JP2003520047A - 評価方法 - Google Patents
評価方法Info
- Publication number
- JP2003520047A JP2003520047A JP2001553379A JP2001553379A JP2003520047A JP 2003520047 A JP2003520047 A JP 2003520047A JP 2001553379 A JP2001553379 A JP 2001553379A JP 2001553379 A JP2001553379 A JP 2001553379A JP 2003520047 A JP2003520047 A JP 2003520047A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- amino acid
- medium
- embryos
- amino acids
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 title description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 94
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 65
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 92
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 92
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims description 85
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 53
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 39
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 38
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 25
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 20
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 20
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 19
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 15
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 9
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 claims description 9
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 8
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 229940116871 l-lactate Drugs 0.000 claims description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 7
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 6
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 5
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 5
- 239000012594 Earle’s Balanced Salt Solution Substances 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 4
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 4
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 claims description 4
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims description 3
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002824 D-alpha-aminobutyric acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 claims 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 abstract description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 34
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 22
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 21
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 20
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 17
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 17
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 210000000472 morula Anatomy 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000288049 Perdix perdix Species 0.000 description 3
- 201000011252 Phenylketonuria Diseases 0.000 description 3
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000034004 oogenesis Effects 0.000 description 3
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 ammonium ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 230000032692 embryo implantation Effects 0.000 description 2
- 208000002854 epidermolysis bullosa simplex superficialis Diseases 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000000270 postfertilization Effects 0.000 description 2
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N D-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- 101000879758 Homo sapiens Sjoegren syndrome nuclear autoantigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 208000034702 Multiple pregnancies Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 1
- 102100037330 Sjoegren syndrome nuclear autoantigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 229940100228 acetyl coenzyme a Drugs 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004703 blastocyst inner cell mass Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 210000001771 cumulus cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010448 genetic screening Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- VNOYUJKHFWYWIR-ITIYDSSPSA-N succinyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CCC(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 VNOYUJKHFWYWIR-ITIYDSSPSA-N 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/873—Techniques for producing new embryos, e.g. nuclear transfer, manipulation of totipotent cells or production of chimeric embryos
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0604—Whole embryos; Culture medium therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
細胞を培地中でインキュベートするステップを含む、細胞の生存力を評価する方法。本培地は、複数のアミノ酸を含み、この培地中の少なくとも１種のアミノ酸の濃度変化を測定する。
Description
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、細胞の生育力を評価する方法に関する。
【０００２】
［発明の背景］
アミノ酸は、マウス(Ｇａｒｄｎｅｒ ａｎｄ Ｌａｎｅ １９９３)、ラット
(Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ １９９０； Ｍｉｙｏｓｈｉ ｅ
ｔ ａｌ．１９９５)、ヒツジ(Ｇａｒｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９４)および
ウシ(Ｔａｋａｈａｓｈｉ ａｎｄ Ｆｉｒｓｔ １９９２；Ｒｏｓｅｎｋｒａ
ｎｓ ａｎｄ Ｆｉｒｓｔ １９９４；Ｋｅｓｋｉｎｔｅｐｅ ｅｔ ａｌ．１
９９５)等の、様々な種において、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、着床前胚の発生を改善
することが証明されている；Ｌａｎｅ ａｎｄ Ｇａｒｄｎｅｒ（１９９４）は
、イーグル（Ｅａｇｌｅ）の必須アミノ酸は、合糸期から培養されたネズミ胚に
おける、内部細胞塊（ｌＣＭ）の細胞数を増加させると報告した。
(Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ １９９０； Ｍｉｙｏｓｈｉ ｅ
ｔ ａｌ．１９９５)、ヒツジ(Ｇａｒｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９４)および
ウシ(Ｔａｋａｈａｓｈｉ ａｎｄ Ｆｉｒｓｔ １９９２；Ｒｏｓｅｎｋｒａ
ｎｓ ａｎｄ Ｆｉｒｓｔ １９９４；Ｋｅｓｋｉｎｔｅｐｅ ｅｔ ａｌ．１
９９５)等の、様々な種において、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、着床前胚の発生を改善
することが証明されている；Ｌａｎｅ ａｎｄ Ｇａｒｄｎｅｒ（１９９４）は
、イーグル（Ｅａｇｌｅ）の必須アミノ酸は、合糸期から培養されたネズミ胚に
おける、内部細胞塊（ｌＣＭ）の細胞数を増加させると報告した。
【０００３】
胚は、ｉｎ ｖｉｖｏで、卵管液および子宮液から外因性アミノ酸を得る。合
計２０種の遊離アミノ酸がウシ卵管液で検出され（Ｓｔａｎｋｅ ｅｔ ａｌ．
１９７４)、２５種がウシ子宮液で検出されている（Ｆａｈｎｉｎｇ ｅｔ ａ
ｌ．１９６７)。Ｍｏｏｒｅ ａｎｄ Ｂｏｎｄｉｏｌｉ（１９９３）は、グリ
シンおよびアラニンが、ウシ卵管液で最も優勢な２種のアミノ酸であり、これら
のアミノ酸を補足することにより、卵管細胞の存在下で、ウシ胚発生が増進され
ることを発見した。Ｓｕｈら（１９９５）は、グリシンを含むＣＲ２培地で培養
された有意に多いウシ接合体が胚盤胞期に達することを報告し、Ｒｉｅｇｅｒ
ａｎｄ Ｌｏｓｋｕｔｏｆｆ（１９９４）は、グルタミンおよびグリシンが、裸
出されたウシ卵母細胞によって消費され、グルタミンは、早期着床前発生中に取
り込まれることを示した（Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９２)。
計２０種の遊離アミノ酸がウシ卵管液で検出され（Ｓｔａｎｋｅ ｅｔ ａｌ．
１９７４)、２５種がウシ子宮液で検出されている（Ｆａｈｎｉｎｇ ｅｔ ａ
ｌ．１９６７)。Ｍｏｏｒｅ ａｎｄ Ｂｏｎｄｉｏｌｉ（１９９３）は、グリ
シンおよびアラニンが、ウシ卵管液で最も優勢な２種のアミノ酸であり、これら
のアミノ酸を補足することにより、卵管細胞の存在下で、ウシ胚発生が増進され
ることを発見した。Ｓｕｈら（１９９５）は、グリシンを含むＣＲ２培地で培養
された有意に多いウシ接合体が胚盤胞期に達することを報告し、Ｒｉｅｇｅｒ
ａｎｄ Ｌｏｓｋｕｔｏｆｆ（１９９４）は、グルタミンおよびグリシンが、裸
出されたウシ卵母細胞によって消費され、グルタミンは、早期着床前発生中に取
り込まれることを示した（Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９２)。
【０００４】
この分野における研究は、１種または１組の放射標識アミノ酸を投与すること
に集中していたが、メスの管内の胚は、アミノ酸の混合物に曝露される（Ｌｅｅ
ｓｅ １９８８)。Ｌａｍｂ ａｎｄ Ｌｅｅｓｅ（１９９４）は、アミノ酸２
０種の生理学的混合物の、ネズミ胚盤胞による消費を測定し、９種が示差的に使
い果たされていることを確認した。
に集中していたが、メスの管内の胚は、アミノ酸の混合物に曝露される（Ｌｅｅ
ｓｅ １９８８)。Ｌａｍｂ ａｎｄ Ｌｅｅｓｅ（１９９４）は、アミノ酸２
０種の生理学的混合物の、ネズミ胚盤胞による消費を測定し、９種が示差的に使
い果たされていることを確認した。
【０００５】
Ｆｒｅｉら（１９８９）は、放射標識メチオニンがタンパク質に取り込まれる
速度を測定し、ウシ胚におけるアミノ酸の運命を調査研究した。彼等は、合糸期
から８細胞期までの間に、タンパク質合成速度が定量的に低減し、続いて、この
時点から胚盤胞期まで、累進的に増加することを発見した。これらの発生段階の
頃に確認さるアミノ酸利用の定量的増加は、発生の８〜１６細胞期に起こる、ウ
シ胚ゲノムの転写開始と関係があると考えられる（Ｔｅｌｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ
．１９９０)。
速度を測定し、ウシ胚におけるアミノ酸の運命を調査研究した。彼等は、合糸期
から８細胞期までの間に、タンパク質合成速度が定量的に低減し、続いて、この
時点から胚盤胞期まで、累進的に増加することを発見した。これらの発生段階の
頃に確認さるアミノ酸利用の定量的増加は、発生の８〜１６細胞期に起こる、ウ
シ胚ゲノムの転写開始と関係があると考えられる（Ｔｅｌｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ
．１９９０)。
【０００６】
アミノ酸は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで受精したウシ接合体の桑実胚および胚盤胞へ
の発生を改善し、胚盤胞期における総細胞数を増加させることも証明されている
（Ｔａｋａｈａｓｈｉ ａｎｄ Ｆｉｒｓｔ １９９２；Ｒｏｓｅｎｋｒａｎｓ
ａｎｄ Ｆｉｒｓｔ １９９４；Ｋｅｓｋｉｎｔｅｐｅ ｅｔ ａｌ．１９９
５)。外因的に投与されたアミノ酸が、いかにして、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの胚発
生を助けるかは不明である。グルタミンのように、エネルギー源の役割を果たす
ものもあれば（Ｒｉｅｇｅｒａｎｄ Ｇｕａｙ １９８８；Ｒｉｅｇｅｒ １９
９２)、内因性アミノ酸のプールサイズを増大し、その結果、新規タンパク質合
成を刺激するものもある（Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ １９９０
)。Ｖａｎ Ｗｉｎｋｌｅ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（１９９５）は、ｉｎ
ｖｉｔｒｏで発生するネズミ胚のアミノ酸含量と、ｉｎ ｖｉｖｏで発生する
ネズミ胚のアミノ酸含量との間には有意差があることを示した。
の発生を改善し、胚盤胞期における総細胞数を増加させることも証明されている
（Ｔａｋａｈａｓｈｉ ａｎｄ Ｆｉｒｓｔ １９９２；Ｒｏｓｅｎｋｒａｎｓ
ａｎｄ Ｆｉｒｓｔ １９９４；Ｋｅｓｋｉｎｔｅｐｅ ｅｔ ａｌ．１９９
５)。外因的に投与されたアミノ酸が、いかにして、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの胚発
生を助けるかは不明である。グルタミンのように、エネルギー源の役割を果たす
ものもあれば（Ｒｉｅｇｅｒａｎｄ Ｇｕａｙ １９８８；Ｒｉｅｇｅｒ １９
９２)、内因性アミノ酸のプールサイズを増大し、その結果、新規タンパク質合
成を刺激するものもある（Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ １９９０
)。Ｖａｎ Ｗｉｎｋｌｅ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（１９９５）は、ｉｎ
ｖｉｔｒｏで発生するネズミ胚のアミノ酸含量と、ｉｎ ｖｉｖｏで発生する
ネズミ胚のアミノ酸含量との間には有意差があることを示した。
【０００７】
Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ ａｎｄ Ｌｅｅｓｅ（１９９６）は、合成卵管液（synt
hetic oviduct fluid; ＳＯＦ；Ｔｅｒｖｉｔ ｅｔ ａｌ．１９７２)を補足す
るのに通常使用される濃度の１９種のアミノ酸で培養されたウシ胚を調査研究し
た。推定される合糸期から胚盤胞期までの、ｉｎ ｖｉｔｒｏで受精した胚群、
および受精後７日に子宮から新たにフラッシュされた胚盤胞（ｉｎ ｖｉｖｏで
誘導）を研究した。蛍光定量的誘導体化後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）で個々のアミノ酸を検出することにより、１７種のアミノ酸の消費速度を
１２時間にわたって測定した。Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ ａｎｄ Ｌｅｅｓｅ（１９
９６）は、推定される合糸期（０．７６±０．０５ｐｍｏｌ接合体-1時間-1）お
よび４細胞期（０．９４±０．１ｐｍｏｌ胚-1時間-1)におけるグルタミン消費
を確認した。しかし、Ｂ２培地中の唯一のアミノ酸基質として与えられた放射標
識グルタミンの、ウシ胚による取り込みを測定したＲｉｅｇｅｒ ら（１９９２
）の結果とは違って、胚盤胞期に、より大きいグルタミンの消費は確認されなか
った。
hetic oviduct fluid; ＳＯＦ；Ｔｅｒｖｉｔ ｅｔ ａｌ．１９７２)を補足す
るのに通常使用される濃度の１９種のアミノ酸で培養されたウシ胚を調査研究し
た。推定される合糸期から胚盤胞期までの、ｉｎ ｖｉｔｒｏで受精した胚群、
および受精後７日に子宮から新たにフラッシュされた胚盤胞（ｉｎ ｖｉｖｏで
誘導）を研究した。蛍光定量的誘導体化後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）で個々のアミノ酸を検出することにより、１７種のアミノ酸の消費速度を
１２時間にわたって測定した。Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ ａｎｄ Ｌｅｅｓｅ（１９
９６）は、推定される合糸期（０．７６±０．０５ｐｍｏｌ接合体-1時間-1）お
よび４細胞期（０．９４±０．１ｐｍｏｌ胚-1時間-1)におけるグルタミン消費
を確認した。しかし、Ｂ２培地中の唯一のアミノ酸基質として与えられた放射標
識グルタミンの、ウシ胚による取り込みを測定したＲｉｅｇｅｒ ら（１９９２
）の結果とは違って、胚盤胞期に、より大きいグルタミンの消費は確認されなか
った。
【０００８】
アミノ酸消耗に関して、Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ ａｎｄ Ｌｅｅｓｅ（１９９６
）の最も興味深い結果は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導された胚盤胞によるばかりで
なく、ｉｎ ｖｉｔｒｏで発生の全ての段階で、かなりの量のスレオニンが消費
されたことであった。スレオニンの運命は不明であるが、スレオニンは、アセチ
ルコエンザイムＡ（ＣｏＡ）またはスクシニル−ＣｏＡとしてクレブス回路に入
ることにより、エネルギー基質の役割を果たすと考えられる。
）の最も興味深い結果は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導された胚盤胞によるばかりで
なく、ｉｎ ｖｉｔｒｏで発生の全ての段階で、かなりの量のスレオニンが消費
されたことであった。スレオニンの運命は不明であるが、スレオニンは、アセチ
ルコエンザイムＡ（ＣｏＡ）またはスクシニル−ＣｏＡとしてクレブス回路に入
ることにより、エネルギー基質の役割を果たすと考えられる。
【０００９】
ｉｎ ｖｉｔｒｏで産生された胚の全ての段階およびｉｎ ｖｉｖｏで誘導さ
れた胚によって、かなりの量のアラニンが生成した。Ｖａｎ Ｗｉｎｋｌｅ ａ
ｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（１９９５）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで成長させたネズ
ミ胚盤胞で、非常に高い濃度が確認されたため、アラニンは、胚が廃棄窒素を隔
絶する経路の役割を果たすという仮説を立てた。加えて、Ｇａｒｄｎｅｒ ａｎ
ｄ Ｌａｎｅ（１９９３）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで成長させたマウス胚にとって
