JP2002525405A

JP2002525405A - Ｐｅｇ−ベースのマクロモノマー、これから製造された化学的に不活性なポリマー、ならびにこれらポリマーの有機合成および酵素反応への使用

Info

Publication number: JP2002525405A
Application number: JP2000572278A
Authority: JP
Inventors: メルダル，モーテン; ブシャルト，ジェンス; ラドマン，ジョルグ
Original assignee: カールスベルクエイ／エス
Priority date: 1998-09-28
Filing date: 1999-09-28
Publication date: 2002-08-13
Also published as: EP1137690A2; HU0103572D0; NO20011554L; US7064179B1; AU766181B2; ES2232176T5; CZ20011037A3; ES2232176T3; NO20011554D0; AU5849899A; EP1137690B2; WO2000018823A3; IL141849A0; ATE282057T1; DE69921850D1; DE69921850T2; CA2345332A1; NZ511315A; WO2000018823A2; HUP0103572A3

Abstract

(57)【要約】【化１】【化２】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の分野）本発明は、エチレングリコール反復単位を含むマクロモノマー、それから製造
された化学的に不活性なポリマー、およびそのようなポリマーの固相生化学的ア
ッセイにおける使用に関する。

【０００２】（発明の背景）アクリルアミド終結ポリエチレングリコールを架橋ポリマーの製造で使用する
ことは、国際特許出願第WO93/16118号および英国特許第9609911.4号に記述され
ている。そのようなポリマーは特にペプチド、オリゴヌクレオチドもしくはオリ
ゴ多糖合成用の固体支持体またはタンパク質の固定化用基質もしくはクロマトグ
ラフ用樹脂として用いられている。それらは、水中で完全に膨脹し、また固相酵
素アッセイ用にも用いることができる。そのように製造されたポリマーは特にポ
リペプチド合成の支持体として有用であるが、ポリマーマトリックスの主鎖中の
不安定な結合の除去と、より化学的に不活性な結合との置換により、それらが多
様な有機反応を行うための支持体として用いられることが可能となる。

【０００３】前述のＰＥＧ−ベース樹脂のすべては、無水酢酸やルイス酸、塩化チオニル、
ブチルリチウムまたはカリウムヘキサメチルジシラザンのような過酷で通常用い
られる反応条件に対してかなり不安定であるのに対し、安定な１級エーテル結合
のみ、加えてＣＨおよびＣＣ結合を含むポリマーがこれらの条件下で完全に安定
であろう。

【０００４】上記要求を考え、ここに、オキセタンまたはビニルフェニルプロピルエーテル
終結ポリエチレンおよびポリプロピレングリコールの一連のマクロモノマーを開
発し、それらから、前述のＰＥＧ−ベースポリマーにおける不安定な結合を安定
なエーテル連鎖で置換し、一方親水性−疎水性の特徴の最適バランスは変わらな
い、架橋した樹脂を製造することができる。

【０００５】（発明の要旨）１つの観点において、本発明は、６〜２００の範囲の反復単位を有し、式：

【化３１】［式中、ｍは、０〜１０の整数であり、ａは、１〜４の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］；を有するか、または式：

【化３２】［式中、ｍは、１〜１０の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］を有す
るエーテル基で終結する少なくとも１つの末端を有するポリエチレングリコール
のマクロモノマーに関する。

【０００６】別の観点において、本発明は、構造：

【化３３】［式中、

【化３４】は以下のｎの平均値も意味し、ＸおよびＹは、互いに独立して式：

【化３５】［式中、ｍは、０〜１０の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あるか、またはＸは−ＯＨであり、Ｙは式：

【化３６】［式中、ｍは、０〜１０であり、ａは、上記で定義のとおりであり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あるか、またはＸおよびＹは、互いに独立して式：

【化３７】［式中、ｍは、１〜１０であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あるか、またはＸは−ＯＨであり、Ｙは式：

【化３８】［式中、ｍは、１〜１０であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
ある］を有するタイプＡのマクロモノマーに関する。

【０００７】さらに別の観点において、本発明は、構造：

【化３９】［式中、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルであり、

【化４０】は、上記で定義のように６〜３００の実数であり、Ｘ、ＹおよびＺは、互いに独立してＯＨまたは式：

【化４１】［式中、ｍは、０〜１０の整数であり、ａは、上記で定義したとおりであり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あり、ただしＸ、ＹおよびＺの少なくとも１つが式：

【化４２】［式中、ｍは、０〜１０の整数であり、ａは、上記で定義したとおりであり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あるか、またはＸ、ＹおよびＺは、互いに独立してＯＨまたは式：

【化４３】［式中、ｍは、１〜１０の整数であり、ａは、上記で定義したとおりであり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あり、ただしＸ、ＹおよびＺの少なくとも１つが式：

【化４４】［式中、ｍは、１〜１０の整数であり、ａは、上記で定義したとおりであり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
ある］を有するタイプＢのマクロモノマーに関する。

【０００８】（発明の詳細な説明）本明細書中において、用語「アルキル」は、メチル、エチル、プロピル、イソ
プロピル、ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert-ブチル、ペンチル、ヘキシ
ル、ヘプチル、オクチル、ノニルまたはデシルのような１〜１０炭素原子の脂肪
族残基を意味する。用語「アリールアルキル」は、メチレン、エチレンまたはプ
ロピレンのような１〜５炭素原子のアルキレン鎖に結合したアリール基を意味し
、その中のアリール基は、フェニル、ナフチルおよびビフェニルのような標準的
な炭素環式芳香式ならびにピリジル、ビピリジル、イミダゾリル、トリアゾリル
、ピロリル、ビピロリル、チアゾリルおよびオキサゾリルのようなヘテロ環式を
含む単環もしくは２環芳香式であってもよい。

【０００９】置換基Ｒに付け加えた因子「ａ」は、Ｒがフェニル環に全体で「ａ」回存在す
ること、および各基Ｒは他の基Ｒとは独立してＲの定義から選択されてもよいこ
とを示す。因子「

【化４５】」は、上記で定義したとおり６〜３００の実数であり、マクロモノマーに存在す
る該エチレンオキシ基の平均値を意味する。

【００１０】本発明のマクロモノマーは、適当なポリエチレングリコールの、リチウム、ナ
トリウム、カリウムまたはセシウム誘導体のようなアルカリ金属誘導体、好まし
くはナトリウム誘導体を、適当なハロ置換、例えばブロモ、クロロもしくはヨー
ド置換、またはトシル置換のようなアリールスルホネート置換ビニルフェニルア
ルキルもしくはオキセタニルアルキル誘導体と反応させることにより、対応する
ビニルフェニルアルキルまたはオキセタニルアルキルでキャップされたポリエチ
レングリコールを生じて、簡便に製造できる。

【００１１】ポリエチレングリコールは、例えば、ＰＥＧ鎖で置換された芳香族または脂肪
族炭素原子核から、マクロモノマーの４〜６分岐により備えられた「スター」タ
イプ、またはＰＥＧマクロモノマーが３級もしくは４級炭素原子から３分岐した
「Ｔ」型タイプであってもよい。

【００１２】Ｌｉ、Ｎａ、ＫまたはＣｓとのポリエチレングリコールのアルカリ金属誘導体
は、ナトリウム、カリウム、リチウムのようなアルカリ金属もしくは例えばＮａ
Ｈ、ＫＨ、ＬｉＨのようなアルカリ金属水素化物との反応または、例えばＢｕＬ
ｉ、ＫＯｔＢｕ、Ｃｓ₂ＣＯ₃、ＫＨＭＤＳのようなアルキル−もしくはアルコキ
シ−もしくは他のアルカリ金属塩との交換により形成できる。

【００１３】キャップされたビニルフェニルアルキルマクロモノマーは、過硫酸アンモニウ
ムまたはｔ−ブチルペルオキシドまたはメタクロロ過安息香酸またはＡＩＢＮの
ような無機または有機過酸化物のような遊離基開始剤を用いて重合でき、架橋樹
脂を生ずる。同様に、オキセタニルアルキルでキャップされたマクロモノマーは
、例えば、Ｅｔ₂Ｏ：ＢＦ₃、ＴＭＳＯＴｆ、ＴｆＯＨ、ＴＭＳＢｒ、ＴＭＳＩ、
ＴｉＣｌ₄もしくはＺｎＢｒ₂塩またはハフニウム、イットリウム、タンタルおよ
び鉄のハロゲン化物ならびに他の塩のようなカチオン性触媒を用いて重合でき、
架橋樹脂を生ずる。

