JP2003508484A

JP2003508484A - がん治療または予防のためのα−リノレン酸代謝物の使用

Info

Publication number: JP2003508484A
Application number: JP2001521308A
Authority: JP
Inventors: オブコビツチ，マーク; カバキビ，エイマン; ハマート，スーザン; オルソン，リーザ・エム; リンドマン，ジユリー
Original assignee: モンサントテクノロジーエルエルシー
Priority date: 1999-09-10
Filing date: 2000-09-11
Publication date: 2003-03-04
Also published as: US6340705B1; EP1237545A2; CA2384502A1; CA2384502C; WO2001017517A3; WO2001017517A2; MXPA02002681A; AU7371600A; US20020010211A1; EP1237545B1; ATE318133T1; DE60026152T2; DE60026152D1

Abstract

(57)【要約】哺乳類におけるがんは、ステアリドン酸（１８：４ｎ−３）、エイコサテトラエン酸（２０：４ｎ−３）、ドコサペンタエン酸（２２：５ｎ−３）およびそれらの混合物などのα−リノレン酸の代謝物、特にステアリドン酸などの代謝物のがん阻害量を、それを必要とする哺乳類に投与することにより治療または予防することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野本発明は、がん治療のためのα−リノレン酸代謝物の使用に関する。さらに具
体的には、本発明は、がん、特に、結腸がん、乳がん、肺がんおよび前立腺がん
などの上皮細胞がんの治療または予防のためのステアリドン酸の使用に関する。

【０００２】発明の背景必須脂肪酸類（ＥＦＡ類）には、α−リノレン酸から誘導されたｎ−３（また
はω−３）タイプおよびリノール酸から誘導されたｎ−６（またはω−６）タイ
プの２種類がある。これらの代謝経路における出発の多不飽和脂肪酸類（ＰＵＦ
Ａ類）（すなわち、α−リノレン酸およびリノール酸）は体内で産生できず、し
たがって、食物で得る必要がある。ｎ−３、ｎ−６およびｎ−９ＰＵＦＡの不飽
和化並びに伸長経路を下記に示す。

【０００３】

【表１】

【０００４】食物脂肪が腫瘍形成に大きな作用を有する可能性があるという証拠を供する重
要な要素は、腫瘍促進の媒介において食物中の脂肪の種類が脂肪量と同じく重要
であることを示唆するデータである。この点で、ＰＵＦＡ類に多大な関心が寄せ
られた。ＰＵＦＡ類の作用の原因となる正確な機序は不明であるが、ＰＵＦＡ作
用が、アラキドン酸を経て、あるいはプロスタグランジン類、ＨＥＴＥ類および
ロイコトリエン類を経て媒介されることが示唆された。

【０００５】食物ｎ−３ＰＵＦＡ類は、組織アラキドン酸含量を抑制するのに極めて効果的
であり、長鎖ｎ−３ＰＵＦＡ類は、α−リノレン酸よりもさらに効果的であるこ
とが古くから知られている：Ｗｈｅｌａｎ，Ｊ．，Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ，Ｋ．Ｓ
．およびＫｉｎｓｅｌｌａ，Ｊ．Ｅ．，Ｌｉｐｉｄｓ，Ｖｏｌ．２６，１１９−
１２６（１９９１）；Ｈｗａｎｇ，Ｄ．Ｈ．，Ｂｏｕｄｒｅａｕ，Ｍ．およびＣ
ｈａｎｍｕｇａｎ，Ｐ．，Ｊ．Ｎｕｔｒ．，Ｖｏｌ．１１８，４２７−４３７（
１９８８）。また、ｎ−３ＰＵＦＡ類を含有する食物、特に魚油に見られるもの
（すなわち、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエンン酸（ＤＨＡ
））は、腫瘍形成と促進を減少させると報告されており、ｎ−３ＰＵＦＡの取り
込みは、化学的に誘導された腫瘍形成と負の相関がある：Ｂｒａｄｅｎ，Ｌ．Ｍ
．およびＣａｒｒｏｌｌ，Ｋ．Ｋ．，Ｌｉｐｉｄｓ２１：２８５−２８８，１
９８６；Ｒｅｄｄｙ，Ｂ．，およびＭａｒｕｙａｍａ，Ｈ．，ＣａｎｃｅｒＲ
ｅｓ．４６：３３６７−３３７０，１９８６；Ｍｉｎｏｕｒａ，Ｔ．，Ｔａｋａ
ｔａ，Ｔ．，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，Ｍ．，Ｔａｋａｄａ，Ｈ．，Ｙａｍａｍｕｒ
ａ，Ｍ．，Ｈｉｃｋｉ，Ｋ．およびＹａｍａｍｏｔｏ，Ｊ．，ＣａｎｃｅｒＲ
ｅｓ．４８：４７９０−４７９４，１９８８；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｒ．Ｌ．，Ｔａｎ
ｕｒｅ，Ｊ．Ｃ．，Ａｎｄｒｉａｎｏｐｏｕｌｏｓ，Ｇ．，Ｓｏｕｚａ，Ｇ．お
よびＬａｎｄｓ，Ｅ．Ｅ．Ｍ．，Ｎｕｔｒ．Ｃａｎｃｅｒ１１：２１５−２２
０，１９８８；Ｒｅｄｄｙ，Ｂ．およびＳｕｇｉｅ，Ｓ．，ＣａｎｃｅｒＲｅ
ｓ．４８：６６４２−６６４７，１９８８。

