JP2003533992A - ウイルスベクターによる遺伝子送達 - Google Patents

ウイルスベクターによる遺伝子送達

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Abstract

(57)【要約】 遺伝子送達法であって、バキュロウイルスベクター内に該遺伝子を供給し、該ベクターを身体の無血または通常無血の区画に適用することからなる方法。遺伝子産物の外膜周囲への送達のためのデバイスであって、それから該遺伝子が発現しうるバキュロウイルスベクター中に該遺伝子が供給されてなるデバイス。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （技術分野） 本発明はウイルスベクターを用いる遺伝子送達に関する。
【０００２】 （背景技術） 効率的な遺伝子移動は、血管性疾患（例えば血管形成術後の再狭窄、バイパス
形成術後のアテローム性動脈硬化症、末梢のアテローム性動脈硬化性疾患、血管
プロテーゼ吻合の狭窄および血栓形成）の治療のための有益な道具である。この
目的のために様々な技術が開発されてきた。例えば、イラ−ハーツラら（Yla-He
rttuala et al, J. Clin. Invest. 95：2692-8 （1995））およびライチネンら
（Laitinen et al, Hum. Gene. Ther. 8：1645-50 （1997））参照。 国際公開第98/20027号パンフレットは血管手術の間に、動脈遺伝子導入に使用
しうる外膜周囲カラー（periadventitial collar）を開示している。しかしなが
ら、より使いやすく効率の良い遺伝子導入ベクターに対して持続的な必要性があ
る。心血管への適用で有益な効果を奏するのに必要なのは、単に導入遺伝子の一
過性の発現のようだ（イラ−ハーツラら（Yla-Herttuala et al, Lancet 355：2
13-222 （2000））。
【０００３】 バキュロウイルス類はこれまで長期にわたってバイオ農薬および昆虫での効率
的な組換え蛋白の製造に使用されてきた。それらは、本質的に種特異性が高いこ
と、また無脊椎動物で増殖することが知られていないという理由で、通常安全と
考えられている。ビリオンが脊椎動物種由来のある種の細胞株に入ることは示さ
れているが、天然ウイルスを用いて遺伝子発現が検出されたとの証拠はない。
しかしながら、適当な真核性プロモーターを含有するオートグラファ・カリフォ
ルミカ（Autographa californica）多核性多角体病ウイルス（AcMNPV）は標的遺
伝子を効率よくある哺乳動物細胞型に導入し発現させることができる（例えば、
ホッフマンら（Hofmann et al, PNAS USA 92：10099-10103 （1995）参照）。加
えて、バルソウムら（Barsoum et al, Hum. Gene. Ther. 8：2011-8 （1997））
により、エンベロープに水疱性口内炎ウイルスC糖タンパクを有するバキュロウ
イルスは、ヒトへパトーマ細胞株の形質導入の効率が有意に増大し、バキュロウ
イルスにより形質導入することができる哺乳動物細胞型の範囲が拡大すると報告
した。バキュロウイルスによる哺乳動物細胞の安定した形質導入は、優勢な選択
マーカーをコードする発現カセットをバキュロウイルスゲノムに含有せしめるか
、バキュロウイルス−アデノ結合ハイブリッドウイルスベクターを用いるかのい
ずれで達成された（コンドレイら（Condreay et al, PNAS USA 96：127-132 （1
999））およびパランボら（Palombo et al, J. Virol. 72：5025-34 （1998）参
照）。
【０００４】 サンディッヒら（Sandig et al, Hum. Gene Ther. 7：1937-45 （1996））は
、バキュロウイルスを、全身性または内置性適用、ならびに肝臓実質への直接注
射によってマウスおよびラットでのインビボ遺伝子送達に用いる試みが不成功に
終わったと報告した。この理由の一つは恐らく血清補体系の古典経路によるバキ
ュロウイルスの不活化にあるだろう。国際公開第00/05394号パンフレットにはバ
キュロウイルスベクターとその脊椎動物の神経細胞への遺伝子導入における使用
が開示されている。
【０００５】 （発明の開示）発明の要約 バキュロウイルス類の不活化が回避可能であることが見出された。特に、バキ
