JP2003502438A - タンパク質の精製法 - Google Patents
タンパク質の精製法Info
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Abstract
Description
する。本発明はまた該方法により得られる医薬組成物にも関する。
て阻害し、従って凝血の調節において重要な役割を担う、血漿糖タンパク質であ
る。血中のAT−III含量のわずかな減少が、血栓塞栓症の危険性の増加と関連
する。AT−III濃縮物は後天的または遺伝的抗トロンビン欠乏症の患者におけ
る血栓塞栓症の予防および処置に使用されている。
として、AT−III濃縮物のウイルス不活性化が望まれる。ポリエチレングリコ
ール(PEG)との沈殿が、タンパク質を濃縮するためおよびウイルスを沈殿させ
るために、AT−III精製において広く使用されている(例えば、Wickerhauser e
t al. (1979) Vox Sanguinis 36, 281参照)。PEGに加えて、また硫酸バリウ
ム、エタノール、トリクロロ酢酸、デキストラン−およびアンモニウムスルフェ
ートが、AT−IIIの精製中の沈殿剤として使用されている。多くのこれらの沈
殿剤は、最終AT−III製剤に存在した場合、危険である。結果として、これら
の薬剤の除去が必要であり、AT−IIIの回収率がそれにより減少する。
使用のためのAT−III濃縮物は、したがって、通常、+60℃で10時間、通
常、滅菌される。一般に、血漿タンパク質は熱処理中に活性を失う。この理由の
ため、安定化剤を滅菌中に使用する。
剤として使用されている(Mitra et al. (1982) Biotechnology and Bioengineer
ing vol. XXIV, 97-107; Tengborn et al. (1987) Thrombosis Research 48, 70
1-711; Einarsson et al. (1989) Transfusion 29, 148-152)。しかし、これら
の文献には、クエン酸塩およびサッカライドがAT−IIIの精製における沈殿剤
として使用できるという示唆はない。
AT−IIIの貯蔵寿命を延長させる種々の試みが成されている。
ッカライド等、より具体的にはアルブミン、ウロキナーゼ、ゼラチン、マンニト
ール、ヘパリン、グリシンおよびリジンから選択される少なくとも一つの物質で
安定化した、AT−IIIの凍結乾燥調製物を記載する。
ノ酸および塩化ナトリウムから選択された1個以上の要素で安定化した修飾AT
−IIIの凍結乾燥調製物を記載する。該有機酸塩は、琥珀酸ナトリウムまたはク
エン酸ナトリウムである。該サッカライドはD−マンニトール、ラクトース、グ
ルコースおよびD−ソルビトールである。この文献には、クエン酸塩をスクロー
スと組合わせて含む、凍結乾燥AT−III調製物の示唆はない。
た後のまたは凍結乾燥製品の溶液での再構築後の粒子(約2−75μm)の形成で
ある。特に、タンパク質のような大きな分子で作業する場合、比較的しばしば起
こり、その原因の機構は明らかに理解されていない現象がある。恐らく、どのよ
うな量およびサイズの粒子が発生するかに影響する、製品の分子サイズ、製品の
賦形剤、製品容器の材料および製品をその中に再構築する溶液を含む、因子の組
合わせである。製品中のこの相対的に少ない量の粒子が危険であることは示され
ていない。しかし、全ての医薬製造者が、製品における粒子、特に目に見える粒
子の量をできるだけ減少させることを目的としているのは明らかである。
製における、ウイルスおよびAT−III以外のタンパク質を含む不純物の沈殿の
ための使用に有利であり得ることが、驚くべきことに判明した。本方法は、数個
の利点を含む: ・本発明の沈殿段階は、高いウイルス不活性化、高い純度および最小限のAT−
III不活性化を確実にする。 ・得られたAT−III溶液は、更に安定化化合物の添加なしに直接滅菌に付すこ
とができる。したがって、クエン酸塩とサッカライドの組合わせは、沈殿剤およ
び滅菌中の安定化剤としての2つの目的を果たす。 ・AT−IIIの精製中に更にサッカライドとクエン酸塩の薬学的に許容される組
合わせを除去する必要がない。代わりに、この沈殿剤はまたAT−IIIの凍結乾
燥調製物の安定化剤としても有用である。
トロンビン−IIIは本質的に溶液中に留まるのに十分な量でサッカライドとクエ
ン酸塩を添加する; (b)不純物を沈殿させる;そして (c)沈殿不純物を除去し、それにより精製抗トロンビン−IIIを含む溶液を得る
