JP2004026719A - ピーナッツ渋皮抽出物を有効成分とする抗肥満用組成物 - Google Patents
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Abstract
【課題】安全性の高い天然物の中から、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する物質を見出し、それを有効成分とした新規な抗肥満用組成物を提供する。
【解決手段】抗肥満用組成物の有効成分として、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用及びα−アミラーゼ阻害作用からなる群より選択される１種類以上の作用を有するピーナッツ渋皮抽出物を含有させる。
【選択図】 なし
【解決手段】抗肥満用組成物の有効成分として、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用及びα−アミラーゼ阻害作用からなる群より選択される１種類以上の作用を有するピーナッツ渋皮抽出物を含有させる。
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有し、肥満の予防・治療に有用な抗肥満用組成物（例えば、医薬組成物、飲食品組成物、飼料組成物、化粧料組成物等）に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、飽食や運動不足等の生活習慣が原因となって体脂肪の増加し、肥満が増えている。このような肥満の増加は、人間ばかりでなく、ペットや家畜においても見られる。肥満は、高脂血症や動脈硬化等の成人病の原因になるため、美容の面で問題となるばかりでなく、健康の面でも大きな問題となる。
【０００３】
肥満の予防・治療法としては、例えば、摂取する食事の制限や、各種の有酸素運動による脂肪燃焼等がある。これらの方法は、短期間で効果が得ることが難しいばかりでなく、肉体的苦痛及び精神的苦痛を伴うこともあるので、有効な手段であるとは言えない。このため、抗肥満用組成物（例えば、医薬組成物、飲食品組成物、飼料組成物、化粧料組成物）を用いた肥満の予防・治療法が一般的に用いられている。
【０００４】
抗肥満用組成物の有効成分としては、糖質又は脂肪の代謝に関与する酵素、例えば、リパーゼ、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ、α−グルコシダーゼ、α−アミラーゼ等の活性を阻害する物質が用いられ、このような阻害作用を有する物質としては、例えば、カフェイン、テトラサイクリン等の化合物、各種植物抽出物（例えば、特開昭６４−９０１３１、特開平１−１０２０２２、特開平３−２１９８７２、特開平５−２５５１００、特開平１０−２６２６０６）等が知られている。
しかし、何れの抗肥満用組成物も、副作用がある、安全性が低い、抗肥満効果が低い等の問題点を有しているため、新規な抗肥満用組成物の開発が望まれている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明は、安全性の高い天然物の中から、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する物質を見出し、それを有効成分とした新規な抗肥満用組成物を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するために、本発明は、ピーナッツ渋皮抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗肥満組成物を提供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明において、「ピーナッツ渋皮抽出物」には、ピーナッツの渋皮を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【０００８】
ピーナッツ（Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ ＬＩＮＮＥ）はマメ科に属する植物であり、ピーナッツの渋皮は薄皮又は甘皮とも呼ばれるものである。ピーナッツの渋皮は、ピーナッツを各種食品に加工する際に必ず廃棄されるものであり、特にピーナッツバターの製造時に膨大な量の渋皮が廃棄物として生じるが、これまでピーナッツの渋皮の有用な用途についてはほとんど知られておらず、廃棄物として処分されていた。ピーナッツの渋皮には、グルコシルトランスフェラーゼ阻害作用を有する成分が含まれていることが知られていたが（特開２０００−１７８１５８）、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する成分が含まれていることは、これまで知られていなかった。
【０００９】
ピーナッツの渋皮に含有されるリパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、ピーナッツの渋皮からリパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する抽出物を得ることができる。例えば、抽出原料を乾燥した後、そのまま、又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。この際、抽出原料の乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ピーナッツの渋皮は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、ピーナッツの渋皮の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１０】
抽出溶媒としては、極性溶媒を用いることが好ましく、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが特に好ましい。
【００１１】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１２】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール等の炭素数１〜４の低級脂肪族アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；又はこれらの混合物等が挙げられる。
【００１３】
２種以上の極性溶媒の混合物を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合物を使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比を１００：０〜１０：９０（重量比）とすることができる。
【００１４】
ピーナッツの渋皮からリパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する抽出物を得るにあたり特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の装置を用いて抽出することができる。
【００１５】
