JP2003503591A - 標識およびプローブを保持するデンドリマーを用いた検出 - Google Patents

標識およびプローブを保持するデンドリマーを用いた検出

Info

Publication number
JP2003503591A
JP2003503591A JP2001508057A JP2001508057A JP2003503591A JP 2003503591 A JP2003503591 A JP 2003503591A JP 2001508057 A JP2001508057 A JP 2001508057A JP 2001508057 A JP2001508057 A JP 2001508057A JP 2003503591 A JP2003503591 A JP 2003503591A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
dendrimer
compound
dendritic core
probe
labeling
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2001508057A
Other languages
English (en)
Inventor
ローゼ，ジェスパー
Original Assignee
ダコ エー エス
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ダコ エー エス filed Critical ダコ エー エス
Publication of JP2003503591A publication Critical patent/JP2003503591A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G83/00—Macromolecular compounds not provided for in groups C08G2/00 - C08G81/00
    • C08G83/002—Dendritic macromolecules
    • C08G83/003—Dendrimers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
    • C12Q1/682—Signal amplification
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)

Abstract

(57)【要約】 新規デンドリマーならびに新規デンドリマー複合体が開示される。かかるデンドリマーおよび／またはデンドリマー複合体は、試料の種々の成分の検出のために、また検出システムおよびシグナル増強／増幅システムとして使用されうる。デンドリマーおよびデンドリマー複合体はまた、種々の構造部／化合物を標識するために使用され得る。さらに、１つもしくはそれ以上の標識されたデンドリマーまたは１つもしくはそれ以上のデンドリマー複合体を含有する標識キットおよび検出キットもまた、考えられうる用途の１つである。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 発明の分野 本発明はポリマー化学の分野に関し、特に新規デンドリマー（dendrimers）お
よび新規デンドリマー複合体に関する。さらなる一側面として、本発明は、試料
中の様々な成分の検出に上記デンドリマーおよび／またはデンドリマー複合体を
検出系、シグナル増強／増幅系および標識系として利用する分野に関する。さら
に、上記デンドリマー／デンドリマー複合体を含むキットも、本発明の一部であ
る。
【０００２】 発明の背景 タンパク質や核酸などの特定の生物学的マーカーの検出を可能にするプローブ
は広く有用であり、インビトロ診断用途にもインビボ診断用途にも、また生命科
学の研究にも有益なツールである。しかしこれらのマーカーの検出は、全てのマ
ーカーが十分に高い数で存在するわけではないので、困難な場合がある。そのた
め、単一の標識プローブによる低コピー数の標的の検出は、仮にそのプローブが
標的に高度な特異性および忠実性でハイブリダイズできたとしても、不可能にな
るか、または非実用的になる。この重大な制約が、アッセイで検出できるシグナ
ルの増強を目的とする様々な検出系の開発を助長してきた。そのような系の例に
は、標的増幅法（例えばＰＣＲ、ＮＡＳＢＡ、ＳＤＡおよびＬＣＲ）とシグナル
増幅法（例えばチラミド（Ｔｙｒａｍｉｄｅ）シグナル増幅法）の両方が含まれ
る。
【０００３】 様々な種類の検出系を利用できるにもかかわらず、まだ改良の余地はある。そ
の一つとして、デンドリマーは、低コピー数の標的を使用するアッセイで検出可
能なシグナルを改善する手段になりうる。なぜならプローブからのシグナル出力
を増大させる手段として、単一のプローブを複数の検出可能標識で修飾すること
ができるからである。
【０００４】 一般にデンドリマーは、中心から複数の分岐点を介して発散し複数の外縁官能
基で終わっている明確に定義された高分子（macromolecules）である。これらの
外縁官能基を使って、複数の標識（例えばビオチン、発蛍光団（fluorophores）
またはそれらの組み合わせ）を例えばＤＮＡオリゴマーなどの他の分子に連結す
ることができる。もう一つの選択肢として、例えばペプチド、核酸またはペプチ
ドと核酸の組み合わせなどといった複数の高分子を、デンドリマーに連結するこ
ともできる。選択した同じ分子または異なる分子をデンドリマーの外縁に連結で
きることで、シグナル増幅能力が得られる。
【０００５】 例えばデンドリマーは、免疫系への抗原または抗原性ペプチドの提示を容易に
することによって（例えばワクチン接種法における）免疫応答を改善するために
使用されている。具体的には、個々のペプチドよりも抗原性を増強するために小
さいポリリジンコア上に複数のペプチドが合成またはグラフトされる多抗原性ペ
プチド（ＭＡＰ）および抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、これに関連する系である。
【０００６】 デンドリマー形成に応用される高分子には、通例、線状高分子（例えばデキス
トラン）、分岐高分子（例えば加水分解デンプン）、環状高分子（例えばシクロ
デキストリン）および球状高分子（例えばナノ粒子）がある。これらは特に、抗
体などの複数のプローブ、ＨＲＰなどのシグナル生成タンパク質、またはそれら
の組み合わせを呈示するために使用されてきた。
【０００７】 既知のデンドリマーは広く使用されているにもかかわらず、いくつかの欠点と
制約を持っている。例えば、既知デンドリマーの大半は極めて緊密な構造体であ
り、デンドリマーの外層（外縁）にかなりの立体障害または立体的込み合いを引
き起こしている。ＭＡＰの場合は分岐点間に３〜６結合しかないので、これがと
りわけ顕著である。周知のＳｔａｒＢｕｒｓｔTMデンドリマーは分岐点間に７結
合しか含まないため、デンドリマーの外縁には結合に利用できる自由な空間が、
ビオチンなどの小分子（標識）の場合でさえ、ほとんどないか全くないという状
況にすぐに達してしまう（参考文献１）。利用できるスペースが外縁にほとんど
ないこのような状態では、ＤＮＡオリゴマーなどの大きい分子はデンドリマーに
結合することがとりわけ困難であり、また結合に成功したとしても、そのオリゴ
マーへのハイブリダイゼーションの速度は、高分子複合体の込み合った外縁によ
る制約を受ける。
【０００８】 例えばＤＮＡオリゴマーのデンドリマーが製造されている。しかしこれらは極
めて大きくかさ高い分子である。分岐点間の間隔は数百結合になりうるが、その
構造を一つにまとめる二重らせんは、縦方向の広がりに対して非常にかさ高い。
また、大きくてかさ高い分子は、細胞取り込みおよび移動性の低下を示す場合が
あるので、一定の用途では扱いが困難な場合がある。
【０００９】 従来のデンドリマーのさらにもう一つの制約は、不純物をうまく除去すべき場
合には、それらのデンドリマーを通例、固相化学によって製造しなければならな
いことである。特に、ＭＡＰはほとんど常に固相法によって製造されるので、こ
の技術は小さい線状ペプチドに限定される。というのも、大きい生体分子は苛酷
な切断／脱保護条件とは一般に相容れないからである。
【００１０】 従来のデンドリマーのさらにもう一つの欠点は、デンドリマーの大半がホモ官
能性であることである。それらはホモ官能性であるため、デンドリマーに明確に
定義された形で異なるリガンドを結合することが困難であるか、不可能な場合が
ある。
【００１１】 従来のデンドリマーでは、その込み合いゆえに、特定種類のシグナル増幅を達
成することが困難な場合がある。例えば、込み合った外縁を持つデンドリマーに
複数の（同一のまたは相異なる）発蛍光団を連結する場合、誘起された衝突によ
って、または消光効率が発蛍光団間距離の６乗に比例するエネルギーまたは電子
の量子移動によって、おそらく発蛍光団は互いに消光しあうだろう。この消光は
シグナル出力を制限する。というのは、これら多数の発蛍光団は個々の発蛍光団
のそれぞれから生じうるシグナルの和よりもかなり少ないシグナルを生成するか
らであり、ゆえに、複数の発蛍光団を１つのデンドリマーに連結することによっ
て１つのシグナル種（例えばＤＮＡプローブ）からのシグナル出力の実質的な改
善を達成するという思想の妨げになる。
【００１２】 バックグラウンド染色は検出に関するもう一つのよく知られた課題である。多
層視覚化系の技術分野では、層の数および化学的多様性に伴い潜在的なバックグ
ラウンド問題が増大する。ブロッキングおよびストリンジェントな洗浄条件は各
層ごとに最適化しなければならないが、先行する層および後続の層にも適合しな
ければならず、よって多層系の構築を制約する。
【００１３】 発明の概要 本発明は上記の欠点および制約を持たない新規デンドリマーおよびデンドリマ
ー複合体を提供する。本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体では、様
々な化合物が結合される末端外縁官能基間に間隔があいている。したがって本発
明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体は、既知のデンドリマーと比較して
、緊密度または込み合い度が（特に外縁部で）低い構造を持っている。実際、本
発明のデンドリマーはその空間的大きさに比べて低分子量であり、したがってＭ
ＡＰおよびＡＰＣなどの従来のデンドリマーほどにはかさ高くない。さらに本発
明のデンドリマーは液相化学反応によって製造できる。
【００１４】 最後に、そして極めて重要なことに、本発明のデンドリマーは分子構造が明確
に定義されており、しかもヘテロ多官能性である。すなわち本デンドリマー／デ
ンドリマー複合体は、少なくとも２つの異なる置換基／構造部（entities）を持
つことが可能であり、さらにそれらのうちの少なくとも一方を複数ずつ提示する
ことが可能である。その結果、本発明のデンドリマーの外縁には異なる成分の様
々な組み合わせを、高度に明確な方法かつ高度に明確な化学量論で連結すること
ができる。ゆえに、本発明のデンドリマーは特定の用途に合わせて特製すること
ができ、本発明のデンドリマーには他のポリマーコンジュゲートで一般に観察さ
れるロット間変動はないだろう。したがって本発明のデンドリマーおよびデンド
リマー複合体は、例えば検出系およびシグナル増強系などとして、広範な用途に
有用である。
【００１５】 第１の側面として、本発明は、一般式（Ｉ） （構造部（Entity）１）x1−Ａ−（構造部２）x2 （Ｉ） ［式中、Ａは少なくとも１つのＮ原子分岐点を持つ樹状コアであり、前記分岐点
は天然アミノ酸の一部ではなく、Ａは少なくとも１つのエーテル基を含むもので
あり、 構造部１および構造部２はそれぞれ独立してプローブ、１もしくは複数の標識化
合物で置換されたプローブ、標識化合物、または反応性基を持つプローブであり
、 ｘ１およびｘ２は独立して０または１〜１２００の整数である］ の新規デンドリマーおよびその保護型に関する。
【００１６】 もう一つの側面として、本発明は、本明細書に定義する少なくとも１つのデン
ドリマーを含んでなり、当該１つまたはそれ以上のデンドリマーが他の目的化合
物に （例えば末端または内部で天然または非天然アミノ酸に、末端または内部
でペプチド核酸に、末端または内部でＬＮＡに、末端または内部でペプチドに、
末端または内部でタンパク質に、抗体に、抗原に、免疫複合体に、末端または内
部でＲＮＡ配列またはそのアナログに、末端または内部でＤＮＡ配列またはその
アナログに、末端または内部で高分子に、または固体もしくは半固体支持体に）
結合されている新規デンドリマー複合体およびその保護型に関する。
【００１７】 本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体ならびにその保護型には、例
えば核酸配列、抗体、抗原、免疫複合体、タンパク質またはペプチドの検出など
といった、試料中の様々な成分の存在を検出する際に使用することを含む、広範
な用途が考えられる。
【００１８】 さらに本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体は、検出系およびシグ
ナル増幅系として、または検出系およびシグナル増幅系中に使用することができ
る。そのような系は、核酸配列、抗体、抗原、免疫複合体、タンパク質またはペ
プチドの検出を含む試料中の様々な成分の検出に好適に使用できる。
【００１９】 本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体はインビトロおよびインビボ
診断法での応用も可能である。したがって本発明は、なかんずく、上記デンドリ
マーおよびデンドリマー複合体および／またはその保護型を含んでなる検出キッ
トおよび増幅キットに関する。
【００２０】 本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体ならびにその保護型のもう一
つの考える用途は、様々な化合物の標識に使用することである。したがって、本
発明はさらに、上記デンドリマーおよびデンドリマー複合体ならびにその保護型
の標識反応における使用、ならびに上記デンドリマーおよび／またはデンドリマ
ー複合体および／またはその保護型を含んでなる標識キットに関する。
【００２１】 以下に本発明を詳細に説明する。
【００２２】 詳細な説明 第１の側面として、本発明は、一般式（Ｉ） （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2 （Ｉ） ［式中、Ａは少なくとも１つのＮ原子分岐点を持つ樹状コアであり、前記分岐点
は天然アミノ酸の一部ではなく、Ａは少なくとも１つのエーテル基を含むもので
あり、 構造部１および構造部２はそれぞれ独立してプローブ、１つまたはそれ以上の標
識化合物で置換されたプローブ、標識化合物、または反応性基を持つプローブで
あり、 ｘ１およびｘ２は独立して０または１〜１２００の整数である］ を有するデンドリマーおよびその保護型に関する。
【００２３】 ＷＯ９８／３２４６９（参考文献２）から、多数のアミン含有酸を含む線状、
分岐または樹状ポリマー主鎖を含んでなる化合物が知られている。特に前記ポリ
マー主鎖は天然または非天然アミノ酸残基から構成されている。前記化合物には
少なくとも１つのレポーター成分（moiety）が連結している。前記ポリマー（デ
ンドリマー）は非対称でも対称でもよい。前記デンドリマーは治療薬および診断
薬として有用である。本発明のデンドリマーは、その樹状コア（dendritic core
）が天然アミノ酸の一部ではない少なくとも１つのＮ原子分岐点を持つ点、また
さらにその樹状コアが少なくとも１つのエーテル基を含む点で、ＷＯ９８／３２
４６９に開示されているデンドリマーとは異なる。
【００２４】 ＥＰ２７１１８０（参考文献３）およびＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ
．９，８１３−８２５（１９９８）（参考文献４）から、いわゆるＳｔａｒＢｕ
ｒｓｔTMデンドリマーが知られている。かかるデンドリマーは放射対称性を持つ
規則的な樹状分岐を特徴とする分子構造を示す密な構造体である。ＳｔａｒｔＢ
ｕｒｓｔTMデンドリマーは様々な物質を運搬するのに適している。本発明のデン
ドリマーはその樹状コアが少なくとも１つのエーテル基を含む点、またさらに本
発明のデンドリマーがヘテロ多官能性であるのに対し、従来のＳｔａｒＢｕｒｓ
ｔTMデンドリマーの外縁基は全て同一である点で、ＥＰ２７１１８０（参考文献
３）およびＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．（参考文献４）に開示されて
いるデンドリマーとは異なる。
【００２５】 ＷＯ９７／０７３９８（参考文献５）から、デンドリマー／ポリペプチド複合
体が知られている。この複合体は複数の末端を持つデンドリマーからなり、その
末端には第１および第２ポリペプチドが結合していて、形成された複合体は第１
および第２の所定の生物学的活性を示す。第１および第２ポリペプチドが互いに
結合しているデンドリマー／ポリペプチド複合体も含まれる。ＷＯ９７／０７３
９８（参考文献５）に従って使用されるデンドリマーは詳細には定義されていな
い。というのも、この文書で説明されている発明は、デンドリマーそのものには
ないようだからである。しかし、その説明からは、ＳｔａｒＢｕｒｓｔTMデンド
リマーが適しているようである。上述のように本発明のデンドリマーはその樹状
コアが少なくとも１つのエーテル基を含む点、またさらに本発明のデンドリマー
がヘテロ多官能性であるのに対し、従来のＳｔａｒＢｕｒｓｔTMデンドリマーの
外縁基は全て同一である点で、ＳｔａｒＢｕｒｓｔTMデンドリマーとは異なる。
【００２６】 ＳｔａｒＢｕｒｓｔTMデンドリマーは「星形（starburst ）の密な充填」を示
す密な構造体であり、デンドリマーの表面は、このデンドリマー表面が密集状態
になってデンドリマー内部の空隙を取り囲み、その密集がデンドリマー内部への
またはデンドリマー外への物質の拡散を制御するために使用できる分子レベルの
障壁となるように、十分な末端成分を持っている（ＥＰ２７１１８０（参考文献
３）の第６頁第１１〜１９行参照）。このいわゆる「星形トポロジー」は、開始
コアの周りに有機反復単位を同心的樹状層形に集合させることによって達成され
る（ＥＰ２７１１８０（参考文献３）の第２頁第２０〜３１行参照）。このトポ
ロジーは、比較的短いアミノ含有鎖単位（特にＰＥＩおよびＰＡＭＡＭ）の連続
層を形成させることによって達成される（ＥＰ２７１１８０（参考文献３）の３
１および実施例参照）。上述のように、これは極めて密な構造体をもたらし、運
搬すべき物質はこの星形コンジュゲートの使用が容易なように、コネクターおよ
び／またはスペーサーを持つ必要があるかもしれない（ＥＰ２７１１８０（参考
文献３）の第１３頁第２９行〜第１４頁第１行参照）。
【００２７】 ＷＯ９８／３２４６９（参考文献２）には、１つまたはそれ以上のレポーター
基を保持するかまたはそれらレポーター基に結合しているアミノ酸のコポリマー
が診断用途および治療用途にとりわけ適しているという知見に、その発明がある
と述べられている（第４頁第３段落参照）。ＷＯ９８／３２４６９（参考文献２
）の第６頁第２段落に述べられているように、そのデンドリマーは多数の天然ま
たは非天然アミノ酸からなる。ＷＯ９８／３２４６９（参考文献２）の第７頁第
３段落から、アミノ酸の使用により、デンドリマーは生分解性になることが推論
できる。このデンドリマーは他の成分も含みうる（ＷＯ９８／３２４６９（参考
文献２）の第６頁第３段落参照）。前記他の成分は比較的短いアミノ含有鎖であ
る。アミノ酸および／または他の成分の連続層の使用は、極めて密な構造を持つ
デンドリマーをもたらす。
【００２８】 本明細書の序論部分で述べたように、このような密なデンドリマー構造には、
なかんずくデンドリマーの外層における重大な立体障害および立体的込み合いな
らびにデンドリマーの外層に結合した発蛍光団の消光など、いくつかの欠点があ
る。これに対し、本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体はこれらの欠
点を持たない。したがって本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体の利
点は非常に多い。本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体は極めて大き
い構造部でも結合できるほど十分に緩やかな構造を持っている。さらに、最も近
い隣接アンカー基同士が十分に離れているので、反応性の低下、結合した構造部
の凝集、蛍光消光および他の望ましくない立体的込み合いの影響が回避されまた
は最小限に抑えられる。さらに、本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合
体のもう１つの顕著な利点は、それらが親水性基を含有するために一般に良好な
溶解性を持っていることである。また本デンドリマーは例えばプローブまたは標
識化合物などといった所望の構造部で容易に誘導体化することができ、それによ
って複数の部位が持つ全潜在能力を完全に活用して、明確に定義されたコンジュ
ゲートを製造することができる。さらに、結合させる構造部の化学修飾を回避し
、アミン類、カルボン酸類、チオール類、アルコール類などといった自然に存在
する官能基をデンドリマーと自発的に反応させることができるように、デンドリ
マーを前もって活性化することもできる。特に本デンドリマーはヘテロ官能性で
あることができる。このようにして、一種類の構造部（例えばプローブまたは標
識化合物）をデンドリマー上の１またはいくつかの基に取り付ける一方で、オル
トゴナル（orthogonal）な化学反応を用いて他の構造部（例えば他のプローブま
たは標識化合物）を他の基に取り付けることができ、正確な化学量論は異なる構
造部が同じ部位を巡って競争することによるのではなく、異なる化学反応によっ
て制御される。例えば分岐点間に１７個の結合を持ち、外縁では最も近い隣接ア
ンカー基間に４０個の結合があるデンドリマーを構築することができる。デンド
リマーは、例えばモノＢｏｃ−アミノポリ無水物またはポリＢｏｃ−アミノモノ
無水物などとして誘導体化することができる。本デンドリマーの利点は、外縁の
イモ二酢酸（imodiacetic acid）無水物成分を使って容易に誘導体化できること
である。この成分は極めて迅速かつ選択的に１級脂肪族アミン類と反応して、水
性条件下に無保護の核酸またはそのアナログ（ペプチド核酸など）との水中での
結合を可能にする。逆にＢｏｃ基を除去して、生成した遊離のアミノ基を活性カ
ルボン酸類と直接反応させるか、チオール反応性であるマレイミド類または２−
ハロアセチル類が得られるように反応させるか、またはやはりアミノ反応性であ
る無水物が得られるように反応させることもできる。複数のベンジルエステル基
とＢｏｃ−アミノ基との間に得られる完全な直交性は有益である。このようにし
てヘテロ官能性デンドリマーを容易に製造することができる。
【００２９】 本発明のデンドリマーでは、上記の定義に沿って、樹状コアＡが単一の中心か
ら複数世代の連続層として広がり、各層は１またはそれ以上の分岐点を持つ。
【００３０】 特に樹状コアＡは、Ｃ1-100 アルキル基、Ｃ2-100 アルケニル基、Ｃ2-100 ア
ルキニル基（前記アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は任意に１また
はそれ以上の官能基および／または１もしくはそれ以上のヘテロ原子を含む）、
天然または非天然アミノ酸、ペプチド核酸成分、ＬＮＡ、ペプチド、タンパク質
、抗体、抗原、免疫複合体、ＤＮＡ配列またはそのアナログ、ＲＮＡ配列または
そのアナログ、高分子および固形または半固形支持体の１つまたはそれ以上から
なる。ただし、上記の但書き（すなわち樹状コアは少なくとも１つのＮ原子分岐
点を持ち、前記分岐点は天然アミノ酸の一部ではなく、またＡは少なくとも１つ
のエーテル基を含むこと）に留意する。各層は上述した残基の１つまたはそれ以
上を含んでよいと理解すべきである。
【００３１】 アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基としては、特にＣ5-80、Ｃ5-70 、Ｃ5-60、Ｃ10-50 、Ｃ10-25 、Ｃ15-25 およびＣ10-20 炭素原子を持ち、さら
に任意に１またはそれ以上の官能基および／または１またはそれ以上のヘテロ原
子を含有するようなものを挙げることができる。アルキル基、アルケニル基およ
びアルキニル基は直鎖基でも分枝鎖基でもよい。
【００３２】 「官能基」という用語は、例えばエステル基、エーテル基、チオール基、カル
ボニル基、ヒドロキシル基、アミド基、カルボキシル基、およびイミド基などの
基ならびにそれらの組み合わせを含むものとする。
【００３３】 「ヘテロ原子」という用語は、なかんずくＯ、Ｎ、ＳおよびＰを包含するもの
とする。
【００３４】 本発明に関して、「プローブ」という用語は、マーカーおよび／またはその複
合体を特異的に認識してそれらに結合する化学的または生物学的起源の化合物を
意味するものとする。いくつかのプローブが考えられうる。所望のマーカーまた
は核酸配列を標的とするプローブを選択する方法は、当業者に知られている。適
切なプローブ配列には、なかんずく、細菌、ウイルス、真菌類、アレルゲン、染
色体およびマーカーに由来するものなどがある。本発明では数個のプローブを互
いに連結してもよい。したがって、「プローブ」という表現はプローブの組み合
わせを包含し、当該プローブは末端でまたは内部で互いに結合されていてもよい
ものとする。
【００３５】 「ＲＮＡ」および「ＤＮＡ」という用語はもちろん周知の表現であり、したが
って、特に言及する必要はないと考える。「ＤＮＡ」という用語はさらにセンス
鎖とアンチセンス鎖の両方を含む。ＲＮＡおよびＤＮＡのアナログは、例えば修
飾型結合（ホスホチオエートなど）、修飾型リボース（ＬＮＡなど）または修飾
型塩基（例えば５−置換ウラシル）など、ＲＮＡおよびＤＮＡの何らかの化学修
飾を含むものとする。「ペプチド核酸」はいくつかの面でＤＮＡの機能に似てい
る合成分子である。ペプチド核酸はＷＯ９２／２０７０２（参考文献６）および
ＷＯ９２／２０７０３（参考文献７）に初めて開示された。「ペプチド核酸」と
いう用語は、通常どおり、ポリマー主鎖を持つ化合物を表すと広義に解釈すべき
である（ＷＯ９２／２０７０２（参考文献６）およびＷＯ９２／２０７０３（参
考文献７）の定義参照）。「ＬＮＡ」は新しく発明された化合物であり、やはり
いくつかの面でＤＮＡの機能に似ている。「ペプチド」「タンパク質」「抗体」
「抗原」および「免疫複合体」は周知の用語であり、本発明においては本発明の
目的に適した当該物質を包含するものとする。抗体および免疫複合体は単量体、
二量体、三量体、四量体または様々な多量体／集合体として使用できる。ＩｇＡ
、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭクラスならびにそれらのサブクラスに属
する抗体／免疫複合体も包含される。「抗体」という用語はエピトープおよび上
記抗体の様々な断片（例えばＦａｂ断片および単鎖断片）も含む。モノクローナ
ル抗体、ポリクローナル抗体および組換え抗体も含まれる。「高分子」という用
語は、デキストラン、ポリビニルピロリドン、分岐または線状ポリエーテル、お
よび分岐または線状ポリリジンを包含するものとする。本発明に関して「固形ま
たは半固形支持体」という用語は、例えばポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ
エチレン、デキストラン、ナイロン、アミロース、セルロース、ポリアクリルア
ミドおよびアガロースなどの粒子およびビーズ、例えばセルロース、酢酸セルロ
ース、グリセロールおよびフッ化ポリビニリデンなどの膜を包含するものとする
。
【００３６】 上記デンドリマーと、それらデンドリマーの保護型は、どちらも本発明の一側
面である。保護型とは保護基が結合しているものである。樹状コア自体が保護基
で保護されていてもよい（例えばｘ１もしくはｘ２またはｘ１およびｘ２が０の
場合）。そのような保護基は樹状コアの最外層に位置してよい。また、構造部１
および構造部２は独立して、 保護基、 保護基で保護されたプローブ（保護プローブ）、 保護基で保護された標識化合物（保護標識化合物）、 １つまたはそれ以上の標識化合物で置換された保護プローブ、 １つまたはそれ以上の保護標識化合物で置換された保護プローブ、 保護基で保護された反応性基（保護反応性基）を持つプローブ、 であり得る。
【００３７】 適切な保護基の例は、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｍｔｔ、Ｍｍｔ、Ｄｄｅ、Ａｌｌ、
Ａｌｏｃ、ＯＤｍａｂ、ＯｔＢｕ、Ｏｍｅ、Ｏｂｚ、Ｚ、ＭＯＭおよびベンジル
オキシカルボニルである。
【００３８】 樹状コアは末端に遊離の基、反応性基または活性化された基を持ってもよい
（例えばｘ１もしくはｘ２またはｘ１およびｘ２が０の場合）。一例としてアミ
ンおよび酸が挙げられる。
【００３９】 好ましい一態様として、樹状コアＡは各連続層に −ＮＨ（（ＣＨ2 ）q Ｏ））q （ＣＨ2 ）q Ｎ（（ＣＨ2 ）q Ｃ（Ｏ）−）2 、 （（−ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｎ（（ＣＨ2 ）q Ｏ−）2 、 （（−ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｃ（（ＣＨ2 ）q Ｏ−）3 、および −ＮＨ（（ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｃ（（ＣＨ2 ）q Ｃ（Ｏ）−）3 ［式中、各ｑは独立して０または１〜８（好ましくは１〜３）の整数である］ の１つまたはそれ以上を含みうる。上述した基の１またはそれ以上ならびに天然
もしくは非天然アミノ酸、ペプチド核酸成分、ＬＮＡ、ペプチド、タンパク質、
抗体、抗原、免疫複合体、ＤＮＡ配列またはそのアナログ、ＲＮＡ配列またはそ
のアナログ、高分子および固形もしくは半固形支持体の１つまたはそれ以上を含
有する連続層、および上述した基の１つまたはそれ以上を含有するさらなる層、
および天然もしくは非天然アミノ酸、ペプチド核酸成分、ＬＮＡ、ペプチド、タ
ンパク質、抗体、抗原、免疫複合体、ＤＮＡ配列またはそのアナログ、ＲＮＡ配
列またはそのアナログ、高分子および固形もしくは半固形支持体の１またはそれ
以上を含有する他の層も含まれる。
【００４０】 適切な成分としては、親水性特性を持つ基がさらに挙げられる。両性イオン基
も含まれる。
【００４１】 特に、樹状コアＡは −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ
（Ｏ））2 −、 −ＮＨ（ＣＨ2 ）2 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 （Ｎ（ＣＨ2 ＣＨ2 ）Ｎ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ
）− （−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 （Ｏ）（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（
ＣＨ2 ＣＯＯＨ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））q （式中、ｑは上記と同意義）、 −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＯＯＨ
）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）− −ＮＨ（ＣＨ3 ）3 （ＯＣＨ2 ＣＨ2 ）q Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 ＣＯＯＨ）
ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）− −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）
ＣＨ2 Ｏ（ＣＨ2 ＣＨ2 ）q ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）ＮＨ− （ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 ＣＯＯＨ
）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）− の１つまたはそれ以上を含みうる。
【００４２】 特定の態様では、樹状コアは層化合物ＡＬＬ、ＤＡＡＬ、ＴＡＡＬ、ＰＥＧ、
ＰＥＧ３４およびＰＩＰの１つまたはそれ以上を含む（下記の略号参照）。
【００４３】 一定の用途では、樹状コアＡは同じ基本構造を持つ連続層を形成する同一の単
位から構成されることが有利だろう。また別の用途では、樹状コアＡが交互する
構造を持つ層を形成する異なる単位から構成されることが有利だろう。
【００４４】 樹状コアＡの各層は二分岐または三分岐であることが好適であり得る。これは
各層が２つまたは３つの分岐点を持ちうることを意味する。２つの分岐点は三価
の窒素原子によって提供され得、３つの分岐点は四価の炭素原子によって提供さ
れ得る。
【００４５】 上記の定義によれば、樹状コアＡは、少なくとも１つのＮ原子分岐点を含み、
前記分岐点は天然アミノ酸の一部ではなく、Ａは少なくとも１つのエーテル基を
含む。したがって本デンドリマーがもっぱら天然アミノ酸のみから構成されるこ
とはない。しかし一部の用途では、樹状コアＡが天然または非天然アミノ酸を含
むことは利点になるだろう。
【００４６】 本発明のデンドリマーの緩やかな（loose ）構造は、構造部１のそれぞれおよ
び／または構造部２のそれぞれの間またはその逆の間隔距離（ｉｎｔｅｒｄｉｓ
ｔａｎｃｅ）が少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３
０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少な
くとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも
１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも
１５０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、少なくとも
２３０、少なくとも２５０、少なくとも２６０、少なくとも２７０、少なくとも
２８０、少なくとも２９０、少なくとも３００、少なくとも３１０、少なくとも
３２０、少なくとも３３０、少なくとも３４０、少なくとも３５０、少なくとも
３６０、少なくとも３７０、少なくとも３８０、少なくとも３９０、少なくとも
４００、少なくとも４１０、少なくとも４２０、少なくとも４３０、少なくとも
４４０、少なくとも４５０、少なくとも４６０、少なくとも４７０、少なくとも
４８０、少なくとも４９０、少なくとも５００、少なくとも５２５、少なくとも
５５０、少なくとも５７５、または少なくとも６００の結合であるように樹状コ
アＡを形成させることによって達成することができる。ある態様では上記相互距
離が３５、７７０、１３０および２５０結合である（実施例参照）。「相互距離
」という表現は、同じ分岐点に結合している２つの構造部間の結合数を意味する
が、他の分岐への結合は含まない。
【００４７】 上から明らかなように、本発明は、 ｘ１およびｘ２が共に０、 ｘ１が０かつｘ２が１〜１２００、 ｘ１が１〜１２００かつｘ２が０、および ｘ１が１〜１２００かつｘ２が１〜１２００ であるデンドリマーに関する。
【００４８】 本発明のデンドリマーは、構造部１と構造部２の何らかの組み合わせを提示す
るように構築することができる。特に興味深い選択肢としては、 （１）構造部１がプローブであり、構造部２が標識化合物であるもの、 （２）構造部１が標識化合物であり、構造部２がプローブであるもの、 （３）構造部１と構造部２が共にプローブであるもの、 （４）構造部１と構造部２が共に標識化合物であるもの、 （５）構造部１が標識化合物で置換されたプローブであり、構造部２が標識化合
物であるもの、 （６）構造部１が標識化合物であり、標識単位２は標識化合物で置換されたプロ
ーブであるもの、 （７）構造部１のうち１つまたはそれ以上がプローブであり、残りの構造部１が
上に定義した考えられうる置換基のうちの別の置換基であり、構造部２が標識化
合物または標識化合物で置換されたプローブであるもの、 （８）構造部２のうち１つまたはそれ以上がプローブであり、残りの構造部２が
上に定義した考えられうる置換基のうちの別の置換基であり、構造部１が標識化
合物または標識化合物で置換されたプローブであるもの、 （９）構造部１が同じまたは異なる標識化合物であるか、同じまたは異なる標識
化合物で置換された同じまたは異なるプローブであるもの、 （１０）構造部２が同じまたは異なる標識化合物であるか、同じまたは異なる標
識化合物で置換された同じまたは異なるプローブであるもの、 （１１）構造部１だけが存在するもの（ｘ１は０）、 （１２）構造部２だけが存在するもの（ｘ２は０）、 およびこれらのデンドリマーの保護型が考えられる。
【００４９】 明記したように、本発明のデンドリマーは、構造部１の全部または一部のみお
よび／または構造部２の全部または一部のみのプローブ／標識化合物を、任意に
選択することにより、多色提示（または多重シグナル提示）が可能である。すな
わち１、２、３、４、さらには５以上の異なる標識を持たせることが可能である
。また、異なる領域または同じ領域を標的とする１、２、３、４、さらにはそれ
以上の異なるプローブを持たせることも可能である。
【００５０】 多色オプションが望ましい場合は、以下の標識化合物を適宜使用することがで
きる： フルオレセインおよびローダミン、 フルオレセインおよびＣｙ３、 フルオレセインおよびリサミン、 フルオレセインおよびクマリン、 ローダミンおよびクマリン、 リサミンおよびクマリン、 フルオレセイン、ローダミンおよびクマリン、 フルオレセイン、リサミンおよびクマリン。
【００５１】 これによれば、以下の本発明デンドリマーはいずれも本発明の一側面である：
構造部１および構造部２がどちらも標識化合物または標識化合物で置換されたプ
ローブであるもの、 標識化合物のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つは
異なる標識化合物であるもの、 構造部１は標識化合物または標識化合物によって置換されたプローブであり、か
つ構造部２は別の標識化合物または前記別の標識化合物で置換されたプローブで
あるもの、 構造部１および構造部２はどちらも同じまたは異なる標的の異なるまたは同じ領
域を標的としうるプローブであるもの、 構造部１だけが存在するもの、 構造部２だけが存在するもの、 ならびにそれらの保護型。
【００５２】 本発明に関して「標識化合物」という用語は、検出に役立つ置換基、すなわち
可視シグナルまたは他の方法で検出可能なシグナルを直接または間接的に生成す
るのに適した置換基を指す。本発明によれば、適切な標識化合物は、発蛍光団、
ビオチン、ジニトロフェニルラジカル、ジゴキシゲニン、放射性同位体標識（共
有結合した放射性同位体標識および放射性イオンに結合した錯体など）、酵素標
識、色素、ケミルミネセンス標識、エレクトロルミネセンス標識、ハプテン、抗
原または抗体標識、およびスピン標識を含む。特に興味深い標識化合物の例は、
ビオチン、蛍光標識、例えばフルオレセイン標識（例：５−（および６）−カル
ボキシフルオレセイン、５−または６−カルボキシフルオレセイン、６−（フル
オレセイン）−５−（および６）−カルボキサミドヘキサン酸、およびフルオレ
セインイソチオシアネート）、ジニトロフェニルラジカル、ローダミン、テトラ
メチルローダミン、シアニン色素（Ｃｙ２、Ｃｙ３およびＣ５など）、置換され
ていてもよいクマリン、Ｒ−フィコエリトリン、アロフィコエリトリン、テキサ
スレッドおよびプリンストンレッド、ならびにＲ−フィコエリトリンと例えばＣ
ｙ５またはテキサスレッドなどとのコンジュゲートである。このような標識化合
物は、任意に、１つまたはそれ以上の保護基で保護してもよい。そのような保護
基の例は上に挙げた。
【００５３】 特にプローブは、ペプチド核酸、ＲＮＡ配列もしくはＤＮＡ配列またはそれら
のアナログ、抗体、抗原、タンパク質、ペプチドまたはその誘導体、エピトープ
、およびビオチン、またはその保護型から選択しうる。
【００５４】 上記の定義に従って、本発明のデンドリマーは、結合した構造部（構造部１お
よび構造部２）を２４００個（ｘ１およびｘ２がそれぞれ１２００個）まで持つ
ことができる。構造部（構造部１および構造部２）の総数は好適には２０００、
１０００、９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００
、５０または２５まででありうる。構成単位１および構成単位２の数は同じであ
っても異なってもよい。特にデンドリマーの最外層は４、８、１６、３２、６４
、１２８、２５６、５１２、１０２４または１０４８個の結合した構造部を持ち
うる。
【００５５】 特定の態様では、本発明は一般式 （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2 （Ｉ） ［式中、樹状コアＡは上と同意義であって、ｘ１およびｘ２は独立して２m であ
り、ｍは１〜１０の整数である］ を有するデンドリマーに関する。具体的にはｍとして２、３、４または５を挙げ
ることができる。すなわち、ｍが２であるとは、ｘ１および／またはｘ２が４で
あることを意味し、ｍが３であるとはｘ１および／またはｘ２が８であることを
意味し、ｍが４であるとはｘ１および／またはｘ２が１６であることを意味し、
ｍが５であるとはｘ１および／またはｘ２が３２であることを意味する。
【００５６】 特別な一態様では、本発明は、樹状コアＡが１つまたはそれ以上の構造（Ｉａ
）の成分 Ｚ［（Ｚ］z ［）y ］z （Ｉａ） ［式中、各Ｚは、少なくとも１つのＮ原子分岐点を含有する基であり、前記分岐
点は天然アミノ酸の一部ではなく、式（Ｉａ）の成分は少なくとも１つのエーテ
ル基を含む。また各ｙは独立して２または３であり、ｚは１〜１０の整数である
。ただしｙz ≦１２００である］ を含むデンドリマーおよびその保護型に関する。各Ｚ基はデンドリマーの最外層
上の構造部間に間隔を与える任意の基であってよい。
【００５７】 Ｚ基が樹状コアＡの構造の一部をなし、 ｘ１およびｘ２が共に０、 ｘ１が０かつｘ２は１〜１２００、 ｘ１が１〜１２００かつｘ２は０、および ｘ１が１〜１２００かつｘ２は１〜１２００ であるデンドリマーならびにその保護型は、本発明の範囲に包含される。
【００５８】 重要な一態様は、上述のように１つまたはそれ以上の基（原則としてｘ１およ
び／またはｘ２個の他の基）で終わっているデンドリマーである。
【００５９】 特別な一態様では、本発明のデンドリマーは、樹状コアＡが、天然または非天
然アミノ酸、ペプチド核酸成分、ＬＮＡ、ペプチド、タンパク質、抗体、抗原、
免疫複合体、ＤＮＡ配列またはそのアナログ、ＲＮＡ配列またはそのアナログ、
高分子および／または固形もしくは半固形支持体に結合した少なくとも２つの構
造（Ｉａ）の成分を含むデンドリマーでありうる。これらの用語のより詳細な定
義は上に述べた。したがって成分（Ｉａ）のそれぞれが他の化合物に結合されて
樹状コアＡを形成しているデンドリマーが形成される。これら他の化合物には、
適宜、少なくとも２つの構造（Ｉａ）の成分を結合させることができる。しかし
、一定の応用例では、例えば２〜１００、２〜８０、２〜７０、２〜６０、２〜
５０、２〜３５、２〜３０、２〜２５、２〜２０、２〜１８、２〜１５、２〜１
２、２〜１０、２〜８、２〜５または３もしくは４個という数多くの構造（Ｉａ
）の成分が結合していてもよい。構造（Ｉａ）の成分は上に定義した他の化合物
（例えばアルキル基、アルケニル基、アルキニル基（前記の基は上に定義した置
換基を含有する）、アミノ酸、ペプチド核酸、ＬＮＡ、ペプチド、タンパク質お
よび高分子）の末端または内部に結合させることができる。
【００６０】 特に、構造（Ｉａ）の成分を形成し樹状コアＡの一部をなす各Ｚは、１つまた
はそれ以上のＣ1-100 アルキル基、Ｃ2-100 アルケニル基、Ｃ2-100 アルキニル
基（前記アルキル基、アルケニル基、およびアルキニル基は所望により１つまた
はそれ以上の官能基および／または１つまたはそれ以上のヘテロ原子を含む）、
天然または非天然アミノ酸、ペプチド核酸成分、ＬＮＡ、ペプチド、タンパク質
、抗体、抗原、免疫複合体、ＤＮＡ配列およびそのアナログ、ＲＮＡ配列および
そのアナログならびに高分子からなりうる。
【００６１】 アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基としては、特にＣ5-80、Ｃ5-70 、Ｃ5-60、Ｃ10-50 、Ｃ10-25 、Ｃ15-25 およびＣ10-20 炭素原子を持ち、所望
により１つまたはそれ以上の官能基および／または１つまたはそれ以上のヘテロ
原子をさらに含有するものを挙げることができる。「官能基」および「ヘテロ原
子」という用語は上に定義した。
【００６２】 特に、構造（Ｉａ）の成分を形成し樹状コアＡの一部をなす各Ｚは、１つまた
はそれ以上のＣ15-25 アルキル基、Ｃ15-25 アルケニル基、Ｃ15-25 アルキニル
基を含み、前記アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は所望により１つ
またはそれ以上の官能基および／または１つまたはそれ以上のヘテロ原子を含有
することができる。
【００６３】 特別な一態様として、樹状コアＡの一部をなす各Ｚは、 −ＮＨ（（ＣＨ2 ）q Ｏ））q （ＣＨ2 ）q Ｎ（（ＣＨ2 ）q Ｃ（Ｏ）−）2 、 （（−ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｎ（（ＣＨ2 ）q Ｏ−）2 、 （（−ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｃ（（ＣＨ2 ）q Ｏ−）3 、および −ＮＨ（（ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｃ（（ＣＨ2 ）q Ｃ（Ｏ）−）3 ［式中、各ｑは独立して０または１〜８（好ましくは１〜３）の整数である］ の１つまたはそれ以上を含みうる。上述した基の１つまたはそれ以上ならびに天
然もしくは非天然アミノ酸、ペプチド核酸成分、ＬＮＡ、ペプチド、タンパク質
、抗体、抗原、免疫複合体、ＤＮＡ配列またはそのアナログ、ＲＮＡ配列または
そのアナログ、高分子および固形もしくは半固形支持体の１つまたはそれ以上を
含有する連続層、および上述した基の１つまたはそれ以上を含有するさらなる層
、および天然もしくは非天然アミノ酸、ペプチド核酸成分、ＬＮＡ、ペプチド、
タンパク質、抗体、抗原、免疫複合体、ＤＮＡ配列またはそのアナログ、ＲＮＡ
配列またはそのアナログ、高分子および固形もしくは半固形支持体の１つまたは
それ以上を含有する他の層も含まれる。
【００６４】 特に、構造（Ｉａ）の成分を形成し樹状コアＡの一部をなす各Ｚ基は、 −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ
（Ｏ））2 −、 −ＮＨ（ＣＨ2 ）2 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 （Ｎ（ＣＨ2 ＣＨ2 ）Ｎ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ
）− （−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 （Ｏ）（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（Ｃ
Ｈ2 ＣＯＯＨ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））q （式中、ｑは上記と同意義）、 −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＯＯＨ
）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）− −ＮＨ（ＣＨ3 ）3 （ＯＣＨ3 ＣＨ2 ）q Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 ＣＯＯＨ）
ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）− −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）
ＣＨ2 Ｏ（ＣＨ2 ＣＨ2 ）q ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）ＮＨ− （ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 ＣＯＯＨ
）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）− の１つまたはそれ以上を含みうる。
【００６５】 特定の態様では、樹状コアは層化合物ＡＬＬ、ＤＡＡＬ、ＴＡＡＬ、ＰＥＧ、
ＰＥＧ３４およびＰＩＰの１つまたはそれ以上を含む。
【００６６】 特に、樹状コアＡの一部をなすＺ基は、構造部１のそれぞれおよび／または構
造部２のそれぞれの間またはその逆の相互距離が少なくとも５、少なくとも１０
、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なく
とも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０
、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０
、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２１０
、少なくとも２２０、少なくとも２３０、少なくとも２５０、少なくとも２６０
、少なくとも２７０、少なくとも２８０、少なくとも２９０、少なくとも３００
、少なくとも３１０、少なくとも３２０、少なくとも３３０、少なくとも３４０
、少なくとも３５０、少なくとも３６０、少なくとも３７０、少なくとも３８０
、少なくとも３９０、少なくとも４００、少なくとも４１０、少なくとも４２０
、少なくとも４３０、少なくとも４４０、少なくとも４５０、少なくとも４６０
、少なくとも４７０、少なくとも４８０、少なくとも４９０、少なくとも５００
、少なくとも５２５、少なくとも５５０、少なくとも５７５、または少なくとも
６００結合になるように選択することができる。一部の態様では上記相互距離が
３５、７７０、１３０および２５０結合である（実施例参照）。
【００６７】 Ｚ基が樹状コアＡの一部をなしている本発明のデンドリマーは、構造部１と構
造部２の何らかの組み合わせを提示するように構築することができる。特に興味
深い選択肢としては、 （１）構造部１はプローブであり、構造部２は標識化合物であるもの、 （２）構造部１は標識化合物であり、構造部２はプローブであるもの、 （３）構造部１と構造部２は共にプローブであるもの、 （４）構造部１と構造部２は共に標識化合物であるもの、 （５）構造部１は標識化合物で置換されたプローブであり、構造部２は標識化合
物であるもの、 （６）構造部１は標識化合物であり、構造部２は標識化合物で置換されたプロー
ブであるもの、 （７）構造部１のうち１つまたはそれ以上はプローブであり、残りの構造部１は
上に定義した考えられうる置換基のうちの別の置換基であり、構造部２は標識化
合物または標識化合物で置換されたプローブであるもの、 （８）構造部２のうち１つまたはそれ以上はプローブであり、残りの構造部２は
上に定義した考えうる置換基のうちの別の置換基であり、構造部１は標識化合物
または標識化合物で置換されたプローブであるもの、 （９）構造部１は同じまたは異なる標識化合物であるか、同じまたは異なる標識
化合物で置換された同じまたは異なるプローブであるもの、 （１０）構造部２は同じまたは異なる標識化合物であるか、同じまたは異なる標
識化合物で置換された同じまたは異なるプローブであるもの、 （１１）構造部１だけが存在するもの（ｘ１は０）、 （１２）構造部２だけが存在するもの（ｘ２は０）、 および上記デンドリマーの保護型が考えられる。
【００６８】 もちろん、１つまたはそれ以上の構造部を例えば反応性基、遊離の基、または
活性化された基で置換して、樹状コアを終結させることができる。
【００６９】 したがって、Ｚ基が樹状コアＡの一部をなすデンドリマーの一側面には、 構造部１および構造部２の一方がプローブであり、他方が標識化合物であるもの
、 構造部１および構造部２がどちらも標識化合物または標識化合物で置換されたプ
ローブであるもの、 標識化合物のうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つは
異なる標識化合物であるもの、 構造部１は標識化合物または標識化合物によって置換されたプローブであり、か
つ構造部２は別の標識化合物または前記別の標識化合物で置換されたプローブで
あるもの、 構造部１および構造部２はどちらもプローブであるもの、 構造部１および構造部２はどちらも同じまたは異なる標的の異なるまたは同じ領
域を標的としうるプローブであるもの、 構造部１だけが存在するもの、ならびに 構造部２だけが存在するもの、 が包含される。
【００７０】 標識化合物は、好ましくは、発蛍光団、ビオチン、ジニトロフェニル基、ジゴ
キシゲニン、放射性同位体標識、または酵素標識、色素、ケミルミネセンス標識
、ハプテン、抗原または抗体標識、およびスピン標識から選択される。そのよう
な標識化合物の例は上に挙げた。標識化合物は保護基で保護してもよい。適切な
保護基の例は上に挙げた。
【００７１】 特にプローブは、ペプチド核酸、ＲＮＡ配列またはＤＮＡ配列またはそれらの
アナログ、抗体、抗原、タンパク質、ペプチドまたはその誘導体、エピトープ、
およびビオチンから選択しうる。
【００７２】 Ｚ基が樹状コアＡの一部をなす本発明のデンドリマーは、好適には、ｘ１およ
びｘ２が独立して２m であり、ｍが１〜１０の整数であるものである。ｍとして
は特に２、３、４または５を挙げることができる。
【００７３】 一般に、本発明のどのデンドリマーでも、構造部１および構造部２は問題の置
換基に末端または内部で結合することができる。したがって構造部１および構造
部２の少なくとも１つは、末端または内部で天然または非天然アミノ酸に、末端
または内部でペプチド核酸に、末端または内部でペプチドに、末端または内部で
ＬＮＡに、末端または内部でタンパク質に、抗体に、抗原に、免疫複合体に、末
端または内部でＲＮＡ配列またはそのアナログに、末端または内部でＤＮＡ配列
またはそのアナログに、末端または内部で高分子に、または固形もしくは半固形
支持体に結合している。
【００７４】 さらなる側面として、本発明は、本明細書に記載する保護型デンドリマーに関
する。
【００７５】 また本発明は、本明細書に定義する少なくとも１つのデンドリマーが末端また
は内部で天然または非天然アミノ酸に、末端または内部でペプチド核酸に、末端
または内部でＬＮＡに、末端または内部でペプチドに、末端または内部でタンパ
ク質に、抗体に、抗原に、免疫複合体に、末端または内部でＲＮＡ配列またはそ
のアナログに、末端または内部でＤＮＡ配列またはそのアナログに、末端または
内部で高分子に、または固形もしくは半固形支持体に結合してなるデンドリマー
複合体およびその保護型に関する。
【００７６】 特に、本デンドリマー複合体は、デンドリマーが構造部１および／または構造
部２の少なくとも１つを介して結合しているものである。
【００７７】 また、本デンドリマー複合体では、デンドリマーが樹状コアＡの１つまたはそ
れ以上の基を介して結合している場合も考えられる。
【００７８】 本発明のデンドリマー複合体には、適宜、１〜１００、１〜８０、１〜７０、
１〜６０、１〜５０、１〜３５、１〜３０、１〜２５、１〜２０、１〜１８、１
〜１５、１〜１２、１〜１０、１〜８、１〜５または２、３または４個の本明細
書に定義するデンドリマーを結合させることができる。
【００７９】 特別な態様では、本デンドリマーは、内部で天然もしくは非天然アミノ酸、ペ
プチド核酸、ＬＮＡ分子、タンパク質、ＲＮＡ配列もしくはＤＮＡ配列、高分子
、または固形もしくは半固形支持体に結合される。
【００８０】 例えば、デンドリマー複合体がＤＮＡもしくはＲＮＡ配列、ペプチド核酸また
はＬＮＡ分子を含む場合、本明細書に定義するデンドリマー１個には、それぞれ
に５０、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、５個のアミノ酸を組み込
むことができる。
【００８１】 上の記述に従って、興味深い本発明のデンドリマー／デンドリマー複合体の構
造の非限定的な例を以下に挙げる。 （１）（標識化合物）x1−樹状コア−（所望により上に定義した官能基／ヘテ
ロ原子を含有する１つまたはそれ以上のアルキル基、アルケニル基またはアルキ
ニル基に結合したペプチド核酸、ＤＮＡ、タンパク質および／または抗体）−樹
状コア−（標識化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、構造部１および構造部２は標識化合物であり、
樹状コアＡはその一部として１つまたはそれ以上のペプチド核酸、ＤＮＡ、タン
パク質および／または抗体を含む。アルキル基、アルケニル基およびアルキニル
基は末端または内部で結合させることができる。
【００８２】 （２）（標識化合物）x1−樹状コア−（ペプチド核酸、ＤＮＡ、タンパク質お
よび／または抗体）−樹状コア−（標識化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、構造部１および構造部２は標識化合物であり、
樹状コアＡはその一部として１つまたはそれ以上のペプチド核酸、ＤＮＡ、タン
パク質および／または抗体を含む。
【００８３】 （３）（標識化合物）x1−構造（Ｉａ）の成分−（ペプチド核酸、ＤＮＡ、タ
ンパク質および／または抗体）−前記構造の成分−（標識化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、構造部１および構造部２は標識化合物であり、
樹状コアＡは、１つまたはそれ以上のペプチド核酸、ＤＮＡ、タンパク質および
／または抗体に結合した構造（Ｉａ）の成分を含む。
【００８４】 （４）（標識化合物）x1−構造（Ｉａ）の成分−（所望により上に定義した官
能基／ヘテロ原子を含有する１つまたはそれ以上のアルキル基、アルケニル基ま
たはアルキニル基に結合したペプチド核酸、ＤＮＡ、タンパク質および／または
抗体）−前記構造の成分−（標識化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、構造部１および構造部２は標識化合物であり、
樹状コアＡは１つまたはそれ以上のペプチド核酸、ＤＮＡ、タンパク質および／
または抗体に結合した構造（Ｉａ）の成分を含む。アルキル基、アルケニル基お
よびアルキニル基は末端または内部で結合させることができる。
【００８５】 （５）（標識化合物）x1−樹状コア−（１つまたはそれ以上のアルキル基、ア
ルケニル基、または上に定義した置換基／官能基を有するアルケニル基に結合し
たペプチド核酸、ＤＮＡ、タンパク質および／または抗体）−樹状コア−（標識
化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、構造部１および構造部２は標識化合物であり、
樹状コアＡはその一部として１つまたはそれ以上のペプチド核酸、ＤＮＡ、タン
パク質および／または抗体を含む。アルキル基、アルケニル基およびアルキニル
基は末端または内部で結合させることができる。
【００８６】 （６）（標識化合物）x1−構造（Ｉａ）の成分−（１つまたはそれ以上のアル
キル基、アルケニル基、または上に定義した置換基／官能基を有するアルケニル
基に結合したペプチド核酸、ＤＮＡ、タンパク質および／または抗体）−構造（
Ｉａ）の成分−（標識化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、構造部１および構造部２は標識化合物であり、
樹状コアＡは１つまたはそれ以上のペプチド核酸、ＤＮＡ、タンパク質および／
または抗体に結合した構造（Ｉａ）の成分を含む。
【００８７】 （７）（タンパク質または抗体）−樹状コア−（標識化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、構造部１は例えばストレプトアビジンまたは抗
体などのタンパク質であり、ｘ１は１である。タンパク質または抗体は単量体、
二量体、三量体、四量体または他の多量体の形をとりうる。
【００８８】 （８）（タンパク質または抗体）−樹状コア−（標識化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、構造部１は例えばストレプトアビジンまたは抗
体などのタンパク質であり、ｘ１は１である。樹状コアＡは１つまたはそれ以上
の構造（Ｉａ）の成分を含む。タンパク質または抗体は単量体、二量体、三量体
、四量体または他の多量体の形をとりうる。
【００８９】 （９）（タンパク質または抗体）−［樹状コア−（標識化合物）x2］1,2,3,.. . 。 これらのタイプの化合物では、構造部１は例えばストレプトアビジンまたは抗
体などのタンパク質であり、ｘ１は１である。タンパク質または抗体は単量体、
二量体、三量体、四量体または他の多量体の形をとりうる。上に示した通り、こ
れらのタイプの化合物は、結合した１つまたはそれ以上の［樹状コア−（標識化
合物）x2］（デンドリマー複合体）を持つことができる。
【００９０】 （１０）（タンパク質または抗体）−［樹状コア−（標識化合物）x2］1,2,3, ... 。 これらのタイプの化合物では、構造部１は例えばストレプトアビジンまたは抗
体などのタンパク質であり、ｘ１は１である。タンパク質または抗体は単量体、
二量体、三量体、四量体または他の多量体の形をとりうる。樹状コアＡは１つま
たはそれ以上の構造（Ｉａ）の成分を含む。上に示した通り、これらのタイプの
化合物は、結合した１つまたはそれ以上の［樹状コア−（標識化合物）x2］（デ
ンドリマー複合体）を持つことができる。
【００９１】 （１１）樹状コア−（標識化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、ｘ１は０である。１つまたはそれ以上のこれら
デンドリマーをＤＮＡ、ペプチド核酸または抗体に樹状コアを介して結合するこ
とができる。
【００９２】 （１２）樹状コア−（標識化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、ｘ１は０である。樹状コアＡは１つまたはそれ
以上の構造（Ｉａ）の成分を含む。１つまたはそれ以上のこれらのデンドリマー
をＤＮＡ、ペプチド核酸または抗体に樹状コアを介して結合することができる。
【００９３】 （１３）（ペプチド核酸、ＤＮＡおよび／またはタンパク質に結合した標識化
合物）x1−樹状コア−（標識化合物）x2。 これらのタイプの化合物では、適宜異なる標識化合物を使って、多色シグナル
オプションとすることができる。
【００９４】 （１４）（ペプチド核酸、ＤＮＡおよび／またはタンパク質に結合した標識化
合物）x1−樹状コア−（標識化合物）x2。 樹状コアＡは１つまたはそれ以上の構造（Ｉａ）の成分を含む。これらのタイ
プの化合物では、適宜異なる標識化合物を使って、多色シグナルオプションとす
ることができる。
【００９５】 （１５）（ペプチド核酸、ＤＮＡおよび／またはタンパク質に結合した標識化
合物）x −樹状コア−（ペプチド、タンパク質、ペプチド核酸および／またはＤ
ＮＡ）x2。 これらのタイプの化合物では、適宜異なる標識化合物を使って、多色シグナル
オプションとすることができる。
【００９６】 （１６）（ペプチド核酸、ＤＮＡおよび／またはタンパク質に結合した標識化
合物）x −樹状コア−（ペプチド、タンパク質、ペプチド核酸および／またはＤ
ＮＡ）x2。 これらのタイプの化合物では、適宜異なる標識化合物を使って、多色シグナル
オプションとすることができる。樹状コアＡは１つまたはそれ以上の構造（Ｉａ
）の成分を含む。
【００９７】 （１７）デンドリマー複合体は、本明細書に定義するいくつかのデンドリマー
が結合している四量体型ストレプトアビジンまたはデキストラン高分子などのタ
ンパク質を適宜含むことができる。本デンドリマーは４、８、１６、さらには３
２個までの結合した標識化合物（フルオレセインなど）を適宜持つことができる
。
【００９８】 （１８）デンドリマー複合体は、本明細書に定義するいくつかのデンドリマー
が結合している四量体型ストレプトアビジンまたはデキストラン高分子などのタ
ンパク質を適宜含むことができる。本デンドリマーは、各々、４、８、１６、さ
らには３２個までの結合した標識化合物（そのうちの少なくとも２つは異なるも
の、例えばフルオレセインおよびローダミン）を適宜持つことができる。
【００９９】 上記の態様の保護型は極めて興味深いデンドリマーおよびデンドリマー複合体
でありうる。保護型デンドリマーまたは保護型デンドリマー複合体を与える適切
な保護基は上記の保護基、特にＢｏｃ、ＦｍｏｃおよびＯｂｚである。
【０１００】 上記の全ての態様で明記したわけではないが、標識化合物は同一であっても異
なっていてもよい。同様にプローブは同一であっても異なっていてもよい。さら
に「プローブ」という表現は、上述のように、適切なプローブの定義の下に挙げ
た選択肢の１つまたはそれ以上を包含するものとする。すなわち各構造部１およ
び／または構造部２は上記プローブの組み合わせを含むことができる。同様に「
標識化合物」という表現も標識化合物の組み合わせを含むことができる。
【０１０１】 本明細書に記載する保護型デンドリマー複合体も本発明の範囲に包含される。
【０１０２】 上述のように本デンドリマーおよびデンドリマー／複合体の用途は数多い。
【０１０３】 したがって、さらなる一側面として、本発明は、試料中の核酸配列、抗体、抗
原、免疫複合体、タンパク質またはペプチドの存在を検出するための本明細書に
定義するデンドリマーおよびデンドリマー複合体の使用に関する。
【０１０４】 試料は試験すべき任意の試料、特に血液試料、骨髄試料、染色体スプレッド（
ｓｐｒｅａｄ）、組織試料、組織切片、細胞塗沫標本、生検試料、器官、スワプ
（ｓｗａｐ）、細胞またはその一部の懸濁液、全細胞またはその一部でありうる
。本デンドリマーはインビトロ診断にもインビボ診断にも適している。
【０１０５】 本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体は任意のアッセイ系のほとん
どでの使用に適している。非限定的な例はＥＬＩＳＡ系システム、ドットブロッ
ト、フローサイトメトリー、ＩＳＨのようなインサイチュー系アッセイ、他の染
色系アッセイ、比濁法のような他のビーズ系または粒子系アッセイ、およびスラ
イド系システムである。
【０１０６】 所望により多官能性を示す単一のデンドリマーまたはデンドリマー複合体を使
用することができる。数種類のデンドリマーまたはデンドリマー複合体を使用す
ることもできる。さらにはデンドリマーおよびデンドリマー複合体の組み合わせ
を使用することができる。
【０１０７】 本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体は、上述のように、生物学的
試料中に存在する物質の決定に適している。非限定的な応用例を以下に挙げる。
【０１０８】 １．例えば構造部１を、試料中の特定の核酸配列、免疫複合体、抗体、抗原ま
たはペプチドに結合する能力を持つプローブとし、構造部２を標識化合物または
標識化合物で置換されたプローブとすることができる。これにより、シグナルの
著しい増強が可能になる。
【０１０９】 ２．構造部１を、試料中の特定の核酸配列、免疫複合体、抗体、抗原またはペ
プチドに結合する能力を持つプローブとし、構造部２の１つまたはそれ以上を試
料中の目的物質には結合しないプローブ（例えばＤＮＡ、ペプチド核酸またはペ
プチド）とすることができる。その場合、構造部１が構造部２に特異的結合する
プローブである別のデンドリマー／デンドリマー複合体を適用することができる
。この別のデンドリマーでは、構造部２は標識化合物または標識化合物で置換さ
れたプローブであるとよい。もちろん第３または第４のデンドリマー／デンドリ
マー複合体を同じ方法で構築することもできる。このようにして、多層検出系が
得られる。結果としてシグナルの著しい増強が得られる。
【０１１０】 ３．特にデンドリマー／デンドリマー複合体を低コピー数で存在する物質また
は１コピーしか存在しない物質の検出に使用する場合は、２以上のデンドリマー
を使用することができる。構造部１が試料中の特定の核酸配列に結合するデンド
リマー／デンドリマー複合体と、構造部１が第１配列の近傍にある試料中の別の
特定核酸配列に結合するデンドリマーとを適用することができる。その場合、構
造部２は標識化合物または標識化合物で置換されたプローブとすることができる
。もちろん、さらなるデンドリマー／デンドリマー複合体を同じ様式で構築して
もよい。これにより、観察されるシグナルの著しい増幅が得られる。
【０１１１】 ４．３の原理は上記２で説明した多層系に拡張することができる。
【０１１２】 ５．本デンドリマー／デンドリマー複合体は、ＤＮＡのセンス鎖とアンチセン
ス鎖の同時検出に特に適している。構造部１を、センス鎖の核酸配列に結合する
ように選択し、構造部２をアンチセンス鎖の核酸配列に結合するように選択する
ことができる。構造部１および／または構造部２の１つまたはそれ以上を標識化
合物または標識化合物で置換されたプローブになるように選択して、検出を可能
にすることができる。もう一つの選択肢として、多層系を上記と同じ方法で（す
なわち構造部１および／または構造部２の１つまたはそれ以上を、試料中の関連
物質に結合しないプローブとする）構築することもできる。これは、例えば異な
るＤＮＡ、ペプチド核酸、ペプチド、抗体または抗原などでありうる。
【０１１３】 ６．本デンドリマー／デンドリマー複合体は構造部１／構造部２を介して粒子
に結合することができる。次に１つまたはそれ以上の構造部１／構造部２をプロ
ーブとし、残りを標識化合物とすることができる。
【０１１４】 ７．本デンドリマー／デンドリマー複合体は、樹状コア中に標識を含有するこ
とができる（これは樹状コアが官能基を含有する場合に可能）。また、構造部１
／構造部２をプローブ中の官能基を介して内部的に標識することもできる。
【０１１５】 ８．２以上の構造部２が互いに近接する配列に向けられてもよい。その場合、
構造部１は適宜、標識化合物でありうる。
【０１１６】 ９．本デンドリマー／デンドリマー複合体は、樹状コア内に１つまたはそれ以
上の核酸配列および／またはペプチド核酸成分を適宜含むことができる。
【０１１７】 １０．本デンドリマー複合体は、本明細書に定義するいくつかのデンドリマー
が結合している四量体型ストレプトアビジンまたはデキストラン高分子などのタ
ンパク質を適宜含むことができる。本デンドリマー複合体は、各々、４、８、１
６、さらには３２個までの結合した標識化合物（フルオレセインなど）を適宜持
つことができる。本デンドリマーは緩やかな（ｌｏｏｓｅ）構造を持つので消光
は全くまたはほとんど起こらず、さらに本デンドリマー／デンドリマー複合体は
良好な溶解度を有している。これはもちろんシグナルの著しい増強をもたらす。
【０１１８】 １１．デンドリマー複合体は、いくつかのデンドリマーが結合したＤＮＡ鎖を
適宜含むことができる。例えば、１つのデンドリマーにそれぞれ１０〜１５塩基
を組み込むことができる。デンドリマーが標識化合物を含む場合は、これがシグ
ナルの著しい増強／増幅をもたらす。
【０１１９】 本発明のもう一つの側面は、本明細書に定義する少なくとも１つのデンドリマ
ーおよび／または少なくとも１つのデンドリマー複合体を含む検出系である。
【０１２０】 さらなる一側面として、本発明は、本明細書に定義する少なくとも１つのデン
ドリマーおよび／または少なくとも１つのデンドリマー複合体を含むシグナル増
幅系に関する。
【０１２１】 したがって本発明は、本明細書に定義するデンドリマーおよびデンドリマー複
合体の検出系としての使用、ならびに本明細書に定義するデンドリマーおよびデ
ンドリマー複合体のシグナル増幅系としての使用に関する。
【０１２２】 このような検出系または増幅系は、試料中の核酸配列、抗体、抗原、免疫複合
体、タンパク質またはペプチドの存在の検出に適している。
【０１２３】 さらに、本発明のデンドリマーおよびデンドリマー複合体は、様々な標識反応
に使用することができる。したがって本発明は、化合物を標識するために本明細
書に定義するデンドリマーおよびデンドリマー複合体を使用することに関する。
特に、標識される化合物は、ペプチド核酸、ＬＮＡ、ＲＮＡ配列、ＤＮＡ配列ま
たはそのアナログ、抗体、抗原、免疫複合体、タンパク質、ペプチドまたはその
誘導体、エピトープ、ストレプトアビジンおよびビオチンから選択される。
【０１２４】 標識反応のために、デンドリマーおよびデンドリマー複合体は、発蛍光団、ビ
オチン、ジニトロフェニル基、ジゴキシゲニン、放射性同位体標識、酵素標識、
色素、ケミルミネセンス標識、ハプテン、抗原または抗体標識、およびスピン標
識などの１つまたはそれ以上の標識化合物を適宜含むことができる。
【０１２５】 さらなる一側面として、本発明は、化合物を標識するための標識キットであっ
て、１つまたはそれ以上のデンドリマーおよび／またはデンドリマー複合体を含
むキットに関する。そのようなキットの一態様として、本キットはさらに標識化
合物を含む。もう一つの態様として、本キットはデンドリマーおよびデンドリマ
ー複合体が標識化合物を含むようなキットである。標識化合物は、発蛍光団、ビ
オチン、ジニトロフェニル基、ジゴキシゲニン、放射性同位体標識、酵素標識、
色素、ケミルミネセンス標識、ハプテン、抗原または抗体標識、およびスピン標
識から適宜選択することができる。
【０１２６】 化合物を検出するための検出キットであって、本明細書に定義する１つまたは
それ以上のデンドリマーおよび／または１つまたはそれ以上のデンドリマー複合
体を含み、前記デンドリマーおよび／またはデンドリマー複合体が１つまたはそ
れ以上の標識化合物を含むキットを提供することも、本発明の目的である。もち
ろん、前記デンドリマー／デンドリマー複合体は無標識であってもよく、その場
合、キットはデンドリマー／デンドリマー複合体を標識する手段を含むことがで
きる。適切な標識化合物／標識手段には、発蛍光団、ビオチン、ジニトロフェニ
ル基、ジゴキシゲニン、放射性同位体標識、酵素標識、色素、ケミルミネセンス
標識、ハプテン、抗原または抗体標識、およびスピン標識がある。
【０１２７】 本発明のデンドリマーは、例えばペプチド合成に関して使用される方法など、
様々な方法で製造できる。固相および液相合成法が必要な場合、それらを適用す
る方法は当業者にはすぐにわかるだろう。
【０１２８】 特に、デンドリマーのビルディングブロックは個別に合成することができる。
次に、デンドリマーを組み立てることができる。これにより、デンドリマーとそ
の保護型を製造することができる。
【０１２９】 もう一つの選択肢として、デンドリマーを段階的方法で合成してもよい。この
場合は、デンドリマー全体を合成し、最後の工程で様々な構造部を結合させる。
これにより、デンドリマーとその保護型を製造することができる。
【０１３０】 さらにもう一つの製造法では、デンドリマーを段階的に溶液状態で合成するこ
とができる。この場合は、反応生成物を沈殿させ、所望の生成物が得られるまで
その作業を繰り返す。
【０１３１】 合成には様々な溶媒、試薬、保護基、活性化剤などを適用すべきである。ある
合成法の概略を以下に示す。これに関連して挙げる試薬等は他の合成法にも適用
することができる。
【０１３２】 すなわち、上に定義した式（Ｉ）のデンドリマーまたはその保護型を製造する
ための一方法は、 脱保護によって除去することができるいくつかの保護基を持つ樹状コアＡを樹
状コアＡの成分に応じて化学／ペプチド合成によって製造し、 要すれば、適切な脱保護剤を使って保護基を除去し、 要すれば、構造部１および／または構造部２を樹状コアＡに結合することによ
ってデンドリマーを得る、 ことからなる。
【０１３３】 式（Ｉ）のデンドリマーまたはその保護型を製造するためのもう一つの方法は
、 樹状コアＡの成分に応じて、化学／ペプチド合成により、樹状コアＡ用のビル
ディングブロックを製造し、 脱保護によって除去することが可能ないくつかの保護基を持つ樹状コアＡを組
み立て、 要すれば、適切な脱保護剤を使って保護基を除去し、 要すれば、構造部１および／または構造部２を樹状コアＡに結合することによ
ってデンドリマーを得る、 ことからなる。
【０１３４】 保護基の数は構造部１および構造部２の数（すなわちｘ１およびｘ２の数）と
一致しうることを理解すべきである。しかし、保護基がそれより少ない場合も多
い場合も考えられる。
【０１３５】 本発明のデンドリマーまたはその保護型を製造するためのさらにもう一つの方
法は、 保護されていてもよい出発物質を基質（例えばポリエチレングリコール化合物
）に結合して、可溶性の結合生成物とし、 上記結合生成物を必要であれば脱保護して、溶液状態での結合反応に付し、 その結果生成した生成物を沈殿させ、 要すれば上記の操作を繰り返すことにより、デンドリマーまたはその保護型を
得る、 ことからなる。
【０１３６】 保護基はオルトゴナルな（orthogonal）化学反応を使用するかどうかに応じて
（下記参照）、１段階または多段階（例えば２段階）で除去することができる。
所望であれば反応は適切な溶媒中で行なうことができる。反応を促進するために
反応温度を調節することができる。
【０１３７】 本発明のデンドリマー複合体およびその保護型は、当業者に知られている結合
法によって組み立てることができる。
【０１３８】 したがってさらなる一側面として、本発明は、本明細書に記載する方法によっ
て得ることのできるデンドリマーおよびデンドリマー複合体ならびにその保護型
に関する。
【０１３９】 合成および組み立ての非限定的な例を以下に記載する。
【０１４０】 １つの合成原理を以下に説明する。他の合成原理は実施例で述べる。
【０１４１】 式（Ｉ）： （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2 （Ｉ） ［式中、Ａは少なくとも１つのＮ原子分岐点を持つ樹状コアであり、前記分岐点
は天然アミノ酸の一部ではなく、Ａは少なくとも１つのエーテル基を含んでおり
； 構造部１および構造部２はそれぞれ独立して、所望により１つまたはそれ以上
の標識化合物で置換されているプローブ、標識化合物または反応性基を持つプロ
ーブであって； ｘ１は１、およびｘ２は０または１〜１２００の整数である］ のデンドリマーの製造方法であって、以下の工程を含む方法： （ａ）式： 構造部１−Ｚ−（構造部２）y ［式中、Ｚは少なくとも１つの分岐点を含有する基であり、構造部１および構造
部２は、同一であっても異なってもよい適切な保護基であり、ｘ２は２または３
である］ の化合物を、所望により適切な溶媒中で適切な脱保護剤と反応させて、式：構造
部１−Ｚの化合物および式：Ｚ−（構造部２）y の化合物［式中、構造部１およ
び構造部２は保護基である］を得る工程、 （ｂ）工程（ａ）で得た化合物を、所望により適切な溶媒中で互いに反応させ
て、式： 構造部１−Ｚ［Ｚ−（構造部２）y ］y （ＩＩＩ） ［式中、構造部１および構造部２は保護基である］ の化合物を得る工程、 （ｃ）所望により、工程（ｂ）で得た化合物を所望により適切な溶媒中で後続
の反応のために適切な脱保護剤で脱保護し、また所望により、得られた化合物を
互いにまたは工程（ａ）または（ｂ）の化合物の一つと反応させる工程、 （ｄ）生成する保護化合物を得る工程（得られた保護化合物は所望により適切
な溶媒中で後続の反応のために適切な脱保護剤で脱保護してもよい）、 （ｅ）工程（ｃ）および（ｄ）を所望の回数繰り返すことにより、式： 構造部１−Ａ−（構造部２）x2 （ＩＶ） ［式中、構造部１および構造部２は保護基であり、ｘ２は上記と同意義であり、
Ａは構造： Ｚ［Ｚ］z ［）y ］z （Ｉａ） （式中、ｚは上記と同意義） を持つ樹状コアである］ の化合物を得る工程、 （ｆ）要すれば、保護基、構造部１および構造部２を適切な脱保護剤を使って所
望により適切な溶媒中で同時に除去するか、個別に除去し、それによって得られ
る脱保護化合物を構造部１および構造部２と結合して、式（Ｉ）のデンドリマー
を得る工程。
【０１４２】 一般式（Ｉ）： （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2 （Ｉ） ［式中、Ａは少なくとも１つのＮ原子分岐点を持つ樹状コアであり、前記分岐点
は天然アミノ酸の一部ではなく、Ａは少なくとも１つのエーテル基を含む； 構造部１および構造部２はそれぞれ独立して、所望により１つまたはそれ以上
の標識化合物で置換されていてよいプローブ、標識化合物、反応性基を持つプロ
ーブである； ｘ１およびｘ２は独立して０または１〜１２００の整数である］ のデンドリマーおよびその保護型は、以下の工程を含む方法によって製造するこ
とができる。 （ｆ１）１つまたはそれ以上の一般式： 構造部１−Ａ−（構造部２）x2 （ＩＶ） ［式中、Ａおよびｘ２は上記と同意義であり、構造部１および構造部２は適切な
保護基である］ の化合物を、適切な脱保護剤を使って、所望により適切な溶媒中で、脱保護によ
って１つまたはそれ以上の一般式： Ａ−（構造部２）x2 ［式中、構造部２は保護基である］ の化合物に変換する工程、 （ｆ２）工程（ｆ１）の化合物を式：Ａ−（構造部１）x1［式中、構造部１は保
護基である］の化合物と反応させるか、または工程（ｆ１）の化合物を互いに反
応させることにより、一般式： （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2 （Ｖ） ［式中、ｘ１およびｘ２は上記と同意義であり、構造部１および構造部２は保護
基である］ の化合物を得る工程、 （ｆ３）要すれば、保護基、構造部１および構造部２を適切な保護剤を使って所
望により適切な溶媒中で同時にまたは個別に除去し、そのようにして得た脱保護
化合物を上に定義した構造部１および構造部２と結合させることにより、式（Ｉ
）のデンドリマーを得る工程。
【０１４３】 上記の説明で添字「ｙ」は与えられたＺ基が二分岐（ｙが２）であるか、三分
岐（ｙが３）であるかを定義する。
【０１４４】 本発明に関して「保護基」とは適切な脱保護剤で除去することのできる基を意
味するものとする。適切な保護基の例はＦｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｍｔｔ、Ｄｄｅ、Ａ
ｌｌ、ＯＤｍａｂ、Ａｌｏｃ、ＯｔＢｕ、ＯＭｅ、ＯＢｚ、Ｚ、ＭＯＭおよびベ
ンジルオキシカルボニルである。保護基の選択は、なかんずく、保護する必要の
ある基のタイプに依存する。上記の基の一部は−ＣＯＯＨ基の保護に適しており
、また他の基は−ＮＨ2 基の保護に適している。２つのタイプの保護基を使用す
る場合は、それらがオルトゴナル(orthogonal)保護基になるように適宜選択する
。さらに、保護基は中間体化合物上および／または生成するデンドリマー上の様
々な構造部に適合するように選択すべきである。
【０１４５】 「適切な溶媒」という用語は、反応の進行を許す溶媒を包含するものとする。
適切な溶媒の例は、例えば水、ならびにアセトン、アセトニトリル、シクロヘキ
サン、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ジクロロメタン、ＮＭＰ、ＤＩＰＥＡ、ベンゼン、ト
ルエンなどの有機溶媒およびそれらの混合物である。
【０１４６】 本発明に関して「適切な脱保護剤」とは、保護基の除去を可能にする薬剤を意
味するものとする。脱保護剤の選択は保護基の選択に依存する。適切な脱保護剤
の例はＴＦＡ、ＴＦＭＳＡ、ＨＢｒ、ＨＣｌ、ＨＦ、ピペリジン、ＤＢＵ、ヒド
ラジン、塩基、求核剤、Ｐｄ／Ｃ／Ｈ2 およびＰｄ／ＡｃＯＨ／ＮＭＭである。
【０１４７】 上に概説した方法を以下により詳細に説明する。
【０１４８】 工程（ａ） 工程（ａ）では、式：構造部１−Ｚ−（構造部２）y ［式中、構造部１および
構造部２は保護基である］の化合物（いわゆるデンドリマーモノマー）を適切な
脱保護剤と反応させる。この反応は溶媒中で行なう場合もあるし溶媒中で行なわ
ない場合もある。すなわち脱保護剤は十分な溶解度を示す場合がある。適切な溶
媒は、例えば水および上述した有機溶媒ならびにその混合物である。Ｚ基の構造
部１側がアミンである場合、適切な保護基は例えばＢｏｃ、Ｆｍｏｃ、ベンジル
オキシカルボニル、フタルイミド、Ｍｔｔ、Ｍｍｔおよびトリフルオロアセチル
などである。構造部１基が酸である場合、適切な保護基は例えばベンジル、メチ
ル、ｔｅｒｔ−ブチル、ＭＯＭおよびシリルエステルなどである。構造部２にも
、保護すべき基がアミンであるか酸基であるかを考慮して、同じ保護基を適用す
ることができる。脱保護剤は除去すべき保護基に適合するように選択される。例
えば強酸もしくはＨＢｒによって、または様々な脱保護剤を混合することによっ
て、両方の脱保護基の除去を同時に達成することができる。脱保護は室温で、ま
たは例えばドライアイスで冷却しながら、または例えば１００〜１８０℃の高温
で行なうことができる。光化学的脱保護も一つの選択肢になりうる。
【０１４９】 ある場合には、それぞれに出発物質を含有する２つの異なる反応容器を使って
合成を開始し、一方の容器では構造部１の保護基を除去し、他方の容器では構造
部２の保護基を除去することが有利である。もう一つの選択肢として、構造部１
および構造部２の保護基を同じ脱保護剤では除去できないように選択して、同じ
反応容器で反応を行なうこともできる。いずれの場合も、式：構造部１−Ｚの化
合物および式：Ｚ−（構造部２）y の化合物［式中、構造部１および構造部２は
保護基である］が得られる。
【０１５０】 保護基の除去は、さらなる反応を行なう準備の整った官能基をＺ基が持つよう
になることを意味し、官能基の数は存在しうる分岐点の数に依存する。そのよう
な官能基には−ＣＯＯＨ、−ＮＨ2 、環状無水物、チオール、アルコールおよび
ハロゲンが含まれる。
【０１５１】 ２種類の出発化合物を使用して、Ｚ基が互いに異なっているデンドリマーを生
成させてもよい。
【０１５２】 工程（ｂ） 工程（ｂ）では、工程（ａ）で得た化合物を互いに反応させることにより、式
（ＩＩＩ）：構造部１−Ｚ［Ｚ−（構造部２）y ］y の中間体化合物［式中、構
造部１および構造部２は保護基である」を得る。この反応は室温で、または例え
ばドライアイスなどによる冷却下に、または１００℃〜１８０℃の温度に加熱し
ながら行なうことができる。この反応に適した溶媒には上述の溶媒およびそれら
の混合物がある。しかしこの反応を溶媒中で行なう必要はない。
【０１５３】 この工程の生成物は式（Ｉ）の保護型デンドリマーである。構造部２の保護基
の除去し、構造部２基を結合すると、デンドリマーが生成する。ｙが２である場
合、デンドリマーは４つの官能基を持つ。ｙが３である場合、デンドリマーは２ 3 ＝６官能基を持つ。これらの一部は遊離型であることができる。これはすなわ
ち、官能基の一部が構造部２基を持たないことを意味する。保護基を除去しない
場合は保護型デンドリマーが得られる。
【０１５４】 工程（ａ）と同様に、保護基の除去により、反応に供することができる複数の
官能基を持つ化合物が得られる。
【０１５５】 しかし中間体化合物を樹状コアを伸長させるさらなる反応に供することもでき
る。これが望ましい場合は工程（ｃ）に従って作業を進める。そうでない場合は
工程（ｆ）に従って作業を進める。
【０１５６】 工程（ｃ） 工程（ｃ）では、樹状コアをさらに伸長させる。さらなる伸長を望まない場合
は、工程（ｂ）で得た化合物を工程（ｆ）に従った反応に供する。したがって工
程（ｃ）は随意の工程である。
【０１５７】 式（ＩＩＩ）：構造部１−Ｚ［Ｚ−（構造部２）y ］y （構造部１および構造
部２は保護基）を持つ工程（ｂ）で得た中間体化合物を適切な脱保護剤を使って
所望により適切な溶媒中で脱保護する。脱保護剤は構造部１の保護基または構造
部２の保護基、あるいはかわりに構造部１の保護基と構造部２の保護基の両方を
同時に除去することができるように選択する。したがって脱保護剤の混合物を使
用することができる。適切な脱保護剤は上述した脱保護剤である。
【０１５８】 脱保護により、さらなる反応に利用できる複数の官能基を持つ化合物が得られ
る。そのような官能基は、例えば−ＣＯＯＨ、−ＮＨ2 、環状無水物、チオール
、アルコールおよびハロゲンである。
【０１５９】 脱保護は所望により適切な溶媒中で行なうことができる。適切な溶媒または溶
媒の混合物の例は上記のとおりである（工程（ａ）および（ｂ））。溶媒／複数
の溶媒の選択は保護基および反応条件の選択に依存する。
【０１６０】 反応は室温で、または例えばドライアイスなどで冷却しながら、または加熱し
ながら行なうことができる。光化学反応も可能である。
【０１６１】 脱保護は、上述のように２つの反応容器で行なうことができ、この場合は一方
の容器では構造部１を除去して式：Ｚ［Ｚ−（構造部２）y ］y の化合物を得て
、もう一つの容器では構造部２を除去して式：構造部１−Ｚ［Ｚ］y の化合物を
得る（式中、構造部１および構造部２は保護基であり、各［Ｚ］はさらなる反応
に利用できるｙ個の官能基を持つ）。上記の式から明らかなように、そのような
［Ｚ］基がｙ個存在する。
【０１６２】 このようにして得た化合物は互いに反応させるか、工程（ａ）または（ｂ）の
化合物の一つと反応させることができる。もう一つの選択肢として、脱保護した
化合物を１つまたはそれ以上の相異なるＺ基を持っている化合物と反応させて、
様々なＺ基が相互に異なっているデンドリマーを生成させることもできる。
【０１６３】 脱保護した化合物を構造部１の保護基が除去された化合物と反応させると、構
造部１および構造部２との結合により、多数の構造部１および構造部２を持つ式
（Ｉ）のデンドリマーが生成する。保護基を除去しない場合は、保護型デンドリ
マーが得られる。
【０１６４】 脱保護した化合物を構造部２の保護基が除去された化合物と反応させると、こ
の反応で構造部１および構造部２との結合により、式（Ｉ）のデンドリマーが生
成する。
【０１６５】 工程（ｄ） 工程（ｄ）では、工程（ｃ）で得た保護化合物をさらなる反応のために脱保護
することができる。脱保護は所望により適切な溶媒中で行なう。適切な溶媒の例
は上記工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の項に記載した溶媒である。脱保護は、
除去すべき保護基に適合するように、またさらに異なる保護基を除去すべきかど
うかを考慮して選択された適切な脱保護剤を使って行なわれる。適切な脱保護剤
の例は上述している。
【０１６６】 工程（ｅ） 工程（ｅ）では、樹状コアが所望のサイズになるまで、脱保護と反応を所望の
回数だけ繰り返す。したがって式（ＩＶ）：構造部１−Ａ−（構造部２）x2の中
間体化合物（式中、構造部１および構造部２は保護基である）が得られる。
【０１６７】 所望する型の１つまたはそれ以上のデンドリマーが得られたら、それらを１つ
またはそれ以上の核酸またはＤＮＡ配列および／またはペプチド核酸成分に結合
することにより、それらの配列を樹状コア内に持つデンドリマーを得ることがで
きる。
【０１６８】 工程（ｆ） 工程（ｆ）では構造部１の保護基と構造部２の保護基の除去を行なう。構造部
１の保護基と構造部２の保護基の除去は同時に行なうか、別々の工程として行な
うことができる。これはなかんずく脱保護剤の選択と保護基の選択に依存する。
適切な脱保護剤は上に挙げた。この反応は適切な溶媒中またはそのような溶媒の
混合物中で行なう場合も、溶媒または溶媒の混合物中では行なわない場合もある
。適切な溶媒の例は上に挙げた。
【０１６９】 次に、脱保護した中間体化合物を適切な構造部１および構造部２に結合して式
（Ｉ）のデンドリマーを得る。結合条件は、構造部１および構造部２の性質に適
合するように選択する。結合は適切な結合剤、例えばカルボジイミド、ＨＢＴＵ
、ＨＡＴＵ、ＴＢＴＵ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＰｙＡＯＰ、ＤｈｂｔＯＨエステ
ル、Ｐｆｐ、ＢｔおよびＡｔなどを使って適宜行なうことができる。結合は所望
により上述したような溶媒または様々な溶媒の混合物中で行なうことができる。
結合は室温で、また冷却下に、または加熱下に、または光化学反応を利用して行
なうことができる。結合はデンドリマーを極めて反応性の高い活性型（例えば無
水物、ハロアセチル誘導体および他のハロゲン化物、チオール、マレイミド、お
よびＮＨＳエステルなど）に変換することによって達成することができる。
【０１７０】 工程（ｆ１） 工程（ｆ１）では、式（ＩＶ）：構造部１−Ａ−（構造部２）x2の中間体化合
物（式中、構造部１および構造部２は保護基である）を、適切な脱保護剤を使っ
て脱保護する。適切な脱保護剤は、例えば上述した脱保護剤である。この反応は
適切な溶媒またはそれら溶媒の混合物中で行なう場合も、溶媒または溶媒混合物
中では行なわない場合もある。この反応は室温で、または例えばドライアイスで
冷却しながら、または約１００〜１８０℃に加熱しながら行なうことができる。
【０１７１】 目的は、複数の構造部を樹状コアの両「側」に提示する能力を持つ式（Ｉ）の
デンドリマーを得ることである。
【０１７２】 構造部１の保護基の除去により、式：Ａ−（構造部２）x2の化合物（構造部２
は保護基である）が得られる。
【０１７３】 サイズが小さい樹状コアが望ましい場合は、工程（ｂ）で得た式（ＩＩＩ）の
中間体化合物を、構造部１の保護基も除去されている化合物との反応（工程（ｃ
））に供することができる。この方法でも式（Ｉ）の保護型デンドリマーが得ら
れるが、その樹状コアの大きさは、式（ＩＶ）の中間体化合物の反応によって得
られる式（ＩＩ）のデンドリマーよりも小さい。
【０１７４】 工程（ｆ２） 工程（ｆ２）では、工程（ｆ１）の脱保護化合物を、保護基１（Ｐｒｏｔ１）
が除去されているもう一つの式（ＩＶ）の中間体化合物との反応に供する。ある
いは、工程（ｆ１）の脱保護化合物を保護基１が除去されているもう一つの化合
物との反応に供して、Ｚ基が互いに相違しているデンドリマーを生成することも
できる。
【０１７５】 上に示した他の工程については、反応を溶媒ありまたは溶媒なしで行なうこと
ができる。反応は室温で、または冷却下もしくは加熱下に、または光化学反応に
よって行なうことができる。
【０１７６】 適切な脱保護剤は、例えば上記の脱保護剤である。
【０１７７】 この反応により、式（Ｖ）：（構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2の中間体化
合物（構造部１および構造部２は保護基である）が得られる。
【０１７８】 工程（ｆ３） 工程（ｆ３）では、保護基を除去する。保護基の除去により、反応性の官能基
が生成する（活性化された基）。そのような官能基は例えば−ＣＯＯＨ、−ＮＨ 2 、環状無水物、チオール、アルコールおよびハロゲンなどである。構造部１の
保護基と構造部２の保護基の除去は同時にまたは多くの工程で行なうことができ
る。
【０１７９】 次に、構造部１および構造部２との結合を行なう。結合は上記工程（ｆ）で説
明したように行なわれる。
【０１８０】 構造部１の保護基と構造部２の保護基は相異なってもよいし、同一であっても
よい。ほとんどの目的には、構造部１の保護基と構造部２の保護基が相異なるこ
とが最も好適である。こうすることにより、相異なる構造部１と構造部２の結合
が可能になるからである。
【０１８１】 上記のどの工程でも、感受性の高い側鎖基を保護する必要があるかもしれない
。これは、Ｂｏｃ、ｔＢｕ、ＺおよびＣｂｚなどの適切な一時的側鎖保護基を用
いることによって行なうことができる。側鎖保護基はＴＦＡ、ＴＦＭＳＡ、ＨＢ
ｒ、ＨＣｌもしくはＨＦなどの酸、塩基、またはピリジンなどの求核剤を使って
除去することができる。
【０１８２】 従来のデンドリマー化合物製造法と比較すると、本発明の方法は液相反応であ
るのに対して、大半の従来法は固相法に基づいている。
【０１８３】 様々な中間体化合物も本発明の範囲に包含される。さらに、本発明は、このよ
うな製造方法によって得ることのできるデンドリマーおよび中間体も包含する。
【０１８４】 本発明を以下の非限定的な実施例によりさらに説明する。
【０１８５】 実施例 実施例１１．１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０ −トリオキサペンタデカンの調製；図４，Ｎｏ．１参照 ２１．８ｇ、０．１ｍｏｌの（Ｂｏｃ）２０を溶解させたジオキサン（２００
ｍｌ）を、１１０ｇ、０．５ｍｏｌの１，１３−ジアミノ−４，７，１０−トリ
オキサトリデカンを溶解させたジオキサン（４００ｍｌ）に滴下して加えた。添
加後に２０分攪拌し、さらに１時間攪拌後、溶媒をエバポレートし、得られた油
を水（３００ｍｌ）とジクロロメタン（３００ｍｌ）との間で分配した。有機相
を濃縮して油とし、シリカでのカラムクロマトグラフィーにより精製した。生成
物を１０％アンモニア飽和メタノールを含むジクロロメタンで溶出させた（ｒ．
ｆ．０．５）。収量は無色油（７２％）２３．０ｇ。Ｃ15Ｈ32Ｎ2 Ｏ5 について
計算したＭｗ．は３２０．３。測定値は３２１．９（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯ
Ｆ ＭＳ）。
【０１８６】 実施例２１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−ト リオキサペンタデカン−１５−ビス（ベンジルオキシカルボニルメチル）の調製 、図４，Ｎｏ．２ 構造部１−Ａ−（構造部２）2 の形を有し、樹状コアＡ＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −、構造
部１＝Ｂｏｃ、構造部２＝ＯＢｚ、ｘ１＝１、ｘ２＝２である、保護されたデン
ドリマーモノマー
【０１８７】 ６．４ｇ、０．０２ｍｏｌの１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１
５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカンを、ＤＭＦ（２５ｍｌ）と
ＤＩＰＥＡ（１３ｍｌ）中に溶解させた。１０．０ｇ、４．３ｍｏｌの２−ブロ
モ酢酸ベンジルエステルを加え、５分後、反応混合物を８０℃まで３５分間さら
に加熱した。溶媒をエバポレートし、残渣を飽和ＮａＨＣＯ3 （５００ｍｌ）と
酢酸エチル（５００ｍｌ）との間で分配した。有機相を水（２×５００ｍｌ）で
洗浄し、エバポレートして乾燥させ、シリカで精製し、生成物を溶出させた（ｒ
．ｆ ０．５、１：１の酢酸エチル／ヘキサンを使用）。収量は淡黄油（８０％
）９．９ｇ。Ｃ33Ｈ48Ｎ2 Ｏ9 について計算したＭｗは６１６．８。測定値は６
１８．２（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０１８８】 実施例３３．１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０ −トリオキサペンタデカン−１５−二酢酸の調製、図４，Ｎｏ．３ 構造部１−Ａ−（遊離酸）2 の形を有し、Ａ＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −、構造部１＝Ｂｏ
ｃ、ｘ１＝１であり、樹状コアが遊離酸で終わる、脱保護されたデンドリマーモ
ノマー
【０１８９】 ３．０９ｇ、５ｍｍｏｌの１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５
−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビス（ベンジルオキ
シカルボニルメチル）をメタノール（３０ｍｌ）中に溶解させた。１０％Ｐｄ／
Ｃ（３００ｍｇ）を加え、反応混合物を室温、室圧で１時間水素添加した（脱保
護）。Ｐｄ／Ｃをスピンダウンし、上清を濃縮して乾燥させた。収量は無色樹脂
（９９％）２．２ｇ。Ｃ19Ｈ36Ｎ2 Ｏ9 について計算したＭｗ．は４３６．５。
測定値は４３７．９（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０１９０】 実施例４４．１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビス（ ベンジルオキシカルボニルメチル）（ＴＦＡ付加物）の調製、図４，Ｎｏ．４ 式（遊離アミン）−Ａ−（構造部２）2 を有し、Ａ＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（
ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −、構造部２
＝ＯＢｚ、ｘ２＝２であり、樹状コアが遊離アミンの形で終わる、デンドリマー
【０１９１】 ６．７８ｇ、１１ｍｍｏｌの１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１
５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビス（ベンジルオ
キシカルボニルメチル）をＴＦＡ（２×２０ｍｌ）から２度エバポレートし、乾
燥させた。収量は淡黄油（１００％）としてＴＦＡ付加物１３ｇ。Ｃ28Ｈ40Ｎ2 Ｏ7 について計算したＭｗ．は５１６．５。測定値は５１７．９（ＭＨ+ 、ＭＡ
ＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０１９２】 実施例５１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−ト リオキサペンタデカン−１５−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０ ，１３−トリオキサ−ヘプタデカン−１７−ビス（ベンジルオキシカルボニルメ チル）］の調製、図４，Ｎｏ．５ 構造部１−Ａ−（構造部２）2 の形を有し、樹状コアＡ＝３個の−ＮＨ（ＣＨ 2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −
基、構造部１＝Ｂｏｃ、構造部２＝ＯＢｚ、ｘ１＝１、ｘ２＝４である、保護さ
れたデンドリマー
【０１９３】 １３ｇ、１１ｍｍｏｌの１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタ
デカン−１５−ビス（ベンジルオキシカルボニルメチル）（ＴＦＡ付加物）をＤ
ＭＦ（２５ｍｌ）とトリエチルアミン（７．５ｇ）中に溶解させた。２．２ｇ、
４．９ｍｍｏｌの１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−
４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−二酢酸を含むＤＭＦ（４ｍｌ）
を加え、次いで６．２４ｇ、１２ｍｍｏｌのＰｙＢＯＰを加えた。混合物を４５
℃で２時間攪拌し、溶媒をエバポレートした。残渣を飽和ＮａＨＣＯ3 （２００
ｍｌ）とＤＣＭ（５００ｍｌ）との間で分配した。ＤＣＭ相を水（２×２００ｍ
ｌ）で２度さらに抽出し、濃縮して乾燥させた。得られた油をシリカで精製し、
１５％メタノールを含む酢酸エチルで溶出した（ｒ．ｆ．０．５）。収量は粘性
油（５３％）として３．７ｇ。Ｃ75Ｈ112 Ｎ6 Ｏ21について計算したＭｗ．は１
４３３．８。測定値は１４３５．１（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０１９４】 実施例６１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−ト リオキサペンタデカン−１５−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０ ，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−二酢酸］の調製、図４，Ｎｏ．６ 構造が構造部１−Ａ−（遊離酸）4 （ＩＶ）であり、樹状コアＡが３個の−Ｎ
Ｈ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ
））2 −基を含んでなり、構造部１＝Ｂｏｃ、ｘ１＝１であり、樹状コアが遊離
酸の形−ＣＯＯＨで終わる、部分的に保護されたデンドリマー
【０１９５】 １．４３ｇ、１ｍｍｏｌの１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５
−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビス［３，１７−ジ
アザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス−（
ベンジルオキシカルボニルメチル）］をメタノール（１５ｍｌ）中に溶解させた
。１０％Ｐｄ／Ｃ（１５０ｍｇ）を加え、反応混合物を室温、室圧で１時間水素
添加した。Ｐｄ／Ｃをスピンダウンし、上清を濃縮して乾燥させた。収量は粘性
油（９７％）として１．０４ｇ。Ｃ47Ｈ88Ｎ6 Ｏ21について計算したＭｗ．は１
０７３．２。測定値は１０７５．２（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０１９６】 実施例７１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビス［３， １７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７− ビス−ベンジルオキシカルボニルメチル）］の調製、図４，Ｎｏ．７ 式が（遊離アミン）−Ａ−（構造部２）2 であり、樹状コアＡが３個の式−Ｎ
Ｈ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ
））2 −成分を含んでなり、構造部２＝ＯＢｚ、ｘ２＝４であり、デンドリマー
が遊離のアミンの形−ＮＨ2 で終わる、部分的に保護されたデンドリマー
【０１９７】 ７．１５ｇ、５ｍｍｏｌの１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５
−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビス［３，１７−ジ
アザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス（ベ
ンジルオキシカルボニルメチル）］をＴＦＡから２度エバポレートし、乾燥させ
た（２×３０ｍｌ）。収量は淡黄油（１００％）としてＴＦＡ付加物約１５ｇ。
Ｃ70Ｈ104 Ｎ6 Ｏ19について計算したＭｗ．は１３３３．６。測定値は１３３４
．１（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０１９８】 実施例８１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−ト リオキサペンタデカン−１５−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０ ，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス（３，１７−ジアザ−２−オキソ −７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス［３，１７−ジアザ− ２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス（ベンジル オキシカルボニルメチル）］）］の調製、図５，Ｎｏ．８ 式が構造部１−Ａ−（構造部２）8 であり、樹状コアＡが１５個の式−ＮＨ（
ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）） 2 −成分を含んでなり、構造部１＝Ｂｏｃ、構造部２＝ＯＢｚ、ｘ１＝１、ｘ２
＝１６である、保護されたデンドリマー
【０１９９】 １５ｇ、５ｍｍｏｌの１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデ
カン−１５−ビス−［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオ
キサヘプタデカン−１７−ビス（ベンジルオキシカルボニルメチル）］（ＴＦＡ
付加物）をＤＭＦ（３０ｍｌ）とトリエチルアミン（９ｇ）に溶解させた。この
溶液に１．０４ｇ、０．９７ｍｍｏｌの１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）
−１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビス［３
，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７
−二酢酸］を加え、次いで３．１２ｇ、６ｍｍｏｌのＰｙＢＯＰを加えた。混合
物を４５℃で２時間攪拌し、溶媒をエバポレートした。残渣をＤＣＭ（２００ｍ
ｌ）とメタノール（２０ｍｌ）中にとり、飽和ＮａＨＣＯ3 （２００ｍｌ）で抽
出し、次いで水（２×５０ｍｌ）で抽出した。有機相をエバポレートして乾燥さ
せ、シリカで精製し、１５％メタノールを含むＤＣＭでエリューディング（elud
ing）（ｒ．ｆ．０．３）した。収量は無色油（３３％）２．１ｇ。Ｃ327 Ｈ496 Ｎ30Ｏ93について計算したＭｗ．は６３３５．７。測定値は６３３３．６（Ｍ
Ｈ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２００】 実施例９１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビス［３， １７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７− ビス−（ベンジルオキシカルボニルメチル）］の調製、図５，Ｎｏ．９ 式が（遊離アミン）−Ａ−（構造部２）2 であり、樹状コアＡが３個の式−Ｎ
Ｈ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ
））2 −成分を含んでなり、構造部２＝ＯＢｚ、ｘ２＝４であり、デンドリマー
が遊離のアミンの形−ＮＨ2 で終わる、部分的に保護されたデンドリマー
【０２０１】 １５ｇの１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−
ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカ
ン−１７−ビスベンジルオキシカルボニルメチル）］（５ｍｍｏｌのＴＦＡ付加
物、実施例７参照）をＤＣＭ（１５０ｍｌ）に溶解させ、０．５Ｍ Ｎａ2 ＣＯ 3 （１５０ｍｌ）で中和した。有機相を単離した。トルエン（５０ｍｌ）を加え
、溶媒をエバポレートした。収量は粘性油（８５％）として５．７ｇ。Ｃ70Ｈ10 4 Ｎ6 Ｏ19について計算したＭｗ．は１３３３．６。測定値は１３３４．９（Ｍ
Ｈ＋、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。この化合物は室温で緩慢なアンモニア分解
を受けることが観察された。
【０２０２】 実施例１０１−（２−ブロモアセチル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペ ンタデカン−１５−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３−ト リオキサヘプタデカン−１７−ビス（ベンジルオキシカルボニルメチル）］の調 製、図５，Ｎｏ．１０ （活性基）−Ａ−（構造部２）4 の形であり、活性基＝ブロモアセチル、構造
部２＝ＯＢｚ、ｘ２＝４であり、樹状コアが活性基で終わる、活性デンドリマー
【０２０３】 １，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビス［３
，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７
−ビス−（ベンジルオキシカルボニルメチル）］、９、５．７ｇ、４．２５ｍｍ
ｏｌを含むトルエン（２５ｍｌ）を、ブロモ酢酸無水物１．３ｇ、５ｍｍｏｌと
ルチジン（lutidine）８７０ｍｇ、８ｍｍｏｌとを含む、氷浴で冷却されたＤＣ
Ｍ（２５ｍｌ）に２０分かけて滴下して加えた。さらにＤＣＭ（１００ｍｌ）を
混合物に加え、次いでＮａＨＣＯ３（１００ｍｌ）で抽出した。有機相をろ過し
、エバポレートして乾燥させた。得られた油をシリカで精製し、１０％メタノー
ルを含むＤＣＭでエリューディング（eluding）（ｒ．ｆ．０．５）した。収量
は粘性油（８５％）として５．２５ｇ。Ｃ72ＢｒＨ105 Ｎ6 Ｏ20について計算し
たＭｗ．は１４５４．７。測定値は１４５６．１（ＭＨ＋、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
ＭＳ）。
【０２０４】 実施例１１１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−ト リオキサペンタデカン−１５−ビス（３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０ ，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス−［３，１７−ジアザ−２−オキ ソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス−（ベンジルオキシ カルボニルメチル）］）の調製、図５，Ｎｏ．１１ 構造部１−Ａ−（構造部２）8 の形であり、構造部１＝Ｂｏｃ、構造部２＝Ｏ
Ｂｚ、ｘ１＝１、ｘ２＝８であり、樹状コアＡが７個のＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（Ｃ
Ｈ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −を含んでなる
、保護されたデンドリマー
【０２０５】 ５．２５ｇ、３．６ｍｍｏｌの１−（２−ブロモアセチル）−１，１５−ジア
ザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビス［３，１７−ジアザ−
２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス（ベンジル
オキシカルボニルメチル）］と、５８０ｍｇ １．８ｍｍｏｌの１−（ｔｅｒｔ
−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタ
デカンとをＤＭＦ（６ｍｌ）とＤＩＰＥＡ（１ｍｌ）に溶解させた。混合物を８
０℃で２時間攪拌し、溶媒を除去した。得られた油をＤＣＭ（１００ｍｌ）中に
とり、飽和ＮａＨＣＯ3 （１００ｍｌ）で抽出し、次いで水（２×２０ｍｌ）で
洗浄した。溶媒除去後、生成物をシリカで精製し、１０％メタノールを含むＤＣ
Ｍでエリューディング（eluding）（ｒ．ｆ．０．３）した。収量は粘性油（８
１％）として４．５ｇ。Ｃ159 Ｈ240 Ｎ14Ｏ45について計算したＭｗは３０６７
．７３。測定値は３０６９．２（ＭＨ＋、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）。
【０２０６】 実施例１２１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−ト リオキサペンタデカン−１５−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０ ，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス（３，１７−ジアザ−２−オキソ −７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス［３，１７−ジアザ− ２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス（ベンジル オキシカルボニルメチル）］）］の調製、図６，Ｎｏ．１２ （遊離アミン）−Ａ−（構造部２）16の形であり、樹状コアＡが１５個の式−
ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（
Ｏ））2 −成分を含んでなり、構造部２＝ＯＢｚ、ｘ２＝１６、ｘ１＝０であり
、樹状コアが遊離アミンで終わる、部分的に保護されたデンドリマー
【０２０７】 実施例８の化合物（１００ｍｇ）をＴＦＡ（１ｍｌ）に溶解させ、５分後、生
成物をエーテルで沈澱させて単離し得た。収量は定量的であると思われた。Ｃ32 2 Ｈ488 Ｎ30Ｏ91について計算したＭｗ．は６２３５．７。測定値は６２３７．
３（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２０８】 実施例１３１−（ビオチニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカ ン−１５−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサ ヘプタデカン−１７−ビス（３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３− トリオキサヘプタデカン−１７−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１ ０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス（ベンジルオキシカルボニルメ チル）］）］の調製、図６，Ｎｏ．１３ 構造部１−Ａ−（構造部２）16の形であり、樹状コアＡが１５個の式−ＮＨ（
ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）） 2 −成分を含んでなり、構造部１＝ビオチニル、構造部２＝ＯＢｚ、ｘ１＝１、
ｘ２＝１６である、誘導対化（Derivatised）デンドリマー
【０２０９】 実施例１２の化合物（１００ｍｇ）をＮＭＰ（１ｍｌ）とＤＩＰＥＡ（０．１
ｍｌ）に溶解させ、ビオチン（５ｍｇ）を加え、次いでＰｙＢＯＰ（８ｍｇ）を
加えた。４５℃で１時間後、粗生成物をエーテル（８ｍｌ）で沈澱させて単離し
た。そのようにして得た化合物を１０ｍｌのＤＣＭに再溶解し、ＮａＨＣＯ3 （
１０ｍｌ）で抽出した。有機相を濃縮して乾燥させ、生成物を得た。収量は８０
ｍｇ（７９％）。Ｃ332 Ｈ502 Ｎ32Ｏ93Ｓについて計算したＭｗ．は６４６１．
８。測定値は６４６３．２（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２１０】 実施例１４１−（ビオチニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカ ン−１５−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサ ヘプタデカン−１７−ビス（３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３− トリオキサヘプタデカン−１７−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１ ０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス（カルボキシメチル）］）］の 調製、図６，Ｎｏ．１４ 構造部１−Ａ−（遊離酢酸）16の形であり、樹状コアＡが１５個の式−ＮＨ（
ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）） 2 −成分を含んでなり、構造部１＝ビオチニル、ｘ１＝１であり、デンドリマー
が遊離酢酸で終わる、デンドリマー
【０２１１】 実施例１３の化合物（８０ｍｇ）を２ｍｌのメタノールに溶解させ、３０ｍｇ
のＰｄ／Ｃを加えた。混合物を大気圧下で１時間水素添加した。触媒をろ過によ
り除去し、混合物を濃縮して乾燥させた。収量は：６２ｍｇ（１００％）。Ｃ22 0 Ｈ406 Ｎ32Ｏ93Ｓについて計算したＭｗ．は５０１９．７。測定値は５０２２
．３（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２１２】 実施例１５１−（ビオチニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−トリオキサペンタデカ ン−１５−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサ ヘプタデカン−１７−ビス（３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０，１３− トリオキサヘプタデカン−１７−ビス［３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１ ０，１３−トリオキサヘキサデカン−１６−（２，６−ジオキソモルホリン−４ −イル）］）］の調製、図７，Ｎｏ．１５ 構造部１−Ａ−（活性基）8 の形であり、樹状コアＡが７個の−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −を
有する１７個の成分および外縁の８個の−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（
ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 −（２，６−ジオキソモルホリン−４−イル）−基を
含んでなり、構造部１＝ビオチニル、ｘ１＝１であり、デンドリマーがＮ−２，
６−ジオキシモルホリンで終わる、活性デンドリマー。
【０２１３】 実施例１４の化合物（１０ｍｇ）をピリジン（１００μｌ）に溶解させ、ジイ
ソプロピルカルボジイミド（４μｌ）を加えた。５５℃で３０分後、生成物をエ
ーテルの添加により沈澱させた。収量は：９ｍｇ（９１％）。Ｃ220 Ｈ390 Ｎ32 Ｏ85Ｓについて計算したＭｗ．は４８７５．７。測定値は４８７６．５（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２１４】 実施例１６実施例１５由来のデンドリマーの最終結合、図７，Ｎｏ．１６ 式が構造部１−Ａ−（構造部２）8 の形であり、樹状コアＡが７個の−ＮＨ（
ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）） 2 −を有する１５個の基および外縁の８個の基＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 −（Ｎ（ＣＨ2 ＣＯＯＨ）−（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ
）−））を含んでなり、構造部１＝ビオチニル、構造部２＝リンカー−カルボキ
シフルオレセイン（ここで、リンカー＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（
ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨ−）、ｘ１＝１、ｘ２＝８である、デンドリマー
【０２１５】 実施例１５の化合物（９ｍｇ）をＮＭＰ（１００μｌ）に溶解させ、ＤＩＰＥ
Ａ（２０μｌ）と（１３−カルボキシフルオレセイニルアミド）−４，７，１０
−トリオキソトリデカン−１−アミン（１３ｍｇ）とを加えた。５５℃で１０分
後、粗生成物をエーテルで沈澱させることにより単離した。収量は：ＲＰ−ＨＰ
ＬＣ精製後において５．３ｍｇ（３０％）。Ｃ468 Ｈ682 Ｎ48Ｏ157 Ｓについて
計算したＭｗ．は９５０４．２９。測定値は９５０２．１（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ
−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２１６】 実施例１７１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−ト リオキサペンタデカン−１５−ビス〔３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０ ，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス−（３，１７−ジアザ−２−オキ ソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス〔３，１７−ジアザ −２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス−（カル ボキシメチル）〕）〕の調製、図８、Ｎｏ．１７ 型構造部１−Ａ−（遊離酢酸）16の部分的に保護されたデンドリマー、樹状コ
ア中心Ａ＝１５グループ、各々＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −、構造部１＝ＢＯＣ、ｘ１＝１、
樹状コア中心は遊離酸型で終結する。
【０２１７】 実施例８の化合物（１００ｍｇ）をメタノール２ｍｌに溶解し、３０ｍｇ Ｐ
ｄ／Ｃを添加した。混合物を１時間大気圧下で水素化した。触媒を濾過して除き
、混合物を減圧して乾燥した。収量：７７ｍｇ（１００％）。Ｃ215 Ｈ384 Ｎ30 Ｏ85Ｓの計算されたＭｗ．４７４９．３。結果４７５２．３（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤ
Ｉ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２１８】 実施例１８１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，１５−ジアザ−４，７，１０−ト リオキサペンタデカン−１５−ビス〔３，１７−ジアザ−２−オキソ−７，１０ ，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス（３，１７−ジアザ−２−オキソ −７，１０，１３−トリオキサヘプタデカン−１７−ビス〔３，１７−ジアザ− ２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサヘキサデカン−１６−（２，６−ジオ キソモルホリン−４−イル）〕）〕の調製、図８、Ｎｏ．１８ 型構造部１−Ａ−（活性基）8 の活性化されたデンドリマー、樹状コア中心Ａ
＝７個の−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（
ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −、および周囲の８個＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 −（２，６−ジオキソモルホリンを有する１５グ
ループ、構造部１＝Ｂｏｃ、ｘ１＝１、デンドリマーは活性化基で終結する。
【０２１９】 実施例１７の化合物（１０ｍｇ）をピリジン（１００μｌ）に溶解し、ジイソ
プロピルカルボジイミド（４μｌ）を添加した。５５℃で３０分後、生成物をエ
ーテルの添加により沈澱させた。収量：９ｍｇ（９１％）。Ｃ215 Ｈ384 Ｎ30Ｏ 85 の計算されたＭｗ．４７４９．３４。結果４７５１．２（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ
−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２２０】 実施例１９型（遊離アミン）−Ａ−（構造部２）8 のデンドリマーの調製、図８、Ｎｏ． １５グループを含有してなる樹状コア中心Ａ、７個の−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（
ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −、周囲の８
個＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 −（Ｎ（
ＣＨ2 ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−））、構造部２＝核酸塩基配列カルボキシ
フルオレセイニル−ＡＡＡＡＣＧＧＴＣＡＣＣＡＧＧ−リンカー−Ｌｙｓ−ＮＨ 2 −を有するペプチド核酸、式中、リンカー＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ） 2 ＯＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−、ｘ２＝８、構造部２はＬｙｓ上のε−Ｎを介してＡに結
合される、樹状コア中心は遊離アミン基で終結する。
【０２２１】 ペプチド核酸（カルボキシフルオレセイニル−ＡＡＡＡＣＧＧＴＣＡＣＣＡＧ
Ｇ−リンカー−Ｌｙｓ−ＮＨ2 ）（２ｍｇ）をＮＭＰ（１００μｌ）、ＴＦＡ（
２０μｌ）およびＤＩＰＥＡ（５０μｌ）に溶解した。実施例１８の化合物０．
２ｍｇを添加し、混合物を５５℃で３０分間保持した。粗生成物をエーテルの添
加により沈澱させ、次いでＴＦＡ（１００μｌ）中で懸濁させ再沈澱させた。生
成物を超遠心分離により精製し、過剰の未反応ペプチド核酸を３０ｋＤａ分離フ
ィルターを通過させた。収量：１ｍｇ（５６％）。Ｃ1754Ｈ2216Ｎ798 Ｏ483 の
計算されたＭｗ．４２２０４．７。結果４２２００（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯ
Ｆ ＭＳ）。
【０２２２】 実施例２０型（遊離アミン）−Ａ−（構造部２）8 のデンドリマーの調製、図９、Ｎｏ．２ ０ １５グループを含有してなる樹状コア中心Ａ、７個の−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（
ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −、周囲の８
個＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 −（Ｎ（
ＣＨ2 ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−））、構造部２＝核酸塩基配列カルボキシ
フルオレセイニル−ＴＡＡＣＣＣＴＡＡＣＣＣＴＡＡＣＣＣ−リンカー−Ｌｙｓ
−ＮＨ2 −を有するペプチド核酸、式中、リンカー＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（Ｃ
Ｈ2 ）2 ＯＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−、ｘ２＝８、構造部２はＬｙｓ上のε−Ｎを介して
Ａに結合される、樹状コア中心は遊離アミンで終結する。
【０２２３】 ペプチド核酸（カルボキシフルオレセイニル−ＴＡＡＣＣＣＴＡＡＣＣＣＴＡ
ＡＣＣＣ−リンカー−Ｌｙｓ−ＮＨ2 ）（１ｍｇ）をＮＭＰ（１００μｌ）、Ｔ
ＦＡ（２０μｌ）およびＤＩＰＥＡ（５０μｌ）に溶解した。実施例１８の化合
物０．１ｍｇを添加し、混合物を５５℃で３０分間保持した。粗生成物をエーテ
ルの添加により沈澱させ、次いでＴＦＡ（１００μｌ）中で懸濁させ再沈澱させ
た。生成物を超遠心分離により精製し、過剰の未反応ペプチド核酸を３０ｋＤａ
分離フィルターに通過させた。収量：０．６ｍｇ（６０％）。Ｃ1986Ｈ2560Ｎ85 4 Ｏ591 の計算されたＭｗ．４７５３０．１。結果４７６００（ＭＨ+ 、ＭＡＬ
ＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２２４】 実施例２１型（構造部１）−Ａ−（構造部２）8 のデンドリマーの調製、図９、Ｎｏ．２１ １５グループを含有してなる樹状コア中心Ａ、７個＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（
ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −、周囲の８
個＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 −（Ｎ（
ＣＨ2 ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−））、構造部１＝カルボキシフルオレセイ
ニル−ＴＴＴＴＧＣＣＡＧＴ−Ｌｙｓ、構造部２＝核酸塩基配列カルボキシフル
オレセイニル−ＴＡＡＣＣＣＴＡＡＣＣＣＴＡＡＣＣＣ−リンカー−Ｌｙｓ−Ｎ
Ｈ2 −を有するペプチド核酸、式中、リンカー＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 ＯＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−、ならびにｘ１＝１、ｘ２＝８、構造部１はＥＤＴＡを
介してＡに架橋される、構造部２はＬｙｓ上のε−Ｎを介してＡに結合される。
【０２２５】 ＮＭＰ（１００μｌ）、ＴＦＡ（２０μｌ）およびＤＩＰＥＡ（５０μｌ）中
で、過剰のＥＤＴＡ二無水物（１ｍｇ）をカルボキシフルオレセイニル−ＴＴＴ
ＴＧＣＣＡＧＴ−Ｌｙｓ−ＮＨ2 （１ｍｇ）と反応させ、カルボキシフルオレセ
イニル−ＴＴＴＴＧＣＣＡＧＴ−Ｌｙｓ（ε−Ｎ−ＥＤＴＡ一無水物）−ＮＨ2 を得、それをエーテル沈澱により単離する。この活性化中間化合物をＮＭＰ（５
０μｌ）に再溶解し、５５℃で１００μｌ ＮＭＰ、２０μｌ ＴＦＡおよび５
０μｌ ＤＩＰＥＡ中の実施例２０のデンドリマー（０．６ｍｇ）に添加する。
１時間後、生成物をエーテルで再沈殿させる。生成物を超遠心分離により精製し
、過剰の活性化中間化合物を３０ｋＤａカットオフフィルターに通過させた。収
量：０．３ｍｇ（４６％）。Ｃ2131Ｈ2730Ｎ909 Ｏ718 の計算されたＭｗ．５０
９６６．９。結果５１１００（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２２６】 実施例２２型（遊離アミン）−Ａ−（構造部２）8 のデンドリマーの調製、図１０、Ｎｏ． ２２ １５グループを含有してなる樹状コア中心Ａ、７個＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（
ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 −、周囲の８
個＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 −（Ｎ（
ＣＨ2 ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−））、構造部２＝リンカー−カルボキシフ
ルオレセイン、式中、リンカー＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨ−、ｘ２＝８。
【０２２７】 実施例１８の化合物（１０ｍｇ）をＮＭＰ（１００μｌ）に溶解し、ＤＩＰＥ
Ａ（２０μｌ）および（１３−カルボキシフルオレセイニルアミド）−４，７，
１０−トリオキソトリデカン−１−アミン（１３ｍｇ）を添加した。５５℃で１
０分後、粗生成物をエーテルでの沈澱により単離し、次いで１００μｌ ＴＦＡ
に溶解して、エーテルで再沈殿させた。収量：ＲＰ−ＨＰＬＣ精製後７ｍｇ（３
６％）。Ｃ458 Ｈ648 Ｎ46Ｏ155 の計算されたＭｗ．９２７８．４。結果９２８
１．５（ＭＨ+ 、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）。
【０２２８】 実施例２３式（遊離アミン）−Ａ−（構造部２）8 のデンドリマーの調製、図１１、Ｎｏ． ２３ 樹状コア中心Ａが１５グループを含有してなるデンドリマー、７個＝−ＮＨ（
ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）） 2 −、−、周囲の８個＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（
ＣＨ2 ）3 −（Ｎ（ＣＨ2 ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−））、構造部２＝ＡＡ
Ｌ−ＡＡＬ−リンカー−カルボキシフルオレセイン、式中、リンカー＝−ＮＨ（
ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨ−、およびＡＡＬ
＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 −（Ｎ（Ｃ
Ｈ2 ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−））、ｘ２＝８、デンドリマーは遊離アミン
で終結する。
【０２２９】 （１３−カルボキシフルオレセイニルアミド）−４，７，１０−トリオキソト
リデカン−１−アミン、５７ｍｇを０．５ｍＬ ＮＭＰおよび０．１ｍＬ ＤＩ
ＰＥＡ（２０μｌ）に溶解した。２５０μＬピリジン中に５０ｍｇの実施例３１
の化合物を添加した。５分後、中間生成物をエーテルで沈澱させ、０．５ｍＬ
ＴＦＡで脱保護し、沈澱させ、０．１ｍＬ ＤＩＰＥＡで中和し、０．５ｍＬ
ＮＭＰに溶解した。それを再び３７５μＬピリジン中に７５ｍｇの化合物３１と
５分間反応させ、次いで沈澱させ、５分間ＴＦＡ脱保護を行なった。最終的にＨ
ＰＬＣ精製により、２５ｍｇのＡＡＬ−ＡＡＬ−リンカー−カルボキシフルオレ
セインを得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：結果１２１４。計算値１２１４．１
（Ｍ+ Ｈ）。これを実施例１８の化合物（１０ｍｇ）とＮＭＰ（１００μＬ）お
よびＤＩＰＥＡ（３０μＬ）中で室温で１０分間反応させた。エーテルでの沈澱
、次いで最後のＴＦＡ脱保護およびＨＰＬＣ精製により、１５ｍｇの表題の化合
物を得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：結果１４４６０。計算値１４４４５。
【０２３０】 実施例２４Ｎ−Ｂｏｃ，Ｎ’（ブロモアセチル）−４，７，１０−トリオキソトリデカンジ アミンの調製、図１２、Ｎｏ．２４ 実施例１の化合物１６ｇ、５０ｍｍｏｌを５０ｍＬ ＤＣＭに溶解し、２００
ｍＬの氷冷ＤＣＭ中無水ブロモ酢酸５５ｍｍｏｌおよびルチジン７０ｍｍｏｌに
３０分かけて滴下して加えた。混合物を１００ｍＬの１Ｍクエン酸塩ｐＨ４．５
で２回抽出し、減圧して部分的に乾燥し、ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨで直ちに精製し
た。収量１７．６ｇ、８０％。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ（Ｍ+ Ｈ−Ｂｏｃ）：
結果３４２．２。計算値３４３。
【０２３１】 実施例２５ジアミノ酸リンカー−ジベンジルエステル（ＤＡＡＬ−ジベンジルエステル） 式（構造部１）2 −Ａ−（構造部２）2 のデンドリマー、式中、構造部１＝Ｂ
ｏｃ、構造部２＝ＯＢｚ、ｘ１＝１、ｘ２＝２、およびＡ＝ＤＡＡＬ
【０２３２】 実施例４の化合物５．１５ｇ遊離アミン型、１０ｍｍｏｌを３０ｍＬ ＤＭＦ
および１５ｍＬ ＤＩＰＥＡ中に溶解した。Ｎ−Ｂｏｃ，Ｎ’（ブロモアセチル
）−４，７，１０−トリオキソトリデカンジアミン１０ｇを添加し、混合物を２
時間５０Ｃで攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、混合物を１００ｍＬ ＤＣＭに
溶解し（ｔａｋｅ ｕｐ）、炭酸水素ナトリウム１００ｍＬ、次いで水１００ｍ
Ｌで抽出した。減圧して乾燥し、次いでＤＣＭ中５〜１５％ＭｅＯＨでのクロマ
トグラフィーにより、粘性オイルとして６．８ｇ、５５％を得た。ＭＡＬＤＩ−
ＴＯＦ ＭＳ（Ｍ+ Ｈ）：結果１２３７．３。計算値１２３８．２。
【０２３３】 実施例２６ジアミノ酸リンカー−ジベンジルエステル（ＤＡＡＬ−ジベンジルエステル） 、 遊離アミン型の調製、図１２、Ｎｏ．２６ 式（遊離アミン）2 −Ａ−（構造部２）2 のデンドリマー、式中、構造部２＝
ＯＢｚ、ｘ２＝２、およびＡ＝ＤＡＡＬ
【０２３４】 ジアミノ酸リンカー−ジベンジルエステル６．８ｇを３０ｍＬ ＴＦＡに溶解
した。５分後、ＴＦＡを減圧下で除去し、混合物を２００ｍＬ ＤＣＭに溶解し
、１５０ｍＬ炭酸ナトリウムで２回抽出した。有機相を減圧して乾燥し、乾燥ト
ルエンから減圧下にエバポレーションによりさらに乾燥した。収量４．８ｇ、８
４％。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：結果１０３８．６。計算値１０３８．１。
【０２３５】 実施例２７テトラアミノ酸リンカー−ジベンジルエステル（ＴＡＡＬ−ジベンジルエステル ）の調製、図１３、Ｎｏ．２７ 式（構造部１）4 −Ａ−（構造部２）2 のデンドリマー、式中、構造部１＝Ｂ
ｏｃ、構造部２＝ＯＢｚ、Ａ＝３−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 −、および２−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（Ｃ
Ｈ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−）2
【０２３６】 実施例２６の化合物４．８ｇを２０ｍＬ ＤＭＦおよび１０ＭＬ ＤＩＰＥＡ
に溶解した。Ｎ−Ｂｏｃ，Ｎ’（ブロモアセチル）−４，７，１０−トリオキソ
トリデカンジアミン１０ｇを添加し、混合物を４時間５０℃で攪拌した。溶媒を
減圧下で除去してオイルを得、それを１００ｍＬ ＤＣＭに溶解し、炭酸水素ナ
トリウム、次いで水で抽出した。有機相を除去し、残渣をシリカ上で最初は酢酸
エチル中１５％ＭｅＯＨでクロマトグラフを行ない、次いでＤＣＭ中１５％Ｍｅ
ＯＨで溶出した。このようにして得られた生成物をシリカ上でＤＣＭ中１０％ア
ンモニア飽和ＭｅＯＨで精製し、粘性がある澄んだオイルとして２．２ｇ、１９
％を得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：結果２４８０。計算値２４７９。
【０２３７】 実施例２８テトラアミノ酸リンカー（ＴＡＡＬ）、遊離ジ酸型の調製、図１３、Ｎｏ．２８ 型（構造部１）4 −Ａ−（遊離酢酸）2 のデンドリマー、式中、構造部１＝Ｂ
ｏｃ、ｘ１＝４、Ａ＝ＴＡＡＬ
【０２３８】 実施例２７のテトラアミノ酸リンカー−ジベンジルエステル１．２ｇを２０ｍ
Ｌ ＭｅＯＨに溶解し、２００ｍｇの１０％Ｐｄ／Ｃを添加し、混合物を２時間
水素化した。触媒および溶媒を遠心分離により除去し、次いでエバポレーション
を行なって、生成物１ｇを得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：結果２３００。計
算値２２９９。
【０２３９】 実施例２９テトラアミノ酸リンカー−無水物の調製、図１３、Ｎｏ．２９ 構造（構造部１）4 −Ａ−（Ｎ−２，６−ジオキソモルホリン）のデンドリマ
ー、式中、構造部１＝Ｂｏｃ、ｘ１＝４、Ａ＝３−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ−（ＣＨ 2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 −、デンドリマーは、
Ｎ−２，６−ジオキソモルホリン基で終結する。
【０２４０】 実施例２７のテトラアミノ酸リンカー、遊離ジ酸型１００ｍｇを１ｍＬピリジ
ンに溶解した。ジイソプロピルカルボジイミド０．１ｍＬを添加し、混合物を７
０℃で１０分間反応させた。生成物のこの約０．３８Ｍ溶液を、さらなる精製な
しに直ちに使用した。かかる溶液と過剰の遊離一次アミンとの基礎条件下での反
応は、無水物への＞９０％の変換を示した。
【０２４１】 実施例３０テトラアミノ酸リンカー−ジベンジルエステル−遊離テトラアミンの調製 構造（遊離アミン）４−Ａ−（構造部２）２のデンドリマー、式中、構造部２
＝ＯＢｚ、ｘ２＝２、Ａ＝３−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 −、および２−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ−（ＣＨ 2 ）2 Ｏ−（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−）2 、樹状コア中
心は、遊離アミンで終結する。
【０２４２】 テトラアミノ酸リンカー−ジベンジルエステル２３０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌを
１ｍＬ ＴＦＡに溶解した。５分後、７ｍＬのエーテルを添加して、生成物を遠
心分離により単離した。それをエーテルで繰り返しボルテックスし（votexed ）
、３００ｍｇの半固体ＴＦＡ付加物を得、それをさらなる精製なしに直ちに使用
した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：結果２０７８。計算値２０７９。
【０２４３】 実施例３１アミノ酸リンカー−無水物（ＡＡＬ−無水物）の調製 ０．２５ｍＬピリジン中５３ｍｇの実施例３の化合物をジイソプロピルカルボ
ジイミド２５μＬで７０℃で１０分間活性化し、さらなる精製なしに、溶液で用
いた。収量を定量的に５０ｍｇであると仮定した。
【０２４４】 実施例３２Ｏ−（Ｂｏｃ−アミノプロピル）−Ｏ’−アミノプロピル−エチレングリコール （Δ３４グリコールユニット）の調製 Ｏ，Ｏ’−ビスアミノプロピル−エチレングリコールを２５０ｍＬ ＴＨＦに
溶解した。混合物を氷浴上で冷却し、１５ｍＬ ＴＨＦ中１．１８ｇＢｏｃ−無
水物を滴下して加え、混合物を減圧すると２０ｇの粘性オイルになった。このオ
イルをシリカ上でＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨを用いて精製し、次いでＤＣＭ中２０
％半アンモニア飽和（half ammonia saturated）ＭｅＯＨで溶出した。生成物を
ＤＣＭ中１５％半アンモニア飽和ＭｅＯＨで再精製し、２．７５ｇ、２９％を得
た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：結果（４４．０５）ｎ＋２３５。計算値（４４
．０５）ｎ＋２３３。
【０２４５】 実施例３３Ｏ−（Ｂｏｃ−アミノプロピル）−Ｏ’−（ブロモアセトアミドプロピル）−エ チレングリコール（Δ３４グリコールユニット）の調製 Ｏ−（Ｂｏｃ−アミノプロピル）−Ｏ’アミノプロピル−エチレングリコール
（Δ３４グリコールユニット）１．１ｇを３ｍＬ ＤＣＭに溶解し、氷冷ＤＣＭ
３ｍＬ中０．７ｍｍｏｌブロモ酢酸無水物および１ｍｍｏｌルチジンに添加した
。１５分の反応後、混合物を２ｍＬの１Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ４．５で２
回抽出し、次いで減圧して乾燥し、それをＤＣＭ中１５％ＭｅＯＨを用いてシリ
カ上で精製した。収量１ｇ、８５％。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ（Ｍ−Ｂｏｃ）
：結果（４４．０５）ｎ＋２５２。計算値（４４．０５）ｎ＋２５３。
【０２４６】 実施例３４オクタ−（Ｂｏｃ−アミノ−ＰＥＧ）−デンドリマー−ジベンジルエステルの調 製 型（構造部１）8 −Ａ−（構造部２）2 の保護されたデンドリマー、式中、構
造部１＝Ｂｏｃ、構造部２＝ＯＢｚ、ｘ１＝８、ｘ２＝２、Ａ＝３−ＮＨ（ＣＨ 2 ）3 Ｏ−（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 −、
および２−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ−（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ
（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−）2 、および８−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ）34 （ＣＨ3 ）ＮＨ−。
【０２４７】 テトラアミノ酸リンカー−ジベンジルエステル−遊離テトラアミンＴＦＡ付加
物１００ｍｇ、約０．０３ｍｍｏｌを１ｍＬ ＤＭＦおよび０．５ｍＬ ＤＩＰ
ＥＡに溶解した。Ｏ−（Ｂｏｃ−アミノプロピル）−Ｏ’−（ブロムアセトアミ
ドプロピル）−エチレングリコール（Δ３４グリコールユニット）１ｇ、約０．
５ｍｍｏｌを添加し、混合物を６０℃で４時間攪拌した。５ｍＬ ＤＣＭを添加
し、混合物を炭酸水素ナトリウム２ｍＬ、次いで水１ｍＬで抽出した。ＤＣＭを
エバポレーションで除去し、生成物をエーテル１２ｍＬを加えることにより沈澱
させた。収量４００ｍｇ。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：結果：１６６００（８Ｐ
ＥＧ−アーム）および主な不純物として１２９００（６ＰＥＧ−アーム）。
【０２４８】 実施例３５オクタ−（カルボキシフルオレセインアミド−ＰＥＧ）−デンドリマー−ジベン ジルエステルの調製、図１５、Ｎｏ．３５ （構造部１）8 −Ａ−構造部２型のデンドリマー、ここで構造部１＝フルオレ
シニル、構造部２＝ＯＢｚ、ｘ１＝８、ｘ２＝１、Ａ＝３−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ
−（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 −及び２ＮＨ
（ＣＨ2 ）3 Ｏ−（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ
）−）2 、並びに８ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ）34（ＣＨ3 ）ＮＨ−
。
【０２４９】 オクタ−（Ｂｏｃ−アミノ−ＰＥＧ）−デンドリマー−ジベンジルエステル２
００ｍｇをＴＦＡ １ｍＬに溶解し、５分後に中間体遊離オクタアミンをエーテ
ル７ｍＬを添加して沈殿させた。それをエーテルでボルテックスし、次いでＮＭ
Ｐ １ｍＬとＤＩＰＥＡ ０．３ｍＬに溶解した。Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイ
ミド−カルボキシ−フルオレセイン５０ｍｇを添加し、１０分後にさらに５０ｍ
ｇを添加した。全部で３０分後に、エーテル７ｍＬを添加して、生成物を沈殿さ
せた。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：分析値１８６００（主要生成物、８個のフル
オレシニル化ＰＥＧアームと一致）
【０２５０】 実施例３６オクタ−（カルボキシフルオレセインアミド−ＰＥＧ）−デンドリマー−遊離二 酸の調製、図１５、Ｎｏ．３６ （構造部１）8 −Ａ−（遊離酸）2 型のデンドリマー、構造部１＝フルオレシ
ニル、ｘ１＝８、Ａ＝３−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ−（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ
（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 −及び２ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ−（ＣＨ2 ）2 Ｏ
（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−）2 、並びに８ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ）34（ＣＨ3 ）ＮＨ−。
【０２５１】 実施例３５のオクタ−（カルボキシフルオレセインアミド−ＰＥＧ）−デンド
リマー−ジベンジルエステル約１００ｍｇを１．０Ｍ ＬｉＯＨ １ｍＬ及びＴ
ＨＦ ２ｍＬに溶解させた。３０分反応後に１．０Ｍ ＨＣｌ １ｍＬを添加し
た。さらに水６ｍＬを添加し、アンモニアを添加してｐＨ８にし、殆ど黒色（濃
赤色）であるが透明な溶液を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣにより、１８ｍｇの収量で、
最外層に８個のフルオレセイン基を有する表題化合物の単離ができた（０．１％
ＴＦＡ水溶液中約５５％のアセトニトリルで抽出する）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
ＭＳ：分析値１８４００。さらに、６個および７個のフルオレセイニル化(fluor
esceinylated) アームを有するデンドリマー３０ｍｇも単離された。
【０２５２】 実施例３７オクタ−（カルボキシフルオレセインアミド−ＰＥＧ）−デンドリマー酸無水物 の調製、図１５、Ｎｏ．３７ （構造部１）8 −Ａ−（Ｎ−２，６−ジオキソモルホリン）2 型のデンドリマ
ー、構造部１＝フルオレシニル、ｘ１＝８、Ａ＝１Ｎ（ＣＨ3 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ） 2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ3 ）3 、３Ｎ（ＣＨ3 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ3 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 、８ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ）34（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 、デンドリマーはジオキソモルホリン基
で終わる。
【０２５３】 ＮＭＰ５０μＬ中オクタ−（カルボキシフルオレセインアミド−ＰＥＧ）−デ
ンドリマー−遊離二酸３ｍｇをジイソプロピルカルボジイミド５μＬと室温で１
５分間反応させ、エーテル１ｍＬを添加することで沈殿させた。それを、さらな
る精製をせずに使用した。大過剰量の実施例３２の化合物（Ｏ−（Ｂｏｃ−アミ
ノプロピル）−Ｏ’アミノプロピル−エチレングリコール（Δ３４グリコール単
位））を用いる対照反応は、約８５％の生成物がこの方法で活性化されたことを
示した。
【０２５４】 実施例３８Ｂｏｃ−アミノＰＥＧの調製 ５０ｇのＰＥＧ１０００、５０ｍｍｏｌ、をＴＨＦ ３００ｍＬ中に溶解させ
、２Ｍブチルリリウム(butyllilium) １０ｍＬを添加した。ＴＨＦ ３０ｍＬ中
実施例２４の化合物９ｇを添加し、溶液を窒素下で一晩攪拌した。乾燥するまで
減圧(reduce)し、ＤＣＭから炭酸水素塩で抽出し、ＤＣＭ中メタノールを用いる
クロマトグラフィーを繰り返し、１２ｇ ５０％を得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
ＭＳ：分析値（４４．０５３）n 。
【０２５５】 実施例３９１−（ブロモアセチル）−１，１５−ジアザ−４，７−１０−トリオキサ−ペン タデカン−１５−ビス（ベンジルオキシカルボニルメチル）の調製 （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2型のデンドリマー、構造部１＝ブロモア
セチル、ｘ１＝１、構造部２ Ｏ−Ｂｚ、ｘ２＝２、Ａ＝１ＮＨ（ＣＨ3 ）2 Ｏ
（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ3 ）3 Ｎ（（ＣＨ2 ）Ｃ（Ｏ））2 。
【０２５６】 実施例４のＴＦＡ付加物を炭酸水素塩を用いてＤＣＭから抽出し、減圧下でト
ルエンからエバポレートすることで乾燥させ、８０％収率で遊離アミンを得た。
２０ｍｍｏｌのこの産物１０．３ｇをトルエン２５ｍＬ中に溶解させ、氷冷ＤＣ
Ｍ１００ｍＬ中のブロモ酢酸無水物２２ｍｍｏｌおよびルチジン３０ｍｍｏｌに
３０分かけて滴下した。混合物を１Ｍ クエン酸塩（ｐＨ４．５）１００ｍＬで
２回抽出し、部分的に乾燥するまで減圧し、ＤＣＭ（ｒ．ｆ ０．８）中５％Ｍ
ｅＯＨで直ぐに精製した。収率８０％。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：分析値６３
８．７。計算値６３８。
【０２５７】 実施例４０Ｂｏｃ−ＰＥＧ−リンカージベンジルエステルの調製 （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2型のデンドリマー、構造部１＝Ｂｏｃ、
構造部２＝ＯＢｚ、ｘ１＝１、ｘ２＝２、Ａ＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ） 2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 （Ｏ（ＣＨ2 ）2 ）22ＯＣ
Ｈ2 Ｃ（Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 。
【０２５８】 実施例３８のＢｏｃ−アミノ−ＰＥＧ１２ｇをＤＣＭ ６０ｍＬに溶解させ、
２Ｍブチルリチウム５．５ｍＬを添加した。ＴＨＦ １０ｍＬ中１−（ブロモア
セチル）１，１５−ジアザ−４，７−１０−トリオキサペンタデカン−１５−ビ
ス（ベンジルオキシカルボニルメチル）４．４ｇを冷却しながら、添加し、混合
物を室温で一晩攪拌した。乾燥するまで減圧し、炭酸水素塩で抽出し、クロマト
グラフィー操作(work-up) を繰り返して、１０％を１．７ｇ得た。ＭＡＬＤＩ−
ＴＯＦ ＭＳ：
【０２５９】 実施例４１Ｂｏｃ−ＰＥＧ−リンカー遊離二酸の調製 （構造部１）x1−Ａ型のデンドリマー、構造部１＝Ｂｏｃ、ｘ１＝１、Ａ＝Ｎ
Ｈ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ 2 （Ｏ（ＣＨ2 ）2 ）22ＯＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ
（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 。デンドリマーは遊離酸で
終わる。
【０２６０】 実施例４０のＢｏｃ−ＰＥＧ−リンカージベンジルエステル１．７ｇをＭｅＯ
Ｈ １５ｍＬに溶解させた。窒素下で１０％Ｐｄ／Ｃ ３００ｍｇを添加し、混
合物を２時間水素化した。触媒および溶媒の除去により、粘性油の定量的収量を
得た。この化合物を、次の反応のためにピリジン中で２０％溶液として保存した
。
【０２６１】 実施例４２Ｂｏｃ−Ｐｅｇ−リンカー無水物の調製 ピリジン中２０％のＢｏｃ−ＰＥＧ−リンカー遊離二酸を７０℃で１０分間１
０％ジイソプロピルカルボジイミドを用いて活性化し、約１Ｍの酸無水物溶液を
得、これを新たに（fresh)使用した。
【０２６２】 実施例４３Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ’−ブロモアセチル−エチレンジアミンの調製 モノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン１６ｇ、１００ｍｍｏｌ、をＤＣＭ５０ｍＬ
に溶解させ、氷冷ＤＣＭ３５０ｍＬ中１１０ｍｍｏｌブロモ酢酸無水物および１
３０ｍｍｏｌルチジンに３０分かけて滴下した。混合物を濾過し、１Ｍクエン酸
塩（ｐＨ４．５）２００ｍＬで２回抽出し、濾過し、部分的に乾燥するまで減圧
し、エーテル１５０ｍＬを有する氷浴で攪拌した。生成物を濾過して取り出し、
乾燥させた。収量１０ｇ、淡黄褐色粉末。
【０２６３】 実施例４４Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ’−（Ｎ−ピペラジニル−アセチル）−エチレンジアミンの調製 ピペラジン４．３ｇをＴＨＦ５０ｍＬ中に溶解させ、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ’−ブロ
モアセチル−エチレンジアミン２．８ｇを添加した。１時間後、混合物を乾燥す
るまで減圧し、ＤＣＭ５０ｍＬに溶解し、水で一度抽出した。乾燥するまで減圧
し、ＤＣＭ中１０％アンモニア飽和ＭｅＯＨを用いるクロマトグラフィー操作に
より、５０％、１．４ｇを油として得、これはゆっくりと凝固化した。
【０２６４】 実施例４５Ｂｏｃ−ピペラジン−リンカーベンジルエステルの調製 Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ’−（Ｎ−ピペラジニル−アセチル）−エチレンジアミン１．
４ｇをＤＭＦ ５ｍＬおよびＤＩＰＥＡ １ｍＬに溶解させ、１．５ｍＬ、次い
でブロモ酢酸ベンジルエステル１．２ｇを添加した。混合物を４０℃で３０分間
攪拌し、ＤＣＭ５０ｍＬに溶解し、炭酸水素ナトリウム５０ｍＬで抽出した。Ｄ
ＣＭ中５％ＭｅＯＨを用いるクロマトグラフィーで３６％、８００ｍｇを得た。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ（Ｍ+ Ｈ）：分析値４３８．７。計算値４３９．４。
【０２６５】 実施例４６Ｂｏｃ−ピペラジン−リンカー、遊離酸の調製 Ｂｏｃ−ピペラジン−リンカーベンジルエステル８００ｍｇをＭｅＯＨ １０
ｍＬに溶解させた。窒素下で１０％Ｐｄ／Ｃ １００ｍｇを添加し、混合物を１
時間水素化した。Ｐｄ／Ｃを遠心分離で取り除き、次いで溶媒（solven) のエバ
ポレーションにより、定量的収量６２０ｍｇの表題化合物を得た。ＭＡＬＤＩ−
ＴＯＦ ＭＳ（Ｍ+ Ｈ）：分析値３４７．１。計算値３４７．４。
【０２６６】 実施例４７ＰＥＧ３４−リンカー−ジベンジルエステルの調製 （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2型のデンドリマー、構造部１＝Ｂｏｃ、
構造部２＝ＯＢｚ、ｘ１＝１、ｘ２＝２、Ａ＝−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 （Ｏ（ＣＨ2 ）2 ）34Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 。
【０２６７】 Ｏ−（Ｂｏｃ−アミノプロピル）−Ｏ’アミノプロピル−エチレングリコール
（Δ３４グリコール単位）１．４９ｇをＤＭＦ ５ｍＬおよびＤＩＰＥＡ １．
５ｍＬに溶解させた。ブロモ酢酸ベンジルエステル６１６μＬを添加し、混合物
を６０℃で１時間反応させた。溶媒を除去し、残渣をＤＣＭ ２５ｍＬに溶解し
た。それを炭酸水素ナトリウム２５ｍＬで抽出し、今度はそれをＤＣＭ ２５ｍ
Ｌで逆抽出した（back-extracted) 。合わせた有機層を減圧し、ＤＣＭ中１０％
ＭｅＯＨを用い、シリカ上で精製し、ＤＣＭ中１５％ＭｅＯＨで溶出した。透明
な粘性油として収量８１０ｍｇ、４６％。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ（Ｍ−Ｂｏ
ｃ）：分析値（４４．０５）ｎ＋４２９。計算値（４４．０５）＋４３０。
【０２６８】 実施例４８ＰＥＧ３４−リンカー−遊離二酸の調製 （構造部１）x1−Ａ型のデンドリマー、構造部１＝Ｂｏｃ、ｘ１＝１、Ａ＝−
ＮＨ（ＣＨ2 ）3 （Ｏ（ＣＨ2 ）2 ）34Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））2 。デンドリマーは遊離酸で終わる。
【０２６９】 ＰＥＧ３４−リンカー−ジベンジルエステル０．８１ｇをＭｅＯＨ ２０ｍＬ
に溶解させ、Ｐｄ／Ｃ １６０ｍｇを添加した。混合物を２時間水素化し、続い
てＰｄ／Ｃおよび溶媒を除去し、遊離二酸７２３ｍｇを得た（９８％）。
【０２７０】 実施例４９４９ＰＥＧ３４−リンカー−無水物の調製 ピリジン中ＰＥＧ３４−リンカー−遊離二酸の２０％溶液９５．６μＬを、ジ
イソプロピルジイミド（diisopropyldiiminde)と７０℃で１０分間反応させ、さ
らに精製することなく使用した。
【０２７１】 実施例５０式（（ＦｌｕＰＥＧ）4 ＴＡＡＬ）4 ＴＡＡＬ−ＰＥＧ−ＰＥＧ−ＰＮＡ（式中 、構造部１＝ＦｌｕＰＥＧ、ｘ１＝１６、構造部２＝ＰＮＡ、ここで、ペプチド 核酸はＴＧＴ ＧＣＧ ＣＣＣ ＴＣＡ ＡＣＴ ＡＡＣの核酸塩基配列を有す る、ｘ２＝１）で表されるデンドリマーの調製 また、この手法を、実施例５０〜５７の化合物を調製するために使用した。
【０２７２】 標準固相Ｂｏｃ化学作用を用いて、実施例４６のピペラジンリンカーをＰＮＡ
と直接連結させた。
【０２７３】 次の一般法を用いて、他のリンカーを溶液中でＰＮＡおよび誘導体と連結させ
た：ＰＮＡをＮＭＰに溶解させ、１〜５ｍＭの濃度にした。これが純粋なＮＭＰ
中で達成できなければ、水を２０％添加して所望の濃度の透明な溶液を得た。次
いで、ＰＮＡのＨＰＬＣ精製由来の残留ＴＦＡを５％ピリジンの添加により中和
した。２当量の適当なＢｏｃ保護リンカー−無水物を添加した後、２０％ＤＩＰ
ＥＡを添加した。反応後にＭＡＬＤＩを行い、１０分後の不完全な反応の場合（
競合している加水分解による共同溶媒として水を使用する際に主に観察される）
、さらに２当量のリンカーを添加した。
【０２７４】 粗生成物を１０倍過剰のエーテルの添加により沈殿させた。
【０２７５】 １０分間ＴＦＡ中に５０〜１００倍過剰の５％メタクレゾール中に溶解させた
後、さらに１０倍過剰のエーテルで沈殿させることでＢｏｃ脱保護を達成した。
【０２７６】 追加のリンカーをＰＮＡ−構築物に結合させ、必要であれば、続いてＨＰＬＣ
精製するか、または市販のアミノ反応性標識を最大限の濃度で用いて、典型的に
は３〜１５重量％、典型的には遊離アミノ基に比べて３〜３０倍モル過剰の標識
を用いて構築物を標識した。
【０２７７】 実施例５１式（（ＦｌｕＰＥＧ）4 ＴＡＡＬ−ＰＥＧ）4 ＴＡＡＬ−ＰＥＧ−ＰＮＡ（式中 、構造部１＝ＦｌｕＰＥＧ、ｘ１＝１６、構造部２＝ＰＮＡ、ここで、ペプチド 核酸はＴＧＴ ＧＣＧ ＣＣＣ ＴＣＡ ＡＣＴ ＡＡＣの核酸塩基配列を有す る、およびｘ２＝１）で表されるデンドリマーの調製 該生成物を、実施例５０に記載の手法に従って調製した。
【０２７８】 実施例５２式（ＦｌｕＰＥＧ）4 ＴＡＡＬ−ＰＮＡ−Ｌｙｓ−Ｃｙ３（式中、構造部１＝Ｆ ｌｕＰＥＧ、ｘ１＝４、構造部 ２＝Ｃｙ３、ｘ２＝１、Ｌｙｓ＝リジン、ここで 、ＰＮＡはＴＧＴ ＧＣＧ ＣＣＣ ＴＣＡ ＡＣＴ ＡＡＣのヌクレオチベー スを有するペプチド核酸である）で表されるデンドリマーの調製 該生成物を、実施例５０に記載の手法に従って調製した。
【０２７９】 実施例５３式（（標識−ＰＥＧ）4 ＴＡＡＬ−ＰＮＡ−Ｌｙｓ−ＴＡＡＬ（ＰＥＧ−標識） 4 （式中、構造部１＝標識−ＰＥＧ、該標識はＦｌｕ（フルオレセイン）、Ｒｈ ｏ（ローダミン）、Ｌｉｓ（リサミン（lissamine)）、Ｃｙ３、またはＤＮＰ、 ｘ１＝４、樹枝状コアＡ＝他の樹枝状コアＡ＝ＴＡＡＬに連結されたＰＮＡ−Ｌ ｙｓに連結されたＴＡＡＬ、構造部１＝ＰＥＧ−標識、ｘ１＝４、ここで、ペプ チド核酸であるＰＮＡはＴＧＴ ＧＣＧ ＣＣＣ ＴＣＡ ＡＣＴ ＡＡＣの核 酸塩基配列を有する）で表されるデンドリマー複合体の調製 該生成物を、実施例５０に記載の手法に従って調製した。
【０２８０】 Ａ：標識はＦｌｕ Ｂ：標識はＲｈｏ Ｃ：標識はＬｉｓ Ｄ：標識はＣｙ３ Ｅ：標識はＤＮＰ
【０２８１】 実施例５４式（（ＦｌｕＰＥＧ）4 ＴＡＡＬ）4 ＴＡＡＬ−ＰＮＡＬｙｓ−ＴＡＡＬ（ＴＡ ＡＬ）4 （ＰＥＧＦｌｕ）4 ）（式中、構造部１＝ＦｌｕＰＥＧ、ｘ１＝１６、 他の樹枝状コアに連結したＰＮＡ−Ｌｙｓに連結した樹枝状コア、ここで、構造 部１＝ＦｌｕＰＥＧ、ｘ１＝１６、ペプチド核酸であるＰＮＡは核酸配列Ａ：Ｃ ＣＡ ＴＡＴ ＧＣＡ ＧＴＴ ＡＴＡ ＡＧＴ ＡＧＧ、核酸配列Ｂ：ＴＡＴ ＴＧＴ ＡＣＣ ＡＡＧ ＣＡＧ ＡＧＴ ＡＣＣ、核酸配列Ｃ：ＧＧＴ Ａ ＴＡ ＴＡＴ ＡＡＧ ＡＴＧ ＡＣＡ ＣＡＧ ＧＡ、および核酸配列Ｄ：Ｇ ＴＴ ＡＧＴ ＴＡＴ ＡＴＴ ＧＧＧ ＴＧＡ ＴＡＴ ＧＴを有する）で表 されるデンドリマー複合体の調製 該生成物を実施例５０に記載の手法に従って調製した。
【０２８２】 実施例５５式（Ｆｌｕ（ＡＡＬ）2 ）4 ＴＡＡＬ−ＰＮＡＬｙｓ−ＴＡＡＬ（（ＡＬＬ）） 2 Ｆｌｕ）4 （式中、構造部１＝Ｆｌｕ（ＡＡＬ）2 、ｘ１＝４、他の樹枝状コ アに連結したＰＮＡ−Ｌｙｓに連結した樹枝状コア、ここで、構造部１＝Ｆｌｕ （ＡＡＬ）2 、ｘ１＝４、ペプチド核酸であるＰＮＡは核酸配列Ａ：ＣＣＡ Ｔ ＡＴ ＧＣＡ ＧＴＴ ＡＴＡ ＡＧＴ ＡＧＧ、核酸配列Ｂ：ＴＡＴ ＴＧＴ ＡＣＣ ＡＡＧ ＣＡＧ ＡＧＴ ＡＣＣ、核酸配列Ｃ：ＧＧＴ ＡＴＡ Ｔ ＡＴ ＡＡＧ ＡＴＧ ＡＣＡ ＣＡＧ ＧＡ、および核酸配列Ｄ：ＧＴＴ Ａ ＧＴ ＴＡＴ ＡＴＴ ＧＧＧ ＴＧＡ ＴＡＴ ＧＴを有する）で表されるデ ンドリマー複合体の調製 該生成物を実施例５０に記載の手法に従って調製した。
【０２８３】 実施例５６ 式（標識−ＰＥＧ）4 ＴＡＡＬ−ＰＮＡＬｙｓ−ＴＡＡＬ（ＰＥＧ−標識）4 （ 式中、構造部１＝標識ＰＥＧ、ｘ１＝４、他の樹枝状コアに連結したＰＮＡ−Ｌ ｙｓに連結した樹枝状コア、ここで、構造部１＝標識ＰＥＧ、ｘ１＝４、ペプチ ド核酸であるＰＮＡは核酸配列Ａ：ＣＣＡ ＴＡＴ ＧＣＡ ＧＴＴ ＡＴＡ ＡＧＴ ＡＧＧ、核酸配列Ｂ：ＴＡＴ ＴＧＴ ＡＣＣ ＡＡＧ ＣＡＧ ＡＧ Ｔ ＡＣＣ、核酸配列Ｃ：ＧＧＴ ＡＴＡ ＴＡＴ ＡＡＧ ＡＴＧ ＡＣＡ ＣＡＧ ＧＡ、および核酸配列Ｄ：ＧＴＴ ＡＧＴ ＴＡＴ ＡＴＴ ＧＧＧ ＴＧＡ ＴＡＴ ＧＴを有する）で表されるデンドリマー複合体の調製 該生成物を実施例５０に記載の手法に従って調製した。
【０２８４】 実施例５７式（ＦｌｕＰＥＧ）4 ＴＡＡＬ−ＰＩＰ−ＰＩＰ−ＰＮＡ−ＰＩＰ−ＰＩＰ−Ｌ ｙｓ−ＴＡＡＬ（ＦｌｕＰＥＧ）4 のデンドリマー複合体の調製、式中、構造部 １＝ＦｌｕＰＥＧ、ｘ１＝４、樹状コアＡに結合したＰＩＰ−ＰＩＰ−ＰＮＡ− ＰＩＰ−ＰＩＰ−Ｌｙｓに結合した樹状コアＡ、式中、構造部１＝ＦｌｕＰＥＧ 、ｘ１＝４およびペプチド核酸ＰＮＡは、核酸塩基配列ＴＧＴ ＧＣＧ ＣＣＣ ＴＣＡ ＡＣＴ ＡＡＣを有する 実施例５０に記載の手順に従って生成物を調製した。
【０２８５】 実施例５８式（Ｆｌｕ−ＰＥＧ）4 ＴＡＡＬ−ＰＮＡ−Ｌｙｓ−ＴＡＡＬ（ＰＥＧ−Ｆｌｕ ）4 のデンドリマー複合体の調製、式中、構造部１＝標識−ＰＥＧ、ｘ１＝４、 樹状コアＡ＝別の樹状コアＡ＝ＴＡＡＬに結合したＰＮＡ−Ｌｙｓに結合したＴ ＡＡＬ、構造部１＝ＰＥＧ−標識、ｘ１＝４およびペプチド核酸ＰＮＡは、核酸 塩基配列Ａ：ＴｕＧＴｕ ＧＣＧ ＣＣＣ ＴｕＣＤ ＤＣＴ ＤＤＣを有する 実施例５０に記載の手順に従って生成物を調製した。
【０２８６】 実施例５９式（Ｒｈｏ−ＰＥＧ）4 ＴＡＡＬ−ＰＮＡ−Ｌｙｓ−ＴＡＡＬ（ＰＥＧ−Ｒｈｏ ）4 のデンドリマー複合体の調製、式中、構造部１＝標識−ＰＥＧ、ｘ１＝４、 樹状コアＡ＝別の樹状コアＡ＝ＴＡＡＬに結合したＰＮＡ−Ｌｙｓに結合したＴ ＡＡＬ、構造部１＝ＰＥＧ−標識、ｘ１＝４およびペプチド核酸ＰＮＡは、核酸 塩基配列ＧＴｕＴｕ ＤＧＴｕ ＴｕＧＤ ＧＧＧ ＣＧＣ ＤＣＤを有する 実施例５０に記載の手順に従って生成物を調製した。
【０２８７】 実施例６０プローブの評価 実験は、実施例５０〜５９のデンドリマー複合体、および対応する核酸塩基配
列を有する、単一標識した従来のペプチド核酸プローブを用い、中期染色体スプ
レッド（ｓｐｒｅａｄ）において行なった。試料を６０％ホルムアミド中、８０
℃で１０分間変性させた。次いで、（実施例６５に規定の）ハイブリダイゼーシ
ョンバッファー中に入れたデンドリマー複合体または単一標識したプローブを添
加し、スライドを室温まで放冷した後、５５℃でストリンジェント洗浄を行なっ
た。プローブを１〜５の段階でスコアリングし、単一標識したものから得られた
シグナルを２とした。
【０２８８】
【０２８９】 実施例６１ ＶＳＤＥＸ：（ＣＤｘ）n ：（実施例２２のデンドリマー）m の形態のデンド
リマー複合体の調製；式中、ＶＳＤＥＸは、分子量１５００００の線状ビニルス
ルホン活性化デキストラン、およびＣＤｘは抗体；ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、
ＣＤ２３、ＣＤ３３、ＣＤ３４クラスＩ、ＣＤ５６、すべてＤＡＫＯ Ａ／Ｓ製
。
【０２９０】 概略的手順： 実施例２２のデンドリマー９６ｎｍｏｌおよびＶＳＤＥＸ３ｎｍｏｌを、０．
１４Ｍ炭酸水素ナトリウムバッファー０．２８ｍＬ中で６時間、３０℃で反応さ
せた。次いで、１５ｎｍｏｌの抗体を添加し、反応をさらに１８時間進行させた
。未反応のビニルスルホンを、アミノ含有停止バッファーにより１時間クエンチ
（ｑｕｅｎｃｈ）した。次いで、コンジュゲートをセファリルＳ−２００ＨＲカ
ラムで精製した。２７８および４９８ｎｍでの相対吸光度を用いてコンジュゲー
トの化学量論を求めた。得られた典型的な結合比は、抗体／ＤＥＸが２〜３およ
びオクタフルオレセインデンドリマー／ＤＥＸが３〜４であり、約１：１０の抗
体：フルオレセイン比を与えた。
【０２９１】 実施例６２ ＶＳＤＥＸ：（ＣＤｘ）n ：（実施例２３のデンドリマー）m の形態のデンド
リマー複合体の調製；式中、ＶＳＤＥＸは、分子量１５００００の線状ビニルス
ルホン活性化デキストラン、およびＣＤｘは抗体；ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１９、
ＣＤ２３、ＣＤ３３、ＣＤ３４クラスＩ、ＣＤ５６、すべてＤＡＫＯ Ａ／Ｓ製
。
【０２９２】 概略的手順： 実施例２２のデンドリマー９６ｎｍｏｌおよびＶＳＤＥＸ３ｎｍｏｌを、０．
１４Ｍ炭酸水素ナトリウムバッファー０．２８ｍＬ中で６時間、３０℃で反応さ
せた。次いで、１５ｎｍｏｌの抗体を添加し、反応をさらに１８時間進行させた
。未反応のビニルスルホンを、アミノ含有停止バッファーにより１時間クエンチ
した。次いで、コンジュゲートをセファリルＳ−２００ＨＲカラムで精製した。
２７８および４９８ｎｍでの相対吸光度を用いてコンジュゲートの化学量論を求
めた。得られた典型的な結合比は、抗体／ＤＥＸが２〜３およびオクタフルオレ
セインデンドリマー／ＤＥＸが３〜４であり、約１：５の抗体：フルオレセイン
比を与えた。
【０２９３】 実施例６３ ＶＳＤＥＸ：（ＣＤ３）3 ：（実施例２２のデンドリマー）4 対ＶＳＤＥＸ：（
ＣＤ３）3 ：（実施例２３のデンドリマー）2 対ＣＤ２３：ＦＩＴＣ（ＤＡＫＯ
Ａ／Ｓ）の比較 ３種類のコンジュゲートをフローサイトメトリーにより、リンパ球の染色に関
して試験した。ＶＳＤＥＸ：（ＣＤ３）3 ：（実施例２２のデンドリマー）4 は
、ＣＤ２３：ＦＩＴＣよりも有意に強い特異的シグナルを与えたが、顆粒球（g
ranylocyte）の強い非特異的染色も認められた。
【０２９４】 ＶＳＤＥＸ：（ＣＤ３）3 ：（実施例２３のデンドリマー）2 は、３種類のコ
ンジュゲートの中で最も強い特異的シグナルを生じたが、顆粒球の非特異的染色
は、：（ＣＤ３）3 ：（実施例２２のデンドリマー）4 と比べて有意に低かった
。実際、このコンジュゲートは、１６倍まで希釈することができたが、依然とし
て未処理の（ｐｌａｉｎ）ＣＤ２３：ＦＩＴＣコンジュゲートに匹敵する特異的
シグナルを生じた。
【０２９５】 フルオレセイン（fluoroscein ）の抗体に対する比が２倍高いにもかかわらず
、：（ＣＤ３）3 ：（実施例２３のデンドリマー）2 がＶＳＤＥＸ：（ＣＤ３） 3 ：（実施例２２のデンドリマー）4 よりも強いシグナルを与えたという事実は
、実施例２３のデンドリマーにおけるフルオレセイン間の間隔（ｓｐａｃｉｎｇ
）の増加によるものである。このデンドリマーは、最も近接するフルオレセイン
間の１３７個の結合を特徴し、一方、実施例２２のデンドリマーにおけるフルオ
レセイン間には６７個の結合がある。
【０２９６】 実施例６４ストレプトアビジン（strepavidine）：（実施例３７のデンドリマー）コンジュ ゲートの調製 実施例３７のデンドリマー２ｍｇを水中に溶解し、２ｍｇのストレプトアビジ
ンを含む０．１４Ｍ炭酸塩バッファー水溶液０．１ｍＬ（ｐＨ１０）に添加した
。１０分間の反応後、混合物をクエン酸バッファーでｐＨ７に中和した。コンジ
ュゲートをセファリルＳ−２００ＨＲカラムで精製すると、非結合ストレプトア
ビジンの後かつ非結合デンドリマーの前に溶出した。
【０２９７】 推定されるコンジュゲートのＭＡＬＤＩは、１個のデンドリマーが結合したス
トレプトアビジンサブユニットに対応する分子量３１５００に新たなピークを示
した。しかしながら、非結合サブユニットに対応する１３０００にもピークが存
在し、これは、該反応条件下ですべてのサブユニットが標識されたわけではない
ことを示す。
【０２９８】 実施例６５実施例１９の式のデンドリマーを用いたγ−グロビンｍＲＮＡの検出およびシグ ナル増幅系またはシグナル増強系としての使用 ヒト臍帯血を単離し、出産直後にホルムアルデヒド固定し、顕微鏡スライドガ
ラス上に固定した。スライドをハイブリダイゼーション溶液（５０ｍＭ Ｔｒｉ
ｓ、１０ｍＭ ＮａＣｌ、１０％ｗ／ｖデキストラン硫酸、３０％ｗ／ｖホルム
アミド、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（登録商標）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、
ｐＨ７．６）で覆った。ハイブリダイゼーション溶液は、実施例１９のデンドリ
マー（５ｎＭ）または対応する核酸塩基配列を有するペプチド核酸（４０ｎＭ）
のいずれかをさらに含んだが、１種類のフルオレセイン標識（デンドリマーでな
い）で標識した。５５℃で３０分間のハイブリダイゼーション後、スライドを、
３０分間、３０％ｗ／ｖホルムアミド、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（登
録商標）、５ｍＭ ＥＤＴＡを含有する洗浄バッファーを用いるストリンジェン
ト洗浄条件に供した。抗ＦＩＴＣ：ＨＲＰ；ビオチニル−チラミド；ＦＩＴＣ−
ストレプトアビジンを用いて蛍光シグナルを増幅した。最後のストリンジェント
洗浄後、スライドを乾燥し、Ｉｍａｇｅｎ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｆｌｕｉｄ（Ｄ
ＡＫＯ Ａ／Ｓ）を加えた。実施例１９のデンドリマーを用いて得たシグナルは
、単一標識したペプチド核酸プローブを用いて得たシグナルよりも約１０倍強か
った。見かけ上、１種類のみのデンドリマーペプチド核酸が、試料中においてそ
の相補的ｍＲＮＡ配列に結合し、残りの７種類のフルオレセイン標識したペプチ
ド核酸はシグナル増幅に寄与する。デンドリマー含有ハイブリダイゼーションバ
ッファー、および単一標識したペプチド核酸を含有する対照バッファー中のペプ
チド核酸の見かけ上（ｎｏｍｉｎａｌ）濃度が同じであることは、さらに注目す
べきである。成人男性末梢血を用いた対照実験では、単一標識したペプチド核酸
プローブと比べて、バックグラウンドの増加もデンドリマーの交差反応も示され
なかった。
【０２９９】 実施例６６多層検出系におけるデンドリマーの使用 実施例１９及び実施例２１のデンドリマーを使用した。実施例１９のデンドリ
マーを、実施例５１に記載のようにしてヒト臍帯血とハイブリダイズさせた。実
施例２１のデンドリマーの構造部１は実施例１９のデンドリマーの８個の構造部
２に相補的である。これを追加のシグナル増強工程に利用した。実施例１９のデ
ンドリマーとのハイブリダイゼーションおよびストリンジェント洗浄後、ハイブ
リダイゼーションバッファー中の実施例２１のデンドリマーを室温に供した後、
３５℃でストリンジェント洗浄を行なった。比較のため、スライドの１つでは、
この追加の工程を省略した。実施例１９および実施例２１の両方のデンドリマー
を用いたハイブリダイゼーションの場合のシグナルを実施例１９のデンドリマー
のみを用いたハイブリダイゼーションの場合のシグナルと比べると、約５倍の増
幅が見られた。これは、単一標識した従来のプローブ（実施例６５参照）と比べ
て約５０倍の増強に相当する。
【０３００】 実施例６７バックグラウンドシグナルの低下 実験は、実施例２０のデンドリマー、および対応する核酸塩基配列を有する単
一標識した従来のペプチド核酸プローブを用い、中期染色体糸において行なった
。核酸塩基配列をヒトテロメア配列に指向させた。核酸塩基配列（ＴＡＡＣＣＣ
）3 。試料を６０％ホルムアミド中、８０℃で１０分間変性した。次いで、（実
施例６５に規定のような）デンドリマーまたはプローブを含むハイブリダイゼー
ションバッファーを添加し、スライドを室温まで放冷した後、６０℃でストリン
ジェント洗浄を行なった。従来のプローブがあっても標的が飽和しているため、
ほぼ同一のシグナルがデンドリマーおよび従来のプローブのそれぞれについて観
察された。バックグラウンドシグナルは両方の場合において見られた。７０℃で
のストリンジェント洗浄の後、従来のプローブの場合においてシグナルは完全に
なくなったが、デンドリマーシグナルは減衰しなかった。さらに、デンドリマー
の場合のバックグラウンドシグナルは、洗浄温度の上昇により著しく低下した。
したがって、より高温の洗浄温度の使用によって、より高い信号雑音比がもたら
される。
【０３０１】 実施例６８ビオチン：ストレプトアビジンに基づく増幅系 実験は、実施例６５の単一標識した従来のプローブを用い、実施例６５に記載
のようにして行なった。最後の可視化工程において、市販のＦＩＴＣ：ストレプ
トアビジンコンジュゲートを、未処理のストレプトアビジンと比較した後、実施
例１６のデンドリマーとともにインキュベートした。従来の系では、１個のＦＩ
ＴＣ：ストレプトアビジンが各固定化ビオチンに結合する。デンドリマー主体の
系では、１個のストレプトアビジンが各ビオチンに結合し、ストレプトアビジン
上には３個の結合部位が残り、これらは、さらなるデンドリマー結合に利用され
うる。したがって、全部で２４個のフルオレセイン分子を有する実施例１６の３
個のデンドリマーは、ストレプトアビジンを介して各ビオチンに結合する。約１
５倍のシグナル増強が観察され、市販の該コンジュゲートにおいてＦＩＴＣのス
トレプトアビジンに対する比が１．５〜１であることに一致した。
【０３０２】
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、種々の適切な保護基の例を示す。
【図２】 図２は、活性基の例を示す。
【図３】 図３は、遊離基の例を示す。
【図４】 図４〜１７は、実施例の様々なデンドリマーを示す。
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ ４Ｃ０７１ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/545 Ａ ４Ｊ０３１ Ｇ０１Ｎ 33/545 33/566 33/566 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ， ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，Ｋ Ｇ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ， ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ， ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B024 AA11 BA80 CA01 CA09 CA11 HA12 4B063 QA01 QQ01 QQ42 QQ52 QR32 QR48 QR55 QR81 QR82 QS34 QS36 QX02 4C056 AA02 AB01 AC03 AD01 AE03 AF01 EA01 EB03 EC07 4C062 HH21 4C063 AA05 BB07 CC79 DD54 EE10 4C071 AA01 BB01 CC02 CC21 DD06 EE13 FF04 GG06 HH08 KK11 LL10 4J031 BA07 BA09 BA12 BA15 BA22 BA23 BA28 BA29 BB01 BB02 BB03 BC07 BD03

Claims (68)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 一般式（Ｉ） （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2 （Ｉ） （式中、Ａは少なくとも１つのＮ原子分岐点を有する樹状コアであり、該分岐点
    は天然に存在するアミノ酸の一部ではなく、Ａは少なくとも１つのエーテル基を
    含み、各々の構造部１および構造部２は、独立して、プローブ、１つもしくはそ
    れ以上の標識化合物で置換されたプローブ、標識化合物、または反応性基を有す
    るプローブであり、ｘ１およびｘ２は独立して、０または１〜１２００の整数で
    ある） を有するデンドリマーおよびその保護型。
  2. 【請求項２】 樹状コアＡが、単一の焦点から複数世代の連続層として広が
    り、各層が１つまたはそれ以上の分岐点を有してなる、請求項１記載のデンドリ
    マー。
  3. 【請求項３】 樹状コアＡが、１つまたはそれ以上のＣ1-100 アルキル基、
    Ｃ2-100 アルケニル基、Ｃ2-100 アルキニル基を含み、該アルキル基、アルケニ
    ル基、およびアルキニル基が、任意に、１つまたはそれ以上の官能基および／ま
    たは１つまたはそれ以上のヘテロ原子、天然または非天然のアミノ酸、ペプチド
    核酸成分、ＬＮＡ、ペプチド、タンパク質、抗体、抗原、免疫複合体、ＤＮＡ配
    列またはそのアナログ、ＲＮＡ配列またはそのアナログ、高分子、および固体ま
    たは半固体の支持体を含有してなる、請求項１または２記載のデンドリマー。
  4. 【請求項４】 樹状コアＡが、１つまたはそれ以上のＣ15-25 アルキル基、
    Ｃ15-25 アルケニル基、Ｃ15-25 アルキニル基を含み、該アルキル基、アルケニ
    ル基、およびアルキニル基が、任意に１つまたはそれ以上の官能基および／また
    は１つまたはそれ以上のヘテロ原子を含んでなる、請求項３記載のデンドリマー
    。
  5. 【請求項５】 樹状コアＡが、１つまたはそれ以上の、 −ＮＨ（（ＣＨ2 ）q Ｏ））q （ＣＨ2 ）q Ｎ（（ＣＨ2 ）q Ｃ（Ｏ）−）2 、
    （（−ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｎ（（ＣＨ2 ）q Ｏ−）2 、 （（−ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｃ（（ＣＨ2 ）q Ｏ−）3 、および −ＮＨ（（ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｃ（（ＣＨ2 ）q Ｃ（Ｏ）−）3 、 （式中、各々のｑは、独立して、０、１〜８、好ましくは１〜３の整数である）
    を含んでなる、請求項３または４記載のデンドリマー。
  6. 【請求項６】 樹状コアが、１つまたはそれ以上の、 −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ
    （Ｏ））2 −、 −ＮＨ（ＣＨ2 ）2 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 （Ｎ（ＣＨ2 ＣＨ2 ）Ｎ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ
    ）−、 （−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 （Ｏ）（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ２）3 Ｎ（Ｃ
    Ｈ2 ＣＯＯＨ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））q 、 （式中、ｑは前記で規定された通りである） −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＯＯＨ
    ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−、 −ＮＨ（ＣＨ3 ）3 （ＯＣＨ2 ＣＨ2 ）q Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 ＣＯＯＨ）
    ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−、および −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）
    ＣＨ2 Ｏ（ＣＨ2 ＣＨ2 ）q ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ
    （ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 ＣＯＯＨ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−、 を含んでなる、請求項３〜５いずれか記載のデンドリマー。
  7. 【請求項７】 各々の構造部１または構造部２の間の間隔距離が少なくとも
    １５０個の結合である、請求項１〜６いずれか記載のデンドリマー。
  8. 【請求項８】 構造部１および構造部２の一方がプローブであり、他方が標
    識化合物である、請求項１〜７いずれか記載のデンドリマーまたはその保護型。
  9. 【請求項９】 構造部１および構造部２の両方が、標識化合物、または標識
    化合物により置換されたプローブである、請求項１〜７いずれか記載のデンドリ
    マーまたはその保護型。
  10. 【請求項１０】 少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つ
    の標識化合物が異なる標識化合物である、請求項９記載のデンドリマーまたはそ
    の保護型。
  11. 【請求項１１】 構造部１が、標識化合物、または標識化合物により置換さ
    れたプローブであり、構造部２が、別の標識化合物または該別の標識化合物によ
    り置換されたプローブである、請求項９記載のデンドリマーまたはその保護型。
  12. 【請求項１２】 構造部１および構造部２の両方がプローブである、請求項
    １〜７いずれか記載のデンドリマーまたはその保護型。
  13. 【請求項１３】 標識化合物が、発蛍光団、ビオチン、ジニトロフェニルラ
    ジカル、ジゴキシゲニン、ラジオアイソトープ標識、または酵素標識、染料、化
    学発光標識、ハプテン、抗原または抗体標識、およびスピン標識から選択される
    ものである、請求項１２記載のデンドリマーまたはその保護型。
  14. 【請求項１４】 プローブが、ペプチド核酸、ＲＮＡ配列もしくはＤＮＡ配
    列またはそのアナログ、抗体、抗原、タンパク質、ペプチドまたはその誘導体、
    エピトープ、およびビオチンから選択されるものである、請求項１〜１２いずれ
    か記載のデンドリマーまたはその保護型。
  15. 【請求項１５】 ｘ１およびｘ２の両方が０である、請求項１〜１４いずれ
    か記載のデンドリマー。
  16. 【請求項１６】 ｘ１が０であり、ｘ２が１〜１２００の整数である、請求
    項１〜１４いずれか記載のデンドリマー。
  17. 【請求項１７】 ｘ２が０であり、ｘ１が１〜１２００の整数である、請求
    項１〜１４いずれか記載のデンドリマー。
  18. 【請求項１８】 保護型を提供する保護基が、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｍｔｔ、
    Ｍｍｔ、Ｄｄｅ、Ａｌｌ、Ｏｄｍａｂ、Ａｌｏｃ、ＯｔＢｕ、ＯＭｅ、ＯＢｚ、
    Ｚ、ＭＯＭおよびベンジルオキシカルボニルから選択されるものである、請求項
    １〜１７いずれか記載のデンドリマー。
  19. 【請求項１９】 ｘ１およびｘ２が独立して２m であり、ｍが１〜１０の整
    数である、請求項１〜１８いずれか記載のデンドリマー。
  20. 【請求項２０】 ｍが２、３、４または５である、請求項１９記載のデンド
    リマー。
  21. 【請求項２１】 樹状コアＡが、１つまたはそれ以上の構造（Ｉａ）の成分
    Ｚ［（Ｚ］z ［）y ］z （Ｉａ） （式中、各々のＺは、少なくとも１つのＮ原子分岐点を含む基であり、該分岐点
    が天然に存在するアミノ酸の一部ではなく、式（Ｉａ）の成分は少なくとも１つ
    のエーテル基を含み、各々のｙは独立して２または３であり、ｚは１〜１０の整
    数であり、ただしｙz ≦１２００である） を含む、請求項１〜２０いずれか記載のデンドリマーおよびその保護型。
  22. 【請求項２２】 樹状コアＡが、天然または非天然のアミノ酸、ペプチド核
    酸成分、ＬＮＡ、ペプチド、タンパク質、抗体、抗原、免疫複合体、ＤＮＡ配列
    またはそのアナログ、ＲＮＡ配列またはそのアナログ、高分子、および／または
    固体または半固体の支持体に連結された少なくとも２つの構造（Ｉａ）の成分を
    含有してなる、請求項２１記載のデンドリマー。
  23. 【請求項２３】 各々のＺが、１つまたはそれ以上のＣ1-100 アルキル基、
    Ｃ2-100 アルケニル基、Ｃ2-100 アルキニル基を含み、該アルキル基、アルケニ
    ル基、およびアルキニル基が、任意に、１つまたはそれ以上の官能基および／ま
    たは１つまたはそれ以上のヘテロ原子、天然または非天然のアミノ酸、ペプチド
    核酸成分、ＬＮＡ、ペプチド、タンパク質、抗体、抗原、免疫複合体、ＤＮＡ配
    列およびそのアナログ、ＲＮＡ配列およびそのアナログならびに高分子を含有し
    てなる、請求項２１または２２記載のデンドリマー。
  24. 【請求項２４】 樹状コアＡが、１つまたはそれ以上のＣ15-25 アルキル基
    、Ｃ15-25 アルケニル基、Ｃ15-25 アルキニル基を含んでなり、該アルキル基、
    アルケニル基、およびアルキニル基が、任意に１つもしくはそれ以上の官能基お
    よび／または１つもしくはそれ以上のヘテロ原子を含んでなる、請求項２３記載
    のデンドリマー。
  25. 【請求項２５】 樹状コアＡが、１つまたはそれ以上の、 −ＮＨ（（ＣＨ2 ）q Ｏ））q （ＣＨ2 ）q Ｎ（（ＣＨ2 ）q Ｃ（Ｏ）−）2 、
    （（−ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｎ（（ＣＨ2 ）q Ｏ−）2 、 （（−ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｃ（（ＣＨ2 ）q Ｏ−）3 、および −ＮＨ（（ＣＨ2 ）q Ｏ）q （ＣＨ2 ）q Ｃ（（ＣＨ2 ）q Ｃ（Ｏ）−）3 、 （式中、各々のｑは独立して０、１〜８、好ましくは１〜３の整数である） を含んでなる、請求項２３または２４記載のデンドリマー。
  26. 【請求項２６】 樹状コアＡが、１つまたはそれ以上の −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 Ｃ
    （Ｏ））2 −、 −ＮＨ（ＣＨ2 ）2 ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ2 （Ｎ（ＣＨ2 ＣＨ2 ）Ｎ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ
    ）−、 （−ＮＨ（ＣＨ2 ）3 （Ｏ）（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ２）3 Ｎ（Ｃ
    Ｈ2 ＣＯＯＨ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ））q 、 （式中、ｑは前記で規定された通りである）、 −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＯＯＨ
    ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−、 −ＮＨ（ＣＨ3 ）3 （ＯＣＨ2 ＣＨ2 ）q Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 ＣＯＯＨ）
    ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−、および −ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 ＮＨＣ（Ｏ）
    ＣＨ2 Ｏ（ＣＨ2 ＣＨ2 ）q ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ2 ）3 Ｏ（ＣＨ2 ）2 Ｏ
    （ＣＨ2 ）2 Ｏ（ＣＨ2 ）3 Ｎ（ＣＨ2 ＣＯＯＨ）ＣＨ2 Ｃ（Ｏ）−、 を含んでなる、請求項２１〜２６いずれか記載のデンドリマー。
  27. 【請求項２７】 各々の構造部１または構造部２の間の間隔距離が少なくと
    も１５０個の結合である、請求項２１〜２６いずれか記載のデンドリマー。
  28. 【請求項２８】 構造部１および構造部２の一方がプローブであり、他方が
    標識化合物である、請求項２１〜２７いずれか記載のデンドリマーまたはその保
    護型。
  29. 【請求項２９】 構造部１および構造部２の両方が、標識化合物、または標
    識化合物により置換されたプローブである、請求項２１〜２７いずれか記載のデ
    ンドリマーまたはその保護型。
  30. 【請求項３０】 少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つ
    の標識化合物が、異なる標識化合物である、請求項２９記載のデンドリマーまた
    はその保護型。
  31. 【請求項３１】 構造部１が、標識化合物、または標識化合物により置換さ
    れたプローブであり、構造部２が、別の標識化合物または該別の標識化合物によ
    り置換されたプローブである、請求項２９記載のデンドリマーまたはその保護型
    。
  32. 【請求項３２】 構造部１および構造部２の両方がプローブである、請求項
    ２１〜２７いずれか記載のデンドリマーまたはその保護型。
  33. 【請求項３３】 標識化合物が、発蛍光団、ビオチン、ジニトロフェニルラ
    ジカル、ジゴキシゲニン、ラジオアイソトープ標識、または酵素標識、染料、化
    学発光標識、ハプテン、抗原または抗体標識、およびスピン標識から選択される
    ものである、請求項２１〜３２いずれか記載のデンドリマーまたはその保護型。
  34. 【請求項３４】 プローブが、ペプチド核酸、ＲＮＡ配列もしくはＤＮＡ配
    列またはそれらのアナログ、抗体、抗原、タンパク質、ペプチドまたはそれらの
    誘導体、エピトープ、およびビオチンから選択されるものである、請求項２１〜
    ３２いずれか記載のデンドリマーまたはその保護型。
  35. 【請求項３５】 ｘ１およびｘ２の両方が０である、請求項２１〜３４いず
    れか記載のデンドリマー。
  36. 【請求項３６】 ｘ１が０であり、ｘ２が１〜１２００の整数である、請求
    項２１〜３４いずれか記載のデンドリマー。
  37. 【請求項３７】 ｘ２が０であり、ｘ１が１〜１２００の整数である、請求
    項２１〜３４いずれか記載のデンドリマー。
  38. 【請求項３８】 ｘ１およびｘ２が独立して２m であり、ｍが１〜１０の整
    数である、請求項２１〜３７いずれか記載のデンドリマー。
  39. 【請求項３９】 ｍが２、３、４または５である、請求項３８記載のデンド
    リマー。
  40. 【請求項４０】 構造部１および構造部２の少なくとも１つが、天然もしく
    は非天然のアミノ酸に末端でまたは内部で、ペプチド核酸に末端でまたは内部で
    、ペプチドに末端でまたは内部で、ＬＮＡに末端でまたは内部で、タンパク質に
    末端でまたは内部で、抗体、抗原、免疫複合体、ＲＮＡ配列もしくはそのアナロ
    グに末端でまたは内部で、ＤＮＡ配列もしくはそのアナログに末端でまたは内部
    で、高分子に末端でまたは内部で、あるいは固体または半固体の支持体に連結さ
    れてなる、請求項１〜３９いずれか記載のデンドリマー。
  41. 【請求項４１】 請求項１〜４０いずれか記載の保護されたデンドリマー。
  42. 【請求項４２】 天然もしくは非天然のアミノ酸に末端でまたは内部で、ペ
    プチド核酸に末端でまたは内部で、ＬＮＡに末端でまたは内部で、ペプチドに末
    端でまたは内部で、タンパク質に末端でまたは内部で、抗体、抗原、免疫複合体
    、ＲＮＡ配列もしくはそのアナログに末端でまたは内部で、ＤＮＡ配列もしくは
    そのアナログに末端でまたは内部で、高分子に末端でまたは内部で、あるいは固
    体または半固体の支持体に連結された、少なくとも１つの請求項１〜４１いずれ
    か記載のデンドリマーを含有してなるデンドリマー複合体またはその保護型。
  43. 【請求項４３】 デンドリマーが、少なくとも１つの構造部１および／また
    は構造部２を介して連結されてなる、請求項４２記載のデンドリマー複合体。
  44. 【請求項４４】 デンドリマーが、樹状コアＡの基（単数または複数）を介
    して連結されてなる、請求項４２記載のデンドリマー複合体。
  45. 【請求項４５】 デンドリマー複合体が、請求項１〜４１いずれか記載の１
    〜５０個のデンドリマーを含有してなる、請求項４２〜４４いずれか記載のデン
    ドリマー複合体。
  46. 【請求項４６】 デンドリマー複合体が、１〜３５個、１〜３０個、１〜２
    ５個、１〜１５個、１〜１０個、１〜８個、１〜５個、または１〜３個の請求項
    １〜４１いずれか記載のデンドリマーを含有してなる、請求項４５記載のデンド
    リマー複合体。
  47. 【請求項４７】 デンドリマーが、天然に存在するかまたは天然には存在し
    ないアミノ酸、ペプチド核酸、ＬＮＡ、タンパク質、ＲＮＡ配列もしくはＤＮＡ
    配列、高分子、または固体もしくは半固体の支持体に内部で連結されてなる、請
    求項４２〜４６いずれか記載のデンドリマー複合体。
  48. 【請求項４８】 請求項４２〜４７いずれか記載の保護されたデンドリマー
    複合体。
  49. 【請求項４９】 試料中の核酸配列、抗体、抗原、免疫複合体、タンパク質
    、またはペプチドの存在を検出するための請求項１〜４１いずれか記載のデンド
    リマーまたは請求項４２〜４８いずれか記載のデンドリマー複合体の使用。
  50. 【請求項５０】 少なくとも１つの請求項１〜４１いずれか記載のデンドリ
    マーおよび／または少なくとも１つの請求項４２〜４８いずれか記載のデンドリ
    マー複合体を含有してなる検出システム。
  51. 【請求項５１】 少なくとも１つの請求項１〜４１いずれか記載のデンドリ
    マーおよび／または少なくとも１つの請求項４２〜４８いずれか記載のデンドリ
    マー複合体を含有してなるシグナル増幅システム。
  52. 【請求項５２】 検出システムとしての、請求項１〜４１いずれか記載のデ
    ンドリマーまたは請求項４２〜４８いずれか記載のデンドリマー複合体の使用。
  53. 【請求項５３】 シグナル増幅システムとしての、請求項１〜４１いずれか
    記載のデンドリマーまたは請求項４２〜４８いずれか記載のデンドリマー複合体
    の使用。
  54. 【請求項５４】 試料中の核酸配列、抗体、抗原、免疫複合体、タンパク質
    、またはペプチドの存在を検出するための請求項５０記載の検出システムまたは
    請求項５１記載の増幅システムの使用。
  55. 【請求項５５】 試料が、血液試料、骨髄試料、染色体スプレッド、組織試
    料、組織切片、細胞スメア、バイオプシー、器官、スワップ、細胞またはその一
    部の懸濁物、あるいは全細胞またはその一部である、請求項５４記載の使用。
  56. 【請求項５６】 インビトロ診断法またはインビボ診断法における請求項１
    〜４１いずれか記載のデンドリマーまたは請求項４２〜４８いずれか記載のデン
    ドリマー複合体の使用。
  57. 【請求項５７】 化合物を標識するための、請求項１〜４１いずれか記載の
    デンドリマーまたは請求項４２〜４８いずれか記載のデンドリマーの使用。
  58. 【請求項５８】 標識対象の化合物が、ペプチド核酸、ＬＮＡ、ＲＮＡ配列
    、ＤＮＡ配列またはそのアナログ、抗体、抗原、タンパク質、ペプチドまたはそ
    の誘導体、エピトープ、ストレプトアビジン、およびビオチンから選択されるも
    のである、請求項５７記載の使用。
  59. 【請求項５９】 デンドリマーまたはデンドリマー複合体が、発蛍光団、ビ
    オチン、ジニトロフェニルラジカル、ジゴキシゲニン、ラジオアイソトープ標識
    、酵素標識、染料、化学発光標識、ハプテン、抗原または抗体標識、およびスピ
    ン標識から選択された１つまたはそれ以上の標識化合物を含有してなる、請求項
    ５７または５８記載の使用。
  60. 【請求項６０】 １つまたはそれ以上の、請求項１〜４１いずれか記載のデ
    ンドリマーおよび／または請求項４２〜４８いずれか記載のデンドリマー複合体
    を含有してなる、化合物を標識するための標識キット。
  61. 【請求項６１】 標識化合物をさらに含有してなる、請求項６０記載の標識
    キット。
  62. 【請求項６２】 デンドリマーまたはデンドリマー複合体が、標識化合物を
    含有してなる、請求項６０記載の標識キット。
  63. 【請求項６３】 標識化合物が、発蛍光団、ビオチン、ジニトロフェニルラ
    ジカル、ジゴキシゲニン、ラジオアイソトープ標識、酵素標識、染料、化学発光
    標識、ハプテン、抗原または抗体標識、およびスピン標識から選択されるもので
    ある、請求項６０または６１記載の標識キット。
  64. 【請求項６４】 １つまたはそれ以上の請求項１〜４２いずれか記載のデン
    ドリマーおよび／または請求項４２〜４８いずれか記載のデンドリマー複合体を
    含有してなり、該デンドリマーおよび／または該デンドリマー複合体が、１つま
    たはそれ以上の標識化合物を含有してなる、化合物を検出するための検出キット
    。
  65. 【請求項６５】 標識化合物が、発蛍光団、ビオチン、ジニトロフェニルラ
    ジカル、ジゴキシゲニン、ラジオアイソトープ標識、酵素標識、染料、化学発光
    標識、ハプテン、抗原または抗体標識、およびスピン標識から選択されてなる、
    請求項６４記載の検出キット。
  66. 【請求項６６】 一般式（Ｉ） （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2 （Ｉ） （式中、Ａが少なくとも１つのＮ原子分岐点を有する樹状コアであり、該分岐点
    が、天然に存在するアミノ酸の一部ではなく、Ａが少なくとも１つのエーテル基
    を含有してなり、各々の構造部１および構造部２が独立して、１つまたはそれ以
    上の標識化合物により任意に置換されているプローブ、標識化合物、または反応
    性基を有するプローブであり、ｘ１およびｘ２が、独立して０または１〜１２０
    ０の整数である） を有するデンドリマーの製造方法であって、 樹状コアＡの成分に応じて、化学／ペプチド合成により樹状コアＡを調製する工
    程、ここで樹状コアＡは、脱保護により除去されうる多数の保護基を有する、 所望により、適切な脱保護剤の使用により保護基を除去する工程、 所望により、構造部１および／または構造部２を樹状コアＡに結合させる工程を
    含み、それによりデンドリマーまたはその保護型を得る、デンドリマーまたはそ
    の保護型の製造方法。
  67. 【請求項６７】 一般式（Ｉ） （構造部１）x1−Ａ−（構造部２）x2 （Ｉ） （式中、Ａは、少なくとも１つのＮ原子分岐点を有する樹状コアであり、該分岐
    点は天然に存在するアミノ酸の一部ではなく、Ａは少なくとも１つのエーテル基
    を含み、各々の構造部１および構造部２が、独立して、１つまたはそれ以上の標
    識化合物により任意に置換されているプローブ、標識化合物、または反応性基を
    有するプローブであり、ｘ１およびｘ２は独立して０または１〜１２００の整数
    である） を有するデンドリマーまたはその保護型の製造方法であって、 樹状コアＡの成分に応じて、化学／ペプチド合成により樹状コアＡのためのビル
    ディングブロックを調製する工程、 樹状コアＡを構築する工程、ここで樹状コアＡは、脱保護により除去されうる多
    数の保護基を有し、 所望により、適切な脱保護剤の使用により保護基を除去する工程、 所望により、構造部１および／または構造部２を樹状コアＡに結合させる工程を
    含み、それによりデンドリマーまたはその保護型を得る、デンドリマーまたはそ
    の保護型の製造方法。
  68. 【請求項６８】 請求項６６または６７記載の方法により得られうるデンド
    リマー。
JP2001508057A 1999-06-29 2000-06-29 標識およびプローブを保持するデンドリマーを用いた検出 Pending JP2003503591A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA199900934 1999-06-29
DK199900934 1999-06-29
PCT/DK2000/000351 WO2001002861A1 (en) 1999-06-29 2000-06-29 Detection using dendrimers bearing labels and probes

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2003503591A true JP2003503591A (ja) 2003-01-28

Family

ID=8099175

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001508057A Pending JP2003503591A (ja) 1999-06-29 2000-06-29 標識およびプローブを保持するデンドリマーを用いた検出

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20030077635A1 (ja)
EP (1) EP1192465A1 (ja)
JP (1) JP2003503591A (ja)
AU (1) AU5522600A (ja)
CA (1) CA2376619A1 (ja)
WO (1) WO2001002861A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007501812A (ja) * 2003-08-08 2007-02-01 ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ ペプチドのための結合剤として新しい構造上十分に定義された枝分れしたポリマーの合成および適用

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030124547A1 (en) * 1998-09-04 2003-07-03 Risa Peoples Hybridization assays for gene dosage analysis
US6471968B1 (en) * 2000-05-12 2002-10-29 Regents Of The University Of Michigan Multifunctional nanodevice platform
DK1397380T3 (da) * 2001-06-20 2007-05-07 Univ Ramot Multipelt antigent peptid, der udviser flere kopier af en epitop af et plaquedannende polypeptid, og fremgangmåder til anvendelse deraf
US7473767B2 (en) * 2001-07-03 2009-01-06 The Institute For Systems Biology Methods for detection and quantification of analytes in complex mixtures
WO2003083440A2 (en) * 2002-03-29 2003-10-09 Genentech, Inc. Methods and compositions for detection and quantitation of nucleic acid analytes
US7648678B2 (en) 2002-12-20 2010-01-19 Dako Denmark A/S Method and system for pretreatment of tissue slides
US7153905B2 (en) * 2003-03-21 2006-12-26 The General Hospital Corporation Hyperbranched dendron and methods of synthesis and use thereof
JP5095764B2 (ja) * 2003-09-18 2012-12-12 ポスコ サブストレート、製造方法、診断システム及び検出方法
US20060286378A1 (en) * 2005-05-23 2006-12-21 Shivkumar Chiruvolu Nanostructured composite particles and corresponding processes
WO2007124593A1 (en) * 2006-05-02 2007-11-08 Universite Laval Branched peptide amplification and uses thereof
KR100938777B1 (ko) * 2006-12-15 2010-01-27 주식회사 파나진 다중 아민기를 갖는 펩티드 핵산과 이를 이용하는 핵산검출 장치
US9096849B2 (en) * 2007-05-21 2015-08-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Navy Solid phase for capture of nucleic acids
WO2010039861A2 (en) 2008-09-30 2010-04-08 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer conjugates
US9017644B2 (en) 2008-11-07 2015-04-28 The Regents Of The University Of Michigan Methods of treating autoimmune disorders and/or inflammatory disorders
WO2011059609A2 (en) 2009-10-13 2011-05-19 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer compositions and methods of synthesis
WO2011059586A2 (en) 2009-10-30 2011-05-19 The Regents Of The University Of Michigan Multifunctional small molecules
FR2955111B1 (fr) 2010-01-12 2013-05-31 Biomerieux Sa Procede de preparation de composes polybiotinyles
WO2013085718A1 (en) 2011-12-08 2013-06-13 The Regents Of The University Of Michigan Multifunctional small molecules
ES2678211T3 (es) 2012-03-27 2018-08-09 Ventana Medical Systems, Inc. Conjugados de señalización y procedimientos de uso
JP6841609B2 (ja) 2015-07-10 2021-03-10 ３スキャン インコーポレイテッド 組織学的染色の空間的多重化

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL83567A (en) * 1986-08-18 1992-02-16 Dow Chemical Co Starburst conjugates with a carried material,such as an agricultural or pharmaceutical material
US6083708A (en) * 1995-08-11 2000-07-04 Dade Behring Inc. Polypeptide: dendrimer complexes
DE19703718A1 (de) * 1996-01-23 1997-07-24 Inst Chemo Biosensorik Affinitätssensoren und -assays
DE19624705A1 (de) * 1996-06-20 1998-01-08 Deutsches Krebsforsch Dendrimere auf Saccharid-Basis
CA2278200A1 (en) * 1997-01-29 1998-07-30 Nycomed Imaging As Polymers
AU2788099A (en) * 1998-02-25 1999-09-15 Biotraces, Inc. Phosphate-based dendrimers for bioassays
DE19855180A1 (de) * 1998-11-30 2000-05-31 Metabion Gmbh Ges Fuer Angewan in situ-Hybridisierungsverfahren
GB9905771D0 (en) * 1999-03-12 1999-05-05 Isis Innovation Compounds

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007501812A (ja) * 2003-08-08 2007-02-01 ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ ペプチドのための結合剤として新しい構造上十分に定義された枝分れしたポリマーの合成および適用

Also Published As

Publication number Publication date
US20030077635A1 (en) 2003-04-24
AU5522600A (en) 2001-01-22
EP1192465A1 (en) 2002-04-03
WO2001002861A1 (en) 2001-01-11
CA2376619A1 (en) 2001-01-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2003503591A (ja) 標識およびプローブを保持するデンドリマーを用いた検出
EP0220899B1 (en) Bifunctional linker
AU764144B2 (en) Polyamide chains of precise length, methods to manufacture them and their conjugates
JP4877225B2 (ja) ポリオキシアルキレン誘導体
JP2018138588A (ja) 新規リンカー、その製造方法およびその応用
KR101072899B1 (ko) 아미노산 스페이서가 결합된 펩티드 핵산의 합성 및 그의응용
CN111001012A (zh) 一种亲水碳酸酯型抗体偶联药物
CN110974975B (zh) 一种快速释放的抗体药物偶联物
KR100938777B1 (ko) 다중 아민기를 갖는 펩티드 핵산과 이를 이용하는 핵산검출 장치
EP1412755A2 (en) Use of dendrimers and poly-branched molecules to enhance signal in fluorescent assay systems
RU2533567C2 (ru) Производные комплекса металл-сален и способ их получения
Kantchev et al. Direct solid-phase synthesis and fluorescence labeling of large, monodisperse mannosylated dendrons in a peptide synthesizer
JPH11124396A (ja) 樹状ポリペプチド
JP2002525405A (ja) Ｐｅｇ−ベースのマクロモノマー、これから製造された化学的に不活性なポリマー、ならびにこれらポリマーの有機合成および酵素反応への使用
JP2003506326A (ja) 診断イメージング造影剤、生物活性物質、および薬剤の単分子担体としてのポリペプチドデンドリマー
CN114191564A (zh) 一种非天然鹅膏毒肽类抗体偶联物
JP2011504463A (ja) ヘテロ二官能性のポリエチレングリコール試薬
CN110456053B (zh) 一种二价靶向多肽探针及其制备方法
JP2001514741A (ja) 緑色蛍光蛋白質およびその蛍光変異体による標的の検出
Pechar et al. Poly (ethylene glycol)-based polymer carrier of doxorubicin degradable by both enzymatic and chemical hydrolyses
JPWO2002051797A1 (ja) 新規な機能性ペプチド核酸モノマーとその製法
JP2009096929A (ja) 擬似ペプチドライブラリー
JP3418693B2 (ja) ポリ−ε−置換−Ｌ−リジンのＤ−ガラクトピラノシル−グルコン酸誘導体
EP1361228A1 (en) Thermostable and monoconjugatable gold cluster complexes
Kinzel et al. Synthesis of a functionalized high affinity mannose receptor ligand and its application in the construction of peptide‐, polyamide‐and PNA‐conjugates