段階を含む、抗トロンビン−IIIの精製法を提供する。
質を含む、望ましくない物質を意味することを意図する(下記実施例1参照)。不
純物は、例えば、ヒスチジン−リッチ糖タンパク質、ヘモペキシン(hemopexine)
、リポタンパク質、ガンマグロブリン、トリトン−X−100、トリ−n−ブチ
ルホスフェート、ウイルスおよびプリオンを含む。
哺乳類、例えばウシ、ブタ、または好ましくはヒト起源である。AT−IIIはま
た、組換えDNA法によるような遺伝子操作により、またはトランスジェニック
動物から、例えば、AT−IIIを乳中に産生するヒツジの乳から得られ得る。
−AT−IIIであり得、または任意のAT−IIIの誘導体であり得る。α−AT−
IIIとβ−AT−IIIの差は、例えば、Brennan et al. (FEBS Letters 219(2), 4
31-436, 1987)により記載されている。“AT−IIIの誘導体”なる用語は、ポリ
ペプチドがAT−IIIの生物学的活性を実質的に有する限り、例えば、置換、小
欠失、挿入または介入のような修飾を担持するポリペプチドを意味する。
カライド、またはグルコース、ソルビトール、マンニトール、グリコン酸または
マルトースのようなモノサッカライドである。スクロースが、体内におけるその
有利なバイオアベイラビリティーのため、好ましい。
v)の範囲であり得る。好ましくは、サッカライド濃度は15%から25%(w/v)
の間、最も好ましくは約20%(w/v)である。
リ金属クエン酸塩およびアルカリ土類金属クエン酸塩であり得る。アルカリ金属
クエン酸塩の例はクエン酸ナトリウムおよびクエン酸カリウムであり、一方アル
カリ土類金属クエン酸塩の例はクエン酸マグネシウムおよびクエン酸カルシウム
である。バイオアベイラビリティー、低価格および容易な取扱いの理由のため、
クエン酸ナトリウムが好ましい。
得る。好ましくは、クエン酸塩濃度は0.5から1.5Mの間、最も好ましくは1
Mから1.25Mの間である。
7から8の間、最も好ましくは中性(約7.5)である。沈殿は適当には+10℃
から+40℃の温度、好ましくは+15℃から+25℃の間のような室温で行い
得る。
下に溶液に添加する。この方法はサッカライドとクエン酸塩の濃度勾配を発生さ
せる。不純物が沈殿剤の異なる濃度で沈殿する傾向を有するはずであるので、こ
のような勾配は不純物の沈殿に最適である。沈殿剤のゆっくりした添加はまたク
エン酸とサッカライドの高い局所濃度の危険性を少なくし、そしてそれによりA
T−IIIの沈殿の危険性を少なくする。
の最終濃度に到達した後、更に約15分撹拌する。
段階は、1−20μmフィルターを通した予備濾過、続く0.2μmフィルターを
通した滅菌濾過を含む。選択が遠心である場合、当業者はタンパク質精製の通常
のテキストブックの助けにより適当な濃度を決定できるであろう。抗トロンビン
−IIIを含む濾液または上清液体を次いで更なる処理に適当な形で回収する。
IIIを含む得られた溶液の滅菌を、安定化剤としてのサッカライド、特にスクロ
ースおよびクエン酸塩の存在下で行う、AT−IIIの精製の段階を含む。本発明
の特に好ましい形において、既に添加された量のサッカライドとクエン酸塩が滅
菌中の安定化剤として十分であり、結果として更なる安定化剤は添加しない。
を含み、加えて、安定化剤としてのサッカライド、特にスクロースおよびクエン
酸塩の存在下の抗トロンビン−IIIの凍結乾燥を含む。沈殿および滅菌中の安定
化のために先に使用したのと同じ薬剤が、簡便には凍結乾燥中の安定化剤として
も使用できる。
た形でAT−IIIを得るために望まれる可能性があることは理解されよう。この
ような段階は、例えば、任意の望ましい順番で: ・不活性化AT−IIIを除去するためのヘパリン−セファロース(登録商標)のよ
うな適当な媒体での親和性クロマトグラフィー; ・AT−IIIの濃縮および脱塩のための限外濾過; ・ウイルスの更なる除去のための濾過 を含み得る。
る。AT−III精製の例は下記実施例1に示す。
提供する。本発明の組成物は、更なる処理なしに液体調製物として使用し得る。
しかし、投与前に、液体調製物を、適当には安定化剤の存在下、AT−IIIの乾
燥により更に処理する。乾燥の適当な方法は、凍結乾燥である。乾燥のための他
の可能性のある方法は、例えば、真空濃縮を含む。
物と比較して増加した安定性(延長した貯蔵寿命)を有する凍結乾燥AT−III組
成物である。該組成物は(i)抗トロンビン−III;および(ii)安定化剤としての