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、必要に応じて時々攪拌しながら、１〜３時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去することにより抽出液が得られる。この際、抽出溶媒量は通常、抽出原料の１０〜１００倍量（重量比）であり、抽出温度は通常３０〜１００℃である。
【００１６】
得られた抽出液は、淡褐色で味や匂いも穏やかなものであるから、そのままでも抗肥満用組成物の有効成分として用いることができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。また、抽出液を活性炭で処理しても有効成分が除かれることはないので、抽出物に活性炭による脱臭・脱色処理を施してもよい。吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によるさらなる精製も、抽出液の活性の向上に有効なものであれば必要に応じて施すことができる。
【００１７】
以上のようにして得られるピーナッツ渋皮抽出物は、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用及びα−アミラーゼ阻害作用からなる群より選択される１種類以上の作用を有しており、この作用を利用してピーナッツ渋皮抽出物を抗肥満用組成物の有効成分として使用することができる。なお、「有効成分」とは、抗肥満用組成物の抗肥満効果に寄与する成分を意味し、ピーナッツ渋皮抽出物が抗肥満用組成物の抗肥満効果に寄与し得る限り、ピーナッツ渋皮抽出物は抗肥満用組成物の主成分である必要はないし、また、抗肥満用組成物にはピーナッツ渋皮抽出物以外に抗肥満効果に寄与する成分が含まれていてもよい。
【００１８】
抗肥満用組成物の形態は、抗肥満効果（肥満の予防・治療効果）を発揮し得る限り、内用又は外用のいずれの形態であってもよく、その具体例としては、医薬組成物、飲食品組成物、飼料組成物、化粧品組成物等が挙げられる。
抗肥満用組成物のピーナッツ渋皮抽出物以外の成分は、組成物の形態に応じて適宜選択することができる。
【００１９】
医薬品組成物は、例えば、ピーナッツ渋皮抽出物に薬学的に許容され得る賦形剤その他任意の助剤（例えば、基剤、増量剤、希釈剤、乳化剤、分散剤、溶剤等）を配合することにより製造することができる。医薬品組成物の剤形としては、例えば、粉末状、顆粒状、錠剤状、液剤等が挙げられる。このように製剤化したピーナッツ渋皮抽出物は、抗肥満剤として有用であるばかりでなく、リパーゼ阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、α−グルコシダーゼ阻害剤及びα−アミラーゼ阻害剤としても有用である。そして、リパーゼ阻害剤及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、肥満の予防・治療に有用であるばかりでなく、皮膚炎等の炎症性疾患の予防・治療にも有用である。
【００２０】
飲食品組成物及び飼料組成物は、ピーナッツ渋皮抽出物に、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等を配合することにより製造することができる。
【００２１】
飲食品組成物は、ピーナッツ渋皮抽出物をその活性を妨げないような任意の飲食品に配合することにより製造することもできる。ピーナッツ渋皮抽出物を配合し得る飲食品は特に限定されないが、その具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物、パン等が挙げられる。ピーナッツ渋皮抽出物は、糖質及び脂質を含有しない飲食品に配合してもよいが、糖質又は脂質を含有する飲食品に配合することが好ましい。こうして製造された飲食品組成物は、抗肥満用飲食品としてばかりでなく、美肌、痩身等の美容を目的とした飲食品、すなわち美容用飲食品としても用いることができる。
【００２２】
飼料組成物は、ピーナッツ渋皮抽出物をその活性を妨げないような任意の飼料に配合することにより製造することもできる。ピーナッツ渋皮抽出物を配合し得る飼料は特に限定されないが、その具体例としては、ペットフード、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。
【００２３】
化粧料組成物は、ピーナッツ渋皮抽出物に、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素消去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を配合することにより製造することができる。
また、化粧料組成物は、ピーナッツ渋皮抽出物をその活性を妨げないような任意の化粧料に配合することにより製造することもできる。ピーナッツ渋皮抽出物を配合し得る化粧料は特に限定されないが、その具体例としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、入浴剤、リップクリーム、口紅等の皮膚化粧料が挙げられる。
【００２４】
ピーナッツ渋皮抽出物には若干の渋味があるが、この渋味が医薬組成物、飲食品組成物又は飼料組成物を投与する上で障害になるときは、サイクロデキストリン、デキストリン、乳糖、糖アルコール（例えばソルビトール、マルチトール、エリスリトール、キシリトール等）等を配合して渋味を隠蔽することができる。
【００２５】
抗肥満用組成物を製造する際、有効成分としてピーナッツ渋皮抽出物以外のリパーゼ阻害物質、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害物質、α−グルコシダーゼ阻害物質及びα−アミラーゼ阻害物質を併用してもよい。抗肥満用組成物に配合し得る有効成分の具体例としては、ギムネマシルベスタ、ガルシニアカンボジア、カプサイシン、キトサン、共役リノール酸（ＣＬＡ）、Ｌ−カルニチン、オルニチン、茶抽出物、クロム等が挙げられる。
【００２６】
抗肥満用組成物におけるピーナッツ渋皮抽出物の配合量は、組成物の形態や抽出物の活性等に応じて適宜調整することができる。例えば、標準的なピーナッツ渋皮抽出物をそのまま配合する場合、好適な配合率は、約０．０１〜２０．０重量％であり、特に好ましい配合率は約０．１〜５．０重量％である。
【００２７】
【実施例】
以下、実施例を示して本発明をさらに詳細に説明する。なお、各例において「部」は重量部を意味する。
【００２８】
〔製造例１〕
ピーナッツ渋皮の乾燥物１００ｇに抽出溶媒として１０００ｍＬの水を入れ、沸騰水浴中で２時間加熱し、可溶性成分を抽出した。得られた抽出液を減圧下に濃縮乾固し、固形抽出物１０ｇ（粉末）を得た。（収率１０％）
【００２９】
〔製造例２〕
ピーナッツ渋皮の乾燥物１００ｇに抽出溶媒として１２００ｍＬの６０％含水エタノールを入れ、６０℃で２時間加熱し、可溶性成分を抽出した。得られた抽出液を減圧下に濃縮乾固し、固形抽出物１５ｇ（粉末）を得た。（収率１５％）抽出溶媒は上記で記述した内、作業性、経済性及び安全性を考慮に入れると、水、含水アルコールが好ましく、抽出溶媒量は５〜５０倍量が好ましく、抽出温度は３０〜１００℃が好ましいと考えられる。
【００３０】
〔試験例１〕リパーゼ阻害活性試験
製造例１及び２で得られたピーナッツ渋皮の水抽出物及び６０％エタノール抽出物を５０重量％エタノールに溶解させて試料溶液を調製した。