【０００６】組織のアラキドン酸含量は、エイコサノイド生合成と関連している：Ｌｉ，Ｂ
．Ｙ．，Ｂｉｒｄｗｅｌｌ，Ｃ．およびＷｈｅｌａｎ，Ｊ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ．
Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．３５，１８６９−１８７７（１９９４）。結腸粘膜リン脂質
におけるエイコサペンタエン酸濃度は、細胞増殖の指標と負の相関がある：Ｌｅ
ｅ，Ｄ．-Ｙ．Ｋ．，Ｌｕｐｔｏｎ，Ｊ．Ｒ．，Ａｕｋｅｍａ，Ｈ．Ｍ．および
Ｃｈａｐｋｉｎ，Ｒ．Ｓ．，Ｊ．Ｎｕｔｒ．，Ｖｏｌ．１２３，１８０８−１９
１７（１９９３）。逆に、結腸粘膜のリン脂質におけるアラキドン酸含量は、細
胞増殖のより高度の指標と関連している：Ｌｅｅ，Ｄ．-Ｙ．Ｋ．，Ｌｕｐｔｏ
ｎ，Ｊ．Ｒ．，Ａｕｋｅｍａ，Ｈ．Ｍ．およびＣｈａｐｋｉｎ，Ｒ．Ｓ．，Ｊ．
Ｎｕｔｒ．，Ｖｏｌ．１２３，１８０８−１９１７（１９９３）。

【０００７】ごく最近、Ｐａｕｌｓｏｎらは、魚油由来のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）
およびドコサヘキサノエン酸（ＤＨＡ）の濃縮物が、Δ７１６Ａｐｃノックアウ
トＭｉｎ／＋マウスにおいて腸管ポリープの形成と増殖を減少したことを示した
：Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｖｏｌ．１８，１９０５−１９１０（１９９
７）。同様に、Ｏｓｈｉｍａらは、食物のＤＨＡ−エチルエステルが、Δ７１６
ＡｐｃノックアウトＭｉｎ／＋マウスにおける腸管ポリープ発生を減少させるこ
とを示した：Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｖｏｌ．１６，２６０５−２６０
７（１９９５）；Ｍｏｓｅｒ，Ａ．Ｒ．，Ｌｕｏｎｇｏ，Ｃ．，Ｇｏｕｌｄ，Ｋ
．Ａ．，ＭｃＮｅｌｅｙ，Ｍ．Ｋ．，Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ，Ａ．Ｒ．，Ｄｏｖｅ
，Ｗ．Ｆ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，３１Ａ（７−８），１０６１−１０６
４（１９９５）。

【０００８】欧州特許出願第０４４０３０７Ａ２号は、乳がん治療における使用のための組
成物を開示している。開示された組成物は、α−リノレン酸の１種または複数の
代謝物、およびリノール酸の１種または複数の代謝物を含む。

【０００９】国際出願第９７／３９７４９号は、悪液質および食欲減退の予防と治療のため
の方法を記載している。悪液質および食欲減退は、疾病が転移がんに進行したが
ん患者間に共通した状態であると言われている。開示された方法には、個々にｎ
−６脂肪酸およびｎ−３脂肪酸を含む油状混合物、分枝鎖アミノ酸を含むアミノ
窒素源および抗酸化剤成分を投与することを含んでいる。

【００１０】米国特許第５，８８６，０３７号には、リポ蛋白過剰血症、肥満症、尿酸過剰
血症、高血圧症、脂肪肝、タイプＩＩ糖尿病、インスリン耐性、およびアテロー
ム血管疾患が挙げられる。開示組成物には、中鎖脂肪酸およびｎ−３多不飽和長
鎖脂肪酸などの代謝症候群（Ｘ症候群）に関連すると思われる種々の疾病の治療
のための食物組成を開示している。

【００１１】米国特許第５，１５８，９７５号には、アレルギー障害、皮膚障害、リュウマ
チ障害、および外傷、ショックおよび病変後の障害などの炎症状態の予防と治療
のためにステアリドン酸の使用を記載している。ステアリドン酸（ＳＤＡ）およ
びその代謝物、ＥＰＡおよびＤＨＡは、炎症過程に関与するロイコトリエンの生
合成を阻害すると言われている。

【００１２】米国特許第５，５６２，９１３号には、喫煙者におけるｎ−６必須脂肪酸また
はｎ−３必須脂肪酸欠乏を治療する方法を記載している。この方法は、ｎ−６必
須脂肪酸、ｎ−３必須脂肪酸、またはｎ−６脂肪酸とｎ−３脂肪酸の混合物を喫
煙者に投与することを含んでいる。

【００１３】発明の概要本発明は、哺乳類におけるがんの治療と予防のための方法を対象とする。この
方法は、ステアリドン酸（１８：４ｎ−３）、エイコサテトラエン酸（２０：
４ｎ−３）、ドコサペンタエン酸（２２：５ｎ−３）およびそれらの混合物
のがん阻害量を、それを必要とする哺乳類に投与することを含む。

【００１４】図面の簡単な説明図１は、ＨｅｐＧ２細胞における放射性標識ＡＬＡ、ＳＤＡおよびＥＰＡの取
込み率を示す。図２は、ＨｅｐＧ２細胞中での、長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸代謝物への放射性
標識ＡＬＡの代謝率を示す。図３は、ＨｅｐＧ２細胞中での、長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸代謝物への放射性
標識ＳＤＡの代謝率を示す。図４は、ＨｅｐＧ２細胞中での、ＥＰＡへの放射性標識ＡＬＡおよびＳＤＡの
代謝率を示す。図５は、ＨｅｐＧ２細胞中での、ＤＨＡへの放射性標識ＡＬＡ、ＳＤＡおよび
ＥＰＡの代謝率を示す。図６は、マウス肝臓中での、放射性標識ＡＬＡ、ＳＤＡおよびＥＰＡの長鎖ｎ
−３多不飽和脂肪酸代謝物への変換を示す。図７は、肝組織からの放射性標識脂肪酸の回収に関して修正した、放射性標識
ＡＬＡ、ＳＤＡおよびＥＰＡの長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸代謝物への変換を示す
。図８は、エチルエステル体のＡＬＡ、ＳＤＡ、ＥＰＡまたはＤＨＡを増量した
ＵＳ１７食餌で飼育されたマウス肝臓中に蓄積された長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸
の全量を示す。図９は、エチルエステル体のＡＬＡ、ＳＤＡ、ＥＰＡまたはＤＨＡを増量した
ＵＳ１７食餌で飼育されたラット肝臓中に蓄積された長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸
の全量を示す。図１０は、腸がんのＭｉｎ／＋マウスモデルにおける腸管ポリープ数およびサ
イズに対するエチルエステル体として給餌されたＡＬＡ、ＳＤＡ、ＥＰＡまたは
ＤＨＡの作用を示す。図１１は、マウス小腸のリン脂質（ＰＬ）分画中のアラキドン酸含量に対する
エチルエステル体として給餌されたＡＬＡ、ＳＤＡ、ＥＰＡまたはＤＨＡの作用
を示す。図１２は、ヌードマウス／ＨＴ−２９がんモデルにおける原発性腫瘍増殖に対
するエチルエステル体として給餌されたＳＤＡの作用を示す。

