CN106661550A - 受精卵的正常发育率提高剂 - Google Patents

受精卵的正常发育率提高剂 Download PDF

Info

Publication number
CN106661550A
CN106661550A CN201580033437.8A CN201580033437A CN106661550A CN 106661550 A CN106661550 A CN 106661550A CN 201580033437 A CN201580033437 A CN 201580033437A CN 106661550 A CN106661550 A CN 106661550A
Authority
CN
China
Prior art keywords
embryonated egg
normal development
iron
development rate
ala
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201580033437.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106661550B (zh
Inventor
田中徹
中岛元夫
高桥究
中岛修
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yamagata University NUC
SBI Pharmaceuticals Co Ltd
Original Assignee
Yamagata University NUC
SBI Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yamagata University NUC, SBI Pharmaceuticals Co Ltd filed Critical Yamagata University NUC
Publication of CN106661550A publication Critical patent/CN106661550A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106661550B publication Critical patent/CN106661550B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/02—Breeding vertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/26—Iron; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明提供一种体外培养基，该培养基能使受精卵的体外培养正常进行至胚泡阶段，而不会使发育停止。本发明使用下式(I)所示5‑氨基乙酰丙酸类或其盐(式中，R1表示氢原子或酰基，R2表示氢原子、直链或支链烷基、环烷基、芳基或芳烷基)作为受精卵的正常发育率提高剂，来提高受精卵的正常发育率。