各試料溶液５０μＬ、リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ起源、Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ社；１５．４Ｕ／ｍＬ）５０μＬ、０．１Ｍ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解した５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｒｏ−ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）（ＤＴＮＢ，０．１ｍｇ／ｍＬ）３４０μＬ及びエタノールに溶解したｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ ｆｌｕｏｒｉｄｅ（ＰＭＳＦ，３．５ｍｇ／ｍＬ）１０μＬをよく混合し、３０℃で５分間静置した。この酵素反応液に、エタノールに溶解した２，３−ｄｉｍｅｒｃａｐｔｏ−１−ｐｒｏｐａｎｏｌ ｔｒｉｂｕｔｙｌａｔｅ（ＢＡＬＢ，０．３ｍｇ／ｍＬ）及びｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ（ＳＤＳ，０．２６ｍｇ／ｍＬ）をそれぞれ２５μＬずつ加えた後、３０℃で３０分間反応させた。アセトン５００μＬを加えて酵素反応を停止させた後、ＢＡＬＢが加水分解された量に比例する波長４１４ｎｍの吸光度を測定した。また、コントロールとして、試料溶液の代わりに５０重量％エタノールを加えた場合について、同様の操作と吸光度測定を行った。
測定結果から、下記の計算式によりリパーゼ活性阻害率を算出した。
【００３１】
阻害率（％）＝１−［（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）］×１００
【００３２】
上記式中、「Ａ０」は試料溶液を添加した場合の吸光度（酵素反応開始前）、「Ａ１」は試料溶液を添加した場合の吸光度（酵素反応開始後）、「Ａ２」はコントロールの吸光度（酵素反応開始前）、「Ａ３」はコントロールの吸光度（酵素反応開始後）を表す。
【００３３】
試料溶液の試料濃度を１００〜２０００μｇ／ｍＬに段階的に変化させて上記リパーゼ活性阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料溶液の試料濃度（ＩＣ５０）（μｇ／ｍＬ）を求めた。その結果、ピーナッツ渋皮の水抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１８００μｇ／ｍＬ、ピーナッツ渋皮の６０％エタノール抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１５００μｇ／ｍＬであった。
【００３４】
この結果から、ピーナッツ渋皮抽出物がリパーゼ阻害作用を有することが確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物のリパーゼ阻害作用の強さは、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００３５】
〔試験例２〕サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害活性試験
製造例１及び２で得られたピーナッツ渋皮の水抽出物及び６０％エタノール抽出物を、塩化マグネシウムを含有しないトリス塩酸緩衝液に溶解させて試料溶液を調製した。
５ｍＭの塩化マグネシウムを含有するトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに胎児血清アルブミン溶液０．１ｍＬ及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬを加え、さらに各試料溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で５分間プレインキュベーションした。次いで、サイクリックＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で６０分間インキュベーションした。沸騰浴中で３分間煮沸して反応を停止させ、４℃で３５００ｒｐｍ遠心分離し、上清中の反応基質・５’−ＡＭＰを高速液体クロマトグラフィーにより定量した。コントロールとして、試料溶液を添加せずに同様の酵素反応と反応基質の分析を行い、試料溶液無添加時の反応基質量に対する試料溶液添加時の反応基質量の比率より、下記の計算式に基づきサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害率（％）を求めた。
【００３６】
なお、高速液体クロマトグラフィーの条件は次の通りである。
検出器：紫外部吸収検出器（測定波長２６０ｎｍ）
カラム充填剤：１０μｍの化学結合型オクタデシルシラン
カラム管：内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのステンレス管
カラム温度：４０℃
移動相：アセトニトリル／１ｍＭ ＴＢＡＰ（２５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４）＝１０／９０（重量比）混液
流速：１ｍＬ／分
【００３７】
阻害率（％）＝１−［（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）］×１００
【００３８】
上記式中、「Ａ０」は試料溶液を添加した場合の反応生成物量（酵素反応開始前）、「Ａ１」は試料溶液を添加した場合の反応生成物量（酵素反応開始後）、「Ａ２」はコントロールの反応生成物量（酵素反応開始前）、「Ａ３」はコントロールの反応生成物量（酵素反応開始後）を表す。
【００３９】
試料溶液の試料濃度を５０〜２００μｇ／ｍＬに段階的に変化させて上記サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料溶液の試料濃度（ＩＣ５０）（μｇ／ｍＬ）を求めた。その結果、ピーナッツ渋皮の水抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１４０．５μｇ／ｍＬ、ピーナッツ渋皮の６０％エタノール抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１０３．７μｇ／ｍＬであった。
【００４０】
この結果から、ピーナッツ渋皮抽出物がサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有することが確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用の強さは、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００４１】
〔試験例３〕α−グルコシダーゼ阻害活性試験
製造例１及び２で得られたピーナッツ渋皮の水抽出物及び６０％エタノール抽出物を５０重量％エタノールに溶解させて試料溶液を調製した。