、アンモニア毒性は潜在的な問題であることを示した。本研究で、ｉｎ ｖｉｔ
ｒｏで産生されたおよびｉｎ ｖｉｖｏで誘導されたウシ胚の培養中に外部アラ
ニン濃度の大幅な上昇が確認されたことから、我々は、実は、アンモニウムイオ
ンの蓄積を防止するために、胚によってアラニンが形成されると提唱するに至っ
た。
れた胚によって、かなりの量のアラニンが生成した。Ｖａｎ Ｗｉｎｋｌｅ ａ
ｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（１９９５）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで成長させたネズ
ミ胚盤胞で、非常に高い濃度が確認されたため、アラニンは、胚が廃棄窒素を隔
絶する経路の役割を果たすという仮説を立てた。加えて、Ｇａｒｄｎｅｒ ａｎ
ｄ Ｌａｎｅ（１９９３）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで成長させたマウス胚にとって
、アンモニア毒性は潜在的な問題であることを示した。本研究で、ｉｎ ｖｉｔ
ｒｏで産生されたおよびｉｎ ｖｉｖｏで誘導されたウシ胚の培養中に外部アラ
ニン濃度の大幅な上昇が確認されたことから、我々は、実は、アンモニウムイオ
ンの蓄積を防止するために、胚によってアラニンが形成されると提唱するに至っ
た。
【００１０】
胚盤胞移植および４〜８細胞期を超える高い胚発生の要求の出現以来、ヒト着
床前培地中にアミノ酸を含めることが優勢になった。
床前培地中にアミノ酸を含めることが優勢になった。
【００１１】
これにもかかわらず、発生の様々な段階で、どのアミノ酸が実際に胚により利
用されるかということに関する知識は未だ少ない。
用されるかということに関する知識は未だ少ない。
【００１２】
ｉｎ ｖｉｔｒｏで胚を産生するための現行の方法としては、ｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ受精および細胞質内精子注入（intra cytoplasmic sperm injection; ＩＣＳ
Ｉ)などがある。胚産生は、凍結保存および胚生検の技術に従ってもよい。
ｏ受精および細胞質内精子注入（intra cytoplasmic sperm injection; ＩＣＳ
Ｉ)などがある。胚産生は、凍結保存および胚生検の技術に従ってもよい。
【００１３】
胚がアミノ酸混合物を改変する方法を理解することによって、なぜ、ｉｎ ｖ
ｉｔｒｏで産生された胚が、そのｉｎ ｖｉｖｏ対応物より弱いかを理解する糸
口が得られる。これらの問題は、ヒトｉｎ ｖｉｔｒｏ受精（in vitro fertili
zation; ＩＶＦ）プログラムで特に明白であり、その結果、英国における平均成
功率は、現在、約１７％すなわち６例に１例である。
ｉｔｒｏで産生された胚が、そのｉｎ ｖｉｖｏ対応物より弱いかを理解する糸
口が得られる。これらの問題は、ヒトｉｎ ｖｉｔｒｏ受精（in vitro fertili
zation; ＩＶＦ）プログラムで特に明白であり、その結果、英国における平均成
功率は、現在、約１７％すなわち６例に１例である。
【００１４】
代表的なヒトＩＶＦプログラムは、卵巣卵産生および放出ホルモンを女性に投
与することを含む。これらの卵を回収し、精子で受精させ、約１０個の胚を生成
する。次いで、最高３個（英国の場合）の受精胚を女性に移植し戻し、このプロ
グラムが成功すれば、少なくとも１個が子宮に着床し、発生し続ける。
与することを含む。これらの卵を回収し、精子で受精させ、約１０個の胚を生成
する。次いで、最高３個（英国の場合）の受精胚を女性に移植し戻し、このプロ
グラムが成功すれば、少なくとも１個が子宮に着床し、発生し続ける。
【００１５】
ホルモン投与を減らすために、卵形成の早い段階に卵を回収してもよい。その
後の卵成熟は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。ｉｎ ｖｉｔｒｏで成熟させた卵
の受精後、着床させるために、最高３個の受精胚を女性に移し返す。
後の卵成熟は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。ｉｎ ｖｉｔｒｏで成熟させた卵
の受精後、着床させるために、最高３個の受精胚を女性に移し返す。
【００１６】
現在では、受精には、細胞質内精子注入法がますます使用されている。卵巣卵
産生および放出ホルモンの投与に続いて、卵丘細胞で囲まれた卵が放出される。
保護層は卵を覆い隠すため、卵を明らかにするために除去しなければならず、次
いで、この卵を視覚的類別システムに供してから、精子注入を実施する。
産生および放出ホルモンの投与に続いて、卵丘細胞で囲まれた卵が放出される。
保護層は卵を覆い隠すため、卵を明らかにするために除去しなければならず、次
いで、この卵を視覚的類別システムに供してから、精子注入を実施する。
【００１７】
現在まで、高い発生潜在能力を有する胚または卵を効果的且つ確実に選択する
方法はないが、マウスでは、このために、グルコース消費および乳酸産生が使用
されてきた。停止中および健康な胚または卵におけるグルコース、ピルビン酸塩
、または酸素消費等の生理学的パラメーターの比較研究では、この問題を解決す
ることができなかった。現行の方法は、胚および卵を類別システムに供する形態
学的選択に依存する。
方法はないが、マウスでは、このために、グルコース消費および乳酸産生が使用
されてきた。停止中および健康な胚または卵におけるグルコース、ピルビン酸塩
、または酸素消費等の生理学的パラメーターの比較研究では、この問題を解決す
ることができなかった。現行の方法は、胚および卵を類別システムに供する形態
学的選択に依存する。
【００１８】
最も生命力のある胚および卵の決定は非常に不確実なため、人工的受精後、着
床させるために１個より多い胚を母親に移し返す必要が明らかになる。この手技
は、１個以上の胚が発生できない可能性を補い、限られた成功の機会を増大する
。
床させるために１個より多い胚を母親に移し返す必要が明らかになる。この手技
は、１個以上の胚が発生できない可能性を補い、限られた成功の機会を増大する
。
【００１９】
卵または胚の選択の信頼性が高まることは、全体としては、最も生命力のある
胚を選択し、続く着床のために移植することができるＩＶＦプログラムで、重要
な結果を有する。生育可能な胚１個を移植することは、早産のリスクおよび周産
期の問題を伴う多子出産の可能性から守る。
胚を選択し、続く着床のために移植することができるＩＶＦプログラムで、重要
な結果を有する。生育可能な胚１個を移植することは、早産のリスクおよび周産
期の問題を伴う多子出産の可能性から守る。
【００２０】
すべての試験が１００％正確なまたは信頼できる必要はないが、卵または胚１
個の生存力に関して、一貫した指標を得るための非侵襲的方法を提供すべきであ
ることが理解されよう。
個の生存力に関して、一貫した指標を得るための非侵襲的方法を提供すべきであ
ることが理解されよう。
【００２１】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ受精後、できる限りすぐに、胚の移植および着床を行うこと
ができるように、適する試験は、できる限り短い選択期間を含むべきである。こ
のことは、発生中の胚が人工的培養条件に長時間曝露することに関連しかねない
リスクを最小限に抑える。他の方法では、労力および資力集約的な施術の費用を
最小限に抑えることができるため、短い選択期間も経済的観点から有益である。
ができるように、適する試験は、できる限り短い選択期間を含むべきである。こ
のことは、発生中の胚が人工的培養条件に長時間曝露することに関連しかねない
リスクを最小限に抑える。他の方法では、労力および資力集約的な施術の費用を
最小限に抑えることができるため、短い選択期間も経済的観点から有益である。
【００２２】
かなりの研究の関心が、核移植（ＮＴ)による胚の生成にも集中している。こ
のような胚は、ドナー細胞からの核（カリオプラスト）を除核卵（卵質; ooplas
t）に注入し、次いで、電気パルスを使用して胚発生を誘発することによって作
製される。胚盤胞の内部細胞塊に由来し、身体の全ての組織の前駆体細胞である
、幹細胞を含む、様々なカリオプラストが核移植に使用されてきた。しかし、胚
由来の幹細胞（ＥＳ細胞）は、マウスおよびヒトから最終的に単離されたにすぎ
ず、家禽種を含む他の種で、それらを生産する方法が徹底的に調査されている。
「ドリー（Ｄｏｌｌｙ）」の場合、カリオプラストは体細胞性（成体）乳腺細胞
であった。
のような胚は、ドナー細胞からの核（カリオプラスト）を除核卵（卵質; ooplas
t）に注入し、次いで、電気パルスを使用して胚発生を誘発することによって作
製される。胚盤胞の内部細胞塊に由来し、身体の全ての組織の前駆体細胞である
、幹細胞を含む、様々なカリオプラストが核移植に使用されてきた。しかし、胚
由来の幹細胞（ＥＳ細胞）は、マウスおよびヒトから最終的に単離されたにすぎ
ず、家禽種を含む他の種で、それらを生産する方法が徹底的に調査されている。
「ドリー（Ｄｏｌｌｙ）」の場合、カリオプラストは体細胞性（成体）乳腺細胞
であった。
【００２３】
核移植による、特に幹細胞からの胚の生成は、トランスジェニック動物の生産
に向けてのおよび細胞「治療型クローニング」（罹病したまたは適切に機能しな
くなったものに取って代わる新しい細胞および組織の生成）に好ましい経路であ
る。しかし、カリオプラスト、幹細胞、幹細胞前駆体および生育可能な核移植胚
を生成し同定する現行の方法は、労力および時間を要する。
に向けてのおよび細胞「治療型クローニング」（罹病したまたは適切に機能しな
くなったものに取って代わる新しい細胞および組織の生成）に好ましい経路であ
る。しかし、カリオプラスト、幹細胞、幹細胞前駆体および生育可能な核移植胚
を生成し同定する現行の方法は、労力および時間を要する。
【００２４】
配偶子（発生のいずれの段階であってもよい)、胚（核移植によって作られた
ものであってもよい)、カリオプラスト、推定される幹細胞集団、幹細胞前駆体
集団または幹細胞集団等の、細胞の同定を簡素化するであろう生化学マーカーが
必要である。
ものであってもよい)、カリオプラスト、推定される幹細胞集団、幹細胞前駆体
集団または幹細胞集団等の、細胞の同定を簡素化するであろう生化学マーカーが
必要である。
【００２５】
本明細書で使用する用語「卵」は、卵子形成のあらゆる段階の卵を指し、ｉｎ
ｖｉｔｒｏにおいて成熟した卵を含む。
ｖｉｔｒｏにおいて成熟した卵を含む。
【００２６】
［発明の説明］
本発明によれば、複数のアミノ酸を含む培地中で細胞をインキュベートするス
テップと、培地中の少なくとも１種のアミノ酸の濃度変化を測定するステップと
を含む、細胞の生育力を評価する方法が提供される。
テップと、培地中の少なくとも１種のアミノ酸の濃度変化を測定するステップと
を含む、細胞の生育力を評価する方法が提供される。
【００２７】
細胞という用語は、その最も広い意味で使用され、配偶子（発生のいずれの段
階であってもよい)、胚（核移植によって作られたものであってもよい)、カリオ
プラスト、推定される幹細胞集団、幹細胞前駆体集団または幹細胞集団を指す。
階であってもよい)、胚（核移植によって作られたものであってもよい)、カリオ
プラスト、推定される幹細胞集団、幹細胞前駆体集団または幹細胞集団を指す。
【００２８】
生存力(生育力、生命力）という用語は、その最も広い意味で使用され、特に
、胚の胚盤胞期までの発生、成功した胚の着床および着床前スクリーニング方法
を含む。
、胚の胚盤胞期までの発生、成功した胚の着床および着床前スクリーニング方法
を含む。
【００２９】
本発明の方法は、その変化が所定の基準に合えば、細胞を選択するステップを