Description

受精卵的正常发育率提高剂
技术领域
本发明涉及含有5-氨基乙酰丙酸类或其盐(ALA类)的受精卵正常发育率提高剂、用于提高受精卵正常发育率的试剂盒、使受精卵与ALA类接触以提高受精卵正常发育率的方法、用于提高受精卵正常发育率的ALA类、用于配制受精卵正常发育率提高剂的ALA类的应用。
背景技术
对具有优良遗传性状的雌性牲畜的卵子用同样具有优良遗传性状的雄性牲畜的精子进行授精，将受精卵进行体外培养之后移植到其它雌性牲畜(受体)的子宫内，这种胚胎移植技术作为高效生产良种家畜和实验动物的技术被广泛应用。例如，体内受精卵移植和体外受精卵移植都被广泛施行，所谓体内受精卵移植是指将取自供体(提供受精卵的动物)的受精卵移植到经过同期发情处理即通过激素处理等使其处于拟妊娠状态的受体(接受受精卵的动物)，使之妊娠、产仔；而体外受精卵移植则是，从已在食肉处理场判定肉质等好坏后的家畜的卵巢取出未成熟卵子，在体外进行卵子的成熟、受精、发育培养，使用这样得到的处于可进行子宫内移植状态的受精卵。
对于人而言，在1978年报道了Edwards博士和Steptoe博士成功进行体外受精(IVF)-胚胎移植(ET)，即在体外培养液内使卵子与精子受精，然后将经过体外培养的胚胎移植到子宫内(参照例如非专利文献1)。进而，作为用于人体外受精的培养基，具有与受精时人输卵管液的电解质组成近似的组成的HTF培养基(Human Tubal Fluid Medium)被开发了出来(参照例如非专利文献2)，以此为开端，人们开始研究体外受精用培养基，用以代替此前一直使用的Ham F-10培养基等通用性培养基。
关于体外受精用培养基，有下列各种方案：含有丝胶，能够培养体内人工授精所得胚胎或体外受精所得胚胎的人工受精用培养基组合物(参照例如专利文献1)；含有叶黄素的人工受精用培养基组合物(参照例如专利文献2)；含有丙酮酸或乳酸或它们的盐以及牛磺酸或其前体作为必要成分的猪胚胎的体外培养用培养基(参照例如专利文献3)；提高哺乳动物受精卵发育率的方法，该方法在哺乳动物受精卵的发育培养基中添加血管内皮生长因子，实施与饲养层细胞(支持細胞)的共培养，由此提高受精卵的正常发育率(参照例如专利文献4)；含有氨基酸的体外受精用培养基组合物，该组合物实质上不含L-谷氨酰胺或其能水解生成L-谷氨酰胺的衍生物(参照例如专利文献5)；可用于哺乳类卵子或初期胚胎的培养或者精子的配制或培养的体外受精用培养基组合物，该组合物含有游离形式或药理学上可接受的盐的形式的卵泡液所含的21种氨基酸或能水解生成这类氨基酸的它们的衍生物(参照例如专利文献6)；牛受精卵的无血清体外培养用培养基，该培养基由含有乳酸或其可溶性盐、丙酮酸或其可溶性盐、碱性成纤维细胞生长因子和肿瘤生长因子-β1的低葡萄糖浓度TCM199培养基构成(参照例如专利文献7)；对雄性的精子或雌性的卵子或者由它们形成的受精卵进行磁力作用，由此提高受孕率的方法(参照例如专利文献8)等。
此外，作为上述IVF法的一种模式，开发出了使用精子注入用移液管吸取精子并注入卵细胞质中的卵细胞质内精子注入法(intracytoplasmic sperm injection：ICSI)。该方法只要有一个精子就能高效获得受精卵，因此对以严重少精症为首的男性不孕导致的不孕有效。象这样，在体外进行受精卵培养已成为常用手段，但被培养的受精卵未到胚泡阶段而在桑椹胚以前就停止发育的比率已知很高。关于其原因，虽然有人提出是多种因素导致初期发育停止的，但并不确晓其机理。例如，人体外受精的妊娠率占全部体外受精数的约20-25％,到出生则更是只有5-15％，还有报道指出，体外培养牛的受精卵时，从8细胞期到16细胞期发育频繁停止(参照例如非专利文献3)。
另一方面，已知5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)是动物、植物、菌类中广泛存在的四吡咯生物合成过程的中间体，通常可通过5-氨基乙酰丙酸合成酶由丁二酰CoA与甘氨酸生物合成。还开发出了使用5-ALA的光动力疗法(光線力学的療法又は光動力学的治療，ALA-PDT)，该疗法因侵袭性低，能维持生活质量(QOL)而受到注意，报道有使用ALA等的肿瘤诊断、治疗剂等。另外，还已知5-ALA可用作成人病、癌症、男性不孕的预防改善剂或治疗剂(参照例如专利文献9-11)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:特开2012-105585号公报
专利文献2:特开2010-187629号公报
专利文献3:特开2003-024055号公报
专利文献4:特开2002-272315号公报
专利文献5:特开2001-017160号公报
专利文献6:特开平09-070240号公报
专利文献7:特开平08-289779号公报
专利文献8:特开平06-189650号公报
专利文献9:国际公开WO2010/050179号公报
专利文献10:特开2011-16753号公报
专利文献11:国际公开WO2009/139156号公报
非专利文献
非专利文献1：日医大志,第66卷，第1号45-48页
非专利文献2：Quinn,P.J.et al.，Fertility and Sterility，44,493-498,1985
非专利文献3：Wright et al.,J.Anim.Sci.，53，702-729,1981
发明简述
发明所要解决的课题
本发明的课题在于提供一种体外培养基，该培养基能使受精卵的体外培养正常进行至胚泡阶段，而不会发育停止。
用以解决课题的方法
本发明者们为解决上述课题，使用各种培养基成分进行了深入研究，实际将小鼠的受精卵在添加了5-ALA的体外培养基中进行体外培养后，结果发现提高了受精卵的正常发育率，从而完成了本发明。
即，本发明为下列各项。
(1)受精卵正常发育率提高剂，其特征在于含有下式(I)所示化合物或其盐；
[化1]
(式中R1表示氢原子或酰基，R2表示氢原子、直链或支链烷基、环烷基、
芳基或芳烷基)
(2)上述(1)所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于R1和R2为氢原子；
(3)上述(1)或(2)所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于还含有铁化合物；
(4)上述(3)所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于所述铁化合物为一种或多种选自下列的化合物：氯化铁、三氧化二铁、硫酸铁、焦磷酸亚铁、柠檬酸亚铁、柠檬酸铁钠、柠檬酸亚铁钠、柠檬酸铁铵、焦磷酸铁、乳酸铁、葡萄糖酸亚铁、二乙烯三胺五乙酸铁钠、二乙烯三胺五乙酸铁铵、乙二胺四乙酸铁钠、乙二胺四乙酸铁铵、二羧甲基谷氨酸铁钠、二羧甲基谷氨酸铁铵、富马酸亚铁、乙酸铁、草酸铁、琥珀酸亚铁、琥珀酸柠檬酸铁钠、血红素铁、葡聚糖铁、三乙烯四胺铁、乳铁蛋白铁、转铁蛋白铁、铁叶绿酸钠、铁蛋白铁、含糖氧化铁和硫化甘氨酸铁；
(5)上述(1)-(4)任一项所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于能够提高受孕率；
(6)上述(1)-(5)任一项所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于所述受精卵是通过体外受精或体内受精所获得的受精卵；
(7)上述(1)-(6)任一项所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于该提高剂是用于提高受精卵发育率的培养基，其还含有哺乳动物受精卵的体外培养基；