【００１４】さらなる観点において、本発明は、式：

【化４６】［式中、Ｚは、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トルエンスルホニルオキシ、ＣＨ₃ＳＯ₃または
ＣＦ₃ＳＯ₃であり、ａは、１〜４の整数であり、ｍは、０〜１０の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］を有するビニルフェニルアルキル誘導体とのポリエチレングリコールのモノ−お
よびジ−アルカリ金属誘導体の反応生成物の塊重合により形成した架橋ポリマー
に関する。

【００１５】この種類の化合物の合成は、例えば以下：

【化４７】のように達成することができる。

【００１６】さらに別の観点において、本発明は、式：

【化４８】［式中、Ｚは、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トルエンスルホニルオキシ、ＣＨ₃ＳＯ₃または
ＣＦ₃ＳＯ₃であり、ｍは、１〜１０の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］を有するオキセタンまたはオキセタニルアルキル誘導体とのポリエチレングリコ
ールのモノ−およびジ−アルカリ誘導体の反応生成物の塊重合により形成した架
橋ポリマーに関する。

【００１７】この化合物の種類の一員は、例えば以下：

【化４９】のようにして製造できる。

【００１８】図中、オキセタン誘導ポリマーは、ビーズ状形態ニートで製造されるか、また
はオキセタニル化マクロモノマーをある容量の溶媒（例えばアセトニトリル）中
に溶解させ、典型的にはメタクリルオキシプロピルペンタメチルジシロキサンと
メタクリロイルＰＥＧ３５０モノメチルエーテルとのラジカル重合により得られ
るポリマーの、界面活性剤の存在下シリコン（silicon）油中にその混合物を懸
濁させることにより、製造できる。ルイス酸ＢＦ₃を、油中懸濁する直前に低温
で加える。

【００１９】ポリマーは、後の丁度よいときに選択的に開裂させ、より膨張可能なポリマー
を与える、一時架橋剤で変質されてもよい。これは、典型的には、（ビス−（３
−メチル−３−オキセタニルメトキシ）−２−ブテンの混合により達成され、後
に二重結合はオゾン分解または過剰なエチレンを用いたルテニウム触媒化メタセ
シス反応により開裂される。

【００２０】図１は、ビニルフェニルアルキルエーテルでキャップされたポリエチレングリ
コールおよびオキセタンでキャップされたポリエチレングリコールマクロモノマ
ーの製造に関係する反応の概略図である。図２は、ビニルフェニルアルキルエ−テルでキャップされたポリエチレングリ
コールの重合により得られる架橋樹脂の表示である。

【００２１】図３は、オキセタンでキャップされたポリエチレングリコールの重合により得
られる樹脂の表示である。図４は、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙで誘導化した図２の架橋ポリマーのゲル相¹³ＣＮ
ＭＲトレースである。

【００２２】図５は、３．６７ｐｐｍで選択的に励起させ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙでアシル化後
の図２の架橋ポリマーのＰＥＧシグナルを抑制した、マジックアングルスピニン
グ固相¹Ｈ−ＮＭＲトレースである。分解スペクトル図が得られ、同様の結果が
ＭＡＳ固相¹Ｈ−ＮＭＲ分光において図３の樹脂でも得られた。図６は、図３の架橋ポリマーのゲル相¹³Ｃ−ＮＭＲトレースである。

【００２３】図７は、３−メチルオキセタン−３−イルメチル誘導マクロモノマーの重合に
より製造された樹脂上で成功した有機反応を示す。図８は、ビニルフェニルプロピル−ＰＥＧマクロモノマーから製造された樹脂
に結合した蛍光消光基質が、１時間で、ポリマーネットワークじゅうでサブチリ
シンカールスバーグ移動により開裂する固相酵素アッセイを示す。同じ結果がＳ
ＰＯＣＣポリマーで得られた。

【００２４】図９は、シリコン油中での重合により得られたビーズ状ＳＰＯＣＣ樹脂を示す
。

【００２５】以下の実施例は、本発明の実例である。実施例１３−メチル−３−（４−トルエンスルホノキシメチル）−オキセタン４−トルエンスルホニルクロライド（２０ｇ、１０５ｍｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂ （５０ｍＬ）とピリジン（５０ｍＬ）中に溶解させた。氷浴中で冷却下に、３−
ヒドロキシメチル−３−メチルオキセタン（１００ｍｍｏｌ、９．９ｍＬ）を滴
下して加えた。反応物を室温まで一晩温めた。ＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍＬ）で希釈
し、水で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過して溶媒を蒸発
させて除去した。残渣をトルエンで何回か共蒸発させ、残存するピリジンを除去
し、クロロホルムで共蒸発させてトルエンを除去した。得られた粗生成物は、さ
らなる使用に対し十分純粋であった。収量：２２ｇの白色結晶固体（９２％）。
ＴＬＣ：Ｒｆ（石油エーテル／酢酸エチル１：１）：０．５６。スペクトルデ
ータは、文献（Dale,J.：Fredriksen, S.B. Act. Chem. Scand.B 1992, 46,271
〜277）と一致した。

【００２６】実施例２ビスオキセタニル化ポリエチレングリコール（ビス−（３−メチル−３−オキセ
タニルメトキシ）−ＰＥＧポリエチレングリコール（−４００または−１５００；１０ｍｍｏｌ）をトル
エンとの水の共蒸発により注意深く乾燥させた。ついで、それをトルエンとＤＭ
Ｆ（各１５ｍＬ）中に溶解させた。攪拌下に、カリウムヘキサメチルジシラザン
（ＫＨＭＤＳ）（２２ｍｍｏｌ）を室温で加え、１５分後に溶媒を５０℃の水浴
中でロータリーエバポレーターでＨＭＤＳと共に除去した。残存するカリウム化
ＰＥＧをＤＭＦ（１５ｍＬ）中に再溶解した。トシル化オキセタン誘導体（２４
ｍｍｏｌ）を室温で滴下して（in portions）加え、反応物を１２時間７５℃ま
で加熱した。室温まで冷却した後、水（２ｍＬ）を加えて、未反応のアルキル化
剤を完全に加水分解するために１５分間攪拌した。溶媒を４０℃で減圧下に除去
した。残存するスラリーをＣＨ₂Ｃｌ₂中に再懸濁させ、珪藻土（セライト）の層
（有機溶媒で湿らせ、加圧した、ガラスフィルター上に２ｃｍの珪藻土）を通し
てろ過し、最終的に濃縮乾固させた。収量：９０％の２ａ。アセチル化生成物の
ＮＭＲは、オキセタン環を有するＰＥＧ−ヒドロキシ基の＞９５％のアルキル化
を示した。アルキル化剤３の余剰を減少させて用いると（１５および１８ｍｍｏｌ）、オ
キセタニル基の割合は減少した（６６％、８０％）。

【００２７】実施例３モノ−およびビス−オキセタニル化ＰＥＧの混合物のアセチル化実施例２からの反応混合物（１０ｇ）をピリジン（２０ｍＬ）中に溶解させた
。無水酢酸（１０ｍＬ）を加えて、反応物を室温で２４時間攪拌した。溶媒を減
圧下に除去し、アセチル化の度合いを¹Ｈ−ＮＭＲで定量した。

