炎および／または死亡を引き起こす公知のヒト病原体である。それは体液および皮膚潰瘍により伝染する。曝露が疑われるときは、直ちに報告する必要がある。
２．攻撃誘発の２日前、１日前および当日に、直腸温（これは各々のブタの基礎体温となる）を計る。これらの温度を記録する。
３．無菌状態で攻撃誘発用材料（ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）株Ｅ１−６Ｐ ＩＲＰ ＥＲＣシリアル４−９／９７）をその投与直前に調製する。攻撃誘発のバイアルを手で擦ることにより急速解凍する。種がアタッチメントＩＩ上で解凍する時間を記録する。種のバイアルを軽く振盪し、以下の方法を用いて、それをトリプチカーゼ（Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ）大豆ブロス（ＴＳＢ）に最終濃度６．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌで希釈する（種の濃度は約２．１５×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）。無菌状態で攻撃誘発用の種材料０．５ｍｌを無菌ＴＳＢ４．５ｍｌに加える（チューブ１−２．１５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ）。チューブ１を室温で１５分間保持した後、チューブ１を十分に混合し、無菌状態でチューブ１の３．０ｍｌを無菌ＴＳＢ７．０ｍｌに加える（チューブ２−６．５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）。チューブ２を十分に混合し、無菌状態でＴＳＢ中におけるチューブ２の１：１０希釈液を調製する（チューブ３−２−６．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌ）。適当数のブタを攻撃誘発するために、この希釈液を十分に調製する。（すなわち、６．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌの攻撃誘発用材料の１．０ｍｌ投与で２５頭のブタを攻撃誘発する必要があれば、６．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌの攻撃誘発用材料を少なくとも３０ｍｌ調製する。これを行うためには、無菌状態でチューブ２の３．０ｍｌを無菌ＴＳＢ２７．０ｍｌに加える。）すべての攻撃誘発用材料および希釈液チューブを攻撃誘発のときまで氷上に保持する。
４．攻撃誘発用材料の濃度を決定する。チューブ３を十分に混合し、無菌状態でチューブ３の０．５ｍｌを無菌ＴＳＢ４．５ｍｌに加える（チューブ４−６．５×１０３ＣＦＵ／ｍｌ）。チューブ４を十分に混合し、無菌状態でチューブ４の０．５ｍｌを無菌ＴＳＢ７．０ｍｌに加える（チューブ５−４．３×１０２ＣＦＵ／ｍｌ）。
５．３枚のヒツジ血液寒天（ＳＢＡ）プレートに「チューブ５−前攻撃誘発用ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）」、日付および頭文字のラベルを貼る。チューブ５を十分に混合し、無菌状態でチューブ５から３つの異なる０．１ｍｌアリコットを取り出し、それを３枚のＳＢＡプレート上に載せる。滅菌した接種用白金耳を用いて、試料を端に近づきすぎないようにしてＳＢＡプレートの表面上に広げる。これらのプレートを３７℃で２０〜４８時間インキュベートする。前攻撃誘発用ＣＦＵを培養した時間を記録する。すべての希釈チューブを氷上に置く。
６．すべてのブタを、工程ＩＶ．Ｂ．３で調製したチューブ３（６．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌ）の攻撃誘発用材料１．０ｍｌ、ＩＭ、で、首の筋肉に攻撃誘発する。ブタのどちら側の首に攻撃誘発をしたかを記録する。攻撃誘発期間の間、すべての攻撃誘発用材料を氷上で保持する。
７．ブタが攻撃誘発された後、チューブ５の内容物を十分に混合する。３枚のＳＢＡプレートに「チューブ５−後攻撃誘発用丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）」および日付のラベルを貼る。無菌状態でチューブ５から３つの異なる０．１ｍｌアリコットを取り出し、それを３枚のヒツジ血液寒天プレート上に載せる。滅菌した接種用白金耳を用いて、試料を端に近づきすぎないようにしてＳＢＡプレートの表面上に広げる。これらのプレートを３７℃で２０〜４８時間インキュベートする。後攻撃誘発用ＣＦＵを培養した時間を記録し、攻撃誘発用材料が解凍した時間から後攻撃誘発用ＣＦＵが行われるまでにかかった時間を計算する。
８．各々のブタの体温を７日間連続して計り、記録する。各々のブタを丹毒の臨床的徴候（食欲不振、硬直および／または関節の関与を伴ったうつ；転移性皮膚病変を伴ったまたは伴わない瀕死）について調べて観察結果を記録する。また、注射部位の反応、全身の皮膚発赤斑、食欲不振またはチアノーゼを調べて記録する。
９．獣医師は検死を行い、丹毒の臨床的徴候を示さないが研究の間に死亡する各々のブタの死亡原因を決定すべきである。
１０．残りの攻撃誘発用材料を焼却または高圧蒸気殺菌法により廃棄する。
１１．２通りのプレート上のコロニーの数を数えて平均し、記録する。
【００７１】
Ｃ．計算／説明
１．対照ブタは、臨床的徴候があり、２日間続けて（前攻撃誘発の日を除く）体温が１０５．６°Ｆであれば、丹毒に関して陽性であると考えられる。（９ＣＦＲ§１１３．６７を参照）。陽性であると考えるべき基準を満足するブタは、現場監督または所属獣医師の考え次第で、ペニシリンで治療して苦痛および激痛を軽減すればよい。
２．対照ブタの少なくとも８０％は、有効であるべき攻撃誘発の観察期間の間に丹毒の正の徴候示さなければならない。（９ＣＦＲ§１１３．６７を参照）。
３．数えたコロニーの平均数に培養した最終希釈液の倍率を掛ける。前攻撃誘発用および後攻撃誘発用ＣＦＵの結果の濃度を平均する。攻撃誘発用材料の平均濃度は、有効な攻撃誘発の場合、５×１０４〜９×１０４ＣＦＵ／ｍｌであるべきである。
【００７２】
第１回目のワクチン接種後の臨床的徴候および体温
ワクチン接種したすべてのブタは、第１回目のワクチン接種の８日後まで観察され、いずれのブタも丹毒に関連する臨床的徴候を示さなかった。それぞれ４ＤＰＶ１および５ＤＰＶ１に体温が１日だけ１０４．６°Ｆであった２頭のブタを除いて、たいていのブタは、ワクチン接種後の観察期間の間、正常な体温であった。上記の２頭のブタには、臨床的徴候は観察されなかった。ワクチン接種したブタの一部は、観察期間の間、基礎体温より１°Ｆ高い体温を示したが、これは取扱いの間にブタを興奮させたことから生じたと思われる。同様に、数頭のワクチン接種していない対照（例えば、ブタ）も、臨床的徴候を示すことなく、１または２日間体温が高かった。
【００７３】
第２回目のワクチン接種後の臨床的徴候および体温
ワクチン接種したブタは、いずれも第２回目のワクチン接種の８日間を通じて丹毒に関連する臨床的徴候を示さなかった。それぞれ６ＤＰＶ２に体温が１日だけ１０４．２°Ｆであった１頭のブタならびに５および６ＤＰＶ２に体温が１日だけ１０４．１°Ｆであった別のブタ除いて、すべてのブタは、観察期間の間、正常な体温であった。これらのブタの両方は、観察期間の間、臨床的徴候を示さなかった。同様に、１頭の対照ブタは、臨床的徴候を示すことなく、７ＤＰＶ２に１日だけ体温１０４．３°Ｆを示した。これらの１日だけ高い体温は、おそらく取扱いの間にブタを興奮させたことから生じたと思われる。各々のワクチン接種後の臨床的観察および体温の両方から採取されたデータは、このワクチン株がブタに対して安全であり、ワクチン接種後に丹毒に関連する臨床的徴候を引き起こさないことを示す。
【００７４】
攻撃誘発後の臨床的観察
第２回目のワクチン接種の２１日後に、２０頭のワクチン接種動物および１０頭の対照を、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の毒性株で攻撃誘発した。すべてのブタを丹毒に関連する臨床的徴候について観察し、直腸温を攻撃誘発の前に２日間および攻撃誘発の後に７日間測定した。
【００７５】
攻撃誘発後の対照ブタの臨床的徴候
ワクチン接種していないすべての対照（１００％）は、丹毒に関連する重篤な臨床的徴候、例えば、関節炎、全身の発赤斑（菱形皮膚病変）、嗜眠、食欲不振、うつおよび突然死を示した。攻撃誘発の４日後に、４頭の対照ブタ、すなわちＯ４０４、Ｏ４１７、Ｏ４１２およびＯ４３２が死亡した。ブタＯ４０６およびＲ７３は５ＤＰＣに死亡しているのが見出され、ブタＯ４０３は６ＤＰＣに死亡した。攻撃誘発の７日後に、対照ブタの１０頭のうち７頭（７０％）が死亡した。ブタＯ４０３は、死亡前５ＤＰＣに体温が１０５．７°Ｆであった。ブタＯ４０４およびＯ４０６は、死亡前にそれぞれ体温が１０３．１°Ｆおよび１０２．４°Ｆであった。ブタＯ４１７、Ｏ４２１、Ｏ４３２およびＲ７３は、死亡前にそれぞれ体温が１０５．２°Ｆ、１０４．９°Ｆ、９９．５°Ｆおよび１０５．６°Ｆであった。３頭の対照ブタ、すなわちＯ４１１、Ｏ４２６およびＯ４２９は、重篤な臨床的徴候を有しながら、攻撃誘発を生き延びた。
【００７６】
攻撃誘発後のワクチン接種したブタの臨床的症候
ワクチン接種動物の１００パーセント（２０頭のうち２０頭）は、観察期間の間、丹毒に関連する典型的な臨床的徴候を示さなかった。ブタＯ４０９は、２ＤＰＣに注射部位の発赤を示した。ワクチン接種をしたブタは、いずれも攻撃誘発後の観察期間の間に、１０４．０°Ｆより高い体温を示さなかった。ワクチン接種したブタから採取したデータは、ワクチン接種動物の１００％がブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の攻撃誘発から保護されることを示した。これらの結果は、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）からブタを保護するのに有効なワクチンであると認定する９ＣＦＲの要件を十分に満足する。
【００７７】
攻撃誘発後のブタからのブタ丹毒菌 （Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ） の単離
ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の単離は、攻撃誘発後または検死時の対照ブタから採取した血液、脾臓、肝臓および腸間膜リンパ節から行った。観察されるように、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）は、対照ブタＯ４０３、Ｏ４０６、Ｏ４１１、Ｏ４２６、Ｏ４２９およびＲ７３から採取した試料から単離した。ブタＯ４０４、Ｏ４１７、Ｏ４２１およびＯ４３２は、４ＤＰＣに死亡していることが見出され、そのときには試料は採取しなかった。また、血液試料を７ＤＰＣにワクチン接種したブタから採取したが、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）はワクチン接種したブタから単離されなかった。対照ブタからのブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）単離の結果は、有効なブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）攻撃誘発に対する９ＣＦＲ要件を満足している。
【００７８】
結論
この研究からのデータは、この場合は、本発明の方法に従って、自動水配分装置を用いて、飲料水により約６．０６×１０７ＣＦＵ／投与の割合で集団投与されたブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ワクチン、すなわち無毒性の生きた培養物を含有する本発明の風味付けしたワクチン製剤が安全であり、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の感染により引き起こされる疾患からブタを保護するのに有効であることを示している。この研究からの結果は、９ＣＦＲ１１３．６７に述べられている要件を十分に満足し、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ワクチン、すなわち無毒性の生きた培養物が使用許可を受けるのにふさわしいことを認定している。
【００７９】
実施例２
風味付けされていないものと比較した経口投与される風味付けされたワクチン
本発明の風味付けされた経口投与されるワクチンが風味付けされていないものと比べて感染に対してより高い保護を提供したことを示すために、凍結乾燥したブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）を抗原とするイチゴ風味のワクチン製剤、凍結乾燥したブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）を抗原とする風味付けしていないワクチン製剤、および香味剤も抗原も添加しない対照製剤を利用して、実施例１に記載したものに類似したワクチン接種プロトコルを行った。すべてのワクチンおよび対照製剤は、実施例１に記載したように調製した。攻撃誘発の実験は、実施例１に記載したように行った。
実験およびデータを以下の表に記載する：
【００８０】
【表６】
【００８１】
【表７】
【００８２】
【表８】
【００８３】
実施例３
抗原が風味付けしていないワクチン製剤で活性であることを示すために、風味付けせずに製剤化されたワクチンの単回投与をブタにシリンジで投与した。これらのデータを以下の表７に与えるが、これらのデータは抗原が活性であり、香味剤が飲料水中における風味付けされた経口投与されるワクチンのブタによるより高い摂取を与えることを示している。
【００８４】
【表９】
【００８５】
参考文献
Ｍ． Ｌ． Ａｕｇｅｎｓｔｅｉｎ， Ｌ． Ｊ． Ｊｏｈｎｓｔｏｎ， Ｇ． Ｃ． Ｓｈｕｒｓｏｎ， Ｊ． Ｄ． Ｈａｗｔｏｎ ａｎｄ Ｊ． Ｅ． Ｐｅｔｔｉｇｒｅｗ． Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｒｍ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｓｗｉｎｅ Ｄｉｅｔｓ； Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ． １９９４．
（技術分野）
本発明は、疾患の予防における補助として飲料水またはシロップによる健康な動物の経口ワクチン接種のための方法および組成物を対象とする。
【０００２】
（背景技術）
動物の集団を苦しめることができる伝染病は数多く存在し、動物を衰弱させて死に至らしめる。かかる伝染病に対する成功したワクチン接種は、感染した動物における疾患の症状を改善または除去するために既に実施されている。経口投与されるワクチン接種は、注射の必要性がないので、好ましい方法である。
【０００３】
例えば、ブタ、家禽、ウシ、ヒツジ、ヤギおよびウマなどの家畜の大集団においては、注射によるワクチン接種は、多大の時間を必要とし、大きな労働力を要する。加えて、筋肉注射は肉にダメージを与え、動物にストレスを与えることになる。
【０００４】
例えば、イヌおよびネコなどの家庭で飼育されるペットにおいては、筋肉注射を受けるストレスは、一般の感染症に対して有効な経口ワクチンの使用により軽減される。
【０００５】
ブタおよび家禽の両方の単位のサイズは、世界中でかなり大きくなっている。多くのブタ用施設が現在１０，０００頭以上の乳離れしたブタを収容することができるのに対し、多くの家禽の単位は現在さらに多くの鳥を収容することができる。伝統的なワクチンによる各々のブタまたは鳥のワクチン接種は、大きな労働力を要するし、困難である。各々の動物を捕獲し、少なくとも１回、また、多くの場合は２回注射し、ワクチン接種の過程の間、捕捉しなければならない。