(8)提高受精卵正常发育率的方法，其特征在于使受精卵与上述(1)-(7)任一项所记载的受精卵正常发育率提高剂接触；
(9)提高受精卵正常发育率的方法，其特征在于将上述(1)-(7)任一项所记载的受精卵正常发育率提高剂给予对象母本(雌亲)；
(10)用于提高受精卵正常发育率的试剂盒，该试剂盒包含：a)上式(I)所示化合物或其盐、以及b)铁化合物；
(11)上述(10)所记载的用于提高受精卵正常发育率的试剂盒，其特征在于该试剂盒还包含：c)哺乳动物受精卵的体外培养基；
(12)上式(I)所示化合物或其盐用于配制受精卵正常发育率提高剂的应用；
(13)上述(12)所记载的应用，其特征在于使用式(I)所示化合物或其盐与铁化合物；
(14)上述(13)所记载的应用，其特征在于使用式(I)所示化合物或其盐与铁化合物以及哺乳动物受精卵的体外培养基；
(15)用于提高受精卵正常发育率的上述式(1)所示化合物或其盐。
发明效果
本发明可以提高人或牲畜的人工授精的发育率和受孕率、自然妊娠的受孕率，能够提高家畜繁殖的生产能力、品种改良的效率。
附图简述
图1为C57BL/6J系的受精卵的发育率图，该图中，对各个阶段正常发育的胚胎数进行计数，以0小时的受精卵数为100％计；
图2为C57BL/6J系的受精卵的发育率图，该图中，对各个阶段正常发育的胚胎数进行计数，以受精卵培养开始后24小时之后的2细胞期的卵数为100％计；
图3为BDF2系雌性小鼠与BDF1系雄性小鼠交配得到的受精卵的发育率图，该图中，以0小时的受精卵数为100％计；
图4为BDF2系雌性小鼠与BDF1系雄性小鼠交配得到的受精卵的发育率图，该图中，对各个阶段正常发育的胚胎数进行计数，以受精卵培养开始后24小时之后的2细胞期的卵数为100％计；
图5是在KSOM中以受精卵(0小时)的数为100％计时发育率的经时变化图(自然交配受精卵)；
图6是在KSOM中以受精后24小时之后的2细胞期的胚胎数为100％计时发育率的经时变化图(自然交配受精卵)；
图7是在mWM中以受精卵(0小时)的数为100％计时发育率的经时变化图(自然交配受精卵)；
图8是在mWM中以受精后24小时之后的2细胞期的胚胎数为100％计时发育率的经时变化图(自然交配受精卵)；
图9是在KSOM中以受精后24小时之后的2细胞期的胚胎数为100％计时培养温度对发育率的影响图(体外受精卵)；
图10是在mWM中以受精后24小时之后的2细胞期的胚胎数为100％计时培养温度对发育率的影响图(体外受精卵)；
图11是在KSOM中35℃培养条件下，以受精后24小时之后的2细胞期胚胎数为100％计时发育率的经时变化图(体外受精卵)；
图12是在mWM中35.5℃培养条件下，以受精后24小时之后的2细胞期胚胎数为100％计时发育率的经时变化图(体外受精卵)；
图13是在mWM中35℃培养条件下，以受精后24小时之后的2细胞期胚胎数为100％计时发育率的经时变化图(体外受精卵)。
发明的实施方式
本发明的受精卵正常发育率提高剂，只要含有上式(I)所示化合物或其盐(以下统称为“ALA类”)即可，对其并没有特别限定，可以是包含哺乳动物受精卵体外培养基的适用于人工授精的受精卵发育率提高用培养基，另外优选除ALA类外还含有铁化合物，进一步优选能够提高受孕率。作为本发明中受精卵来源的生物物种，优选哺乳动物，例如人、猴、小鼠、大鼠、仓鼠、天竺鼠、牛、猪、马、兔、绵羊、山羊、猫、狗等。
上述ALA类中，优选例如式(I)的R1和R2同为氢原子时的5-ALA或其盐。5-ALA也被称为δ-氨基乙酰丙酸，是氨基酸的一种。作为5-ALA衍生物，可以例举式(I)中R1为氢原子或酰基、式(I)中R2为氢原子、直链或支链烷基、环烷基、芳基或芳烷基的5-ALA以外的化合物。
作为式(I)中的酰基，可以例举甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、新戊酰基、己酰基、辛酰基、苄基羰基等直链或支链状碳原子数为1-8的链烷酰基；苯甲酰基、1-萘酰基、2-萘酰基等碳原子数为7-14的芳酰基。
作为式(I)中的烷基，可以例举甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等直链或支链状碳原子数为1-8的烷基。
作为式(I)中的环烷基，可以例举环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环十二烷基、1-环己烯基等饱和或者可存在部分不饱和键的碳原子数为3-8的环烷基。
作为式(I)中的芳基，可以例举苯基、萘基、蒽基、菲基等碳原子数为6-14的芳基。
作为式(I)中的芳烷基，芳基部分可以例举与上述芳基相同的例子，烷基部分可以例举与上述烷基相同的例子，具体例如苯甲基、苯乙基、苯丙基、苯丁基、二苯甲基、三苯甲基、萘甲基、萘乙基等碳原子数为7-15的芳烷基。
作为上述5-ALA衍生物,优选上述R1为甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等的化合物，上述R2为甲基、乙基、丙基、丁基、戊基等的化合物，上述R1与R2的组合可优选例举甲酰基与甲基、乙酰基与甲基、丙酰基与甲基、丁酰基与甲基、甲酰基与乙基、乙酰基与乙基、丙酰基与乙基、丁酰基与乙基的组合等。
ALA类只要在生物体内以式(I)的5-ALA或其衍生物的状态作为有效成分发挥作用，根据给予形态，可以是为提高溶解性的各种盐，也可以是在生物体内能经酶分解的前药(前体)形式的酯给予。例如，作为5-ALA及其衍生物的盐，可以是药理学上容许的酸加成盐、金属盐、铵盐、有机胺加成盐等。作为酸加成盐，可以例举盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐、硝酸盐、硫酸盐等各种无机酸盐，甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、甲苯磺酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、乙醇酸盐、甲磺酸盐、丁酸盐、戊酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苹果酸盐等各种有机酸加成盐。作为金属盐，可以例举锂盐、钠盐、钾盐等各种碱金属盐，镁盐、钙盐等各种碱土金属盐，铝、锌等各种金属盐。作为铵盐，可以例举铵盐、四甲基铵盐等烷基铵盐等。作为有机胺盐,可以例举三乙胺盐、哌啶盐、吗啉盐、甲苯胺盐等各种盐。此外，这些盐在使用时可以以溶液形式使用。
上述ALA类中，优选5-ALA和5-ALA甲酯、5-ALA乙酯、5-ALA丙酯、5-ALA丁酯、5-ALA戊酯等各种酯类，以及它们的盐酸盐、磷酸盐、硫酸盐，特别优选例举5-ALA盐酸盐、5-ALA磷酸盐。
上述ALA类可通过化学合成、经由微生物生成、经由酶生成等任何公知的方法制造。并且，上述ALA类也可以形成水合物或溶剂合物，还可以任何一种单独使用或者两种或多种适当组合使用。
上述铁化合物可以是有机盐，也可以是无机盐。无机盐的例子有氯化铁、三氧化二铁、硫酸铁、焦磷酸亚铁。有机盐的例子有羧酸盐，例如作为羟基羧酸盐，有柠檬酸亚铁、柠檬酸铁钠、柠檬酸亚铁钠、柠檬酸铁铵等柠檬酸盐，焦磷酸铁、乳酸铁、葡萄糖酸亚铁、二乙烯三胺五乙酸铁钠、二乙烯三胺五乙酸铁铵、乙二胺四乙酸铁钠、乙二胺四乙酸铁铵、二羧甲基谷氨酸铁钠、二羧甲基谷氨酸铁铵、富马酸亚铁、乙酸铁、草酸铁、琥珀酸亚铁、琥珀酸柠檬酸铁钠等有机酸盐，血质铁、葡聚糖铁、三乙烯四胺铁、乳铁蛋白铁、转铁蛋白铁、铁叶绿酸钠、铁蛋白铁、含糖氧化铁和硫化甘氨酸铁；其中优选柠檬酸亚铁钠、柠檬酸钠。