【００２８】実施例４オキセタニル化ＰＥＧの重合により形成したＳＰＯＣＣ−樹脂方法Ａ：実施例２で製造したオキセタニル化ＰＥＧ−１５００もしくは−４０
０（１〜２０ｍｍｏｌ）または実施例３からのアセチル化誘導体をアルゴン下に
等容量のＣＨ₂Ｃｌ₂中に溶解させ、−２０℃に冷却し、磁気攪拌棒で攪拌した。
フッ化ホウ素ジエチルエーテル化物（０．１５〜０．３当量）を加えた。重合が
起こる温度を測定するために、徐々に温めた（−１０℃、２時間；０℃、２時間
；４℃、２時間）。最終的に、溶液の粘度が増加し、磁気攪拌機が停止した（粘
着点）。溶液を４℃に３０分間維持した後に、粘着点に達した。ポリマーをこの
温度で保管し（２日）、さらなる１日間室温で保管した。後処理で、ポリマーを
断片に切断した。膨脹させ（ＣＨ₂Ｃｌ₂、２時間）、ついで乳棒を用いて金属ふ
るい（１ｍｍ孔サイズ）を通して粒状化させた。粒状化樹脂を注意深く洗浄し（
ＣＨ₂Ｃｌ₂、ＴＨＦ、ＤＭＦ、水、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ＣＨ₂Ｃｌ₂）真空下に乾燥
した。充填した樹脂と膨脹した容量を異なる溶媒中で測定した。ポリマーのヒド
ロキシ基の力量を、ＭＳＮＴ法（Tetrahedron Letters 1988, 29, 5871〜5874）
を用いてフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）−Ｇｌｙでエステル
化し、２０％ピペリジン／ＤＭＦとの検量したポリマーサンプルの処理により形
成したジベンゾフルベンとピペリジンの付加体のＵＶ吸収を測定することにより
決定した。０．６

【００２９】ポリマー生成物の膨脹力量をシリンジ法（Azanneau, F.I.,ら、J. Peptide Sc i. , 1995, 1, 31〜44）で測定した。ポリマーの膨脹容積は、それぞれＤＭＦ中
で１１ｍＬ／ｇ、メチレンジクロライド中１２ｍＬ／ｇ、および水中１４ｍＬ／
ｇであった。

【００３０】実施例５オキセタニル化ＰＥＧの重合により形成したＳＰＯＣＣ−樹脂方法Ｂ：実施例３からのオキセタニル化ＰＥＧ−１５００をＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解
させ（１ｍＬ／ｇモノマー）０℃に冷却した。ルイス酸触媒ＢＦ₃ＯＥｔ₂を加え
た（０．４当量）。室温まで温め、磁気攪拌機を停止させ、粘度が増加したこと
に示されるように、１０分後に粘着点に達した。攪拌停止後、反応物を６０℃ま
で２日間温めた。室温まで冷却した後、後処理を方法Ａで記載したように行った
。

【００３１】実施例６オキセタニル化ＰＥＧの重合により形成したＳＰＯＣＣ−樹脂方法Ｃ：実施例２からのオキセタニル化ＰＥＧ−４００をダイグライム中に溶
解させ（１ｍＬ／ｇモノマー）室温で攪拌した。ＢＦ₃ＯＥｔ₂をゆっくり加え１
分後に攪拌を停止した。反応物を２日間７０℃まで温めた。室温まで冷却した後
、後処理を方法Ａで記載したように行った。

【００３２】実施例４〜６で製造した樹脂での使用量および得られた膨脹を表１に示す。一
番良い重合がアセチル化マクロモノマーで得られたことが明らかである。

【００３３】

【表１】

【００３４】実施例７ビス−ビニルフェニルプロピルポリエチレングリコール（１５００）：無水（Harris, J. M. J. Macromol. Sci., Rev. Macromol. Chem. Phys. 1985
; C25：325〜373）ＰＥＧ₁₅₀₀（１２．４ｇ）をＡｒ下に５０℃でＴＨＦ（２５
ｍＬ）中に溶解させ、ＮａＨ（４９７ｍｇ、油中６０％、１．５当量）を加えた
。５分後、ビニルフェニルプロピルクロライド（２．２ｍＬ、１．５当量）を１
５分間にわたって加えた。ＮａＨ／ビニルフェニルプロピルクロライド（各１．
５当量）の添加を３時間後に繰り返し、６時間後に再度ＮａＨ（１．５当量）を
加えた。茶色の混合物をさらに１６時間攪拌し、濃縮し、水（７５ｍＬ）中に溶
解し、中和し、水（１２５ｍＬ）を加え、溶液を揮発油（５０ｍＬ）で洗浄した
。水相を濃縮し、ついでトルエン（３×３５ｍＬ）で共蒸発させて、茶色の不透
明な残渣を得、それをＣＨ₂Ｃｌ₂（１５０ｍＬ）中に溶解させ、ＭｇＳＯ₄（３
５ｇ）で乾燥した。セライトを通してろ過し、濃縮乾固して、プロトンＮＭＲに
より純粋である、１３．１ｇの薄茶色固体（９４％）を得た。

【００３５】実施例８ビス−ビニルフェニルプロピルポリエチレングリコール（１５００）の重合実施例７で合成されたビニルフェニルプロピル置換ＰＥＧ（１５００）からの
樹脂を、７０℃で２．５時間（ＮＨ₄）₂Ｓ₂Ｏ₈（１４８ｍｇ、０．０７当量）、
テトラメチルエチレンジアミン（４４３μＬ、０．３２当量）、ソルビタンモノ
ラウリル酸塩（１３３ｍｇ）を用いて、前述の重合方法(Auzanneau, F.-I.；Mel
dal, M., およびBock, K., J. Pept. Sci., 1995, 1, 31〜44）を用いて、ビニ
ルフェニルプロピル置換ＰＥＧ（１５００）（１２．６ｇ）の逆（reverse）懸
濁重合によりビーズ状形態に製造した。１２０ｇの四塩化炭素と８０ｇのｎ−ヘ
プタンを重合器中で混合し、窒素で２０分間除去して７０℃まで温めた。０．１
４８ｇのＫ₂Ｓ₂Ｏ₈と共に実施例７からの生成物（１２．６ｇ）の３０ｇ水中の
溶液を窒素で除去し、有機相へ注ぎいれ、６５０ｒｐｍで攪拌した。２分後、テ
トラメチルエチレンジアニオン（４４３μＬ、０．３２当量）を加えた。重合を
７０℃で５時間進行させ、その終点で反応混合物をろ過し、ビーズをメタノール
で洗浄して真空下に乾燥した。乾燥粒子は直径７０〜４００μｍであった。収率
：６５％。

【００３６】実施例９ビス−ビニルフェニルプロピルポリエチレングリコール（１５００）の重合代わりに、樹脂を水中室温で２４時間（ＮＨ₄）₂Ｓ₂Ｏ₈（０．０６当量）とテ
トラメチルエチレンジアミン（０．２５当量）を用いて塊重合で製造し、ついで
粒状化し、ふるいにかけ、洗浄して凍結乾燥した。収率：７１％。使用量および
膨脹を実施例４で記述したように測定した。使用量：０．２２ｍｍｏｌ／ｇ。膨
脹量：４ｍＬ／ｇ（ＤＭＦ）、４ｍＬ／ｇ（Ｈ₂Ｏ）、６ｍＬ／ｇ（ＣＨ₂Ｃｌ₂
）。

【００３７】実施例１０本発明のマクロモノマーを他のモノマーと共重合させ、最終ポリマーにおいて
特性を異ならせることもできる。実施例７からの生成物は、遊離基重合の可能な
、例えばスチレン、ジビニルベンゼン、メタクリレート、アクリレートおよびア
クリルアミドのような、多くのモノマーと共重合することができる。しかし、実
施例７のマクロモノマー生成物のコモノマーは、オキセタン含有モノマーに限定
される。

【００３８】実施例１１実施例２〜３および７のマクロモノマーの重合により製造されたタイプのマク
ロポリマーは、化学的に安定で不活性であることの両方が期待され、しかしそれ
ぞれ異なる物理的特性を有するであろう。例えば、ハイドロジェネオリティック
な（hydrogeneolitic）、強塩基または強酸条件下で、両方の樹脂は完全に安定
である。しかし、それらは膨脹溶媒に対する異なる選択性を有する。前述のＰＥ
Ｇ−ベース樹脂とは対照的に、本発明の樹脂は、塩化チオニル、６ＮＨＣｌ、
ＴＭＳ−Ｂｒ、ＴＭＳ−ＯＴｆおよびＡｃ₂Ｏ、濃ＫＯＨ、ＫＨＤＭＳ／ＣＨ₂Ｃ
ｌ₂および３ｍＭＢｕＬｉに対し、長期間にわたって安定である。