さらに含むことが好ましい。
さらに含むことが好ましい。
【００３０】
さらなる発生用に選択される胚が、生物の卵管に導入され、子宮壁に着床する
ことが好ましい。さらなる発生用に選択される卵を受精させて胚を生成し、これ
が生物の卵管に導入されて、子宮壁に着床する。本発明の１つの実施形態では、
卵は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで成熟させた卵である。さらなる発生用に選択される、
カリオプラスト、推定される幹細胞集団、幹細胞前駆体集団、幹細胞集団、また
は核移植で作られた胚を、耐病性、多い赤身塊、およびその乳汁中にヒト用医療
品を生成する能力等の、望ましい特質を備えたトランスジェニック生物の生産に
使用することが可能である。
ことが好ましい。さらなる発生用に選択される卵を受精させて胚を生成し、これ
が生物の卵管に導入されて、子宮壁に着床する。本発明の１つの実施形態では、
卵は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで成熟させた卵である。さらなる発生用に選択される、
カリオプラスト、推定される幹細胞集団、幹細胞前駆体集団、幹細胞集団、また
は核移植で作られた胚を、耐病性、多い赤身塊、およびその乳汁中にヒト用医療
品を生成する能力等の、望ましい特質を備えたトランスジェニック生物の生産に
使用することが可能である。
【００３１】
本培地は、グルコース、Ｌ−乳酸塩、ピルビン酸塩およびアミノ酸類の生理学
的混合物を加えたアールの平衡塩類溶液（Earle's Balanced Salt Solution; Ｅ
ＢＳＳ）を含むことが好ましい。
的混合物を加えたアールの平衡塩類溶液（Earle's Balanced Salt Solution; Ｅ
ＢＳＳ）を含むことが好ましい。
【００３２】
グルコース、Ｌ−乳酸塩およびピルビン酸塩の濃度は、それぞれ、０．５ｍＭ
〜１．５ｍＭ、４ｍＭ〜６ｍＭおよび０．３７ｍＭ〜０．５７ｍＭの範囲である
ことが好ましい。さらに好ましくは、グルコース、Ｌ−乳酸塩およびピルビン酸
塩の濃度は、１ｍＭ、５ｍＭ、および０．４７ｍＭである。
〜１．５ｍＭ、４ｍＭ〜６ｍＭおよび０．３７ｍＭ〜０．５７ｍＭの範囲である
ことが好ましい。さらに好ましくは、グルコース、Ｌ−乳酸塩およびピルビン酸
塩の濃度は、１ｍＭ、５ｍＭ、および０．４７ｍＭである。
【００３３】
胚（核移植によって作られたものであってもよい)、卵、カリオプラスト、推
定される幹細胞集団、幹細胞前駆体集団または幹細胞集団は、およそ４μLの培
地滴中で培養されることが好ましい。ｏ−フタルジアルデヒドで誘導体化した後
、消費された培地のアミノ酸濃度を、ＨＰＬＣを使用して測定し、アミノ酸消費
および生成プロフィールを作成することが好ましい。
定される幹細胞集団、幹細胞前駆体集団または幹細胞集団は、およそ４μLの培
地滴中で培養されることが好ましい。ｏ−フタルジアルデヒドで誘導体化した後
、消費された培地のアミノ酸濃度を、ＨＰＬＣを使用して測定し、アミノ酸消費
および生成プロフィールを作成することが好ましい。
【００３４】
ＨＰＬＣで使用するためのマイクロリットルのサンプルを正確に希釈するため
に、内部標準を培地に導入する。内部標準は、Ｄ−α−アミノ酪酸であることが
好ましい。
に、内部標準を培地に導入する。内部標準は、Ｄ−α−アミノ酪酸であることが
好ましい。
【００３５】
本発明は、培地中で細胞をインキュベートする手段と、培地中の少なくとも１
種のアミノ酸の濃度変化を決定する手段とを含む、診断キットをも提供する。本
診断キットは、試験細胞を中でインキュベートする培地中のアミノ酸の消費また
は生成を示すアミノ酸プロフィールを作成する。本診断キットは、インキュベー
トした細胞のアミノ酸プロフィールと、研究の特定の生物の停止中および健康な
細胞に関する所定の「フィンガープリント」アミノ酸プロフィールとの比較を可
能にすることが好ましい。従って、アミノ酸プロフィールは、最も生命力のある
細胞を選択する際の選択マーカーとして使用される。
種のアミノ酸の濃度変化を決定する手段とを含む、診断キットをも提供する。本
診断キットは、試験細胞を中でインキュベートする培地中のアミノ酸の消費また
は生成を示すアミノ酸プロフィールを作成する。本診断キットは、インキュベー
トした細胞のアミノ酸プロフィールと、研究の特定の生物の停止中および健康な
細胞に関する所定の「フィンガープリント」アミノ酸プロフィールとの比較を可
能にすることが好ましい。従って、アミノ酸プロフィールは、最も生命力のある
細胞を選択する際の選択マーカーとして使用される。
【００３６】
アミノ酸消費または生成のプロフィールを使用して、特定のアミノ酸プロフィ
ールを特徴とする、推定される幹細胞集団、幹細胞前駆体集団または幹細胞集団
の存在を確認することができる。次いで、この推定される幹細胞集団、幹細胞前
駆体集団または幹細胞集団を遺伝子操作に使用して、トランスジェニック生物を
生産することができる。本発明の方法は、幹細胞同定および選択のための簡単な
生化学マーカーを提供することにより、現在の技術に勝る非常に大きな利点を示
す。
ールを特徴とする、推定される幹細胞集団、幹細胞前駆体集団または幹細胞集団
の存在を確認することができる。次いで、この推定される幹細胞集団、幹細胞前
駆体集団または幹細胞集団を遺伝子操作に使用して、トランスジェニック生物を
生産することができる。本発明の方法は、幹細胞同定および選択のための簡単な
生化学マーカーを提供することにより、現在の技術に勝る非常に大きな利点を示
す。
【００３７】
本発明の方法を使用して、細胞を培地に移植後、２４時間以下で細胞の選択を
実現することが好ましい。選択は、細胞を培地に移植後、１０時間以下で実現す
ることがさらに好ましい。選択は、６時間以下で実現することが最も好ましい。
実現することが好ましい。選択は、細胞を培地に移植後、１０時間以下で実現す
ることがさらに好ましい。選択は、６時間以下で実現することが最も好ましい。
【００３８】
本発明の１つの実施形態では、ある特定の種の、生命力のある細胞を選択する
ための選択マーカーとして、「フィンガープリント」アミノ酸プロフィールが全
体として使用される。本発明の別の実施形態では、最も生命力のある細胞の選択
は、その種の健康な細胞を示す消費または生成プロフィールを有する、一般に１
〜５種のアミノ酸を含む、アミノ酸の小さいグループに基づく。
ための選択マーカーとして、「フィンガープリント」アミノ酸プロフィールが全
体として使用される。本発明の別の実施形態では、最も生命力のある細胞の選択
は、その種の健康な細胞を示す消費または生成プロフィールを有する、一般に１
〜５種のアミノ酸を含む、アミノ酸の小さいグループに基づく。
【００３９】
本発明の方法は、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジおよびあらゆる他の家禽動物を含
む、様々な生物に使用することが可能である。選択マーカーに使用されるアミノ
酸は、任意のアミノ酸または複数のアミノ酸を含んでもよい。本発明の１つの実
施形態では、本方法は、ヒトに使用され、選択マーカーに使用されるアミノ酸と
しては、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、
グリシン、ロイシン、リジン、トリプトファン、バリンのいずれかのアミノ酸ま
たはアミノ酸の組合せなどが挙げられる。本発明の１つの実施形態では、選択マ
ーカーに使用されるアミノ酸はアラニンである。
む、様々な生物に使用することが可能である。選択マーカーに使用されるアミノ
酸は、任意のアミノ酸または複数のアミノ酸を含んでもよい。本発明の１つの実
施形態では、本方法は、ヒトに使用され、選択マーカーに使用されるアミノ酸と
しては、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、
グリシン、ロイシン、リジン、トリプトファン、バリンのいずれかのアミノ酸ま
たはアミノ酸の組合せなどが挙げられる。本発明の１つの実施形態では、選択マ
ーカーに使用されるアミノ酸はアラニンである。
【００４０】
［発明の詳細な説明］
次に、単なる例示として、添付の図面を参照しながら、本発明を説明する。
最初の実験で、ｉｎ ｖｉｔｒｏで受精させた予備のヒト胚を、胚盤胞期に達
するまで、４μLの培地滴に個別に入れた。ｉｎ ｖｉｖｏで発生中の胚が遭遇
する条件によく似るように、胚を個別に培養した。この培地は、１ｍＭグルコー
ス、５ｍＭ Ｌ−乳酸塩、０．４７ｍＭピルビン酸塩および２０種のアミノ酸類
の生理学的混合物を加えたＥＢＳＳの滴４μLで構成されていた。アミノ酸類の
個々の濃度は、０．００５ｍＭ〜１．０ｍＭの範囲であった。
するまで、４μLの培地滴に個別に入れた。ｉｎ ｖｉｖｏで発生中の胚が遭遇
する条件によく似るように、胚を個別に培養した。この培地は、１ｍＭグルコー
ス、５ｍＭ Ｌ−乳酸塩、０．４７ｍＭピルビン酸塩および２０種のアミノ酸類
の生理学的混合物を加えたＥＢＳＳの滴４μLで構成されていた。アミノ酸類の
個々の濃度は、０．００５ｍＭ〜１．０ｍＭの範囲であった。
【００４１】
培養中に、消費された培地中の１８種のアミノ酸濃度を、ｏ−フタルジアルデ
ヒドで誘導体化した後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して、
同時に測定した。この結果を使用して、図１〜３に示した、アミノ酸消費および
生成プロフィールを集計した。
ヒドで誘導体化した後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して、
同時に測定した。この結果を使用して、図１〜３に示した、アミノ酸消費および
生成プロフィールを集計した。
【００４２】
ＨＰＬＣ用の、マイクロリットルのサンプルを正確に希釈するために、代謝で
きないアミノ酸（Ｄ−αアミノ酪酸）の形の内部標準を、体積当たり４９部に１
部の濃度で、培地中に導入した。この内部標準を使用することにより、休止胚に
存在し、別の方法では、「バックグラウンドノイズ」中に紛れてしまうであろう
微小の差を感知することができる。マーカーに起因するＨＰＬＣピークを容易に
区別することができるため、これを使用して、正確な希釈を計算した。
きないアミノ酸（Ｄ−αアミノ酪酸）の形の内部標準を、体積当たり４９部に１
部の濃度で、培地中に導入した。この内部標準を使用することにより、休止胚に
存在し、別の方法では、「バックグラウンドノイズ」中に紛れてしまうであろう
微小の差を感知することができる。マーカーに起因するＨＰＬＣピークを容易に
区別することができるため、これを使用して、正確な希釈を計算した。
【００４３】
図２に示す通り、コンパクションしている８細胞期から桑実胚期の間に、培地
から有意に消費されたアミノ酸は、セリン、アルギニン、イソロイシンおよびロ
イシンであった。アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸塩およびトリプトフ
ァンは、有意に生成された。アラニン出現は、コンパクションしている８細胞か
ら桑実胚期までの間、培養された胚では１０．８７±１．６１ｐｍｏｌ／胚／時
間であったのに対して、桑実胚から胚盤胞期まで培養された胚では、１３．９０
±１．２３ｐｍｏｌ／胚／時間に増加した。
から有意に消費されたアミノ酸は、セリン、アルギニン、イソロイシンおよびロ
イシンであった。アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸塩およびトリプトフ
ァンは、有意に生成された。アラニン出現は、コンパクションしている８細胞か
ら桑実胚期までの間、培養された胚では１０．８７±１．６１ｐｍｏｌ／胚／時
間であったのに対して、桑実胚から胚盤胞期まで培養された胚では、１３．９０