【００１５】発明の詳細な説明ここで用いられる用語「治療」とは、良性腫瘍、がん性腫瘍およびポリープの
増殖、拡散または転移の部分阻害または全阻害ならびに腫瘍細胞およびポリープ
細胞の部分破壊または全破壊を含む。用語の「予防」とは、臨床的に明白な腫瘍
またはポリープの発症を全体的に予防すること、または危険性のある各個人にお
いて腫瘍またはポリープ発生の前臨床的に明白な段階の発症を予防することを含
む。用語の「予防」とはまた、悪性細胞への開始予防、または前悪性細胞から悪
性細胞への悪化を阻止するかまたは逆行させることを含む。このことは、腫瘍お
よび／またはポリープを発生させる危険性のあるものを含む。

【００１６】本発明者らは、ステアリドン酸（ＳＤＡ；１８：４ｎ−３）の哺乳類への投
与がα−リノレン酸（ＡＬＡ；１８：３ｎ−３）の同量投与よりも、哺乳類に
おけるエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の
組織濃度を高濃度に上昇させることを発見した。また、本発明者らは、がんを治
療し、または予防するためのＥＰＡとＤＨＡに対する前駆体としてのＳＤＡの使
用を可能にする割合と効率で、ＳＤＡがＥＰＡとＤＨＡに変換されることを発見
した。本発明者らはまた、驚くべきことに大腸の腫瘍形成を阻害する上で、食餌
のＳＤＡは、食餌のＥＰＡおよびＤＨＡよりもなおさらに効果的であり得ること
を発見した。

【００１７】さらに、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡではなくＳＤＡの患者への投与は、「生
理学的なチャネリング」を利用するが、そこでＳＤＡからＥＰＡおよびＤＨＡへ
の代謝が、究極的に体内脂肪酸代謝により制御され、腫瘍形成に影響を与える（
例えば、アラキドン酸代謝と競合する）脂質プールにおいて至適分布となる。こ
の代謝制御は、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡの直接投与により供されるものより
もＥＰＡとＤＨＡのより有効な分布となり得る。さらに、ＳＤＡの方が短い鎖長
を有し、ＥＰＡおよびＤＨＡよりも少ない不飽和結合を有することから、ＳＤＡ
は、ＥＰＡまたはＤＨＡの何れよりも望ましい感覚受容性を示し得る。その結果
、ＳＤＡは、例えば機能性食品または栄養補助剤などの多くの適用においてＥＰ
ＡおよびＤＨＡの特に魅力的な代替物として寄与し得る。

【００１８】本発明の方法により治療または予防し得るがんには、結腸がん、乳がん、前立
腺がんおよび肺がんなどの上皮細胞がんが挙げられる。本発明の方法により治療
または予防し得る他のがんには、脳がん、骨がん、腺がん、口唇がん、口腔がん
、食道がん、小腸がんおよび胃がんなどの胃腸がん、肝臓がん、膀胱がん、膵臓
がん、卵巣がん、子宮頚がん、腎細胞がん、および扁平上皮細胞がんおよび基底
細胞がんなどの皮膚がんが挙げられる。

【００１９】哺乳類に投与された場合、ＳＤＡは如何なる生物学的活性体であってもよい。
例えば、ＳＤＡは、カルボン酸であってもよく、またはその代わりに、脂質、カ
ルボン酸塩、エステル、アミド、または幾つかの他の薬剤的に許容できるカルボ
ン酸誘導の形態であってもよい。ＳＤＡの他に、がんを治療または予防するＥＰ
ＡおよびＤＨＡの前駆体として本発明に使用してもよいＡＬＡの他の代謝物とし
ては、エイコサテトラエン酸（２０：４ｎ−３）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ
ｎ−３；２２：５ｎ−３）およびその混合物が挙げられる。

【００２０】 α−リノレン酸代謝物は、医薬品、栄養剤または食品物の形態で投与し得る。
医薬製剤を調製する通常の当業者は、知られた賦形剤（例えば、生理食塩水、グ
ルコース、澱粉など）を用いて１種または複数のα−リノレン酸代謝物を有する
薬剤組成物を容易に製剤化できる。薬剤組成物は、投与の望ましい方法に従って
製剤化し得る。例えば、１種または複数のα−リノレン酸代謝物を含有する医薬
製剤は、経口投与、経腸投与、非経口投与または直腸投与用に調製し得る。

【００２１】同様に、栄養剤（例えば、栄養補助剤）を調製する通常の当業者は、α−リノ
レン酸代謝物を有する栄養組成物を容易に製剤化できる。また、食品または食品
成分製剤を調製する通常の当業者は、α−リノレン酸代謝物を有する食品組成物
または食品成分組成物を容易に製剤化できる。

