JP2003523768A - インテグリンアンタゴニスト - Google Patents

インテグリンアンタゴニスト

Info

Publication number
JP2003523768A
JP2003523768A JP2001562679A JP2001562679A JP2003523768A JP 2003523768 A JP2003523768 A JP 2003523768A JP 2001562679 A JP2001562679 A JP 2001562679A JP 2001562679 A JP2001562679 A JP 2001562679A JP 2003523768 A JP2003523768 A JP 2003523768A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
adam
seq
amino acids
disintegrin domain
polypeptide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2001562679A
Other languages
English (en)
Inventor
ファンスロー，ウィリアム・シー，ザ・サード
セレッティ，ダグラス・パット
ポインデクスター，カート・マシュー
ブラック，ロイ・アルヴィン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Immunex Corp
Original Assignee
Immunex Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immunex Corp filed Critical Immunex Corp
Publication of JP2003523768A publication Critical patent/JP2003523768A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6489—Metalloendopeptidases (3.4.24)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Abstract

(57)【要約】 本発明は、インテグリンの生物学的活性を阻害し、内皮細胞遊走を阻害し、そして血管形成を阻害する方法および組成物を提供する。特に、本発明は、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインを含む組成物および前記組成物を用いる方法を提供する。好ましい態様において、本発明の方法および組成物を用いて、血管形成を阻害し、そして血管形成に仲介される疾患または状態を処置する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 関連出願に対するクロスレファレンス 本出願は、本明細書にその内容が援用される、係属中の米国仮出願第６０／１
８４，８６５号、２０００年２月２５日提出の優先権を請求する。
【０００２】 発明の分野 本発明は、インテグリンおよびそのリガンド間の相互作用をアンタゴナイズす
るのに有用な方法および組成物に関する。特に、本発明は、インテグリンおよび
そのリガンド間の相互作用をアンタゴナイズするための、ＡＤＡＭディスインテ
グリンドメインの使用に関する。
【０００３】 発明の背景 Ａ．インテグリンおよびディスインテグリン インテグリンは、細胞間（細胞−細胞接着）並びに細胞および細胞外マトリッ
クスタンパク質間（細胞−ＥＣＭ接着）の接着を仲介する、細胞表面タンパク質
のファミリーである。インテグリンは、非共有結合したαおよびβサブユニット
で構成されるヘテロ二量体構造である。ヒトにおいて、少なくとも１５の異なる
αサブユニットおよび８の異なるβサブユニットが組み合わされ、多様な生物学
的活性およびリガンド特異性を持つインテグリンが形成される。インテグリンは
、胚発生、血小板凝集、免疫反応、組織修復およびリモデリング、骨吸収、並び
に腫瘍浸潤および転移を含む、生物学的過程に重要な役割を果たす。インテグリ
ンは、したがって、ヒト疾患における療法的介入の重要な標的である。
【０００４】 ディスインテグリンは、低分子量、可溶性、システインリッチペプチドのファ
ミリーであり、ヘビ毒から単離されてきている（Ｎｉｅｗｉａｒｏｗｓｋｉら， Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ３１（４）：２８９， １
９９４に概説される）。ヘビ毒ディスインテグリンは、典型的には、ＲＧＤ（Ａ
ｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ、配列番号１９）モチーフを含む。ＲＧＤモチーフは、多
くのインテグリンに認識され、そしてフィブロネクチン、ビトロネクチン、およ
びフォンウィルブランド因子を含む、いくつかのインテグリンリガンドに存在す
る。ディスインテグリンは、細胞表面インテグリンのそのリガンドへの結合を阻
害することによって、正常の接着過程を破壊する。
【０００５】 ディスインテグリン様ドメインは、膜貫通タンパク質のＡＤＡＭファミリーを
含む、無脊椎動物および脊椎動物両方に由来する細胞タンパク質で同定されてき
ている（例えばＷｅｓｔｃａｍｐおよびＢｌｏｂｅｌ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ
． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１：２７４８， １９９４；Ｗｏｌｆｓ
ｂｅｒｇら， Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ． １６９：３７８， １９９５；Ａｌｆａ
ｎｄａｒｉら， Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ． １８２：３１４， １９９７を参照さ
れたい）。
【０００６】 Ｂ．ＡＤＡＭ ＭＤＣとも呼ばれてきているＡＤＡＭは、Ｉ型膜貫通システインリッチ糖タン
パク質のファミリーである（Ｗｅｓｋａｍｐら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａ
ｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９１：２７４８， １９９４；Ｗｏｌｆｓｂｅ
ｒｇら， Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ． １６９：３７８， １９９５）。ＡＤＡＭの
多ドメイン構造には、典型的には、アミノ末端メタロプロテアーゼドメイン、デ
ィスインテグリンドメイン、システインリッチ領域（ディスインテグリンドメイ
ンおよび膜貫通ドメイン間の領域）、膜貫通領域、および細胞質ドメインが含ま
れる。多様な動物種で、少なくとも３０のＡＤＡＭファミリーメンバーが同定さ
れてきている。ＡＤＡＭの構造は、これらが、細胞接着、細胞融合、シグナル伝
達、およびタンパク質分解を含む、多様な生物学的過程に関与している可能性が
あることを示唆する。ＡＤＡＭファミリーのメンバーは、実際、精子−卵結合お
よび融合、筋管形成、神経形成、およびタンパク質分解に役割を果たすことが示
されてきている。
【０００７】 ＭＤＣ−１５またはメターギディン（ｍｅｔａｒｇｉｄｉｎ）とも呼ばれるＡ
ＤＡＭ−１５は、現在までに、そのディスインテグリンドメイン内にＲＧＤモチ
ーフを含むと同定されている、唯一のＡＤＡＭである。Ｚｈａｎｇら（Ｊ． Ｂ
ｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７３（１３）：７３４５， １９９８）は、グルタチ
オンＳ−トランスフェラーゼ融合タンパク質として大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）で
発現させた、ＡＤＡＭ−１５の単離ディスインテグリンドメインが、αvβ3イン
テグリンと特異的に相互作用し、そしてその相互作用はＲＧＤトリペプチド配列
に仲介されると報告している。組換え融合タンパク質は、αIIbβ3およびα5β1 を含む、試験した他のインテグリンと相互作用しなかった。Ｎａｔｈら（Ｊ．
Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ １１２：５７９， １９９９）は、ＣＯＳ細胞中の
Ｆｃ融合タンパク質として発現させた全ＡＤＡＭ−１５細胞外ドメインが、造血
細胞上のαvβ3およびα5β1インテグリンと相互作用し、そしてその相互作用は
ＲＧＤトリペプチド配列に仲介されると報告している。ＺｈａｎｇらおよびＮａ
ｔｈらは、ＡＤＡＭ−１５およびαvβ3インテグリン間のＲＧＤ依存相互作用は
、悪性腫瘍および血管形成などの過程における役割を示唆すると解説している。
【０００８】 Ｃ．血管形成 新規血管の生成である血管形成は、内因性の陽性および陰性制御分子に反応し
て、内皮細胞および平滑筋細胞が増殖し、遊走し、そして集合して管を形成する
、空間的および時間的に制御された過程である。血管形成は、正常生理および病
的生理両方において、重要な役割を果たす。
【０００９】 正常生理条件下で、血管形成は、胎児および胚発生、創傷治癒、臓器再生、並
びに子宮内膜、黄体、および胎盤の形成を含む、メス生殖リモデリングに関与す
る。血管形成は、正常条件下で、特に成体動物において、厳しく制御され、そし
て制御調節の撹乱は、病的血管形成を導く可能性がある。
【００１０】 病的血管形成は、炎症性疾患、特定の目の障害、および癌の発現および／また
は進行に関連付けられてきている。特に、いくつかの系列の証拠は、血管形成が
、固形腫瘍の増殖および持続、並びにその転移に必須であるという概念を支持す
る（例えばＦｏｌｋｍａｎ， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ２８５：１
１８２， １９７１；Ｆｏｌｋｍａｎら， Ｎａｔｕｒｅ ３３９：５８， １
９８９；Ｋｉｍら， Ｎａｔｕｒｅ ３６２：８４１， １９９３；Ｈｏｒｉら
， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５１：６１８０， １９９１；Ｚｅｔｔｅｒ，
Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｍｅｄ． ４９：４０７， １９９８を参照されたい
）。新規血管の形成は、増殖する腫瘍に、酸素、栄養素、廃棄物除去、および浸
潤細胞が循環系に進入し、そして遠隔転移を確立する導管を提供する。多様な種
類の血管形成阻害剤が、現在、開発されており、そして癌（例えばＢｅｒｇｅｒ
ｓら， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：８０８， １９９９を参照されたい）および
他の型の病的血管形成の予防（例えば悪性前状態の処置）、介入（例えば小さい
腫瘍の処置）、および退行（例えば大きい腫瘍の処置）に関して試験されている
。内皮細胞遊走、増殖、および形態形成を含む、血管形成過程の多くの段階は、
血管細胞接着を必要とするため、特定のインテグリンアンタゴニストが抗血管形
成剤として試験されてきている。
【００１１】 αvβ3インテグリンを含め、いくつかのインテグリンが、培養内皮細胞および
平滑筋細胞の表面上に発現される。αvβ3インテグリンは、フォンウィルブラン
ド因子、フィブリン、フィブリノーゲン、およびフィブロネクチンの内皮細胞受
容体であり、そして血管形成性血管組織のマーカーである。Ｂｒｏｏｋｓらは、
αvβ3インテグリンに対するモノクローナル抗体及び、環状ペプチド阻害剤は血
管形成を妨げ、そしてαvβ3抗体が、腫瘍退行を促進すると報告している（Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２６４：５６９， １９９４；Ｃｅｌｌ ７９：１１５７， １９
９４）。これらの結果は、αvβ3インテグリンが、病的血管形成に特徴付けられ
る疾患の有用な療法標的であることを示唆する。
【００１２】 インテグリンおよびそのリガンド間の相互作用をアンタゴナイズする、さらな
る組成物および方法に対する多大な必要性がある。特に、病的血管形成に依存す
る疾患過程の予防、抑止、および緩和のため、血管形成を阻害する、さらなる組
成物および方法に対する多大な必要性がある。
【００１３】 発明の概要 本発明は、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインが、インテグリンの生物学的
活性を阻害し、そして内皮細胞遊走および血管形成を阻害するのに有用であると
いう発見に基づき、この発見は、これらの阻害活性が、ＲＧＤモチーフを欠くＡ
ＤＡＭディスインテグリンドメイン内にあるという、予期されない発見を含む。
【００１４】 本発明は、インテグリンのそのリガンドへの結合をアンタゴナイズし、そして
それによって、該インテグリンの生物学的活性を阻害する方法であって、インテ
グリンを、有効量のＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドと接触さ
せることを含む、前記方法に関する。本発明はさらに、内皮細胞遊走を阻害する
方法および血管形成を阻害する方法であって、有効量のＡＤＡＭディスインテグ
リンドメインポリペプチドを投与することを含む、前記方法に関する。いくつか
の態様において、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドは、多量体
、好ましくは、ロイシンジッパー多量体またはＦｃポリペプチドの形である。い
くつかの態様において、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインは、ヒトＡＤＡＭ
由来であり、そして好ましくは、ＡＤＡＭ−８、ＡＤＡＭ−９、ＡＤＡＭ−１０
、ＡＤＡＭ−１５、ＡＤＡＭ−１７、ＡＤＡＭ−２０、ＡＤＡＭ−２１、ＡＤＡ
Ｍ−２２、ＡＤＡＭ−２３、またはＡＤＡＭ−２９由来である。ＡＤＡＭディス
インテグリンドメインは、好ましくは、組換え細胞内で産生され、そして好まし
くは、薬学的に許容しうるキャリアーを含む組成物中に存在する。
【００１５】 いくつかの好ましい態様において、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリ
ペプチドは：配列番号２のアミノ酸２３−２６４、配列番号４のアミノ酸２３−
３０３、配列番号６のアミノ酸２３−２３５、配列番号８のアミノ酸２３−２９
２、配列番号１０のアミノ酸２３−２１６、配列番号１２のアミノ酸２３−３０
５、配列番号１４のアミノ酸２３−２９３、配列番号１６のアミノ酸２３−３１
２、配列番号１８のアミノ酸２３−３１０、および配列番号２２のアミノ酸２３
−２９８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかのより好まし
い態様において、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドは：配列番
号２のアミノ酸３４−９１、配列番号４のアミノ酸３４−９２、配列番号６のア
ミノ酸３４−９９、配列番号８のアミノ酸３４−９２、配列番号１０のアミノ酸
３４−９３、配列番号１２のアミノ酸３４−９１、配列番号１４のアミノ酸３４
−９１、配列番号１６のアミノ酸３４−９２、配列番号１８のアミノ酸３４−９
１、および配列番号２２のアミノ酸３４−９１からなる群より選択されるアミノ
酸配列を含む。いくつかの最も好ましい態様において、ＡＤＡＭディスインテグ
リンドメインポリペプチドは：配列番号２のアミノ酸７８−９１、配列番号４の
アミノ酸７９−９２、配列番号６のアミノ酸８７−９９、配列番号８のアミノ酸
７９−９２、配列番号１０のアミノ酸７９−９３、配列番号１２のアミノ酸７８
−９１、配列番号１４のアミノ酸７８−９１、配列番号１６のアミノ酸７９−９
２、配列番号１８のアミノ酸７８−９１、および配列番号２２のアミノ酸７８−
９１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１６】 いくつかの態様において、療法有効量のＡＤＡＭディスインテグリンドメイン
を、こうした処置が必要な哺乳動物に投与する。好ましい態様において、哺乳動
物は、血管形成に仲介される状態、目の障害、悪性または転移性状態（ｃｏｎｄ
ｉｔｉｏｎ）、炎症性疾患、骨粗しょう症および加速された骨吸収に仲介される
他の状態、再狭窄、不適切な血小板活性化、補充（ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ）、
または凝集、血栓症、あるいは組織修復または創傷治癒を必要とする状態に罹患
している。ＡＤＡＭディスインテグリンドメインは、いくつかの態様において、
放射線療法と組み合わせて、および／または１つ若しくはそれより多くのさらな
る療法剤と組み合わせて、投与される。
【００１７】 本発明はまた、インテグリン生物学的活性を調節するか、インテグリンおよび
ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン間の相互作用を調節するか、内皮細胞遊走
を阻害するか、または血管形成を阻害する化合物を同定する方法であって、試験
化合物を、インテグリンまたは内皮細胞および該インテグリンまたは内皮細胞に
結合するＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドと合わせ、そして試
験化合物が、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドのインテグリン
または内皮細胞への結合を改変するかどうかを決定することを含む、前記方法も
含む。
【００１８】 本発明のこれらの側面および他の側面は、以下の詳細な説明、実施例、および
請求の範囲を参照した際、明らかになるであろう。 発明の詳細な説明 Ａ．本明細書に用いられる略語および用語 「４−１ＢＢ」および「４−１ＢＢリガンド」（４−１ＢＢ−Ｌ）は、とりわ
け米国特許第５，６７４，７０４号に記載されるポリペプチドであり、可溶性型