【０００６】
これらの難題ゆえに、ブタまたは家禽を感染から保護する、飲料水により動物群に投与（集団投与）される有効なワクチンは、人件費を節約するだけでなく、注射針により引き起こされるストレスおよび肉へのダメージを回避することにより、生産者にとって大きな利益となる。
【０００７】
加えて、一般的には納屋で飼育され、互いに分離して収容され閉じ込められていることが多いウシ、ヒツジ、ヤギおよびウマの生産者も、個別注射の費用、ストレスおよび肉のダメージを除去するので、飲料水により投与される経口ワクチンから利益を得る。
【０００８】
最後に、例えば、イヌおよびネコなどの家庭で飼育されるペットは、それらのストレスを減少させ注射を回避するので、経口ワクチンの投与から利益を得る。
【０００９】
従来は、鳥の大群への飲料水による集団投与の間に経験された主な不都合は、水消費の変動によるワクチン量の不一致と、一部の動物がワクチンを全く摂取しない可能性とである。加えて、ワクチン中における細菌またはウイルス病原体の生存可能性および安定性が水への混合により影響を受け得る。水中での安定性は、時間と共に劇的に減少し得る。かくして、免疫原性の病原体の不安定化を防止するように限られた時間量で動物に集団投与するためのワクチンを提供することは非常に望ましい。また、集団全体にわたるワクチン含有飲料水の一貫した自己投与を確実にするために動物にとって望ましいワクチンを提供することは都合がよい。
【００１０】
疾患を引き起こす伝染性の病原体に対するワクチンの経口投与に関する別の主要な欠点は、かかる病原体が不快な臭気または風味に関連することが多いことである。動物の大群に集団投与されるワクチン製剤は動物にとって望ましいものでなければならず、さもなければ、動物はそれらを自己投与、すなわちそれらを飲まない。同様に、家畜または個別に閉じ込められている動物に投与されるワクチン製剤は、動物が製剤を自己投与するように動物にとって口当たりの良いことが都合よい。最後に、家庭で飼育されるペットに関しては、これらの動物は、一般的には、口内に経口ワクチンを投与される。経口ワクチンは、獣医師または動物の健康管理者により投与されるが、動物により拒絶され吐き出されることが多い。かくして、経口投与されるワクチンを動物にとって望ましく、かつワクチンの成功した投与および摂取の見込みが増大する製剤で提供することは非常に都合よい。
【００１１】
ＷＯ９８／５１２７９は、ポリマー微粒子に封入された抗原性ペプチドをコードするＤＮＡからなる経口ワクチンの投与を記載している。風味を付ける物質を微粒子に封入してもよい。しかし、かかる微粒子は水溶性ではなく、疾患を引き起こす細菌またはウイルスの投与を行えない。
【００１２】
ベル（Ｂｅｌｌ）ら（オーストラリアン・ベテリナリー・ジャーナル（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ）６８（３），１９９１，ｐｐ．８５−８９）は、ニワトリへの集団投与によるニューカッスル病Ｖ４株ワクチンの投与を記載している。このワクチンは、以下の３つの方法を利用して投与された：１）脱脂粉乳と混合し、飲料水で投与；２）エアロゾルで投与；および３）粗いスプレーで投与。ニューカッスルウイルスに対する抗体の生成の血清学的な証拠が示されたが、ウイルス攻撃誘発（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）の研究は行われなかった。かくして、これらの鳥の疾患に対するワクチン接種の程度を決定することはできなかった。より重要なことは、鳥にとってより口当たりの良いワクチン製剤を製造する試みがなされなかった。
【００１３】
グリーブ（Ｇｒｉｅｖｅ）は、ニューカッスル病ワクチン製剤に青い色素を添加することにより、飲料水またはスプレーによるニワトリへのワクチン集団投与の評価を記載している。色素は、鳥の舌を一時的に染色することにより、ワクチンの消費をモニターするために用いられる。色素は、群れの約８０％だけがワクチンを摂取したことを示した。鳥にとってより口当たりの良いワクチン製剤を製造する試みはなされなかった。
【００１４】
かくして、動物にとって口当たりの良い有効に労働力の節約になる経口投与されるワクチンを処方し投与することは非常に望ましい。かかるワクチン製剤は、獣医師ならびに牛乳および食肉生産者に動物の群れおよび他の動物の健康を最適化するための便利で新しい戦略的な道具を提供するのに対し、動物に拒絶されないより口当たりの良い経口ワクチンは獣医学の実務において望ましい。
【００１５】
（発明の開示）
本発明は、動物の疾患に対する保護を提供する方法であって、
（ａ）水溶性の口当たりの良い香味剤を、経口投与されるワクチン投与用の水溶性媒体と混合し；
（ｂ）さらに工程（ａ）の混合物と、経口投与されるワクチンの有効成分としての細菌およびウイルスからなる群から選択される抗原を混合し；
（ｃ）工程（ｂ）の経口投与されるワクチンを動物に投与して、該抗原による感染に関連する疾患に対する保護を提供すること；
からなる方法を包含する。
【００１６】
また、本発明は、動物による経口投与されるワクチンの増大した摂取を誘発する方法であって、
（ａ）水溶性の口当たりの良い香味剤を、経口投与されるワクチン投与用の水溶性媒体と混合し；
（ｂ）さらに工程（ａ）の混合物と、経口投与されるワクチンの有効成分としての細菌およびウイルスからなる群から選択される抗原と混合し；
（ｃ）工程（ｂ）のワクチン混合物を動物に経口投与し；
（ｄ）経口投与されるワクチンの増大した摂取を香味剤で誘発すること；
からなる方法を包含する。
【００１７】
さらに、本発明は、有効成分として、細菌およびウイルスからなる群から選択される抗原と、水溶性の口当たりの良い香味剤および経口投与される動物ワクチン投与用の水溶性媒体とからなる経口投与される動物ワクチン製剤を包含する。
【００１８】
（発明を実施するための形態）
ここで引用されたすべての特許、特許出願、刊行物および他の資料は、出典を示すことにより、それらの全体を援用する。一致しない場合には、本願の説明は、定義を含めて、調整することを意図する。
【００１９】
ここで用いられるように、「集団投与」なる用語は、大きい施設に共に収容されている動物群に対する水溶性ワクチンの大規模投与として定義される。典型的には、かかる施設はブタおよび家禽を飼育する。
【００２０】
ここで用いられるように、「ブタ（ｓｗｉｎｅ）」および「ブタ（ｐｉｇ）」または「ブタ（ｐｉｇｓ）」なる用語は、同義語として用いられる。
【００２１】
ここで用いられるように、「家禽」なる用語は、ニワトリ、七面鳥およびアヒルを含むものとして定義される。
【００２２】
ここで用いられるように、「口当たりの良い香味剤」なる用語は、それが投与される動物または動物たちにより望まれることが示されている風味を付ける物質として定義される。かかる所望性は、口当たりの良い香味剤で風味付けられている飲料水またはシロップの自己投与の観察により、本発明の経口投与されるワクチンに処方する前に決定される。かかる香味剤の非限定的な例としては、イチゴ、サクランボ、ブドウ、スイカ、リンゴなどのフルーツの香味剤；魚の香味剤；肉の香味剤；および動物または動物たちに好まれる他の香味剤が挙げられる。フルーツの香味剤は、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコおよびイヌに投与するのに特に好ましい。肉の香味剤は、イヌおよびネコに特に好ましい。魚の香味剤は、ネコに特に好ましい。
【００２３】
ここで用いられているように、「動物の取扱者」なる用語は、農夫、獣医師、動物の健康に関する専門家、あるいは動物の世話ならびに動物への医薬品、ワクチンおよび／または餌の投与に責任のある他の人々を包含する。
【００２４】
本発明は、動物の疾患に対する保護を提供するための、および、動物による経口投与されるワクチンの増大した摂取を誘発するための、方法および組成物を包含する。本発明の方法は、混合した抗原による感染に関連する疾患に対する保護を提供し、かつ香味剤でワクチンの増大した摂取を誘発するために、細菌またはウイルス抗原を水溶性の口当たりの良い香味剤と混合し、さらに抗原および香味剤の混合物を、動物にワクチンを経口投与するための水溶性媒体と混合することを対象とする。
【００２５】
本発明は、かくして、疾患の予防における補助としての飲料水またはシロップによる健康な動物の経口ワクチン接種のための方法および組成物を包含する。口当たりの良い香味剤の混合は、動物の取扱者により投与された場合にワクチン製剤の自己投与を促進し、および／または製剤の拒絶を防止するために望ましい風味を有するワクチン製剤を提供する。
【００２６】
本発明のワクチンに処方される抗原は、細菌およびウイルスの疾患を引き起こす病原体である。生きた細菌およびウイルスが特に好ましい。生きた細菌またはウイルスをワクチン製剤の抗原として投与する場合、生きた抗原の生存可能性は特に重要である。動物または動物たちは、最大の可能な抗原性を確実にし、かつ強い免疫応答を得るように、抗原の生存可能性が大きく減少する前にワクチンを摂取しなければならない。
【００２７】
「悪性でない」または「不活化」細菌またはウイルス株は、動物の疾患を引き起こすことができないものと理解され、当業者がワクチンとして動物に投与するのが安全であると考えるいかなる株をも包含する。例えば、例えば、発熱、鼻汁または目やになどの軽症の臨床的徴候を引き起こす株は、かかる臨床的徴候は許容可能なワクチンの副作用であると考えられるので、本発明の範囲内である。
【００２８】
本発明に用いるために細菌またはウイルス抗原を不活化する１つの方法は、抗原のゲノムに、疾患を引き起こすその能力を排除する、ヌクレオチドの置換、挿入および／または欠失などの遺伝子突然変異を導入することである。組換えＤＮＡ技術の方法は、弱毒化株を製造するために細菌またはウイルス抗原のゲノムに欠失、挿入および置換を作出するのに用いることができる。これらの方法は、当該分野で公知であり、例えば、サムブロック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら（モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）、ア・ラボラトリー・マニュアル（Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）、第２版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、１９８９年）に記載されている。本発明に用いるために細菌またはウイルス抗原を弱毒化または不活化する他の方法は、当業者に公知である。
【００２９】
ここで用いられているように、「修飾された生きたウイルス」または「修飾された生きた細菌」は、典型的には、疾患を引き起こすその能力を弱毒化するために組織培養細胞内を通過させることにより変更されているが、動物に投与された場合に疾患または感染を保護するその能力を維持するウイルスまたは細菌抗原である。
【００３０】
本発明のウイルス抗原の「感染単位」は、ＴＣＩＤ５０、すなわち組織培養細胞の５０％を感染または死滅させるのに必要なウイルスの量して定義される。
【００３１】
所定の培養物中における細菌抗原の濃度は、当該分野で公知の標準的な方法、例えば、顕微鏡分析、コロニー計数または液体培養物の分光学的分析で測定することができる。
【００３２】
細菌毒素抗原の濃度は、適当な動物モデル、例えば、マウスにおける致死量（ＬＤ）およびＬＤ５０を求めることにより得ることができる。
【００３３】
ワクチンは、当該分野で標準的な方法により新しく採取したウイルス培養物から製造すればよい。ウイルスの増殖は、標準的な技術（細胞変性効果の観察、免疫蛍光または他の抗体に基づく検定法）によりモニターされ、十分に高いウイルス力価が達成されたときに採取される。ウイルス原品は、ワクチン製剤に添加する前に、従来の方法により、さらに濃縮または凍結乾燥してもよい。他の方法、例えば、トーマス（Ｔｈｏｍａｓ）ら（アグリ−プラクティス（Ａｇｒｉ−Ｐｒａｃｔｉｃｅ）、Ｖ．７ Ｎｏ．５，ｐｐ．２６−３０）に記載されているものを採用することができる。
【００３４】
細菌は、当該分野で公知の方法に従って増殖させる。本発明の製剤に用いるべき細菌抗原は、液状であってもよいし、口当たりの良い香味剤および水溶性媒体と共に用いる前に、再構成される凍結乾燥形態であってもよい。
【００３５】
一般的には、単一の動物に対して、１つの投与量のワクチンで投与すべき細菌抗原の好ましい量は、約１０５〜約１０１１コロニー形成単位（「ＣＦＵ」）、好ましくは約１０６〜約１０１０ＣＦＵ、最も好ましくは約１０７〜約１０９ＣＦＵである。別の好ましい具体例では、有効量は投与量あたり約１０５〜約１０８ＣＦＵである。
【００３６】
一般的には、単一の動物に対して、１つの投与量のワクチンで投与すべきウイルス抗原の好ましい量は、約１０３ ． ０〜約１０６ ． ０ＴＣＩＤ５０／ｍｌ、好ましくは１０４〜１０５ＴＣＩＤ５０／ｍｌに対応する量を含有する。
【００３７】
本発明のワクチンに処方すべき各々の細菌またはウイルス抗原の用量または有効量は、一般的には、ワクチン接種される動物または動物たちの年齢、健康および免疫状態（例えば、以前の曝露、母親の抗体）、ならびに用いられる特定の抗原に依存する。適当な有効量は、最低抗原レベルおよび投与すべき水またはシロップの用量計算を含めて、当業者がごく普通に求めることができる。
【００３８】
上記したように、いかなる感染性の弱毒化または不活化された生きたまたは死んだ細菌またはウイルス病原体であっても、本発明のワクチンに処方し、本発明の方法に従って投与すればよい。特に好ましい抗原の非限定的な例としては、以下の動物に感染するものが挙げられる：
ブタ−ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、大腸菌Ｋ８８、Ｋ９９、Ｆ４１および９８７Ｐ（Ｅ． ｃｏｌｉ Ｋ８８， Ｋ９９， Ｆ４１ ａｎｄ ９８７Ｐ）、Ｃ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ ｃ）、サルモネラ・コレラスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、気管支敗血症菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、レプトスピラ・ブラティスラヴァ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｂｒａｔｉｓｌａｖａ）、イヌ型レプトスピラ症（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトスピラ・グリッポチフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・ハルジョ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・プロモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｐｒｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・イクテロ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏ）、ブタ・インフルエンザウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、サーコウイルス（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ）、ＰＲＲＳウイルス（ＰＲＲＳ ｖｉｒｕｓ）、ブタ痘（Ｓｗｉｎｅ ｐｏｘ）、ロタウイルス（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、ブタ呼吸器コロナウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、パルボウイルス（Ｐａｒｖｏ ｖｉｒｕｓ）、オーエスキー病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ）、伝染性胃腸炎の病原体（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ａｇｅｎｔ）。
ウマ−腺疫菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、ウマ・インフルエンザウイルスＡ１およびＡ２株（Ｅｑｕｉｎｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓ Ａ１ ａｎｄ Ａ２ ｓｔｒａｉｎｓ）、ウマ・リノニューモニド１型、１ｂ型および４型（Ｅｑｕｉｎｅ Ｒｈｉｎｏｐｎｅｕｍｏｎｉｄｓ ｔｙｐｅ １， １ｂ ａｎｄ ４）、東部ウマ脳髄炎（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、西部ウマ脳脊髄炎（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、ベネズエラウマ脳脊髄炎（Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、ウマ・ロタウイルス（Ｅｑｕｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、
ウシ−大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Ｅ． ｃｏｌｉ ０１５７ ： Ｈ７）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、パスツレラ・ヘモリティカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、イヌ型レプトスピラ症（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトスピラ・グリッポチフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・ハルジョ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・プロモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｐｒｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・イクテロ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏ）、Ｃ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ Ｃ）、Ｄ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ Ｄ）、クロストリジウム・チャウヴォエル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｈａｕｖｏｅｌ）、クロストリジウム・ノーヴィ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）、悪性水腺菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、クロストリジウム・ヘモリティクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・ソデリイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｄｅｌｌｉｉ）、サルモネラ・ダブリンおよびネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｄｕｂｌｉｎ ａｎｄ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、ウシ・ロタウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、ウシ・コロナウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、ウシ伝染性鼻気管炎（Ｂｏｖｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、ウシ下痢症ウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザ−３（Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ−３）、呼吸器合胞体ウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）。
家禽−ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セプリナ・ピロシコリ（Ｓｅｐｕｌｌｉｎａ ｐｉｌｏｓｉｃｏｌｉ）、マレック病ウイルス（Ｍａｒｅｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、伝染性ファブリーキウス嚢病（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｕｒｓａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、伝染性気管支炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ニューカッスル病ウイルス（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、レオウイルス（Ｒｅｏ ｖｉｒｕｓ）、七面鳥鼻気管炎（Ｔｕｒｋｅｙ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、コウイディオシス（Ｃｏｕｉｄｉｏｓｉｓ）。
イヌ−イヌ型レプトスピラ症（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトスピラ・グリッポチフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・ハルジョ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・プロモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｐｒｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・イクテロ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏ）、イヌ・ライム病ボレリア（Ｃａｎｉｎｅ Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、イヌ・エールリヒア・カニス（Ｃａｎｉｎｅ Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃａｎｉｓ）、イヌ気管支敗血症菌（Ｃａｎｉｎｅ Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、イヌのランブル鞭毛虫（Ｃａｎｉｎｅ Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ）、イヌ・ジステンパー（Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ）、イヌ・アデノウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、イヌ・コロナウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、イヌ・パラインフルエンザ（Ｃａｎｉｎｅ Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、イヌ・パルボウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、イヌ狂犬病（Ｃａｎｉｎｅ Ｒａｂｉｅｓ）。
ネコ−ネコのオウム病クラミジア（Ｆｅｌｉｎｅ Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、ネコ免疫不全ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）、ネコ白血病ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）、ネコ鼻気管炎（Ｆｅｌｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｌｉｔｉｓ）、ネコ汎白血球減少症（Ｆｅｌｉｎｅ Ｐａｎｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ）、ネコ狂犬病（Ｆｅｌｉｎｅ ｒａｂｉｅｓ）。
【００３９】
多くの場合、本発明の経口投与されるワクチンに処方するための細菌およびウイルス抗原の調製および製造は、動物たちが好まない口当たりの悪い風味を有する抗原をもたらす。かくして、飲料水またはシロップでワクチンを経口投与する場合、動物たちはワクチン製剤をそれほど飲まないか、あるいは不快な風味ゆえにシロップを拒絶して吐き出す。本発明のワクチン製剤に口当たりの良い香味剤を混合することは、経口投与されるワクチンの摂取を促進し増大させる。かかる口当たりの良い香味剤は、利用される香味剤により規定される濃度で混合される。好ましい濃度としては、少なくとも約０．０１％〜１．０％またはそれ以上が挙げられる。
【００４０】
液状の香味剤は、滴下器または他の手段によりワクチン製剤に加えればよい。香味剤が粉末状であれば、それらは再水和してワクチン製剤に混合すればよい。
【００４１】
本発明の経口ワクチンをブタまたは家禽に投与する場合、投与の好ましい方法は、共に飼育されている動物の大群への集団投与によるものである。ワクチンは、連続的な供給または滴下により動物たちに提供される飲料水中に処方される。次いで、動物たちは飲料水の所へ行き、水中に含有されるワクチンを飲むことにより、ワクチンを自己投与する。連続的な供給または滴下装置の一例は、ドサトロン（ＤｏｓａｔｒｏｎＴＭ）（ドサトロン・インターナショナル・インク（Ｄｏｓａｔｒｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）、フロリダ州クリアウォーター）と呼ばれる自動水配分装置である。ある好ましい具体例では、水配分装置は水溶性ワクチン／香味剤を水滴下供給器に少量ずつ連続的に供給する。次いで、水滴下供給器は水を動物たちに飼育設備内での集団投与により、例えば、乳頭突起により滴下することにより、供給する。
【００４２】
本発明の経口ワクチンを納屋、畜舎または囲いの中で恒久的に飼育され個別に維持されているウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギまたは他の家畜に投与する場合、投与の好ましい方法は飲料水の入ったバケツまたはかいば桶での投与によるものである。
【００４３】
本発明の経口ワクチンを動物またはネコもしくはイヌなどの家庭で飼育されているペットに単独で投与する場合、ワクチンは飲料水またはより好ましくはシロップで投与すればよい。かかるシロップは、好ましくはシリンジなどの装置により口に投与される。かかる投与は、最も好ましくは咽喉の背側におけるものである。経口ワクチンは、当該分野で公知の方法に従ってシロップに製剤化すればよい。シロップを製剤化する方法の非限定的な例は、以下の参考文献に見出すことができる：
【００４４】
”Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｓｙｒｕｐｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ ａｍｙｌａｓｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂｅｓ”， Ｓａｈａ， Ｂ． Ｃ．； Ｚｅｉｋｕｓ， Ｊ． Ｇ．， Ｅｎｚｙｍｅ Ａｎｄ ＭｉｃｒｏｂｉａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． １２， Ｎｏ． ３， ｐ． ２２９−２３１ （１９９０）；
”Ｐｒｏｂｌｅｍ ｏｆ Ｔｈｅ Ｍａｓｓ−Ｖｏｌｕｍｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ａｎｄ Ｔａｂｌｅ Ｓｙｒｕｐｓ”， Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ， Ａ． Ｉ．， Ｆａｒｍａｔｓｉｙａ （Ｍｏｓｃｏｗ）， Ｖｏｌ． ３３， Ｎｏ． ６， ｐ． ７０−７１ （１９８４）；
”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｓｙｒｕｐ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｖｅｒｓｕｓ ｃｏｕｇｈ： Ｆｒｏｍ ｔｅｓｔ−ｓｉｚｅ ｂａｔｃｈ ｔｏ ｐｉｌｏｔ−ｓｉｚｅ ｂａｔｃｈ．”， Ｒｅｎａｕｄｅａｕ， Ｐ．； Ｃｌａｉｒ， Ｐ．．； Ｃａｉｒｅ−Ｍａｕｒｉｓｉｅｒ， Ｆ．， Ｔｒａｖａｕｘ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｑｕｅｓ ｄｅｓ Ｃｈｅｒｃｈｅｕｒｓ ｄｕ Ｓｅｒｖｉｃｅ ｄｅ Ｓａｎｔｅ ｄｅｓ Ａｒｍｅｅｓ， Ｖｏｌ． ０．， Ｎｏ． ２０． （１９９９）， ｐｐ． １１３−１１４；
”Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ ｄｅｘｔｒｏｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ ｒｅｓｉｎａｔｅ ｓｙｒｕｐ”， ＥＩ−Ｓａｍａｌｉｇｙ， Ｍ． Ｓ．； Ｍａｈｍｏｕｄ， Ｈ． Ａ．； Ｏｍａｒ， Ｉ． Ｍ．， Ｅｇｙｐｔｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｖｏｌ． ３７， Ｎｏ． １−６ （１９９６）， ｐｐ． ５０９−５１９；
”Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ， ｅｆｆｉｃａｃｙ， ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｑｕｉｎｉｎｅ （ｓｙｒｕｐ） ｉｎ ｕｎｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ｍａｌａｒｉａ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ．”， Ｒｅｙ， Ｅ．； Ｐａｒｉｅｎｔｅ−Ｋｈａｙａｔ， Ａ．； Ｄ’Ａｔｈｉｓ， Ｐ．； Ｔｅｔａｎｙｅ， Ｅ．； Ｖａｒｌａｎ， Ｍ．； Ｏｌｉｖｅ， Ｇ．； Ｐｏｎｓ， Ｇ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． １８， Ｎｏ． Ｓｕｐｐｌ． Ｂ （１９９６）， ｐｐ． １２５；
”Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｒｏｐ ａｎｄ ｓｙｒｕｐ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａ （ｄｅｘｔｒｏｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ−ｇｕａｉｆｅｎｅｓｉｎ−ｍｅｎｇｌｉｔｈａｔｅ）−ｂａｓｅｄ ｃｏｕｇｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ．”， Ｆｒａｎｃｈｉ， Ｆ．， Ｒｉｖｉｓｔａ ｄｉ Ｐａｔｏｌｏｇｉａ ｅ Ｃｌｉｎｉｃａ， Ｖｏｌ． ４８， Ｎｏ． ３ （１９９３）， ｐｐ． １４９−１６６；
”Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｒｕｃｔｏｓｅ ｓｙｒｕｐｓ ｆｒｏｍ Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ ａｒｔｉｃｈｏｋｅ ｔｕｂｅｒ ｕｓｉｎｇ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｎｕｌｉｎａｓｅ ｆｒｏｍ Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ｙ−８５”， Ｗｅｉ， Ｗｅｎｌｉｎｇ； Ｌｅ Ｈｕｉｙｉｎｇ， Ｗａｎ Ｗｕｇｕａｎｇ； Ｗａｎｇ， Ｓｈｉｙｕａｎ， Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ． （Ｏｘｆｏｒｄ）， Ｖｏｌ． ３４， Ｎｏ． ６，７ （１９９９）， ｐｐ． ６４３−６４６；
”Ｓｙｒｕｐｓ ｆｏｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｐａｃｔ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｗｉｔｈ ｌａｒｇｅ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ”， Ｄｏｙｌｅ， Ｔｈｏｍａｓ Ｒ．， １９９９年１０月２６日， 米国特許第５，９７３，０７９号；
”Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｓｙｒｕｐ ｆｒｏｍ ｓｔａｒｃｈ”， Ｎｏｒｍａｎ， Ｂａｒｒｉｅ Ｅｄｍｕｎｄ； Ｈｅｎｄｒｉｋｓｅｎ， Ｈａｎｎｅ Ｖａｎｇ， １９９９年９月１６日， 国際公開第ＷＯ ９９／４６３９９号； ”Ａｃｒｙｌａｔｅ ｓｙｒｕｐ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｗｅａｔｈｅｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ”， Ｍａｋｉｎｏ， Ｔａｋａｙｕｋｉ； Ｔａｋｅｍｏｔｏ， Ｔｏｓｈｉｏ； Ｙａｎａｇａｓｅ， Ａｋｉｒａ， １９９９年８月３日， 日本国特許第９９２０９４３１号（日本国特許出願第１９９８−２４０４１−Ａ２号）；
”Ｍｉｃｒｏｅｌｅｍｅｎｔ ｓｙｒｕｐ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｉｔｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ”， Ｓｖｉａｔｋｏ， Ｐｅｔｅｒ； Ｂｏｄａ， Ｋｏｌｏｍａｎ， １９９８年７月８日， スロバキア特許第２７９，１２８号；
”Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｂｅｅｔ ｓｕｇａｒ ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ ｓｙｒｕｐ ｉｎｖｅｒｔ ａｎｄ ｓｕｃｒｏｓｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｂｙ ｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ”， Ｖｅｒｃｅｌｌｏｔｔｉ， Ｊｏｈｎ Ｒ．； Ｄｅｓｉｍｏｎｅ， Ｆｒａｎｋ； Ｃｌａｒｋｅ， Ｍａｒｇａｒｅｔ Ａ．， Ｐｒｏｃ． Ｓｕｇａｒ Ｐｒｏｃｅｓｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｎｆ． （１９９８）， ｐｐ． ４４２−４４８；
”Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｗｄｅｒｓ ｆｒｏｍ ｔｒｅｈａｌｏｓｅ ｓｙｒｕｐｓ”， Ｔｏｔｓｕｋａ， Ａｔｓｕｓｈｉ； Ｙａｍａｍｏｔｏ， Ｔａｋｅｓｈｉ； Ｕｍｉｎｏ， Ｔａｋｅｈｉｒｏ， １９９９年５月２５日， 日本国特許第９９１４００９４号（日本国特許出願第１９９７−３１５９９３／Ａ２号、１９９７年１０月３１日出願）；
”Ｈｕｍａｎ ＩＧＦ−Ｉ ｓｙｒｕｐ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｕｓｅ”， Ｓｈｉｒｌｅｙ， Ｂｒｅｔ Ａ．； Ｈｏｒａ， Ｍａｎｉｎｄｅｒ Ｓ．， １９９９年５月２０日， 国際公開第ＷＯ ９９／２４０６２号；
”Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｒｃｈ ｓｙｒｕｐｓ ｏｎ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｆｏａｍ ｐｒｏｄｕｃｔｓ”， Ｎｅｂｅｓｎｙ， Ｅｗａ； Ｐｉｅｒｚｇａｌｓｋｉ， Ｔａｄｅｕｓｚ； Ｒｏｓｉｃｋａ， Ｊｕｓｔｙｎａ， Ｚｅｓｚ． Ｎａｕｋ．−Ｐｏｌｉｔｅｃｈ． Ｌｏｄｚ．， Ｃｈｅｍ． Ｓｐｏｚｙｗ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， Ｖｏｌ． ５８ （１９９８）， ｐｐ． ６９−９４；
”Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｌｏｒａｌ ｈｙｄｒａｔｅ ｓｙｒｕｐ”， Ｉｓｈｉｄａ， Ａｔｓｕｙｏ； Ｍｉｙａｍａ， Ｓｈｕｈｏ； Ｍｉｋａｙａｍａ， Ｈｉｒｏｋｉ； Ｔｅｒｕｙａｍａ， Ｓｈｉｇｅｏ； Ｔａｋｅｙａｓｕ， Ａｋｉｋｏ； Ｏｈａｓｉ， Ａｔｓｕｓｈｉ； Ｏｋａｍｏｔｏ， Ｋａｚｕａｋｉ； Ｏｎｉｓｈｉ， Ｔｏｓｈｉｏ； Ｙａｓｕｈａｒａ， Ａｋｉｈｉｒｏ， Ｉｇａｋｕ ｔｏ Ｙａｋｕｇａｋｕ， Ｖｏｌ． ４０， Ｎｏ． ２ （１９９８）， ｐｐ． ３２９−３３３；
”Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ ａｎｄ ｓｙｒｕｐ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓａｃｃｈａｒｉｆｉｅｄ ｃｏｒｎ ｓｔａｒｃｈ ｈｙｄｒｏｌｙｚａｔｅ”， Ｓｉｎｇｈ， Ｎ．； Ｃｈｅｒｙａｎ， Ｍ．， Ｊ． Ｃｅｒｅａｌ Ｓｃｉ．， Ｖｏｌ． ２７， Ｎｏ． ３ （１９９８）， ｐｐ． ３１５−３２０；
”Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｌａｃｔｕｌｏｓｅ ｆｒｏｍ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｓｙｒｕｐｓ”， Ｂｉｍｂｉ， Ｇｉｕｓｅｐｐｅ， Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ． ６２２， ３７４−Ｂ１；
”Ｍａｌｔｉｔｏｌ ｂａｓｅｄ ｓｗｅｅｔｅｎｉｎｇ ｓｙｒｕｐ， ｃｏｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｉｓ ｓｙｒｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ａ ｃｒｙｓｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ａｇｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ”， Ｒｉｂａｄｅａｕ−Ｄｕｍａｓ， Ｇｕｉｌｌａｕｍｅ； Ｆｏｕａｃｈｅ， Ｃａｔｈｅｒｉｎｅ； Ｓｅｒｐｅｌｌｏｎｉ， Ｍｉｃｈｅｌ， 欧州特許第６１１，５２７−Ｂ１号；
”Ｓｙｒｕｐ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ”， Ｋａｗａｓａｋｉ， Ｙｏｓｈｉｈｉｋｏ； Ｓｕｚｕｋｉ， Ｙｕｋｉｏ， 欧州特許第４４１，３０７−Ｂ１号；
”Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｓｙｒｕｐｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ”， ＰＡＴＥＬ， Ｍａｎｓｕｋｈ， Ｍ．； ＲＥＥＤ， Ｍｉｃｈａｅｌ， Ａ．； ＷＯＫＡＳ， Ｗｉｌｌｉａｍ， Ｊ．； ＫＵＲＥＳ， Ｖａｓｅｋ， Ｊ．； 欧州特許第２４１，５４３ Ｂ１号；
”Ｍｅｔｈａｄｏｎｅ ｓｙｒｕｐ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｈｅｒｏｉｎ ｄｒｕｇ ａｄｄｉｃｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ”， Ｇａｇｎａｉｒｅ， Ｌ．； Ｆｅｌｌｏｕｓ， Ｊ．； Ｄａｕｐｈｉｎ， Ａ．； Ｂｏｎａｎ， Ｂ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｄｅ Ｐｈａｒｍａｃｉｅ Ｃｌｉｎｉｑｕｅ （Ｆｒａｎｃｅ）， Ｖｏｌ． １７， Ｎｏ． ４ （１９９８）， ｐｐ． ２６４−２６７；
”Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｂｌｅ ｓｙｒｕｐｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｅｘｔｒａｃｔｕｍ ｐｌａｎｔａｇｉｎｉｓ ｆｌｕｉｄｕｍ”， Ｔｉｃｈｙ， Ｅ．， Ｐｈａｒｍａｚｉｅ （Ｇｅｒｍａｎｙ）， Ｖｏｌ． ５２， Ｆｅｂ． １９９７， ｐｐ． １６７−１６８；
”Ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ， ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ， ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ａｎｄ−ｄｙｎａｍｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ２ ｎｅｗ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｉｒａｃｅｔａｍ （ｉｎｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｒｕｐ） ｕｎｄｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎ ｍａｎ”， Ｓａｌｅｔｕ， Ｂ．； Ｈｉｔｚｅｎｂｅｒｇｅｒ， Ｇ．； Ｇｒｕｎｂｅｒｇｅｒ， Ｊ．； Ａｎｄｅｒｅｒ， Ｐ．； Ｒａｍｅｉｓ， Ｈ． ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｖｏｌ． ３３， Ｍａｙ １９９５， ｐｐ． ２４９−２６２；
”Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｓｙｒｕｐ ａｎｄ ｔａｂｌｅｔ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｅｆｅｔａｍｅｔ ｐｉｖｏｘｉｌ”， Ｄｕｃｈａｒｍｅ， Ｍ． Ｐ．； Ｅｄｗａｒｄｓ， Ｄ． Ｊ．； ＭｃＮａｍａｒａ， Ｐ． Ｊ．； Ｓｔｏｅｃｋｅｌ， Ｋ．， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ， Ｖｏｌ． ３７， Ｄｅｃ． １９９３， ｐｐ． ２７０６−２７０９；
”Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｐｒｉｎｋｌｅ ｖｅｒｓｕｓ ｓｙｒｕｐ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｖａｌｐｒｏａｔｅ ｆｏｒ ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ， ｔｏｌｅｒａｎｃｅ， ａｎｄ ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”， Ｃｌｏｙｄ， Ｊ． Ｃ．； Ｋｒｉｅｌ， Ｒ． Ｌ．； Ｊｏｎｅｓ−Ｓａｅｔｅ， Ｃ． Ｍ．； Ｏｎｇ， Ｂ． Ｙ．； Ｒｅｍｍｅｌ， Ｒ． Ｐ． ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ， Ｖｏｌ． １２０， Ａｐｒ． １９９２， ｐｐ． ６３４−６３８；
”Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｙｒｕｐｓ ｒｉｃｈ ｉｎ ｆｒｕｃｔｏｓｅ ｆｒｏｍ ｔｕｐｉｎａｍｂｏ”， Ｍａｇｒｏ， Ｊ． Ｒｅｇａｌｏ Ｄａ； Ｆｏｎｓｅｃａ， Ｍ． Ｍ．， Ｒｅｖｉｓｔａ Ｐｏｒｔｕｇｕｅｓａ ｄｅ Ｆａｒｍａｃｉａ （Ｐｏｒｔｕｇａｌ）， Ｖｏｌ． ３８， Ａｐｒ．−Ｊｕｎ． １９８８， ｐｐ． ２７−３２；
”Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ ｐｒｏｘｅｔｉｌ ｄｒｙ ｓｙｒｕｐ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｆｉｅｌｄ”， Ｋａｓａｇｉ， Ｔ．； Ｔａｎｉｍｏｔｏ， Ｋ．； Ｏｇｉｈａｒａ， Ｙ．； Ｈａｙａｓｈｉｂａｒａ， Ｈ．； Ｏｋｕｄａ， Ｈ．； Ｓｈｉｒａｋｉ， Ｋ．， Ｊｐｎ Ｊ Ａｎｔｉｂｉｏｔ， Ｖｏｌ． ４７， Ｎｏ． ９， Ｓｅｐｔ． １９９４， ｐｐ． １２０２−９；および
”Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ ｏｒ ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ ｓｙｒｕｐ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ”， Ｋａｗａｓａｋｉ， Ｙｏｓｈｉｈｉｋｏ； Ｓｕｚｕｋｉ， Ｙｕｋｉｏ， 米国特許第５，１５４，９２６号。
【００４５】
調製されるワクチン原液の量は、各々の動物がワクチン接種の期間に飲む水の量に基づいている。好ましいワクチン接種期間は、抗原に依存して、飲料水で投与するための０．５〜１０時間である。各々の動物が飲む水の量は、ワクチン接種されるべき動物の平均体重に従って推定される。自動水配分装置を用いる場合、好ましい方法は以下のとおりである。ワクチン原液を接続ホースにより自動水配分装置に加える。自動水配分装置は水源に接続する。水配分装置は、パイプライン中の流水と共にワクチンを吸い上げ、飲料水が滴下する乳頭突起に送り出す。
【００４６】
本発明の経口投与されるワクチンを処方するためには、動物に投与すべき（体重に基づく）水の量をまず求める。ワクチン接種すべき動物の全体重は、ワクチン接種すべき動物の全数に動物の平均体重を掛けることにより計算する。動物の体重に必要とされる水の量を求めて、ワクチン製剤を必要な水およびワクチン製剤を投与すべき時間の長さに基づいて計算する。ブタに対する本発明のワクチンの処方および投与に用いるべき計算方法のタイプの１つの非限定的な例は、実施例１および表２に見出すことができる。
【００４７】