スクロースおよびクエン酸塩を含む。本組成物が、所望により更なる薬学的に許
容される賦形剤および/または担体、例えば塩、例えば塩化ナトリウム;アミノ
酸、例えばリジン、アラニン、グリシンまたはヒスチジン;界面活性剤、例えば
、商品名Tween-80(登録商標)として既知のポリソルベート80;およびポリエチ
レングリコール(PEG4000)またはグルコン酸のような他の賦形剤を含むこ
とは当業者には理解されよう。
適当な濃度を有するAT−III(50から1000IU/ml、または5から200mg
/ml)の水性溶液に溶解、または好ましくはダイアフィルトレーションする。溶
液のpHは6から9の間、好ましくは7から8の間に調節しなければならない。
溶液を次いで滅菌濾過し、管状ガラスボトルのようなバイアルに充填し、凍結乾
燥する。
5から2.5、より好ましくは1.0から1.5重量部である。クエン酸塩、好ま
しくはクエン酸ナトリウムの相対的量は、好ましくは抗トロンビンの重量部当り
1から4、より好ましくは2.5から3.0重量部である。
の添加無しで安定であることにより特徴付けられる。更なる血漿由来タンパク質
が不存在であることは、本発明の組成物の純度およびウイルス安全性を増加させ
る。
凍結乾燥調製物を生理的等張塩溶液または滅菌水に、例えば、0.5から20%(
w/v)AT−IIIとなるように溶解できる。溶液を全身作用を得るために静脈内に
投与できる。しかし、また溶液を、例えば、冠状動脈のバルーン手術の間の局所
作用を得るために、投与することも可能である。
を充填した後に、特に凍結乾燥製品の再構築後に発生する目に見える粒子(約2
−75μm)の形成である。したがって、本発明の更なる目的は、本質的にこのよ
うな目に見える粒子がない再構築製品を得ることである。
性界面活性剤の添加が、3ヶ月までの期間、本質的に目に見える粒子および望ま
しくない粒子がない再構築AT−III製品を提供することを、驚くべきことに発
見した。非イオン性界面活性剤は、好ましくはポロキサマーのようなブロックコ
ポリマー、またはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、好ましくは商
品名Tween80(登録商標)として既知のポリソルベート80(ポリオキシエチレン2
0ソルビタンモノオレエート)から、再構築媒体として選択する。任意のタイプ
のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルを、それが薬学的におよび薬理
学的に許容可能である限り、本発明にしたがった再構築媒体として使用し得る。
本発明に従った使用に適したこのようなポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エ
ステルの更なる例は、Tween20(登録商標)としても既知のポリソルベート20(ポ
リオキシエチレン20ソルビタンモノラウレート);商品名Tween21(登録商標)と
しても既知のポリソルベート21(ポリオキシエチレン(4)ソルビタンモノラウ
レート);商品名Tween40(登録商標)としても既知のポリソルベート40(ポリオ
キシエチレン20ソルビタンモノパルミテート);商品名Tween60(登録商標)とし
ても既知のポリソルベート60(ポリオキシエチレン20ソルビタンモノステア
レート);商品名Tween61(登録商標)としても既知のポリソルベート61(ポリオ
キシエチレン(4)ソルビタンモノステアレート);商品名Tween65(登録商標)とし
ても既知のポリソルベート65(ポリオキシエチレン20ソルビタントリステア
レート);商品名Tween81(登録商標)としても既知のポリソルベート81(ポリオ
キシエチレン(5)ソルビタンモノオレエート);商品名Tween85(登録商標)として
も既知のポリソルベート85(ポリオキシエチレン20ソルビタントリオレエー
ト);および商品名Crillet6(登録商標)としても既知のポリソルベート120(ポ
リオキシエチレン20ソルビタンモノイソステアレートである。このようなポリ
オキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルは、本明細書に引用して包含させるHa
ndbook of pharmaceutical excipients, 3rd edition, pp. 416-419, Arthur H
Kibble編に記載されている。
酸エステルである。任意のタイプのソルビタン脂肪酸エステルを、それが薬学的