±１．２３ｐｍｏｌ／胚／時間に増加した。
【００４４】
コンパクションしている８細胞期に停止した胚は、同一段階の発生中の胚より
有意に多いアラニンを生成した（１７．７２±１．４４ｐｍｏｌ／胚／時間；ｐ
＝０．００２８）（図１〜３)。桑実胚から胚盤胞への過渡期に、グルタミン酸
塩も有意に生成した。
有意に多いアラニンを生成した（１７．７２±１．４４ｐｍｏｌ／胚／時間；ｐ
＝０．００２８）（図１〜３)。桑実胚から胚盤胞への過渡期に、グルタミン酸
塩も有意に生成した。
【００４５】
胚は、胚を中でインキュベートした培地のアミノ酸濃度を変化させることが知
られているが、健康な胚と停止中の胚によってもたらされる変化の有意差は、こ
れまで注目されずに終わった。胚実験の結果は、同一インキュベーション条件に
供せられた卵、カリオプラスト、幹細胞、幹細胞前駆体または核移植で作られた
胚について予測される結果をよく示していることが理解されよう。従って、培地
中の少なくとも１種のアミノ酸の濃度変化を使用して、胚、卵、カリオプラスト
、幹細胞、幹細胞前駆体または核移植で作られた胚の生育力に関する指標を与え
ることができる。これは、後続の操作のための胚または卵の選択、および遺伝子
操作のためのカリオプラスト、幹細胞、幹細胞前駆体または核移植で作られた胚
の選択における大きな進歩を表す。
られているが、健康な胚と停止中の胚によってもたらされる変化の有意差は、こ
れまで注目されずに終わった。胚実験の結果は、同一インキュベーション条件に
供せられた卵、カリオプラスト、幹細胞、幹細胞前駆体または核移植で作られた
胚について予測される結果をよく示していることが理解されよう。従って、培地
中の少なくとも１種のアミノ酸の濃度変化を使用して、胚、卵、カリオプラスト
、幹細胞、幹細胞前駆体または核移植で作られた胚の生育力に関する指標を与え
ることができる。これは、後続の操作のための胚または卵の選択、および遺伝子
操作のためのカリオプラスト、幹細胞、幹細胞前駆体または核移植で作られた胚
の選択における大きな進歩を表す。
【００４６】
たとえば、停止中の胚によるアラニン生成の増加は、意外であり、直感に反す
るものである。アラニンが、廃棄窒素を隔離する経路として使用され、有毒なア
ンモニウムイオンの蓄積を防止するために胚によって形成されるのであれば、一
番健康な胚が最も代謝活性であり、停止中の胚と比較して、多量のアラニンを生
成すると考えられるであろう。意外なことに、一番健康な胚は、代謝的に「静か
」であり、発生できない胚は、比較的多いタンパク質を代謝回転し、アミノ基を
アラニンとして培地中に運び去ることが、結果からわかる。
るものである。アラニンが、廃棄窒素を隔離する経路として使用され、有毒なア
ンモニウムイオンの蓄積を防止するために胚によって形成されるのであれば、一
番健康な胚が最も代謝活性であり、停止中の胚と比較して、多量のアラニンを生
成すると考えられるであろう。意外なことに、一番健康な胚は、代謝的に「静か
」であり、発生できない胚は、比較的多いタンパク質を代謝回転し、アミノ基を
アラニンとして培地中に運び去ることが、結果からわかる。
【００４７】
この結果から、ヒト着床前胚は、発生の異なる段階に、アミノ酸を選択的に使
用できること、また、アラニンの培地中への出現を、胚、卵、カリオプラスト、
幹細胞、幹細胞前駆体または核移植で作られた胚の生存力の潜在的マーカーとし
て使用できることがわかる。
用できること、また、アラニンの培地中への出現を、胚、卵、カリオプラスト、
幹細胞、幹細胞前駆体または核移植で作られた胚の生存力の潜在的マーカーとし
て使用できることがわかる。
【００４８】
本発明の方法は、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ)、嚢胞性線維症等の疾患およ
び他の遺伝子異常または染色体異常等の疾患に関する、着床前スクリーニングに
使用できるであろう。
び他の遺伝子異常または染色体異常等の疾患に関する、着床前スクリーニングに
使用できるであろう。
【００４９】
クロマトグラフィーまたは細菌増殖試験を使用して、生後数日に、血中のフェ
ニルアラニンレベルを測定することによって、現在、英国の全ての赤ちゃんを、
ＰＫＵについて検査している。ＰＫＵになる宿命の胚また卵は、健康な胚または
卵によって生成されるアミノ酸プロフィールと比較して、異なるアミノ酸プロフ
ィールを特徴とする公算が高い。従って、本発明の方法は、さらなる遺伝学的ス
クリーニングプログラムの巨大な可能性を有する。
ニルアラニンレベルを測定することによって、現在、英国の全ての赤ちゃんを、
ＰＫＵについて検査している。ＰＫＵになる宿命の胚また卵は、健康な胚または
卵によって生成されるアミノ酸プロフィールと比較して、異なるアミノ酸プロフ
ィールを特徴とする公算が高い。従って、本発明の方法は、さらなる遺伝学的ス
クリーニングプログラムの巨大な可能性を有する。
【００５０】
本発明の方法は、異なる性の胚は、ある一定のアミノ酸プロフィールを特徴と
する可能性があることによる性別の決定においても、計り知れない価値を有する
。
する可能性があることによる性別の決定においても、計り知れない価値を有する
。
【００５１】
本発明の方法は、広く応用することができ、ヒト胚、卵、カリオプラスト、幹
細胞、幹細胞前駆体または核移植で作られた胚の使用に限定されないことが理解
されよう。牧畜における代表的な方法は、遺伝学的長所を備えたウシに卵誘導ホ
ルモン類を投与し、続いて自然受精させることにより、動物の子宮で、約６〜８
個の胚を生成する。次いで、この胚を、ウシから「フラッシング」し、その後の
発生のために、等級の低い動物に１個ずつ移植する。不適当なフラッシングの危
険性があるため、ヒトで使用するには、この技術は非倫理的である。
細胞、幹細胞前駆体または核移植で作られた胚の使用に限定されないことが理解
されよう。牧畜における代表的な方法は、遺伝学的長所を備えたウシに卵誘導ホ
ルモン類を投与し、続いて自然受精させることにより、動物の子宮で、約６〜８
個の胚を生成する。次いで、この胚を、ウシから「フラッシング」し、その後の
発生のために、等級の低い動物に１個ずつ移植する。不適当なフラッシングの危
険性があるため、ヒトで使用するには、この技術は非倫理的である。
【００５２】
あるいは、価値あるウシにおける卵生成をホルモンで誘発させ、続いて回収し
（卵子採取)、高品質精子を使用して卵を人工的に受精させ、胚盤胞期まで培養
してから、レシピエントに移し返す。屠殺場由来の卵母細胞から、ウシ胚を生成
することも可能である。
（卵子採取)、高品質精子を使用して卵を人工的に受精させ、胚盤胞期まで培養
してから、レシピエントに移し返す。屠殺場由来の卵母細胞から、ウシ胚を生成
することも可能である。
【００５３】
このような牧畜プログラムは、多国籍企業の関心事であり、移植に適した最も
生命力のある卵胚を選択することができる選択方法は、工業の大きな進歩を表す
。この技術を適用することが可能な他の動物としては、ヒツジ、ブタ、全ての家
禽動物、珍しい種および絶滅の危機に直面している種などがある。「ドリー」の
生産に使用されたクローニング技術は、低い成功率で、これまでに２７６が未遂
に終わった。「ドリー」プログラムには、トランスジェニック動物を生産するた
めに、適切なヒツジ細胞を生成しようとする研究努力も含まれていた。
生命力のある卵胚を選択することができる選択方法は、工業の大きな進歩を表す
。この技術を適用することが可能な他の動物としては、ヒツジ、ブタ、全ての家
禽動物、珍しい種および絶滅の危機に直面している種などがある。「ドリー」の
生産に使用されたクローニング技術は、低い成功率で、これまでに２７６が未遂
に終わった。「ドリー」プログラムには、トランスジェニック動物を生産するた
めに、適切なヒツジ細胞を生成しようとする研究努力も含まれていた。
【００５４】
今や、本発明の方法は、その後の胚または卵の移植に使用するための、最も生
命力のある細胞を選択する合理的な方法、およびカリオプラスト、推定される幹
細胞集団、幹細胞前駆体集団、幹細胞集団および核移植で作られた胚を選択する
合理的な方法を提供する。これは、ミクロ操作、核移植および遺伝子構築物の付
加を含む農場動物改良技術における大きな進歩を表す。
命力のある細胞を選択する合理的な方法、およびカリオプラスト、推定される幹
細胞集団、幹細胞前駆体集団、幹細胞集団および核移植で作られた胚を選択する
合理的な方法を提供する。これは、ミクロ操作、核移植および遺伝子構築物の付
加を含む農場動物改良技術における大きな進歩を表す。
【００５５】
ある特定の生物の細胞に関するアミノ酸プロフィールは、極めて非合性的であ
り、異なる生物の細胞について作成されたプロフィールと比較するとき、個々の
アミノ酸が消費されたり生成されたりすることに関して、また停止中の細胞およ
び発生中の細胞で個々のアミノ酸が消費されたり生成されたりすることに関して
、細部にわたって異なる。アラニンを、ヒト細胞の生育力に関する潜在的マーカ
ーとして使用できることが結果から示唆されるが、さらなる調査研究によって、
他の種には、他のアミノ酸がもっと適したマーカーであることが明らかにされる
可能性がある。事実、ヒト胚のさらなる調査研究によって、アラニン以外のアミ
ノ酸も、選択マーカーとして適することが明らかにされている。
り、異なる生物の細胞について作成されたプロフィールと比較するとき、個々の
アミノ酸が消費されたり生成されたりすることに関して、また停止中の細胞およ
び発生中の細胞で個々のアミノ酸が消費されたり生成されたりすることに関して
、細部にわたって異なる。アラニンを、ヒト細胞の生育力に関する潜在的マーカ
ーとして使用できることが結果から示唆されるが、さらなる調査研究によって、
他の種には、他のアミノ酸がもっと適したマーカーであることが明らかにされる
可能性がある。事実、ヒト胚のさらなる調査研究によって、アラニン以外のアミ
ノ酸も、選択マーカーとして適することが明らかにされている。
【００５６】
初期の研究は、受精後３日から４日までのヒト胚に基づいていた。図３に示す
通り、リジンは、停止中の胚で生成し、健康な胚で消費される。これは、選択潜
在能がある可能性がある。同様に、アスパラギンおよびグリシンに関する結果は
有意である。多くの試験を実施するにつれて、健康な胚と停止中の胚に関するア
ミノ酸消費および生成間の有意差が増加すると思われた。
通り、リジンは、停止中の胚で生成し、健康な胚で消費される。これは、選択潜
在能がある可能性がある。同様に、アスパラギンおよびグリシンに関する結果は
有意である。多くの試験を実施するにつれて、健康な胚と停止中の胚に関するア
ミノ酸消費および生成間の有意差が増加すると思われた。
【００５７】
研究を、受精後２日から３日までのヒト胚に広げた。可能な限り、発生中の胚
の人工培養条件への曝露を最小限に抑えることが好ましいため、以前の評価が有
利であると考えた。これらの実験結果を図４および５に示す。
の人工培養条件への曝露を最小限に抑えることが好ましいため、以前の評価が有
利であると考えた。これらの実験結果を図４および５に示す。
【００５８】
後続の研究では、妊娠データの収集を含めた。発生の１日から２日までのＩＣ
ＳＩ胚を分析してから、患者１４例に移植した。ＩＣＳＩ胚とＩＶＦ胚の選択は
、ＩＣＳＩ胚の卵丘が除去されていたこと、従って、評価を容易にすることによ
る。今では、主眼は、健康な着床前の胚の同定ではなく、胚が母体内に着床する
かどうかである（すなわち、臨床面への移動)。
ＳＩ胚を分析してから、患者１４例に移植した。ＩＣＳＩ胚とＩＶＦ胚の選択は
、ＩＣＳＩ胚の卵丘が除去されていたこと、従って、評価を容易にすることによ
る。今では、主眼は、健康な着床前の胚の同定ではなく、胚が母体内に着床する
かどうかである（すなわち、臨床面への移動)。
【００５９】
１ｍＭグルコース、５ｍＭ Ｌ−乳酸塩、０．４７ｍＭピルビン酸およびアミ