上述铁化合物可以各自单独使用,也可以两种或多种混合使用。铁化合物的用量(添加量、给予量)以摩尔比计，为ALA类给予量(5-ALA换算)的0.01-100倍，优选0.05-10倍，更优选0.1-8倍。
本发明的受精卵正常发育率提高剂结合使用ALA类与铁化合物，可以以含有ALA类和铁化合物的组合物形式使用，或者也可以各自单独同时或先后使用。虽然在各自单独使用时优选同时使用，但在各自单独先后使用的情况下，优选使ALA类与铁化合物的给予能够取得相加的效果，最好是取得协同效应。
本发明中的受精卵是指精子进入卵子内，精核与卵核融合受精，由此形成的可通过体细胞分裂生长的单细胞。作为取得受精卵的方法，可以是例如将体内受精后的受精卵采集到体外(取卵)的方法，或者通过体外受精得到受精卵的方法，或者将通过这些方法得到的受精卵冷冻保存后解冻使用的方法。
上述体内受精例如可以是这样在体内进行的受精：临近成熟的卵子从卵巢被排出(排卵)进入输卵管，在一边成熟一边下行到输卵管的中途，与精子相遇受精。获取体内受精的受精卵的方法可以是例如这样的方法：比如在小鼠的情况下，用适当的方法使有受精卵的小鼠安乐死，通过常规方法取出输卵管，用注射针划开输卵管膨大部，将受精卵块通过透明质酸酶处理除去卵丘细胞，由此获得受精卵。
上述体外受精例如可以是在体外人为进行上述受精，体外受精的方法例如有:将取出到体外的卵子与精子共同培养进行受精的方法、透明带开孔法、卵周隙内精子注入法、卵细胞质内精子注入法等显微授精法。其中优选用极细移液管在显微镜下将精子注入卵子细胞质内的ISCI。
上述体外受精中所使用的卵子例如可以是这样的卵子：将排卵的卵子或者临近排卵的成熟卵泡内卵子；采集到体外后的取卵卵子；将采集到体外的未成熟卵子通过常规方法培养成熟的成熟培养卵子；或者是将这些卵子冷冻保存后再解冻的卵子等。将卵泡内卵子采集到体外的方法可以例举将注射针刺入卵泡抽吸的注射器抽吸法、将卵泡切开后取出内容物的小卵泡切开法、将卵巢表面细切的卵巢细切法等。例如，在猪的情况下，通过给予前列腺素F2α、氯前列烯醇、绒膜促性腺激素等激素进行过量排卵处理而获得体内成熟卵子，此外，也可以从来自屠宰场的卵巢采集卵子，使其成熟后使用，不过优选体内成熟卵子，特别是从性成熟(6个月龄以上)后的母猪采集的体内成熟卵子。所述体内成熟卵子可以是这样采集的卵子，即对经过量排卵处理得到的母猪子宫和卵巢，用PBS溶液等进行卵巢灌注而得到的卵子，不过优选对附着有卵丘细胞的卵子进行透明质酸酶处理以除去卵丘细胞。
上述体外受精中所用的精子可以是通过采精、睾丸内精子采集法、显微镜下附睾精子采集法、经皮附睾精子采集法、精子浓缩洗净法等获得的精子，或者是将该精子进行预培养后的精子，或者是将这些精子冷冻保存后再解冻的精子等。
本发明中，受精卵正常发育的概率(正常发育率)是指，例如，上述受精卵在体内或体外通过体细胞分裂，没有发生细胞分裂的停止，也没有出现与本领域技术人员公知的通常预定的细胞分裂模式不同的卵裂，依次变化为各阶段的胚胎的比例，例如2细胞期的胚胎,优选4细胞期的胚胎，更优选8细胞期的胚胎，进一步优选桑椹胚，特别优选胚泡(胚泡阶段的胚胎)。此外，在本发明中，提高正常发育率是指提高至少8细胞期或以后的胚胎的正常发育率。上述桑椹胚是指虽然细胞数增加，但各个细胞仍可确认的具有16-32个左右细胞数的胚胎。上述胚泡是指具有这样的构造的胚胎：形成卵裂腔，外细胞层(滋养外胚层：TE)与内细胞团块(内细胞群：ICM)分开。在自然妊娠的情况下，是相应于在子宫内膜着床前的构造的胚胎(体内发育胚胎)。在体外受精的情况下，已知对正常发育至胚泡阶段的胚胎(体外发育胚胎)进行移植可提高受孕率，但胚胎移植的时期并不限定于胚泡期。这样，发育有受精卵在体外进行体细胞分裂的体外发育(体外培养)和受精卵在体内进行体细胞分裂的体内发育。因此，受精与发育的组合有体内受精-体外发育、体内受精-体内发育、体外受精-体内发育、体外受精-体外发育四种。
作为使用本发明的受精卵正常发育率提高剂提高体外发育的正常发育率的方法，可以例举下列方法：使正常发育率提高剂与受精卵接触的方法，优选在用于提高受精卵发育率的培养基中培养受精卵的方法，其中所述用于提高受精卵发育率的培养基是含有ALA类和铁化合物的哺乳动物受精卵的体外培养基，此外，还有将正常发育率提高剂添加到用于进行取卵卵子的体外成熟的培养基中的方法，将正常发育率提高剂添加到卵子冷冻保存剂中的方法等。作为使用本发明的受精卵正常发育率提高剂提高体内发育的正常发育率的方法，例如可以是将正常发育率提高剂经口、舌下、皮下、静脉内、肌肉内、鼻、卵泡、阴道给予作为卵子来源的人或非人动物母本。与未使用本发明受精卵正常发育率提高剂的情况相比，在使用了本发明正常发育率提高剂的情况下，受精卵的正常发育率得到有义(有意)提高，进而受孕率也得到有义提高。
当本发明的受精卵正常发育率提高剂是用于提高受精卵发育率的培养基时，对于此时所用的上述哺乳动物受精卵的体外培养基没有特别限定，只要是能培养哺乳动物受精卵的培养基即可，例如可以是HTF培养基、m-HTF培养基、Ham培养基、Ham F-10培养基、MEM培养基、199培养基、BME培养基、CMRL1066培养基、McCoy-5A培养基、Weymouth培养基、TrowellT-8培养基、Leibovitz L-15培养基、NCTC培养基、William-E培养基、Kane and Foote培养基、Brinster培养基、m-Tyrode培养基、BWW培养基、WK Whitten培养基、TYH培养基、Hoppes&Pitts培养基、m-KRB培养基、BO培养基、T6培养基、GPM培养基、KSOM、HECM培养基以及这些培养基的改良培养基。还可以使用CARD MEDIUM小鼠体外受精用培养基、用于猪胚胎发育培养的培养基(PZM-5)(功能性肽研究所社生产)等市售的专用体外受精用培养基。具体优选例如含有NcCl、KCl、KH2PO4,MgSO4·7H2O,NaHCO3、乳酸钙、丙酮酸钠、葡萄糖、BSA的培养基，特别优选下表1所示M16培养基，该培养基是在小鼠受精卵的回收、操作实验中最为频繁使用的合成培养基。
[表1]
M16培养基的组成
成分 浓度 供货商
NaC1 5.98g/L(102mM) 和光纯药社生产
KC1 0.356g/L(4.78mM) 和光纯药社生产
KH2PO4 0.163g/L(1.20mM) 和光纯药社生产
MgSO4·7H2O 0.294g/L(1.19mM) 和光纯药社生产
NaHCO3 1.9g/L(22.62mM) 和光纯药社生产
DL-乳酸钙5水合物 0.528g/L(1.71mM) 和光纯药社生产
丙酮酸钠 0.025g/L(0.23mM) 西格玛奥德里奇公司生产
葡萄糖 1g/L(5.55mM) 和光纯药社生产
BSA 3g/L 西格玛奥德里奇公司生产
青霉素 100IU/mL Gibco公司生产
链霉素 50mg/mL Gibco公司生产
酚红 0.01g/L 和光纯药社生产
将上述成分溶解于MiLiQ水后，用0.22μm滤器过滤杀菌，用于进行培养。
关于本发明受精卵正常发育率提高剂在体外发育中的使用量，只要能取得受精卵正常发育率提高的效果即可，对此没有特别限定，当添加到哺乳动物受精卵的体外培养基中时，以5-ALA换算，为0.05μM-5μM，优选0.08μM-2μM，更优选0.1μM-1.5μM。关于本发明受精卵正常发育率提高剂在体内发育中的给予量，只要能取得受精卵正常发育率提高的效果即可，对此没有特别限定，以5-ALA换算，为0.1-20mg/kg·天，优选0.5-10mg/kg·天，更优选1-5mg/kg·天。