【００２２】この用法用量は、投与される特定のα−リノレン酸代謝物、および所望の治療
効果または予防効果に依存する。典型的には、投与されるα−リノレン酸代謝物
量は、約１ｍｇ／ｋｇ／日から約３００ｍｇ／ｋｇ／日の間である。好ましくは
、投与される代謝物量は、約１０ｍｇ／ｋｇ／日から約１５０ｍｇ／ｋｇ／日の
間である。望ましい投与法としては、最も有効なものとして、一般に１日１〜５
回、望ましくは、１日１〜３回投与できる。

【００２３】好ましくは、哺乳類に投与されるα−リノレン酸代謝物は、ＳＤＡまたはＳＤ
Ａ組成物および少なくとも１種の他のＡＬＡ代謝物である。

【００２４】以下の例は、本発明のある好ましい実施形態を例示するために意図され、本発
明の限定を意味するものではない。以下の実施例の全てに用いられるｎ−３ＰＵ
ＦＡ類は、細胞培養に用いられる場合は、遊離酸体（１００％純粋）であり、イ
ンビボで投与される場合は、エチルエステル体（＞８５％純粋）であった。ステ
アリドン酸エチルエステル（ＳＤＡ−ＥＥ）、エイコサペンタエン酸エチルエス
テル（ＥＰＡ−ＥＥ）およびドコサヘキサエン酸エチルエステル（ＤＨＡ−ＥＥ
）は、魚油由来であり、ＫＤＰｈａｒｍａ（ドイツ国ベックスバッハ）から入
手した。さらに、ステアリドン酸エチルエステルをＣａｌｌａｎｉｓｈ社（英国
スコットランド）によりさらに精製すると、約６０％から８５％までにＳＤＡ−
ＥＥ含量を増加させ、また、約８％から０．２％までＥＰＡ−ＥＥ含量を減少さ
せた。植物油由来のα−リノレン酸エチルエステル（ＡＬＡ−ＥＥ）およびγ−
リノレン酸エチルエステル（ＧＬＡ−ＥＥ）は、少なくとも９５％純粋であり、
Ｃａｌｌａｎｉｓｈ社から購入した。脂肪酸エチルエステルの齧歯類への投与を
カロリー当量により相対成長学的に計って、１日当たり消費される脂肪酸のヒト
等価量（＝ｇ／日ヒト等価用量の）を表した。

【００２５】実施例１ＵＳ１７食餌齧歯類における結腸腫瘍形成および促進に及ぼすＰＵＦＡ類の効果を試験する
ために、食餌（「ＵＳ１７食餌」）は、ヒト西欧食に似せてデザインした。ヒト
西欧食には、高濃度の飽和脂肪酸とリノール酸を含み、両方ともがん形成に関連
してきた。ＵＳ１７食餌成分を、下記の表１〜表６に示す。

【００２６】

【表２】

【００２７】

【表３】

【００２８】

【表４】

【００２９】

【表５】

【００３０】

【表６】

【００３１】

【表７】脂肪酸試験薬はオレイン酸（＝オレイン酸カセット）に替え、用量は相対成長
学的に測定した場合に、ヒトによって容易に消費される範囲とした（すなわち、
０．１〜１０ｇ／日）。

【００３２】実施例２ＨｅｐＧ２細胞による^１４Ｃ−ＡＬＡ、^１４Ｃ−ＳＤＡおよび^１４Ｃ−ＥＰＡ
の取込みＨｅｐＧ２細胞によるステアリドン酸の取込みを、α−リノレン酸およびエイ
コサペンタエン酸の取込みと比較した。

【００３３】ＨｅｐＧ２細胞を含む培養培地に、脂肪酸の無いＢＳＡに混成化された２０μ
Ｍの^１４Ｃ−ＡＬＡ、^１４Ｃ−ＳＤＡまたは^１４Ｃ−ＥＰＡを加えた。ＨｅｐＧ
２細胞により取込まれた^１４Ｃ−ＡＬＡ、^１４Ｃ−ＳＤＡまたは^１４Ｃ−ＥＰＡ
の量を、脂肪酸添加６時間後、２４時間後、４８時間後に測定した。シンチレー
ションカウンタを用いて、ＨｅｐＧ２細胞中の放射活性の全量および培地におけ
る残量を測定した。

【００３４】これらの測定結果を図１に示す。図１に見られるように、^１４Ｃ−ＡＬＡ、^１ ^４Ｃ−ＳＤＡおよび^１４Ｃ−ＥＰＡは、ＨｅｐＧ２細胞により等しく取込まれた
。各放射性標識脂肪酸のおよそ９５％が、培養の最初の６時間以内に細胞により
取込まれた。

【００３５】実施例３ＨｅｐＧ２細胞におけるステアリドン酸から長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸への代
謝ＨｅｐＧ２細胞におけるステアリドン酸から長鎖ｎ−３ＰＵＦＡ類（エイコサ
テトラエン酸（２０：４ｎ−３）、エイコサペンタエン酸（２０：５ｎ−３）、
ドコサペンタエン酸（２２：５ｎ−３）およびドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ
−３））への代謝をα−リノレン酸の代謝と比較した。

【００３６】実施例２に記載されるように、ＨｅｐＧ２細胞に^１４Ｃ−ＡＬＡまたは^１４Ｃ
−ＳＤＡを取込ませた。ＨｅｐＧ２細胞に存在する^１４Ｃ−ＥＰＡ、^１４Ｃ−Ｄ
ＰＡおよび^１４Ｃ−ＤＨＡを、脂肪酸添加６時間後、２４時間後、４８時間後に
銀染色薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）により測定した。ＴＬＣプレート上のバ
ンドとして存在する各脂肪酸量は、パッカード（コネチカット州メリデン）によ
り供給されたインスタントイメージャー（ＩｎｓｔａｎｔＩｍａｇｅｒ）を用
いて電子オートラジオグラフィにより定量化した。