におよび薬理学的に許容可能である限り、本発明にしたがった再構築媒体として
使用し得る。本発明に従った再構築媒体として有用な適当なソルビタン脂肪酸エ
ステルは、本明細書に引用して包含させるHandbook of pharmaceutical excipie
nts, 3rd edition, pp. 511-514, Arthur H Kibble編に記載されている。
ビンによる色原性基質H−D−Phe−Pip−Arg−pNA2HCl(Chrom
ogenix, Sweden)の開裂の追跡により、ヘパリン共同因子活性として測定した。F
rantzen Handeland et al. (Scand. J. Haematol. 31, 427-436, 1983)およびva
n Voorhuizen et al. (Thromb. Haemostas. 52(3), 350-353, 1984)参照。
III溶液の濃度(mg/ml)を、6.4IU/mg AT−IIIの吸光率を使用して計算し
た。
0の間の比率として定義した。
(Toyosoda)を備えたTSK G 3000 SWカラム(Toyosoda)での高速液体クロマトグラ
フィー(HPLC)ゲル濾過により測定した。
気泳動により測定した。
、サンプルを、レーザー源が光を通過させ、光センサーが通過する粒子を検出す
るものである検出器に通す。この原則は、いわゆる“光遮断原則”である。光セ
ンサーからの増幅したインパルスを粒子カウンター(Hiac Royco)により集め、そ
の後粒子サイズおよび量に変換させる。
のように、ヒト血漿を冷却沈降させ、遠心分離物1を、8%エタノールでpH7
.2で得られた溶出液を沈殿させ、溶出液を回収することにより得る。
O3、0.15M NaClで、中性pHで平衡化したヘパリン−セファロース(
登録商標)(HS)ゲルで処理する。HSゲルは約10−15IU AT−III/mlを
結合する。ゲルを0.4M NaCl、0.01M Na2PO3、pH7.8で
洗浄し、次いでAT−IIIを2M NaCl、0.01M Na2PO3、pH7
.8で溶出する。
での限外濾過により濃縮し、脱塩する。
.3%(w/w)トリ−n−ブチル−ホスフェート(TNBP)で、New York Blood Cen
terで開発された溶媒/界面活性剤(S/D)技術にしたがって処理する(欧州特許
EP−A−0239859参照)。溶媒および界面活性剤を5%(w/w)ダイズ油で
の抽出により部分的に除去する。
a2PO3、pH7.5含有沈殿緩衝液を、室温で、溶液に連続して30分間、
最終濃度20%(w/v)スクロースおよび1.1Mクエン酸ナトリウムまで添加する
。溶液を更に15分撹拌し、沈殿を傾捨により除去し、集めた上清を、連続して
結合した以下のフィルターで濾過する:20−2μm(Pall)+0.45/0.22
μm(Sartorius)。この段階はウイルス;望ましくないタンパク質;および残った
溶媒および界面活性化合物の除去を意図する(WO94/26287参照)。
60℃で滅菌する。滅菌は窒素ガス圧および連続した撹拌下で行う。滅菌中、2
0%(w/v)スクロースおよび1.1Mクエン酸ナトリウムは、熱不活性化に対して
AT−IIIを安定化するために働く。
−セファロースでの親和性クロマトグラフィーを繰り返し、滅菌中に不活性にな
ったAT−IIIを分離する。ヘパリン−セパロースクロマトグラフィーは段階2
に記載のように行う。
Na2PO3、pH7.4で限外濾過することにより濃縮および脱塩する。
“デッドエンド”技術を使用して、NaClを1Mの濃度までAT−III溶液に
添加し、その後、Viresolve(登録商標)/70(Millipore)を通して濾過することに
より行う。
リウム、0.07mol/kgスクロース、1.5mmol/kgクエン酸、pH7.0で限外
濾過して濃縮および脱塩し、バイアルに充填し、凍結乾燥する。得られた凍結乾
燥組成物はAT−III mg当り2.8mgクエン酸ナトリウムおよび1.3mgスクロ
ースを含む。
II濃縮物の95%以上のタンパク質内容物がAT−IIIである。更に、存在する
AT−IIIタンパク質は95%以上の活性AT−IIIを含み、即ち、5%未満が不
活性AT−IIIである。AT−III濃縮物は、ウイルスの除去および/または不活
性化を指示する段階4、6および9のため更にウイルスセーフである。加えて、
段階1、2、5および7が、ある程度のウイルスの不活性化または除去をもたら
す。