作为本发明为提高受精卵正常发育率的用于体外发育或体内发育的试剂盒，只要包含ALA类和铁化合物即可，对其没有特别限定，可以使用还包含一种或多种哺乳动物受精卵的体外培养基的试剂盒。此外，本发明还涉及ALA类，优选ALA类和铁化合物，或者ALA类和铁化合物以及体外养基在用于配制体外发育或体内发育所用受精卵正常发育率提高剂方面的使用。本发明进一步涉及用于提高受精卵正常发育率的ALA类，优选ALA类和铁化合物，或者ALA类和铁化合物以及体外养基。
下面通过实施例对本发明进行更详细的说明，但本发明的技术范围并不限于这些实施例。
实施例1
[自然交配所得受精卵的采集与体外培养(1)]
(小鼠的交配)
使用C57BL/6J系的雌性小鼠(21周龄-27周龄，体重21.0-24.5g)作为采集受精卵的雌性小鼠。使用C57BL/6J系的雄性小鼠(32-38周龄，体重30.0-35.5g)作为交配用的雄性小鼠。根据诱导过量排卵的常规方法，将5U(单位)的马绒毛膜促性腺激素(血清促性腺激素，ASKA制药株式会社生产)腹腔内给予各雌性小鼠，45-48小时后将5U(单位)的促性腺激素(ゴナトロピン，人绒毛膜促性腺激素，ASKA制药株式会社生产)经腹腔内给予各雌性小鼠。给予促性腺激素(ゴナトロピン)后立即使各雌性小鼠与上述各雄性小鼠交配。
(受精卵的回收)
翌日，确定交配后的雌性小鼠是否有乳白色树脂样的阴道栓，从确认有阴道栓的雌性小鼠采集输卵管。将采集到的输卵管在生理盐水(0.9％(w/v)NaCl)中静置15分钟左右，然后将输卵管移至添加了约300μg/mL透明质酸酶(西格玛奥德里奇公司生产)的M16培养基中，以处理除去卵丘细胞。切开输卵管，取出受精卵，在CO2保温箱内于37℃静置5-10分钟，之后回收已分离卵丘细胞的受精卵，用未添加透明质酸酶的M16培养基洗净，除去透明质酸酶。将所得除去了卵丘细胞的受精卵静置于37℃、CO2保温箱内。
(体外培养)
另外，在35mm培养皿中制作100μL的M16培养基的点滴，该点滴层叠了矿物油(西格玛奥德里奇公司生产)并添加了ALA盐酸盐(SBI制药公司生产)至最终浓度分别为0μM(对照)、0.1μM、0.5μM或1μM，将其静置于37℃、CO2保温箱内。向所述点滴移送29个或30个上述除去了卵丘细胞的受精卵，在CO2保温箱内于37℃进行体外培养。
(胚胎发育)
从点滴内的体外培养开始时(0小时)起，经过24小时、48小时、72小时、96小时后，通过立体显微镜观察，确定各胚胎的发育阶段，算出正常进行发育的胚胎的数、发育率的变化。具体就是，作为在各个阶段正常进行发育的胚胎，计算培养开始24小时后2细胞期的卵数，48小时后3细胞期、4细胞期和8细胞期的卵数，72小时后桑椹胚和胚泡的数，96小时后胚泡的数。各阶段的胚胎数记录在表2中，以受精卵(0小时)的数为100％时的发育率显示在表3和图1中。对于发育率的评价，是以受精卵(0小时)的卵数为100％，算出24小时后、48小时后、72小时后、96小时后正常进行发育的胚胎数的比例，作为正常发育率。另外，由于是自然交配，回收到的受精卵(0小时)的数目包含一定程度的未受精卵，即使是同一实验中回收到的受精卵(0小时)的集落(集団)，在分配到各条件群间的受精卵(0小时)集落中，未受精卵的含有率也可能偶然变化。以受精24小时后的2细胞期的胚胎数为100％所算出的发育率，是为了排除在各条件群间偶然变化的未受精卵含有率的影响而进行的计算。也就是说，为了以确实开始了胚胎发育的卵数为基础计算发育率，将24小时后的2细胞期的卵数设定为100％，这种情况下的发育率显示在表4和图2中。各结果的统计分析通过卡方检验进行，p<0.01(**)、p<0.05(*)时具有统计学上的显著差异。
[表2]
[表3]
(vs对照卡方检验**:p<0.01,*:p<0.05)
<添加ALA对发育率的影响>
从表2、表3和图1可以确定，当以受精卵(0小时)的数为100％时，与未添加ALA的对照品相比，分别添加了0.1μM、0.5μM、1μM的ALA的情况下的发育率提高了。特别是在添加0.1μM ALA的情况下，72小时后的发育率为47％，96小时后的发育率为23％，在添加0.5μM ALA的情况下，72小时后的发育率为48％，与对照品的值相比，发育率得到有义(有意)提高。在添加0.5μM ALA的情况下，96小时后的发育率为45％，在添加了1μM ALA的情况下，72小时后的发育率为52％，96小时后的发育率为45％，与对照品的值相比，发育率得到显著提高。
[表4]
(vs对照卡方检验**:p<0.01,*:p<0.05)
从表4和图2可以确定，当以受精之后24小时后的2细胞期的胚胎数为100％时，与未添加ALA的对照品相比，通过添加0.1μM、0.5μM、1μM的ALA，提高了发育率。特别是在添加0.1μMALA的情况下，96小时后的发育率为32％，与对照品的值相比，发育率得到有义提高。在添加0.5μMALA的情况下，96小时后的发育率为54％，与对照品的值相比，发育率得到显著提高。此外，在添加1μM ALA的情况下，72小时后的发育率为79％，96小时后的发育率为68％，与对照品的值相比，发育率得到显著提高。
实施例2
[自然交配所得受精卵的采集与体外培养(2)]
使用BDF1系(C57BL/6雌×DBA/2雄的F1)的雌性与雄性交配得到的BDF2系的雌性小鼠(5-24周龄，体重16-25g)作为采集受精卵的雌性小鼠，使用BDF1系(C57BL/6雌×DBA/2雄的F1)的雄性小鼠(46-52周龄，体重30-45g)作为交配用的雄性小鼠，对1μM的ALA进行研究，除此之外与实施例1一样进行。结果如下表5-7、图3和4所示。
[表5]
[表6]
<添加ALA对发育率的影响>
从表5、表6和图3可以确定，当以BDF2系统雌性小鼠与BDF1系统雄性小鼠交配所得受精卵(0小时)的数为100％时，与未添加ALA的对照品相比，添加1μM的ALA使发育率上升了。
[表7]
(vs对照卡方检验**:p<0.01,*:p<0.05)
从表7和图4可以确定，当以受精之后24小时后的2细胞期的胚胎数为100％时，与未添加ALA的对照品相比，通过添加1μM的ALA提高了发育率。特别是在添加1μMALA的情况下，72小时后和96小时后的发育率为98％，与对照品的值相比，发育率显著提高。
接下来，将小鼠C57BL/6J通过自然交配和体外受精得到的受精卵在体外培养系中进行低温培养，研究ALA对其的胚胎发育促进作用。
实施例3
[自然交配所得受精卵的采集与体外培养(3)]
根据诱导过量排卵的常规方法，将5U(单位)的马绒毛膜促性腺激素(血清促性腺激素,ASKA制药株式会社生产)腹腔内给予C57BL/6J系统的雌性小鼠(4周龄-6周龄)，45-48小时后腹腔内给予5U(单位)的促性腺激素(ゴナトロピン，人绒毛膜促性腺激素，ASKA制药株式会社生产)。给予促性腺激素(ゴナトロピン)后立即使各雌性小鼠与C57BL/6J系统的各雄性小鼠交配。第二天早晨，从确认有阴道栓的雌性小鼠回收输卵管到生理盐水(0.9％(w/v)NaCl)中，用添加了透明质酸酶(约300μg/ml，西格玛奥德里奇公司生产)的KSOM或mWM(都购自ARK Resource公司，http://www.ark-resource.co.jp/seihin/cryopreservation-liquid/)回流灌注输卵管，等除去所得受精卵的卵丘细胞后回收受精卵。用KSOM或mWM的各培养基洗涤受精卵以除去透明质酸酶，并用KSOM或mWM(ARK Resource公司)将其维持在37℃、5％CO2的保温箱内，直至从全部雌性小鼠回收受精卵。所用两种培养基是用于小鼠胚胎培养的具有代表性的培养基，KSOM是具有代表性的低葡萄糖含量的培养基，而mWM则是高葡萄糖含量的培养基。