【００３７】これらの測定結果を図２および図３に示す。図２は、ＡＬＡの長鎖ｎ−３ＰＵ
ＦＡ類への代謝を示す。図３は、ＳＤＡから長鎖ｎ−３ＰＵＦＡ類への代謝を示
す。図２と図３の比較により、ＨｅｐＧ２細胞中のＳＤＡから長鎖ｎ−３ＰＵＦ
Ａ類への代謝はＡＬＡの代謝よりも速いことが示される。^１４Ｃ−ＳＤＡのほぼ
９５％が、^１４Ｃ−脂肪酸最終生成物（すなわち、ＥＰＡまたはＤＨＡ）または ^１４Ｃ脂肪酸中間体（すなわち、２０：４ｎ−３、２２：５ｎ−３および２
４：５ｎ−３）に代謝された。^１４Ｃ−ＳＤＡは、^１４Ｃ−ＡＬＡよりも効率
的に^１４Ｃ−ＥＰＡに代謝された（５５％対２４％）。

【００３８】実施例４ＨｅｐＧ２細胞におけるステアリドン酸からＥＰＡおよびＤＨＡへの代謝ＨｅｐＧ２細胞におけるステアリドン酸からエイコサペンタエン酸（２０：５
ｎ−３）およびドコサヘキサエン酸（２２：６ｎ−３）への代謝を、α−リ
ノレン酸の代謝と比較した。

【００３９】実施例２に記載されるように、ＨｅｐＧ２細胞に^１４Ｃ−ＡＬＡ、^１４Ｃ−Ｓ
ＤＡまたは^１４Ｃ−ＥＰＡを取込ませた。実施例３に記載されたように、Ｈｅｐ
Ｇ２細胞に存在する^１４Ｃ−ＥＰＡおよび^１４Ｃ−ＤＨＡを、脂肪酸添加６時間
後、２４時間後、４８時間後に銀染色薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）により測
定した。実施例３に記載されたように、ＴＬＣプレート上のバンドとして存在す
る^１４Ｃ−ＥＰＡ量および^１４Ｃ−ＤＨＡ量は、インスタントイマージャを用い
て電子オートラジオグラフィにより定量化した。

【００４０】これらの測定結果を図４および図５に示す。図４は、放射性標識ＡＬＡおよび
ＳＤＡのＥＰＡへの代謝を示す。放射性標識ＥＰＡは、経時的にＨｅｐＧ２細胞
におけるその維持を評価するための対照として含ませた。図５は、放射性標識Ａ
ＬＡ、ＳＤＡおよびＥＰＡのＤＨＡへの代謝を示す。図４は、ＳＤＡがＡＬＡよ
りも効率的にＥＰＡに代謝されたことを示す（５５％対２４％）。ＳＤＡから誘
導されたＥＰＡ量は、実際ＥＰＡ自身との培養後に残存したＥＰＡ量と極めて類
似した（５５％対６３％）。図５は、ＳＤＡがＡＬＡよりも効率的にＤＨＡに代
謝されたことを示す（６％対３％）。比較すると、ＥＰＡの約１１％がＤＨＡに
代謝された。全体的に、これらの結果は、ＳＤＡが、ＡＬＡの約２倍の率でＥＰ
Ａ、さらにＤＨＡに代謝されることを示した。

【００４１】実施例５マウスにおけるステアリドン酸の代謝（放射性標識脂肪酸を用いた経時的分析
）マウス肝臓におけるステアリドン酸から長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸（すなわち
、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡｎ−３）お
よびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ））への代謝を、α−リノレン酸、エイコサペ
ンタエン酸およびドコサヘキサエン酸の代謝と比較した。用いられた方法は、^１ ^４Ｃ−標識脂肪酸を用いた経時的試験であった。

【００４２】定常状態の脂肪酸代謝を達成するために、マウスを１ヵ月間ＵＳ１７食餌で給
餌した。定常状態の脂肪酸代謝を達成後、マウスに１０μＣｉの^１４Ｃ−ＡＬＡ
、^１４Ｃ−ＳＤＡ、^１４Ｃ−ＥＰＡまたは^１４Ｃ−ＤＨＡを含む注射剤を腹腔内
投与した。注射３時間後、８時間後または２４時間後にマウスを殺処理し、実施
例３に記載されたように、^１４Ｃ−ＥＰＡ、^１４Ｃ−ＤＰＡｎ−３および^１４Ｃ
−ＤＨＡの全量を、銀染色薄層クロマトグラフィー、次いで直接電子オートラジ
オグラフィーにより測定した。これらの実験結果を図６に示す。図６は、２４時
間目におけるＰＵＦＡ類の代謝順序はＤＨＡ＝ＥＰＡ＞ＳＤＡ＞ＡＬＡであるこ
とを示す。代謝率におけるこの相違は、ＥＰＡ＋ＤＰＡ＋ＤＨＡへの変換を肝組
織から回収した^１４Ｃカウントに調整された場合特に拡大した。ＡＬＡでは、回
収は著しく低かったが、これは、ベータ酸化を受けるＡＬＡの性質による可能性
が大きい。この調整を図７に示すが、これはさらに、ＳＤＡがインビボでＡＬＡ
よりも効果的に長鎖ｎ−３ＰＵＦＡ類に代謝されることをさらに示している。

【００４３】実施例６マウスにおけるステアリドン酸の代謝（冷脂肪酸エチルエステル類を用いたエ
ンドポイント分析）ラットおよびマウスにおけるｎ−６ＰＵＧＡ類およびｎ−３ＰＵＦＡ類の代謝
はヒトの代謝と同様である：Ｌａｎｄｓ，Ｗ．Ｅ．Ｍ．，Ｍｏｒｒｉｓ，Ａ．，
Ｌｉｂｅｌｔ，Ｂ．，Ｌｉｐｉｄｓ，Ｖｏｌ．２５（９），ｐｐ．５０５−５１
６（１９９０）。このように、ラットとマウスでの研究から得られた脂肪酸代謝
の結果は、ヒトにおいても同様であると予測される。