ュロウイルスが、アデノウイルスに匹敵する効率で、外膜周囲遺伝子のウサギ頚
動脈への導入を媒介しうることが示された。組換えバキュロウイルスが取り扱い
容易で迅速に構築できること、多重度感染でさえ哺乳動物細胞に対する細胞毒性
が欠如していること、本質的に哺乳細胞内での複製能力を持たないこと、および
外来配列挿入容量が大きいことは、バキュロウイルスをインビボの遺伝子治療に
おいて極めて好適な道具にするものである。
【０００６】 本発明では、バキュロウイルスの有利な性質を、適当なベクター、即ち、それ
を（インビボまたはエックスビボで）血液の無い身体部位または基本的に血液の
無い身体部位に投与すると、それから遺伝子が発現されるベクターとして利用す
ることができる。即ち、外膜周囲またはより詳しくはカラー（collar）−媒介局
所遺伝子送達により、本質的に血清が無い状態での遺伝子導入が可能となり、そ
の結果血清成分による悪影響を回避できる。また、この新規な方法により、全身
性遺伝子送達が遭遇する他の２つの重要な問題、即ち、注射部位からの迅速なウ
イルスの再分配およびウイルス局所濃度の低下を回避できる。
【０００７】発明の説明 適当な送達システム、活性材料（物質）、処方、投薬量等は国際公開第98/200
27号パンフレットおよび国際公開第99/55315号パンフレットに記載されている（
これらの記載内容を参照して本明細書に組み込む）。即ち、例示にすぎないが、
本発明の送達ビークルはカラー（collar）またはラップ（wrap）であってよい。
これらの公表物に対して、遺伝子送達用ベクターはバキュロウイルスである。
【０００８】 バキュロウイルス類はもちろん既知である。そして、当業者ならば本発明にお
ける使用のための任意の適当なベクターを構築することができる。また、バキュ
ロウイルス生物学とAcMNPVゲノムに関する広範な知識が遺伝子導入に適用するた
めの改良された第二世代ウイルスの設計に役立つであろうことも明らかである。
構築の容易性、および大きい外来DNAフラグメント（＞２０ｋｂｐ）の収容能力
により、導入遺伝子のより安定で、一時的かつ細胞型特異的な発現制御と共に、
より拡大されたまたは標的細胞親和性（向性）を有するバキュロウイルスの開発
が可能になった。本発明に用いるための組換えバキュロウイルスは既知の方法で
治療用途の医薬として処方しうる。
【０００９】 本発明のための投与経路および投与部位として、眼内適用、関節内適用、表在
的な皮膚内適用、尿管、膀胱、ファローピウス管、胆嚢、脊髄、脳脊髄液小室、
胸膜腔および腹腔内空洞が挙げられる。使用した部位（実施例参照）は、動脈、
脳および骨格筋、例えば、例として、単球、衛星細胞および再生する筋芽細胞が
挙げられる。遺伝子送達は直接的な注射または様々なタイプのカテーテルを用い
て行うことができる。
【００１０】 もし適当なら、術中、身体の部分を「無血」にすることができる。この技術は
しばしば脚または腕の手術で用いられており、腕または大腿の周囲をきつく締め
付けることによって、血流を阻止する。次いで、身体の部分を生理食塩水で潅流
して血液を除去し、バキュロウイルスのトランスフェクションを行うことができ
る。
【００１１】 本発明はＶＥＧＦレセプターアゴニストの送達に用いることができる。例えば
、国際公開98/20027号パンフレットに詳細に記載されている。さらに、遺伝子を
適当に選択することにより、癌、例えば脳腫瘍の治療に用いることができる。
【００１２】 本発明のさらなる面では、移植器官および血管に関し、移植器官および血管は
生体外（ex vivo）で生理食塩水により潅流され生体外でバキュロウイルス注射
される。 以下の実施例により本発明を詳細に説明する。
【００１３】実施例１ 組換え型バキュロウイルスの調製 ウイルスは、導入ベクターpFASTBac1（pFB）（Gibco BRL, Life Technologies
, Gaithersburg, MD, USA）を用いて構築した。サイトメガロウイルス（CMV）
プロモーターを有する、核を標的とするβ−ガラクトシダーゼ（βnt−Gal）カ
セットをｐFBのStuI部位にポリヘドリンプロモーターに関して逆方向で挿入して
プラスミドpFBCMV-βntを生成した。
【００１４】 BacTo-BacTM Baculovirus Expression System（Gibco BRL）を用いて、組換え
型ウイルスを生成させた。ウイルスを細胞密度２×１０6細胞/mlで、スポドプテ
ラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda 9）（Ｓｆ９）浮遊培養（SF-900培
地、Gibco BRL）により３日間増幅した。培養物５０mlにつき、接種材料として
一次トランスフェクション上清２００μｌを用いた。増幅したウイルス１Lを得
るために、増幅ウイルスストック２mlを接種物として用いた。細胞培養培地を16
,000 gで２０分間、室温で遠心し、細胞デブリス（破片）を除去した。清澄化し
た上清を１.５ｍｌの２５％ショ糖／燐酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を下層に
入れた超遠心管に移し、遠心（120,000 g、４℃、1.5時間）してウイルスを濃縮
した。ウイルスのペレットを氷冷ＰＢＳ３５ｍｌに再懸濁し、３ｍｌの２５％シ
ョ糖／ＰＢＳを含有する超遠心管に移し、上記のごとくにして遠心した。最終の
ウイルスペレットを冷ＰＢＳ１０mlに再懸濁し、0.45μmフィルターでろ過し、
以後の使用のために、光から４℃で保護した。ウイルス力価をＳｆ９細胞による
プラークアッセイで決定した。ウイルス調製品をリポ多糖類と細菌学的汚染物質
に関して分析した。
【００１５】 組換えアデノウイルスの調製 ライチネンら（Laitinen、前傾）に記載されているようにしてアデノウイルス
（pCMVnlslacZAd5）をコードする核を標的とするＬａｃＺを構築し調製した。ラ
イチネンら（Laitinen et al, Hum. Gene Ther. 9：1481-6（1998））の記載に
従い、ウイルス調製品を組換えコンピテントウイルス、リポ多糖類および細菌学
的汚染物質に関して分析した。
【００１６】 インビトロでの遺伝子移入（導入） ウサギ大動脈細胞（RAASMC：Yla-Herttualaら（1995）、前掲）およびヒト癌
／内皮細胞様ＥＣＶ−３０４細胞（ATTC CRL-1998）を細胞密度10,000／ウエル
（Falcon Culture Slide, Becton Dickinson, Meylan, France）で平板培養した
。形質導入の前に、細胞を無血清培地（DMEM、100 units/ml ペニシリンおよび1
00μg/ml ストレプトマイシン、Gibco BRL）中で３時間付着させた。ウイルスを
ＭＯＩ２００または1000で培地に加え、細胞を３７℃で９０分間インキュベート
した。形質導入後、１０％ウシ胎仔血清含有増殖培地を１０ｍM ｎ−酪酸（Sigm
a、St. Louis、MD, USA）と一緒に、または無しで加えた。１８時間のインキュ
ベーション後、培地を除去し細胞をＰＢＳで３回洗浄した。細胞を1.２５％グル
タルアルデヒドで１５分間固定化しＰＢＳで３回洗浄した。Ｘ−Ｇａｌ （MBI F
ermentas,、Lithuania）染色液（1 mg/ml、2 mM MgCl2、5 mM K3Fe（CN）6、5 m
M K4Fe（CN）6、1×ＰＢＳ）を細胞に加え、３７℃で３時間インキュベートした
。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、さらに4% パラフォルムアルデヒド（PFA）で
１０分間固定化した。ＰＢＳで洗浄した後、細胞をメイヤーズカルマラム（Maye
rs Carmalum）で５分間カウンター染色した。Ｂｌｕｅ Ｘ−Ｇａｌ陽性細胞を計
数し形質導入効率を全細胞数に対する陽性細胞のパーセントで表した。
【００１７】 ＯＮＰＧアッセイ 形質導入されたRAASMC細胞におけるlacZにコードされているβ−ガラクトシダ
ーゼ活性を、ルポネンら（Ruponen et al, Biochim. Biophys. Acta 1415：331-
41 （1999））の記載に従い、比色基質、ｏ−ニトロフェニルβ‐Ｄガラクトピ
ラノシド（ONPG、Sigma）を用いて測定した。
【００１８】 インビトロ毒性アッセイ 細胞を１０％ウシ胎仔血清含有DMEMおよび抗生物質（100 units/mL ペニシリ
ンおよび100 μg/mL ストレプトマイシン）からなる増殖培地１００μｌを含有
する９６ウエルにより、細胞密度20,000個／ウエルで平板培養した。形質導入効
率アッセイに関してウイルス形質導入を行い、細胞を３７℃で48時間インキュベ
ートした。増殖培地を除去し細胞をＰＢＳで洗浄した。フェノールレッド不含で