ノ酸２０種の生理学的混合物を加えたＥＢＳＳを含む培地中で、ＩＣＳＩ胚をイ
ンキュベートした。アミノ酸の個々の濃度は、０．００５ｍＭ〜１．０ｍＭの範
囲であった。
ノ酸２０種の生理学的混合物を加えたＥＢＳＳを含む培地中で、ＩＣＳＩ胚をイ
ンキュベートした。アミノ酸の個々の濃度は、０．００５ｍＭ〜１．０ｍＭの範
囲であった。
【００６０】
調査研究のこの関係の結果は特に勇気付けるものであり、評価方法の有効性に
関する確証的な証拠を提供する。
関する確証的な証拠を提供する。
【００６１】
本発明の方法は、ある特定の種に独特であり、且つその種の最も生命力のある
細胞の選択に使用することができる、「フィンガープリント」アミノ酸プロフィ
ールの作成を可能にする。
細胞の選択に使用することができる、「フィンガープリント」アミノ酸プロフィ
ールの作成を可能にする。
【００６２】
どの胚が出産予定日まで発育するか分からないため、人工的受精後、一般に、
２個または３個の胚を母体に移し返す。本発明の方法は、胚１個を選択するため
の生化学的検査を実現することにより、多胎生妊娠の可能性を減少させる。本方
法は、形態学的選択方法よりかなり正確である。
２個または３個の胚を母体に移し返す。本発明の方法は、胚１個を選択するため
の生化学的検査を実現することにより、多胎生妊娠の可能性を減少させる。本方
法は、形態学的選択方法よりかなり正確である。
【図１】
８細胞期に発生を停止した２７のヒト胚に関する、平均アミノ酸消費または生
成プロフィール（ｐｍｏｌ／胚／時間）を示す図である。著しく消費または生成
されたアミノ酸を星印で示す。
成プロフィール（ｐｍｏｌ／胚／時間）を示す図である。著しく消費または生成
されたアミノ酸を星印で示す。
【図２】
胚盤胞期まで発生した、コンパクションしている８細胞期における２２のヒト
胚に関する、平均アミノ酸消費または生成プロフィール（ｐｍｏｌ／胚／時間）
を示す図である。著しく消費または生成されたアミノ酸を星印で示す。
胚に関する、平均アミノ酸消費または生成プロフィール（ｐｍｏｌ／胚／時間）
を示す図である。著しく消費または生成されたアミノ酸を星印で示す。
【図３】
図１および図２のデータを重ね合わせて、８細胞期に発生を停止したヒト胚（
斜線を付けたバー）と胚盤胞期まで発生したヒト胚（斜線を付けていないバー)
に関するアミノ酸消費または生成（ｐｍｏｌ／胚／時間）を比較する図である。
停止中および発生中の胚の各群につき、各アミノ酸について、Ｔ検定を使用して
、消費データまたは生成データを比較した。０．０５未満のｐ値を有意と考えた
。ａ、ｂ、ｃまたはｄの上付き文字で印をつけたアミノ酸（それぞれ、アラニン
、アスパラギン、グリシンおよびリジン）に関するデータは、２組の試験で有意
に異なる。
斜線を付けたバー）と胚盤胞期まで発生したヒト胚（斜線を付けていないバー)
に関するアミノ酸消費または生成（ｐｍｏｌ／胚／時間）を比較する図である。
停止中および発生中の胚の各群につき、各アミノ酸について、Ｔ検定を使用して
、消費データまたは生成データを比較した。０．０５未満のｐ値を有意と考えた
。ａ、ｂ、ｃまたはｄの上付き文字で印をつけたアミノ酸（それぞれ、アラニン
、アスパラギン、グリシンおよびリジン）に関するデータは、２組の試験で有意
に異なる。
【図４】
８細胞期に発生を停止した、受精後２日から３日までのヒト胚（斜線を付けた
バー）と、胚盤胞期まで発生した、受精後２日から３日までのヒト胚（斜線を付
けていないバー)に関する、アミノ酸消費または生成（ｐｍｏｌ／胚／時間）を
比較するために、データを重ね合せた図である。
バー）と、胚盤胞期まで発生した、受精後２日から３日までのヒト胚（斜線を付
けていないバー)に関する、アミノ酸消費または生成（ｐｍｏｌ／胚／時間）を
比較するために、データを重ね合せた図である。
【図５】
受精後２日から３日までの、発生中および停止中のヒト胚における、５種のア
ミノ酸の利用合計を示す図である。
ミノ酸の利用合計を示す図である。
【図６】
結果として妊娠したＩＣＳＩ胚（斜線を付けていないバー）および結果として
妊娠できなかったＩＣＳＩ胚（斜線を付けたバー）に関する、発生の１日から２
日までの、アミノ酸消費または生成（ｐｍｏｌ／胚／時間）を比較するために、
データを重ね合せた図である。
妊娠できなかったＩＣＳＩ胚（斜線を付けたバー）に関する、発生の１日から２
日までの、アミノ酸消費または生成（ｐｍｏｌ／胚／時間）を比較するために、
データを重ね合せた図である。
【図７】
結果として妊娠したＩＣＳＩ胚と結果として妊娠できなかったＩＣＳＩ胚およ
び結果として妊娠できなかったＩＣＳＩ胚に関する、発生の１日から２日までの
、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＴｒｐの出現の合計を示す図である。
び結果として妊娠できなかったＩＣＳＩ胚に関する、発生の１日から２日までの
、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＴｒｐの出現の合計を示す図である。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１４年２月１２日（２００２．２．１２）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｇ０１Ｎ 30/88 Ｇ０１Ｎ 30/88 Ｆ
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ
，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，
ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ
Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ
，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，
ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，
ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ
Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ
，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，
ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ
Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ
，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，
ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ
Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ
，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，
ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
(72)発明者 ホートン，フランセスカ・ドーン
イギリス国，ワイオー10 ５ワイダブリュ
ー ヨーク，ピー・オー・ボックス 373，
ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ヨーク，デ
パートメント・オヴ・バイオロジー
(72)発明者 ハンファーソン，ピーター・ゴードン
イギリス国，ワイオー10 ５ワイダブリュ
ー ヨーク，ピー・オー・ボックス 373，
ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ヨーク，デ
パートメント・オヴ・バイオロジー
Ｆターム(参考） 4B063 QA01 QQ08 QR43 QR47 QR49
QS31 QS39 QS40
4C087 AA01 BB57 CA04 NA14 ZB21
Claims (27)
- 【請求項１】 複数のアミノ酸を含む培地中で細胞をインキュベートするス
テップと、培地中の少なくとも１種のアミノ酸の濃度変化を測定するステップと
を含む、細胞の生存力を評価する方法。 - 【請求項２】 前記変化が所定の基準に合う場合、さらに発生させるために
前記細胞を選択するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 前記細胞が胚であり、前記胚が生物の卵管に導入される、請
求項２に記載の方法。 - 【請求項４】 前記細胞が卵であり、前記卵を受精させて、生物の卵管に導
入される胚を生成する、請求項２に記載の方法。 - 【請求項５】 さらなる発生用に選択される細胞が、トランスジェニック生
物の生産に使用されるか、組織中の罹病したまたは損傷した細胞の治療代替用に
使用される、請求項２に記載の方法。 - 【請求項６】 前記培地が、グルコース、Ｌ−乳酸塩、ピルビン酸塩および
アミノ酸の生理学的混合物を加えたアールの平衡塩類溶液を含む、請求項１〜５
のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項７】 グルコース、Ｌ−乳酸塩およびピルビン酸の濃度が、それぞ
れ、０．５ｍＭ〜１．５ｍＭ、４ｍＭ〜６ｍＭおよび０．３７ｍＭ〜０．５７ｍ
Ｍの範囲であり、個々のアミノ酸濃度が０．００５ｍＭ〜１．０ｍＭの範囲であ
る、請求項６に記載の方法。 - 【請求項８】 前記グルコース、Ｌ−乳酸塩およびピルビン酸の濃度が、１
ｍＭ、５ｍＭ、および０．４７ｍＭである、請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】 配偶子、胚、カリオプラスト、推定される幹細胞集団、幹細
胞前駆体集団または幹細胞集団を培地中で培養する、請求項１〜８のいずれか１
項に記載の方法。 - 【請求項１０】 ｏ−フタルジアルデヒドで誘導体化後、ＨＰＬＣを使用し
て、消費された培地中のアミノ酸濃度を測定する、請求項１〜９のいずれか１項
に記載の方法。 - 【請求項１１】 ＨＰＬＣで使用するための、マイクロリットルのサンプル
を正確に希釈するために、内部標準をサンプル培地に導入する、請求項１０に記
載の方法。 - 【請求項１２】 前記内部標準が、Ｄ−αアミノ酪酸である、請求項１１に
記載の方法。 - 【請求項１３】 アミノ酸消費または生成プロフィールを作成する、請求項
１〜１２のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項１４】 細胞の生存力を評価する際に、選択マーカーとして、前記
アミノ酸消費または生成プロフィールを全体として使用する、請求項１３に記載
の方法。 - 【請求項１５】 その種の、健康な発生中の細胞を示す消費または生成プロ
フィールを有する、典型的には２〜７種のアミノ酸を含む１群のアミノ酸に基づ
いて、前記最も生存力のある細胞の選択が行われる請求項１３に記載の方法。 - 【請求項１６】 前記最も生命力のある細胞の選択が、その種の、健康な発
生中の細胞を示す消費または生成プロフィールを有する、1種類のアミノ酸に基
づく、請求項１３に記載の方法。 - 【請求項１７】 前記細胞を前記培地に移した後、２４時間以内で、細胞の
生存力の評価が実現される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項１８】 前記細胞を前記培地に移した後、１０時間以内で、細胞の
生存力の評価が実現される、請求項１７に記載の方法。 - 【請求項１９】 前記細胞を前記培地に移した後、６時間以内で、細胞の生