を含む。
【００１９】 「ＡＤＡＭ」は、ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼドメインを
有する膜貫通糖タンパク質のファミリーであり、ＭＤＣ、メタロプロテアーゼ／
ディスインテグリン／システインリッチタンパク質とも呼ばれる。
【００２０】 「ディス」は、ディスインテグリンドメインであり；「ＡＤＡＭディス」は、
ＡＤＡＭディスインテグリンドメインである。 「ＣＤ４０リガンド」（ＣＤ４０Ｌ）は、とりわけ米国特許第５，７１６，８
０５号に記載されるポリペプチドであり、可溶性型を含む。
【００２１】 「ＣＤ１４８」は、プロテインチロシンホスファターゼであり、ＤＥＰ−１、
ＥＣＲＴＰ、およびＰＴＰＲＪとも呼ばれる。ＣＤ１４８結合タンパク質は、Ｄ
ａｎｉｅｌら、ＰＣＴ公報第ＷＯ ００／１５２５８号、２０００年３月２３日
に記載される。
【００２２】 「ＤＭＥＭ」は、ダルベッコの修飾イーグル培地である。 「ＦＡＣＳ」は、蛍光活性化細胞分析分離である。 「Ｆｌｔ３Ｌ」は、Ｆｌｔ３リガンド、とりわけ米国特許第５，５５４，５１
２号に記載されるポリペプチドであり、可溶性型を含む。
【００２３】 「ＨＲＭＥＣ」は、ヒト腎臓微小血管内皮細胞である。 「ＨＭＶＥＣ−ｄ」は、ヒト真皮微小血管内皮細胞である。 「ｍＡｂ」はモノクローナル抗体である。
【００２４】 「ＭＤＣ」は、メタロプロテアーゼおよびディスインテグリンドメインを有す
るシステインリッチタンパク質のファミリーであり、ＡＤＡＭとも呼ばれる。 「ネクチン−３」は、ネクチンファミリー内の細胞接着分子である（とりわけ
Ｓａｔｏｈ−Ｈｏｒｉｋａｗａら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７５（
１４）：１０２９１， ２０００に記載される）。ヒトネクチン−３核酸および
ポリペプチド配列のＧｅｎＢａｎｋ寄託番号は、それぞれ、ＡＦ２８２８７４お
よびＡＡＦ９７５９７である（Ｒｅｙｍｏｎｄら、２０００）。
【００２５】 「ＰＭＡ」は、ホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテートである。 「Ｔｅｋ」は、Ｔｉｅ２およびｏｒｋとも呼ばれてきており、主に血管内皮で
発現される受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である。ヒトＴｅｋ（ｏｒｋ）の
分子クローニングは、Ｚｉｅｇｌｅｒ、米国特許第５，４４７，８６０号に記載
されている。「Ｔｅｋアンタゴニスト」は、とりわけＣｅｒｒｅｔｔｉら、ＰＣ
Ｔ公報第ＷＯ ００／７５３２３号、２０００年１２月１４日に記載される。
【００２６】 「ＴＮＦ」は、腫瘍壊死因子である。「ＴＮＦＲ」は、腫瘍壊死因子受容体で
あり、可溶性型を含む。「ＴＮＦＲ／Ｆｃ」は、腫瘍壊死因子受容体−Ｆｃ融合
ポリペプチドである。
【００２７】 「ＴＲＡＩＬ」は、ＴＮＦファミリー中のＩＩ型膜貫通ポリペプチドである、
ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンドであり、とりわけ米国特許第５，７６３，
２２３号に記載され、可溶性型を含む。
【００２８】 「ＴＷＥＡＫ」は、ＴＮＦファミリー中のＩＩ型膜貫通ポリペプチドである、
アポトーシスのＴＮＦ−弱エフェクターであり、とりわけＣｈｉｃｈｅｐｏｒｔ
ｉｃｈｅら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７２（５１）：３２４０１
， １９９７に記載され、可溶性型を含む。「ＴＷＥＡＫ−Ｒ」は「ＴＷＥＡＫ
受容体」であり、とりわけ米国特許出願第６０／１７２，８７８号および第６０
／２０３，３４７号、およびＦｅｎｇら， Ａｍ． Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ． １
５６（４）：１２５３， ２０００に記載され、可溶性型を含む。ＴＷＥＡＫ−
Ｒ／Ｆｃは、ＴＷＥＡＫ受容体−Ｆｃ融合ポリペプチドである。
【００２９】 「ＶＥＧＦ」は、ＶＰＦまたは血管透過性因子としても知られる、血管内皮増
殖因子である。 Ｂ．ＡＤＡＭポリペプチドおよびＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリ ペプチド 少なくとも３０のＡＤＡＭが記載されてきている。表１は、選択されたヒトＡ
ＤＡＭに関する参考情報を提供する。
【００３０】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインは、ヘビ毒ディスインテグリンに配列相
同性を示し、そしてシステインのフレームワークによって特徴付けられる。例え
ば、典型的なディスインテグリン配列は：
【００３１】
【化１】
【００３２】 のようなフレームワークを含む。 いくつかのＡＤＡＭディスインテグリンドメインを表２および配列表に示す。 本発明は、インテグリン結合活性、内皮細胞遊走の阻害、および血管形成の阻
害からなる群より選択される、少なくとも１つの活性を保持する、多様な型のＡ
ＤＡＭディスインテグリンドメインの使用を含む。用語「ＡＤＡＭディスインテ
グリンドメインポリペプチド」は、他のＡＤＡＭドメイン（システインリッチ領
域など）を含み、または含まず、天然ＡＤＡＭディスインテグリンドメインのす
べてまたは一部を含むポリペプチドと共に、限定されるわけではないが：（ａ）
断片、（ｂ）変異体、（ｃ）誘導体、（ｄ）融合ポリペプチド、および（ｅ）多
量体型（多量体）を含む関連型を含むよう、意図される。これらの関連型が、イ
ンテグリン結合、内皮細胞遊走、および／または血管形成を阻害する能力は、以
下に例示されるものなどの方法を用いることによって、または当該技術分野に知
られる他のアッセイを用いることによって、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉ
ｖｏで決定することが可能である。
【００３３】 表１ ＡＤＡＭファミリーの選択されたメンバー
【００３４】
【表１】
【００３５】 用語「変異体」は、天然ＡＤＡＭディスインテグリンドメインに実質的に相同
であるが、1つ若しくはそれより多くの欠失、挿入または置換のため、天然ＡＤ
ＡＭディスインテグリンドメインのものと異なるアミノ酸配列を有する、ポリペ
プチドを含む。特定の態様には、限定されるわけではないが、天然ＡＤＡＭディ
スインテグリンドメイン配列と比較した際、アミノ酸残基の１ないし１０の欠失
、挿入または置換を含む、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドが
含まれる。ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの変異体として含
まれるのは、対立遺伝子型および選択的スプライシング型などの天然存在である
変異体と共に、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドのアミノ酸配
列またはＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドをコードする核酸の
ヌクレオチド配列を修飾することによって、構築されている変異体である。
【００３６】 一般的に、天然ポリペプチドに存在する１またはそれより多くのアミノ酸の置
換は、保存的に行うべきである。保存的置換の例には、活性ドメイン（類）の外
部のアミノ酸の置換、およびＡＤＡＭディスインテグリンドメインの二次および
／または三次構造を改変しないアミノ酸の置換が含まれる。さらなる例には、Ｉ
ｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＡｌａを互いに置換するなどの、１つの脂肪族残
基の別のものでの置換、あるいはＬｙｓおよびＡｒｇ；ＧｌｕおよびＡｓｐ；ま
たはＧｌｎおよびＡｓｎ間といった、１つの極性残基の別のものでの置換、ある
いはＰｈｅ、Ｔｒｐ、またはＴｙｒを互いに置換するなどの、芳香族残基の別の
ものでの置換が含まれる。他のこうした保存的置換、例えば、同様の疎水性特性
を有する領域全体の置換が、当該技術分野に知られる。
【００３７】 いくつかの好ましい態様において、ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン変異
体は、天然ＡＤＡＭディスインテグリンドメインのアミノ酸配列に、アミノ酸配
列において、少なくとも約７０％同一であり；いくつかの好ましい態様において
、ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン変異体は、天然ＡＤＡＭディスインテグ
リンドメインのアミノ酸配列に、アミノ酸配列において、少なくとも約８０％同
一である。いくつかのより好ましい態様において、ＡＤＡＭディスインテグリン
ドメイン変異体は、天然ＡＤＡＭディスインテグリンドメインのアミノ酸配列に
、アミノ酸配列において、少なくとも約９０％同一であり；いくつかのより好ま
しい態様において、ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン変異体は、天然ＡＤＡ
Ｍディスインテグリンドメインのアミノ酸配列に、アミノ酸配列において、少な
くとも約９５％同一である。いくつかの最も好ましい態様において、ＡＤＡＭデ
ィスインテグリンドメイン変異体は、天然ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン
のアミノ酸配列に、アミノ酸配列において、少なくとも約９８％同一であり；い
くつかの最も好ましい態様において、ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン変異
体は、天然ＡＤＡＭディスインテグリンドメインのアミノ酸配列に、アミノ酸配
列において、少なくとも約９９％同一である。
【００３８】 同一性パーセントは、ポリペプチドおよび核酸どちらの場合でも、視覚的検査
によって決定することが可能である。同一性パーセントは、ＳｍｉｔｈおよびＷ
ａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖ． Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ ２：４８２， １９８１）
に改訂されたような、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ． Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ． ４８：４４３， １９７０）の並列法を用いて決定することも可
能である。好ましくは、同一性パーセントは、コンピュータープログラム、例え
ば、遺伝学コンピューターグループ（ＧＣＧ；ウィスコンシン州マディソン、Ｄ
ｅｖｅｒｅｕｘら， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １２：３８７， １
９８４も参照されたい）より入手可能なＧＡＰコンピュータープログラム、バー
ジョン１０．ｘを用いることによって、決定する。ＧＡＰプログラムの好ましい
デフォルトパラメーターには：（１）ヌクレオチドに関する単一（ｕｎａｒｙ）
比較マトリックス（同一に対し１および非同一に対し０の値を含む）、およびア
ミノ酸に関する、ＳｃｈｗａｒｔｚおよびＤａｙｈｏｆｆ監修，Ａｔｌａｓ ｏ
ｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏ
ｎ， ｐｐ．３５３−３５８， １９７９に記載されるような、Ｇｒｉｂｓｋｏ
ｖおよびＢｕｒｇｅｓｓ， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １４：６７４
５， １９８６の加重比較マトリックス；（２）各ギャップに対する３０（アミ
ノ酸）または５０（ヌクレオチド）のペナルティおよび各ギャップ中の各記号に
対しさらに１（アミノ酸）または３（ヌクレオチド）のペナルティ；（３）末端
ギャップに対するペナルティなし；および（４）長いギャップに対する最大ペナ
ルティなし、が含まれる。配列比較の当業者に用いられる他のプログラムもまた
、用いることが可能である。ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン断片に関して
は、同一性パーセントは、断片に存在するＡＤＡＭディスインテグリンドメイン
部分に基づいて、計算する。
【００３９】 欠失または挿入戦略を採用する際、生物学的活性（インテグリン結合活性、内
皮細胞遊走の阻害、または血管形成の阻害など）に対する欠失または挿入の潜在
的な影響を考慮しなければならない。本発明のポリペプチドのサブユニットは、
末端または内部残基または配列を欠失させることによって、構築することが可能
である。行うことが可能な突然変異の種類に関するさらなる手引きは、同様の構
造を有するポリペプチドに、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド
の配列を比較することによって、それと共に、本発明のポリペプチドの構造解析
を行うことによって、提供される。
【００４０】 用語「変異体」はまた、中程度にストリンジェントな条件（例えば５ＸＳＳＣ
、０．５％ ＳＤＳ、１．０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の前洗浄溶液および
５０℃、５ＸＳＳＣ、一晩のハイブリダイゼーション条件）下、またはより高い
ストリンジェンシーの条件下で、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプ
チドをコードするＤＮＡ配列にハイブリダイズすることが可能であって、そして
インテグリン結合活性、内皮細胞遊走の阻害、および血管形成の阻害からなる群
より選択される、少なくとも１つの活性を保持するポリペプチドをコードする核
酸にコードされる、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドも含む。
当業者は、中程度のハイブリダイゼーションストリンジェンシーを構成する塩お
よび温度のさらなる組み合わせを決定することが可能である。より高いストリン
ジェンシーの条件には、ハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション
後の洗浄のための、より高い温度、および／またはより低い塩濃度が含まれる。
【００４１】 天然配列の断片に連結することを可能にする制限部位が隣接した、突然変異体
配列を含むオリゴヌクレオチドを合成することによって、突然変異を核酸中に導
入することが可能である。連結後、生じた再構築配列は、望ましいアミノ酸挿入
、置換、または欠失を有する変異体をコードする。あるいは、オリゴヌクレオチ
ド指示部位特異的突然変異誘発法を使用して、必要な置換、欠失、または挿入に
したがって改変された特定のコドンを有する、改変された遺伝子を提供すること
が可能である。公知のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法もまた、望ましいポリ
ペプチドまたはその断片をコードするＤＮＡ配列を生成し、そして増幅するのに
使用することが可能である。ＤＮＡ断片の望ましい末端を定義するオリゴヌクレ
オチドを、５’および３’プライマーとして使用する。オリゴヌクレオチドは、
増幅されたＤＮＡ断片の発現ベクター内への挿入を促進する制限エンドヌクレア
ーゼの認識部位を、さらに含んでもよい。
【００４２】 本発明はさらに、結合する天然パターングリコシル化を含むまたは含まないＡ
ＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの使用を含む。酵母または哺乳
動物発現系（例えばＣＯＳ−１またはＣＯＳ−７細胞）で発現されたＡＤＡＭデ
ィスインテグリンドメインは、発現系の選択に応じ、分子量およびグリコシル化
パターンにおいて、天然ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドと同
様である可能性も、または有意に異なる可能性もある。大腸菌などの細菌発現系
でのＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの発現は、非グリコシル
化分子を提供する。異なる宿主細胞はまた、異なってポリペプチドをプロセシン
グし、多様なＮまたはＣ末端を持つポリペプチドの混成混合物を生じる可能性も
ある。
【００４３】 グリコシル基、脂質、リン酸、アセチル基およびそれらに匹敵するものなどの
他の化学部分と、共有または凝集コンジュゲートを形成することによって、ＡＤ
ＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの一次アミノ酸構造を修飾し、誘
導体を生成することが可能である。ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペ
プチドの共有誘導体は、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインアミノ酸側鎖に、
またはＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドのＮ末端またはＣ末端
で、特定の官能基を連結させることによって、調製することが可能である。
【００４４】 本発明を実施するのに有用なＡＤＡＭディスインテグリンドメインの融合ポリ
ペプチドには、Ｎ末端またはＣ末端融合体としての組換え体培養における合成に
よるなど、他のポリペプチドとＡＤＡＭディスまたはその断片の共有または凝集
コンジュゲートが含まれる。１つの種類の融合ポリペプチドが、ＡＤＡＭディス
インテグリンオリゴマーと関連して、以下に論じられる。別の例として、融合ポ
リペプチドは、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドのＮ末端領域
またはＣ末端領域に、翻訳と同時に、または翻訳後に、ポリペプチドをその合成
部位から、細胞膜または細胞壁の内部または外部の部位に移動させるのを指示す