ＭＴＴ溶液（3-（4,5−ジメチルチアゾリル−2）−2，5−ジフェニルテトラゾリ
ウム ブロミド、5 mg／ｍＬ、最終濃度0.3mg／ｍｌ）を含有する無血清DMEMを
加え、細胞を２時間インキュベートした。暗青色のホルマザン結晶を溶解するた
めにMTT溶液を除去し150μｌの1 M DMSOを各ウエルに加え、十分に撹拌混合した
。吸収を570nmで測定した。生存率を無ウイルスまたは無酪酸塩ウエル（１００
％ウエル）との比較で計算した。
【００１９】 動物実験 雄性ニュージーランドホワイト（NZW）ウサギ（n=12、2.8-3.7 kg）を用いた
。フェンタニル−フルアニゾン（0.3 ml/kg、s.c.、Janssen Pharmaceutica、Be
erse、 Belgium）とミダゾラム（1.5 mg/kg、i.m.、Roche、Basel、Switzerland
）を用いて麻酔した。左および右頸動脈を正中頸部切開により露出させた。動脈
を注意深く周辺組織から分離し、その周囲に長さ３ｃｍのシラスチックカラー（
ライチネンら（1997）、前掲参照）を配した。ライチネンら（１９９７年、前掲
）の方法と正確に同一の方法で、遺伝子導入のために、カラー取り付け後５日目
にウサギを再度麻酔し、プラスミド／リポソーム、シュードタイプレトロウイル
スおよびアデノウイルスのトランスフェクション効率と比較した。カラーを開放
し１×１０9 pfuのアデノウイルスまたはバキュロウイルスを含有する遺伝子導
入溶液500μｌで満たした。各動物に、左頸動脈をアデノウイルス、右頸動脈を
バキュロウイルスによる処置用に用いた。遺伝子導入から３、7、14日目に4羽の
ウサギを犠牲にし組織学的分析のために動脈を採取した。全動物工程は承認され
ていた。
【００２０】 組織学的分析 頸動脈を3等分した。近位第3部は4% PFA／15%スクロース（pH 7.4）中、4時間
浸漬固定化し、１５％スクロース（pH 7.4）で一夜リンスしパラフィン包埋した
。中間部は4% PFA/ＰＢＳ（pH 7.4）で30分間浸漬固定化しＰＢＳ（pH 7.2）で
リンスし、OCT化合物（Miles Scientific、Naperville、IL、USA）に包埋した。
遠位部分はmRNAの単離と逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）用に液体窒
素中で急速凍結し−７０℃で保存した。
【００２１】 β−ガラクトシダーゼ陽性細胞を同定するために無作為に選択した各ウサギか
ら得た凍結切片（１０μm）をＸ−Ｇａｌ（MBI Fermentas）で18時間染色した。
遺伝子導入効率は、2人の独立した観察者によって、無作為に選択した８切片に
おける、外膜または全動脈壁１ｍｍ2あたりのＸ-Gal陽性細胞として計算した。
結果の平均値±標準誤差（SEM）が報告されている。イラ-ハチュラ（Yla-Herttu
ala （1995）前掲）が記載したようにして、パラフィン切片を用いて内皮細胞（
CD-31、1：50希釈、Dako、Hamburg、Germany）、マクロファージ（RAM-11、1：1
00希釈、Dako）、平滑筋細胞（HHF-35、1：50希釈、Dako）およびＴ−細胞（MCA
-805、1：100希釈、Dako）の免疫細胞化学的検出を行った。免疫染色のための対
照は、第１抗体が除外され、免疫グロブリンに適合するクラスおよび種とインキ
ュベートした切片からなるものであった。形態計測および画像分析はヘマトキシ
リン‐エオシン染色パラフィン切片およびイメージ−Pro PlusTMソフトウエア
を使用してオリンパスAX70顕微鏡（Olympus光学、日本）で行った。
【００２２】 ＲＴ−ＰＣＲ 形質導入した頸動脈セグメントからTrizol試薬（Gibco-BRL）を用いてTotal
RNAを抽出し過剰量のRQ1 RNAse-不含DNAse（Promega, Madison, WI, USA）で処
理した。cDNA合成にはM-MuIV逆転写酵素（MBI Fermentas）を用いた。lacZのた
めのプライマー類（それぞれ20 pmol）を、５’プライマーをCMVプロモーターか
ら選択し、３’プライマーをコーディング領域から選択することにより、内因性
遺伝子と導入遺伝子とを区別するように設計した。ダイナザイム（Dynazyme）ポ
リメラーゼ（Finnzymes、Espoo、Finland）を増幅に用いた。