【００４４】マウス肝臓におけるステアリドン酸の長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸（すなわち、
エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡｎ−３）およ
びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ））への代謝を、α−リノレン酸、エイコサペン
タエン酸およびドコサヘキサエン酸の代謝と比較した。用いられた方法は、非放
射性、用量応答、代謝エンドポイント試験であった。

【００４５】マウスに、１、３または１０ｇ／日の脂肪酸を含むヒトの西欧食と等価量のα
−リノレン酸エチルエステル（ＡＬＡ−ＥＥ）、ステアリドン酸エチルエステル
（ＳＤＡ−ＥＥ）、エイコサペンタエン酸エチルエステル（ＥＰＡ−ＥＥ）また
はドコサヘキサエン酸エチルエステル（ＤＨＡ−ＥＥ）を含有するＵＳ１７食餌
（ヒト等価用量ｇ／日）で飼育した。ＵＳ１７食餌における１７％の脂肪（３７
エン％）含量を維持するために、添加した脂肪酸エステルの量に等しい量のオレ
イン酸（１８：１ｎ−９）をオレイン酸カセットとしてＵＳ１７食餌から除去
した。文献の報告ではオレイン酸は、炎症およびがんに関して中立であることが
示されているため、置換脂肪酸としてオレイン酸が選ばれた。

【００４６】各々のＵＳ１７に基づく食餌を続けて１カ月後、マウスを殺処理し、マウスの
肝臓各々の脂肪酸組成をガスクロマトグラフィにより分析した。これらの分析結
果を図８に示す。

【００４７】図８は、長鎖ｎ−３ＰＵＦＡ類（すなわち、ＥＰＡ＋ＤＰＡｎ−３＋ＤＨＡ）
の総計は、以下の順序で用量依存的に肝臓組織に増加したことを示している：Ｄ
ＨＡ−ＥＥ＞ＥＰＡ−ＥＥ＞ＳＤＡ−ＥＥ＞ＡＬＡ−ＥＥ。これらの結果は、Ｓ
ＤＡがＡＬＡよりもより良く長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸へ代謝されたことを示し
た。図８はまた、食餌のｎ−３ＰＵＦＡ類の各々が肝臓組織において、用量依存
的にアラキドン酸の濃度を減少させたことも示している。アラキドン酸代謝物（
例えば、プロスタグランジン類、ロイコトリエン類およびＨＥＴＥ類（ヒドロキ
シエイコサテトラエン類））は、腫瘍形成に関連しているため、このことは重要
である。「基礎」群は、ＵＳ１７に基づく食餌に切り替える直前に標準の齧歯類
食を給餌されたマウスである。この結果は、長鎖ｎ−３ＰＵＦＡ類またはアラキ
ドン酸の総計濃度は同一であり、ＵＳ１７食餌が標準の齧歯類食に比べて脂肪酸
組成を有意に変化させなかったことを示している。

【００４８】実施例７ラットにおけるステアリドン酸の代謝（冷脂肪酸エチルエステル類を用いたエ
ンドポイント分析）ラットの肝臓におけるステアリドン酸の長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸（すなわち
、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡｎ−３）お
よびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ））への代謝を、α−リノレン酸、エイコサペ
ンタエン酸およびドコサヘキサエン酸の代謝と比較した。用いた方法は、マウス
の代わりにラットを用いた以外は実施例６に記載されたものである。これらの分
析結果を図９に示す。

【００４９】図９は、長鎖ｎ−３ＰＵＦＡ類（すなわち、ＥＰＡ＋ＤＰＡｎ−３およびＤＨ
Ａ）の総計が、以下の順序で用量依存的に肝臓組織に蓄積したことを示している
：ＤＨＡ−ＥＥ＞ＥＰＡ−ＥＥ＞ＳＤＡ−ＥＥ＞ＡＬＡ−ＥＥ。これらの結果は
、ＳＤＡがＡＬＡよりもより良く長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸へ代謝されたことを
示した。図９はまた、食餌のｎ−３ＰＵＦＡ類の各々が肝臓組織において、用量
依存的にアラキドン酸の濃度を減少させたことも示している。ＳＤＡはアラキド
ン酸濃度を、ＡＬＡまたはＥＰＡのいずれかが減少させたよりもより大きく減少
させた。

【００５０】実施例８Ｍｉｎ／＋マウスモデルの腸がんに及ぼすｎ−３およびｎ−６ＰＵＦＡ類の効
果腸がんのＭｉｎ／＋マウスモデルにおいて、選ばれたｎ−３およびｎ−６多不
飽和脂肪酸類の効果を評価した。以下の脂肪酸エチルエステルが腸ポリープ形成
に対するそれらの効果に関して試験された：１）ＡＬＡ−ＥＥ；２）ＳＤＡ−Ｅ
Ｅ；３）ＥＰＡ−ＥＥ；４）ＤＨＡ−ＥＥ；５）ＧＬＡ−ＥＥ（α−リノレン酸
、１８：３ｎ−６）；および６）ＣＬＡ−ＥＥ（共役リノール酸；ｃ９ｔ１１−
１８：２（７７％）＋ｃ９ｃ１１−１８：２（１８％）＋他の異性体（５％））
。

【００５１】これらの脂肪酸エチルエステル類は、１０ｇ／日のヒト等価用量（３重量％）
を供するようにＵＳ１７食餌に添加された。ＮＳＡＩＤのスリンダク（３２０ｐ
ｐｍ）をポジティブコントロールとして供した。ＵＳ１７食餌における１７％の
脂肪（３７エン％）含量を維持するために、添加した脂肪酸エチルエステルの量
に等しい量のオレイン酸（１８：１ｎ−９）をＵＳ１７食餌から除去した。マ
ウスはおよそ週齢５週で受け入れ、受け入れ時に試験食を給餌した。各々の試験
食を続けて７週後マウスを殺処理し、腸ポリープを数え測定した。これらの分析
結果を表６に示す。