各試料溶液５０μＬに、０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解した１０ｍＭ シュークロース又はマルトース溶液３００μＬを加えてよく混合し、３７℃で５分間プレインキュベートした。次いで、これに、α−グルコシダーゼ含有小腸液（ラット小腸アセトンパウダー１ｇを０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍＬに添加して、スターラーで攪拌（４℃、１時間）し、遠心分離（３，５００ｒｐｍ、１５分間）により分離した上澄液）３０μＬを加え、３７℃で３０分間反応させた。沸騰水上で３分間煮沸してから反応を停止させ、４℃で遠心分離し、上清中の反応生成物であるグルコースをグルコーステストワコー（和光純薬（株））により定量した。コントロールとして、試料溶液を添加せずに同様の酵素反応と反応生成物の分析を行い、試料溶液無添加時の反応生成物量に対する試料溶液添加時の反応生成物量の比率より、下記の計算式に基づいてα−グルコシダーゼ阻害率（％）を算出した。
【００４２】
阻害率（％）＝１−［（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）］×１００
【００４３】
上記式中、「Ａ０」は試料溶液を添加した場合のグルコース量（酵素反応開始前）、「Ａ１」は試料溶液を添加した場合のグルコース量（酵素反応開始後）、「Ａ２」は、コントロールのグルコース量（酵素反応開始前）、「Ａ３」はコントロールのグルコース量（酵素反応開始後）を表す。
【００４４】
試料溶液の試料濃度を５０〜４００μｇ／ｍＬに段階的に変化させて上記α−グルコシダーゼ阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料溶液の試料濃度（ＩＣ５０）（μｇ／ｍＬ）を求めた。その結果、ピーナッツ渋皮の水抽出物を用いた場合のＩＣ５０は、基質がシュークロースであるときには２８０μｇ／ｍＬ、基質がマルトースであるときには３１０μｇ／ｍＬ、ピーナッツ渋皮の６０％エタノール抽出物を用いた場合のＩＣ５０は、基質がシュークロースであるときには２２０μｇ／ｍＬ、基質がマルトースであるときには２４０μｇ／ｍＬであった。
【００４５】
この結果から、ピーナッツ渋皮抽出物がα−グルコシダーゼ阻害作用を有することが確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物のα−グルコシダーゼ阻害作用の強さは、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００４６】
〔試験例４〕α−アミラーゼ阻害活性試験
製造例１及び２で得られたピーナッツ渋皮の水抽出物及び６０％エタノール抽出物を水に溶解させて試料溶液を調製した。
各試料溶液５０μＬに、５０ｍＭ 酢酸緩衝液緩衝液（ｐＨ５．５）に溶解した０．５％可溶性澱粉溶液２５０μＬ、α−アミラーゼ溶液（人唾液由来）５０μＬ、２０ｍＭ 塩化カリウムと１００ｍＭ 塩化ナトリウムとを含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液緩衝液（ｐＨ５．５）５０μＬ、及び５０ｍＭ 酢酸緩衝液緩衝液（ｐＨ５．５）１００μＬを添加し、３７℃で１５分間反応させた。反応終了後、１．７ｍＭ ヨウ化カリウムと０．１７ｍＭ ヨウ素とを含む０．００１７Ｎ 塩酸溶液５ｍＬ加え、７００ｎｍの吸光度を測定した。コントロールとして、試料溶液を添加せずに同様の酵素反応と反応生成物の分析を行い、試料溶液無添加時の反応生成物量に対する試料溶液添加時の反応生成物量の比率より、下記の計算式に基づいてα−アミラーゼ阻害率（％）を算出した。
【００４７】
阻害率（％）＝１−［（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）］×１００
【００４８】
上記式中、「Ａ０」は試料溶液を添加した場合の吸光度（酵素反応開始前）、「Ａ１」は試料溶液を添加した場合の吸光度（酵素反応開始後）、「Ａ２」はコントロールの吸光度（酵素反応開始前）、「Ａ３」はコントロールの吸光度（酵素反応開始後）を表す。
【００４９】
試料溶液の試料濃度を２００〜２０００μｇ／ｍＬに段階的に変化させて上記α−アミラーゼ阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料溶液の試料濃度（ＩＣ５０）（μｇ／ｍＬ）を求めた。その結果、ピーナッツ渋皮の水抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１３００μｇ／ｍＬ、ピーナッツ渋皮の６０％エタノール抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１０５０μｇ／ｍＬであった。
【００５０】
この結果から、ピーナッツ渋皮抽出物がα−アミラーゼ阻害作用を有することが確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物のα−アミラーゼ阻害作用の強さは、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００５１】
〔配合例１〕食パン
下記の原料を食パンの常法により、混合、発酵、オーブンし、抗肥満作用を有する食パンを製造した。
製造例２のピーナッツ渋皮抽出物 ２部
強力粉 ２５０部
砂糖 １５部
食塩 ２部
無塩バター ２０部
脱脂粉乳 ５部
ドライイースト ３部
水 ２００部
【００５２】
〔配合例２〕飴
下記の原料を飴製造の常法により、混合、濃縮、成形し、抗肥満作用を有する飴を製造した。
製造例２のピーナッツ渋皮抽出物 １部
ショ糖 ７０部
水飴 ３０部
クエン酸 １部
香料 ０．１部
水 １５部
【００５３】
〔配合例３〕果汁入り飲料
下記の原料を果汁入り飲料製造の常法により、混合、溶解、充填し、抗肥満作用を有する果汁入り飲料を製造した。
製造例１のピーナッツ渋皮抽出物 ０．５部
グレープフルーツ果汁 ０．３部
果糖ブドウ糖液糖 ５部
香料 ０．０１部
クエン酸ソーダ ０．１部
ビタミンＣ ０．１部
精製水 ９５部
【００５４】
〔配合例４〕混合茶
下記の原料をお茶の常法により、抽出、ろ過、充填し、抗肥満作用を有するお茶を製造した。
製造例１のピーナッツ渋皮抽出物 １部
ウーロン茶 ２部
ハトムギ茶 ２部
黄杞茶 ２部
ハブソウ ３部
精製水 ９０部
【００５５】
〔配合例５〕ペットフード
下記の原料をペットフード製造の常法により、混合、成形、乾燥し、抗肥満作用を有するペットフードを製造した。
製造例１のピーナッツ渋皮抽出物 ５ｇ
大豆粕 １０ｇ
大豆油 ５ｇ
魚粉 ５ｇ
炭酸カルシウム １ｇ
ビタミンＢ群コンプレックス ０．１ｇ
ビタミンＡＤＥプレミックス ０．１ｇ
【００５６】
【発明の効果】