るシグナルペプチド（また、シグナル配列、シグナル、リーダーペプチド、リー
ダー配列、またはリーダーとして、多様に呼ばれる）を含んでもよい。可溶性Ａ
ＤＡＭディスポリペプチドのＮ末端に、細胞外分泌を促進するシグナルペプチド
を融合させるのが、特に好適である。この場合、シグナルペプチドは、典型的に
は、細胞から可溶性ポリペプチドが分泌される際に、切断される。
【００４５】 分泌された可溶性ポリペプチドは、例えば遠心分離により、望ましいポリペプ
チドを発現する、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）細胞を培地から分離し、そ
して望ましいポリペプチドの存在に関して培地（上清）をアッセイすることによ
って、同定する（そして非可溶性膜結合対応物と区別する）ことが可能である。
培地中に望ましいポリペプチドが存在することによって、該ポリペプチドが細胞
から分泌され、そしてしたがって該ポリペプチドの可溶性型であることが示され
る。可溶性ポリペプチドは、いくつかの慣用技術のいずれによって、調製しても
よい。望ましい可溶性ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、ポリペプチドの
産生のため、発現ベクターにサブクローニングしてもよいし、または、望ましい
コードＤＮＡ断片を、化学的に合成してもよい。
【００４６】 可溶性ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドは、ＡＤＡＭの細胞
外部分由来のさらなる部分（システインリッチ領域など）を含みまたは含まない
、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインのすべてまたは一部を含むが、一般的に
、細胞表面でのポリペプチドの保持を引き起こすであろう膜貫通ドメインを欠く
。可溶性ポリペプチドは、ポリペプチドが、産生される細胞から分泌される限り
、膜貫通ドメインの一部、あるいは細胞質ドメインのすべてまたは一部を含んで
もよい。可溶性ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの例を、実施
例に提供する。本発明のいくつかの好ましい態様において、可溶性ＡＤＡＭディ
スインテグリンドメインポリペプチドの多量体型を用いて、リガンドへのインテ
グリン結合、そしてしたがってインテグリン生物学的活性を阻害する。いくつか
の最も好ましい態様において、可溶性ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリ
ペプチドを用いて、内皮細胞遊走を阻害し、そして／または血管形成を阻害する
。これらの阻害活性には、インテグリン仲介およびインテグリン独立機構両方が
含まれる可能性がある。
【００４７】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン多量体は、二量体、三量体、およびより
高次の多量体を含む、共有結合または非共有結合多量体である。オリゴマーは、
異なるＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド上のシステイン残基間
に形成されるジスルフィド結合によって、連結することが可能である。本発明の
１つの態様は、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドに融合したペ
プチド部分間の共有または非共有相互作用を介して連結された、多数のＡＤＡＭ
ディスインテグリンドメインポリペプチドを含む多量体に関する。こうしたペプ
チドは、ペプチドリンカー（スペーサー）、または多量体化を促進する特性を有
するペプチドであってもよい。以下により詳細に記載されるように、そこに付着
するＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの多量体化を促進するこ
とが可能なペプチドの中に、ロイシンジッパーおよび抗体由来の特定のポリペプ
チドがある。特定の態様において、多量体は、２つないし４つのＡＤＡＭディス
インテグリンドメインポリペプチドを含む。
【００４８】 いくつかの態様において、ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン多量体は、免
疫グロブリン由来のポリペプチドを用いて調製する。抗体由来ポリペプチドの多
様な部分（Ｆｃドメインを含む）に融合している特定の異種性ポリペプチドを含
む融合タンパク質の調製は、例えば、Ａｓｈｋｅｎａｚｉら（Ｐｒｏｃ． Ｎａ
ｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８８：１０５３５， １９９１）；Ｂ
ｙｒｎら（Ｎａｔｕｒｅ ３４４：６７７， １９９０）；並びにＨｏｌｌｅｎ
ｂａｕｇｈおよびＡｒｕｆｆｏ（“免疫グロブリン融合タンパク質の構築”，
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ中， Ｓｕ
ｐｐｌ．４， １０．１９．１−１０．１９．１１ページ， １９９２）に記載
されている。
【００４９】 本発明の１つの好ましい態様は、ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン（ＡＤ
ＡＭディス）をＦｃポリペプチドに融合させることによって生成される２つの融
合タンパク質を含むＡＤＡＭディスインテグリンドメイン二量体に関する。ＡＤ
ＡＭディス−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする遺伝子融合体を適切な発現ベク
ターに挿入する。該組換え発現ベクターで形質転換された宿主細胞でＡＤＡＭデ
ィス−Ｆｃ融合ポリペプチドを発現し、そして抗体分子によく似た形で集合させ
、その結果、鎖間ジスルフィド結合がＦｃ部分間に形成され、二価可溶性ＡＤＡ
Ｍディスポリペプチドを生じるのを可能にする。本明細書において、用語「Ｆｃ
ポリペプチド」は、抗体のＦｃ領域由来のポリペプチドの天然および突然変異タ
ンパク質（ｍｕｔｅｉｎ）型を含む。二量体化を促進するヒンジ領域を含むこう
したポリペプチドの一部切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）型もまた含まれる。
【００５０】 ＰＣＴ出願ＷＯ ９３／１０１５１に記載される１つの適切なＦｃポリペプチ
ドは、ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域のＮ末端ヒンジ領域から天然Ｃ末端に渡る一
本鎖ポリペプチドである。別の有用なＦｃポリペプチドは、米国特許第５，４５
７，０３５号およびＢａｕｍら， ＥＭＢＯ Ｊ． １３：３９９２， １９９
４に記載されるＦｃ突然変異タンパク質である。この突然変異タンパク質のアミ
ノ酸配列は、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａに変化し、アミノ酸２０がＬｅｕ
からＧｌｕに変化し、そしてアミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａに変化しているこ
とを除けば、ＷＯ ９３／１０１５１に示される天然Ｆｃ配列のものと同一であ
る。該突然変異タンパク質は、Ｆｃ受容体に対し、減少した親和性を示す。Ｆｃ
部分を含む融合ポリペプチド、およびそれから形成される多量体型は、プロテイ
ンＡまたはプロテインＧカラム上のアフィニティークロマトグラフィーによる容
易な精製という利点を提供し、そしてＦｃ融合ポリペプチドは、非修飾ポリペプ
チドより、長いｉｎ ｖｉｖｏ半減期を提供する可能性があり、これは、療法的
適用に有用である。
【００５１】 他の態様において、可溶性ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド
を、抗体重鎖または軽鎖の可変部に対し置換してもよい。融合タンパク質が抗体
の重鎖および軽鎖両方で作成されている場合、４つもの可溶性ＡＤＡＭディスイ
ンテグリンドメインポリペプチドを持つＡＤＡＭディスインテグリンドメイン多
量体を形成することが可能である。
【００５２】 あるいは、ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン多量体はペプチドリンカー（
スペーサー）、または多量体化を促進する特性を有するペプチドを含むまたは含
まない多数のＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドを含む融合ポリ
ペプチドである。適切なペプチドリンカーの中に、米国特許第４，７５１，１８
０号および第４，９３５，２３３号に記載されるものがある。望ましいペプチド
リンカーをコードするＤＮＡ配列は、当該技術分野に知られる、いかなる慣用的
技術を用い、ＡＤＡＭディスをコードするＤＮＡ配列の間に、そして該ＤＮＡ配
列と同じ読み枠で挿入してもよい。例えば、リンカーをコードする化学的に合成
されたオリゴヌクレオチドを、ＡＤＡＭディスをコードする配列間に連結しても
よい。特定の態様において、融合タンパク質は、ペプチドリンカーによって分離
された、２ないし４つのＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドを含
む。
【００５３】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン多量体を調製するための別の方法は、ロ
イシンジッパードメインの使用を伴う。ロイシンジッパードメインは、該ドメイ
ンが見られるタンパク質の多量体化を促進するペプチドである。ロイシンジッパ
ーは、元々、いくつかのＤＮＡ結合タンパク質で同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌ
ｚら， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４０：１７５９， １９８８）、そして以来、多
様な異なるタンパク質で見出されてきている。既知のロイシンジッパーの中に、
二量体化または三量体化する天然存在ペプチドおよびその誘導体がある。可溶性
オリゴマータンパク質を産生するのに適したロイシンジッパードメインの例は、
ＰＣＴ出願ＷＯ ９４／１０３０８に記載され、そして肺界面活性物質プロテイ
ンＤ（ＳＰＤ）由来のロイシンジッパードメインが、Ｈｏｐｐｅら， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ３４４：１９１， １９９４に記載される。修飾ロイシンジッパ
ーに融合している異種性タンパク質の安定した三量体化を可能にする、該修飾ロ
イシンジッパーの使用が、Ｆａｎｓｌｏｗら， Ｓｅｍｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ
． ６：２６７， １９９４に記載されている。ロイシンジッパーペプチドに融
合しているＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドを含む組換え融合
ポリペプチドを適切な宿主細胞で発現し、そして形成されるＡＤＡＭディスイン
テグリンドメイン多量体を培養上清から回収する。
【００５４】 Ｃ．ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの組換え産生 本発明に用いるＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドは、組換え
発現系を用いて、産生することが可能である。ＡＤＡＭディスインテグリンドメ
インポリペプチドをコードする組換え発現ベクターで形質転換した宿主細胞を、
ＡＤＡＭディスインテグリンドメインの発現を促進する条件下で培養し、そして
ＡＤＡＭディスインテグリンドメインを回収する。ＡＤＡＭディスインテグリン
ドメインポリペプチドはまた、トランスジェニック植物または動物において、産
生することも可能である。
【００５５】 いかなる適切な発現系を使用してもよい。組換え発現ベクターは、適切な転写
および翻訳制御ヌクレオチド配列、例えば、哺乳動物、微生物、ウイルス、また
は昆虫遺伝子由来のものなどに、機能可能であるように連結されている、ＡＤＡ
ＭディスインテグリンドメインポリペプチドをコードするＤＮＡを含む。ヌクレ
オチド配列は、制御配列が、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインＤＮＡ配列に
機能的に関連する場合、機能可能であるように連結されている。したがって、プ
ロモーターヌクレオチド配列は、該プロモーターヌクレオチド配列が、ＡＤＡＭ
ディスインテグリンドメインＤＮＡ配列の転写を調節する場合、ＡＤＡＭディス
インテグリンドメインＤＮＡ配列に機能可能であるように連結されている。制御
配列の例には、転写プロモーター、オペレーター、またはエンハンサー、ｍＲＮ
Ａリボソーム結合部位、並びに転写および翻訳の開始および終結を調節する適切
な配列が含まれる。適切なシグナルペプチド（天然または異種性）をコードする
配列を、発現ベクターに取り込んでもよい。シグナルペプチド（分泌リーダー）
のＤＮＡ配列を、ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン配列にインフレームで融
合させ、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドがまず、該シグナル
ペプチドを含む融合タンパク質として翻訳されるようにしてもよい。意図される
宿主細胞で機能するシグナルペプチドは、ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン
ポリペプチドの細胞外分泌を促進する。シグナルペプチドは、細胞からの分泌に
際し、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドから切断される。ＡＤ
ＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの発現に適した宿主細胞には、原
核生物、酵母、並びに昆虫および哺乳動物細胞を含む、より高次の真核細胞が含
まれる。細菌、真菌、酵母、昆虫および哺乳動物細胞宿主での使用に適したクロ
ーニング用および発現ベクターが、当該技術分野に知られる。
【００５６】 突然変異誘発およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を含む組換えＤＮＡ技術
を用いて、当業者は、アミノ酸残基または配列の多様な付加または置換、あるい
は末端または内部残基または配列の欠失を含む、ＡＤＡＭディスインテグリンド
メインポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を産生することが可能であり、これ
らのポリペプチドには、ＡＤＡＭディスインテグリンドメイン断片、変異体、誘
導体、多量体、および融合ポリペプチドが含まれる。
【００５７】 発現されたＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドを精製するため
の方法は、使用した宿主系、および該組換えポリペプチドが分泌されるかどうか
に応じて異なるであろう。ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドは
、１つまたはそれより多くの濃縮、塩析、イオン交換、疎水性相互作用、アフィ
ニティー精製、ＨＰＬＣ、またはサイズ排除クロマトグラフィー工程を含む、当
該技術分野に知られる方法を用いて、精製してもよい。Ｆｃ部分を含む融合ポリ
ペプチド（およびそこから形成される多量体）は、プロテインＡまたはプロテイ
ンＧカラム上のアフィニティークロマトグラフィーによる、容易な精製という利
点を提供する。
【００５８】 Ｄ．療法 開示される方法を用いて、こうした処置が必要な哺乳動物において、インテグ
リン結合およびインテグリン生物学的活性を阻害し、そして内皮細胞遊走および
／または血管形成を阻害することが可能である。処置は、インテグリンに仲介さ
れる疾患または状態の開始または再発を防ぐため、あるいはインテグリンに仲介
される疾患または状態を有する哺乳動物を処置するため、好適に投与される。
【００５９】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドおよびその組成物の療法的
使用の例には、目の障害、皮膚科障害、および悪性または転移性状態、炎症性疾
患、骨粗しょう症および加速された骨吸収に仲介される他の状態、再狭窄、不適
切な血小板活性化、補充、または凝集、血栓症、あるいは組織修復または創傷治
癒を必要とする状態などの、血管形成に仲介される状態に罹患している個体の処
置が含まれる。
【００６０】 本発明にしたがって処置することが可能な目の障害の中には、限定されるわけ
ではないが、糖尿病網膜症（糖尿病の主な合併症）、未熟児網膜症（しばしば、
慢性の視覚的問題を引き起こし、そして盲目の高リスクを持つ、目のこの破壊的
な状態は、未熟児の治療中の重度の合併症である）、血管新生緑内障、網膜芽細
胞腫、水晶体後線維増殖症、ルベオーシス、ブドウ膜炎、黄斑変性、および角膜
移植片血管新生を含む、目の血管新生によって特徴付けられる目の疾患がある。
他の目の炎症性疾患、目の腫瘍、および脈絡膜または虹彩血管新生に関連する疾
患もまた、本発明にしたがって処置することが可能である。
【００６１】 本発明はまた、固形腫瘍などの悪性および転移性状態を処置するのに用いるこ
とも可能である。固形腫瘍には、原発性および転移性肉腫および癌腫両方が含ま
れる。
【００６２】 本発明はまた、限定されるわけではないが、関節炎、リウマチ、炎症性腸疾患
、および乾癬を含む、炎症性疾患を処置するのに用いることも可能である。 本発明にしたがって処置することが可能な、不適切な血小板活性化、補充、凝
集、または血栓症に仲介される状態の中には、冠状動脈疾患または損傷、心筋梗
塞または心筋梗塞後の損傷、脳卒中、不安定狭心症、アテローム性動脈硬化症、
動脈硬化症、子癇前症、塞栓症、肺虚血、冠状動脈虚血、および大脳虚血を含む
、血小板関連虚血性障害、血管形成術、粥腫切除術、ステント配置、およびバイ
パス手術を含む経皮冠状動脈介入後の再狭窄、冠状動脈血栓症、大脳動脈血栓症
、心臓内血栓症、末梢動脈血栓症、静脈血栓症、異質の（ｆｏｒｅｉｇｎ）また
は損傷組織表面への曝露に関連する血栓症および凝固障害、および血栓症後の再
閉塞、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）を含む血栓症障害、肺塞栓症（ＰＥ）、一過性
虚血発作（ＴＩＡ）、並びに血管閉塞が共通の根底にある特徴である、別の状態
がある。いくつかの態様において、本発明にしたがった方法は、血栓形成または
再形成、進行冠状動脈疾患、または血管の閉塞、再閉塞、狭窄および／または再
狭窄、あるいは脳卒中に関して、高リスクである個体で用いられる。いくつかの
態様において、本発明にしたがった方法は、バルーン血管形成術、レーザー血管
形成術、冠状動脈粥腫切除術または類似の技術、頚動脈血管内膜切除術、血管移
植片の吻合、血栓形成の高リスクを有する手術（すなわち冠状動脈バイパス手術
、補綴弁または血管の挿入およびそれに匹敵するもの）、粥腫切除術、ステント
配置、内在カテーテルまたは補綴弁または血管などの慢性心臓血管装置の配置、
臓器移植、あるいはバイパス手術などの血管形成術と組み合わせて用いる。
【００６３】 本発明にしたがって処置することが可能な他の疾患および状態には、良性腫瘍
および新生物発生前の状態、心筋血管形成、血友病関節、強皮症、血管癒合、喘
息およびアレルギー、湿疹および皮膚炎、移植片対宿主疾患、敗血症、成人呼吸
促進症候群、毛細血管拡張症、および創傷顆粒化が含まれる。
【００６４】 本発明にしたがった方法は、望ましい予防または療法活性に関して、ｉｎ ｖ
ｉｖｏ動物モデルで試験すると共に、ヒトへの投与前に、最適療法投薬量を決定
するため、試験することが可能である。
【００６５】 特定の処置法で有効であろう特定のＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリ
ペプチドの量は、年齢、処置しようとする状態の種類および重症度、体重、望ま
しい処置期間、投与法、並びに他のパラメーターに応じる。有効投薬量は、医師
または他の資格を持つ医学的専門家によって、決定される。典型的な有効投薬量
は、約０．０１ｍｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。いくつかの好
ましい態様において、投薬量は、約０．１−５０ｍｇ／ｋｇであり；いくつかの
好ましい態様において、投薬量は、約０．５−１０ｍｇ／ｋｇである。局所投与
用の投薬量は、典型的には、全身投与用より低い。いくつかの態様において、単
回投与が十分であり：いくつかの態様において、ＡＤＡＭディスインテグリンド
メインは、１日またはそれ以上に渡って、多回用量として投与される。
【００６６】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドは、典型的には、１つまた
はそれ以上の薬理学的に許容しうるキャリアーを含む薬剤組成物の形で投与され
る。薬学的に許容しうるキャリアーには、投与経路に関して、薬学的に許容しう
るものである、希釈剤、充填剤、アジュバント、賦形剤、およびビヒクルが含ま
れ、そして適切な分散、湿潤、および懸濁剤を用いて処方される、水性または油
性懸濁物であってもよい。
【００６７】 薬学的に許容しうるキャリアーは、一般的に無菌であり、そして発熱物質を含
まず、そして水、油、溶媒、塩、糖および他の炭水化物、乳化剤、緩衝剤、抗菌
剤、およびキレート剤を含んでもよい。特定の薬学的に許容しうるキャリアーお
よび活性化合物対キャリアーの比は、組成物の可溶性および化学的特性、投与方
式、並びに標準的な薬学的実施によって決定される。
【００６８】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドは、徴候に対して適切な方
式で、患者に投与される。したがって、例えば、ＡＤＡＭディスインテグリンド
メインポリペプチドまたはその薬剤組成物は、静脈内、経皮、皮内、腹腔内、筋
内、鼻内、硬膜外、経口、局所、皮下、腔内、移植物からの持続放出、蠕動経路
によって、または他の適切な技術いずれかによって、投与することが可能である
。非経口投与が好ましい。
【００６９】 請求される発明の特定の態様において、処置は、１つまたはそれより多くのさ
らなる療法剤で哺乳動物を処置することをさらに含む。さらなる療法剤（類）は
、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの投与前に、投与と同時に
、または投与後に、投与することが可能である。１より多い療法剤の使用は、処
置される哺乳動物が固形腫瘍を有する場合、特に好適である。請求される発明の
いくつかの態様において、処置は、放射線で哺乳動物を処置することをさらに含
む。近接照射療法および遠隔放射線療法を含め、放射線は、ＡＤＡＭディスイン
テグリンドメインポリペプチドおよび／またはさらなる療法剤（類）の投与前に
、投与と同時に、または投与後に、投与することが可能である。
【００７０】 いくつかの好ましい態様において、方法は、ＡＤＡＭディスインテグリンドメ
インポリペプチドに加え、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ビンカアルカロイドおよ
び他の植物由来化学療法剤、抗腫瘍抗生物質、抗腫瘍酵素、トポイソメラーゼ阻
害剤、白金類似体、副腎皮質抑制剤、ホルモンおよび抗ホルモン剤、抗体、免疫
療法剤、放射療法剤、並びに生物学的反応修飾剤からなる群より選択される、１
つまたはそれより多くの療法剤の投与を含む。
【００７１】 いくつかの好ましい態様において、方法は、ＡＤＡＭディスインテグリンドメ
インポリペプチドに加え、シスプラチン、シクロホスファミド、メクロレタミン
、メルファラン、ブレオマイシン、カルボプラチン、フルオロウラシル、５−フ
ルオロデオキシウリジン、メトトレキセート、タキソール、アスパラギナーゼ、
ビンクリスチン、およびビンブラスチン、インターロイキン類、インターフェロ
ン類（アルファ、ベータ、またはデルタ）およびＴＮＦなどのリンホカイン類お
よびサイトカイン類、クロラムブシル、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチ
ン、セムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、シタラビン、メルカプトプ
リン、チオグアニン、ビンデシン、エトポシド、テニポシド、ダクチノマイシン
、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイト
マイシン、Ｌ−アスパラギナーゼ、ヒドロキシ尿素、メチルヒドラジン、ミトタ
ン、タモキシフェン、フルオキシメステロン、ＩＬ−８阻害剤、アンギオスタチ
ン、エンドスタチン、クリングル５、アンギオポエチン−２またはアンギオポエ
チン−１の他のアンタゴニスト、血小板活性化因子のアンタゴニスト、塩基性線
維芽細胞増殖因子のアンタゴニスト、およびＣＯＸ−２阻害剤からなる群より選
択される、１つまたはそれ以上の療法剤の投与を含む。
【００７２】 いくつかの好ましい態様において、方法は、ＡＤＡＭディスインテグリンドメ
インポリペプチドに加え、Ｆｌｔ３リガンド、ＣＤ４０リガンド、インターロイ
キン−２、インターロイキン−１２、４−１ＢＢリガンド、抗４−１ＢＢ抗体、
ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦアンタゴニストおよびＴＮＦＲ／Ｆｃを含むＴＮＦ受容体ア
ンタゴニスト、Ｔｅｋアンタゴニスト、ＴＷＥＡＫアンタゴニストおよびＴＷＥ
ＡＫ−Ｒ／Ｆｃを含むＴＷＥＡＫ−Ｒアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体を含むＶ
ＥＧＦアンタゴニスト、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦ−Ｒ１およびＶＥＧＦ−Ｒ２
を含む、Ｆｌｔ１およびＦｌｋ１またはＫＤＲとしても知られる）アンタゴニス
ト、ＣＤ１４８（ＤＥＰ−１、ＥＣＲＴＰ、およびＰＴＰＲＪとも呼ばれる、Ｔ
ａｋａｈａｓｈｉら， Ｊ． Ａｍ． Ｓｏｃ． Ｎｅｐｈｒｏｌ． １０：２
１３５−４５， １９９９；およびＰＣＴ公報第ＷＯ ００／１５２５８、２０
００年３月２３日）結合タンパク質、並びにネクチン−３アンタゴニストからな
る群より選択される、可溶性型を含む、１つまたはそれ以上の療法ポリペプチド
の投与を含む。
【００７３】 いくつかの好ましい態様において、本発明のＡＤＡＭディスインテグリンドメ
インポリペプチドは、ＢｒｏｗｄｅｒらおよびＫｌｅｍｅｎｔら（Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６０：１８７８， ２０００；Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖ
ｅｓｔ． １０５（８）：Ｒ１５， ２０００；Ｂａｒｉｎａｇａ， Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２８８：２４５， ２０００も参照されたい）に記載されるものなどの
「メトロノーム療法」の構成要素として、または該療法と組み合わせて用いる。
【００７４】 本明細書において、用語「療法」、「療法の」、「処置する」および「処置」
は、一般的に、現存する疾患または状態の療法または処置に加え、予防、すなわ
ち防御を含む。本発明の方法は、最初の処置として、最初の療法後に残った疾患
の処置のため、または他の療法の付属物として、用いることが可能である。生物
学的有効性を測定する方法が、当該技術分野に知られ、そして以下の実施例に例
示される。
【００７５】
【実施例】
以下の実施例は、特定の態様を例示することを意図し、そして本発明の範囲を
限定するためではない。
【００７６】 実施例１ ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド 本実施例は、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの組換え産生
の１つの方法を記載する。
【００７７】 Ｉｇカッパリーダー配列をコードする発現カセット、ＡＤＡＭディスインテグ
リンドメイン、およびＣ末端Ｆｃ領域を、細菌プラスミド中で構築し、その後、
真核発現ベクター（ｐＤＣ４０９、ＥＭＢＯ Ｊ． １０：２８２１， １９９
１、または別の哺乳動物発現ベクター）に移した。多様な構築物のコード領域を
表２に要約する。ディスインテグリンドメインに加え、これらの構築物は、ＡＤ
ＡＭの細胞外部分のさらなる部分（例えばシステインリッチ領域およびＥＧＦ様
ドメイン）をコードする。
【００７８】 発現ベクターをＣＯＳ−１、ＣＶ−１／ＥＢＮＡ、または２９３／ＥＢＮＡ細
胞にトランスフェクションした。トランスフェクション２日後、細胞を４時間、 35 Ｓ標識した。上清および総細胞溶解物を調製し、そしてプロテインＡ−セファ
ロースビーズを用いてアリコットを免疫沈降し、Ｆｃタグ化ポリペプチドを捕捉
した。35Ｓ標識ＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドを、８−１６％
還元ゲル上で泳動し、そしてオートラジオグラフィーを介して検出した。
【００７９】 上清中に最も多くの可溶性タンパク質を生じた細胞種を、より大きい規模（Ｔ
−１７５形式、２０フラスコ）の一過性トランスフェクションで用い、そして１
週間後に上清およそ１リットルを採取した。アフィニティークロマトグラフィー
（プロテインＡカラム）を用いて、ＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプ
チドを上清から精製した。ポリペプチドをＦＡＣＳ、免疫沈降、および以下に記
載されるものなどの生物学的アッセイに用いる前に、Ｎ末端アミノ酸配列、アミ
ノ酸組成、およびタンパク質完全性（還元および非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥ）を決定することによって、ポリペプチドを性質決定した。
【００８０】 表２ ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド構築物
【００８１】
【表２】
【００８２】 1ポリペプチド配列中の残基 2予測される切断部位は、残基２０の後ろである 3ＡＤＡＭディスを含むが、さらなるＡＤＡＭ配列も含む可能性がある、構築
物部分 4ディスインテグリンフレームワーク、例えば配列番号２０ 実施例２ 細胞へのＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの結合 Ａ．内皮細胞への結合 本実施例は、フローサイトメトリーインテグリンｍＡｂに基づく結合阻害アッ
セイを記載し、該アッセイを用いて、内皮細胞表面上に発現されるインテグリン
へのＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドの結合を示す。ヒト内皮細
胞は、αvβ3、αvβ5、β1、β4、α1、α2、α3、α4、α5、およびα6インテ
グリンを発現する。
【００８３】 初代ヒト真皮微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ−ｄ）は、補足した内皮増殖培地
（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、メリーランド州ウォーカーズ
ビル）中で維持した。実施例１で産生したＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポ
リペプチドは、ＨＭＶＥＣ−ｄに特異的に結合することが示された。ヒトインテ
グリンαvβ3（ＬＭ６０９、抗ＣＤ５１／６１、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ、カリフォル
ニア州テメキュラ、Ｂｒｏｏｋｓら， Ｓｃｉｎｅｃｅ ２６４：５６９， １
９９４）、α2β1（ＢＨＡ２．１抗ＣＤ４９ｂ、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ、Ｗａｎｇら
， Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ ９：８６５， １９９８
）、α5β1（ＳＡＭ−１抗ＣＤ４９ｅ、Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ、Ａ． ｔｅ Ｖｅ
ｌｄｅら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４０：１５４８， １９８８）、α3
β1（ＡＳＣ−６抗ＣＤ４９ｃ、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ、Ｐａｔｔａｒａｍａｌａｉ
ら， Ｅｘｐ． Ｃｅｌｌ． Ｒｅｓ． ２２２：２８１， １９９６）、α4
β1（ＨＰ２／１抗ＣＤ４９ｄ、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、フランス・マルセイユ
、第４回ヒト白血球分化抗原国際会議ワークショップ、オーストリア・ウィーン
、１９８９、ワークショップ番号ｐ０９１）、α6β1（ＧｏＨ３抗ＣＤ４９ｆ、
Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、第４回ヒト白血球分化抗原国際会議ワークショップ、ワ
ークショップ番号ｐ０５５）、α6β4（４３９−９Ｂ抗ＣＤ１０４、Ｐｈａｒｍ
ｉｎｇｅｎ、カリフォルニア州サンディエゴ、Ｓｃｈｏｌｏｓｓｍａｎら， １
９９５ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ Ｖ：Ｗｈｉｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉ
ｆｆｅｒｎｔｉａｔｉｏｎ Ａｎｔｉｇｅｎｓ． Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒ
ｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， ニューヨーク）、およびαvβ5（ＭＡＢ １９６１、
Ｃｈｅｍｉｃｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、モノクローナル抗ヒトインテ
グリンαvβ5 ｍＡｂ、ＩｇＧ１アイソタイプは、ビトロネクチン／フィブロネ
クチンへのαvβ5仲介結合／接着を阻害する；Ｗｅｉｎａｋｅｒら， Ｊ． Ｂ
ｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６９：６９４０， １９９４）に特異的なモノクロー
ナル抗体もまた、ＨＭＶＥＣ−ｄに特異的に結合することが示された。これらの
抗体は各々、示されるインテグリンのそのリガンド（例えばフィブロネクチン、
ビトロネクチン、フィブリノーゲン）への結合を特異的に遮断することが知られ
る。インテグリンｍＡｂがＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドの結
合を阻害する能力は、どのインテグリンにディスインテグリンドメインが結合す
るか、そして間接的に、どのインテグリン結合活性をディスインテグリンドメイ
ンがアンタゴナイズすることが可能であるかを明らかにする。抗体が内皮細胞へ
のＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドの結合を阻害する能力は、以
下のように試験した。
【００８４】 結合研究を行う前に、トリプシン−ＥＤＴＡを用いて、培養容器からＨＭＶＥ
Ｃ−ｄを除去した。血清を含む培地中で細胞を洗浄し、そして１ｍＭ Ｃａ２＋
、１ｍＭ Ｍｇ２＋および０．５ｍＭ Ｍｎ２＋、０．１％アジ化ナトリウム、
１０％正常ヤギ血清、２％ウサギ血清および２％ウシ胎児血清を含むＰＢＳから
なる結合培地中に再懸濁した。これらの結合条件下で、ＡＤＡＭ−８、−９、−
１０、−１５、−１７、−２０、−２１、−２２、−２３、および−２９ディス
−Ｆｃは、すべて、ヒト内皮細胞に結合する。
【００８５】 ２００，０００ないし５００，０００のＨＭＶＥＣ−ｄを含む細胞懸濁物１０
０マイクロリットルを、１２ｘ７５ｍｍプラスチック試験管に添加した。ディス
インテグリン−Ｆｃ融合タンパク質を添加する１５分前に、インテグリンの１つ
に特異的なモノクローナル抗体、または対照モノクローナル抗体（ＣＤ２９また
はＭ１５）を、１００μｇ／ｍｌの濃度（５−８倍質量過剰）で、細胞懸濁物に
添加した。ＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドおよび対照Ｆｃ融合
ポリペプチド（Ｐ７．５ＩＩ．Ｆｃ）を、１２．５ないし２０μｇ／ｍｌの多様
な濃度で、細胞懸濁物に添加し、そして３０℃で１時間インキュベーションした
。２ｍｌの結合培地中で、細胞を遠心分離することによって、未結合Ｆｃポリペ
プチドを洗い流した。洗浄細胞ペレットを、結合培地に再懸濁し、そしてその後
、２．５μｇ／ｍｌの濃度のヤギ抗ヒトＦｃ特異的ビオチン化抗体と、３０℃で
３０分間インキュベーションした。細胞ペレットを遠心分離し、そして洗浄した
後、細胞を結合培地に再懸濁し、そしてストレプトアビジン−フィコエリトリン
コンジュゲートを１：１０００希釈（１μｇ／ｍｌ）で細胞懸濁物に添加し、そ
して３０℃で３０分間インキュベーションすることによって、結合した抗ヒトＦ
ｃ−ビオチンを検出した。未結合ストレプトアビジン−フィコエリトリンを洗い
流し、そしてヨウ化プロピディウムを含む結合培地に細胞を再懸濁した。フロー
サイトメトリーによって、蛍光結合（ディスインテグリン−Ｆｃ結合）のレベル
を測定した。
【００８６】 各ＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドの結合レベルは、抗インテ
グリン特異的ｍＡｂの存在下、および対照ｍＡｂの存在下で測定した。結合強度
（ＭＦＩ）および細胞結合の割合を両方測定した。阻害パーセントは、式［１−
（ＭＦＩ対照−ＭＦＩインテグリンｍＡｂ）／ＭＦＩ対照］を用いて計算した。
これらの研究の結果を表３に要約する。
【００８７】 ＡＤＡＭ−１５、−１７、−２０および−２２ディスインテグリンドメインポ
リペプチドはαvβ3に結合し；ＡＤＡＭ２３ディスインテグリンドメインポリペ
プチドはα2β1に結合し；ＡＤＡＭ−１５、−２１、−２２および−２３ディス
インテグリンドメインポリペプチドはα5β1に結合し；ＡＤＡＭ−１０、−１７
、−２２および−２３ディスインテグリンドメインポリペプチドはα6インテグ
リンに結合し；ＡＤＡＭ−１０および−１５ディスインテグリンドメインポリペ
プチドはαvβ5に結合した。過剰な非遮断αvβ5抗体は、内皮細胞へのＡＤＡＭ
−１０、−２２、および−２３ディスインテグリンポリペプチドの結合に有意に
影響を及ぼさず、これらのＡＤＡＭディスポリペプチドが、リガンド（例えばフ
ィブロネクチン、ビトロネクチン）結合部位以外のインテグリン部位またはそれ
に加えたインテグリン部位と相互作用することを示唆した。異なる種類のアッセ
イからの結果に基づき、Ｃａｌらは、ＡＤＡＭ−２３ディスインテグリンドメイ
ンが、ＲＧＤ独立機構を通じて、αvβ3インテグリンと相互作用すると報告して
いる（Ｍｏｌｅｃ． Ｂｉｏｌ． ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ １１：１４５７，
２０００）。
【００８８】 他のＡＤＡＭディスインテグリンドメインおよび他のモノクローナル抗体を用
いて、結合実験を反復する。選択されたインテグリンに結合するＡＤＡＭディス
インテグリン−Ｆｃポリペプチドを、インテグリン−リガンド相互作用を破壊す
る能力、並びに内皮細胞機能、血管形成および他のｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ
ｖｉｖｏの生物学的活性を調節する能力に関して、さらに試験する。
【００８９】 表３ ヒト内皮細胞上に発現されるインテグリンへのＡＤＡＭディスインテグリン− Ｆｃポリペプチドの結合
【００９０】
【表３】
【００９１】 1陽性結合は、＞２０％結合阻害と定義；正常バックグラウンド変動、５−１
０％；ベースライン陽性、バックグラウンドのおよそ２Ｘ 2５−８倍過剰のインテグリンｍＡｂの存在下での、対照ｍＡｂに比較される
ような、ＡＤＡＭディス−Ｆｃによる結合の阻害パーセント Ｂ．初代ヒトＴ細胞への結合 初代ヒトＴ細胞は、全血から精製した。これらの細胞をＦＡＣＳ実験に用いて
、精製ＡＤＡＭディス−Ｆｃポリペプチドの細胞表面結合を評価した。ＡＤＡＭ
ディス−Ｆｃ結合は、ＣｏｎＡ（５μｇ／ｍｌ）または固定ＯＴＫ３抗体（１ｍ
ｇ／ｍｌ、３７℃１時間固定）刺激を伴い、または伴わず、評価した。ＡＤＡＭ
ディス−Ｆｃポリペプチド（２０μｇ／ｍｌ）は、陽イオン（Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋
＋、Ｍｎ＋＋、各０．５ｍＭ）の存在下で、４℃または３０℃いずれかで結合さ
せた。ネズミおよびラット抗ヒトインテグリン抗体のパネルを用いて、細胞表面
インテグリン発現を評価した。これらの細胞の表面上にαvβ5、α1、α3、α4
、α6、β1、およびβ7インテグリンが検出された。ＡＤＡＭディス−Ｆｃポリ
ペプチドは、４℃で、初代ヒトＴ細胞に結合しなかった。ＡＤＡＭ−８−、ＡＤ
ＡＭ−９−、ＡＤＡＭ−１５−、ＡＤＡＭ−２０−、ＡＤＡＭ−２１−、ＡＤＡ
Ｍ−２２−、およびＡＤＡＭ−２３−ディス−Ｆｃポリペプチドは、ＣｏｎＡ刺
激を伴った場合、３０℃で、初代Ｔ細胞に結合しなかった。ＡＤＡＭディス−Ｆ
ｃ結合は、３倍モル過剰の、上に列挙されるインテグリンに対する抗体によって
、阻害されなかった。
【００９２】 Ｃ．休止血小板への結合 クエン酸化洗浄休止血小板へのＡＤＡＭディス−Ｆｃポリペプチドの結合を、
４℃または３０℃で行った。結合は、ビオチン化抗ヒトＦｃ特異的抗体およびス
トレプトアビジン−ＰＥを用いたフローサイトメトリーによって、解析した。休
止血小板は、インテグリンＣＤ４１／ＣＤ６１およびＣＤ４９ｅを発現する。Ａ
ＤＡＭ−９ディス−ＦｃおよびＡＤＡＭ−８ディス−Ｆｃは、３０℃で休止血小
板に結合したが、４℃では結合しなかった。３０℃での休止血小板へのＡＤＡＭ
−９ディス−Ｆｃ結合は、１０倍過剰のＣＤ４１ａ ｍＡｂによって阻害されな
かった。
【００９３】 実施例３ 創傷閉鎖アッセイにおける、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチ ドの活性 平面内皮細胞遊走（創傷閉鎖）アッセイを用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＡＤ
ＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドによる血管形成阻害を定量化した。
このアッセイにおいて、内皮細胞遊走は、培養細胞単層における環状創傷の閉鎖
速度として測定した。創傷閉鎖速度は直線性であり、そしてｉｎ ｖｉｖｏで血
管形成を刺激する剤および阻害する剤によって、動的に制御される。
【００９４】 Ｍａｒｔｉｎら， Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ ３３：
２６１， １９９７に記載されるように、初代ヒト腎臓微小血管内皮細胞、ＨＲ
ＭＥＣを単離し、培養し、そして融解後、第三継代で用いた。集密ＨＲＭＥＣ単
層に、シリコンチップドリルプレスを用いて、複製環状損傷、「創傷」（直径６
００−８００ミクロン）を生成した。創傷を加えた時点で、２０ｎｇ／ｍｌ Ｐ
ＭＡ（ホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート）、ある範囲の濃度
のＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチド、またはＰＭＡおよびＡＤＡ
Ｍディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドの組み合わせを含む培地（ＤＭＥＭ＋
１％ＢＳＡ）を補った。顕微鏡および画像解析ソフトウェア（Ｂｉｏｑｕａｎｔ
、テネシー州ナッシュビル）を用いて、時間（０−１２時間）の関数として、残
った創傷面積を測定した。相対遊走速度を各剤に関して計算し、そして残った創
傷面積の直線回帰によって、剤の組み合わせを、時間に渡ってプロットした。Ａ
ＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドによる、ＰＭＡ誘導内皮細胞遊走
の阻害を、表４に示す。
【００９５】 ＥＧＦ誘導遊走に対するＡＤＡＭ−ディス−Ｆｃポリペプチドの影響もまた、
測定した。これらの実験では、創傷を加えた時点で、ＰＭＡの代わりに、ＥＧＦ
（上皮増殖因子、４０ｎｇ／ｍｌ）を培地に添加した。結果を表５に示す。
【００９６】 表４ ＰＭＡ誘導内皮細胞創傷閉鎖遊走アッセイにおける、ＡＤＡＭ−１５、−１７ 、−２０、および−２３ディス−Ｆｃポリペプチドの影響
【００９７】
【表４】
【００９８】 1勾配が有意に異なるかどうか試験するため、３つ組Ｙ値を平均し、そして単
一データとして処理するための勾配 2括弧内のデータは、勾配の＋／−標準誤差である 3ＰＭＡの存在下で観察される遊走速度に比較した阻害パーセント 表５ ＥＧＦ誘導内皮細胞創傷閉鎖遊走アッセイにおける、ＡＤＡＭ−１７、−２０ 、および−２３ディス−Ｆｃポリペプチドの影響
【００９９】
【表５】
【０１００】 1勾配が有意に異なるかどうか試験するため、３つ組Ｙ値を平均し、そして単
一データとして処理するための勾配 2括弧内のデータは、勾配の＋／−標準誤差である 3ＥＧＦのみの存在下で観察される遊走速度に比較した阻害パーセント ＡＤＡＭ−２０および−２３ディス−Ｆｃポリペプチドは、１５μｇ／ｍｌで
、ＥＧＦおよびＰＭＡ誘導内皮遊走両方の最大阻害を示した。ＡＤＡＭ−１５お
よび−１７ディス−Ｆｃポリペプチドは、１５μｇ／ｍｌで、内皮細胞遊走を阻
害するのに、より有効でなかった。Ｈｕ ＩｇＧは、対照Ｆｃタンパク質として
含まれた、実施実験のいずれにおいても、ＥＧＦまたはＰＭＡ誘導内皮細胞遊走
を阻害しなかった。
【０１０１】 実施例４ 角膜ポケットアッセイにおける、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペ プチドの活性 マウス角膜ポケットアッセイを用いて、ｉｎ ｖｉｖｏでＡＤＡＭディスイン
テグリン−Ｆｃポリペプチドによる血管形成の阻害を定量化する。このアッセイ
において、麻酔マウスの角膜上皮に生成した微小ポケット中に移植した、ヒドロ
ンペレットからの緩慢放出型で、血管形成または抗血管形成活性に関して試験し
ようとする剤を固定する。血管新生は、外見、密度、および正常無血管角膜への
血管形成角膜縁からの血管内殖の度合いとして測定する。
【０１０２】 Ｋｅｎｙｏｎら， Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ． ＆ Ｖｉｓｕａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ ３７：１６２５， １９９６に記載されるようなヒドロンペレ
ットは、ｂＦＧＦ（９０ｎｇ／ペレット）、ｂＦＧＦおよびＩｇＧ（１１μｇ／
ペレット、対照）、またはｂＦＧＦおよびある範囲の濃度のＡＤＡＭディスイン
テグリン−Ｆｃポリペプチドを含むスクラルファートを取り込む。ペレットは、
６−８週齢オスＣ５７ＢＬマウスの角膜縁の内側から外側に１ｍｍ微小切開する
ことによって生成した角膜間質微小ポケットに、外科的に移植する。５日後、ｂ
ＦＧＦへの新生血管反応のピーク時に、ペレットを含む経線内の原線から３５−
５０°の初期角度で、Ｚｅｉｓｓスリットランプを用いて、角膜の写真を撮影す
る。画像をデジタル化し、そしてサブトラクティブカラーフィルター（Ａｄｏｂ
ｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ ４．０）でプロセシングし、ヘモグロビン含量によっ
て、確立された微小血管を描写する。画像解析ソフトウェア（Ｂｉｏｑｕａｎｔ
、テネシー州ナッシュビル）を用いて、血管新生されている角膜画像の部分、血
管新生領域内の血管密度、および総角膜内の血管密度を計算する。ＡＤＡＭディ
スインテグリン−Ｆｃポリペプチド用量の関数としてのｂＦＧＦ誘導角膜血管形
成の阻害を決定する。
【０１０３】 実施例５ ネズミ移植モデルにおける、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチ ドによる血管新生の阻害 １匹のマウスドナー由来の、遺伝的に同様の別のマウスの耳皮膚への異所（ｈ
ｅｔｅｒｏｔｏｐｉｃａｌｌｙ）移植心臓組織の生存は、移植された心臓および
周囲の組織による、生存および心筋機能のためのエネルギーを促進するための、
適切な血管新生を必要とする。移植部位での不適切な血管系は、心臓に対する過
剰な虚血、組織損傷、および組織移植の失敗を引き起こす。内皮細胞遊走および
血管形成に関与する因子をアンタゴナイズする剤は、移植部位での血管形成を減
少させ、それによって、移植組織機能および最終的には移植自体を限定する可能
性がある。ネズミ異所心臓同系移植モデルを用いて、血管新生に対するＡＤＡＭ
ディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドのアンタゴニスト効果を立証する。メス
ＢＡＬＢ／ｃ（＝１２週齢）レシピエントに、同一系統のドナーマウス由来の新
生児心臓移植片を与える。ドナー心臓組織は、第０日にレシピエントの左耳介に
移植し、そしてマウスを２群に分ける。対照群には、ヒトＩｇＧ（Ｈｕ ＩｇＧ
）を、一方、他の群には、ＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドを、
どちらも腹腔内投与する。処置は、連続５日間、続ける。移植片の機能性は、移
植後、第７日および第１４日の、可視拍動活性を監視することによって、決定す
る。ＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドの用量の関数として、機能
移植片の阻害を決定する。移植部位の浮腫、並びに宿主およびドナー組織血管系
に対するＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドの影響を可視化するた
め、移植心臓の組織像を調べる（例えば因子ＶＩＩＩ染色を用いる）。
【０１０４】 実施例６ ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドでの腫瘍の処置 ＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドを、固形腫瘍の動物モデルに
おいて試験する。ＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドの影響は、腫
瘍頻度および腫瘍増殖を測定することによって、決定する。
【０１０５】 ＡＤＡＭディスインテグリン−Ｆｃポリペプチドの生物学的活性はまた、カル
シウム動員アッセイおよび血小板活性化、補充、または凝集を測定するアッセイ
などの、当業者に知られる他のｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、およびｉｎ
ｖｉｖｏアッセイにおいても、立証する。
【０１０６】 本明細書に引用される参考文献の相当する開示は、本明細書に特に援用される
。上に示される実施例は、網羅的であるとも、または本発明の範囲を限定すると
も意図されない。当業者は、修飾および変動が、上記の解説に照らして可能であ
ることを理解するだろうし、そしてこうした修飾および変動は、本発明の範囲内
であるよう意図される。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 9/10 １０１ 7/02 17/02 9/10 17/06 １０１ 19/02 17/02 19/10 17/06 27/02 19/02 27/06 19/10 29/00 27/02 １０１ 27/06 31/04 29/00 35/00 １０１ 35/04 31/04 43/00 １０５ 35/00 １１１ 35/04 Ｃ０７Ｋ 14/46 43/00 １０５ 19/00 １１１ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ０７Ｋ 14/46 Ｃ１２Ｑ 1/02 19/00 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 43/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 セレッティ，ダグラス・パット アメリカ合衆国ワシントン州98133，シア トル，ノース・ワンハンドレッドアンドナ インティセブンス・プレース 1607 (72)発明者 ポインデクスター，カート・マシュー アメリカ合衆国ワシントン州98103，シア トル，インターレイク・アベニュー・ノー ス 9247，アパートメント ２ (72)発明者 ブラック，ロイ・アルヴィン アメリカ合衆国ワシントン州98115，シア トル，サーティース・アベニュー・ノース イースト 8062 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA38 BA63 CA04 DA02 EA02 GA11 HA01 4B063 QA18 QQ08 QR48 QS02 QS31 4B064 AG20 AG30 CA10 CA19 CC24 DA01 4C084 AA02 AA12 AA19 BA44 CA43 DC50 MA02 NA14 ZA062 ZA332 ZA362 ZA402 ZA452 ZA542 ZA662 ZA892 ZA962 ZA972 ZB112 ZB152 ZB262 4H045 AA10 AA20 AA30 BA10 BA41 CA53 DA83 DA86 EA28 FA74

Claims (42)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 インテグリンのそのリガンドへの結合をアンタゴナイズす
    る方法であって、インテグリンを発現する細胞を、有効量のＡＤＡＭディスイン
    テグリンドメインポリペプチドと接触させることを含む、前記方法。
  2. 【請求項２】 こうした処置が必要な哺乳動物において、インテグリンの
    そのリガンドへの結合をアンタゴナイズする方法であって、有効量のＡＤＡＭデ
    ィスインテグリンドメインポリペプチドを投与することを含む、前記方法。
  3. 【請求項３】 哺乳動物が、目の障害、悪性および転移性状態、炎症性疾
    患、骨粗しょう症および加速された骨吸収に仲介される他の状態、再狭窄、不適
    切な血小板活性化、補充、または凝集、血栓症、あるいは組織修復または創傷治
    癒を必要とする状態からなる群より選択される状態に罹患している、請求項２の
    方法。
  4. 【請求項４】 こうした処置が必要な哺乳動物において、血管形成を阻害
    する方法であって、該哺乳動物に阻害有効量のＡＤＡＭディスインテグリンドメ
    インポリペプチドを投与することを含み、該ディスインテグリンドメインがＲＧ
    Ｄ配列を含まない、前記方法。
  5. 【請求項５】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインが、多量体の形であ
    る、請求項１−４の１つの方法。
  6. 【請求項６】 多量体が二量体または三量体である、請求項５の方法。
  7. 【請求項７】 多量体がＦｃポリペプチドまたはロイシンジッパーを含む
    、請求項５の方法。
  8. 【請求項８】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインが、ヒトＡＤＡＭ由
    来である、請求項１−７の１つの方法。
  9. 【請求項９】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインが、ＡＤＡＭ−８、
    ＡＤＡＭ−９、ＡＤＡＭ−１０、ＡＤＡＭ−１５、ＡＤＡＭ−１７、ＡＤＡＭ−
    ２０、ＡＤＡＭ−２１、ＡＤＡＭ−２２、ＡＤＡＭ−２３、およびＡＤＡＭ−２
    ９からなる群より選択されるＡＤＡＭ由来である、請求項８の方法。
  10. 【請求項１０】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインが、ＡＤＡＭ−１
    ７、ＡＤＡＭ−２０、またはＡＤＡＭ−２３由来である、請求項９の方法。
  11. 【請求項１１】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドが：
    （ａ）配列番号２のアミノ酸１−４９４、配列番号２のアミノ酸２３−２６４、
    配列番号４のアミノ酸１−５３３、配列番号４のアミノ酸２３−３０３、配列番
    号６のアミノ酸１−４６５、配列番号６のアミノ酸２３−２３５、配列番号８の
    アミノ酸１−５２２、配列番号８のアミノ酸２３−２９２、配列番号１０のアミ
    ノ酸１−４４６、配列番号１０のアミノ酸２３−２１６、配列番号１２のアミノ
    酸１−５３５、配列番号１２のアミノ酸２３−３０５、配列番号１４のアミノ酸
    １−５２３、配列番号１４のアミノ酸２３−２９３、配列番号１６のアミノ酸１
    −５４２、配列番号１６のアミノ酸２３−３１２、配列番号１８のアミノ酸１−
    ５４０、配列番号１８のアミノ酸２３−３１０、配列番号２２のアミノ酸１−５
    ２８、配列番号２２のアミノ酸２３−２９８； （ｂ）少なくとも１つのＡＤＡＭディス活性を保持する、（ａ）のポリペプチド
    の断片； （ｃ）少なくとも１つのＡＤＡＭディス活性を保持する、（ａ）または（ｂ）の
    ポリペプチドの変異体；および （ｄ）少なくとも１つのＡＤＡＭディス活性を保持する、（ａ）、（ｂ）、また
    は（ｃ）のポリペプチドを含む融合ポリペプチド からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１−１０の１つの方法。
  12. 【請求項１２】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインが、配列番号２の
    アミノ酸３４−９１、配列番号４の３４−９２、配列番号６の３４−９９、配列
    番号８の３４−９２、配列番号１０の３４−９３、配列番号１２の３４−９１、
    配列番号１４の３４−９１、配列番号１６の３４−９２、配列番号１８の３４−
    ９１、または配列番号２２の３４−９１からなる群より選択されるアミノ酸配列
    を含む、請求項１１の方法。
  13. 【請求項１３】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドが：
    （ａ）配列番号２のアミノ酸１−４９４、配列番号２のアミノ酸２３−２６４、
    配列番号４のアミノ酸１−５３３、配列番号４のアミノ酸２３−３０３、配列番
    号６のアミノ酸１−４６５、配列番号６のアミノ酸２３−２３５、配列番号８の
    アミノ酸１−５２２、配列番号８のアミノ酸２３−２９２、配列番号１０のアミ
    ノ酸１−４４６、配列番号１０のアミノ酸２３−２１６、配列番号１２のアミノ
    酸１−５３５、配列番号１２のアミノ酸２３−３０５、配列番号１４のアミノ酸
    １−５２３、配列番号１４のアミノ酸２３−２９３、配列番号１６のアミノ酸１
    −５４２、配列番号１６のアミノ酸２３−３１２、配列番号１８のアミノ酸１−
    ５４０、配列番号１８のアミノ酸２３−３１０、配列番号２２のアミノ酸１−５
    ２８、配列番号２２のアミノ酸２３−２９８；および （ｂ）（ａ）のポリペプチドの断片 からなる群より選択されるポリペプチドに、アミノ酸配列において、少なくとも
    ７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である変異体であ
    り、前記変異体ポリペプチドが少なくとも１つのＡＤＡＭディス活性を保持する
    、請求項１−１２の１つの方法。
  14. 【請求項１４】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドが：
    （ａ）配列番号１のヌクレオチド１１８−１５９９、配列番号１のヌクレオチド
    １８４−９０９、配列番号３のヌクレオチド４６−１６４４、配列番号３のヌク
    レオチド１１２−９５４、配列番号５のヌクレオチド２５−１４１９、配列番号
    ５のヌクレオチド９１−７２９、配列番号７のヌクレオチド４１−１６０６、配
    列番号７のヌクレオチド１０７−９１６、配列番号９のヌクレオチド２５−１３
    ６２、配列番号９のヌクレオチド９１−６７２、配列番号１１のヌクレオチド２
    ５−１６２９、配列番号１１のヌクレオチド９１−９３９、配列番号１３のヌク
    レオチド２５−１５９３、配列番号１３のヌクレオチド９１−９０３、配列番号
    １５のヌクレオチド２５−１６５０、配列番号１５のヌクレオチド９１−９６０
    、配列番号１７のヌクレオチド２５−１６４４、配列番号１７のヌクレオチド９
    １−９５４、配列番号２１のヌクレオチド１１８−１７０１、配列番号２１のヌ
    クレオチド１８４−１０１１； （ｂ）遺伝暗号の縮重のため、（ａ）の核酸にコードされるポリペプチドをコー
    ドする配列；および （ｃ）中程度のまたは高いストリンジェンシーの条件下で、（ａ）または（ｂ）
    の配列にハイブリダイズし、そして少なくとも１つのＡＤＡＭディス活性を保持
    するポリペプチドをコードする配列 からなる群より選択される配列を含む核酸にコードされる、請求項１−１０の１
    つの方法。
  15. 【請求項１５】 ＡＤＡＭディス活性が、インテグリン結合活性、内皮細
    胞遊走の阻害、および血管形成の阻害からなる群より選択される、請求項１１−
    １４の１つの方法。
  16. 【請求項１６】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドが、
    ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの発現を可能にする条件下で
    、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドをコードする組換え細胞を
    培養し、そしてＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドを回収するこ
    とによって、産生されている、請求項１−１５の１つの方法。
  17. 【請求項１７】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドが、
    薬学的に許容しうるキャリアーを含む組成物中に存在する、請求項１−１６の１
    つの方法。
  18. 【請求項１８】 哺乳動物が、血管形成に仲介される疾患または状態を有
    する、請求項２の方法。
  19. 【請求項１９】 疾患または状態が、目の血管新生によって特徴付けられ
    る、請求項１８の方法。
  20. 【請求項２０】 疾患または状態が、固形腫瘍である、請求項１８の方法
    。
  21. 【請求項２１】 哺乳動物を放射線で処置することをさらに含む、請求項
    １−２０の１つの方法。
  22. 【請求項２２】 哺乳動物を第二の療法剤で処置することをさらに含む、
    請求項１−２１の１つの方法。
  23. 【請求項２３】 第二の療法剤が、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ビンカア
    ルカロイドおよび他の植物由来化学療法剤、抗腫瘍抗生物質、抗腫瘍酵素、トポ
    イソメラーゼ阻害剤、白金類似体、副腎皮質抑制剤、ホルモンおよび抗ホルモン
    剤、抗体、免疫療法剤、放射療法剤、並びに生物学的反応修飾剤からなる群より
    選択される、請求項２２の方法。
  24. 【請求項２４】 第二の療法剤が、シスプラチン、シクロホスファミド、
    ブレオマイシン、カルボプラチン、フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、
    ５−フルオロデオキシウリジン、メトトレキセート、タキソール、アスパラギナ
    ーゼ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メクロレタミン、メルファラン、５−
    フルオロデオキシウリジン、インターロイキン類、インターフェロン類（アルフ
    ァ、ベータ、またはデルタ）およびＴＮＦなどのリンホカイン類およびサイトカ
    イン類、クロラムブシル、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチ
    ン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、シタラビン、メルカプトプリン、チオグ
    アニン、ビンデシン、エトポシド、テニポシド、ダクチノマイシン、ダウノルビ
    シン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、Ｌ
    −アスパラギナーゼ、ヒドロキシ尿素、メチルヒドラジン、ミトタン、タモキシ
    フェン、フルオキシメステロン、およびＣＯＸ−２阻害剤からなる群より選択さ
    れる、請求項２２の方法。
  25. 【請求項２５】 第二の療法剤が、Ｆｌｔ３リガンド、ＣＤ４０リガンド
    、インターロイキン−２、インターロイキン−１２、４−１ＢＢリガンド、抗４
    −１ＢＢ抗体、ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦアンタゴニストおよびＴＮＦＲ／Ｆｃを含む
    ＴＮＦ受容体アンタゴニスト、Ｔｅｋアンタゴニスト、ＴＷＥＡＫアンタゴニス
    トおよびＴＷＥＡＫ−Ｒ／Ｆｃを含むＴＷＥＡＫ−Ｒアンタゴニスト、抗ＶＥＧ
    Ｆ抗体を含むＶＥＧＦアンタゴニスト、ＶＥＧＦ受容体アンタゴニスト、ＣＤ１
    ４８結合タンパク質、並びにネクチン−３アンタゴニストからなる群より選択さ
    れる、可溶性型を含むポリペプチドである、請求項２２の方法。
  26. 【請求項２６】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインが、非経口的に投
    与される、請求項２の方法。
  27. 【請求項２７】 αvβ3、α2β1、α5β1、α6β1、α6β4、およびαv
    β5からなる群より選択されるインテグリンの生物学的活性を阻害する方法であ
    って、インテグリンを、阻害有効量のＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリ
    ペプチドと接触させることを含む、前記方法。
  28. 【請求項２８】 インテグリンがαvβ3であり、そしてＡＤＡＭディスイ
    ンテグリンドメインがＲＧＤ配列を含まない、請求項２７の方法。
  29. 【請求項２９】 ＡＤＡＭがＡＤＡＭ−１７、ＡＤＡＭ−２０、またはＡ
    ＤＡＭ−２２である、請求項２８の方法。
  30. 【請求項３０】 インテグリンがα2β1であり、そしてＡＤＡＭがＡＤＡ
    Ｍ−２３である、請求項２７の方法。
  31. 【請求項３１】 インテグリンがα5β1であり、そしてＡＤＡＭがＡＤＡ
    Ｍ−１５、ＡＤＡＭ−２１、ＡＤＡＭ−２２、またはＡＤＡＭ−２３である、請
    求項２７の方法。
  32. 【請求項３２】 インテグリンがα6β1またはα6β4であり、そしてＡＤ
    ＡＭがＡＤＡＭ−１０、ＡＤＡＭ−１７、ＡＤＡＭ−２２、またはＡＤＡＭ−２
    ３である、請求項２７の方法。
  33. 【請求項３３】 インテグリンがαvβ5であり、そしてＡＤＡＭがＡＤＡ
    Ｍ−１０、ＡＤＡＭ−１５、またはＡＤＡＭ−２３である、請求項２７の方法。
  34. 【請求項３４】 インテグリン生物学的活性を調節する化合物を同定する
    方法であって： （ａ）試験化合物を、インテグリンおよび該インテグリンに結合するＡＤＡＭデ
    ィスインテグリンドメインポリペプチドと合わせ；そして （ｂ）試験化合物が、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドのイン
    テグリンへの結合を改変するかどうかを決定する ことを含む、前記方法。
  35. 【請求項３５】 インテグリンおよびＡＤＡＭディスインテグリンドメイ
    ン間の相互作用を調節する化合物を同定する方法であって： （ａ）試験化合物を、インテグリンおよび該インテグリンに結合するＡＤＡＭデ
    ィスインテグリンドメインポリペプチドと合わせ；そして （ｂ）試験化合物が、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドのイン
    テグリンへの結合を改変するかどうかを決定する ことを含む、前記方法。
  36. 【請求項３６】 インテグリンが、細胞表面上に存在する、請求項３４ま
    たは３５の方法。
  37. 【請求項３７】 細胞が内皮細胞である、請求項３６の方法。
  38. 【請求項３８】 インテグリンが、αvβ3、α2β1、α5β1、α6β1、α 6 β4、およびαvβ5からなる群より選択される、請求項３４−３７の１つの方法
    。
  39. 【請求項３９】 インテグリン生物学的活性またはインテグリン結合活性
    が、少なくとも部分的に阻害される、請求項３４−３８の１つの方法。
  40. 【請求項４０】 内皮細胞遊走および／または血管形成を阻害する化合物
    を同定する方法であって： （ａ）試験化合物を、内皮細胞および内皮細胞に結合するＡＤＡＭディスインテ
    グリンドメインポリペプチドと合わせ；そして （ｂ）試験化合物が、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドの内皮
    細胞への結合を改変するかどうかを決定する ことを含む、前記方法。
  41. 【請求項４１】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドが、
    ＡＤＡＭ−８、ＡＤＡＭ−９、ＡＤＡＭ−１０、ＡＤＡＭ−１５、ＡＤＡＭ−１
    ７、ＡＤＡＭ−２０、ＡＤＡＭ−２１、ＡＤＡＭ−２２、ＡＤＡＭ−２３、また
    はＡＤＡＭ−２９由来のＡＤＡＭディスインテグリンドメインを含む、請求項３
    ４−４０の１つの方法。
  42. 【請求項４２】 ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチドが、
    ＡＤＡＭ−１７、ＡＤＡＭ−２０、またはＡＤＡＭ−２３由来のＡＤＡＭディス
    インテグリンドメインを含む、請求項４１の方法。
JP2001562679A 2000-02-25 2001-02-23 インテグリンアンタゴニスト Pending JP2003523768A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18486500P 2000-02-25 2000-02-25
US60/184,865 2000-02-25
PCT/US2001/005701 WO2001062905A2 (en) 2000-02-25 2001-02-23 Integrin antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2003523768A true JP2003523768A (ja) 2003-08-12

Family

ID=22678680

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001562679A Pending JP2003523768A (ja) 2000-02-25 2001-02-23 インテグリンアンタゴニスト

Country Status (10)

Country Link
US (2) US7074408B2 (ja)
EP (1) EP1259595B1 (ja)
JP (1) JP2003523768A (ja)
AT (1) ATE358718T1 (ja)
AU (2) AU4721901A (ja)
CA (1) CA2400040A1 (ja)
DE (1) DE60127656T2 (ja)
IL (1) IL151032A0 (ja)
NZ (1) NZ521437A (ja)
WO (1) WO2001062905A2 (ja)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009101968A1 (ja) * 2008-02-14 2009-08-20 Gene Techno Science Co., Ltd. 抗ａｄａｍ－１５抗体及びその利用
JP2010519919A (ja) * 2007-03-06 2010-06-10 ビオアリアンス ファルマ メタルギジンのディスインテグリンドメイン（ｒｄｄ）をコードする配列を含むプラスミド
US8207137B2 (en) 2001-07-26 2012-06-26 Inserm Method of inhibiting angiogenesis or invasion or formation of metastases
JP2015511599A (ja) * 2012-03-16 2015-04-20 ユニバーシティ ヘルス ネットワーク Ｔｏｓｏ活性を調節するための方法および組成物
JP2016020352A (ja) * 2006-01-19 2016-02-04 アイジーン インコーポレイテッド ペプチドを有効成分とする血管関連疾患の治療剤組成物
JP2016527265A (ja) * 2013-07-30 2016-09-08 インダストリー−アカデミック コーポレーション ファウンデーション，ヨンセイ ユニバーシティ サクサチリン−Ｆｃ融合タンパク質及びその用途
JP2019123742A (ja) * 2014-12-31 2019-07-25 ヒュオンス カンパニー リミテッド Ｒｇｄモチーフ含有ペプチドまたはその断片を含む、視神経を保護するための医薬組成物

Families Citing this family (134)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
NZ504431A (en) * 1997-10-30 2001-09-28 Immunex Corp SVPH1-26 DNA and polypeptides
NZ506817A (en) * 1998-02-11 2003-08-29 Immunex Corp Metalloprotease-disintegrin SVPH3-13 and SVPH3-17 nucleic acids, and their corresponding polypeptides and methods for their production
US6265199B1 (en) * 1998-07-10 2001-07-24 Zymogenetics, Inc. Disintegrin homologs
BR0007556A (pt) 1999-01-15 2001-10-23 Biogen Inc Antagonistas de tweak e de receptor de tweak e uso dos mesmos para tratar distúrbios imunológicos
IL143769A0 (en) * 1999-01-21 2002-04-21 Immunex Corp Metalloproteinase-disintegrin family members: svph dnas and polypeptides
JP2003508028A (ja) * 1999-07-28 2003-03-04 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍治療のための組成物と方法
CA3016482A1 (en) 1999-11-30 2001-06-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h1, a novel immunoregulatory molecule
US20020001840A1 (en) * 2000-04-03 2002-01-03 Carlos Lopez-Otin Methods and compositions for modulating integrin-mediated cell-cell interactions
WO2001081377A2 (en) * 2000-04-21 2001-11-01 Amgen, Inc. Integrin/adhesion antagonists
EP1363657A2 (en) * 2000-05-08 2003-11-26 Biogen, Inc. Method for promoting neovascularization using a tweak agonist and an angiogenic factor
US6458552B1 (en) * 2000-06-06 2002-10-01 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Metalloprotease peptide substrates and methods
US20030148924A1 (en) * 2002-07-09 2003-08-07 Tamar Tennenbaum Methods and pharmaceutical compositions of healing wounds
US20040037828A1 (en) * 2002-07-09 2004-02-26 Bar-Ilan University Methods and pharmaceutical compositions for healing wounds
US20100129332A1 (en) * 2000-07-31 2010-05-27 Tamar Tennenbaum Methods and pharmaceutical compositions for healing wounds
US7208151B2 (en) * 2001-09-12 2007-04-24 Biogen Idec Ma Inc. Tweak receptor agonists as anti-angiogenic agents
WO2002022124A1 (en) * 2000-09-18 2002-03-21 Merck & Co., Inc. Treatment of inflammation with a combination of a cyclooxygenase-2 inhibitor and an integrin alpha-v antagonist
US6294368B1 (en) 2001-03-22 2001-09-25 Applera Corporation Isolated human metalloprotease proteins, nucleic acid molecules encoding human protease proteins, and uses thereof
ES2328025T3 (es) 2001-10-09 2009-11-06 Mayo Foundation For Medical Education And Research Mejoramiento de las respuestas inmunitarias por anticuerpos agonistas 4-1 bb.
WO2003086311A2 (en) 2002-04-09 2003-10-23 Biogen, Inc. Methods for treating tweak-related conditions
CN1774445A (zh) * 2002-08-16 2006-05-17 惠氏公司 用于治疗rage相关病症的组合物和方法
WO2004078137A2 (en) * 2003-03-04 2004-09-16 Greenville Hospital System Antitumor agents comprising a targeting portion and an immune response triggering portion
RU2336910C2 (ru) 2003-04-11 2008-10-27 Амбу А/С Ларингоскопическая маска и способ ее изготовления
PL1648998T3 (pl) 2003-07-18 2015-03-31 Amgen Inc Specyficzne czynniki wiążące czynnik wzrostu hepatocytów
EP1651161B1 (en) 2003-08-07 2011-10-19 HealOr Ltd. Pharmaceutical compositions and methods for accelerating wound healing
AU2005249566B2 (en) 2004-06-04 2010-11-11 Genentech, Inc. Method for treating multiple sclerosis
US7507748B2 (en) * 2004-07-22 2009-03-24 Amgen Inc. Substituted aryl-amine derivatives and methods of use
WO2006042237A2 (en) 2004-10-06 2006-04-20 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h1 and methods of diagnosis, prognosis, and treatment of cancer
CA2596273C (en) 2005-02-02 2017-11-14 Raven Biotechnologies, Inc. Adam-9 modulators
DK2529619T3 (en) 2005-02-17 2016-01-11 Biogen Ma Inc Treatment of neurological disorders
TW200714289A (en) * 2005-02-28 2007-04-16 Genentech Inc Treatment of bone disorders
EP1885388B1 (en) 2005-05-10 2013-09-11 Biogen Idec MA Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
WO2006138219A2 (en) 2005-06-13 2006-12-28 Biogen Idec Ma Inc. Methods of diagnosis / prognosis of inflammatory conditions
WO2007024921A2 (en) * 2005-08-24 2007-03-01 Cell Matrix Combination therapies for inhibiting integrin-extracellular matrix interactions
ZA200802546B (en) * 2005-08-29 2009-10-28 Healor Ltd Methods and compositions for prvention and treatment of diabetic and aged skin
EP2015781A4 (en) * 2005-09-12 2009-12-23 Univ Johns Hopkins COMPOSITIONS HAVING ANTIANGIOGENIC ACTIVITY AND USES THEREOF
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
US7354904B2 (en) * 2005-12-08 2008-04-08 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Bacteriocin inducer peptides
US9101581B2 (en) * 2008-10-27 2015-08-11 Eyegene Inc. Method for treating vascular-related disease
CN101379082A (zh) * 2006-01-19 2009-03-04 爱吉恩公司 治疗血管相关疾病的包含肽的药物组合物
KR100797567B1 (ko) 2006-04-27 2008-01-24 연세대학교 산학협력단 혈소판 그래뉼 분비 억제용 단백질
PE20080403A1 (es) 2006-07-14 2008-04-25 Amgen Inc Derivados heterociclicos fusionados y metodos de uso
US8217177B2 (en) 2006-07-14 2012-07-10 Amgen Inc. Fused heterocyclic derivatives and methods of use
MX2009008531A (es) 2007-02-16 2009-08-26 Amgen Inc Cetonas de heterociclilo que contienen nitrogeno y su uso como inhibidores de c-met.
JP5706688B2 (ja) 2007-06-14 2015-04-22 ギャラクティカ ファーマシューティカルズ， インク． Ｒａｇｅ融合タンパク質
CN102755649A (zh) * 2007-07-30 2012-10-31 希尔洛有限公司 药物组合物及相关方法
RS56743B1 (sr) 2007-08-21 2018-03-30 Amgen Inc Humani c-fms antigen vezujući proteini
TW201014605A (en) 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
ES2601827T3 (es) * 2009-02-24 2017-02-16 Arava Bio-Tech Ltd. Agentes antagonistas de visfatina para el tratamiento del acné y de otras afecciones
US8663210B2 (en) 2009-05-13 2014-03-04 Novian Health, Inc. Methods and apparatus for performing interstitial laser therapy and interstitial brachytherapy
EP2523677A2 (en) 2010-01-11 2012-11-21 Healor Ltd. Method for treatment of inflammatory disease and disorder
EP2353607A1 (en) * 2010-02-04 2011-08-10 BioAlliance Pharma Use of disintegrin domain of an adamalysin for the treatment of psoriasis
US20110319335A1 (en) 2010-06-23 2011-12-29 Xiaodong Feng Combined administration of integrin receptor antagonists for anti-angiogenic therapy
CA2830516C (en) 2011-03-23 2017-01-24 Amgen Inc. Fused tricyclic dual inhibitors of cdk 4/6 and flt3
US9745288B2 (en) 2011-08-16 2017-08-29 Indiana University Research And Technology Corporation Compounds and methods for treating cancer by inhibiting the urokinase receptor
US8946159B2 (en) * 2011-12-22 2015-02-03 California Northstate College Of Pharmacy, Llc Administration of an antagonist of α5β1 for anti-angiogenesis and cancer treatment
WO2013101771A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Genentech, Inc. Compositions and method for treating autoimmune diseases
TW201334789A (zh) 2012-01-31 2013-09-01 Genentech Inc 抗ｉｇｅ抗體及其使用方法
AR090263A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hoffmann La Roche Terapia combinada de anticuerpos contra el csf-1r humano y las utilizaciones de la misma
US9505749B2 (en) 2012-08-29 2016-11-29 Amgen Inc. Quinazolinone compounds and derivatives thereof
WO2014066084A1 (en) * 2012-10-24 2014-05-01 Novamedica Limited Liability Company Nucleic acid modulators of alpha2beta1
US9302005B2 (en) 2013-03-14 2016-04-05 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for treating cancer
TW201605896A (zh) 2013-08-30 2016-02-16 安美基股份有限公司 Gitr抗原結合蛋白
US10259875B2 (en) 2013-10-01 2019-04-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for treating cancer in patients with elevated levels of BIM
WO2015179654A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Mayo Foundation For Medical Education And Research Distinguishing antagonistic and agonistic anti b7-h1 antibodies
WO2016014148A1 (en) 2014-07-23 2016-01-28 Mayo Foundation For Medical Education And Research Targeting dna-pkcs and b7-h1 to treat cancer
JP6655718B2 (ja) * 2015-06-28 2020-02-26 オールジェネシス バイオセラピューティクス インコーポレイテッド 血管新生を阻害するための融合タンパク質
CN108431038A (zh) 2015-10-06 2018-08-21 豪夫迈·罗氏有限公司 治疗多发性硬化的方法
WO2017075045A2 (en) 2015-10-30 2017-05-04 Mayo Foundation For Medical Education And Research Antibodies to b7-h1
KR102380150B1 (ko) 2016-03-08 2022-03-29 얀센 바이오테크 인코포레이티드 Gitr 항체, 방법, 및 용도
US20180206726A1 (en) 2016-12-07 2018-07-26 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
KR20190095936A (ko) 2016-12-14 2019-08-16 프로제너티, 인크. 인테그린 저해제로의 위장관 질환의 치료
EP4001269A1 (en) 2016-12-22 2022-05-25 Amgen Inc. Benzoisothiazole, isothiazolo[3,4-b]pyridine, quinazoline, phthalazine, pyrido[2,3-d]pyridazine and pyrido[2,3-d]pyrimidine derivatives as kras g12c inhibitors for treating lung, pancreatic or colorectal cancer
CN107137722B (zh) * 2017-05-20 2020-06-02 青岛科技大学 一种纳米载药系统(DOX-RGD-BSA@AuNCs)药物传递和生物成像
JOP20190272A1 (ar) 2017-05-22 2019-11-21 Amgen Inc مثبطات kras g12c وطرق لاستخدامها
SG11202001499WA (en) 2017-09-08 2020-03-30 Amgen Inc Inhibitors of kras g12c and methods of using the same
WO2019213526A1 (en) 2018-05-04 2019-11-07 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors and methods of using the same
EP3788038B1 (en) 2018-05-04 2023-10-11 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors and methods of using the same
EP3790886B1 (en) 2018-05-10 2024-06-26 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors for the treatment of cancer
WO2019232419A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors and methods of using the same
US20190375749A1 (en) 2018-06-11 2019-12-12 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors and methods of using the same
EP3807276A2 (en) 2018-06-12 2021-04-21 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors encompassing a piperazine ring and use thereof in the treatment of cancer
EP3810085A1 (en) 2018-06-20 2021-04-28 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an integrin inhibitor
KR20200044321A (ko) * 2018-10-19 2020-04-29 아이진 주식회사 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
JP2020090482A (ja) 2018-11-16 2020-06-11 アムジエン・インコーポレーテツド Ｋｒａｓ ｇ１２ｃ阻害剤化合物の重要な中間体の改良合成法
EP3883565A1 (en) 2018-11-19 2021-09-29 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors and methods of using the same
JP7377679B2 (ja) 2018-11-19 2023-11-10 アムジエン・インコーポレーテツド がん治療のためのｋｒａｓｇ１２ｃ阻害剤及び１種以上の薬学的に活性な追加の薬剤を含む併用療法
US20220249814A1 (en) 2018-11-19 2022-08-11 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
PE20211475A1 (es) 2018-12-20 2021-08-05 Amgen Inc Inhibidores de kif18a
AU2019401495A1 (en) 2018-12-20 2021-06-24 Amgen Inc. Heteroaryl amides useful as KIF18A inhibitors
US20220073504A1 (en) 2018-12-20 2022-03-10 Amgen Inc. Kif18a inhibitors
US20220056015A1 (en) 2018-12-20 2022-02-24 Amgen Inc. Kif18a inhibitors
SG11202109422WA (en) 2019-03-01 2021-09-29 Revolution Medicines Inc Bicyclic heterocyclyl compounds and uses thereof
MX2021010319A (es) 2019-03-01 2021-12-10 Revolution Medicines Inc Compuestos biciclicos de heteroarilo y usos de estos.
EP3738593A1 (en) 2019-05-14 2020-11-18 Amgen, Inc Dosing of kras inhibitor for treatment of cancers
CN114144414A (zh) 2019-05-21 2022-03-04 美国安进公司 固态形式
MX2022001295A (es) 2019-08-02 2022-02-22 Amgen Inc Inhibidores de kif18a.
AU2020324406A1 (en) 2019-08-02 2022-03-17 Amgen Inc. KIF18A inhibitors
WO2021026101A1 (en) 2019-08-02 2021-02-11 Amgen Inc. Kif18a inhibitors
JP2022542392A (ja) 2019-08-02 2022-10-03 アムジエン・インコーポレーテツド Ｋｉｆ１８ａ阻害剤としてのピリジン誘導体
US20220402916A1 (en) 2019-09-18 2022-12-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Small molecule inhibitors of kras g12c mutant
EP4048671A1 (en) 2019-10-24 2022-08-31 Amgen Inc. Pyridopyrimidine derivatives useful as kras g12c and kras g12d inhibitors in the treatment of cancer
CR20220230A (es) 2019-10-28 2022-06-15 Merck Sharp & Dohme Inhibidores de pequeñas moléculas de mutante g12c de kras
WO2021085653A1 (en) 2019-10-31 2021-05-06 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. 4-aminobut-2-enamide derivatives and salts thereof
EP4055028A1 (en) 2019-11-04 2022-09-14 Revolution Medicines, Inc. Ras inhibitors
MX2022005357A (es) 2019-11-04 2022-06-02 Revolution Medicines Inc Inhibidores de ras.
AU2020379734A1 (en) 2019-11-04 2022-05-05 Revolution Medicines, Inc. Ras inhibitors
MX2022005525A (es) 2019-11-08 2022-06-08 Revolution Medicines Inc Compuestos de heteroarilo bicíclicos y usos de estos.
US20230192681A1 (en) 2019-11-14 2023-06-22 Amgen Inc. Improved synthesis of kras g12c inhibitor compound
WO2021097207A1 (en) 2019-11-14 2021-05-20 Amgen Inc. Improved synthesis of kras g12c inhibitor compound
CN114980976A (zh) 2019-11-27 2022-08-30 锐新医药公司 共价ras抑制剂及其用途
WO2021106231A1 (en) 2019-11-29 2021-06-03 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. A compound having inhibitory activity against kras g12d mutation
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
TW202140011A (zh) 2020-01-07 2021-11-01 美商銳新醫藥公司 Shp2抑制劑給藥和治療癌症的方法
WO2021185719A1 (en) * 2020-03-15 2021-09-23 Ac Bioscience Sa Rgd-containing peptide and use thereof for cancer treatment
WO2021215545A1 (en) 2020-04-24 2021-10-28 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Anticancer combination therapy with n-(1-acryloyl-azetidin-3-yl)-2-((1h-indazol-3-yl)amino)methyl)-1h-imidazole-5-carboxamide inhibitor of kras-g12c
EP4139299A1 (en) 2020-04-24 2023-03-01 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Kras g12d protein inhibitors
CN115916194A (zh) 2020-06-18 2023-04-04 锐新医药公司 用于延迟、预防和治疗针对ras抑制剂的获得性抗性的方法
JP7373664B2 (ja) 2020-07-15 2023-11-02 大鵬薬品工業株式会社 腫瘍の治療に使用されるピリミジン化合物を含む組み合わせ
MX2023002248A (es) 2020-09-03 2023-05-16 Revolution Medicines Inc Uso de inhibidores de sos1 para tratar neoplasias malignas con mutaciones de shp2.
JP2023541916A (ja) 2020-09-15 2023-10-04 レボリューション メディシンズ インコーポレイテッド がんの治療における、ｒａｓ阻害剤としてのインドール誘導体
EP4267250A1 (en) 2020-12-22 2023-11-01 Qilu Regor Therapeutics Inc. Sos1 inhibitors and uses thereof
CA3217393A1 (en) 2021-05-05 2022-11-10 Elena S. Koltun Ras inhibitors
KR20240017811A (ko) 2021-05-05 2024-02-08 레볼루션 메디슨즈, 인크. 암의 치료를 위한 ras 억제제
CN117500811A (zh) 2021-05-05 2024-02-02 锐新医药公司 共价ras抑制剂及其用途
WO2022250170A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Small molecule inhibitors of kras mutated proteins
AR127308A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Revolution Medicines Inc Inhibidores ras
WO2023114954A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Genzyme Corporation Pyrazolopyrazine compounds as shp2 inhibitors
EP4227307A1 (en) 2022-02-11 2023-08-16 Genzyme Corporation Pyrazolopyrazine compounds as shp2 inhibitors
WO2023172940A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Revolution Medicines, Inc. Methods for treating immune refractory lung cancer
US11723955B1 (en) 2022-05-13 2023-08-15 Allgenesis Biotherapeutics Inc. VEGFR fusion protein pharmaceutical composition
WO2023240263A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Revolution Medicines, Inc. Macrocyclic ras inhibitors
WO2024081916A1 (en) 2022-10-14 2024-04-18 Black Diamond Therapeutics, Inc. Methods of treating cancers using isoquinoline or 6-aza-quinoline derivatives