存力の評価が実現される、請求項１８に記載の方法。 - 【請求項２０】 前記細胞が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、あらゆる家禽動
物、または珍しい種および絶滅の危機に直面している種を含む、任意の生物に由
来する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項２１】 前記方法がヒトに使用される、請求項２０に記載の方法。
- 【請求項２２】 選択マーカーに使用される前記アミノ酸が、アラニン、シ
ステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒス
チジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリ
ン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファンま
たはチロシンのうちの１種またはそれらの組合せを含む、請求項２１に記載の方
法。 - 【請求項２３】 選択マーカーに使用される前記アミノ酸がアラニンである
、請求項２２に記載の方法。 - 【請求項２４】 請求項５に記載の方法に従って生産される、トランスジェ
ニック非ヒト動物。 - 【請求項２５】 複数のアミノ酸を含む培地中で細胞をインキュベートする
手段と、培地中の少なくとも１種のアミノ酸の濃度変化を決定する手段とを含む
、診断キット。 - 【請求項２６】 前記診断キットが、各アミノ酸に関する消費または生成の
プロフィールを作成する、請求項２５に記載の診断キット。 - 【請求項２７】 前記変化が、所定の基準に合った場合、前記キットが、さ
らなる発生用の細胞を選択する手段を提供する、請求項２５または２６に記載の
診断キット。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0001270A GB0001270D0 (en) | 2000-01-19 | 2000-01-19 | Assessment method |
| GB0001270.8 | 2000-01-19 | ||
| GB0015699.2 | 2000-06-28 | ||
| GB0015699A GB0015699D0 (en) | 2000-01-19 | 2000-06-28 | Assessment method |
| PCT/GB2001/000196 WO2001053518A2 (en) | 2000-01-19 | 2001-01-19 | Method of assessing the viability of a cell |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2012204407A Division JP2013051960A (ja) | 2000-01-19 | 2012-09-18 | 評価方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003520047A true JP2003520047A (ja) | 2003-07-02 |
| JP5265832B2 JP5265832B2 (ja) | 2013-08-14 |
Family
ID=26243434
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001553379A Expired - Fee Related JP5265832B2 (ja) | 2000-01-19 | 2001-01-19 | 評価方法 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US7202395B2 (ja) |
| EP (1) | EP1248852B1 (ja) |
| JP (1) | JP5265832B2 (ja) |
| AT (1) | ATE335838T1 (ja) |
| AU (1) | AU2001226929A1 (ja) |
| DE (1) | DE60122106T2 (ja) |
| DK (1) | DK1248852T3 (ja) |
| ES (1) | ES2267708T3 (ja) |
| PT (1) | PT1248852E (ja) |
| WO (1) | WO2001053518A2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009522381A (ja) * | 2006-01-09 | 2009-06-11 | ザ・ロイヤル・インスティテューション・フォア・ザ・アドバンスメント・オブ・ラーニング／マクギル・ユニヴァーシティ | 生殖補助医療におけるメタボロミクスによる確定 |
| JP2013506406A (ja) * | 2009-09-30 | 2013-02-28 | シーメンス アクチエンゲゼルシヤフト | 細胞生命力の決定方法および装置 |
| WO2014208391A1 (ja) * | 2013-06-24 | 2014-12-31 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 細胞状態判定方法、及びそれを用いた自動分析装置 |
| JP2019170235A (ja) * | 2018-03-28 | 2019-10-10 | 国立大学法人 大分大学 | 胚の評価方法 |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0601746D0 (en) * | 2006-01-27 | 2006-03-08 | Novocellus Ltd | Cryopreservation method |
| US20070254309A1 (en) | 2006-04-20 | 2007-11-01 | Northern Sydney And Central Coast Area Health Service | Methods for Assessing Embryo Viability |
| US20080160003A1 (en) * | 2006-10-31 | 2008-07-03 | University Of Delaware | Fertility Enhancement Using Lipid Carriers and Bioactive Molecules |
| GB0705321D0 (en) * | 2007-03-20 | 2007-04-25 | Novocellus Ltd | Method |
| WO2011008932A1 (en) * | 2009-07-16 | 2011-01-20 | Molecular Biometrics, Inc. | Methods of assessing embryo outcome |
| US20150272622A1 (en) | 2011-12-22 | 2015-10-01 | Previvo Genetics, Llc | Recovery and processing of human embryos formed in vivo |
| US20160151090A1 (en) * | 2011-12-22 | 2016-06-02 | Previvo Genetics, Llc | Recovery and processing of human embryos formed in vivo |
| WO2016009416A1 (en) * | 2014-07-18 | 2016-01-21 | Pécsi Tudományegyetem | Viability assessment of in vitro cultured human embryos from the culture medium |
| WO2016013115A1 (ja) * | 2014-07-25 | 2016-01-28 | 株式会社 リージャー | 希釈生体試料成分の分析方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0394626A (ja) * | 1988-12-21 | 1991-04-19 | Univ Pennsylvania | トランスジェニックな生物体および細胞、ならびにトランスジェニックな生物体および細胞の製造法 |
| JPH0928384A (ja) * | 1994-11-21 | 1997-02-04 | Jeong-Sun Seo | 糖尿病発生トランスジェニックマウス |
| JPH10309149A (ja) * | 1997-03-10 | 1998-11-24 | Takeda Chem Ind Ltd | 単球走化性蛋白質類およびその受容体トランスジェニック動物 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5096822A (en) * | 1990-07-26 | 1992-03-17 | W. R. Grace & Co.- Conn. | Bovine embryo medium |
-
2001
- 2001-01-19 DK DK01901270T patent/DK1248852T3/da active
- 2001-01-19 AT AT01901270T patent/ATE335838T1/de active
- 2001-01-19 ES ES01901270T patent/ES2267708T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-19 DE DE60122106T patent/DE60122106T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-19 US US10/181,387 patent/US7202395B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-01-19 AU AU2001226929A patent/AU2001226929A1/en not_active Abandoned
- 2001-01-19 JP JP2001553379A patent/JP5265832B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-01-19 EP EP01901270A patent/EP1248852B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-19 PT PT01901270T patent/PT1248852E/pt unknown
- 2001-01-19 WO PCT/GB2001/000196 patent/WO2001053518A2/en active IP Right Grant
-
2007
- 2007-01-31 US US11/669,221 patent/US7615677B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-11-02 US US12/610,741 patent/US20100223681A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0394626A (ja) * | 1988-12-21 | 1991-04-19 | Univ Pennsylvania | トランスジェニックな生物体および細胞、ならびにトランスジェニックな生物体および細胞の製造法 |
| JPH0928384A (ja) * | 1994-11-21 | 1997-02-04 | Jeong-Sun Seo | 糖尿病発生トランスジェニックマウス |