本発明により、ピーナッツ渋皮抽出物を有効成分として含有する抗肥満用組成物が提供される。ピーナッツ渋皮抽出物は、糖質又は脂肪の代謝に関与するリパーゼ、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ、α−グルコシダーゼ又はα−アミラーゼ活性を阻害し、食事で摂取した糖質及び脂質の分解・吸収を抑制する。また、ピーナッツは、渋皮を剥がさずに食べることができる食品素材であるから、その渋皮抽出物の安全性に問題はなく、さらに、腸内有用細菌に対して望ましくない作用を示す恐れもない。したがって、ピーナッツ渋皮抽出物を有効成分として含有する本発明の抗肥満用組成物は、肥満の予防・治療に有用である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有し、肥満の予防・治療に有用な抗肥満用組成物（例えば、医薬組成物、飲食品組成物、飼料組成物、化粧料組成物等）に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、飽食や運動不足等の生活習慣が原因となって体脂肪の増加し、肥満が増えている。このような肥満の増加は、人間ばかりでなく、ペットや家畜においても見られる。肥満は、高脂血症や動脈硬化等の成人病の原因になるため、美容の面で問題となるばかりでなく、健康の面でも大きな問題となる。
【０００３】
肥満の予防・治療法としては、例えば、摂取する食事の制限や、各種の有酸素運動による脂肪燃焼等がある。これらの方法は、短期間で効果が得ることが難しいばかりでなく、肉体的苦痛及び精神的苦痛を伴うこともあるので、有効な手段であるとは言えない。このため、抗肥満用組成物（例えば、医薬組成物、飲食品組成物、飼料組成物、化粧料組成物）を用いた肥満の予防・治療法が一般的に用いられている。
【０００４】
抗肥満用組成物の有効成分としては、糖質又は脂肪の代謝に関与する酵素、例えば、リパーゼ、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ、α−グルコシダーゼ、α−アミラーゼ等の活性を阻害する物質が用いられ、このような阻害作用を有する物質としては、例えば、カフェイン、テトラサイクリン等の化合物、各種植物抽出物（例えば、特開昭６４−９０１３１、特開平１−１０２０２２、特開平３−２１９８７２、特開平５−２５５１００、特開平１０−２６２６０６）等が知られている。
しかし、何れの抗肥満用組成物も、副作用がある、安全性が低い、抗肥満効果が低い等の問題点を有しているため、新規な抗肥満用組成物の開発が望まれている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明は、安全性の高い天然物の中から、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する物質を見出し、それを有効成分とした新規な抗肥満用組成物を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するために、本発明は、ピーナッツ渋皮抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗肥満組成物を提供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明において、「ピーナッツ渋皮抽出物」には、ピーナッツの渋皮を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【０００８】
ピーナッツ（Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ ＬＩＮＮＥ）はマメ科に属する植物であり、ピーナッツの渋皮は薄皮又は甘皮とも呼ばれるものである。ピーナッツの渋皮は、ピーナッツを各種食品に加工する際に必ず廃棄されるものであり、特にピーナッツバターの製造時に膨大な量の渋皮が廃棄物として生じるが、これまでピーナッツの渋皮の有用な用途についてはほとんど知られておらず、廃棄物として処分されていた。ピーナッツの渋皮には、グルコシルトランスフェラーゼ阻害作用を有する成分が含まれていることが知られていたが（特開２０００−１７８１５８）、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する成分が含まれていることは、これまで知られていなかった。
【０００９】
ピーナッツの渋皮に含有されるリパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、ピーナッツの渋皮からリパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する抽出物を得ることができる。例えば、抽出原料を乾燥した後、そのまま、又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。この際、抽出原料の乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ピーナッツの渋皮は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、ピーナッツの渋皮の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１０】
抽出溶媒としては、極性溶媒を用いることが好ましく、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが特に好ましい。
【００１１】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１２】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール等の炭素数１〜４の低級脂肪族アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；又はこれらの混合物等が挙げられる。
【００１３】
２種以上の極性溶媒の混合物を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合物を使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比を１００：０〜１０：９０（重量比）とすることができる。
【００１４】
ピーナッツの渋皮からリパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用又はα−アミラーゼ阻害作用を有する抽出物を得るにあたり特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の装置を用いて抽出することができる。
【００１５】
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、必要に応じて時々攪拌しながら、１〜３時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去することにより抽出液が得られる。この際、抽出溶媒量は通常、抽出原料の１０〜１００倍量（重量比）であり、抽出温度は通常３０〜１００℃である。
【００１６】
得られた抽出液は、淡褐色で味や匂いも穏やかなものであるから、そのままでも抗肥満用組成物の有効成分として用いることができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。また、抽出液を活性炭で処理しても有効成分が除かれることはないので、抽出物に活性炭による脱臭・脱色処理を施してもよい。吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によるさらなる精製も、抽出液の活性の向上に有効なものであれば必要に応じて施すことができる。