さいサイズ(20−25nm)のために最も除去が困難なウイルスである、パルボウ
イルスで行った。
を行った。溶液をパルボウイルス含量に関して、実施例1の段階5の前および後
で分析した。結果は、沈殿段階が、少なくとも102の係数までパルボウイルス
の含量を減少させることを示す。
換クロマトグラフィー(CM-Sephrose(登録商標)、Amersham Pharmacia Biotech)
に、一つは実施例1、段階5の沈殿段階に付した。精製段階の前および後に、ア
リコートをヘパリン共同因子活性およびAT−III含量に関して分析した。表I
に示す結果は、両方の方法がAT−III溶液に精製効果を有することを示す。残
っているヘパリン共同因子活性として測定した収率は、沈殿段階のほうが幾分高
かった。
施例1、段階4で得たAT−III溶液に、種々の塩を中性pHおよび室温(+23
℃)で添加した。沈殿(あれば)を除去し、上清溶液の特異的活性を測定した。
ス(“A280inv”)で得たタンパク質濃度を使用して計算した。“精製係数”は、
各サンプルについてA280の塩の添加前および塩を測定(各々“A280ref”お
よび“A280sanple”)し、式A280ref(samle)−A280sample×100/A280ref (inv) −A280inv を使用して得た。
られた精製係数を表IIに示す。
90%以上であった。したがって、結果は優れた精製および高回収率が、クエン
酸ナトリウムおよびスクロースを使用して得られることを示す。
AT−IIIの安定性における効果を試験した。表IIIからVIに示す結果は、組合わ
せたクエン酸ナトリウムとスクロースが、AT−IIIの安定性に有利な効果を有
することを示す。
せは、AT−IIIの重量部当りクエン酸ナトリウム2.8重量部およびスクロース
1.2重量部である。
Iの1%(w/v)水溶液に添加した。pHを7.0に調節し、溶液を滅菌濾過し(Mill
ipore)、バイアルに充填し、凍結乾燥させた。
製剤した: 製剤A: 125IU/ml抗トロンビン;0.4mgクエン酸ナトリウム/IU抗トロンビン;1
μgクエン酸/IU抗トロンビン;0.2mgスクロース/IU抗トロンビン;pH7.
0。 製剤B: 125IU/ml抗トロンビン;0.2mg塩化ナトリウム/IU抗トロンビン;0.2mg
アルブミン/IU抗トロンビン;1μgリン酸ナトリウム/IU抗トロンビン;4μg
アセチルトリプトファン/IU抗トロンビン;3μgカプリル酸ナトリウム/IU抗
トロンビン;pH7.0。
した。ボトルを真空下で密閉し、その直ぐ後に分析した。 表VIIおよびVIIIに示す結果は、本発明の製剤Aが、製剤Bと比較した場合、
AT−III安定性に有利な効果を有することを示す。
築媒体の粒子の形成を阻害する能力の比較 実施例7の製剤Aにしたがった抗トロンビン(500IU)の凍結乾燥ボトルを、
50IU/mlに、以下の再構築媒体で再構築した(全ての媒体を使用前に滅菌濾過(
Millipore)した): a)注射用水 b)0.15M塩化ナトリウム c)0.025Mリン酸ナトリウム、pH7.4 d)0.01%ポリソルベート80(Tween80(登録商標)) e)0.15Mリジン、pH7.4 f)0.15Mグリシン g)0.15Mアラニン
粒子が検出されなかった唯一の媒体は0.01%ポリソルベート80(Tween80(登
録商標))であり、残りの全ては同様の量の粒子発生であった。
のポリソルベート80(Tween80(登録商標))の粒子の形成を阻害する能力の比較 実施例7の製剤Aの抗トロンビン(500IU)の凍結乾燥ボトルを、以下の異な
る濃度のポリソルベート80(Tween80(登録商標))で50IU/mlに再構築した(全
ての媒体を使用前に滅菌濾過(Millipore)した): a)0.0100%(w/w)ポリソルベート80(Tween80(登録商標)) b)0.0050%(w/w)ポリソルベート80(Tween80(登録商標)) c)0.0010%(w/w)ポリソルベート80(Tween80(登録商標)) d)0.0001%(w/w)ポリソルベート80(Tween80(登録商標)) e)注射用水
、42時間、5日、11日、1ヶ月、2ヶ月および3ヶ月後に目視検査した。
ート80(Tween80(登録商標))であり、残りの全てで幾分または大量の粒子が検
出された。
ポリソルベート80(Tween80(登録商標))と水の粒子の形成を阻害する能力の比
較 実施例7の製剤Aの抗トロンビン(500IU)の凍結乾燥ボトルを、0.01%