向未添加ALA或添加了ALA(1μM或3μM)的100μl培养基(KSOM或mWM)形成的点滴(层叠有矿物油(西格玛奥德里奇公司生产))中移入20-50个所回收的受精卵。此后，在37℃、5％CO2和35℃、5％CO2这两种培养条件下进行培养。对从采集受精卵开始24小时后的2细胞期卵数进行计数，对96小时后的胚泡数进行计数。发育率的评价与实施例1一样进行。KSOM的结果显示在表8-表10、图5和图6中，mWM的结果显示在表11-表13、图7和图8中。
[表8]
[表9]
[表10]
[表11]
[表12]
[表13]
<低温(35℃)培养条件下对发育率的影响>
对未添加ALA组的对照品在37℃培养与35℃培养时的发育率进行比较，使用KSOM的情况(表9、图5，表10、图6)下，当以受精卵(0)小时的数为100％计时(表9)，培养96小时后发育为胚泡的发育率从23％变为4％，当以受精24小时后2细胞期的胚胎数为100％计时(表10)，培养96小时后的发育率从56％变为6％，分别都出现了有义降低,使用mWM的情况(表12、图7，表13、图8)下，当以受精卵(0)小时的数为100％计时(表12)，培养96小时后的发育率从35％变为23％,当以受精24小时后2细胞期的胚胎数为100％计时(表13)，培养96小时后的发育率从71％变为49％，也都分别出现了有义降低。从上述结果可知，在本实验条件下进行的C57BL/6J受精卵的低温培养会阻碍发育的进行。
<在低温(35℃)培养条件下添加ALA对发育率的影响>
在35℃培养条件下,使用KSOM时，未添加ALA组的对照品在培养96小时后发育成胚泡的发育率，以受精卵(0小时)的数为100％计时为4％(表9)，以受精24小时后的2细胞期胚胎数为100％计时为6％(表10)，而与此相对，1μMALA添加组的发育率，以受精卵(0小时)的数为100％计时为10％(表9),以受精24小时后的2细胞期胚胎数为100％计时为15％(表10),各自都出现了有义上升。另一方面，使用mWM时，未添加ALA组的对照品在培养96小时后发育成胚泡的发育率，以受精卵(0小时)的数为100％计时为23％(表12)，以受精24小时后的2细胞期胚胎数为100％计时为49％(表13)，而与此相对，3μM ALA添加组的发育率，以受精卵(0小时)的数为100％计时为32％(表12)，以受精24小时后的2细胞期胚胎数为100％计时为65％(表13),各自都出现了有义上升,不过与使用KSOM时不同,1μM ALA添加组的发育率并未出现有义上升(表12、13)。
实施例4
[体外受精所得受精卵的采集与体外培养]
将5U(单位)的马绒毛膜促性腺激素(血清促性腺激素,ASKA制药株式会社生产)腹腔内给予C57BL/6J系统的雌性小鼠(3.9周龄-4.0周龄)，45-48小时后腹腔内给予5U(单位)的促性腺激素(ゴナトロピン，人绒毛膜促性腺激素，ASKA制药株式会社生产)，诱导其过量排卵。给予促性腺激素(ゴナトロピン)15小时后，开腹回收输卵管。在矿物油中，用解剖针切开输卵管膨大部，将卵子回收到mHTF培养基(ARK Resource公司)的点滴中。从C57BL/6J雄性小鼠的附睾尾部回收精子，在mHTF培养基中于37℃、5％CO2条件下培养40分钟到1小时，使精子获能。向加入了所回收的卵子的培养基点滴中，加入2μl-4μl含有精子的mHTF培养基进行授精，在37℃、5％CO2条件下进行培养。受精之后4小时到6小时后，用KSOM(ARKResource公司)或mWM(ARK Resource公司)洗涤受精卵，去除卵丘细胞和精子。暂且用KSOM或mWM培养在37℃、5％CO2的保温箱内，直至回收完全部受精卵。
向未添加ALA或添加了ALA(1μM或3μM)的100μl培养基(KSOM或mWM)形成的点滴(层叠有矿物油(西格玛奥德里奇公司生产))每个点滴中移入25个受精卵。此后，在37℃、5％CO2和35℃、5％CO2及35.5℃、5％CO2这三种培养条件下进行培养。计测卵子回收24小时后的2细胞期胚胎个数、96小时后的胚泡个数。并且，由于从体外受精获得的受精卵的发育会稍迟，对卵子回收120小时后的胚泡个数也进行计测。以受精24小时后的2细胞期的胚胎数为100％计，以此为基础计算各培养时间的胚胎发育率。KSOM的结果显示在表14、表15、图9和图11中，mWM的结果显示在表16、表17、图10、图12和图13中。
[表14]
[表15]
[表16]
[表17]
<低温(35℃和35.5℃)培养条件下对发育率的影响>
对未添加ALA组的对照品在37℃、35.5℃、35℃培养时的发育率进行比较，使用KSOM的情况(表15、图9)下，当以受精24小时后2细胞期胚胎数为100％计时，培养120小时后发育成胚泡的发育率从37℃的74％变为35.5℃的41％、35℃的24％，有义降低了。使用mWM的情况(表17、图10)也同样地，以受精24小时后2细胞期的胚胎数为100％计时，培养96小时后发育成胚泡的发育率从37℃的83％变为35.5℃的53％、35℃的25％，随着温度有义降低了。从上述结果可知，与自然交配所得受精卵一样，本实验条件下进行的C57BL/6J的体外受精卵的低温培养会阻碍发育的进行。
<在低温(35℃和35.5℃)培养条件下添加ALA对发育率的影响>
使用KSOM(表14和表15)时，在35℃培养条件下(图11)，未添加ALA的组在培养120小时后，以受精24小时后的2细胞期的胚胎数为100％计，发育成胚泡的发育率为24％，而与此相对,1μMALA添加组为36％,3μM ALA添加组为27％,35℃培养且添加1μM ALA的情况有义提高了发育成胚泡的发育率。
其次，使用mWM时(表16和表17)，在35.5℃培养条件下(图12)，未添加ALA的组在培养96小时后，以受精24小时后的2细胞期的胚胎数为100％计，发育成胚泡的发育率为53％，而与此相对，1μMALA添加组为70％，3μM ALA添加组为75％，通过添加ALA的情况有义提高了发育成胚泡的发育率。另外，在35℃培养条件下(图13)，未添加ALA的组在培养96小时后，以受精24小时后的2细胞期的胚胎数为100％计，发育成胚泡的发育率为25％，而与此相对,1μM ALA添加组为53％,3μM ALA添加组为38％，35℃培养且添加1μM ALA的情况有义提高了发育成胚泡的发育率。
(研究)
<ALA对发育率的影响>
关于未正常进行发育的受精卵或胚胎，考虑有可能是细胞内血红素合成量下降，即，内源性5-ALA供应不足引起能量生产障碍，从而导致初期发育停止。认为通过补充5-ALA还有铁，能够提高发育率和受孕率。
<低温培养对胚胎发育的影响>
在自然交配与体外受精两种方式得到的C57/BL6受精卵的体外发育体系中，与37℃的正常培养相比，35.5℃和35℃的低温培养降低了发育成胚泡的发育率，证明发育受到抑制。特别是在体外受精卵的胚胎培养中，可观察到随着温度变化对发育成胚泡的发育抑制(图9和图10)，表明该体系可作为低体温症导致不孕的模型。
<低温培养条件下ALA对胚胎发育的促进效果>
对在本实验条件下ALA对低温培养的小鼠胚胎发育的作用进行分析后，可确认，在自然交配所得受精卵和体外受精卵的体外发育中，低温培养条件下，ALA显现出发育促进作用。特别是使用mWM的情况观察到了强促进作用。由于mWM是高葡萄糖培养基，而KSOM是低葡萄糖培养基，所以考虑ALA的作用可能具有葡萄糖依赖性。
<ALA作为人不孕症治疗药物的可能性>
本实验虽然使用的是小鼠受精卵，但低温下的受精卵发育推测是一种与不孕原因之一的低体温症类似的压力下状态，这就揭示了一种可能性，即服用ALA有对改善低体温导致的人不孕症可能有效。
工业上的可应用性
本发明可提高从受精卵到胚胎的制备效率，所述胚胎适合用于进行胚胎移植到母体中，因而在畜牧业和不孕症治疗领域有用。

Claims (15)

1.受精卵正常发育率提高剂，其特征在于含有下式(I)所示化合物或其盐，
[化1]
式中，R1表示氢原子或酰基，R2表示氢原子、直链或支链烷基、环烷基、芳基或芳烷基。
2.权利要求1所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于R1和R2为氢原子。
3.权利要求1或2所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于还含有铁化合物。
4.权利要求3所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于所述铁化合物为一种或多种选自下列的化合物：氯化铁、三氧化二铁、硫酸铁、焦磷酸亚铁、柠檬酸亚铁、柠檬酸铁钠、柠檬酸亚铁钠、柠檬酸铁铵、焦磷酸铁、乳酸铁、葡萄糖酸亚铁、二乙烯三胺五乙酸铁钠、二乙烯三胺五乙酸铁铵、乙二胺四乙酸铁钠、乙二胺四乙酸铁铵、二羧甲基谷氨酸铁钠、二羧甲基谷氨酸铁铵、富马酸亚铁、乙酸铁、草酸铁、琥珀酸亚铁、琥珀酸柠檬酸铁钠、血红素铁、葡聚糖铁、三乙烯四胺铁、乳铁蛋白铁、转铁蛋白铁、铁叶绿酸钠、铁蛋白铁、含糖氧化铁和硫化甘氨酸铁。
5.权利要求1-4任一项所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于能够提高受孕率。
6.权利要求1-5任一项所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于所述受精卵是通过体外受精或体内受精所获得的受精卵。
7.权利要求1-6任一项所记载的受精卵正常发育率提高剂，其特征在于该提高剂是用于提高受精卵发育率的培养基，其还含有哺乳动物受精卵的体外培养基。
8.提高受精卵正常发育率的方法，其特征在于使受精卵与权利要求1-7任一项所记载的受精卵正常发育率提高剂接触。
9.提高受精卵正常发育率的方法，其特征在于将权利要求1-7任一项所记载的受精卵正常发育率提高剂给予对象母本。
10.用于提高受精卵正常发育率的试剂盒，该试剂盒包含：a)下式(I)所示化合物或其盐
[化2]
式中，R1表示氢原子或酰基，R2表示氢原子、直链或支链烷基、环烷基、芳基或芳烷基；
以及b)铁化合物。
11.权利要求10所记载的用于提高受精卵正常发育率的试剂盒，其特征在于该试剂盒还包含：c)哺乳动物受精卵的体外培养基。
12.下式(I)所示化合物或其盐用于配制受精卵正常发育率提高剂的应用，
[化3]
式中，R1表示氢原子或酰基，R2表示氢原子、直链或支链烷基、环烷基、芳基或芳烷基。
13.权利要求12所记载的应用，其特征在于使用式(I)所示化合物或其盐与铁化合物。
14.权利要求13所记载的应用，其特征在于使用式(I)所示化合物或其盐与铁化合物以及哺乳动物受精卵的体外培养基。
15.用于提高受精卵正常发育率的下述式(1)所示化合物或其盐，
[化4]
式中，R1表示氢原子或酰基，R2表示氢原子、直链或支链烷基、环烷基、芳基或芳烷基。
CN201580033437.8A 2014-07-11 2015-07-10 受精卵的正常发育率提高剂 Active CN106661550B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2014-143204 2014-07-11
JP2014143204 2014-07-11
PCT/JP2015/003515 WO2016006260A1 (ja) 2014-07-11 2015-07-10 受精卵の正常発生率向上剤