【００２３】 lacZ増幅のためのプライマーは、順方向プライマーがSEQ ID NO：1（アデノウ
イルス（A））およびSEQ ID NO：2（バキュロウイルス（B））であり、両者のた
めの逆方向プライマーがSEQ ID NO：3である。ホットスタート（９5℃で5分間、
58℃で3分間）の後、以下の工程（各サイクルは95℃で１分間、58℃で2分間、72
℃で3分間）を３９サイクル、最後に７２℃で１０分間の伸長反応を行った。第
１ＰＣＲ生成物５μｌを用いて第２ＰＣＲを、順方向プライマーSEQ ID NO：4（
A）およびSEQ ID NO：5（B）を用いて行った。両者のための逆方向プライマーは
SEQ ID NO：6であった。第１PCRのサイクルは95℃、5分間の後、最初のPCRと同
様のサイクルを20サイクル行った。
【００２４】 インビトロでの遺伝子導入 バキュロウイルスストックを試験するために、10 mM 酪酸ナトリウムの存在下
または不在下、RAASMCおよびＥＣＶ−３０４細胞を感染多重度（ＭＯＩ）200ま
たは1000 pfu／細胞で形質導入し、Ｘ−Ｇａｌ陽性細胞の割合（％）を数えた。
結果を同一条件下、lacZ−アデノウイルスで形質導入した細胞と比較した（表１
）。公表された結果（コンドレイら（Condreay）、前掲）と一致して細胞培養に
酪酸塩を添加すると、特にバキュロウイルスを用いた場合、導入遺伝子の発現が
顕著に増加した。ＥＣＶ−３０４細胞（ＭＯＩ１０００で２１%が感染）よりもR
AASMC細胞（ＭＯＩ１０００で91%が感染）の方がバキュロウイルスによる形質導
入をより受けやすいようだった。RAASMC細胞内でのβ−ガラクトシダーゼ活性の
レベルをo−ニトロフェニルβ−D−ガラクトピラノシド（ONPG）を用いる定量的
な生物化学的アッセイにより測定した。結果はバキュロウイルスで形質導入した
細胞中で、酪酸塩処理後に導入遺伝子の発現増大を示した、Ｘ−Ｇａｌ染色と一
致していた。
【００２５】 インビトロ毒性 3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−2,5−ジフェニルテトラゾリウム
ブロミド（MTT）アッセイを用いてウイルス調製品の毒性を測定した（表２）。
バキュロウイルス、アデノウイルスのいずれも、酪酸塩の不在下、ＭＯＩ２００
または１０００でRAASMCなんら主要な細胞毒性を持たなかった。しかしながら酪
酸塩の共存下では、バキュロウイルスをＭＯＩ１０００で用いるとこれらの細胞
に多少の細胞毒性が検出された。酪酸塩の存在下ＭＯＩ１０００で酪酸塩の存在
下ではバキュロウイルスによる細胞毒性効果が検出されなかった（データ示さず
）ことを除き、同様の結果が一次ＷＨＨＬ（Watanabe遺伝性高脂血症）ウサギ線
維芽細胞でも得られた。
【００２６】 インビボでの遺伝子導入 バキュロウイルスをインビボで遺伝子導入に用いることができるかどうかを決
定するために遺伝子導入後３、７、１４日目にNZWウサギを殺した。β−ガラク
トシダーゼ発現が核を標的としているので、極めて強いＸ−Ｇａｌ染色が形質導
入細胞の核に局在していた。バキュロウイルスで形質導入した（１×109 pfu／
動脈）頸動脈からβ−ガラクトシダーゼ活性陽性細胞の数を計算し同様の処理を
したアデノウイルスで形質導入した動脈と比較した。両ウイルス共にマーカー遺
伝子の血管壁への送達を媒介した。バキュロウイルス処置動脈とアデノウイルス
処置動脈の、３日目の導入遺伝子陽性細胞の数、β−ガラクトシダーゼ陽性細胞
／mm2 外膜（11±4および19±6／mm2 全動脈壁）は、それぞれ12±5および23±7
であった。７日目の対応する値は17±6および22±7（15±5および18±6）であっ
た。１４日目の値は0.1±0および0.2±0.1（0.1±0および0.1±０.1）であった
。このように、バキュロウイルス媒介遺伝子発現は、アデノウイルス媒介遺伝子
導入と同様の効率および時間傾向で、一時的なものであった。動脈壁での導入遺
伝子発現をRT-PCRによっても検証した。
【００２７】 脈管／媒体比（全動脈）の平均値は0.18±0.03（バキュロウイルス処置動脈）
および0.12±0.01（アデノウイルス処置動脈）であり、これは処置手順が血管壁
を損傷しなかったことを示している。動脈の組織学的所見は、遺伝子導入７日後
に外膜の外側ではβ−ガラクトシダーゼ活性を検出しなかった。両ウイルスに関
して、RAM-11免疫染色およびMCA-805免疫染色で、それぞれ形質導入動脈におい