【００５２】

【表８】

【００５３】表６に示されるように、分析により大腸および小腸においてＳＤＡはポリープ
の数（４７％）、ポリープの大きさ（１８％）およびポリープ量（数×大きさ）
の減少に効果的であることが示された。ポリープおよび腫瘍という用語は、同意
に用いられているが、専門的に言うと、病巣がポリープである（すなわち、初期
段階の腫瘍または新生物）ことに注意する必要がある。

【００５４】意外にも大腸におけるポリープの形成と発現の阻害におけるＳＤＡの有効性は
、ポジティブコントロールとして一般に用いられているＮＳＡＩＤの一種、スリ
ンダクに匹敵し、ＡＬＡだけでなく、ＥＰＡおよびＤＨＡの有効性よりも大きか
った。ＡＬＡとＥＰＡは僅かに有効であったが、ＤＨＡは大腸において有効性を
示さなかった。意外にも同様に、小腸におけるポリープの形成と発現の阻害にお
けるＳＤＡの有効性はＥＰＡの有効性に匹敵し、ＡＬＡとＤＨＡの有効性よりも
大きかった。このことは、図１０の棒グラフの形にも示されている。ＳＤＡ、Ｅ
ＰＡおよびＤＨＡとは対照的にＧＬＡとＣＬＡは、ポリープ数を増加させるよう
である。しかし、その差は、ＵＳ１７のコントロールに比べれば大きくはない。

【００５５】実施例９小腸のアラキドン酸の組織濃度に及ぼすｎ−３およびｎ−６ＰＵＦＡ類の効果小腸組織のアラキドン酸濃度減少における選ばれたｎ−３およびｎ−６多不飽
和脂肪酸の有効性をＭｉｎ／＋マウスモデルを用いて評価した。以下の脂肪酸エ
チルエステルが腸の脂肪酸組成に及ぼすそれらの効果に関して試験された：１）
ＡＬＡ−ＥＥ；２）ＳＤＡ−ＥＥ；３）ＥＰＡ−ＥＥ；４）ＤＨＡ−ＥＥ；５）
ＧＬＡ−ＥＥ；および６）ＣＬＡ−ＥＥ。脂肪酸組成が小腸で測定されたのは、
大多数のポリープの形成される場所が小腸だからである。

【００５６】実施例８で検討したように、これらの脂肪酸エステルをＵＳ１７食餌に添加し
た。マウスの小腸のリン脂質分画におけるアラキドン酸濃度をガスクロマトグラ
フィーにより測定した。この分析結果を図１１に示す。図１１では同一文字で標
識された棒線（例えば、両方とも「ｂ」と標識されたコントロールとＣＬＡ）は
統計的に差のない値を有している。

【００５７】図１１では、マウス小腸のアラキドン酸濃度の減少においてＳＤＡは、ＡＬＡ
、ＥＰＡおよびＤＨＡよりもより有効性であったことを示している。アラキドン
酸の代謝物（例えば、プロスタグランジン類、ロイコトリエン類およびＨＥＴＥ
類）は、腫瘍形成に関係してきたため、組織中のアラキドン酸濃度の減少が望ま
しい。

【００５８】実施例１０ヌードマウス／ＨＴ−２９がんモデルの原発性腫瘍増殖に及ぼすステアリドン
酸の効果原発性腫瘍増殖の阻害におけるステアリドン酸（１８：４ｎ−３）の有効性
をヌードマウス／ＨＴ−２９がんモデルを用いて評価した。ヌードマウス／ＨＴ
−２９がんモデルについては以前に記載されている：Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ａｌ
ｃｏｃｅｌｏａＲ．，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｆ．，Ｌａｃａｌ，ＪＣ，Ｃａｎ
ｃｅｒＲｅｓ．，５９（１３），３１１２−１８（１９９９）；Ｆａｎｔｉｎ
ｉ，Ｊ．，ＣａｎｃｅｒＪ．，５（２）（１９９２）。

【００５９】ヌード（すなわち、免疫欠損）マウスに３週間ＵＳ１７食を給餌した。ウシ胎
仔血清、ペニシリンおよびストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、ニューヨーク州グ
ランドアイランド）を補足し、３７℃でＣＯ_２雰囲気を維持したＲＰＭＩ−１６
４０培地でＨＴ−２９細胞を培養した。最適細胞濃度に達した後、ＨＴ−２９細
胞を洗浄し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に懸濁させた。細胞懸濁液はＭＡ
ＴＲＩＧＥＬ（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＬａｂｗａｒｅ、マサチュ
ーセッツ州ベッドフォード）中で作製した。この懸濁液はＰＢＳ中２／３容量細
胞、１／３容量ＭＡＴＲＩＧＥＬであった。ＭＡＴＲＩＧＥＬは、内皮細胞によ
り分泌された細胞外基質を供する。この基質は、原発性腫瘍としてのＨＴ−２９
細胞の付着と増殖を助ける脈管形成因子および細胞増殖因子を含有している。

【００６０】ヌードマウスの右後足の足底下部位に１００万個の細胞、３０μｌ容量を注入
した。ＨＴ−２９細胞の注入５日後マウスの半数をオレイン酸の代わりにステア
リドン酸（３重量％＝１０ｇ／日ヒト等価用量）を含有するＵＳ１７食餌に切り
替えた。原発性腫瘍の増殖量をマウス足部容積変化の経時的測定により測定した
。足部容積は、プレスチモメータ（ＵｇｏＢａｓｉｌｅ、イタリア国カメリオ
バレセ）により測定した。これらの測定結果を図１２に示す。

【００６１】図１２では、ステアリドン酸を含有したＵＳ１７食餌を給餌されたマウスは、
ＵＳ１７コントロール食餌を給餌されたマウスに比べて原発性腫瘍増殖の減少を
示したことが見られる。３５日後、ＳＤＡを含有するＵＳ１７食餌を給餌された
マウスは、ＵＳ１７食餌を給餌されたマウスよりも原発性腫瘍増殖が３３％少な
いことが示された。