| JPH10309149A (ja) * | 1997-03-10 | 1998-11-24 | Takeda Chem Ind Ltd | 単球走化性蛋白質類およびその受容体トランスジェニック動物 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| JPN5002027853; ＤＯＮＮＡＹ Ｉ: ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＲＥＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ Ｖ５３ Ｎ２, 199906, Ｐ１７１-１７８ * |
| JPN5002027854; ＤＯＮＮＡＹ Ｉ: ＲＥＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ ＮＵＴＲＩＴＩＯＮ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ Ｖ３９ Ｎ５-６, 1999, Ｐ５２３-５３３ * |
| JPN5002027855; ＰＡＲＴＲＩＤＧＥ Ｒ Ｊ: ＲＥＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ ＦＥＲＴＩＬＩＴＹ ＡＮＤ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ Ｖ８ Ｎ６, 1996, Ｐ９４５-９５０ * |
| JPN5002027856; ＨＯＵＧＨＴＯＮ Ｆ Ｄ: ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＲＥＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＦＥＲＴＩＬＩＴＹ ＡＢＳＴＲＡＣＴ ＳＥＲＩＥＳ Ｎ２５, 200007, Ｐ７４ * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009522381A (ja) * | 2006-01-09 | 2009-06-11 | ザ・ロイヤル・インスティテューション・フォア・ザ・アドバンスメント・オブ・ラーニング／マクギル・ユニヴァーシティ | 生殖補助医療におけるメタボロミクスによる確定 |
| JP2013506406A (ja) * | 2009-09-30 | 2013-02-28 | シーメンス アクチエンゲゼルシヤフト | 細胞生命力の決定方法および装置 |
| US10421988B2 (en) | 2009-09-30 | 2019-09-24 | Siemens Aktiengesellschaft | Method and assembly for determining cell vitalities |
| WO2014208391A1 (ja) * | 2013-06-24 | 2014-12-31 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 細胞状態判定方法、及びそれを用いた自動分析装置 |
| JP2015006134A (ja) * | 2013-06-24 | 2015-01-15 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 細胞状態判定方法、及びそれを用いた自動分析装置 |
| US9862921B2 (en) | 2013-06-24 | 2018-01-09 | Hitachi High-Technologies Corporation | Method for determining cell state and autoanalyzer using said method |
| JP2019170235A (ja) * | 2018-03-28 | 2019-10-10 | 国立大学法人 大分大学 | 胚の評価方法 |
| JP7134462B2 (ja) | 2018-03-28 | 2022-09-12 | 国立大学法人 大分大学 | 胚の評価方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2001053518A3 (en) | 2001-12-20 |
| PT1248852E (pt) | 2006-10-31 |
| ATE335838T1 (de) | 2006-09-15 |
| DE60122106T2 (de) | 2006-12-07 |
| US7202395B2 (en) | 2007-04-10 |
| US20030091977A1 (en) | 2003-05-15 |
| US20080145888A1 (en) | 2008-06-19 |
| EP1248852B1 (en) | 2006-08-09 |
| WO2001053518A2 (en) | 2001-07-26 |
| DE60122106D1 (de) | 2006-09-21 |
| US20100223681A1 (en) | 2010-09-02 |
| JP5265832B2 (ja) | 2013-08-14 |
| US7615677B2 (en) | 2009-11-10 |
| ES2267708T3 (es) | 2007-03-16 |
| AU2001226929A1 (en) | 2001-07-31 |
| DK1248852T3 (da) | 2006-12-18 |
| EP1248852A2 (en) | 2002-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7615677B2 (en) | Assessment method | |
| Thompson | Comparison between in vivo-derived and in vitro-produced pre-elongation embryos from domestic ruminants | |
| Galli et al. | Bovine embryo technologies | |
| Berg et al. | Red deer cloned from antler stem cells and their differentiated progeny | |
| JP6918782B2 (ja) | 培養培地 | |
| CN104350145B (zh) | 用于无饲养细胞培养牛和猪的精原干细胞的方法 | |
| JP2000508161A (ja) | キメラ有蹄類及びトランスジェニック有蹄類の生産のための胚幹細胞 | |
| Sawai et al. | Stage-specific requirement of cysteine during in vitro maturation of porcine oocytes for glutathione synthesis associated with male pronuclear formation | |
| CA2277278A1 (en) | Embryonic stem cell serum replacement | |
| EP3436080B1 (en) | Method to prepare sperm | |
| JP2000502910A (ja) | トランスジェニック有蹄動物を産生するための有蹄動物胚幹様細胞、その細胞を作製および使用する方法 | |
| Meier et al. | Amino acid concentrations in uterine fluid during early pregnancy differ in fertile and subfertile dairy cow strains | |
| Binyameen et al. | Recent trends in bovine reproductive biotechnologies. | |
| JP2020185018A (ja) | 胚の培養方法および培地 | |
| CN100523174C (zh) | 来自猿猴的胚胎干细胞的生产方法 | |
| JP2013051960A (ja) | 評価方法 | |
| JP2001333770A (ja) | 脊椎動物の膵臓のインビトロ形成方法 | |
| CN106661550A (zh) | 受精卵的正常发育率提高剂 | |
| JP2021529554A (ja) | 精子機能を亢進させるための組成物及び方法 | |
| FR2497100A1 (fr) | Production de calcitonine humaine | |
| WO2009125236A2 (en) | Modification of sperm motility and its storage shelf time | |
| RU2730597C2 (ru) | Криоконсервация эмбрионов копытных | |
| WO2023141683A1 (en) | Methods of embryo multiplication | |
| Kopeěný et al. | Selective association of some hamster-egg-synthesized proteins with decondensing human sperm chromatin | |
| CN103717730B (zh) | 胚胎培养用组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20080116 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100922 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101222 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110513 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110815 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20120409 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20120410 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20120518 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120918 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20120925 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121023 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130122 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130219 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130312 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130405 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130502 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |