CN118201632A - 免疫原性凝胶组合物 - Google Patents

Abstract

一种口服施用的免疫原性凝胶组合物及使动物免疫的方法，所述方法包括向所述动物施用治疗有效量的包含动物病原体抗原及用于口服施用的凝胶组合物的免疫原性凝胶组合物。

Description

免疫原性凝胶组合物

背景技术

劳氏内细胞菌(Lawsonia(L.)intracellularis)为猪增殖性肠病(porcineproliferative enteropathy；“PPE”)的致病物，其几乎影响所有动物，包括：兔、雪貂、仓鼠、狐狸、马及其他各种动物，如鸵鸟及鸸鹋。劳氏内细胞菌为全球最盛行的猪肠道病原体，并在全球范围内造成猪生产的重大损失。

劳氏内细胞菌疫苗在美国及欧洲已批准使用(商标Ileitis)，其基于WO96/39629A1及WO2005/011731A1中所描述的减毒的劳氏内细胞菌活菌分离株。

还已描述劳氏内细胞菌死菌疫苗，诸如WO2009144088 A2、WO97/20050A1及WO2002/26250A2中所述。

肠沙门氏菌肠亚种猪霍乱血清型(Salmonella enterica subsp.entericaserovar Choleraesuis；SC)及肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型(Salmonella entericasubsp.enterica serovar Typhimurium；ST)已鉴别为猪中的主要病原体。ST为生长猪或肥育猪的肠炎及亚临床生产损失的主要原因且造成环境及动物尸体污染。由于人畜共通的可能性，因此世界各地已建立ST干预规划，试图减少动物尸体污染，最终目标为减少人类沙门氏菌病个案。

传统上使用SC疫苗治疗沙门氏菌感染，例如ENTERISOL猪霍乱沙门氏菌疫苗无毒活菌培养物(Boehringer Ingelheim)。此产品描述于US 5,436,001及US 5,580,557中，两者以引用的方式并入本文中。

鼠伤寒沙门氏菌分离株包括德国Impfstoffwerk Dessau-Tornau(IDT)的鼠伤寒沙门氏菌421/125。此分离株用作SALMOPORC的活性成分，SALMOPORC为沙门氏菌活疫苗，由Ceva(Ceva SantéAnimale)出售。本发明的优选ST描述于DE2843295及其等效案US 3,856,935中，两者均以引用的方式并入本文中。

此外，存在猪霍乱-鼠伤寒沙门氏菌活疫苗(沙门氏菌属T/C)，其包含猪霍乱沙门氏菌与鼠伤寒沙门氏菌两者。

通过经口灌服或通过饮用水口服给予劳氏内细胞菌活疫苗(诸如Ileitis)及沙门氏菌活菌疫苗(诸如ENTERISOL)两者。

然而，传统经口灌服施用需要针对单个的猪操作，此使得劳动力成本高且对猪而言有压力。

在使用饮用水施用的情况下，未曾饮用水的猪崽在断奶之前未接种疫苗且无法经由饮用水接种疫苗。此外，通过饮用水施用涉及许多步骤。

然而，一般而言，需要早期接种疫苗以有效保护动物。就活疫苗而言，抗生素可能干扰所述活疫苗的功效。因此，在出生的后尽可能快地对动物进行疫苗接种将为有益的，以便在对哺乳期期间处于未用药窗的动物进行疫苗接种(在大部分猪未接受抗菌剂时接种疫苗)。

此外，美国猪肉行业遭受严重的劳动力不足，对农场及加工厂产生负面影响(参见https://nppc.org/issues/issue/agriculture-labor-issues/)。

因此，需要更早且更高效的疫苗接种方法，以减少对单个动物的操作、减少劳动力及减少动物压力。

发明内容

在描述本发明的方面之前，必须指出，如本文及随附权利要求所用，除非上下文清楚地另外指示，否则单数形式“一(a)”、“一(an)”及“所述(the)”包括复数个提及物。因此，举例而言，提及“抗原”包括多种抗原，提及“病毒”为提及本领域技术人员已知的一或多种病毒及其等效物，以此类推。除非另外定义，否则本文中所用的所有技术及科学术语具有与一般熟悉本发明所属技术领域者通常所理解相同的含义。尽管类似或等效于本文所描述的任何方法及材料均可用于本发明的实施或测试中，但现描述优选的方法、装置及材料。出于描述及公开公开文本中所报导的可结合本发明使用的细胞株、载体及方法的目的，本文提及的所有公开文本以引用的方式并入本文中。本文中的任何内容均不应被解释为承认本发明无权凭借先有发明而在时间上早于此类公开。

本发明解决先前技术中固有的问题且提供先前技术的独特进展。一般而言，本发明提供一种免疫原性凝胶组合物，其包含劳氏内细胞菌抗原和/或沙门氏菌属抗原及适于口服施用的凝胶组合物。

有利地，本文提供的实验数据公开动物食用疫苗凝胶组合物。与传统经口灌服应用相比，活的劳氏内细胞菌及沙门氏菌凝胶疫苗的吸收甚至更优。此外，疫苗凝胶组合物与传统施用方法一样有效。

然而，有利地，动物在未用药窗(哺乳期期间)内较早时间接种疫苗，以避免或减少对单个猪的操作且减少动物压力。

术语“凝胶”为本领域技术人员所熟知。此外，术语“凝胶”在下文进一步定义。此外，适合的凝胶为本领域技术人员所知且可市购，诸如凝胶(Animal ScienceProducts,Nacogdoches,TX)。

术语“免疫原性组合物”指包含至少一种抗原的组合物，其在免疫原性组合物施用的宿主中引发免疫反应。此类免疫反应可为针对本发明的免疫原性组合物的细胞免疫反应和/或抗体介导的免疫反应。优选地，免疫原性组合物诱发免疫反应，且更优选地，赋予针对动物病原体感染的一或多种临床症状的保护性免疫。宿主也描述为“动物”。

通常，“免疫反应”包括但不限于一或多种以下作用：产生或活化特异性针对本发明的免疫原性组合物中所包括的一或多种抗原的抗体、B细胞、辅助T细胞、抑制T细胞和/或细胞毒性T细胞和/或γ-δT细胞。优选地，宿主将呈现保护性免疫反应或治疗反应。

“保护性免疫反应”或“保护性免疫”将由以下证明：受感染宿主通常所呈现的临床症状减少或缺失、恢复时间加快和/或感染持续时间减少、或受感染宿主的组织或体液或排泄物中的病原体滴度降低。

在宿主呈现保护性免疫反应使得对新感染的抗性将增强和/或疾病的临床严重程度将降低的情况下，将免疫原性组合物描述为“疫苗”。

如本文所用，“抗原”指但不限于这样的组分，其在宿主中引起对包含此类抗原或其免疫活性组分的感兴趣的免疫原性组合物或疫苗的免疫反应。抗原或免疫活性组分可为完整微生物(呈灭活的或修饰的活的形式)或其任何片段或部分，其若向宿主施用，则可在宿主中引起免疫反应。在所谓的修饰的活疫苗(MLV)中，抗原可为或可包含呈原始形式或作为减毒的生物体的完整活生物体。抗原可进一步包含所述生物体的适当要素(次单位疫苗)，其中此等组件通过以下产生：破坏整个生物体或此类生物体的生长培养物且随后进行纯化步骤，产生所需结构；或通过适当操纵适合系统(如但不限于细菌、昆虫、哺乳动物或其他物种)诱发的合成过程，以及任选地随后进行分离及纯化程序；或通过使用合适的医药组合物直接并入遗传物质，在需要疫苗的动物中诱发所述合成过程(多核苷酸疫苗接种)。抗原可包含所谓死疫苗(KV)中的通过适当方法灭活的完整生物体。若生物体为细菌，则死疫苗称为菌苗(bacterin)。

在本发明的一个方面中，所述免疫原性凝胶组合物包含劳氏内细胞菌抗原及适于口服施用的凝胶组合物。

在本发明的一个方面中，所述免疫原性凝胶组合物包含沙门氏菌属抗原及适于口服施用的凝胶组合物。

在本发明的一个方面中，所述免疫原性凝胶组合物包含劳氏内细胞菌抗原及沙门氏菌属抗原及适于口服施用的凝胶组合物。

有利地，本文所提供的实验数据显示当以凝胶组合物施用时，可将劳氏内细胞菌抗原与沙门氏菌属抗原组合(未观测到干扰)。

在本发明的一个方面中，劳氏内细胞菌抗原和/或沙门氏菌属抗原是全细胞细菌。

劳森菌抗原

术语“劳氏内细胞菌”为本领域技术人员已知。劳氏内细胞菌为猪增殖性肠病(“PPE”)的致病物。

在本发明的一个方面中，所述劳氏内细胞菌抗原为死的劳氏内细胞菌或修饰的活劳氏内细胞菌。

在本发明的一个方面中，所述死的劳氏内细胞菌为死的全细胞劳氏内细胞菌。

劳氏内细胞菌死疫苗已描述于WO2009144088 A2、WO97/20050A1及WO2002/26250A2中。

任何传统灭活方法均可用于本发明的目的。因此，灭活可通过本领域技术人员已知的化学和/或物理处理进行。优选的灭活方法包括添加环化二元乙烯亚胺(cyclizedbinary ethylenimine，BEI)，包括添加已环化为二元乙烯亚胺(BEI)的2-溴伸乙基胺氢溴酸盐(BEA)溶液。优选的其他化学灭活试剂包含但不限于Triton X-100、脱氧胆酸钠、溴化十六烷基三甲基铵、β-丙内酯、硫柳汞、酚及甲醛(福尔马林(Formalin))。然而，灭活也可包含中和步骤。优选的中和剂包括但不限于硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠及类似物。

优选的福尔马林灭活条件包括福尔马林浓度为约0.02％(v/v)至2.0％(v/v)，更优选为约0.1％(v/v)至1.0％(v/v)，也更优选为约0.15％(v/v)至0.8％(v/v)，甚至更优选为约0.16％(v/v)至0.6％(v/v)，且最优选为约0.2(v/v)至0.4％(v/v)。孵育时间视病原体的抗性而定。一般而言，进行灭活过程，直至在适合培养系统中未检测到病原体生长为止。

优选地，灭活的劳氏内细胞菌为福尔马林灭活的，优选地使用如上文所描述的浓度。

优选地β-丙内酯灭活条件包括约0.005％(v/v)至4.0％(v/v)且更优选约0.05％(v/v)至2.0％(v/v)之间的β-丙内酯浓度。孵育时间视病原体的抗性而定。一般而言，进行灭活过程，直至在适合培养系统中未检测到病原体生长为止。

优选地，灭活的劳氏内细胞菌通过β-丙内酯灭活，优选地使用如上文所描述的浓度。

优选地，免疫原性组合物包含每剂量10²至10¹⁴个死的劳氏内细胞菌的细胞，更优选为每剂量10⁴至10¹²个死的劳氏内细胞菌的细胞，且甚至更优选为每剂量10⁶至10¹⁰个死的劳氏内细胞菌的细胞。

优选地，免疫原性组合物包含每剂量25至2000μg死的劳氏内细胞菌的量，更优选为每剂量50至1000μg死的劳氏内细胞菌的量，且甚至更优选为每剂量100至800μg死的劳氏内细胞菌的量。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物包含每剂量10⁶至10¹⁰个死的劳氏内细胞菌的细胞或每剂量100至800μg死的劳氏内细胞菌的量。

在本发明的一个方面中，劳氏内细胞菌抗原为修饰的活劳氏内细胞菌。

在本发明的一个方面中，劳氏内细胞菌抗原为劳氏内细胞菌的无毒分离株或减毒的劳氏内细胞菌。

术语“减毒的”指病原体的毒性减少。在本发明中，“减毒”与“无毒”或“修饰的活的”同义。在本发明中，减毒的动物病原体(诸如劳氏内细胞菌或沙门氏菌属)不仅为毒性已减小、从而不引起动物病原体感染(诸如劳氏内细胞菌或沙门氏菌属)的临床症状但能够诱发目标动物的免疫反应的动物病原体，而且可意谓与感染非减毒的动物病原体且不接受减毒的细菌的动物“对照组”相比，感染减毒的动物病原体的动物的临床症状发病率或严重程度降低。在本文中，术语“降低(reduce/reduced)”意谓与如上文所定义的对照组相比，降低至少10％、优选25％、甚至更优选50％、还更优选60％、甚至更优选70％、还更优选80％、还更优选90％、甚至更优选95％且最优选100％。因此，减毒的、无毒动物病原体菌株或分离株为适于并入包含修饰的活动物病原体的免疫原性组合物中的病原体菌株或分离株。

劳氏内细胞菌的病原性及非病原性减毒的细菌菌株于先前技术中已熟知。举例而言，WO 96/39629及WO 05/011731描述劳氏内细胞菌的非病原性减毒的菌株及其制备方法。

具体而言，WO 96/39629描述劳氏内细胞菌的减毒的细菌菌株及所保藏的菌株ATCC 55783的制备。

WO 05/011731描述劳氏内细胞菌的减毒的细菌菌株及所保藏的菌株PTA-4926的制备。

在本发明的一个方面中，无毒分离株为PTA-4926或ATCC 55783。

在本发明的一个方面中，劳氏内细胞菌抗原或无毒劳氏内细胞菌分离株或减毒的劳氏内细胞菌为Ileitis中的抗原或分离株。一般而言，向三周龄或大于三周龄的猪施用Ileitis。

向易感动物施用的建议剂量优选为约3.0TCID₅₀(组织培养感染性剂量50％端点)/剂量至约9.0TCID50/剂量，且更优选为约4.0TCID50/剂量至约7.0TCID50/剂量。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物包含每剂量约3.0至约9.0TCID₅₀的修饰的活劳氏内细胞菌。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物包含每剂量约4.0至约7.0TCID₅₀的修饰的活劳氏内细胞菌。

如本文所用，术语“每剂量”意谓此为每只动物的剂量。然而，若免疫原性凝胶组合物施用畜棚或饲养环境中的若干动物，则免疫原性凝胶组合物包含若干剂量。因此，若畜棚有例如10只动物待接种疫苗，则免疫原性组合物将必须包含10次剂量。优选地，免疫原性凝胶组合物将甚至具有较高数目的剂量，诸如11、12或15或20次剂量，以确保每只动物将接受适当剂量。

沙门氏菌属抗原

术语“沙门氏菌属”为本领域技术人员已知。猪霍乱沙门氏菌(SalmonellaCholeraesuis；SC)及肠沙门氏菌鼠伤寒血清型(Salmonella enterica ser Typhimurium；ST)已鉴别为生长猪或肥育猪的肠炎及亚临床生产损失的主要原因。猪的临床沙门氏杆菌病(salmonellosis)可广泛地分成由猪霍乱沙门氏菌引起的败血症及与鼠伤寒沙门氏菌相关的小肠结肠炎。

在本发明的一个方面中，沙门氏菌属抗原为死沙门氏菌属或修饰的活沙门氏菌属。

在本发明的一个方面中，所述沙门氏菌属为猪霍乱沙门氏菌和/或鼠伤寒沙门氏菌。

在本发明的一个方面中，所述沙门氏菌属为肠沙门氏菌肠亚种猪霍乱血清型和/或肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型。

在本发明的一个方面中，死沙门氏菌属为死的全细胞沙门氏菌属。

传统灭活方法如上文所定义。

在本发明的一个方面中，沙门氏菌属为死的全细胞沙门氏菌属。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物包含每剂量10⁶至10¹⁰个死的沙门氏菌属的细胞或每剂量100至800μg死的沙门氏菌属的量。

在本发明的一个方面中，沙门氏菌属抗原为修饰的活沙门氏菌属。

在本发明的一个方面中，沙门氏菌属抗原为沙门氏菌属的无毒分离株或减毒的沙门氏菌属。

术语“减毒的”如上文所定义。

猪霍乱沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌的非病原性减毒的细菌菌株在先前技术中已熟知。

猪霍乱沙门氏菌菌株已描述于US 5,436,001及US 5,580,557中。此外，猪霍乱沙门氏菌的无毒活菌培养物(ENTERISOLBoehringer Ingelheim Vetmedica,Inc.)可商购。

鼠伤寒沙门氏菌分离株包括德国Impfstoffwerk Dessau-Tornau(IDT)的鼠伤寒沙门氏菌421/125。此分离株用作SALMOPORC的活性成分，SALMOPORC为活沙门氏菌疫苗，由欧洲IDT Biologika GmbH出售。本发明的优选ST描述于DE2843295及其等效案US 3,856,935中，两者均以引用的方式并入。

此外，可商购猪霍乱-鼠伤寒沙门氏菌活疫苗(沙门氏菌属T/C)，其包含猪霍乱沙门菌与鼠伤寒沙门氏菌两者。

在本发明的一个方面中，沙门氏菌属抗原或无毒猪霍乱沙门氏菌和/或鼠伤寒沙门氏菌分离株为以下各者中的抗原或分离株：ENTERISOL和/或SALMOPORC和/或沙门氏菌属T/C。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物每剂量包含约1×10³至约1×10¹²CFU沙门氏菌属。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物包含每剂量约1×10⁵至约1×10¹⁰CFU沙门氏菌属。

凝胶组合物

在本发明的一个方面中，凝胶组合物为粘稠的。

在本发明的一些方面中，凝胶组合物的粘度为至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800cPs(mPa·s)或更高。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物的粘度为至少150mPa·s(至少150cP)。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物的粘度为至少100mPa·s(至少100cP)。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物的粘度为至少50mPa·s或至少50cP。在本发明的另一方面中，凝胶组合物的粘度在50cP(50mPa·s)与150cP(150mPa·s)之间。在本发明的又一方面中，凝胶组合物的粘度在50cP(50mPa·s)与350cP(350mPa·s)之间。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物的粘度为至少25mPa·s或至少25cP。在本发明的另一方面中，凝胶组合物的粘度在25cP(25mPa·s)与150cP(150mPa·s)之间。在本发明的另一方面中，凝胶组合物的粘度在25cP(25mPa·s)与350cP(350mPa·s)之间。

粘度测量单位为Pa·s(帕斯卡秒(pascal second))或mPa·s(毫帕斯卡秒)。传统测量单位为cP(厘泊)。一厘泊为一毫帕斯卡-秒(1cP＝10^-3Pa·s＝1mPa·s)。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物包含水和/或粘着力增强剂和/或pH调节剂和/或稳定剂。

在本发明的一些方面中，包含粘着力增强剂的组合物为粘稠的。

在一个方面中，粘着力增强剂为聚乙烯吡咯啶酮。在其他方面中，粘着力增强剂为亲水性聚合物或共聚物，其为线性的或分支的、交联的，是不可生物降解的，或选自由以下组成的群：黄原胶、瓜尔胶(guar)、果胶、树胶、瓜尔胶衍生物、壳聚糖、葡萄聚糖、麦芽糊精、角叉菜胶、淀粉、聚乙二醇、白蛋白、纤维素醚、玻尿酸、羧甲基羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、明胶、乙酸乙烯酯、聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物、聚乙烯醇、聚磷酸酯、N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)共聚物、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚恶唑啉(polyoxazoline)、二乙烯醚-马来酸酐、聚磷腈，包括前述任一者的衍生物及取代及盐，及其组合。在另一方面中，粘着力增强剂为纤维素，包括羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、羟乙基纤维素(HEC)及羧甲基纤维素(CMC)及其盐中的一或多者。

在一些方面中，粘着力增强剂的最终浓度(w/v)为约0.1％、0.2％、03％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、或49％或其间任何范围，包括例如约0.5％至15％w/v、约0.5％至10％w/v、约0.5％至5％w/v、约0.5％至2％w/v。

在一个方面中，粘着力增强剂的最终浓度(w/v)为约0.5％至15％w/v。

在一些方面中，粘着力增强剂为线性的或分支的、交联的和/或不可生物降解的亲水性聚合物或共聚物。适合的粘着力增强剂包括聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯吡咯啶酮乙酸乙烯酯共聚物、蜡、矿物油、塑性胶(plastigel)(矿物油及聚乙烯的掺合物)、凡士林、白凡士林、虫胶、白油胶(versagel)(液体石蜡、丁烯乙烯/苯乙烯氢化共聚物的掺合物)、聚乙烯蜡、微晶蜡、聚异丁烯、聚乙烯吡咯啶酮乙酸乙烯酯共聚物、及不溶聚丙烯酸酯共聚物、黄原胶、瓜尔胶、果胶、树胶、瓜尔胶衍生物、壳聚糖、葡萄聚糖、麦芽糊精、角叉菜胶、淀粉、聚乙二醇、白蛋白、纤维素醚、玻尿酸、羧甲基羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、明胶、乙酸乙烯酯、聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物、聚乙烯醇、聚磷酸酯、N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)共聚物、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚恶唑啉、二乙烯醚-马来酸酐、聚磷腈，包括衍生物及取代，及其组合。

优选地，粘着力增强剂为麦芽糊精和/或纤维素和/或淀粉和/或树胶。

在一个方面中，粘着力增强剂是基于淀粉或纤维素的。

典型地添加“pH调节剂”以使组合物的pH达到所需值。期望的pH值在约6至约8之间。因此，所描述的本发明的组合物可调配成具有在约6与约8之间，或约6.5与约7.5之间的范围内的pH值。适合的pH调节剂包括但不限于一或多种己二酸、甘氨酸、柠檬酸、氢氧化钙、硅酸镁铝、磷酸二钠、磷酸钠、磷酸钾、氯化钾、柠檬酸钠、乳酸钙、琥珀酸钠、谷氨酸钠、碳酸氢钠及碳酸氢钾及其组合。

如本文所用，“稳定剂”为有助于组合物中活性剂稳定的试剂。稳定剂包括但不限于还原剂。可使用的稳定剂包括硫代硫酸钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、二氧化硫、亚硫酸氢铵及硫代硫酸铵。硫代硫酸钠是优选的，因为其具有高中和能力且视为安全且非腐蚀性的。

术语“稳定剂”也涵盖螯合剂。任选地将螯合剂添加至所描述本发明的组合物中以增强防腐剂或防腐剂系统。优选的螯合剂为温和试剂，诸如乙二胺四乙酸(EDTA)、EDTA衍生物或其任何组合。

用于本发明组合物的组合物中的稳定剂或防腐剂包括但不限于一或多种烷醇、EDTA二钠(乙二胺四乙酸盐)、EDTA盐、EDTA脂肪酸缀合物、异噻唑啉酮、对羟基苯甲酸酯(诸如对羟基苯甲酸甲酯及对羟基苯甲酸丙酯)、丙二醇、山梨酸酯、脲衍生物(诸如重氮烷基脲)或其任何组合。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物包含水、粘着力增强剂及稳定剂。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物包含水、粘着力增强剂及稳定剂及pH调节剂。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物进一步包含调味剂和/或着色剂。

术语“着色剂”也可用于所描述的本发明组合物中以向猪崽提供视觉提示和/或动物照护者提供组合物的呈递、均匀施用且适当附着的视觉验证。着色剂为本领域技术人员所熟知且包括颜料或染料或其组合。适合着色剂包括但不限于FD&C着色剂，诸如：FD&C蓝1号、FD&C蓝2号、FD&C绿3号、橙色B、FD&C橘红2号、FD&C红2号、FD&C红3号、FD&C红40号、FD&C黄5号及FD&C黄6号。

如本文所用，术语“调味剂”指改善动物或猪的适口性和/或味道的一或多种化合物或混合物。调味剂为本领域技术人员所熟知。调味剂包括但不限于营养及非营养甜味剂、风味添加剂、副产物及替代成分。举例而言，适合的调味剂包括但不限于蔗糖、葡萄糖、糖精钠(sodium saccharin)、环己基胺基磺酸钠(sodium cyclamate)、木糖醇、紫苏精(perillartien)、蔗糖素、D-色氨酸、阿斯巴甜(aspartame)、二氢查耳酮(dihydrochalcone)及其类似物、人造水果调味剂(例如草莓调味剂)、血浆蛋白质(例如经喷雾干燥的血浆蛋白质)、奶酪及类奶酪调味剂、乳粉、巧克力及巧克力副产物。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物包含水、麦芽糊精、纤维素、树胶及稳定剂，优选稳定剂为丙二醇。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物包含水、麦芽糊精、半纤维素提取物、阿拉伯树胶及丙二醇。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物包含水、麦芽糊精、半纤维素提取物、水稳定化合物、阿拉伯树胶、丙二醇及人造染色剂。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物进一步包含兽医学上可接受的载剂。

在本发明的一个方面中，兽医学上可接受的载剂为稀释剂。

“稀释剂”可包括水、生理盐水、右旋糖、乙醇、甘油及其类似物。等渗剂可包括氯化钠、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇及乳糖等。稳定剂包括白蛋白及乙二胺四乙酸的碱金属盐等。

在本发明的一个方面中，兽医学上可接受的载剂为生理缓冲液。

在本发明的一个方面中，药学上可接受的载剂为磷酸盐缓冲盐水。

优选地，免疫原性组合物进一步包含蔗糖明胶稳定剂。

优选地，免疫原性组合物可进一步包括一或多种其他免疫调节剂，诸如白介素、干扰素或其他细胞因子。用于本发明的上下文中的佐剂及添加剂的量及浓度可容易地由本领域技术人员确定。

在本发明的一个方面中，所述兽医学上可接受的载剂选自由以下组成的群：溶剂、分散介质、包衣剂、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗剂、吸收延迟剂、佐剂、免疫刺激剂及其组合。

在一些方面中，本发明的免疫原性组合物含有佐剂。如本文所用，“佐剂”可包括氢氧化铝及磷酸铝、皂苷，例如Quil A、QS-21(Cambridge Biotech Inc.,Cambridge MA)、GPI-0100(Galenica Pharmaceuticals,Inc.,Birmingham,AL)、油包水乳液、水包油乳液、水包油包水乳液。乳液可特别地基于轻质液体石蜡油(欧洲药典(European Pharmacopea)类型)；诸如鲨烷或鲨烯的类异戊二烯油；由烯烃、特别是异丁烯或癸烯寡聚产生的油；包含直链烷基的酸或醇的酯，更具体地，植物油、油酸乙酯、丙二醇二-(辛酸酯/癸酸酯)、甘油基三-(辛酸酯/癸酸酯)或丙二醇二油酸酯；分支链脂肪酸或醇的酯，特别是异硬脂酸酯。油与乳化剂组合使用以形成乳液。乳化剂优选为非离子表面活性剂，特别是山梨聚糖的酯、二缩甘露醇(例如，无水甘露糖醇油酸酯)的酯、乙二醇的酯、聚丙三醇的酯、丙二醇的酯与油酸的酯、异硬脂酸的酯、蓖麻油酸的酯或羟基硬脂酸的酯，所述酯任选地经乙氧基化；以及聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物嵌段，特别是普洛尼克(Pluronic)产品，尤其L121。参见Hunter等人,The Theory and Practical Application of Adjuvants(编者Stewart-Tull,D.E.S.),JohnWiley and Sons,NY,第51-94页(1995)，及Todd等人,Vaccine15:564-570(1997)。示例性佐剂为“Vaccine Design,The Subunit and Adjuvant Approach”,M.Powell及M.Newman编,Plenum Press,1995的第147页上描述的SPT乳液，及此同一本书第183页上描述的乳液MF59。

佐剂的另一实例为选自丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物及顺丁烯二酸酐与烯基衍生物的共聚物的化合物。有利佐剂化合物为丙烯酸或甲基丙烯酸(尤其是与糖或多元醇的聚烯基醚交联的)的聚合物。这些化合物以术语卡波姆(carbomer)著称(Phameuropa第8卷,第2期,1996年6月)。本领域技术人员也可参考美国专利第2,909,462号，其描述与具有至少3个羟基、优选不超过8个羟基的聚羟基化合物交联的此类丙烯酸类聚合物，至少三个羟基的氢原子经具有至少2个碳原子的不饱和脂族基团置换。优选的基团为包含2至4个碳原子的基团，例如乙烯基、烯丙基及其他烯系不饱和基团。不饱和基团自身可包含诸如甲基的其他取代基。以名称卡波普(Carbopol)销售的产品(BF Goodrich,Ohio,USA)尤其适合。其与烯丙基蔗糖或烯丙基季戊四醇交联。其中，可提及卡波普974P、934P及971P。最优选为使用卡波普971P。在顺丁烯二酸酐与烯基衍生物的共聚物中为共聚物EMA(Monsanto)，其为顺丁烯二酸酐与乙烯的共聚物。这些聚合物溶解于水中产生酸溶液，优选地将所述酸溶液中和至生理pH，以便得到并有免疫原性的、免疫的或疫苗组合物本身的佐剂溶液。

另外的合适佐剂包括但不限于RIBI佐剂系统(Ribi Inc.)、Block共聚物(CytRx,Atlanta GA)、SAF-M(Chiron,Emeryville CA)、单磷酰基脂质A、阿夫啶(Avridine)脂质胺佐剂、来自大肠杆菌(E.coli)的不耐热肠毒素(重组或以其他方式)、霍乱毒素、IMS1314或胞壁酰二肽或天然存在的细胞因子或重组细胞因子或其类似物或内源性细胞因子释放刺激剂等。

预期佐剂可以每剂量约100μg至约10mg的量，优选每剂量约100μg至约10mg的量，更优选每剂量约500μg至约5mg的量，甚至更优选每剂量约750μg至约2.5mg的量且最优选每剂量约1mg的量添加。或者，以最终产物的体积计，佐剂可在约0.01％至50％的浓度下、优选在约2％至30％的浓度下、更优选在约5％至25％的浓度下、还更优选在约7％至22％的浓度下且最优选在10％至20％的浓度下。

在本发明的一个方面中，所述兽医学上可接受的载剂为选自由以下组成的群的佐剂：氢氧化铝、磷酸铝、皂苷、油包水乳液、水包油乳液、水包油包水乳液、丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐与烯基衍生物的共聚物、RIBI佐剂系统、Block共聚物、SAF-M、单磷酰基脂质A、阿夫啶脂质胺、来自大肠杆菌的不耐热肠毒素(重组或以其他方式)、霍乱毒素、IMS1314、胞壁酰二肽及其组合。

在本发明的一个方面中，所述兽医学上可接受的载剂为水包油包水乳液或卡波姆。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物为疫苗凝胶组合物。

所主张的治疗方法

此外，本发明提供一种使动物免疫的方法，其包含向所述动物施用治疗有效量的包含动物病原体抗原及用于口服施用的凝胶组合物的免疫原性凝胶组合物。

因此，本发明提供一种包含动物病原体抗原及用于口服施用的凝胶组合物的免疫原性凝胶组合物，其用于使动物免疫的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的所述免疫原性凝胶组合物。

此外，本发明提供一种在动物中治疗或预防由动物病原体引起的临床症状的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的包含动物病原体抗原及用于口服施用的凝胶组合物的免疫原性凝胶组合物。

因此，本发明提供一种包含动物病原体抗原及用于口服施用的凝胶组合物的免疫原性凝胶组合物，其用于在动物中治疗或预防由动物病原体引起的临床症状的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的所述免疫原性凝胶组合物。

此外，本发明提供一种使动物免疫的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的如本文所描述的免疫原性凝胶组合物。

因此，本发明提供一种如本文所描述的免疫原性凝胶组合物，其用于使动物免疫的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的所述免疫原性凝胶组合物。

此外，本发明提供一种在动物中治疗或预防由劳氏内细胞菌和/或沙门氏菌属所致的临床症状的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的如本文所描述的免疫原性凝胶组合物。

因此，本发明提供如本文所描述的免疫原性凝胶组合物，其用于在动物中治疗或预防由劳氏内细胞菌和/或沙门氏菌属所致的临床症状的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的所述免疫原性凝胶组合物。

此外，本发明提供一种用于在动物中减少肠中的病变(相比于相同物种的非免疫对照组动物)的方法，所述方法包含向所述动物施用有效量的如本文所描述的免疫原性凝胶组合物。

因此，本发明提供一种如本文所描述的免疫原性凝胶组合物，其用于与相同物种的非免疫对照组动物相比，在动物中减少肠中的病变的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的所述免疫原性凝胶组合物。

此外，本发明提供一种增加动物的平均日体重增量(与相同物种的非免疫对照组动物相比)的方法，所述方法包含向所述动物施用有效量的免疫原性凝胶组合物。

因此，本发明提供一种如本文所描述的免疫原性凝胶组合物，其用于增加动物的平均日体重增量的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的所述免疫原性凝胶组合物。

有利地，本文提供的实验数据公开动物食用疫苗凝胶组合物。凝胶疫苗组合物中的沙门氏菌属及劳氏内细胞菌活菌抗原的摄取甚至优于口服施用的传统经口灌服方法。此外，疫苗凝胶组合物与传统应用方法一样有效。

然而，有利地，动物在未用药窗(哺乳期期间)内较早的时间接种疫苗，以避免或减少对单个猪的操作、减少劳动力及减少动物压力。

术语“预防”通常涉及向有需要或可得益于这样的治疗/防治的动物或动物群施用有效量的本发明的免疫原性凝胶组合物。术语“治疗”指一旦动物或畜群中的至少一些动物已感染这样的病原体且其中这样的动物已展示由此类动物病原体感染造成或与这样的动物病原体感染相关的一些临床症状，则施用有效量的免疫原性组合物。术语“防治”指在动物病原体感染这样的动物之前或至少在这样的动物或动物群组中无动物未展示由这样的动物病原体的感染引起或与这样的动物病原体的感染相关的任何临床症状的情况下，施用动物。术语“预防”及“治疗和/或防治”在本申请中可互换使用。

如本文所用，在组合物的上下文中，术语“有效量”意谓免疫原性凝胶组合物在动物中能够诱发免疫反应、从而减少感染发生率或减轻感染严重程度或减少疾病发生率的量。这样的有效量能够减少畜群中特定动物病原体感染发生率或降低特定动物病原体感染的临床症状的严重程度。具体地，有效量指每剂量的TCID₅₀。或者，在疗法的上下文中，术语“有效量”指疗法的一种量，其足以降低或减轻疾病或病症或其一或多种症状的严重程度或持续时间，阻止疾病或病症推进，引起疾病或病症消退，防止与疾病或病症相关的一或多种症状复发、发展、发作或恶化，或增强或改善另一疗法或治疗剂的预防或治疗。

如本文所用的劳氏内细胞菌感染的术语“临床症状”包括但不限于：平均日体重增量(average daily weight gain；ADWG)降低、体重增量的可变性增加、饲料转化比率增加、回肠和/或空肠和/或盲肠和/或结肠的剖检病变、腹泻、死亡、可检测细菌负荷、劳氏内细胞菌的排出或其组合。

如本文所用的沙门氏菌属感染的术语“临床症状”包括但不限于：平均日体重增量(ADWG)降低、体重增量可变性增加、饲料转化比率增加、回肠和/或空肠和/或盲肠和/或结肠的剖检病变、腹泻、身体病况恶化、抑郁或昏睡行为、可检测细菌负荷、沙门氏菌属的排出或其组合。

优选地，与未治疗或用在本发明之前可获得的免疫原性组合物治疗但随后被特定动物病原体感染的动物相比，临床症状发生率或严重程度降低至少10％、更优选至少20％、再更优选至少30％、甚至更优选至少40％、再更优选至少50％、甚至更优选至少60％、再更优选至少70％、甚至更优选至少80％、再更优选至少90％、再更优选至少95％且最优选100％。在本文中，“降低临床症状发生率和/或严重程度”或“减少临床症状”意谓但不限于与野生型感染相比，减少一组中感染动物的数目、减少或消除展现感染临床症状的动物的数目、或降低一或多个动物中存在的任何临床症状的严重程度。

在本发明的一个方面中，动物病原体为猪、马或牛病原体。

在本发明的一个方面中，动物病原体为细菌性猪或牛病原体。

在本发明的一个方面中，动物病原体为肠道致病细菌或粘膜致病细菌。

肠道致病细菌或粘膜致病细菌为本领域中所熟知且示例性地涵盖沙门氏菌属、大肠杆菌、劳氏内细胞菌及短螺旋菌属(Brachyspira spp.)。

在本发明的一个方面中，动物病原体为沙门氏菌属、大肠杆菌、劳氏内细胞菌、短螺旋菌属或梭菌属(Clostridium.spp.)。

在本发明的一个方面中，动物病原体的所述抗原为粘膜或肠道活性抗原或粘膜或肠道活性活免疫原性组合物或粘膜或肠道活性活疫苗。

术语“粘膜或肠道活性抗原”意谓所述抗原将在粘膜和/或上皮细胞和/或肠上皮细胞中引起免疫反应或将活化粘膜或胃肠道免疫系统。

在本发明的一个方面中，动物病原体的所述抗原为来自猪科动物或牛的粘膜或肠道活性抗原。

术语“动物”优选地指哺乳动物，诸如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、仓鼠、猪科动物、绵羊、狗、猫、马、猴或牛。动物更优选为猪。

必须理解，术语“猪(pig)”或“猪科动物(swine)”包含猪崽、母猪、小母猪、公猪及类似者。

在本发明的一个方面中，动物为猪科动物、马或牛。

在本发明的一个方面中，动物为猪、猪崽、母猪或猪科动物。

在本发明的一个方面中，动物为新生猪或断奶之前的猪崽。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物向一日龄以上、三日龄以上或一周龄以上或两周龄以上或三周龄以上的动物施用。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物向一日龄以上、三日龄以上或一周龄以上或两周龄以上的动物施用。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物向在一周龄与三周龄之间的动物施用。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物向在6日龄与20日龄之间的动物施用。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物向在8日龄与18日龄之间或在10日龄与16日龄之间的动物施用。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物进一步包含兽医学上可接受的载剂。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物以一次或两次剂量施用。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物以多次剂量施用。

此外，已展示施用一次剂量的本发明免疫原性凝胶组合物为有效的。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物通过口服和/或粘膜途径施用。

如本文所用的术语“施用(administering/administration)”意谓免疫原性凝胶组合物间接施用至动物。免疫原性凝胶组合物直接应用在畜棚或饲养环境内某处，以允许所述动物食用所述免疫原性凝胶组合物。免疫原性凝胶组合物也可应用于母体动物，以允许所述动物食用所述免疫原性凝胶组合物。通过此方法有利地使动物在未用药窗(哺乳期期间)内较早时间接种疫苗，以避免或减少对单个猪的操作、减少劳动力及减少动物压力。

优选地，使用施药枪或灌服枪。优选地，使用60ml或120ml或更大施药枪或灌服枪。使用此类施药枪或灌服枪能够容易地将规定量的免疫原性凝胶组合物应用于动物(诸如腹线(underline))或应用于畜棚(诸如应用至垫上)。

在本发明的一个方面中，所述方法包含在畜棚或饲养环境内应用免疫原性凝胶组合物，以允许所述动物食用所述免疫原性凝胶组合物。

必须理解，免疫原性凝胶组合物可置放于允许所述动物食用所述免疫原性凝胶组合物的动物环境或畜棚内中的任何位置。

在本发明的一个方面中，所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物应用至母体动物的腹线或母体动物的乳房、应用至畜棚内的垫上或畜棚内的杯或器皿中。

优选地，免疫原性凝胶组合物应用至垫上。将免疫原性凝胶组合物应用至垫上是有利的，因为操作容易且快速，没有对单个猪的操作，减少劳动力且减少动物压力。

在本发明的一个方面中，所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物应用至畜棚内的垫上。

在本发明的一个方面中，所述方法包含将免疫原性凝胶组合物局部应用于母体动物及允许新生动物或断奶前动物食用所述免疫原性凝胶组合物。

在本发明的一个方面中，所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物局部应用于母体动物的腹线，或其中所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物局部应用于母体动物的至少一个乳头。

在本发明的一个方面中，母体动物为母猪。

在本发明的一个方面中，新生动物为新生猪崽。

在本发明的一个方面中，断奶前动物为断奶前的猪崽。

在本发明的一个方面中，相较于相同物种的非免疫对照组动物，所述方法使得功效参数得到改善，所述功效参数选自由以下组成的群：体重损失减少、细菌负荷降低、肠病变减少、结肠病变减少、回肠和/或空肠病变减少、排出减少、腹泻减少或其组合。

优选地，所述病变意谓宏观和/或微观病变。

术语“降低(reducing/reduction)”意谓相较于相同物种的非免疫对照组动物，特定临床症状的发生率和/或严重程度降低至少10％、优选至少20％、更优选至少30％、甚至更优选至少40％、甚至更优选至少50％、甚至更优选至少60％、甚至更优选至少70％、甚至更优选至少80％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％且最优选100％。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物为疫苗凝胶组合物。

在本发明的一个方面中，免疫原性凝胶组合物进一步包含兽医学上可接受的载剂。

在本发明的一个方面中，凝胶组合物为如本文所描述的凝胶组合物。

此外，本发明提供一种包含如本文所描述的凝胶组合物的垫。

公开内容

本公开进一步包含：

一种免疫原性凝胶组合物，其包含劳氏内细胞菌抗原和/或沙门氏菌属抗原及适于口服施用的凝胶组合物。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述劳氏内细胞菌抗原和/或沙门氏菌属抗原为全细胞细菌。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述劳氏内细胞菌抗原为修饰的活劳氏内细胞菌。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述劳氏内细胞菌抗原为劳氏内细胞菌的无毒分离株或减毒的劳氏内细胞菌。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述免疫原性凝胶组合物包含每剂量约3.0至约9.0TCID₅₀的修饰的活劳氏内细胞菌。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述沙门氏菌属抗原为修饰的活沙门氏菌属。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述沙门氏菌属为猪霍乱沙门氏菌和/或鼠伤寒沙门氏菌。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述沙门氏菌属为肠沙门氏菌肠亚种猪霍乱血清型和/或肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述免疫原性凝胶组合物包含每剂量约1×10⁵至约1×10¹⁰CFU的沙门氏菌属。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述凝胶组合物为粘稠的或具有至少50mPa·s或至少50cP的粘度。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述凝胶组合物包含水和/或粘着力增强剂和/或pH调节剂和/或稳定剂。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述凝胶组合物包含水、粘着力增强剂及稳定剂。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述凝胶组合物进一步包含调味剂和/或着色剂。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述凝胶组合物包含水、麦芽糊精、纤维素、树胶及稳定剂，所述稳定剂优选地是丙二醇。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述凝胶组合物包含水、麦芽糊精、半纤维素提取物、阿拉伯树胶及丙二醇。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述凝胶组合物包含水、麦芽糊精、半纤维素提取物、水稳定化合物、阿拉伯树胶、丙二醇及人造染色剂。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述免疫原性凝胶组合物进一步包含兽医学上可接受的载剂。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述免疫原性凝胶组合物为疫苗凝胶组合物。

在免疫原性凝胶组合物的前述公开内容中的任一者中，所述

本公开进一步包含：

一种使动物免疫的方法，其包含向所述动物施用治疗有效量的包含动物病原体抗原及用于口服施用的凝胶组合物的免疫原性凝胶组合物。

本公开进一步包含：

一种在动物中治疗或预防由动物病原体引起的临床症状的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的包含动物病原体抗原及用于口服施用的凝胶组合物的免疫原性凝胶组合物。

本公开进一步包含：

一种使动物免疫的方法，其包含向所述动物施用治疗有效量的如本文所描述的免疫原性凝胶组合物。

本公开进一步包含：

一种在动物中治疗或预防由劳氏内细胞菌和/或沙门氏菌属引起的临床症状的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的如本文所描述的免疫原性凝胶组合物。

本公开进一步包含：

一种与相同物种的非免疫对照组动物相比，在动物中减少肠中的病变的方法，其包含向所述动物施用有效量的如本文所描述的免疫原性凝胶组合物。

本公开进一步包含：

一种与相同物种的非免疫对照组动物相比，增加动物的平均日体重增量的方法，其包含向所述动物施用有效量的如本文所描述的免疫原性凝胶组合物。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述动物病原体为猪、马或牛病原体。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述动物病原体为猪或牛细菌性病原体。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述动物病原体为肠道致病细菌或粘膜致病细菌。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，动物病原体的所述抗原为粘膜或肠道活性抗原或粘膜或肠道活性活免疫原性组合物或粘膜或肠道活性活疫苗。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述动物为猪科动物、马或牛。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述动物为猪、猪崽、母猪或猪科动物。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述动物为新生猪或断奶之前的猪崽。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述免疫原性凝胶组合物向一日龄以上、三日龄以上或一周龄以上或二周龄以上或三周龄以上的动物施用，或其中所述免疫原性凝胶组合物向在6日龄至20日龄之间的动物施用。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述免疫原性凝胶组合物进一步包含兽医学上可接受的载剂。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述免疫原性凝胶组合物以一次或两次剂量施用。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述免疫原性凝胶组合物通过口服和/或粘膜途径施用。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述方法包含在畜棚或饲养环境内应用免疫原性凝胶组合物，以允许所述动物食用所述免疫原性凝胶组合物。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物应用至母体动物的腹线或母体动物的乳房、施用至畜棚内的垫上或畜棚内的杯或器皿中。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物应用至畜棚内的垫上。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述方法包含将免疫原性凝胶组合物局部应用于母体动物及允许出生后动物或断奶前动物食用所述免疫原性凝胶组合物。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物局部应用于母体动物的腹线，或其中所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物局部施用于母体动物的至少一个乳头。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述母体动物为母猪和/或出生后动物为出生后猪崽和/或所述断奶前动物为断奶前的猪崽。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，相较于相同物种的非免疫对照组个体，所述方法使得功效参数得到改善，所述功效参数选自由以下组成的群：体重损失减少、细菌负荷降低、肠病变减少、结肠病变减少、盲肠病变减少、回肠和/或空肠病变减少、排出减少、腹泻减少或其组合。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述免疫原性凝胶组合物为疫苗凝胶组合物。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述免疫原性凝胶组合物进一步包含兽医学上可接受的载剂。

在所述方法的前述公开内容中的任一者中，所述凝胶组合物为如本文所描述的凝胶组合物。

本公开进一步包含：

一种垫，其包含如本文所描述的凝胶组合物。

实施例

以下实施例仅意欲说明本发明。其不应以任何方式限制权利要求的范畴。

实施例1

通过评估以不同形式施用MLV劳氏内细胞菌或沙门氏菌属之后的疫苗排出来评估凝胶疫苗吸收

此研究的目标为评估凝胶制剂中所提供的口服疫苗在应用于饲养环境的不同位置时是否被动物有效吸收及其与通过经口灌服进行的传统口服施用方法相比如何。

将Ileitis(市购的劳氏内细胞菌活疫苗)与凝胶组合物(凝胶可市购且包含水、麦芽糊精、丙二醇、半纤维素提取物，然而，其他凝胶组合物也是适合的)混合。

治疗组(40只猪/组)：

第1组：Ileitis以凝胶应用于母猪乳房上。

第2组：Ileitis以凝胶应用于杯中。

第3组：Ileitis以凝胶应用至垫上。

第4组：Ileitis通过经口灌服应用。

第5组：未接种疫苗的阴性对照组。

因为Ileitis为口服MLV(修饰的活疫苗)劳森菌疫苗，劳森菌细菌经由粪便排出。通过利用定量PCR测量接种疫苗的猪的粪便中的劳氏内细胞菌排出来评估疫苗吸收功效，定量PCR为本领域中的标准程序。

表1

在另一实验中，测试另一种口服MLV(修饰的活毒疫苗)的凝胶施用。将沙门氏菌属T/C(T/C)(市购的沙门氏菌属活疫苗)与凝胶组合物(凝胶，可购自Animal Science Products,Inc.Nacogdoches,TX)混合。经由凝胶或经由经口灌服提供疫苗，且通过测量粪便中的沙门氏菌属细菌排出来评估疫苗吸收功效。

治疗组(24只猪/组)：

第1组：未接种疫苗的阴性对照组。

第2组：沙门氏菌属T/C以凝胶应用至垫上。

第3组：沙门氏菌属T/C通过经口灌服应用。

表2

结论：

以凝胶制剂施用的口服疫苗被动物有效吸收。

在凝胶组合物中施用的MLV劳氏内细胞菌或MLV沙门氏菌属的吸收令人惊讶地甚至高于标准经口灌服施用。

实施例2

使用劳氏内细胞菌攻击来评估通过凝胶口服施用的MLV劳氏内细胞菌功效

此研究的目标在于评估凝胶组合物作为口服施用Enterisol疫苗的手段的有效性。为验证此方法，通过实验攻击来评估经由凝胶口服施用时的疫苗功效。将Ileitis(市购的劳氏内细胞菌活疫苗)与凝胶组合物(市购凝胶)混合且应用于14至16日龄的猪的分娩笼垫上。在疫苗接种的后第49天用劳氏内细胞菌攻击猪。使用单个猪在剖检病变、微观病变、IHC评分方面的差异作为主要变量来测量功效。

母猪为劳氏内细胞菌PCR阴性。相比于接种疫苗的治疗组，未接种疫苗的治疗组幼仔圈养在独立分娩室中以控制及防止暴露于疫苗。各治疗组包含6只选自4窝幼仔的猪。研究评估以Underline凝胶施用Enterisol Ileitis(EI)。对于此目标，使用三个不同治疗组：1)未接种疫苗、劳氏内细胞菌攻击对照；2)EI凝胶施用；3)EI凝胶施用；4)EI经口灌服施用。

治疗组

表3

猪崽在14至16日龄时施用疫苗。猪崽在21至24日龄时断奶。用野生型分离株疫苗接种后7周，用劳森菌肠组织匀浆进行攻击(攻击剂量为2.76×10¹⁰个劳氏内细胞菌生物体/猪)。根据宏观及微观病变评估疫苗功效。检查空肠、回肠、盲肠及结肠且对肠疾病及劳森菌感染的剖检病变特征进行评分。遵循以下准则来评估宏观病变：0＝无剖检病变；1＝轻度水肿及粘膜或浆膜充血；2＝水肿、充血、网状浆膜及粘膜(增厚)；3＝水肿、充血、网状浆膜及粘膜、剖检增厚；4＝粘膜严重增厚、出血或坏死。还记录宏观病变的长度。用福尔马林固定回肠末端以用于微观组织病理学且如下以五分量表评估劳氏内细胞菌的免疫组织化学(IHC)染色：0＝不存在劳森菌抗原；1＝0至25％隐窝具有抗原；2＝25至50％隐窝具有抗原；3＝50至75％隐窝具有抗原；4＝75至100％隐窝具有抗原。使用以下准则评估苏木精及伊红染色：0＝无病变；1＝局灶性病变；2＝多灶性病变，3＝弥漫性病变。

表4

每个治疗组剖检病变平均评分的结果

Vx＝疫苗

表5

每个治疗组剖检病变平均长度的结果

表6IHC及H&E评分结果

结论：

修饰的活劳氏内细胞菌可通过凝胶组合物施用以便对猪进行免疫接种。相比于未接种疫苗的攻击对照组，通过经口灌服或通过凝胶施用的Ileitis减少剖检病变且减少IHC评分。

实施例3

使用鼠伤寒沙门氏菌攻击来评估通过凝胶口服施用的MLV沙门氏菌属T/C功效

此研究的目标为评估通过凝胶施用的沙门氏菌属T/C(T/C)的效果。在猪14日龄时将组合物施用至分娩笼垫。在疫苗接种的后28天，用鼠伤寒沙门氏菌攻击猪。使用单个猪在剖检病变、临床症状及ADWG方面的差异来测量功效。

相比于接种疫苗的治疗组，未接种疫苗的治疗组幼仔圈养在独立分娩室中，由此严格控制且防止暴露于疫苗的任何可能性。此研究评估在母猪农场以Underline凝胶口服施用Enterisol沙门氏菌属T/C。对于此目标而言，使用三个不同治疗组：1)未接种疫苗、经沙门氏菌属攻击的对照；2)Enterisol沙门氏菌属T/C凝胶施用；3)Enterisol沙门氏菌属T/C经口灌服施用。

表7

母猪为沙门氏菌属PCR阴性。猪崽在14至16日龄时施用疫苗。猪崽在21至24日龄时断奶。沙门氏菌属攻击(鼠伤寒)在疫苗接种后4周进行(肠沙门氏菌鼠伤寒血清型UK-1，剂量为3.510¹⁰cfu/mL，1mL鼻内(每鼻孔0.5mL))。根据临床症状减少及肠病变减少来评定疫苗功效。

表8

沙门氏菌属的宏观病变评估指标

表9

剖检病变平均评分结果

Vx＝疫苗

表10

生长结果(ADWG)

结论：

修饰的沙门氏菌属活菌可通过凝胶组合物施用以便对猪进行免疫接种。相比于未接种疫苗的对照猪，通过经口灌服或通过凝胶施用的沙门氏菌属T/C会减少结肠病变(剖检)。此外，平均日体重增量显著大于未接种疫苗的对照猪。

实施例4

使用劳氏内细胞菌攻击种猪、通过凝胶口服施用MLV劳氏内细胞菌与MLV沙门氏菌属疫苗组合的功效评估，且与传统水施用相比较

此研究的目标为评估凝胶组合物用于口服施用Ileitis(市购劳氏内细胞菌疫苗)的功效。为验证此方法，通过在种猪12周龄时用含有有毒劳氏内细胞菌的肠组织匀浆攻击而暴露于种猪的实验攻击来评定疫苗功效，所述疫苗经由施用于分娩笼垫的凝胶(市购凝胶)口服施用14至19日龄的猪。研究的第二目标为研究通过应用于分娩笼垫的凝胶(市购凝胶)将Ileitis与Enterisol沙门氏菌属T/C沙门氏菌属T/C(市购鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌疫苗)的混合物施用14至19日龄的猪，随后进行实验攻击，通过在种猪12周龄时用含有有毒劳氏内细胞菌的肠组织匀浆攻击而暴露于种猪。将凝胶施用疗法与未接种疫苗的攻击对照疗法以及6周龄时经由所提供的水传统口服施用来疫苗接种Ileitis进行比较。根据单个猪在体重增量及死亡率方面的差异来测量疫苗功效。

表11

治疗组：

在攻击之前，未接种疫苗、水疫苗接种组及作为种猪的猪与凝胶接种疫苗的治疗组圈养于分开的房间，以防止暴露于MLV疫苗。接种疫苗的治疗组通过多个围栏分隔开，各组之间实施丹麦生物安保措施(Danish biosecurity)。所有猪在断奶后接种疫苗。为了攻击种猪，将种猪保持在原始围栏中且在口服给予每只猪约3.7x10¹⁰个劳氏内细胞菌生物体的攻击剂量之后，添加橡胶垫14天。为了攻击治疗组，在断奶后48天(研究第70天)，使四个治疗组的猪混在一起，每个最终围栏地点每种疗法6至7只猪，各治疗组在各围栏中平衡。将三只种猪连同橡胶垫一起置放于各围栏中以促进劳氏内细胞菌对猪的攻击。在凝胶疫苗接种后70天及在水疫苗接种后42天进行种猪暴露及治疗组攻击。在攻击及混合猪直至最终体重研究终点之后测量死亡率。还测量淘汰猪或具有严重健康问题的猪。所有猪在疫苗接种之前的14日龄时分配至各治疗组时(研究第0天)、在84日龄(研究第70天)治疗混合时及在162日龄(研究第148天)市售时称重。

表12

每个治疗组的体重增加结果

ⁱ在模型中用作共变量的共混体重。

不同上标字母(a、b、c)指示统计显著性。

ADG＝平均日体重增量；DOA＝日龄；WOA＝周龄。

表13

每个治疗组在攻击后的死亡率及淘汰结果

不同上标字母(a、b、c)指示统计显著性。

ADG＝平均日体重增量；DOA＝日龄；WOA＝周龄。

相比于未接种疫苗的攻击组，在14至19日龄通过凝胶施用的Ileitis有效且引起显著更重的体重、更大的平均日体重增量及更小的死亡率。此功效水平在未改善的情况下类似于传统的Ileitis水施用。此外，当Ileitis与Enterisol沙门氏菌属T/C混合于凝胶中时，所得疫苗组合也有效(未观测到干扰)。

Claims (28)

1.一种免疫原性凝胶组合物，其包含劳氏内细胞菌(Lawsonia intracellularis)抗原和/或沙门氏菌属(Salmonella spp.)抗原及适于口服施用的凝胶组合物。

2.如权利要求1的免疫原性凝胶组合物，其中所述劳氏内细胞菌抗原和/或所述沙门氏菌属抗原为全细胞细菌。

3.如权利要求1或2中任一项的免疫原性凝胶组合物，其中所述劳氏内细胞菌抗原为修饰的活劳氏内细胞菌或其中所述劳氏内细胞菌抗原为劳氏内细胞菌的无毒分离株或减毒的劳氏内细胞菌。

4.如权利要求1的免疫原性凝胶组合物，其中所述沙门氏菌属抗原为修饰的活沙门氏菌属。

5.如权利要求1或4中任一项的免疫原性凝胶组合物，其中所述沙门氏菌属为猪霍乱沙门氏菌(Salmonella Choleraesuis)和/或鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)和/或

其中所述沙门氏菌属为肠沙门氏菌肠亚种猪霍乱血清型和/或肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型。

6.如权利要求1至5中任一项的免疫原性凝胶组合物，其中所述免疫原性凝胶组合物包含每剂量约3.0至约9.0TCID₅₀的修饰的活劳氏内细胞菌和/或其中所述免疫原性凝胶组合物包含每剂量约1×10⁵至约1×10¹⁰CFU的沙门氏菌属。

7.如权利要求1至6中任一项的免疫原性凝胶组合物，其中所述凝胶组合物为粘稠的或具有至少50mPa·s或至少50cP的粘度，和/或其中所述凝胶组合物进一步包含调味剂和/或着色剂。

8.如权利要求1至7中任一项的免疫原性凝胶组合物，其中所述凝胶组合物包含水和/或粘着力增强剂和/或pH调节剂和/或稳定剂和/或，

其中所述凝胶组合物包含水、粘着力增强剂及稳定剂。

9.如权利要求1至8中任一项的免疫原性凝胶组合物，其中所述凝胶组合物包含水、麦芽糊精、纤维素、树胶及稳定剂，优选地所述稳定剂是丙二醇和/或，

其中所述凝胶组合物包含水、麦芽糊精、半纤维素提取物、阿拉伯树胶及丙二醇和/或，

其中所述凝胶组合物包含水、麦芽糊精、半纤维素提取物、水稳定化合物、阿拉伯树胶、丙二醇及人造染色剂。

10.如权利要求1至9中任一项的免疫原性凝胶组合物，其中所述免疫原性凝胶组合物进一步包含兽医学上可接受的载剂和/或，

其中所述免疫原性凝胶组合物为疫苗凝胶组合物。

11.一种使动物免疫的方法，其包含向所述动物施用治疗有效量的免疫原性凝胶组合物，所述免疫原性凝胶组合物包含动物病原体的抗原及用于口服施用的凝胶组合物。

12.一种在动物中治疗或预防由动物病原体引起的临床症状的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的免疫原性凝胶组合物，所述免疫原性凝胶组合物包含动物病原体的抗原及用于口服施用的凝胶组合物。

13.一种使动物免疫的方法，其包含向所述动物施用治疗有效量的如权利要求1至10中任一项的免疫原性凝胶组合物。

14.一种在动物中治疗或预防由劳氏内细胞菌和/或沙门氏菌属引起的临床症状的方法，所述方法包含向所述动物施用治疗有效量的如权利要求1至10中任一项的免疫原性凝胶组合物。

15.一种用于与相同物种的非免疫的对照组动物相比减少动物的肠中的病变的方法，其包含向所述动物施用有效量的如权利要求1至10中任一项的免疫原性凝胶组合物。

16.一种用于与相同物种的非免疫的对照组动物相比增加动物的平均日体重增量的方法，其包含向所述动物施用有效量的如权利要求1至10中任一项的免疫原性凝胶组合物。

17.如权利要求11或12中任一项的方法，其中所述动物病原体为猪、马或牛病原体和/或，

其中所述动物病原体为猪或牛细菌性病原体和/或，

其中所述动物病原体为肠道致病细菌或粘膜致病细菌。

18.如权利要求11、12及17中任一项的方法，其中动物病原体的所述抗原为粘膜或肠道活性抗原或粘膜或肠道活性活免疫原性组合物或粘膜或肠道活性活疫苗。

19.如权利要求11、12、17或18中任一项的方法，其中所述动物为猪、马或牛。

20.如权利要求13至16中任一项的方法，其中所述动物为猪(pig)、猪崽、母猪或猪科动物(swine)和/或，

其中所述动物为新生猪或断奶前的猪崽。

21.如权利要求11至20中任一项的方法，其中所述免疫原性凝胶组合物施用于一日龄以上、三日龄以上或一周龄以上或二周龄以上或三周龄以上的所述动物，或其中所述免疫原性凝胶组合物施用于6日龄至20日龄之间的所述动物。

22.如权利要求11至21中任一项的方法，其中所述免疫原性凝胶组合物通过口服和/或粘膜途径施用。

23.如权利要求11至22中任一项的方法，其中所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物应用于畜棚或饲养环境内，以允许所述动物食用所述免疫原性凝胶组合物和/或，

其中所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物应用至母体动物的腹线或母体动物的乳房、应用至畜棚内的垫上或畜棚内的杯或器皿中。

24.如权利要求11至23中任一项的方法，其中所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物局部应用于母体动物并且允许出生后动物或断奶前动物食用所述免疫原性凝胶组合物和/或，

其中所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物局部应用于母体动物的腹线，或其中所述方法包含将所述免疫原性凝胶组合物局部应用于母体动物的至少一个乳头。

25.如权利要求23或24中任一项的方法，其中所述母体动物为母猪和/或所述出生后动物为出生后猪崽和/或所述断奶前动物为断奶前的猪崽。

26.如权利要求11至25中任一项的方法，其中所述免疫原性凝胶组合物为疫苗凝胶组合物和/或，

其中所述免疫原性凝胶组合物进一步包含兽医学上可接受的载剂。

27.如权利要求11至26中任一项的方法，其中所述凝胶组合物为如权利要求7至10中任一项的凝胶组合物。

28.一种垫，其包含如权利要求1至10中任一项的凝胶组合物。