ポリソルベート80(Tween80(登録商標))および注射用水で50IU/mlに再構築
した(全ての媒体を使用前に滅菌濾過(Millipore)した)。ボトルを22℃に24
時間静置し、ついで粒子カウンター(Hiac Rpyco)を使用して粒子を計数し、サイ
ズを決定した:
、本発明の製品を0.01%(w/w)ポリソルベート80(Tween80(登録商標))で再
構築した場合、完全に阻害された。
Claims (26)
- 【請求項1】 (a)抗トロンビン−IIIを含む溶液に、該溶液における不純
物は沈殿するが、抗トロンビン−IIIは本質的に溶液中に留まるのに十分な量で
サッカライドとクエン酸塩を添加する; (b)不純物を沈殿させる;そして (c)沈殿不純物を除去し、それにより精製抗トロンビン−IIIを含む溶液を得る
段階を含む、抗トロンビン−IIIの精製法。 - 【請求項2】 サッカライドがモノサッカライドおよびジサッカライドから
なる群から選択される、請求項1に記載の方法。 - 【請求項3】 サッカライドがモノサッカライドである、請求項2に記載の
方法。 - 【請求項4】 サッカライドの濃度が10から30%である、請求項1から
3のいずれかに記載の方法。 - 【請求項5】 サッカライドの濃度が15から25%である、請求項4に記
載の方法。 - 【請求項6】 サッカライドがスクロースである、請求項1から5のいずれ
かに記載の方法。 - 【請求項7】 クエン酸塩の濃度が0.1から3Mである、請求項1から6
のいずれかに記載の方法。 - 【請求項8】 クエン酸塩の濃度が0.5から1.5Mである、請求項7に記
載の方法。 - 【請求項9】 クエン酸塩の源がクエン酸ナトリウムである、請求項1から
8のいずれかに記載の方法。 - 【請求項10】 精製抗トロンビン−IIIを、安定化剤としての該サッカラ
イドおよびクエン酸塩の存在下に含む得られた溶液の滅菌段階が続く、請求項1
から9のいずれかに記載の方法。 - 【請求項11】 更に凍結乾燥段階を含む、請求項1から10のいずれかに
記載の方法。 - 【請求項12】 (i)抗トロンビン−III;および (ii)安定化剤としてのサッカライドおよびクエン酸塩 を含む、請求項1から11のいずれかに記載の方法により得られる医薬組成物。
- 【請求項13】 サッカライドがモノサッカライドである、請求項12に記
載の医薬組成物。 - 【請求項14】 モノサッカライドがスクロースである、請求項13に記載
の医薬組成物。 - 【請求項15】 サッカライドの量が抗トロンビン−IIIの重量部当り0.5
から2.5重量部である、請求項12から14のいずれかに記載の医薬組成物。 - 【請求項16】 サッカライドの量が抗トロンビン−IIIの重量部当り1.0
から1.5重量部である、請求項15に記載の医薬組成物。 - 【請求項17】 クエン酸塩の量が抗トロンビン−IIIの重量部当り1から
4重量部である、請求項12から16のいずれかに記載の医薬組成物。 - 【請求項18】 クエン酸塩の量が抗トロンビン−IIIの重量部当り2.5か
ら3.0重量部である、請求項17に記載の医薬組成物。 - 【請求項19】 クエン酸塩の源がクエン酸ナトリウムである、請求項12
に記載の組成物。 - 【請求項20】 アルブミンが無いことを特徴とする、請求項11から19
のいずれかに記載の組成物。 - 【請求項21】 凍結乾燥形の請求項12から20のいずれかに記載の医薬
組成物。 - 【請求項22】 再構築媒体が少なくとも0.01%(w/w)の濃度の非イオン
性界面活性剤である、請求項21に記載の再構築された医薬組成物。 - 【請求項23】 再構築媒体がポリキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル
である、請求項22に記載の再構築された医薬組成物。 - 【請求項24】 再構築媒体がポリソルベート20、ポリソルベート21、
ポリソルベート40、ポリソルベート60、ポリソルベート61、ポリソルベー
ト65、ポリソルベート80、ポリソルベート81、ポリソルベート85および
ポリソルベート125の任意の一つから選択される、請求項23に記載の再構築
された医薬組成物。 - 【請求項25】 再構築媒体がポリソルベート80である、請求項24に記
載の再構築された医薬組成物。 - 【請求項26】 再構築媒体がソルビタン脂肪酸エステルである、請求項2
2に記載の再構築された医薬組成物。
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