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6177475B1 (en) 1992-06-30 2001-01-23 Billings Pharmaceuticals, Inc. Methods of using integrin modulators for treatment of inflammation
US5814609A (en) 1993-10-22 1998-09-29 University Of Southern California Compositions containing a disintegrin and methods for its use in preventing metastasis and other conditions
US5731288A (en) 1993-10-22 1998-03-24 University Of Southern California Compositions containing contortrostatin and methods for the use thereof
US5693496A (en) 1994-06-20 1997-12-02 Merck & Co., Inc. DNA encoding the mouse and human PH30 beta chain protein
US5830742A (en) 1995-06-08 1998-11-03 Immunex Corporation TNF-α converting enzyme
US6255064B1 (en) 1996-03-01 2001-07-03 The Procter & Gamble Company Disintegrin metalloprotease and its use
JP2000517185A (ja) 1996-08-29 2000-12-26 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 新規なメタロプロテアーゼファミリーｋｕｚ
US6140098A (en) 1996-08-30 2000-10-31 Schering Corporation Nucleic acids encoding mammalian proteinases; related reagents
GB9716755D0 (en) 1997-08-07 1997-10-15 Glaxo Group Ltd Invention
US5922546A (en) 1997-08-25 1999-07-13 Smithkline Beecham Corporation Human disintegrin metalloprotease KUZ gene
NZ504431A (en) * 1997-10-30 2001-09-28 Immunex Corp SVPH1-26 DNA and polypeptides
WO1999036549A1 (en) * 1998-01-14 1999-07-22 Immunex Corporation Testis-specific human svph1-8 proteinase
NZ506817A (en) * 1998-02-11 2003-08-29 Immunex Corp Metalloprotease-disintegrin SVPH3-13 and SVPH3-17 nucleic acids, and their corresponding polypeptides and methods for their production
US6265199B1 (en) 1998-07-10 2001-07-24 Zymogenetics, Inc. Disintegrin homologs
IL143769A0 (en) 1999-01-21 2002-04-21 Immunex Corp Metalloproteinase-disintegrin family members: svph dnas and polypeptides
WO2000043493A2 (en) * 1999-01-22 2000-07-27 Human Genome Sciences, Inc. Metalloproteinase adam 22
US20020001840A1 (en) 2000-04-03 2002-01-03 Carlos Lopez-Otin Methods and compositions for modulating integrin-mediated cell-cell interactions

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8207137B2 (en) 2001-07-26 2012-06-26 Inserm Method of inhibiting angiogenesis or invasion or formation of metastases
JP2016020352A (ja) * 2006-01-19 2016-02-04 アイジーン インコーポレイテッド ペプチドを有効成分とする血管関連疾患の治療剤組成物
JP2010519919A (ja) * 2007-03-06 2010-06-10 ビオアリアンス ファルマ メタルギジンのディスインテグリンドメイン（ｒｄｄ）をコードする配列を含むプラスミド
WO2009101968A1 (ja) * 2008-02-14 2009-08-20 Gene Techno Science Co., Ltd. 抗ａｄａｍ－１５抗体及びその利用
US8461310B2 (en) 2008-02-14 2013-06-11 Gene Techno Science Co., Ltd. Anti-ADAM-15 antibodies and utilization of the same
JP5526407B2 (ja) * 2008-02-14 2014-06-18 株式会社ジーンテクノサイエンス 抗ａｄａｍ−１５抗体及びその利用
JP2015511599A (ja) * 2012-03-16 2015-04-20 ユニバーシティ ヘルス ネットワーク Ｔｏｓｏ活性を調節するための方法および組成物
JP2018027951A (ja) * 2012-03-16 2018-02-22 ユニバーシティ ヘルス ネットワーク Ｔｏｓｏ活性を調節するための方法および組成物
JP2019054821A (ja) * 2012-03-16 2019-04-11 ユニバーシティ ヘルス ネットワーク Ｔｏｓｏ活性を調節するための方法および組成物
JP2016527265A (ja) * 2013-07-30 2016-09-08 インダストリー−アカデミック コーポレーション ファウンデーション，ヨンセイ ユニバーシティ サクサチリン−Ｆｃ融合タンパク質及びその用途
US10208097B2 (en) 2013-07-30 2019-02-19 Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University Method for treating vascular stenosis or occlusive disease due to thrombi by administering a saxatilin-fc fusion protein
JP2019123742A (ja) * 2014-12-31 2019-07-25 ヒュオンス カンパニー リミテッド Ｒｇｄモチーフ含有ペプチドまたはその断片を含む、視神経を保護するための医薬組成物

Also Published As

Publication number Publication date
WO2001062905A2 (en) 2001-08-30
DE60127656T2 (de) 2007-12-20
US20060177443A1 (en) 2006-08-10
IL151032A0 (en) 2003-04-10
AU4721901A (en) 2001-09-03
DE60127656D1 (de) 2007-05-16
US7074408B2 (en) 2006-07-11
US20020042368A1 (en) 2002-04-11
CA2400040A1 (en) 2001-08-30
EP1259595A2 (en) 2002-11-27
WO2001062905A3 (en) 2002-03-21
NZ521437A (en) 2004-04-30
EP1259595B1 (en) 2007-04-04
ATE358718T1 (de) 2007-04-15
AU2001247219B2 (en) 2007-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2003523768A (ja) インテグリンアンタゴニスト
AU2001247219A1 (en) Integrin antagonists
US6413932B1 (en) Tek antagonists comprising soluble tek extracellular binding domain
US7067475B2 (en) Tek antagonists
JP3768427B2 (ja) 免疫グロブリン部分との融合タンパク質、その調製および使用
JP4271850B2 (ja) Ｉｌ−１８受容体
JP2002514079A (ja) キメラｏｐｇポリペプチド
JP2000506005A (ja) ２ｆ１と呼ばれる受容体タンパク質
ES2287773T3 (es) Composiciones y metodos relacionados con fragmentos solubles multimericos y oligomericos del receptor tweak.
JP4326022B2 (ja) ＴＮＦ−α転換酵素
MXPA02010351A (es) Antagonistas de integrina/adhesion.
JP2001510042A (ja) Ｔｒａｉｌ受容体
EP1803810A1 (en) Integrin antagonists
AU2007201172A1 (en) Integrin antagonists
JP2002528058A (ja) コントートロスタチン（ｃｎ）、並びに転移及び他の症状の抑制におけるその使用方法
MXPA06000653A (en) Compositions and methods relating to multimeric and oligomeric soluble fragments of the tweak receptor
AU1757500A (en) TNF-alpha converting enzyme