【００６２】本発明の他の変形形態および修正形態は当業者に明らかとなろう。本発明は請
求項に示されたものを除いては限定されない。

【図面の簡単な説明】

【図１】放射性標識ＨｅｐＧ２細胞におけるＡＬＡ、ＳＤＡおよびＥＰＡの取込み率を
示す。

【図２】ＨｅｐＧ２細胞中での、長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸代謝物への放射性標識ＡＬ
Ａの代謝率を示す。

【図３】ＨｅｐＧ２細胞中での、長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸代謝物への放射性標識ＳＤ
Ａの代謝率を示す。

【図４】ＨｅｐＧ２細胞中での、ＥＰＡへの放射性標識ＡＬＡおよびＳＤＡの代謝率を
示す。

【図５】ＨｅｐＧ２細胞中での、ＤＨＡへの放射性標識ＡＬＡ、ＳＤＡおよびＥＰＡの
代謝率を示す。

【図６】マウス肝臓中での、放射性標識ＡＬＡ、ＳＤＡおよびＥＰＡの長鎖ｎ−３多不
飽和脂肪酸代謝物への変換を示す。

【図７】肝組織から放射性標識脂肪酸の回収に関して修正された、放射性標識ＡＬＡ、
ＳＤＡおよびＥＰＡの長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸代謝物への変換を示す。

【図８】エチルエステル体のＡＬＡ、ＳＤＡ、ＥＰＡまたはＤＨＡを増量したＵＳ１７
食餌で飼育されたマウス肝臓中に蓄積された長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸の全量を
示す。

【図９】エチルエステル体のＡＬＡ、ＳＤＡ、ＥＰＡまたはＤＨＡを増量したＵＳ１７
食餌で飼育されたラット肝臓中に蓄積された長鎖ｎ−３多不飽和脂肪酸の全量を
示す。

【図１０】腸がんのＭｉｎ／＋マウスモデルにおける腸管ポリープ数およびサイズに対す
るエチルエステル体として食餌されたＡＬＡ、ＳＤＡ、ＥＰＡまたはＤＨＡの作
用を示す。

【図１１】マウス小腸のリン脂質（ＰＬ）分画中のアラキドン酸含量に対するエチルエス
テル体として給餌されたＡＬＡ、ＳＤＡ、ＥＰＡまたはＤＨＡの作用を示す。

【図１２】ヌードマウス／ＨＴ−２９がんモデルにおける原発性腫瘍増殖に対するエチル
エステル体として給餌されたＳＤＡの作用を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 35/04 Ａ６１Ｐ 35/04 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ハマート，スーザンアメリカ合衆国、ミズーリ・63074、セント・アン、セント・マーク・レイン・3447 (72)発明者オルソン，リーザ・エムアメリカ合衆国、ミズーリ・63117、リツチモンド・ハイツ、ラベータ・アベニユー・7340 (72)発明者リンドマン，ジユリーアメリカ合衆国、カリフオルニア・94530、エル・セリート、ノーベル・ストリート・ 1236 Ｆターム(参考） 4B018 MD10 MD13 MD14 ME08 4C206 AA01 AA02 DA05 DB06 DB48 GA03 MA01 MA04 ZB26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】哺乳類のがんを治療または予防する方法であって、ステアリ
ドン酸（１８：４ｎ−３）、エイコサテトラエン酸（２０：４ｎ−３）、ド
コサペンタエン酸（２２：５ｎ−３）およびその混合物から成る群から選ばれ
るα−リノレン酸代謝物のがん阻害量を、それを必要とする哺乳類に投与するこ
とを含む方法。
【請求項２】前記がんが、結腸がん、乳がん、前立腺がんまたは肺がんで
ある請求項１に記載の方法。
【請求項３】前記代謝物が、ステアリドン酸（１８：４ｎ−３）を含む
請求項１に記載の方法。
【請求項４】前記代謝物が、本質的にステアリドン酸（１８：４ｎ−３
）から成る請求項１に記載の方法。
【請求項５】前記代謝物が、脂質、カルボン酸塩、エステル、トリグリセ
リド、アミド、または他の薬剤的に許容できるカルボン酸誘導体の形態である請
求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】前記代謝物が、トリグリセリドの形態である請求項１から４
のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】前記代謝物が、エステルの形態である請求項１から４のいず
れか一項に記載の方法。
【請求項８】前記代謝物が、約１ｍｇ／ｋｇ／日から約３００ｍｇ／ｋｇ
／日までの用量で投与される請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】前記代謝物が、約１ｍｇ／ｋｇ／日から約３００ｍｇ／ｋｇ
／日までの用量で投与される請求項５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】前記代謝物が、約１ｍｇ／ｋｇ／日から約３００ｍｇ／ｋ
ｇ／日までの用量で投与される請求項６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】前記代謝物が、約１０ｍｇ／ｋｇ／日から約１５０ｍｇ／
ｋｇ／日までの用量で投与される請求項５に記載の方法。
【請求項１２】前記代謝物が、約１０ｍｇ／ｋｇ／日から約１５０ｍｇ／
ｋｇ／日までの用量で投与される請求項６に記載の方法。
【請求項１３】前記代謝物が、約１０ｍｇ／ｋｇ／日から約１５０ｍｇ／
ｋｇ／日までの用量で投与される請求項７に記載の方法。
【請求項１４】前記代謝物が、約１０ｍｇ／ｋｇ／日から約１５０ｍｇ／
ｋｇ／日までの用量で投与される請求項８に記載の方法。
【請求項１５】前記代謝物が、医薬製剤、栄養剤、または食品製剤で投与
される請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】前記代謝物が、食品製剤で投与される請求項１５に記載の
方法。