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106661550A true CN106661550A (zh) 2017-05-10
CN106661550B CN106661550B (zh) 2020-03-20

Family

ID=55063908

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580033437.8A Active CN106661550B (zh) 2014-07-11 2015-07-10 受精卵的正常发育率提高剂

Country Status (6)

Country Link
US (1) US9962350B2 (zh)
EP (1) EP3168296B1 (zh)
JP (1) JP6278491B2 (zh)
CN (1) CN106661550B (zh)
HK (1) HK1231506A1 (zh)
WO (1) WO2016006260A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109136172A (zh) * 2018-09-11 2019-01-04 苏州市立医院 提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒及其使用方法
US11521320B2 (en) * 2018-05-25 2022-12-06 Sony Corporation Control device, control method, and program

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6977999B2 (ja) * 2018-08-22 2021-12-08 国立大学法人京都大学 胚培養培地、及び胚培養方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101822661A (zh) * 2004-09-02 2010-09-08 克斯莫石油株式会社 健康功能改善剂
CN102014890A (zh) * 2008-05-14 2011-04-13 Sbi5-Ala生物技术股份有限公司 男性不育治疗剂
CN102905702A (zh) * 2010-05-19 2013-01-30 思佰益药业股份有限公司 以5-氨基乙酰丙酸或其衍生物作为有效成分的抗疟药
CN103747784A (zh) * 2011-08-12 2014-04-23 思佰益药业股份有限公司 败血症的预防剂和/或治疗剂

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06189650A (ja) 1992-10-27 1994-07-12 Akihisa Shinjo 受胎率の向上方法
JPH08289779A (ja) 1995-04-24 1996-11-05 Kinousei Pepuchido Kenkyusho:Kk 無血清培地及び体外受精卵の生産方法
JP3660026B2 (ja) 1995-09-04 2005-06-15 扶桑薬品工業株式会社 体外受精用培地組成物
JP2001017160A (ja) 1999-07-07 2001-01-23 Fuso Pharmaceutical Industries Ltd 体外受精用培地組成物
JP4058509B2 (ja) 2001-03-22 2008-03-12 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 ヒトを除く哺乳動物受精卵の発生率向上方法
JP3680130B2 (ja) 2001-07-18 2005-08-10 独立行政法人農業・生物系特定産業技術研究機構 ブタ胚の体外培養用培地及び培養方法
JP4754731B2 (ja) * 2001-07-31 2011-08-24 コスモ石油株式会社 豚成育促進剤及び豚成育促進方法
CA2935654C (en) 2008-10-27 2019-01-08 Sbi Pharmaceuticals Co., Ltd. Prophylactic/ameliorating agent for adult diseases comprising 5-aminolevulinic acid, its ester, or salt thereof as active ingredient
JP5410782B2 (ja) 2009-02-20 2014-02-05 あすか製薬株式会社 人工受精用培地組成物
JP5611548B2 (ja) 2009-07-08 2014-10-22 Ｓｂｉファーマ株式会社 ５−アミノレブリン酸若しくはその誘導体、又はそれらの塩を有効成分とするがんの予防・改善剤
JP2012105585A (ja) 2010-11-17 2012-06-07 Nippon Ika Kikai Seisakusho:Kk 人工受精用組成物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101822661A (zh) * 2004-09-02 2010-09-08 克斯莫石油株式会社 健康功能改善剂
CN102014890A (zh) * 2008-05-14 2011-04-13 Sbi5-Ala生物技术股份有限公司 男性不育治疗剂
CN102905702A (zh) * 2010-05-19 2013-01-30 思佰益药业股份有限公司 以5-氨基乙酰丙酸或其衍生物作为有效成分的抗疟药
CN103747784A (zh) * 2011-08-12 2014-04-23 思佰益药业股份有限公司 败血症的预防剂和/或治疗剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BONKOVSKY HL: "Mechanism of iron potentiation of hepatic uroporphyria: studies in cultured chick embryo liver cells", 《HEPATOLOGY》 *
WILT FH: "Heme and regulation of embryonic hemoglobin synthesis", 《BIOCHEM BIOPHYS RES COMMUN》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11521320B2 (en) * 2018-05-25 2022-12-06 Sony Corporation Control device, control method, and program
CN109136172A (zh) * 2018-09-11 2019-01-04 苏州市立医院 提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒及其使用方法
CN109136172B (zh) * 2018-09-11 2022-02-11 苏州市立医院 提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒及其使用方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20170157074A1 (en) 2017-06-08
EP3168296B1 (en) 2020-09-09
JP6278491B2 (ja) 2018-02-14
US9962350B2 (en) 2018-05-08
JPWO2016006260A1 (ja) 2017-04-27
HK1231506A1 (zh) 2017-12-22
EP3168296A4 (en) 2017-11-29
WO2016006260A1 (ja) 2016-01-14
CN106661550B (zh) 2020-03-20
EP3168296A1 (en) 2017-05-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Grupen The evolution of porcine embryo in vitro production
Barnett et al. Hypotaurine requirement for in vitro development of golden hamster one-cell embryos into morulae and blastocysts, and production of term offspring from in vitro-fertilized ova
Funahashi et al. Effects of different serum supplements in maturation medium on meiotic and cytoplasmic maturation of pig oocytes
Mohr et al. Comparative ultrastructure of hatched human, mouse and bovine blastocysts
Funahashi Polyspermic penetration in porcine IVM–IVF systems
Chemineau et al. Implications of recent advances in reproductive physiology for reproductive management of goats
CN109689072A (zh) 精子活化剂及其用途
JPS60246751A (ja) 胚移植法
CN106661550A (zh) 受精卵的正常发育率提高剂
Wrenzycki In vitro production of (Farm) animal embryos
Falchi et al. Embryo biotechnologies in sheep: Achievements and new improvements
Kurotaki et al. Practical reproductive techniques for the common marmoset
WO2001096533A1 (fr) Cellules souches embryonnaires provenant d&#39;un singe
JP5410782B2 (ja) 人工受精用培地組成物
Kim et al. Fertilization and in vitro development of porcine oocytes following intracytoplasmic injection of round spermatid or round spermatid nuclei
Carnevale The mare as an animal model for reproductive aging in the woman
Beebe et al. Adding essential amino acids at a low concentration improves the development of in vitro fertilized porcine embryos
Kovpak et al. Influence of calcium ionophore on the fertilization of bovine oocytes and their further embryonic development
Gordon In vitro embryo production.
CN110283780B (zh) 牛活体超排采卵方法和所用的制剂
Murakami et al. Transfer of Inner Cell Mass Cells Derived from Bovine Nuclear Transfer Embryos into the Trophoblast of Bovine In Vitro–Produced Embryos
Chundekkad et al. Polyspermic fertilisation of porcine oocytes in vitro-a current review.
US20140206930A1 (en) Twinning with sex sorted sperm
Pavitra Chundekkad et al. Polyspermic fertilisation of porcine oocytes in vitro-a current review.
ABULBASHAR et al. The RECENT STATE OF EMBRYO PRODUCTION TECHNIQUES IN SHEEP BREEDING-A REVIEW.

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1231925

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1231925

Country of ref document: HK