【００１７】
以上のようにして得られるピーナッツ渋皮抽出物は、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用及びα−アミラーゼ阻害作用からなる群より選択される１種類以上の作用を有しており、この作用を利用してピーナッツ渋皮抽出物を抗肥満用組成物の有効成分として使用することができる。なお、「有効成分」とは、抗肥満用組成物の抗肥満効果に寄与する成分を意味し、ピーナッツ渋皮抽出物が抗肥満用組成物の抗肥満効果に寄与し得る限り、ピーナッツ渋皮抽出物は抗肥満用組成物の主成分である必要はないし、また、抗肥満用組成物にはピーナッツ渋皮抽出物以外に抗肥満効果に寄与する成分が含まれていてもよい。
【００１８】
抗肥満用組成物の形態は、抗肥満効果（肥満の予防・治療効果）を発揮し得る限り、内用又は外用のいずれの形態であってもよく、その具体例としては、医薬組成物、飲食品組成物、飼料組成物、化粧品組成物等が挙げられる。
抗肥満用組成物のピーナッツ渋皮抽出物以外の成分は、組成物の形態に応じて適宜選択することができる。
【００１９】
医薬品組成物は、例えば、ピーナッツ渋皮抽出物に薬学的に許容され得る賦形剤その他任意の助剤（例えば、基剤、増量剤、希釈剤、乳化剤、分散剤、溶剤等）を配合することにより製造することができる。医薬品組成物の剤形としては、例えば、粉末状、顆粒状、錠剤状、液剤等が挙げられる。このように製剤化したピーナッツ渋皮抽出物は、抗肥満剤として有用であるばかりでなく、リパーゼ阻害剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、α−グルコシダーゼ阻害剤及びα−アミラーゼ阻害剤としても有用である。そして、リパーゼ阻害剤及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、肥満の予防・治療に有用であるばかりでなく、皮膚炎等の炎症性疾患の予防・治療にも有用である。
【００２０】
飲食品組成物及び飼料組成物は、ピーナッツ渋皮抽出物に、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等を配合することにより製造することができる。
【００２１】
飲食品組成物は、ピーナッツ渋皮抽出物をその活性を妨げないような任意の飲食品に配合することにより製造することもできる。ピーナッツ渋皮抽出物を配合し得る飲食品は特に限定されないが、その具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物、パン等が挙げられる。ピーナッツ渋皮抽出物は、糖質及び脂質を含有しない飲食品に配合してもよいが、糖質又は脂質を含有する飲食品に配合することが好ましい。こうして製造された飲食品組成物は、抗肥満用飲食品としてばかりでなく、美肌、痩身等の美容を目的とした飲食品、すなわち美容用飲食品としても用いることができる。
【００２２】
飼料組成物は、ピーナッツ渋皮抽出物をその活性を妨げないような任意の飼料に配合することにより製造することもできる。ピーナッツ渋皮抽出物を配合し得る飼料は特に限定されないが、その具体例としては、ペットフード、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。
【００２３】
化粧料組成物は、ピーナッツ渋皮抽出物に、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素消去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を配合することにより製造することができる。
また、化粧料組成物は、ピーナッツ渋皮抽出物をその活性を妨げないような任意の化粧料に配合することにより製造することもできる。ピーナッツ渋皮抽出物を配合し得る化粧料は特に限定されないが、その具体例としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、入浴剤、リップクリーム、口紅等の皮膚化粧料が挙げられる。
【００２４】
ピーナッツ渋皮抽出物には若干の渋味があるが、この渋味が医薬組成物、飲食品組成物又は飼料組成物を投与する上で障害になるときは、サイクロデキストリン、デキストリン、乳糖、糖アルコール（例えばソルビトール、マルチトール、エリスリトール、キシリトール等）等を配合して渋味を隠蔽することができる。
【００２５】
抗肥満用組成物を製造する際、有効成分としてピーナッツ渋皮抽出物以外のリパーゼ阻害物質、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害物質、α−グルコシダーゼ阻害物質及びα−アミラーゼ阻害物質を併用してもよい。抗肥満用組成物に配合し得る有効成分の具体例としては、ギムネマシルベスタ、ガルシニアカンボジア、カプサイシン、キトサン、共役リノール酸（ＣＬＡ）、Ｌ−カルニチン、オルニチン、茶抽出物、クロム等が挙げられる。
【００２６】
抗肥満用組成物におけるピーナッツ渋皮抽出物の配合量は、組成物の形態や抽出物の活性等に応じて適宜調整することができる。例えば、標準的なピーナッツ渋皮抽出物をそのまま配合する場合、好適な配合率は、約０．０１〜２０．０重量％であり、特に好ましい配合率は約０．１〜５．０重量％である。
【００２７】
【実施例】
以下、実施例を示して本発明をさらに詳細に説明する。なお、各例において「部」は重量部を意味する。
【００２８】
〔製造例１〕
ピーナッツ渋皮の乾燥物１００ｇに抽出溶媒として１０００ｍＬの水を入れ、沸騰水浴中で２時間加熱し、可溶性成分を抽出した。得られた抽出液を減圧下に濃縮乾固し、固形抽出物１０ｇ（粉末）を得た。（収率１０％）
【００２９】
〔製造例２〕
ピーナッツ渋皮の乾燥物１００ｇに抽出溶媒として１２００ｍＬの６０％含水エタノールを入れ、６０℃で２時間加熱し、可溶性成分を抽出した。得られた抽出液を減圧下に濃縮乾固し、固形抽出物１５ｇ（粉末）を得た。（収率１５％）抽出溶媒は上記で記述した内、作業性、経済性及び安全性を考慮に入れると、水、含水アルコールが好ましく、抽出溶媒量は５〜５０倍量が好ましく、抽出温度は３０〜１００℃が好ましいと考えられる。
【００３０】
〔試験例１〕リパーゼ阻害活性試験
製造例１及び２で得られたピーナッツ渋皮の水抽出物及び６０％エタノール抽出物を５０重量％エタノールに溶解させて試料溶液を調製した。
各試料溶液５０μＬ、リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ起源、Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ社；１５．４Ｕ／ｍＬ）５０μＬ、０．１Ｍ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解した５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｒｏ−ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）（ＤＴＮＢ，０．１ｍｇ／ｍＬ）３４０μＬ及びエタノールに溶解したｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ ｆｌｕｏｒｉｄｅ（ＰＭＳＦ，３．５ｍｇ／ｍＬ）１０μＬをよく混合し、３０℃で５分間静置した。この酵素反応液に、エタノールに溶解した２，３−ｄｉｍｅｒｃａｐｔｏ−１−ｐｒｏｐａｎｏｌ ｔｒｉｂｕｔｙｌａｔｅ（ＢＡＬＢ，０．３ｍｇ／ｍＬ）及びｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ（ＳＤＳ，０．２６ｍｇ／ｍＬ）をそれぞれ２５μＬずつ加えた後、３０℃で３０分間反応させた。アセトン５００μＬを加えて酵素反応を停止させた後、ＢＡＬＢが加水分解された量に比例する波長４１４ｎｍの吸光度を測定した。また、コントロールとして、試料溶液の代わりに５０重量％エタノールを加えた場合について、同様の操作と吸光度測定を行った。
測定結果から、下記の計算式によりリパーゼ活性阻害率を算出した。
【００３１】
阻害率（％）＝１−［（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）］×１００
【００３２】
上記式中、「Ａ０」は試料溶液を添加した場合の吸光度（酵素反応開始前）、「Ａ１」は試料溶液を添加した場合の吸光度（酵素反応開始後）、「Ａ２」はコントロールの吸光度（酵素反応開始前）、「Ａ３」はコントロールの吸光度（酵素反応開始後）を表す。
【００３３】
試料溶液の試料濃度を１００〜２０００μｇ／ｍＬに段階的に変化させて上記リパーゼ活性阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料溶液の試料濃度（ＩＣ５０）（μｇ／ｍＬ）を求めた。その結果、ピーナッツ渋皮の水抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１８００μｇ／ｍＬ、ピーナッツ渋皮の６０％エタノール抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１５００μｇ／ｍＬであった。
【００３４】
この結果から、ピーナッツ渋皮抽出物がリパーゼ阻害作用を有することが確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物のリパーゼ阻害作用の強さは、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００３５】
〔試験例２〕サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害活性試験
製造例１及び２で得られたピーナッツ渋皮の水抽出物及び６０％エタノール抽出物を、塩化マグネシウムを含有しないトリス塩酸緩衝液に溶解させて試料溶液を調製した。
５ｍＭの塩化マグネシウムを含有するトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに胎児血清アルブミン溶液０．１ｍＬ及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬを加え、さらに各試料溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で５分間プレインキュベーションした。次いで、サイクリックＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で６０分間インキュベーションした。沸騰浴中で３分間煮沸して反応を停止させ、４℃で３５００ｒｐｍ遠心分離し、上清中の反応基質・５’−ＡＭＰを高速液体クロマトグラフィーにより定量した。コントロールとして、試料溶液を添加せずに同様の酵素反応と反応基質の分析を行い、試料溶液無添加時の反応基質量に対する試料溶液添加時の反応基質量の比率より、下記の計算式に基づきサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害率（％）を求めた。
【００３６】
なお、高速液体クロマトグラフィーの条件は次の通りである。
検出器：紫外部吸収検出器（測定波長２６０ｎｍ）
カラム充填剤：１０μｍの化学結合型オクタデシルシラン
カラム管：内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのステンレス管
カラム温度：４０℃
移動相：アセトニトリル／１ｍＭ ＴＢＡＰ（２５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４）＝１０／９０（重量比）混液
流速：１ｍＬ／分
【００３７】
阻害率（％）＝１−［（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）］×１００
【００３８】
上記式中、「Ａ０」は試料溶液を添加した場合の反応生成物量（酵素反応開始前）、「Ａ１」は試料溶液を添加した場合の反応生成物量（酵素反応開始後）、「Ａ２」はコントロールの反応生成物量（酵素反応開始前）、「Ａ３」はコントロールの反応生成物量（酵素反応開始後）を表す。
【００３９】
試料溶液の試料濃度を５０〜２００μｇ／ｍＬに段階的に変化させて上記サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料溶液の試料濃度（ＩＣ５０）（μｇ／ｍＬ）を求めた。その結果、ピーナッツ渋皮の水抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１４０．５μｇ／ｍＬ、ピーナッツ渋皮の６０％エタノール抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１０３．７μｇ／ｍＬであった。
【００４０】
この結果から、ピーナッツ渋皮抽出物がサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有することが確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用の強さは、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００４１】
〔試験例３〕α−グルコシダーゼ阻害活性試験
製造例１及び２で得られたピーナッツ渋皮の水抽出物及び６０％エタノール抽出物を５０重量％エタノールに溶解させて試料溶液を調製した。
各試料溶液５０μＬに、０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解した１０ｍＭ シュークロース又はマルトース溶液３００μＬを加えてよく混合し、３７℃で５分間プレインキュベートした。次いで、これに、α−グルコシダーゼ含有小腸液（ラット小腸アセトンパウダー１ｇを０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍＬに添加して、スターラーで攪拌（４℃、１時間）し、遠心分離（３，５００ｒｐｍ、１５分間）により分離した上澄液）３０μＬを加え、３７℃で３０分間反応させた。沸騰水上で３分間煮沸してから反応を停止させ、４℃で遠心分離し、上清中の反応生成物であるグルコースをグルコーステストワコー（和光純薬（株））により定量した。コントロールとして、試料溶液を添加せずに同様の酵素反応と反応生成物の分析を行い、試料溶液無添加時の反応生成物量に対する試料溶液添加時の反応生成物量の比率より、下記の計算式に基づいてα−グルコシダーゼ阻害率（％）を算出した。
【００４２】
阻害率（％）＝１−［（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）］×１００
【００４３】
上記式中、「Ａ０」は試料溶液を添加した場合のグルコース量（酵素反応開始前）、「Ａ１」は試料溶液を添加した場合のグルコース量（酵素反応開始後）、「Ａ２」は、コントロールのグルコース量（酵素反応開始前）、「Ａ３」はコントロールのグルコース量（酵素反応開始後）を表す。
【００４４】
試料溶液の試料濃度を５０〜４００μｇ／ｍＬに段階的に変化させて上記α−グルコシダーゼ阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料溶液の試料濃度（ＩＣ５０）（μｇ／ｍＬ）を求めた。その結果、ピーナッツ渋皮の水抽出物を用いた場合のＩＣ５０は、基質がシュークロースであるときには２８０μｇ／ｍＬ、基質がマルトースであるときには３１０μｇ／ｍＬ、ピーナッツ渋皮の６０％エタノール抽出物を用いた場合のＩＣ５０は、基質がシュークロースであるときには２２０μｇ／ｍＬ、基質がマルトースであるときには２４０μｇ／ｍＬであった。
【００４５】
この結果から、ピーナッツ渋皮抽出物がα−グルコシダーゼ阻害作用を有することが確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物のα−グルコシダーゼ阻害作用の強さは、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００４６】
〔試験例４〕α−アミラーゼ阻害活性試験
製造例１及び２で得られたピーナッツ渋皮の水抽出物及び６０％エタノール抽出物を水に溶解させて試料溶液を調製した。
各試料溶液５０μＬに、５０ｍＭ 酢酸緩衝液緩衝液（ｐＨ５．５）に溶解した０．５％可溶性澱粉溶液２５０μＬ、α−アミラーゼ溶液（人唾液由来）５０μＬ、２０ｍＭ 塩化カリウムと１００ｍＭ 塩化ナトリウムとを含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液緩衝液（ｐＨ５．５）５０μＬ、及び５０ｍＭ 酢酸緩衝液緩衝液（ｐＨ５．５）１００μＬを添加し、３７℃で１５分間反応させた。反応終了後、１．７ｍＭ ヨウ化カリウムと０．１７ｍＭ ヨウ素とを含む０．００１７Ｎ 塩酸溶液５ｍＬ加え、７００ｎｍの吸光度を測定した。コントロールとして、試料溶液を添加せずに同様の酵素反応と反応生成物の分析を行い、試料溶液無添加時の反応生成物量に対する試料溶液添加時の反応生成物量の比率より、下記の計算式に基づいてα−アミラーゼ阻害率（％）を算出した。
【００４７】
阻害率（％）＝１−［（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）］×１００
【００４８】
上記式中、「Ａ０」は試料溶液を添加した場合の吸光度（酵素反応開始前）、「Ａ１」は試料溶液を添加した場合の吸光度（酵素反応開始後）、「Ａ２」はコントロールの吸光度（酵素反応開始前）、「Ａ３」はコントロールの吸光度（酵素反応開始後）を表す。
【００４９】
試料溶液の試料濃度を２００〜２０００μｇ／ｍＬに段階的に変化させて上記α−アミラーゼ阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料溶液の試料濃度（ＩＣ５０）（μｇ／ｍＬ）を求めた。その結果、ピーナッツ渋皮の水抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１３００μｇ／ｍＬ、ピーナッツ渋皮の６０％エタノール抽出物を用いた場合のＩＣ５０は１０５０μｇ／ｍＬであった。
【００５０】
この結果から、ピーナッツ渋皮抽出物がα−アミラーゼ阻害作用を有することが確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物のα−アミラーゼ阻害作用の強さは、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００５１】
〔配合例１〕食パン
下記の原料を食パンの常法により、混合、発酵、オーブンし、抗肥満作用を有する食パンを製造した。
製造例２のピーナッツ渋皮抽出物 ２部
強力粉 ２５０部
砂糖 １５部
食塩 ２部
無塩バター ２０部
脱脂粉乳 ５部
ドライイースト ３部
水 ２００部
【００５２】
〔配合例２〕飴
下記の原料を飴製造の常法により、混合、濃縮、成形し、抗肥満作用を有する飴を製造した。
製造例２のピーナッツ渋皮抽出物 １部
ショ糖 ７０部
水飴 ３０部
クエン酸 １部
香料 ０．１部
水 １５部
【００５３】
〔配合例３〕果汁入り飲料
下記の原料を果汁入り飲料製造の常法により、混合、溶解、充填し、抗肥満作用を有する果汁入り飲料を製造した。
製造例１のピーナッツ渋皮抽出物 ０．５部
グレープフルーツ果汁 ０．３部
果糖ブドウ糖液糖 ５部
香料 ０．０１部
クエン酸ソーダ ０．１部
ビタミンＣ ０．１部
精製水 ９５部
【００５４】
〔配合例４〕混合茶
下記の原料をお茶の常法により、抽出、ろ過、充填し、抗肥満作用を有するお茶を製造した。
製造例１のピーナッツ渋皮抽出物 １部
ウーロン茶 ２部
ハトムギ茶 ２部
黄杞茶 ２部
ハブソウ ３部
精製水 ９０部
【００５５】
〔配合例５〕ペットフード
下記の原料をペットフード製造の常法により、混合、成形、乾燥し、抗肥満作用を有するペットフードを製造した。
製造例１のピーナッツ渋皮抽出物 ５ｇ
大豆粕 １０ｇ
大豆油 ５ｇ
魚粉 ５ｇ
炭酸カルシウム １ｇ
ビタミンＢ群コンプレックス ０．１ｇ
ビタミンＡＤＥプレミックス ０．１ｇ
【００５６】
【発明の効果】
本発明により、ピーナッツ渋皮抽出物を有効成分として含有する抗肥満用組成物が提供される。ピーナッツ渋皮抽出物は、糖質又は脂肪の代謝に関与するリパーゼ、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ、α−グルコシダーゼ又はα−アミラーゼ活性を阻害し、食事で摂取した糖質及び脂質の分解・吸収を抑制する。また、ピーナッツは、渋皮を剥がさずに食べることができる食品素材であるから、その渋皮抽出物の安全性に問題はなく、さらに、腸内有用細菌に対して望ましくない作用を示す恐れもない。したがって、ピーナッツ渋皮抽出物を有効成分として含有する本発明の抗肥満用組成物は、肥満の予防・治療に有用である。
Claims (3)
- ピーナッツ渋皮抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗肥満用組成物。
- 前記抽出物が、リパーゼ阻害作用、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、α−グルコシダーゼ阻害作用及びα−アミラーゼ阻害作用からなる群より選択される１種類以上の作用を有することを特徴とする請求項１記載の抗肥満用組成物。
- 前記組成物が、医薬組成物、飲食品組成物、飼料組成物又は化粧料組成物であることを特徴とする請求項１又は２記載の抗肥満用組成物。
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