本発明の動物たちに投与すべき水の平均量は当業者が求めることができる。投与される水の平均量の非限定的な例は、１）家禽では、１０００羽あたり約２．５〜５ガロン；２）放牧牛は、冬には最低２．５ガロン（９．５Ｌ）の水／頭／日、夏には１２ガロン（４５Ｌ）／頭／日までを消費する；３）種牛、当歳牛および二歳齢の子牛は、一日に約１０ガロン（３８Ｌ）の水を消費する；４）仕上げの子牛は毎日６〜８ガロン（２３〜３０Ｌ）の水を飲む；ならびに５）イヌおよびネコなどの小動物は１日あたり約２５０〜１５００ｍＬの水を必要とする。
【００４８】
飲料水で本発明のワクチンを投与する前に、飲料水の摂取を促進するように、ワクチン接種すべき動物からすべての飲料水を除去することが好ましい。飲料水でワクチンを投与する前に、飲料水を一晩除去することが好ましい。
【００４９】
本発明の経口ワクチンは、動物に投与して一回量または二回量で免疫化すればよい。本発明の好ましい方法は二回量のワクチンの投与である。
【００５０】
以下の実施例は、本発明の非限定的な例示として意図される。
実施例１
風味付けした飲料水によるブタへの経口ワクチンの集団投与
合計３０頭の６週齢のブタを用いて、免疫原性に関する研究を行った。３０頭のブタのうち、２０頭はワクチン接種動物であり、１０頭はワクチン接種をしない対照とした。２０頭のワクチン接種するブタすべてに、自動水分配装置（ドサトロン（Ｄｏｓａｔｒｏｎ））を用いて、飲料水により、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ワクチン（無毒性の生きた培養物）を集団ワクチン接種した。第２回目のワクチン接種は、最初のものと同じ適用方法を用いることにより、第１回目のワクチン接種の２週間後に与えた。ワクチン接種したブタすべてを各々のワクチン接種の８日後に丹毒に関連する臨床的徴候について観察して、ワクチンの安全性を裏付けた。第２回目のワクチン接種の２１日後に、２０頭のワクチン接種動物および１０頭の非ワクチン接種対照すべてに、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の毒性株を筋肉内に攻撃誘発した。攻撃誘発したブタすべてを攻撃誘発の７日間にわたって、９ＣＦＲ１１３．６７に従って、体温および丹毒に関連する臨床的徴候について観察した。ワクチン接種したブタは、各々のワクチン接種後に、丹毒の臨床的徴候を示さなかった。攻撃誘発後、ワクチン接種していない対照ブタの１００パーセント（１００％）は、丹毒の重篤な臨床的徴候、例えば、高い体温、関節炎、食欲不振、うつ、嗜眠、全身の発赤斑（菱形皮膚病変）および観察期間内の突然死を示した。対照ブタの７０パーセント（７０％）は、攻撃誘発の４〜６日後までに死亡した。攻撃誘発後の対照ブタからまたは検死において採取した試料のすべてからブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）が単離された。対照的に、ワクチン接種したブタの１００％は丹毒の臨床的徴候を示さなかった。この研究の結果は、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ワクチンに関する９ＣＦＲ１１３．６７に述べられている要件を十分に満足している。この研究から採取されたデータは、飲料水により投与された集団ワクチン接種用のブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ワクチン（無毒性の生きた培養物）が安全であり、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）により引き起こされる疾患からブタを投与量あたり約６．０６×１０７ＣＦＵの最低レベルで保護するのに有効であることを示した。
【００５１】
試験動物
種： ブタ
頭数： ３０
年齢： ６週齢
性別： 雌雄
品種： 雑種
識別： 耳標
起源： ＦＤＡＨ ＳＰＦ群由来
【００５２】
動物の飼育および世話
すべてのブタは、施設の標準である２１日齢で離乳されるまで雌ブタに養わせた。離乳したブタには、水および餌を自由に与えた。ブタは、現場監督により適当であると思われる、抗生物質を含まないアーリー・スタート・フィード（Ｅａｒｌｙ Ｓｔａｒｔ Ｆｅｅｄ）（スーパースィートブランド（Ｓｕｐｅｒｓｗｅｅｔ Ｂｒａｎｄ））から始めて、スタート・アミノ（Ｓｔａｒｔ Ａｍｉｎｏ）に変更した。ワクチン接種動物および対照は、ワクチン接種後、攻撃誘発まで、２つの別々の部屋で飼育した。ワクチンの投与については、２０頭のワクチン接種したブタを囲いあたり１０頭ずつ２つの囲いに入れた。各々の囲いには、水のホースに接続した水の出る乳頭突起を設けた。両方の乳頭突起への水は、同じ自動水配分装置（ドサトロン（Ｄｏｓａｔｒｏｎ））で送った。攻撃誘発の２日前に、ワクチン接種したブタおよびワクチン接種していない対照を１つの部屋に混合し、すべてのブタをブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の毒性株で攻撃誘発した。攻撃誘発したブタは、すべて観察期間の最後まで、この部屋で維持した。
【００５３】
ワクチンの組成
この研究に用いた凍結乾燥したブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）は最高の継代レベル（すなわち、原種＋５）で製造した。抗原の原種は５回培養物である。各々の継代は、連続的に、ＭＳ＋１、ＭＳ＋２、ＭＳ＋３、ＭＳ＋４およびＭＳ＋５と呼ぶ。
【００５４】
実験計画
マイクロソフト・エクセル（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ）の乱数発生プログラムを用いて、ブタを無作為にワクチン接種動物群および対照群に指定した。第１回目のワクチン接種のとき、６週齢のワクチン接種動物が２０頭、非ワクチン接種対照が１０頭であった（付録２）。すべてのワクチン接種動物には、投与を２週間あけて２回のワクチン接種を行った。ワクチン接種動物および非ワクチン接種対照の両方には、第２回目のワクチン接種の２１日後（２１ＤＰＶ２）に攻撃誘発を行った。両方のワクチン接種については、ワクチンは、自動水分配装置（ドサトロン（Ｄｏｓａｔｒｏｎ））を用いて、飲料水により送達した。将来の可能な血清学的分析のために、ワクチン接種の日および攻撃誘発の日にワクチン接種動物および対照の両方からの血清試料を採取した。攻撃誘発の７日後（７ＤＰＣ）に、生存しているブタすべてを安楽死させた。ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）を単離するために、攻撃誘発後の対照ブタからまたは検死において血液試料および臓器を採取した。また、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）を単離するために、安楽死させたワクチン接種動物から血液試料を採取した。
【００５５】
【表１】
【表２】
ワクチンの調製
調製したワクチン原液の量は、各々のブタが６時間のワクチン接種期間の間に飲む水の量に基づいていた。各々のブタが飲む水およびワクチン有機体の量は、ワクチン接種すべき２０頭のブタの平均体重に従って推定した（付録３）。簡単には、凍結乾燥したワクチンを風味付けした（０．５％ギバウダン・ラウアー（Ｇｉｖａｕｄａｎ Ｒｏｕｒｅ）、連続番号Ｃ−３２１１１０）希釈剤に再懸濁した。再水和したワクチンは、無脂肪粉乳を含有する５リットルのミルク溶液に加え、よく混合した。さらに、ワクチン原液は、水を用いて、７リットルに希釈した後、さらに混合するために、容器を回転プレート上に置いた。次いで、この原液を接続ホースにより自動水配分装置に接続した。接続ホースは水源に接続した。
【００５８】
付録３：ワクチン接種期間の間に消費されるワクチンの推定量の計算
第１回目のワクチン接種
１．ワクチン接種動物の平均体重は１８．３ポンドであった。
２．１８．３ポンド／１００ポンド×９４６ｍＬ＝１７３ｍＬ。この計算は、１００ポンドのブタが２４時間で１ガロン（３７８５．４ｍＬ）の水を飲み、それゆえ、１００ポンドのブタは６時間のワクチン接種期間の間に９４６ｍＬの水を飲むという仮定に基づいていた。
３．各々のワクチンボトルには、４．１２×１０１０ＣＦＵ（２．０６×１０９ＣＦＵ／ｍＬ×２０ｍＬ）が含まれていた。
４．乳頭突起からの投与量あたりの目標ＣＦＵは、原液容器から乳頭突起に失われる分を除いて、１×１０８ＣＦＵであった。
５．各々のブタが１７３ｍＬ中の１×１０８ＣＦＵを得るために、乳頭突起からのワクチン有機体の濃度は、５．８×１０５ＣＦＵ／ｍＬ（１×１０８ＣＦＵ／１７３ｍＬ）でなければならなかった。
６．乳頭突起から５．８×１０５ＣＦＵ／ｍＬを得るためには、ワクチン原液の濃度は、７．４２×１０７ＣＦＵ／ｍＬ（５．８×１０５ＣＦＵ／ｍＬ×１２８＊＝７．４２×１０７ＣＦＵ／ｍＬ）でなければならなかった。
７．６時間のワクチン接種期間の間に乳頭突起からワクチンが連続して流れ出るようにするためには、７リットルの原液が必要であった。原液中の全ＣＦＵは、７．４２×１０７ＣＦＵ／ｍＬ×７０００ｍＬ＝５．１９×１０１１ＣＦＵであった。
８．ボトル１３本の凍結乾燥したワクチンを希釈剤で再水和した。ボトル１２．６本（５．１９×１０１１ＣＦＵ／４．１２×１０１０ＣＦＵ／ボトル＝ボトル１２．６本）に相当する量の再水和したワクチンを無脂肪乳および水と混合して、原液を製造した。
【００５９】
第２回目のワクチン接種
１．ワクチン接種動物の平均体重は３５．５ポンドであった。
２．３５．５ポンド／１００ポンド×９４６ｍＬ＝３３６ｍＬ。この計算は、１００ポンドのブタが２４時間で１ガロン（３７８５．４ｍＬ）の水を飲み、それゆえ、１００ポンドのブタは６時間のワクチン接種期間の間に９４６ｍＬの水を飲むという仮定に基づいていた。
３．各々のワクチンボトルには、４．１２×１０１０ＣＦＵ（２．０６×１０９ＣＦＵ／ｍＬ×２０ｍＬ）が含まれていた。
４．乳頭突起からの投与量あたりの目標ＣＦＵは、原液容器から乳頭突起に失われる分を除いて、１×１０８ＣＦＵであった。
５．各々のブタが３３６ｍＬ中の１×１０８ＣＦＵを得るために、乳頭突起からのワクチン有機体の濃度は、２．９８×１０５ＣＦＵ／ｍＬ（１×１０８ＣＦＵ／３３６ｍＬ）でなければならなかった。
６．乳頭突起から２．９８×１０５ＣＦＵ／ｍＬを得るためには、ワクチン原液の濃度は、３．８１×１０７ＣＦＵ／ｍＬ（２．９８×１０５ＣＦＵ／ｍＬ×１２８＊＝３．８１×１０７ＣＦＵ／ｍＬ）でなければならなかった。
７．６時間のワクチン接種期間の間に乳頭突起からワクチンが連続して流れ出るようにするためには、７リットルの原液が必要であった。原液中の全ＣＦＵは、３．８１×１０７ＣＦＵ／ｍＬ×７０００ｍＬ＝２．６７×１０１１ＣＦＵであった。
８．ボトル７本の凍結乾燥したワクチンを希釈剤で再水和した。ボトル６．４７本（２．６７×１０１１ＣＦＵ／４．１２×１０１０ＣＦＵ／ボトル＝ボトル６．４７本）に相当する量の再水和したワクチンを無脂肪乳および水と混合して、原液を製造した。
＊配分装置は送達比１：１２８に調節した。
【００６０】
水システムの調製、経口投与されるワクチンおよびワクチン接種法
各々のワクチン接種されるブタの体重をワクチン接種の前日に測定し（付録２）、ワクチン接種期間の間に用いるべきワクチン原液の量を計算するのに用いた。飲料水は、ワクチン接種の前に一晩（少なくとも８〜１０時間）ブタから取り上げ、ワクチン接種を開始した後、ブタに再び与えた。ワクチン接種期間は、ブタが推定量のワクチンを消費するように、少なくとも６時間続けた。第１回目のワクチン接種のとき、十分なワクチンが６時間の間に乳頭突起から連続して流れ出るように、７リットルの原液ワクチンを上記のように調製した。ドサトロン（Ｄｏｓａｔｒｏｎ）を原液容器に接続し、そして、水１ガロンあたり１オンスがワクチン接種されるブタに送達されるように、水配分装置を調節した。自動水配分装置は、２つの水の出る乳頭突起（囲いあたり１つの乳頭突起）を並列に駆動し、ワクチンを２つの乳頭突起に同時に送達した。ワクチン原液は、ワクチン期間の間、混合するために攪拌プレート上に置いた。送達を開始した後、２つの乳頭突起からの試料を１時間毎に採取した。生存細菌数の計数は、５％ヒツジ血液を含むＴＳＡＩＩ寒天プレート上で行った。各々の試料につき、５枚のプレートを用いた。第２回目のワクチン接種のとき、ワクチン再水和法、水配分装置のセットアップおよび試料採取は、第１回目のワクチン接種と同じであった。
【００６１】
ワクチン接種投与量の計算
飲料水中におけるワクチンの濃度および投与量の決定を付録４に示す。第１回目のワクチン接種における２つの乳頭突起の平均生存数は３．５０×１０５ＣＦＵ／ｍＬであり、各々のブタが消費する水の推定量は、群の体重および公表されている水消費率に基づいて、約１７３ｍＬであった。それゆえ、各々のブタに実際に投与される投与量あたりのＣＦＵは、３．５０×１０５ＣＦＵ／ｍＬ×１７３ｍＬ＝６．０６×１０７ＣＦＵであると計算された。
【００６２】
同様に、第２回目のワクチン接種における２つの乳頭突起の平均生存数は１．４２×１０５ＣＦＵ／ｍＬであり、各々のブタが消費する水の量は約３３６ｍＬであった。それゆえ、第２回目のワクチン接種の間に各々のブタに実際に投与される投与量あたりのＣＦＵは１．４２×１０５ＣＦＵ／ｍＬ×３３６ｍＬ＝４．７７×１０７ＣＦＵであると計算された。
【００６３】
【表３】
原液と乳頭突起試料との間のワクチン有機体の生存数の比較
原液と乳頭突起試料との間のワクチン有機体の生存数を比較した。第１回目および第２回目のワクチン接種における結果をそれぞれ表１および表２に示す。第１回目のワクチン接種では、原液の平均生存数は１．３６×１０８ＣＦＵ／ｍＬであった。２つの乳頭突起の平均ＣＦＵ／ｍＬは３．４９×１０５ＣＦＵ／ｍＬであり、平均の理論的ＣＦＵ／ｍＬ（原液の平均ＣＦＵ／ｍＬ／１２８）は１．０６×１０６ＣＦＵ／ｍＬであった。乳頭突起の平均と理論的濃度との差は対数値０．４８であった。同様に、第２回目のワクチン接種では、原液の平均生存数は３．５１×１０７ＣＦＵ／ｍＬであった。２つの乳頭突起の平均ＣＦＵ／ｍＬは１．４２×１０５ＣＦＵ／ｍＬであり、平均の理論的ＣＦＵ／ｍＬ（原液の平均ＣＦＵ／ｍＬ／１２８）は２．７４×１０５ＣＦＵ／ｍＬであった。乳頭突起の平均と理論的濃度との差は対数値０．２９であった。この研究から採取したデータは、乳頭突起の試料と原液との平均送達濃度は予想から大きく離れておらず（すなわち、対数０．５未満）、ＣＦＵ決定に対して期待される正常な範囲内に属する。
【００６５】
【表４】
【表５】
各々のワクチン接種後の観察
ワクチン接種したブタは、ワクチンの安全性を裏付けるために、各々のワクチン接種後の８日間にわたり丹毒に関連する臨床的徴候について観察した。また、観察期間の間、毎日の直腸温を計った。
【００６８】
観察および攻撃誘発の方法
第２回目のワクチン接種の３週間後、ワクチン接種動物群および対照群の両方からのすべてのブタにブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の毒性株で攻撃誘発した。攻撃誘発用株（Ｅ１−６Ｐ、ＩＲＰ ＥＰＣシリアル４、ＵＳＤＡ、ＡＰＨＩＳ、ＣＶＢ−Ｌ、９−９７攻撃誘発）は、ＳＯＰ＃ａ１１−０１５−０２に記載されているように調製した（ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）血清型１、ＳＰＦブタに対する攻撃誘発）。簡単には、培養物をＣＶＢ−Ｌ（アイオワ州エームズ）から入手し、修正ファイスト（Ｆｅｉｓｔ）培地で増殖させた。ＣＦＵ／ｍＬを求めた後、培養物を凍結保存する。攻撃誘発では、凍結した原液を急速解凍し、各々のブタに１ｍＬの攻撃誘発用培養物を首の領域に筋肉内投与した。攻撃誘発の投与量（５．７×１０４ＣＦＵ／ｍＬ）は、攻撃誘発の前後にＴＳＡＩＩ血液寒天プレート上における攻撃誘発用材料のＣＦＵ数により確認した。９ＣＦＲ１１３．６７に従って、攻撃誘発前の２日間および攻撃誘発後の７日間にすべてのブタを丹毒に関連する臨床的徴候について観察し、直腸温を測定した。
【００６９】
攻撃誘発を実施する詳細なプロトコルを以下に示す：
Ａ．材料
１．保護用具（手袋、コートおよび安全メガネ）