てマクロファージの侵入（浸潤）と幾らかのＴ細胞が、検出された。実験を通し
て動脈構造および内皮細胞は無傷のままであった。全ての時点での組織学的所見
を表３にまとめた。
【００２８】
【表１】
【００２９】
【表２】
【００３０】
【表３】
【００３１】 実施例２ 基本的に実施例１と同様の手順を用いてバキュロウイルス遺伝子導入は、脳お
よび骨格筋でも有用であることが示された。バキュロウイルス／lacZを用いて、
ラット脳は様々なタイプの脳細胞、特に脳室の脈絡叢細胞および内皮細胞で陽性
トランスフェクションを示した。トランスフェクトされた細胞の特徴はアデノウ
イルスのそれとは明らかに異なっていた。
【００３２】 さらに、バキュロウイルストランスフェクションは、ウサギ平滑筋でも認めら
れた。lacZ（1.8×1010 PFU）をコードするバキュロウイルスを、25G針を介して
直接NZWウサギの閉殻筋に注射した。遺伝子導入後７日目に組織サンプルを採取
し、一夜Ｘ−Ｇａｌ染色を行った。これらの結果は、バキュロウイルスが動脈細
胞のみならず、哺乳動物の幾つかの細胞型のトランスフェクションに使用できる
ことを明らかに示している。
【００３３】 添付の図面は核を標的とするβ−ガラクトシダーゼをコードするバキュロウイ
ルストランスフェクションカセットの構築を図示している。基本的に、これはポ
リヘドリンプロモーターを有する標準的な公有のバキュロウイルスであり、それ
にはクローンした制限部位とCMV-NT lacZ発現カセットが挿入されている。このl
acZ発現カセットはポリヒドリンプロモーターと反対方向に向けられている。CMV
−nt lacZ発現カセットの配列はSEQ ID NO：7である。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ， ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，Ｉ Ｎ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ， ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 カリ・イー・アイレンネ フィンランド、エフイーエン−70211クオ ピオ、ペー・オー・ボックス1627、ユニバ ーシティ・オブ・クオピオ、アー・イー・ ビルタネン・インスティテュート Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA20 BA80 CA02 CA12 DA02 DA03 DA20 EA02 GA11 GA25 HA17 HA20 4C084 AA13 AA17 NA13 ZB262 ZC422 4C087 AA01 AA02 BC83 CA12 NA13 ZB26 ZC42

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 遺伝子産物を送達する方法であって、バキュロウイルスベク
    ター内に該遺伝子を供給し、該ベクターを身体の無血または通常無血の区画に適
    用することからなる方法。
  2. 【請求項２】 外膜周囲への送達である、請求項１記載の方法。
  3. 【請求項３】 遺伝子産物がＶＥＧＦレセプターのアゴニストである、請求
    項１または２記載の方法。
  4. 【請求項４】 内膜過形成の治療のための方法である、請求項１〜３のいず
    れかに記載の方法。
  5. 【請求項５】 区画が動脈細胞を含む、請求項１または２に記載の方法。
  6. 【請求項６】 区画が脳細胞を含む、請求項１または２に記載の方法。
  7. 【請求項７】 区画が骨格筋を含む、請求項１または２に記載の方法。 項１または２記載の方法。
  8. 【請求項８】 遺伝子産物の外膜周囲への送達のためのデバイスであって、
    それから該遺伝子が発現しうるバキュロウイルスベクター中に該遺伝子が供給さ
    れてなるデバイス。
  9. 【請求項９】 カラーの形態である請求項８記載のデバイス。
  10. 【請求項１０】 ラップの形態である請求項８のデバイス。
  11. 【請求項１１】 遺伝子産物がＶＥＧＦレセプターのアゴニストである、請
    求項８〜１０のいずれかに記載のデバイス。
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