【００３９】本発明のマクロモノマーから得られたポリマーの主な利点は、ポリマー主鎖中
にアミドのような官能基が欠損し、高い力量、最適な親水性／疎水性バランスを
有し、高度に機械的に安定および特に化学的に安定であることである。ポリマー
は、入手可能な安価な生物学的適合性ポリエチレングリコールを用いて容易に製
造されるので、費用に対し最も効率がよい。ポリマーのヒドロキシ基は、ポリマ
ー主鎖に影響を与えず、広範囲の官能基変換に対して敏感に反応する。マクロポ
リマー樹脂は、水性条件下に酵素がポリマーネットワークの内部へ貫通できる開
放的な構造を有する。それらの優れた合成的特性に加えて、従って、両方ともポ
リマーに結合している、蛍光消失基質または蛍光消失基質と阻害剤の組み合わせ
を用いる固相酵素アッセイを行うのに適している。特に、樹脂は、スプリットお
よびコンバイン法による、基質や阻害剤のコンビナトリアル有機合成において、
ついで酵素への暴露および反応進行の点検による固相高速スクリーニングにおい
て、用いることができる。ポリマーの構造により、優れた流動特性と、有機反応
条件下に試薬または溶媒利用し易さが得られている。

【００４０】官能基修飾は、ヒドロキシ基を臭素またはアミノ基へ変換する以下の実施例に
おいて説明する。

【００４１】実施例１２ブロモ−ＳＰＯＣＣ−樹脂実施例４からの樹脂（１ｇ、０．６ｍｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中で
懸濁させた。トリフェニルホスフィン（７８７ｍｇ、５当量）およびイミダゾー
ル（２０４ｍｇ、５当量）を加えた。完全に溶解させた後、水浴中で１０℃まで
冷却し、臭素（１５５Ｌ、１．５当量）を滴下して加えた。続いて水浴を除去し
、終夜室温で攪拌した。樹脂をろ過し、ＤＭＦ、水、ＤＭＦ、ＴＨＦおよびＣＨ ₂ Ｃｌ₂で洗浄した。元素分析により、０．８６ｍｍｏｌ／ｇ樹脂の臭素含有量を
得た。

【００４２】実施例１３アミノ−ＳＰＯＣＣ−樹脂実施例４から得た樹脂（１ｇ、０．６ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ中のアジ化ナトリ
ウム（３９０ｍｍｏｌ、１０当量、１０ｍＬ）の溶液中に懸濁させた。混合物を
１８時間の間６０℃に温めた。樹脂をろ過して大量のＤＭＦ、水およびＤＭＦで
洗浄した。１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ
）（０．１ＭＤＢＵを含む、ＤＴＴの０．５ＭＤＭＦ溶液の１０ｍＬ）と組み
合わせて１，４−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を用いて還元を行った。樹脂を
ろ過し、ＤＭＦ、ＴＨＦおよびＣＨ₂Ｃｌ₂で洗浄した。樹脂使用量を、Ｆｍｏｃ
−スクシンイミド（１０当量、４時間）による樹脂サンプルの官能基化の後Ｆｍ
ｏｃ−開裂の分光測定法的測定により、決定した。測定された使用量：０．４４
ｍｍｏｌ／ｇ。

【００４３】本発明のマクロモノマーから得られたポリマーの有機合成における有用性およ
び同時に水性条件との適合性は、以下の実施例において説明する。

【００４４】実施例１４ｐ−［−（Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−グリシルアミド
）−２，４−ジメトキシベンジル］−フェノキシアセチルアミド−ＳＰＯＣＣ−
樹脂ＳＰＯＣＣ−樹脂（２１０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をＦｍｏｃ−保護リンクリ
ンカーで官能基化した。（２０８ｍｇリンカー、０．４当量）をＴＢＴＵ（１２
２ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）とＮ−エチルモルホリン（ＮＥＭ）（８３L、０．
５ｍｍｏｌ）と共にＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解させ、１０分後、３時間で樹脂に
加えた。ＤＭＦ（５回）で洗浄した後、Ｆｍｏｃ−基を開裂させた（ＤＭＦ中２
０％ピペリジン、２および１６分）。脱保護アミン官能基を、リンカーで記述し
たように、ＴＢＴＵ（９３ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）とＮＥＭ（６６Ｌ、０．４
ｍｍｏｌ）で活性化されたＦｍｏｃ−アミノ酸（３当量のＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｓｅｒ
−ＯＨ）で各々３時間でカップリングさせてアシル化した。最終Ｆｍｏｃ−脱保
護の後、生成物を樹脂サンプルから開裂させ（２ｍｇ、９５％ＴＦＡ、２時間）
、ＨＰＬＣとＭＡＬＤＩ−ＭＳで分析した。室温＝２４．０分。ＭＡＬＤＩ−Ｍ
Ｓ：計算値（Ｍ＝Ｃ₂₀Ｈ₃₁Ｎ₅Ｏ₅）。測定値（ＭＨ⁺、ＭＮａ⁺、ＭＫ⁺）：４２
２ｍ／ｚ，４４４ｍ／ｚ，４６０ｍ／ｚ。最終使用量は０．３６ｍｍｏｌ／ｇ
であった。

【００４５】実施例１５ｐ−［−（Ｎ−オキサリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−グリシルア
ミド）−２，４−ジメトキシベンジル］−フェノキシアセチルアミド−ＳＰＯＣ
Ｃ−樹脂実施例１４のＳＰＯＣＣ−樹脂（２００ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）をリン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ７、５０ｍｍｏｌのＮａＨ₂ＰＯ₄の２．５ｍＬ）中でＮ
ａＩＯ₄（９２ｍｇ、６当量）の水溶液で３時間処理し、約ｐＨ５の溶液を生じ
た。樹脂をろ過して除去し、水、ＤＭＦ、ＴＨＦおよびＣＨ₂Ｃｌ₂で洗浄し、Ｈ
ＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣ:室温＝２５．６分。ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：計算値（
Ｍ＝Ｃ₁₉Ｈ₂₆Ｎ₄Ｏ₅）：３９０．４４。測定値（ＭＮａ⁺、ＭＨ₂ＯＮａ⁺）：４
１３．３、４３１．４ｍ／ｚ。

【００４６】実施例１６フェニルリチウムとのアルデヒド−樹脂の反応実施例１５のＳＰＯＣＣ−樹脂（３０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）をフェニル
リチウム（７当量）の１ｍＭＴＨＦ中溶液で、０℃で１０分、次いで室温で１
．５時間で処理した。反応の分析により、ＨＰＬＣの２４〜３７分の間に幾つか
の生成物の混合物が得られた。２４〜２７分の間の生成物は、出発原料の質量を
示した。３１〜３７分の範囲の生成物は、出発原料の２量体の質量を示した。Ｍ
ＡＬＤＩ−ＭＳ：計算値（２×Ｍ）：７８０．８８。測定値：（（２×Ｍ）Ｎａ ⁺ ）：８０４ｍ／ｚ。樹脂自体を含む副反応は全く観察されなかった。

【００４７】実施例１７ｐ−［−（Ｎ−アクリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−グリシルアミ
ド）−２，４−ジメトキシベンジル］−フェノキシアセチルアミド−ＳＰＯＣＣ
−樹脂メチルトリフェニルホスホニウムアイオダイド（６９ｍｇ、０．１７１ｍｍｏ
ｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）中で懸濁させ、−５０℃に冷却した。ブチルリチウム（
０．１５４ｍｍｏｌ）を加えた。塩を溶解させ、溶液の色が強い黄橙色に変わっ
た。２０分後、溶液を−１０℃に温めた。実施例１５からの樹脂（９６ｍｇ、０
．０３４ｍｍｏｌ）を攪拌溶液にアルゴン下に加え、２時間反応させた。生成物
の予備的開裂（９５％ＴＦＡ、２時間）により２−および３−ヒドロキシプロピ
オニル化合物の混合物を得た。それらは、アクリルアミドのウィッティヒ反応生
成物の水和により得た。

【００４８】実施例１８Ｎ−（４−カルボキシブチ−２−トランス−エノイル）−（Ｌ）−ロイシル−グ
リシル−ＳＰＯＣＣ−樹脂実施例１５からの凍結乾燥樹脂（９０ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）をトルエン
（１ｍＬ）とトリエチルオルトフォルメート（０．５ｍＬ）で２時間処理し、無
水トルエン（６回）で洗浄した。トリエチルホスホノアセテート（４１Ｌ、５当
量）をトルエン（１ｍＬ）中に溶解させた。０℃でブチルリチウム（４．５当量
）を加えた。１０分後、その溶液を樹脂に加え、室温で９０分間反応させた。洗
浄（ＤＭＦ、ＴＨＦ、ＣＨ₂Ｃｌ₂）および乾燥後、生じた樹脂をＣＤＣｌ₃中Ｍ
ＡＳ−固相ＮＭＲで分析した。分析サンプルの開裂とＨＰＬＣ分析を行った。樹
脂の一部（４５ｍｇ）を開裂し、分取ＨＰＬＣにより単離して標題生成物を得た
（５．２ｍｇ、６４％）。室温＝２８．０分。¹Ｈ−ＮＭＲ、２５０ＭＨｚ、Ｄ₄ −ＭｅＯＤ）：＝０．８８−０．９８（ｍ，１２Ｈ，Ｌｅｕ−Ｍｅ），１．６−
１．７５（ｍ，６Ｈ，Ｌｅｕ），３．８−４．０（２ｄ，２Ｈ，²Ｊ＝１７．８
Ｈｚ，Ｇｌｙ−），４．４−４．５（ｍ，２Ｈ，Ｌｅｕ６．６８，７．０６（
２ｄ，２Ｈ，³Ｊ_trans＝１５．５Ｈｚ，オレフィン性プロトン）。¹³Ｃ−ＮＭＲ
，６０Ｈｚ，Ｄ₄−ＭｅＯＤ）：＝１３１．９，１３７．３（オレフィン性炭素
）．ＥＳ−ＭＳ：計算値：Ｍ（Ｃ₁₈Ｈ₂₉Ｎ₃Ｏ₇）＝３９９．２０。測定値：４０
０．２ｍ／ｚ。ペプチドおよびグリコペプチド合成においてポリマーの有用性は以下の実施例
中で説明する。

【００４９】実施例１９Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−セリル−Ｌ
−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−グリシル−ＳＰＯＣＣ−樹脂実施例４からのＳＰＯＣＣ−４００（３２６ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ／ｇ使用
量、０．１９ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（３３９ｍｇ、３当量）、
ＭＳＮＴ（３３８ｍｇ、３当量）およびＮ−メチルイミダゾール（Ｍｅｌｍ）（
６８Ｌ、２．２５当量）のＣＨ₂Ｃｌ₂（４ｍＬ）中の溶液と２回、各々４５分間
反応させた。Ｆｍｏｃ−脱保護（ＤＭＦ中２０％ピペリジン、２および１６分）
の後、グリシニル残基を、ＴＢＴＵ（２．９当量、１７７ｍｇ）とＮＥＭ（４当
量、１２７Ｌ）で活性化された４つのＦｍｏｃ−アミノ酸（３当量のＦｍｏｃ−
Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨおよびＦｍｏ
ｃ−Ａｌａ−ＯＨ）で伸長させた。全てのアシル化反応を、ＤＭＦ（４ｍＬ）中
での試薬との１５分の混合時間の後に、樹脂に３時間の反応時間、次いでＦｍｏ
ｃ−脱保護を行った。最終的Ｆｍｏｃ−脱保護の後、樹脂をＨＰＬＣおよびＭＡ
ＬＤＩ−ＭＳで分析した。

【００５０】実施例２０Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル−Ｏ−（２，３，
４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトピラノシル）−Ｌ−セリル−Ｌ−
フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−グリシル−ＳＰＯＣＣ−樹脂実施例１９からの樹脂（１００ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を無水トルエン（３
ｍＬ）からスピードバック中で終夜凍結乾燥した。テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−
ガラクトピラノシルトリクロロアセトイミデート（０．１２ｍｍｏｌ、３当量）
をＣＨ₂Ｃｌ₂（１．５ｍＬ）中に溶解し、樹脂に加えた。アルゴン下に、トリメ
チルシリルトリフルオロメタンスルホネート（ＴＭＳＯＴｆ（ＣＨ₂Ｃｌ₂中１Ｍ
溶液の１２０Ｌ）を加え、１時間反応させた。樹脂を次いでろ過して除き、ＣＨ ₂ Ｃｌ₂、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＴＨＦおよびＣＨ₂Ｃｌ₂で洗浄し、真空下に乾燥した
。グリコシル化方法を繰り返した。分析を、ＭｅＯＨ中ＮａＯＭｅ（０．０２Ｍ
、２時間）での開裂の後、ＨＰＬＣとＭＡＬＤＩ−ＭＳで行った。完全なグリコ
シル化が達成された。ＨＰＬＣ：室温＝２０．１分。ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：計算値
：Ｍ（Ｃ₂₉Ｈ₄₅Ｎ₅Ｏ₁₂）：６５５．７Ｄａ。測定値（ＭＮａ⁺）：６５６ｍ／
ｚ。

【００５１】実施例２１Ｌ−アラニル−Ｏ−（−Ｄ−ガラクトピラノシル）−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニル
アラニル−Ｌ−ロイシル−グリシンヒドラジド実施例２０からの樹脂（２ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を２時間水中２０％ヒ
ドラジンで処理した。ＨＰＬＣ：室温＝２２．０分。ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：計算値
：Ｍ（Ｃ₂₉Ｈ₄₇Ｎ₇Ｏ₁₁）：６６９．７Ｄａ。測定値（ＭＮａ⁺）：６９４ｍ／
ｚ。酵素反応に対する樹脂の有用性は以下の実施例中で説明する。

【００５２】実施例２２Ｌ−アラニル−（３−ニトロ）−Ｌ−チロシニル−Ｌ−グリシル−Ｌ−プロリニ
ル−Ｌ−ロイシル−グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−チロシニル−アラニル−アル
ギニル−（Ｎ^ε−２−アミノベンゾイル）−Ｌ−リジニル−グリシル−グリシル
−ＳＰＯＣＣ−樹脂実施例３からのＳＰＯＣＣ−１５００（６５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を２
回Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（４１ｍｇ、５当量）、ＭＳＮＴ（４０ｍｇ、５当量
）およびＭｅｌｍ（８Ｌ、３．７５当量）のＣＨ₂Ｃｌ₂（４ｍＬ）中溶液で４５
分間処理した。樹脂をろ過して除き、ＣＨ₂Ｃｌ₂とＤＭＦで洗浄した。Ｆｍｏｃ
−基を開裂させ（ＤＭＦ中２０％ピペリジン、２および１６分）、再度ＤＭＦで
洗浄した。配列Ｆｍｏｃ−Ａ（ＮＯ₂）ＹＧＰＬＧＬ（^tＢｕ）ＹＡ（Ｐｍｃ）Ｒ
（Ｂｏｃ−Ａｂｚ）ＫＧ−ＯＨ（４３ｍｇ、３当量）の完全に保護されたノナペ
プチドを、ＴＢＴＵ（６．８ｍｇ、２．９当量）およびＮＥＭ（３．７Ｌ、４当
量）と共にＤＭＦ（４ｍＬ）中に溶解させた。１５分後、後者の溶液を樹脂に加
え、３時間反応させた。樹脂をＤＭＦで大量に洗浄し、９５％ＴＦＡ（１０分、
２．５時間）で２回処理して、側鎖の保護基を除去した。次いで、樹脂を９５％
酢酸（５分４回）、ＤＭＦ中５％トリエチルアミン（２分３回）、ＤＭＦ（２分
２回）、ＴＨＦおよびＣＨ₂Ｃｌ₂で洗浄し、次いで真空下に乾燥させた。ペプチ
ドを分析のため２時間１ＭＮａＯＨで樹脂から開裂させた。ＨＰＬＣ：室温＝
３２．０分。ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：計算値Ｍ（Ｃ₆₈Ｈ₉₉Ｎ₁₉Ｏ₁₉）＝１４８６．７
Ｄａ。測定値：（ＭＨ⁺、ＭＮａ⁺−Ｈ₂Ｏ）１４８７、１４９３ｍ／ｚ。

【００５３】実施例２３実施例２２からのＳＰＯＣＣ−樹脂に結合したデカペプチドの酵素的開裂Ｉ．サブチリシン：樹脂（２ｍｇ）をサブチリシン（１０^-7Ｍ）のｐＨ７リン
酸緩衝液（Ｈ₂Ｏ中５０ｍｍｏｌＮａＨ₂ＰＯ₄）中溶液で処理した。１５分後、
ＵＶ照射の下強い蛍光が観察された。３時間後、樹脂を洗浄し（水、ＤＭＦ、Ｔ
ＨＦ、ＣＨ₂Ｃｌ₂）および乾燥した。酵素処理した樹脂の一部（１ｍｇ）をＮａ
ＯＨ（０．１Ｍ溶液の５０Ｌ、２時間）で処理し、生成物をＨＰＬＣ、次いで質
量分析で分析した。樹脂のほかの部分（１ｍｇ）をエドマン分解に付した。ＨＰ
ＬＣは、出発ペプチド基質の完全な開裂を示した。ＨＰＬＣ：室温＝２２．０分
。ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：計算値Ｍ（Ｃ₂₆Ｈ₄₂Ｎ₁₀Ｏ₇）＝６０６．７Ｄａ。測定値
：６１７．６ｍ／ｚ。エドマン分解（３サイクル）：Ａ、Ａｂｚ−；Ｒ−；Ｋ−
。ＩＩ．マトリックスメタロプロテアーゼ−９。樹脂（２ｍｇ）をＭＭＰ−９（
１００ｎＭおよび２７５ｎＭ）のｐＨ７．７２緩衝液（緩衝液１７、バレルアッ
プ（Ballerup）、ＣＣＢＲから得た）の溶液で２４時間処理した。両方の場合、
著しい蛍光は観察されなかった。Ｉで記述したとおりの開裂およびＨＰＬＣ−分
析により、出発ペプチド基質のみを得た。

【００５４】実施例２４Ｌ−アラニル−（３−ニトロ）−Ｌ−チロシニル−Ｌ−グリシル−Ｌ−プロリニ
ル−Ｌ−ロイシル−グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−チロシニル−アラニル−アル
ギニル−（Ｎ^ε−２−アミノベンゾイル）−Ｌ−リジニル−グリシル−グリシル
−ＰＯＥＰＳ３−樹脂モノ−およびビス−ビニルフェニルプロピル−ＰＥＧ（１５００）（０．１ｇ
、０．０２ｍｍｏｌ）から実施例８において得た樹脂を、真空マニホルドに連結
した手動シリンジシンセサイザー中に充填し、ＭＳＮＴ法（Tetrahedron Letter
s 1988, 29, 5871〜5874）を用いてＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨでエステル化した。
Ｆｍｏｃ基をＤＭＦ中２０％ピペリジンで除去し、保護された基質Ｆｍｏｃ−Ａ
Ｙ（ＮＯ₂）ＧＰＬＧＬＹ（^tＢｕ）Ｒ（Ｐｍｃ）Ｋ（Ｂｏｃ−Ａｂｚ）Ｇ−ＯＨ
（４５ｍｇ、１当量）を、ＴＢＴＵ（１当量）とＮＥＭ（１当量）でのインジト
ゥー活性化を用いて樹脂とカップリングした。樹脂をＤＭＦとジクロロメタンで
洗浄し、乾燥させて保護基を２時間９５％水性ＴＦＡで除去した。樹脂をジクロ
ロメタンで洗浄して乾燥させた。アミノ酸の含有量を定量的アミノ酸分析とエド
マン分解配列分析により測定し、予想された配列と量を見出した。そのペプチド
を分析のため２時間０．１ＭＮａＯＨで樹脂から開裂させた。ＨＰＬＣ：室温
＝３２．０分。ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：計算値Ｍ（Ｃ₆₈Ｈ₉₉Ｎ₁₉Ｏ₁₉）＝１４８６．
７Ｄａ。測定値：（ＭＨ⁺、Ｍｎａ⁺−Ｈ₂Ｏ）１４８７ｍ／ｚ。実施例のオキセタニル化マクロモノマーからのビーズ状ポリマー。

【００５５】実施例２５実施例２４からのＰＯＥＰＳ３−樹脂に結合したデカペプチドの酵素的開裂実施例２４からの樹脂（１０ｍｇ）を水性５０ｍＭビシン（bicine）緩衝液（
０．２ｍＭＣａＣｌ₂、ｐＨ８．５、１００μＬ）中に懸濁させ、同じ緩衝液中
の１０^-6Ｍサブチリシンカールスベルク（１０μＬ）を加えた。反応を、蛍光顕
微鏡（ｅｘ３２０ｎｍ；ｅｍ４２０〜５００ｎｍ）下に視覚化して追跡し、反
応は６０分で完了した。樹脂上の残存ペプチドのエドマン配列分析により、開裂
が完了したことが示された。その結果は、０．１ＭＮａＯＨでの開裂とＨＰＬ
Ｃ分析により確認された。

【００５６】より大きいＭＭＰ９との同様な実験により、樹脂表面においてのみ開裂が生じ
なかったことが示され、樹脂製造に用いるＰＥＧの長さと、調べる酵素のサイズ
との調和の重要性が示された。実施例２３で示したような０．１ＭＮａＯＨで
の開裂とＨＰＬＣ分析により、非開裂ペプチドのみが示された。

【００５７】実施例２６ケイ素重合体界面活性剤の合成：メタクリロイルＰＥＧ３５０モノメチルエーテ
ルメタクリロイルクロライド（０．６７ｍＬ、５．９ｍｍｏｌ）をＰＥＧ３５０
モノメチルエーテル（２．０ｇ、５．７ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１．７
ｍＬ、１２．２ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で攪拌しながら、湿気を除去しながら滴
下して加えた。反応物を５時間攪拌した。反応混合物をろ過し、溶媒を真空下に
蒸発させた。生じた薄白／黄色油をさらに処理せずに用いた。メタクリルオキシプロピルペンタメチルジシロキサン（４．０ｍＬ、１３．１
ｍｍｏｌ）とメタクリロイルＰＥＧ３５０モノメチルエーテルを脱気したクロロ
ホルム（１０ｍＬ）中に溶解した。ＡＩＢＮ（６０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を
加え、反応バイアルを密封して６０℃で４８時間重合させた。溶媒を真空下に蒸
発により除去した。生じたポリマーは黄色ペースト状であり、高真空下に乾燥さ
せ、さらなる処理を行わずに用いた。

【００５８】実施例２７方法Ａにより誘導されたビーズ状オキセタン誘導ポリマー（ＳＰＯＣＣ樹脂）の
懸濁重合界面活性剤（２５ｍｇ／ｇマクロモノマー）をジクロロメタン（０．３８ｍＬ
／ｇマクロモノマー）中に溶解させ、アルゴン下にマクロモノマー（４ｇ）と混
合した。均質溶液を得た後、その溶液を氷浴中で冷却し、ＢＦ₃・ＯＥｔ₂（０．
１ｍＬ／ｇマクロモノマー）を攪拌しながら加え、水分を除いた。２分後、混合
物を室温で１５０ｒｐｍで攪拌しながらシリコン油に加えた（２０ｍＬ／ｇマク
ロモノマー）。室温で２時間後、温度を６０℃に上昇させ、攪拌せずに一晩重合
させた。生じたポリマー粒子を焼結したガラス漏斗上でろ過した。ビーズをジク
ロロメタン、ジメチルホルムアミド、メタノールおよび水で洗浄した。ビーズを
６ＭＨＣｌで２時間室温で処理し、水、メタノール、ジメチルホルムアミドお
よびジクロロメタンで大量に洗浄した。ビーズを乾燥して分類した。ビーズ分布
（メタノール中で測定）；Ｘ＞１０００μｍ：Ｘ＞５００μｍ；Ｘ＞３００μｍ
：Ｘ＜３００μｍ（３：２０：５：１）。ビーズの全収量：２．９ｇ、７３％。

【００５９】実施例２８方法Ｂにより誘導されたビーズ状オキセタン誘導ポリマー（３−メチルオキセタ
ニルメタノールの添加により製造されたＳＰＯＣＣ樹脂）の懸濁重合界面活性剤（２５ｍｇ／ｇマクロモノマー）をジクロロエタン（０．３８ｍＬ
／ｇマクロモノマー）中に溶解させ、マクロモノマー（ＰＥＧ１５００から製造
した、２．３ｇ）と３−メチル−３−オキセタンメタノール（２７μＬ−１００
μＬ）とアルゴン下に混合した。均質溶液を得た後、溶液を氷浴中で冷却してＢ
Ｆ₃・ＯＥｔ₂（０．１ｍＬ／ｇマクロモノマー）を攪拌しながら水分を除去しな
がら添加した。４５秒後、混合物をシリコン油（２０ｍＬ／ｇマクロモノマー）
に室温で２００ｒｐｍで攪拌しながら加えた。室温で２時間後、温度を６０℃に
上昇させ、攪拌せずに一晩重合させた。生じたポリマー粒子を焼結したガラス漏
斗上でろ過した。ビーズをジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、メタノール
および水で洗浄した。ビーズを６ＭＨＣｌで２時間室温で処理し、水、メタノ
ール、ジメチルホルムアミドおよびジクロロメタンで大量に洗浄した。ビーズを
乾燥して分類した。ビーズ分布（メタノール中で測定）；Ｘ＞１０００μｍ：Ｘ
＞５００μｍ；Ｘ＞３００μｍ：Ｘ＜３００μｍ（６：１７：７：０）。ビーズ
の全収量：１．７ｇ、７４％。

【００６０】実施例２９（ビス−（３−メチル−３−オキセタニルメトキシ）−２−ブテン１，４−トランス−ブテ−２−エンジオール（１１ｍｍｏｌ）をトルエンおよ
びＤＭＦ（各１５ｍＬ）中に溶解させた。攪拌下に、カリウムヘキサメチルジシ
ラザン（ＫＨＭＤＳ）（２２ｍｍｏｌ）を室温で加え、１５分後に溶媒をＨＭＤ
Ｓと共に５０℃水浴中でロータリーエバポレーターで除去した。残存するカリウ
ム化アルコールをＤＭＦ（１５ｍＬ）中に再溶解させた。メシル化オキセタン誘
導体（２４ｍｍｏｌ）を室温で一度に加え、反応物を１２時間７５℃で加熱した
。室温に冷却後、水（２ｍＬ）を加え、１５分間攪拌して未反応のアルキル化剤
を完全に加水分解した。溶媒を減圧下に４０℃で除去した。残渣（remanenes）
をＣＨ₂Ｃｌ₂中に溶解させ、水で抽出した。有機相を乾燥させ、蒸発させた。収
量：標題化合物の９０％。生成物のＮＭＲは、アルキル化が定量的であったこと
を示した。

【００６１】実施例３０オキセタニル化ＰＥＧと短い一時架橋剤の重合から形成したＳＰＯＣＣ−樹脂実施例２と同様に製造したオキセタニル化ＰＥＧ−１５００（１〜２０ｍｍｏ
ｌ）と実施例２９で製造した架橋剤（５〜５０ｍｏｌ％）とをアルゴン下に等容
量のＣＨ₂Ｃｌ₂中に溶解させ、−２０℃に冷却し、磁気攪拌棒で攪拌した。フッ
化ホウ素ジエチルエーテル化物（０．１５〜０．５当量）を加え、溶液を−１０
で攪拌し、次いで室温まで温め、ポリマーを形成した。２時間後温度を６０℃に
一晩で上昇させた。ポリマーを断片に切断した。（ＣＨ₂Ｃｌ₂、２時間）膨張し
、次いで乳棒を用いて金属ふるい（１ｍｍ孔サイズ）を通して粒状化した。粒状
化された樹脂を注意深く洗浄し（ＣＨ₂Ｃｌ₂、ＴＨＦ、ＤＭＦ、水、ＤＭＦ、Ｔ
ＨＦ、ＣＨ₂Ｃｌ₂）、真空下に乾燥した。使用量は実施例４で製造したポリマー
のものと匹敵した。ポリマー生成物の膨張容量は、添加した架橋剤の量の応じて
実施例４で記載されたポリマーのものよりかなり少なかった。

【図面の簡単な説明】

【図１】ビニルフェニルアルキルエーテルでキャップされたポリエチレングリコールお
よびオキセタンでキャップされたポリエチレングリコールマクロモノマーの製造
に関係する反応の概略図である。

【図２】ビニルフェニルアルキルエ−テルでキャップされたポリエチレングリコールの
重合により得られる架橋樹脂の代表である。

【図３】オキセタンでキャップされたポリエチレングリコールの重合により得られる樹
脂の代表である。

【図４】Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙで誘導化した図２の架橋ポリマーのゲル相¹³ＣＮＭＲトレ
ースである。

【図５】３．６７ｐｐｍで選択的に励起させ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙでアシル化後の図２の
架橋ポリマーのＰＥＧシグナルを抑制した、マジックアングルスピニング固相¹
Ｈ−ＮＭＲトレースである。分解スペクトル図が得られ、同様の結果がＭＡＳ固
相¹Ｈ−ＮＭＲ分光において図３の樹脂でも得られた。

【図６】図３の架橋ポリマーのゲル相¹³Ｃ−ＮＭＲトレースである。

【図７】３−メチルオキセタン−３−イルメチル誘導マクロモノマーの重合により製造
された樹脂上で成功した有機反応を示す。

【図８】ビニルフェニルプロピル−ＰＥＧマクロモノマーから製造された樹脂に結合し
た蛍光消光基質が、１時間で、ポリマーネットワークじゅうでサブチリシンカー
ルスバーグ移動により開裂する固相酵素アッセイを示す。同じ結果がＳＰＯＣＣ
ポリマーで得られた。

【図９】シリコン油中での重合により得られたビーズ状ＳＰＯＣＣ樹脂を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｃ 237/12 ＺＣＣＣ０７Ｃ 237/12 ＺＣＣ４Ｈ０４５Ｃ０７Ｄ 305/06 Ｃ０７Ｄ 305/06 ４Ｊ００５Ｃ０７Ｋ 17/08 Ｃ０７Ｋ 17/08 ４Ｊ０１１Ｃ０８Ｆ 2/00 Ｃ０８Ｆ 2/00 Ｚ４Ｊ０２７ 2/32 2/32 299/02 299/02 Ｃ０８Ｇ 65/22 Ｃ０８Ｇ 65/22 65/329 65/329 Ｃ１２Ｎ 11/08 Ｃ１２Ｎ 11/08 ＺＧ０１Ｎ 37/00 １０３Ｇ０１Ｎ 37/00 １０３ // Ｇ０１Ｎ 30/48 30/48 Ｒ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人ＣａｒｌｓｂｅｒｇＬａｂｏｒａｔｏｒｉｕｍ，ＧａｍｌｅＣａｒｌｓｂｅｒｇＶｅｊ 10，ＤＫ−2500 ＶａｌｂｙＤＥＮＭＡＲＫ (72)発明者ブシャルト，ジェンスデンマーク、ディケイ−1364 コペンハーゲンケイ、２．ティエイチ．、エヌアールファリマグスガーデ 69 (72)発明者ラドマン，ジョルグデンマーク、ディケイ−2450 コペンハーゲン、エスティ．ティエイチ．、ハンデルスヴェイ 17 Ｆターム(参考） 4B033 NA21 NA45 NB02 NB11 NB33 NB62 ND02 ND03 ND05 4C048 TT02 UU03 XX02 XX04 4D017 AA11 BA07 CA03 CA13 DA03 EA01 4G066 AC14B AC22A AC22B BA09 CA20 CA54 DA11 EA01 FA07 FA37 4H006 AA01 AB80 AC46 BN10 BS10 BV22 BV34 4H045 AA20 BA10 EA50 EA60 FA80 4J005 AA07 AA09 BB01 4J011 AA05 BB01 BB02 DA04 HA03 HB02 HB21 4J027 AC03 AC07 AJ02 CB02 CC02 CD07

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】６〜３００の範囲の反復単位を有し、式：【化１】［式中、ｍは、０〜１０の整数であり、ａは、１〜４の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］；を有するか、または式：【化２】［式中、ｍは、１〜１０の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］を有す
るエーテル基で終結する少なくとも１つの末端を有するポリエチレングリコール
のマクロモノマー。
【請求項２】構造：【化３】［式中、【化４】は、６〜３００の実数であり、ＸおよびＹは、互いに独立して式：【化５】［式中、ａは、１〜４の整数であり、ｍは、０〜１０の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールアルキルである］の基であるか、または
Ｘは−ＯＨであり、Ｙは式：【化６】［式中、ａは、１〜４の整数であり、ｍは、０〜１０であり、ａは、上記で定義のとおりであり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あるか、またはＸおよびＹは、互いに独立して式：【化７】［式中、ｍは、１〜１０の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あるか、またはＸは−ＯＨであり、Ｙは式：【化８】［式中、ｍは、１〜１０の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
ある］を有するマクロモノマー。
【請求項３】構造：【化９】［式中、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルであり、【化1０】は、上記で定義のように６〜３００の実数であり、Ｘ、ＹおよびＺは、互いに独立してＯＨまたは式：【化１１】［式中、ａは、１〜４の整数であり、ｍは、０〜１０の整数であり、ａは、上記で定義したとおりであり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あり、ただしＸ、ＹおよびＺの少なくとも１つが式：【化１２】［式中、ａは、１〜４の整数であり、ｍは、０〜１０の整数であり、ａは、上記で定義したとおりであり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あるか、またはＸ、ＹおよびＺは、互いに独立してＯＨまたは式：【化１３】［式中、ｍは、１〜１０の整数であり、ａは、上記で定義したとおりであり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
あり、ただしＸ、ＹおよびＺの少なくとも１つが式：【化１４】［式中、ｍは、０〜１０の整数であり、ａは、上記で定義したとおりであり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］の基で
ある］を有するマクロモノマー。
【請求項４】ビニルフェニルプロピル基で終結し、式：【化１５】［式中、【化1６】＝６〜３００、Ｒ_aおよびｍは、請求項１で定義したとおりである］を有する請求項２によるマクロモノマー。
【請求項５】３−メチルオキセタン−３−イルメチルエーテル基で終結し
、式：【化１７】［式中、【化1８】＝６〜３００、Ｒおよびｍは、請求項１で定義したとおりである］を有する請求項２によるマクロモノマー。
【請求項６】遊離のヒドロキシ基が、アセチル化されるか、または別の方
法で一時的にヒドロキシ保護されている請求項５によるマクロモノマー。
【請求項７】６〜３００の反復単位を有するポリエチレングリコールのア
ルカリ金属誘導体を、式：【化１９】［式中、Ｚは、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トルエンスルホニルオキシまたはＣＦ₃ＳＯ₃で
あり、ａは、１〜４の整数であり、ｍは、０〜１０であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］を有するか、または式：【化２０】［式中、Ｚは、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トルエンスルホニルオキシまたはＣＦ₃ＳＯ₃で
あり、ｍは、１〜１０の整数であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］を有するハロ置換化合物と反応させることからなる請求項１または２のマクロモ
ノマーの製造法。
【請求項８】式：【化２１】［式中、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルであり
、【化２２】は、６〜３００である］を有するポリエチレングリコールのアルカリ金属誘導体を、式：【化２３】［式中、Ｚは、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トルエンスルホニルオキシまたはＣＦ₃ＳＯ₃で
あり、ａは、１〜４の整数であり、ｍは、０〜１０であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］を有するか、または式：【化２４】［式中、Ｚは、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トルエンスルホニルオキシまたはＣＦ₃ＳＯ₃で
あり、ｍは、１〜１０であり、Ｒは、Ｈまたはアルキルまたはアリールまたはアリールアルキルである］を有するハロ置換化合物と反応させることからなる請求項３のマクロモノマーの
製造法。
【請求項９】アルカリ金属誘導体が、ナトリウム誘導体である請求項７ま
たは８による方法。
【請求項１０】アルカリ金属誘導体が、カリウム誘導体である請求項７ま
たは８による方法。
【請求項１１】請求項２にるマクロモノマーの重合により形成された架橋
ポリマー。
【請求項１２】マクロモノマーが、請求項４で請求した構造を有し、重合
が、遊離基触媒により開始され、ポリマー構造が以下：【化２５】［式中、【化２６】＝６〜３００、Ｒ_aおよびｍは、請求項１で定義したとおりである］のように表される請求項１１による架橋ポリマー。
【請求項１３】重合が、カチオン性触媒により開始され、ポリマー構造が
構造：【化２７】［式中、【化２８】＝６〜３００、Ｒは、請求項１で定義したとおりである］で表される、マクロモノマーが、請求項５で請求するような構造を有する請求項１１による架
橋ポリマー。
【請求項１４】その製造に用いるマクロモノマーが、請求項６の構造を有
し、請求項１３のヒドロキシ化構造に類似した、ペル−Ｏ−アセチル化されるか
、または別の方法で一時的にヒドロキシ保護されているポリマー構造が得られる
請求項１１による架橋ポリマー。
【請求項１５】請求項３のマクロモノマーの塊重合により形成した架橋ポ
リマー。
【請求項１６】逆懸濁重合または噴霧重合により作られた請求項１２によ
るビーズ状架橋ポリマー。
【請求項１７】シリコン油中液滴の重合により形成された請求項１３また
は１４によるビーズ状樹脂。
【請求項１８】熱不活性ガス中での噴霧重合により形成された請求項１３
または１４によるビーズ状樹脂。
【請求項１９】請求項１１により製造されたポリマーの、有機合成用支持
体としての使用。
【請求項２０】請求項１１により製造されたポリマーの、固相酵素反応用
支持体としての使用。
【請求項２１】請求項１１により製造されたポリマーの、ペプチド、ＤＮ
Ａ、ＲＮＡおよびオリゴ糖類合成用支持体としての使用。
【請求項２２】請求項１１により製造されたポリマーの、ペプチド−、タ
ンパク質−、ＤＮＡ−またはＲＮＡ−連結反応用支持体としての使用。
【請求項２３】請求項１１により製造されたポリマーの、クロマトグラフ
ィー分離用の使用。
【請求項２４】請求項１１により製造されたポリマーの、アフィニティー
精製用の使用。
【請求項２５】請求項１１により製造されたポリマーの、タンパク質固定
化用の使用。
【請求項２６】酵素が、支持体と結合した基質または阻害剤と相互作用す
る請求項２０によるポリマーの使用。
【請求項２７】使用が、固体支持体に結合した薬物の遊離を含む請求項１
１によるポリマーの使用。
【請求項２８】遊離が、酵素により媒介される請求項２７による薬物の遊
離。
【請求項２９】固相マジックアングルスピニングＮＭＲ分光法用の、請求
項１１によるポリマーの使用。
【請求項３０】コンビナトリアルケミストリー用の請求項１１によるポリ
マーの使用。
【請求項３１】シリコン油中懸濁重合により形成する請求項１１によるビ
ーズ状ポリマー。
【請求項３２】ビーズが、界面活性剤により安定化されている請求項３１
によるビーズ状ポリマー。
【請求項３３】界面活性剤が、アクリロイル化ＰＥＧ−ＯＭｅとアクリロ
イルプロピルペンタメチルジシロキサンとの混合物のラジカル重合により得られ
る請求項３２によるビーズ状ポリマー。
【請求項３４】後の丁度よいときに選択的に開裂でき、樹脂を膨張をさせ
る、短い一時架橋剤の添加された請求項１１によるポリマー。
【請求項３５】短い架橋剤が、構造：【化２９】または【化３０】［式中、Ｒは、選択的開裂条件に化学的に感受性な、アルキリデン、アリールデ
ン、シラン、シロキサンチオエーテルまたはエーテル橋架けである］を有する請求項３４によるポリマー。
【請求項３６】求電子試薬および求核試薬の反転を伴うが、それでＰＥＧ
のトシラートまたはトリフラートまたはハライドが製造され、３−メチルオキセ
タン−３−イルメタノールまたはビニルフェニルプロパノールの金属アルコキシ
ドと反応させる、請求項７または８により製造される請求項１〜６によるマクロ
モノマー。