２．バイアル１本、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）株Ｅ１−６Ｐ ＩＲＰ ＥＲＣシリアル４−９／９７、ＮＶＳＬ攻撃誘発用培養物からの第１継代。
３．無菌のトリプティック（Ｔｒｙｐｔｉｃ）大豆ブロス。
４．ＳＰＦ群からの感染可能なブタ。
５．シリンジ。
６．針。
７．直腸体温計。
８．滅菌したピペット。
９．滅菌した希釈チューブ。
１０．血液寒天プレート。
１１．滅菌した接種用白金耳。
１２．２００μｌピペッター。
１３．滅菌したピペットチップ。
【００７０】
Ｂ．方法
１．管理人を起こりうる危険から保護するために保護衣類および付属品（手袋、コートおよび安全メガネ）を着用する。ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）は、敗血症、皮膚病変、関節炎および／または死亡を引き起こす公知のヒト病原体である。それは体液および皮膚潰瘍により伝染する。曝露が疑われるときは、直ちに報告する必要がある。
２．攻撃誘発の２日前、１日前および当日に、直腸温（これは各々のブタの基礎体温となる）を計る。これらの温度を記録する。
３．無菌状態で攻撃誘発用材料（ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）株Ｅ１−６Ｐ ＩＲＰ ＥＲＣシリアル４−９／９７）をその投与直前に調製する。攻撃誘発のバイアルを手で擦ることにより急速解凍する。種がアタッチメントＩＩ上で解凍する時間を記録する。種のバイアルを軽く振盪し、以下の方法を用いて、それをトリプチカーゼ（Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ）大豆ブロス（ＴＳＢ）に最終濃度６．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌで希釈する（種の濃度は約２．１５×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）。無菌状態で攻撃誘発用の種材料０．５ｍｌを無菌ＴＳＢ４．５ｍｌに加える（チューブ１−２．１５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ）。チューブ１を室温で１５分間保持した後、チューブ１を十分に混合し、無菌状態でチューブ１の３．０ｍｌを無菌ＴＳＢ７．０ｍｌに加える（チューブ２−６．５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）。チューブ２を十分に混合し、無菌状態でＴＳＢ中におけるチューブ２の１：１０希釈液を調製する（チューブ３−２−６．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌ）。適当数のブタを攻撃誘発するために、この希釈液を十分に調製する。（すなわち、６．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌの攻撃誘発用材料の１．０ｍｌ投与で２５頭のブタを攻撃誘発する必要があれば、６．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌの攻撃誘発用材料を少なくとも３０ｍｌ調製する。これを行うためには、無菌状態でチューブ２の３．０ｍｌを無菌ＴＳＢ２７．０ｍｌに加える。）すべての攻撃誘発用材料および希釈液チューブを攻撃誘発のときまで氷上に保持する。
４．攻撃誘発用材料の濃度を決定する。チューブ３を十分に混合し、無菌状態でチューブ３の０．５ｍｌを無菌ＴＳＢ４．５ｍｌに加える（チューブ４−６．５×１０３ＣＦＵ／ｍｌ）。チューブ４を十分に混合し、無菌状態でチューブ４の０．５ｍｌを無菌ＴＳＢ７．０ｍｌに加える（チューブ５−４．３×１０２ＣＦＵ／ｍｌ）。
５．３枚のヒツジ血液寒天（ＳＢＡ）プレートに「チューブ５−前攻撃誘発用ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）」、日付および頭文字のラベルを貼る。チューブ５を十分に混合し、無菌状態でチューブ５から３つの異なる０．１ｍｌアリコットを取り出し、それを３枚のＳＢＡプレート上に載せる。滅菌した接種用白金耳を用いて、試料を端に近づきすぎないようにしてＳＢＡプレートの表面上に広げる。これらのプレートを３７℃で２０〜４８時間インキュベートする。前攻撃誘発用ＣＦＵを培養した時間を記録する。すべての希釈チューブを氷上に置く。
６．すべてのブタを、工程ＩＶ．Ｂ．３で調製したチューブ３（６．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌ）の攻撃誘発用材料１．０ｍｌ、ＩＭ、で、首の筋肉に攻撃誘発する。ブタのどちら側の首に攻撃誘発をしたかを記録する。攻撃誘発期間の間、すべての攻撃誘発用材料を氷上で保持する。
７．ブタが攻撃誘発された後、チューブ５の内容物を十分に混合する。３枚のＳＢＡプレートに「チューブ５−後攻撃誘発用丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）」および日付のラベルを貼る。無菌状態でチューブ５から３つの異なる０．１ｍｌアリコットを取り出し、それを３枚のヒツジ血液寒天プレート上に載せる。滅菌した接種用白金耳を用いて、試料を端に近づきすぎないようにしてＳＢＡプレートの表面上に広げる。これらのプレートを３７℃で２０〜４８時間インキュベートする。後攻撃誘発用ＣＦＵを培養した時間を記録し、攻撃誘発用材料が解凍した時間から後攻撃誘発用ＣＦＵが行われるまでにかかった時間を計算する。
８．各々のブタの体温を７日間連続して計り、記録する。各々のブタを丹毒の臨床的徴候（食欲不振、硬直および／または関節の関与を伴ったうつ；転移性皮膚病変を伴ったまたは伴わない瀕死）について調べて観察結果を記録する。また、注射部位の反応、全身の皮膚発赤斑、食欲不振またはチアノーゼを調べて記録する。
９．獣医師は検死を行い、丹毒の臨床的徴候を示さないが研究の間に死亡する各々のブタの死亡原因を決定すべきである。
１０．残りの攻撃誘発用材料を焼却または高圧蒸気殺菌法により廃棄する。
１１．２通りのプレート上のコロニーの数を数えて平均し、記録する。
【００７１】
Ｃ．計算／説明
１．対照ブタは、臨床的徴候があり、２日間続けて（前攻撃誘発の日を除く）体温が１０５．６°Ｆであれば、丹毒に関して陽性であると考えられる。（９ＣＦＲ§１１３．６７を参照）。陽性であると考えるべき基準を満足するブタは、現場監督または所属獣医師の考え次第で、ペニシリンで治療して苦痛および激痛を軽減すればよい。
２．対照ブタの少なくとも８０％は、有効であるべき攻撃誘発の観察期間の間に丹毒の正の徴候示さなければならない。（９ＣＦＲ§１１３．６７を参照）。
３．数えたコロニーの平均数に培養した最終希釈液の倍率を掛ける。前攻撃誘発用および後攻撃誘発用ＣＦＵの結果の濃度を平均する。攻撃誘発用材料の平均濃度は、有効な攻撃誘発の場合、５×１０４〜９×１０４ＣＦＵ／ｍｌであるべきである。
【００７２】
第１回目のワクチン接種後の臨床的徴候および体温
ワクチン接種したすべてのブタは、第１回目のワクチン接種の８日後まで観察され、いずれのブタも丹毒に関連する臨床的徴候を示さなかった。それぞれ４ＤＰＶ１および５ＤＰＶ１に体温が１日だけ１０４．６°Ｆであった２頭のブタを除いて、たいていのブタは、ワクチン接種後の観察期間の間、正常な体温であった。上記の２頭のブタには、臨床的徴候は観察されなかった。ワクチン接種したブタの一部は、観察期間の間、基礎体温より１°Ｆ高い体温を示したが、これは取扱いの間にブタを興奮させたことから生じたと思われる。同様に、数頭のワクチン接種していない対照（例えば、ブタ）も、臨床的徴候を示すことなく、１または２日間体温が高かった。
【００７３】
第２回目のワクチン接種後の臨床的徴候および体温
ワクチン接種したブタは、いずれも第２回目のワクチン接種の８日間を通じて丹毒に関連する臨床的徴候を示さなかった。それぞれ６ＤＰＶ２に体温が１日だけ１０４．２°Ｆであった１頭のブタならびに５および６ＤＰＶ２に体温が１日だけ１０４．１°Ｆであった別のブタ除いて、すべてのブタは、観察期間の間、正常な体温であった。これらのブタの両方は、観察期間の間、臨床的徴候を示さなかった。同様に、１頭の対照ブタは、臨床的徴候を示すことなく、７ＤＰＶ２に１日だけ体温１０４．３°Ｆを示した。これらの１日だけ高い体温は、おそらく取扱いの間にブタを興奮させたことから生じたと思われる。各々のワクチン接種後の臨床的観察および体温の両方から採取されたデータは、このワクチン株がブタに対して安全であり、ワクチン接種後に丹毒に関連する臨床的徴候を引き起こさないことを示す。
【００７４】
攻撃誘発後の臨床的観察
第２回目のワクチン接種の２１日後に、２０頭のワクチン接種動物および１０頭の対照を、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の毒性株で攻撃誘発した。すべてのブタを丹毒に関連する臨床的徴候について観察し、直腸温を攻撃誘発の前に２日間および攻撃誘発の後に７日間測定した。
【００７５】
攻撃誘発後の対照ブタの臨床的徴候
ワクチン接種していないすべての対照（１００％）は、丹毒に関連する重篤な臨床的徴候、例えば、関節炎、全身の発赤斑（菱形皮膚病変）、嗜眠、食欲不振、うつおよび突然死を示した。攻撃誘発の４日後に、４頭の対照ブタ、すなわちＯ４０４、Ｏ４１７、Ｏ４１２およびＯ４３２が死亡した。ブタＯ４０６およびＲ７３は５ＤＰＣに死亡しているのが見出され、ブタＯ４０３は６ＤＰＣに死亡した。攻撃誘発の７日後に、対照ブタの１０頭のうち７頭（７０％）が死亡した。ブタＯ４０３は、死亡前５ＤＰＣに体温が１０５．７°Ｆであった。ブタＯ４０４およびＯ４０６は、死亡前にそれぞれ体温が１０３．１°Ｆおよび１０２．４°Ｆであった。ブタＯ４１７、Ｏ４２１、Ｏ４３２およびＲ７３は、死亡前にそれぞれ体温が１０５．２°Ｆ、１０４．９°Ｆ、９９．５°Ｆおよび１０５．６°Ｆであった。３頭の対照ブタ、すなわちＯ４１１、Ｏ４２６およびＯ４２９は、重篤な臨床的徴候を有しながら、攻撃誘発を生き延びた。
【００７６】
攻撃誘発後のワクチン接種したブタの臨床的症候
ワクチン接種動物の１００パーセント（２０頭のうち２０頭）は、観察期間の間、丹毒に関連する典型的な臨床的徴候を示さなかった。ブタＯ４０９は、２ＤＰＣに注射部位の発赤を示した。ワクチン接種をしたブタは、いずれも攻撃誘発後の観察期間の間に、１０４．０°Ｆより高い体温を示さなかった。ワクチン接種したブタから採取したデータは、ワクチン接種動物の１００％がブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の攻撃誘発から保護されることを示した。これらの結果は、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）からブタを保護するのに有効なワクチンであると認定する９ＣＦＲの要件を十分に満足する。
【００７７】
攻撃誘発後のブタからのブタ丹毒菌 （Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ） の単離
ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の単離は、攻撃誘発後または検死時の対照ブタから採取した血液、脾臓、肝臓および腸間膜リンパ節から行った。観察されるように、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）は、対照ブタＯ４０３、Ｏ４０６、Ｏ４１１、Ｏ４２６、Ｏ４２９およびＲ７３から採取した試料から単離した。ブタＯ４０４、Ｏ４１７、Ｏ４２１およびＯ４３２は、４ＤＰＣに死亡していることが見出され、そのときには試料は採取しなかった。また、血液試料を７ＤＰＣにワクチン接種したブタから採取したが、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）はワクチン接種したブタから単離されなかった。対照ブタからのブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）単離の結果は、有効なブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）攻撃誘発に対する９ＣＦＲ要件を満足している。
【００７８】
結論
この研究からのデータは、この場合は、本発明の方法に従って、自動水配分装置を用いて、飲料水により約６．０６×１０７ＣＦＵ／投与の割合で集団投与されたブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ワクチン、すなわち無毒性の生きた培養物を含有する本発明の風味付けしたワクチン製剤が安全であり、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）の感染により引き起こされる疾患からブタを保護するのに有効であることを示している。この研究からの結果は、９ＣＦＲ１１３．６７に述べられている要件を十分に満足し、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ワクチン、すなわち無毒性の生きた培養物が使用許可を受けるのにふさわしいことを認定している。
【００７９】
実施例２
風味付けされていないものと比較した経口投与される風味付けされたワクチン
本発明の風味付けされた経口投与されるワクチンが風味付けされていないものと比べて感染に対してより高い保護を提供したことを示すために、凍結乾燥したブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）を抗原とするイチゴ風味のワクチン製剤、凍結乾燥したブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）を抗原とする風味付けしていないワクチン製剤、および香味剤も抗原も添加しない対照製剤を利用して、実施例１に記載したものに類似したワクチン接種プロトコルを行った。すべてのワクチンおよび対照製剤は、実施例１に記載したように調製した。攻撃誘発の実験は、実施例１に記載したように行った。
実験およびデータを以下の表に記載する：
【００８０】
【表６】
【表７】
【表８】
実施例３
抗原が風味付けしていないワクチン製剤で活性であることを示すために、風味付けせずに製剤化されたワクチンの単回投与をブタにシリンジで投与した。これらのデータを以下の表７に与えるが、これらのデータは抗原が活性であり、香味剤が飲料水中における風味付けされた経口投与されるワクチンのブタによるより高い摂取を与えることを示している。
【００８４】
【表９】
参考文献
Ｍ． Ｌ． Ａｕｇｅｎｓｔｅｉｎ， Ｌ． Ｊ． Ｊｏｈｎｓｔｏｎ， Ｇ． Ｃ． Ｓｈｕｒｓｏｎ， Ｊ． Ｄ． Ｈａｗｔｏｎ ａｎｄ Ｊ． Ｅ． Ｐｅｔｔｉｇｒｅｗ． Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｒｍ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｓｗｉｎｅ Ｄｉｅｔｓ； Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ． １９９４．
Claims (26)
- 動物の疾患に対する保護を提供する方法であって、
（ａ）水溶性の口当たりの良い香味剤を、経口投与されるワクチン投与用の水溶性媒体と混合し；
（ｂ）さらに工程（ａ）の混合物と、経口投与されるワクチンの有効成分としての細菌およびウイルスからなる群から選択される抗原を混合し；
（ｃ）工程（ｂ）の経口投与されるワクチンを動物に投与して、該抗原による感染に関連する疾患に対する保護を提供すること；
からなる方法。 - 抗原が、ブタ、家禽、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ネコおよびイヌからなる群から選択される動物において疾患を引き起こし得る、請求項１記載の方法。
- 抗原が、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、大腸菌Ｋ８８、Ｋ９９、Ｆ４１および９８７Ｐ（Ｅ． ｃｏｌｉ Ｋ８８， Ｋ９９， Ｆ４１ ａｎｄ ９８７Ｐ）、Ｃ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ ｃ）、サルモネラ・コレラスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、気管支敗血症菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、レプトスピラ・ブラティスラヴァ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｂｒａｔｉｓｌａｖａ）、イヌ型レプトスピラ症（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトスピラ・グリッポチフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・ハルジョ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・プロモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｐｒｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・イクテロ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏ）、ブタ・インフルエンザウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、サーコウイルス（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ）、ＰＲＲＳウイルス（ＰＲＲＳ ｖｉｒｕｓ）、ブタ痘（Ｓｗｉｎｅ ｐｏｘ）、ロタウイルス（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、ブタ呼吸器コロナウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、パルボウイルス（Ｐａｒｖｏ ｖｉｒｕｓ）、オーエスキー病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ）、伝染性胃腸炎の病原体（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ａｇｅｎｔ）、腺疫菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、ウマ・インフルエンザウイルスＡ１およびＡ２株（Ｅｑｕｉｎｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓ Ａ１ ａｎｄ Ａ２ ｓｔｒａｉｎｓ）、ウマ・リノニューモニド１型、１ｂ型および４型（Ｅｑｕｉｎｅ Ｒｈｉｎｏｐｎｅｕｍｏｎｉｄｓ ｔｙｐｅ １， １ｂ ａｎｄ ４）、東部ウマ脳髄炎（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、西部ウマ脳脊髄炎（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、ベネズエラウマ脳脊髄炎（Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、ウマ・ロタウイルス（Ｅｑｕｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Ｅ． ｃｏｌｉ ０１５７ ： Ｈ７）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、パスツレラ・ヘモリティカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、Ｄ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ Ｄ）、クロストリジウム・チャウヴォエル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｈａｕｖｏｅｌ）、クロストリジウム・ノーヴィ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）、悪性水腺菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・ヘモリティクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・ソデリイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｄｅｌｌｉｉ）、サルモネラ・ダブリン（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｄｕｂｌｉｎ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、ウシ・ロタウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、ウシ・コロナウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、ウシ伝染性鼻気管炎（Ｂｏｖｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、ウシ下痢症ウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザ−３（Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ−３）、呼吸器合胞体ウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、セプリナ・ピロシコリ（Ｓｅｐｕｌｌｉｎａ ｐｉｌｏｓｉｃｏｌｉ）、マレック病ウイルス（Ｍａｒｅｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、伝染性ファブリーキウス嚢病（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｕｒｓａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、伝染性気管支炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ニューカッスル病ウイルス（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、レオウイルス（Ｒｅｏ ｖｉｒｕｓ）、七面鳥鼻気管炎（Ｔｕｒｋｅｙ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、コウイディオシス（Ｃｏｕｉｄｉｏｓｉｓ）、イヌ・ライム病ボレリア（Ｃａｎｉｎｅ Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、イヌ・エールリヒア・カニス（Ｃａｎｉｎｅ Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃａｎｉｓ）、イヌ気管支敗血症菌（Ｃａｎｉｎｅ Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、イヌのランブル鞭毛虫（Ｃａｎｉｎｅ Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ）、イヌ・ジステンパー（Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ）、イヌ・アデノウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、イヌ・コロナウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、イヌ・パラインフルエンザ（Ｃａｎｉｎｅ Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、イヌ・パルボウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、イヌ狂犬病（Ｃａｎｉｎｅ Ｒａｂｉｅｓ）、ネコのオウム病クラミジア（Ｆｅｌｉｎｅ Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、ネコ免疫不全ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）、ネコ白血病ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）、ネコ鼻気管炎（Ｆｅｌｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｌｉｔｉｓ）、ネコ汎白血球減少症（Ｆｅｌｉｎｅ Ｐａｎｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ）、ネコ狂犬病（Ｆｅｌｉｎｅ ｒａｂｉｅｓ）からなる群から選択される、請求項２記載の方法。
- ワクチンが飲料水により投与される、請求項１記載の方法。
- 動物がブタ、家禽、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ネコおよびイヌからなる群から選択される、請求項１記載の方法。
- 動物がブタおよび家禽からなる群から選択される、請求項１記載の方法。
- 経口投与されるワクチンの投与が飲料水による集団投与である、請求項６記載の方法。
- 動物がブタであり、抗原がブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）である、請求項７記載の方法。
- 動物がイヌおよびネコからなる群から選択される、請求項１記載の方法。
- 経口投与されるワクチンの投与がシリンジによる口への投与である、請求項７記載の方法。
- 動物による経口投与されるワクチンの増大した摂取を誘発する方法であって、
（ａ）水溶性の口当たりの良い香味剤を、経口投与されるワクチン投与用の水溶性媒体と混合し；
（ｂ）さらに工程（ａ）の混合物と、経口投与されるワクチンの有効成分としての細菌およびウイルスからなる群から選択される抗原と混合し；
（ｃ）工程（ｂ）のワクチン混合物を動物に経口投与し；
（ｄ）経口投与されるワクチンの増大した摂取を香味剤で誘発すること；
からなる方法。 - 抗原が、ブタ、家禽、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ネコおよびイヌからなる群から選択される動物において疾患を引き起こし得る、請求項１１記載の方法。
- 抗原が、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、大腸菌Ｋ８８、Ｋ９９、Ｆ４１および９８７Ｐ（Ｅ． ｃｏｌｉ Ｋ８８， Ｋ９９， Ｆ４１ ａｎｄ ９８７Ｐ）、Ｃ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ ｃ）、サルモネラ・コレラスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、気管支敗血症菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、レプトスピラ・ブラティスラヴァ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｂｒａｔｉｓｌａｖａ）、イヌ型レプトスピラ症（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトスピラ・グリッポチフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・ハルジョ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・プロモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｐｒｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・イクテロ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏ）、ブタ・インフルエンザウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、サーコウイルス（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ）、ＰＲＲＳウイルス（ＰＲＲＳ ｖｉｒｕｓ）、ブタ痘（Ｓｗｉｎｅ ｐｏｘ）、ロタウイルス（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、ブタ呼吸器コロナウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、パルボウイルス（Ｐａｒｖｏ ｖｉｒｕｓ）、オーエスキー病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ）、伝染性胃腸炎の病原体（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ａｇｅｎｔ）、腺疫菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、ウマ・インフルエンザウイルスＡ１およびＡ２株（Ｅｑｕｉｎｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓ Ａ１ ａｎｄ Ａ２ ｓｔｒａｉｎｓ）、ウマ・リノニューモニド１型、１ｂ型および４型（Ｅｑｕｉｎｅ Ｒｈｉｎｏｐｎｅｕｍｏｎｉｄｓ ｔｙｐｅ １， １ｂ ａｎｄ ４）、東部ウマ脳髄炎（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、西部ウマ脳脊髄炎（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、ベネズエラウマ脳脊髄炎（Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、ウマ・ロタウイルス（Ｅｑｕｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Ｅ． ｃｏｌｉ ０１５７ ： Ｈ７）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、パスツレラ・ヘモリティカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、Ｄ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ Ｄ）、クロストリジウム・チャウヴォエル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｈａｕｖｏｅｌ）、クロストリジウム・ノーヴィ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）、悪性水腺菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・ヘモリティクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・ソデリイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｄｅｌｌｉｉ）、サルモネラ・ダブリン（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｄｕｂｌｉｎ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、ウシ・ロタウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、ウシ・コロナウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、ウシ伝染性鼻気管炎（Ｂｏｖｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、ウシ下痢症ウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザ−３（Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ−３）、呼吸器合胞体ウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、セプリナ・ピロシコリ（Ｓｅｐｕｌｌｉｎａ ｐｉｌｏｓｉｃｏｌｉ）、マレック病ウイルス（Ｍａｒｅｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、伝染性ファブリーキウス嚢病（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｕｒｓａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、伝染性気管支炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ニューカッスル病ウイルス（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、レオウイルス（Ｒｅｏ ｖｉｒｕｓ）、七面鳥鼻気管炎（Ｔｕｒｋｅｙ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、コウイディオシス（Ｃｏｕｉｄｉｏｓｉｓ）、イヌ・ライム病ボレリア（Ｃａｎｉｎｅ Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、イヌ・エールリヒア・カニス（Ｃａｎｉｎｅ Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃａｎｉｓ）、イヌ気管支敗血症菌（Ｃａｎｉｎｅ Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、イヌのランブル鞭毛虫（Ｃａｎｉｎｅ Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ）、イヌ・ジステンパー（Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ）、イヌ・アデノウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、イヌ・コロナウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、イヌ・パラインフルエンザ（Ｃａｎｉｎｅ Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、イヌ・パルボウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、イヌ狂犬病（Ｃａｎｉｎｅ Ｒａｂｉｅｓ）、ネコのオウム病クラミジア（Ｆｅｌｉｎｅ Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、ネコ免疫不全ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）、ネコ白血病ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）、ネコ鼻気管炎（Ｆｅｌｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｌｉｔｉｓ）、ネコ汎白血球減少症（Ｆｅｌｉｎｅ Ｐａｎｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ）、ネコ狂犬病（Ｆｅｌｉｎｅ ｒａｂｉｅｓ）からなる群から選択される、請求項１２記載の方法。
- ワクチンが飲料水により投与される、請求項１１記載の方法。
- 動物がブタ、家禽、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ネコおよびイヌからなる群から選択される、請求項１１記載の方法。
- 動物がブタおよび家禽からなる群から選択される、請求項１５記載の方法。
- 経口投与されるワクチンの投与が飲料水による集団投与である、請求項１６記載の方法。
- 動物がブタであり、抗原がブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）である、請求項１７記載の方法。
- 動物がイヌおよびネコからなる群から選択される、請求項１１記載の方法。
- 経口投与されるワクチンの投与がシリンジによる口への投与である、請求項１９記載の方法。
- 有効成分として、細菌およびウイルスからなる群から選択される抗原と、水溶性の口当たりの良い香味剤および経口投与される動物ワクチン投与用の水溶性媒体とからなる経口投与される動物ワクチン製剤。
- 抗原が、ブタ、家禽、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ネコおよびイヌからなる群から選択される動物において疾患を引き起こし得る、請求項２１記載の方法。
- 抗原が、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、大腸菌Ｋ８８、Ｋ９９、Ｆ４１および９８７Ｐ（Ｅ． ｃｏｌｉ Ｋ８８， Ｋ９９， Ｆ４１ ａｎｄ ９８７Ｐ）、Ｃ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ ｃ）、サルモネラ・コレラスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、気管支敗血症菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、レプトスピラ・ブラティスラヴァ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｂｒａｔｉｓｌａｖａ）、イヌ型レプトスピラ症（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトスピラ・グリッポチフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・ハルジョ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・プロモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｐｒｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・イクテロ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏ）、ブタ・インフルエンザウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、サーコウイルス（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ）、ＰＲＲＳウイルス（ＰＲＲＳ ｖｉｒｕｓ）、ブタ痘（Ｓｗｉｎｅ ｐｏｘ）、ロタウイルス（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、ブタ呼吸器コロナウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、パルボウイルス（Ｐａｒｖｏ ｖｉｒｕｓ）、オーエスキー病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ）、伝染性胃腸炎の病原体（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ａｇｅｎｔ）、腺疫菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、ウマ・インフルエンザウイルスＡ１およびＡ２株（Ｅｑｕｉｎｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓ Ａ１ ａｎｄ Ａ２ ｓｔｒａｉｎｓ）、ウマ・リノニューモニド１型、１ｂ型および４型（Ｅｑｕｉｎｅ Ｒｈｉｎｏｐｎｅｕｍｏｎｉｄｓ ｔｙｐｅ １， １ｂ ａｎｄ ４）、東部ウマ脳髄炎（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、西部ウマ脳脊髄炎（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、ベネズエラウマ脳脊髄炎（Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ Ｅｑｕｉｎｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、ウマ・ロタウイルス（Ｅｑｕｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Ｅ． ｃｏｌｉ ０１５７ ： Ｈ７）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、パスツレラ・ヘモリティカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、Ｄ型ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ ｔｙｐｅ Ｄ）、クロストリジウム・チャウヴォエル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｈａｕｖｏｅｌ）、クロストリジウム・ノーヴィ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ）、悪性水腺菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・ヘモリティクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・ソデリイ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｄｅｌｌｉｉ）、サルモネラ・ダブリン（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｄｕｂｌｉｎ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、ウシ・ロタウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、ウシ・コロナウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、ウシ伝染性鼻気管炎（Ｂｏｖｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、ウシ下痢症ウイルス（Ｂｏｖｉｎｅ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザ−３（Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ−３）、呼吸器合胞体ウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、セプリナ・ピロシコリ（Ｓｅｐｕｌｌｉｎａ ｐｉｌｏｓｉｃｏｌｉ）、マレック病ウイルス（Ｍａｒｅｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、伝染性ファブリーキウス嚢病（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｕｒｓａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、伝染性気管支炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ニューカッスル病ウイルス（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、レオウイルス（Ｒｅｏ ｖｉｒｕｓ）、七面鳥鼻気管炎（Ｔｕｒｋｅｙ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、コウイディオシス（Ｃｏｕｉｄｉｏｓｉｓ）、イヌ・ライム病ボレリア（Ｃａｎｉｎｅ Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、イヌ・エールリヒア・カニス（Ｃａｎｉｎｅ Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃａｎｉｓ）、イヌ気管支敗血症菌（Ｃａｎｉｎｅ Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、イヌのランブル鞭毛虫（Ｃａｎｉｎｅ Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ）、イヌ・ジステンパー（Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ）、イヌ・アデノウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、イヌ・コロナウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、イヌ・パラインフルエンザ（Ｃａｎｉｎｅ Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、イヌ・パルボウイルス（Ｃａｎｉｎｅ Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、イヌ狂犬病（Ｃａｎｉｎｅ Ｒａｂｉｅｓ）、ネコのオウム病クラミジア（Ｆｅｌｉｎｅ Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、ネコ免疫不全ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）、ネコ白血病ウイルス（Ｆｅｌｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）、ネコ鼻気管炎（Ｆｅｌｉｎｅ ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｌｉｔｉｓ）、ネコ汎白血球減少症（Ｆｅｌｉｎｅ Ｐａｎｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ）、ネコ狂犬病（Ｆｅｌｉｎｅ ｒａｂｉｅｓ）からなる群から選択される、請求項２２記載の方法。
- 投与用媒体が飲料水である、請求項２１記載のワクチン製剤。
- 動物がブタであり、抗原がブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）である、請求項２１記載のワクチン製剤。
- 動物がイヌおよびネコからなる群から選択され、投与用媒体がシロップである、請求項２１記載のワクチン製剤。
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